分解尿素的细菌的分离与计数

第43讲土壤中分解尿素的细菌的分离与计数、分解纤维素的微生物的分离

【本讲目标】

1.利用选择培养基分离细菌

2.运用相关技术解决生产生活中有关微生物的计数

【本讲重点】

对土样的选取和选择培养基的配制

【本讲难点】

对分解尿素的细菌的计数。

【网络构建】

【考点分析】

本节课可以从尿素在农业上的重要应用切入，介绍能分解尿素的细菌，进而说明这种细菌的作用是能够合成分解尿素的酶。联系生产生活实际，使学生对尿素以及分解尿素的细菌形成一定的感性认识。对于实验中的对照原则，指导分组讨论，在掌握微生物分离技术的同时巩固实验设计的基本原则。

【考点突破】

1、尿素是一种重要的氮肥，农作物不能（能，不能）直接吸收利用，而是首先通过土壤中的细菌将尿素分解为氨和CO2，这是因为细菌能合成脲酶。

科学家能从热泉中把耐热细菌筛选出来是因为热泉的高温条件淘汰了绝大多数微生物，这样也适用于实验室中微生物的筛选，原理是人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、PH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。

点评：生物适应一定环境，环境对生物具有选择作用。所以通过配制选择培养基、控制培养条件等选择目的微生物。

2.在统计菌落数目时，常用来统计样品中活菌数目的方法是稀释涂布平板法。除此之外，显微镜直接计数也是测定微生物数量的常用方法。显微镜直接计数是测定微生物的方法。

公式：观察到的红细胞平均数∶观察到的细菌平均数＝红细胞含量∶细菌含量

3.采用稀释涂布平板法统计菌落数目时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300 的平板进行计数。

从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数的计算方法是（平均菌落数÷涂布的稀释液体积）×稀释倍数。

利用稀释涂布平板法成功统计菌落数目的关键是恰当的稀释度。

4.统计的菌落数比活菌的实际数目低。这是因为当两个或多个细胞在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。因此，统计结果一般用菌落数来表示。

5.设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。

6．实验设计

（1）实验设计的内容包括实验方案、材料用具、实施步骤和时间安排等。

（2 ）根据图示2－7填写以下实验流程：

（3）土壤微生物主要分布在距地表3～8cm的近中性土壤中，约70％～80％为细菌。

（4）分离不同的微生物采用不同的稀释度，其原因是不同微生物在土壤中含量不同，其目的是保证获得菌落数在30～300之间、适于计数的平板。细菌稀释度为104、105、106，放线菌稀释度为103、104、105，真菌稀释度为102、103、104。

（5）培养不同微生物往往需要不同培养温度。细菌一般在30～37℃培养1～2d，放线菌一般在25～28℃培养5～7d，霉菌一般在25～28℃的温度下培养3～4d。

(6 )在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。

点评：菌种中有些菌体增殖快，有些菌体增值慢，所以培养时间要充足，使得每个菌体都能形成肉眼可观察到的菌落。

(7)菌落的特征包括形状、大小、隆起程度、颜色等方面。

土壤微生物种类最多、数量最大的原因是什么？土壤中营养物质含量丰富，环境条件适宜等。

（9）实验过程

1）取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。

2）应在火焰旁称取土壤10 g。将称好的土样倒入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，塞好棉塞。

3）在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行。

4）实验时要对培养皿作好标记。注明培养基类型、培养时间、稀释度、培养物等。

5）为了提高效率，在操作时更加有条不紊，应当事先规划时间。

在研究未知微生物时务必规范操作，以防被致病微生物感染，实验后一定要洗手。

7.结果分析与评价

（1）对分离的菌种作进一步的鉴定，还需要借助生物化学的方法。

（2）在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的脲酶将尿素分解成了氨。氨会使培养基的碱性增强，PH 升高。因此，我们可以通过检测培养基pH 变化来判断该化学反应是否发生。

（3）在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变红，说明该细菌能够分解尿素。

测定饮水中大肠杆菌数量的方法是将一定体积的水用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到伊红美蓝培养基上培养，大肠杆菌菌落呈现黑色，通过记述得出水样中大肠杆菌的数量。你认为在该实验中至少应取三个水样。

【典例精析】

例1．对细菌群体生长规律测定的正确的表述是

A．在液体培养基上进行B．至少接种一种细菌

C．接种一个细菌D．及时补充消耗的营养物质

解析：细菌群体生长规律的测定是人们在一定条件下进行的。这些条件是：一种细菌、恒定容积的培养基，液体培养基、定时测定细菌总数。在这些条件下，才能测定出细菌的生长规律。测定时只能用一种细菌的子细胞群体的变化规律表达微生物的生长；恒定容积是给微生物提供一定的生存环境；液体培养基才能通过样品推测细菌总数。若接种多种细菌，则会发生种间斗争而不能测定一种微生物的生长规律。在接种时，要保证一定的接种量。

答案：A

例2．在微生物群体生长规律的测定中，种内斗争最显著最激烈的时期是

A．调整期B．对数期C．稳定期D．衰亡期

解析：种内斗争是一种生态因素。种内斗争反应了种内生物对生存空间和生活资源的争夺。在生活空间充裕，营养充足的时候，种内斗争的程度是比较低的。随着微生物个体数目的增加，每个个体的生存空间越来越少，营养物质也越来越少，每个个体对生存空间和资源的争夺也越来越激烈，种内斗争就越来越激烈。由此可知，在稳定期的种内斗争最激烈。在衰亡期，微生物的数目已经开始减少，pH已经极度不适于微生物的生存，次级代谢产物积累到很高的程度，这时的微生物的生存斗争主要是与无机环境的斗争。

答案：C

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数学案

课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 学习目标：利用选择培养基分离细菌，运用相关技术解决生产生活中有关微生物的计数。 重点与难点：对土样的选取和选择培养基的配制、对分解尿素的细菌的计数 自主预习 一、课题背景 1、尿素是一种重要的氮肥，农作物_________（能，不能）直接吸收利用，而是首先通过土壤中的细菌将尿素分解为，这是因为细菌能合成。 2、科学家能从热泉中把耐热细菌筛选出来是因为这样也适用于实验室中微生物的筛选，原理是。 点评：生物适应一定环境，环境对生物具有选择作用。所以通过配制选择培养基、控制培养条件等选择目的微生物。 〖思考1〗在该培养基配方中，为微生物的生长提供碳源的是，提供氮源的的是，琼脂的作用是。 〖思考2〗该培养基对微生物（具有，不具有）选择作用。如果具有，其选择机制 是。 3、在统计菌落数目时，常用来统计样品中活菌数目的方法是。除此之外， 也是测定微生物数量的常用方法。 【补充】显微镜直接计数是测定微生物的方法。 公式：观察到的红细胞平均数∶观察到的细菌平均数＝红细胞含量∶细菌含量 4、采用稀释涂布平板法统计菌落数目时，培养基表面生长的一个菌落，来源于。通过统计，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在的平板进行计数。 〖思考3〗从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数的计算方法是。〖思考4〗利用稀释涂布平板法成功统计菌落数目的关键是。 〖思考5〗第位同学的结果接近真实值。你认为这两位同学的实验需要改进的操作 是。 5、统计的菌落数比活菌的实际数目。这是因为当两个或多个细胞在一起时，平板上观察到的只是菌落。因此，统计结果一般用来表示。 6、设置对照的主要目的是。 7、对照实验是指除了的条件外，其他条件都的实验。满足该条件的称为，未满足该条件的称为组。 〖思考6〗请设计本实验的对照实验组： 。 二、实验设计 1、实验设计的内容包括、、和等。 2、根据图示2－7填写以下实验流程： 3 、土壤微生物主要分布在距地表 cm的近性土壤中，约为细菌。 4、分离不同的微生物采用不同的稀释度，其原因是，其目的是保证获得 的平板。细菌稀释度为，放线菌稀释度为，真菌稀 释度为。 5、培养不同微生物往往需要不同培养温度。细菌一般在℃培养1～2d，放线菌一般 在℃培养5～7d，霉菌一般在℃的温度下培养3～4d。 6、在菌落计数时，每隔 h统计一次菌落数目。选取 时的记录作为结果，以防止因 而导致遗漏菌落的数目。 点评：菌种中有些菌体增殖快，有些菌体增值慢，所以培养时间要充足，使得每个菌体都能形成肉 眼可观察到的菌落。 7、菌落的特征包括等方面。 〖思考7〗土壤微生物种类最多、数量最大的原因 8、实验过程 1）取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要。 2）应在旁称取土壤 g。将称好的土样倒入盛有 mL无菌水的中，塞好棉塞。 3）在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在旁进行。 4）实验时要对作好标记。注明等。 5）为了提高效率，在操作时更加有条不紊，应当。 〖思考8〗在研究未知微生物时务必规范操作，以防被感染，实验后一定要洗手。 三．结果分析与评价 1、对分离的菌种作进一步的鉴定，还需要借助的方法。 2、在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的将尿素分解成了。氨会使培养基的碱 性，PH 。因此，我们可以通过检测培养基变化来判断该化学反应是否发生。 3、在以为唯一氮源的培养基中加入指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指 示剂将变，说明该细菌能够。 〖思考9〗测定饮水中大肠杆菌数量的方法是将一定体积的水用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到 培养基上培养，大肠杆菌菌落呈现，通过记述得出水样中大肠杆菌的数量。你认为在该实 验中至少应取个水样。 （三）课堂总结、点评 参考答案：

土壤中分解尿素的细菌的分离和计数 教学设计

专题2 微生物的培养与应用 课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数教学设计 金堂县竹篙中学谭善财2013-3-16 一．本节课内容的总体目标 二、教学重点与难点 课题重点：对土样的选取和选择培养基的配制课题难点：对分解尿素的细菌的计数 三、课时： 1h 四、本课题内容标准 1、研究培养基对微生物的选择作用，“研究”属于知识性领域的目标动词，应用水平 2、进行微生物的分离，“进行”属于技能性领域目标动词，独立操作水平 3、测定某种微生物的数量，“测定”属于技能性领域目标动词，独立操作水平。 五、本课题研究思路

六、教学思路： 七、教学流程 八、教学过程 教学内容 教师活动 学生活动 设计意图 复习提问 1.微生物最常用的两种接种方法是什么？ 2.什么稀释涂布平板法？其目的是什么？ 学生回忆 为细菌计数原 理、操作做好铺 垫 导入课题 引导学生阅读“课题背景”知识，提出的问题。 学生自主学习 回答问题 创设情景，引入 新课，使学生明 确分解尿素的细 菌的重要性，突出课题的必要性

研究思路 1、筛选 菌株 1、教师让学生阅读课本P21，讲解：DNA 聚合酶作用，发现过程。引导学生得到启示根据它对生存环 境的要求，到相应的环境中去寻找（即自然界筛 选）。 2、实验室中微生物的筛选原理实验室筛选：人为提 供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、p H 等），同时抑制或阻止其他微生物生长。 3、教师展示各种筛选菌株方法的多媒体图片： 黄石公园热泉 海底火山 大肠杆菌显色培养基 实验室筛选SARS 菌株 4、培养基选择分解尿素的微生物的原理：培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿 1、DNA 聚合酶发现过程，同学们得到什么启示？ 2.学生讨论为什么Taq 细菌能从热泉中筛选出来吗？ 3、学生阅读课本P22侧边栏关于本课题使用的培养基成分相关内容，讨论并回答提供碳源和氮源的分别是什么物质。 4.学生分析讨论，以尿素为唯一 氮源的培养基能否筛选出分解尿素的细菌 3、学生观看教师展示的多媒体图片。 4、学生讨论培养基如何对微生物进行筛选。 引导学生对知识进行迁移学习，培养学生的逻辑迁移思维。 通过观看图片， 使学生由感性认 识过渡到理性认 识。培养学生的学科素养。

2020-2021学年生物选修一配套导学案：2.2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 导学案

§2.2《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》导学案 班级：高二（）班姓名： 【学习目标】 1.简述细菌分解尿素的原理及鉴定分解尿素的细菌的方法。 2.研究培养基对微生物的选择作用,根据各类微生物的代谢特征,配制选择培养基。 3.学会分离、纯化特定微生物的研究思路和方法,掌握从土壤中分离出分解尿素的细菌并计数的操作过程。 【自主预习】 一、筛选菌株 1.自然界中目的菌株筛选的依据:根据它对_________的要求,到相应的环境中去寻找。 2.实验室中微生物筛选的原理:人为提供有利于__________生长的条件(包括营养、温度、pH等),同时_____或_____其他微生物生长。 3.筛选分解尿素的细菌:在选择培养基的配方中,把尿素作为培养基中的唯一_____,原则上只有能够利用_____的微生物才能够生长。 二、统计菌落数目 1.常用方法:_________法。 2.统计依据:当样品的_______足够高时,培养基表面生长的一个菌落,来源于样品稀释液中的一个_____。通过统计平板上的菌落数,就能推测出样品中大约含有多少活菌。 3.操作: (1)设置重复组,增强实验的说服力与准确性。 (2)为保证结果准确,一般选择菌株数在________的平板进行计数。 4.计算公式:每克样品中的菌株数=(C÷V)×M,其中C代表某一稀释度下平板上生长的___________,V代表涂布平板时所用的_____________,M代表_________。 三、设置对照 1.对照实验:是指除了___________以外,其他条件都相同的实验。 2.主要目的:排除实验组中___________对实验结果的影响,提高实验结果的可信度。例如,为了确认培养基是否被杂菌污染,需以不进行接种的培养基培养作为空白对照。 四、实验设计 1.土壤取样: (1)取样原因:土壤有“微生物的___________”之称,同其他生物环境相比,土壤中的微生物,数量_____,种类_____。 (2)土壤要求:富含_______,pH接近_____且潮湿。 (3)取样部位:距地表约________的土壤层。 2.样品的稀释: (1)稀释原因:样品的_________直接影响平板上生长的_________。 (2)稀释标准:选用一定稀释范围的样品液进行培养,保证获得菌落数在________,便于计数。 3.微生物的培养与观察: (1)培养:根据不同微生物的需要,控制适宜的培养_____和培养时间。 (2)观察。 ①观察方法:每隔24 h统计一次菌落数目,最后选取菌落数目稳定时的记录作为结果。

分解尿素

五华县田家炳中学高二生物自主学案 选修1第二章第二节土壤中分解尿素的细菌的分离与技术（1课时）尿素是重要的农业氮肥，只有当土壤中的细菌将尿素分解成氨之后，才能被植物利用，那么怎么分离土壤中分解尿素的细菌呢？ （一）学习任务 一、理论基础 1．筛选菌株 (1)实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时或其他微生物生长。 (2)选择培养基：在微生物学中，将允许种类的微生物生长，同时和其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。 〖思考1〗根据本课题使用的培养基配方，请回答课本22的小字体内容的问题。 （3）配制选择培养基的依据 根据选择培养的菌种的生理代谢特点加入某种物质以达到选择的目的。例如，培养基中不加入有机物可以选择培养微生物；培养基中不加入氮元素，可以选择培养；的微生物.加入高浓度的食盐可选择培养金黄色葡萄球菌等。 2．统计菌落数目 （1）测定微生物数量的常用方法有和。 （2）稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目的原理 当样品的足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在的平板进行计数。此外，测定微生物数量的常用方法还有直接计数。 〖思考2〗请回答课本22的小字体内容的相关问题 〖思考3〗从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数的计算方法是？ 〖思考4〗利用稀释涂布平板法成功统计菌落数目的关键是什么？ 3．设置对照，仔细阅读课本23页右上角，找出什么是对照试验 设置对照的主要目的是排除实验组中对实验结果的影响，提高实验结果的。例如为了排除培养基是否被杂菌污染了，需以培养的培养基作为空白对照。 〖思考5〗根据课本23页关于对照实验小字体的内容，请设计本实验的对照实验组。

新人教版生物选修1课题2《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》学案

新人教版生物选修1课题2《土壤中分解尿素的细菌的 分离与计数》学案 学习目标 研究培养基对微生物的选择作用，进行微生物数量的测定。 学习重点与难点 重点：对土样的选取和选择培养基的配制。 难点：对分解尿素的细菌的计数。 自主探究 1．尿素只有被分解成之后，才能被植物吸收利用。 2．以土壤中能分解尿素的细菌为研究对象，要达到的两个主要目的是： ⑴；⑵。 3．PCR（）是一种在体外将。此项技术的自动化，要求使用耐高温的DNA聚合酶。 思考：怎样找耐高温的酶呢？ 4．实验室中微生物的筛选应用的原理是：人为提供有利于生长的条件（包括等），同时抑制或阻止其他微生物生长。 5．选择培养基是指。 6．常用来统计样品中活菌数目的方法是。即当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在的平板进行计数。另外，也是测定微生物数量的常用方法。 7．比较教材中两位同学的操作方法，哪位同学的结果接近真实值？你认为这两位同学的实验需要改进呢？如需要，如何改进？ 8．一般来说，统计的菌落数往往比活菌的实际数目。这是因为 。因此，统计结果一般用而不是活菌数来表示。 9．设置对照实验的主要目的是，提高实验结果的可信度。 10．对照实验是 。 11．实验设计包括的内容有：、、和，具体的实验步骤以及时间安排等的综合考虑和安排。 12．不同种类的微生物，往往需要不同的培养和培养。在实验过程中，一般每隔24小时统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时的记录作为结果，这样可以 。 13．无菌操作应注意什么问题？ ⑴ ⑵ ⑶ 14．在进行多组实验过程中，应注意做好标记，其目的是。 思考：应标记哪些内容？怎样操作更有利于实验的进行？ 15．对所需的微生物进行初步筛选，只是分离纯化菌种的第一步，要对分离的菌种进行一步的鉴定，还需要借助的方法。 思考：有哪些方法可以对菌种进行鉴定？ 【疑难点拨】

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数导学案

土壤中分解尿素的细菌的分离与激素 1、尿素[CO(NH 2)2]——重要的农业氮肥。只能被土壤中细菌分解为NH 3才能被植物吸收利用。 2、 CO(NH 2)2 + H 2O 细菌脲酶 CO 2 +2NH 3 一、研究思路 （一）筛选菌株 1、实例----耐高温DNA 聚合酶的寻找 美国科学家布鲁克（1966年）--在美国黄石公园的一个热泉中发现耐热细菌。这说明寻找菌株要到期相应的 中寻找。 2、实验室中微生物的筛选原理 人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH 等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。 要分离一种微生物，必须根据该微生物的特点，包括营养、生理、生长条件等，采用 选择培养分离 的方法，或抑制使大多数微生物不能生长，或造成有利于该菌生长的环境，经过一定时间培养后使该菌在群落中的数量上升，再通过平板稀释等方法对它进行纯培养分离。 3、筛选菌株的培养基 KH 2PO 4 1.4g NaHPO 4 2.1g MgSO 4 H 2O 0.2g 葡萄糖 10.0g 尿素 1.0g 琼脂 15.0g 将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL 。 4、选择培养基：允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。 （二）、统计菌落数目： 1、活体计数法----稀释涂布平板法 （1）操作方法：稀释涂布平板 → 统计菌落数。 （2）原理：1个菌落→1个活菌。 （3）统计原则 ①、选 30～300 个菌落的平板统计。 ②、每个稀释度取3个平板取其平均值。 （4）统计结果：统计的菌落数往往比活菌的实际数目 ，因此统计结果一般用 表示。 每克样品中的菌株数= 。 C:某一稀释度下平板上生长的平均菌落数； V:所用稀释液的体积； M:稀释倍数。 2、显微镜直接计数 （三）设置对照 1、设置对照的目的：排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。 2、对照实验是指除了 被测试 的条件外，其他条件都 相同 的实验。满足该条件的称为 对照组，未满足该条件的称为 实验 组。 对照组：设置对照 ---- 同等条件下，培养空白培养基。 四、实验设计

【人教版】选修1生物：2.2《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》 精品导学案

专题2课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 1．尿素只有被分解成之后，才能被植物吸收利用。 2．以土壤中能分解尿素的细菌为研究对象，要达到的两个主要目的是： ⑴；⑵。3．PCR（）是一种在体外将。此项技术的自动化，要求使用耐高温的DNA聚合酶。 思考：怎样找耐高温的酶呢？ 4．实验室中微生物的筛选应用的原理是：人为提供有利于生长的条件（包括等），同时抑制或阻止其他微生物生长。 5．选择培养基是指。6．常用来统计样品中活菌数目的方法是。即当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在的平板进行计数。另外，也是测定微生物数量的常用方法。7．比较教材中两位同学的操作方法，哪位同学的结果接近真实值？你认为这两位同学的实验需要改进呢？如需要，如何改进？ 8．一般来说，统计的菌落数往往比活菌的实际数目。这是因为 。因此，统计结果一般用而不是活菌数来表示。9．设置对照实验的主要目的是，提高实验结果的可信度。 10．对照实验是 。 11．实验设计包括的内容有：、、和，具体的实验步骤以及时间安排等的综合考虑和安排。 12．不同种类的微生物，往往需要不同的培养和培养。在实验过程中，一般每隔24小时统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时的记录作为结果，这样可以 。 13．无菌操作应注意什么问题？ ⑴ ⑵ ⑶ 14．在进行多组实验过程中，应注意做好标记，其目的是。 思考：应标记哪些内容？怎样操作更有利于实验的进行？ 15．对所需的微生物进行初步筛选，只是分离纯化菌种的第一步，要对分离的菌种进行

土壤中分解尿素细菌的分离与计数经典练习

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 班级姓名 1．能够测定样品活菌数的方法是（） A．稀释涂布平板法 B．直接计数法 C．重量法 D．平板划线法 2．下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是 A．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、尿素、琼脂、水 B．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、琼脂、水 C．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、尿素、琼脂、水 D．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水 3．分离土壤中分解尿素的细菌的实验操作中，对于获得纯化的尿素分解菌的单菌落，影响最大的是A．制备浸出液的土壤取自土壤的表层 B．涂布前涂布器未在酒精灯外焰上灼烧灭菌 C．牛肉膏蛋白胨培养基中添加尿素作为氮源 D．接种操作者的双手未用酒精棉进行消毒 4．下列有关微生物培养的叙述，不正确的是 ( ) A．测定土壤样品中的细菌数目，常用稀释涂布平板法进行菌落计数 B．在对微生物进行培养前，需要对微生物和培养基进行灭菌 C．酵母菌发酵过程产生的酒精，对其他微生物生长有一定的抑制作用 D．分离能分解尿素的细菌，要以尿素作为培养基中唯一的氮源 5．下列关于分解尿素的细菌，说法正确的是（） A．以尿素作为唯一碳源 B．能分解尿素的原因是能合成并分泌蛋白酶 C．环境中含有大量的尿素诱导该细菌产生了分解尿素的特性 D．以尿素为唯一氮源且添加了酸碱缓冲剂的培养基来培养该细菌后不会使酚红指示剂变红 6．关于生物技术实践中的有关检验，不正确的是（） A．在果酒制作实验结束时要检验是否有酒精产生，正确的操作步骤是先在试管中加入适量的发酵液，然后再加入硫酸和重铬酸钾的混合液 B．在微生物培养中，检验培养基是否被污染的方法是用一组不接种或接种无菌水的培养基与接种培养物

人教版高中生物选修1 生物技术实践《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》导学案2

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 【课标要求】 1、进行微生物的分离和培养 2、测定某种微生物的数量 3、研究培养基对微生物的选择作用 4、探讨微生物的利用 【考纲要求】 1、微生物的分离和培养 2、培养基对微生物的选择作用 【学习目标】 1、明确选择培养基的功能和作用原理，能够根据微生物筛选原理确定取样地点和方法 2、知道统计样品中活菌数目的方法是稀释涂布平板法，会测定微生物的数量 3、尝试设计微生物学实验并写出实验方案，能关注无菌操作和对照原则 【导学流程】 【预习案】 一、筛选菌株 (1)实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于生长的条件(包括营养、温度、pH 等)，同时或其他微生物生长。 (2)选择培养基：在微生物学中，将允许种类的微生物生长， 同时和其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。【边学边练】（1）土壤中的细菌能分解尿素，是因为它们能合成一种（） A．尿素酶B．脲酶C．蛋白酶 D ．肽酶 【边学边练】（2）教程第22页的培养基为什么能选择出分解尿素的微生物？ 二、统计菌落数目 测定微生物数量的常用方法有和。 1.稀释涂布平板法----活体计数法 （1）原理：当样品的足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在的平板进行计数。 （2）操作方法：稀释涂布平板→统计菌落数。 （3）统计原则 ①、选30～300 个菌落的平板统计。 ②、每个稀释度取3 个平板取其平均值。 （4）统计结果：

每克样品中的菌株数= 。 C:某一稀释度下平板上生长的平均菌落数；V:所用稀释液的体积； M:稀释倍数。 2．显微镜直接计数 利用特定细菌计数或血细胞计数板在显微镜下计算一定容积内微生物数量。 优点：准确统计微生物实际数目 缺点： 3．设置对照 设置对照的主要目的是排除实验组中对实验结果的影响，提高实验结果的。 【边学边练】（3）某同学在稀释倍数为106的培养基中测得平板上菌落数平均值为165，那么每克样品中菌落数是（稀释液体积为0.1ml）（） A、1.65×108 B、1.65×109 C、165 D 、16.5 【边学边练】（4）用来判断培养基是否起到对照作用要设置的对照是（） A、未接种的选择培养基 B、未接种的牛肉膏蛋白胨培养基（全营养） C、接种了的选择培养基 D、接种的牛肉膏蛋白胨培养基（全营养） 三、实验设计、实验操作 一、流程：土壤取样、样品稀释、制备培养基、涂布平板、微生物的培养与观察、菌落计数 二、实验操作： （一）土壤取样 1、土壤是天然培养基---- 其微生物数量、种类。 2、土壤取样： 取样的位置：土壤中70～90％是细菌。在富含有机质的土壤层的处中分布着绝大多数的细菌。从肥沃、湿润的土壤中取样。应先 3 cm 左右，再取样，将样品装入事先准备好的中。 （二）样品稀释 1、测细菌数一般用104、105、106稀释液。 2、稀释过程：在火焰旁将10g 土样加入盛有90 mL 无菌生理盐水的锥形瓶中(体积为250 mL)，充分摇匀，吸取上清液，转移至盛有的生理盐水的无菌大试管中，将土样以101、102、103……依次等比稀释至106稀释度。 3、稀释原则：确保平板上的菌落数在之间。 （三）制备培养基：准备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基，将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显选择培养基上的数目，因此，牛肉膏蛋白胨培养基可以作为，用来判断选择培养基是否起到了选择作用。（四）微生物的培养与观察 1、接种：依次等比稀释至106稀释度，并按照由106～103稀释度的顺序分别吸取进行平板涂布操作。每个稀释度下需要3 个选择培养基、1 个牛肉膏蛋白胨培养基。 2、培养：细菌：30～37℃，1～2d； 3、观察：将涂布好的培养皿放在30℃温度下培养，及时观察记录。 （五）细菌的计数 当菌落数目稳定时，选取菌落数在的平板进行计数。在同一稀释度下，至少对 3 个平板进行重复计数，然后求出，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。

《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》导学案答案说课讲解

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数导学案答案 一、研究培养基对微生物的选择作用 1.筛选菌株 (1)自然界中目的菌株的筛选 ①原理：根据目的菌株对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。 ②实例：能产生耐高温的Taq DNA聚合酶的Taq细菌就是从热泉中筛选出来的。 (2)实验室中目的菌株的筛选 ①原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。 ②实例：从土壤中筛选能分解尿素的细菌。 ③方法：利用选择培养基进行微生物的筛选。 2.选择培养基 (1)概念：允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。 (2)举例：筛选土壤中分解尿素的细菌的选择培养基是以尿素为唯一氮源，按物理性质归类为固体培养基。 1.筛选分解尿素的细菌的选择培养基 下面是本课题使用的培养基的配方，请分析并回答下列问题： KH2PO4 1.4 g Na2HPO4 2.1 g MgSO4·7H2O 0.2 g 葡萄糖10.0 g 尿素 1.0 g 琼脂15.0 g 将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1 000 mL (1)该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是什么物质？ 答案碳源是葡萄糖，氮源是尿素。

(2)分离分解尿素的细菌的选择培养基是如何进行选择的？ 答案该选择培养基的配方中，尿素是培养基中的唯一氮源，因此，只有能够利用尿素的微生物才能够生长。 (3)为什么只有能分解尿素的微生物才能在该培养基上生长？ 答案分解尿素的微生物能合成脲酶，而脲酶可将尿素分解成氨，从而为微生物提供氮源。 2.设计对照实验 (1)如何设计对照实验验证该选择培养基的确筛选到了能分解尿素的细菌？ 答案增设牛肉膏蛋白胨基础培养基并进行涂布平板操作，如果牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数明显多于选择培养基上的菌落数，则说明选择培养基的确起到了筛选能分解尿素的细菌的作用。 (2)如何设计对照实验验证所用的选择培养基没有受到污染？ 答案设置一个未涂布平板的能筛选分解尿素的细菌的选择培养基。 归纳总结选择培养基的分类 (1)利用营养缺陷型选择培养基进行的选择培养：通过控制培养基的营养成分，使营养缺陷型微生物不能正常生长。 (2)利用化学物质进行的选择培养：在完全培养基中加入某些化学物质，利用加入的化学物质抑制某些微生物的生长，同时选择所需的微生物。 (3)利用培养条件进行的选择培养：改变微生物的培养条件(如高温、特殊pH等)，筛选特定微生物。 1.下列有关微生物筛选的叙述中，不正确的是() A.用全营养牛肉膏蛋白胨培养基筛选大肠杆菌 B.用高NaCl的培养基筛选抗盐突变菌株 C.含酚红的尿素培养基筛选鉴别出分解尿素的菌株 D.利用高温条件筛选耐热的Taq细菌 答案 A 解析全营养牛肉膏蛋白胨培养基常用于大肠杆菌的培养，该培养基对微生物无选择作用，A项错误；抗盐突变菌株具有耐高盐的能力，因此可以利用高NaCl的选择培养基进行选择培养，B项正确；分解尿素的菌株能将尿素分解成氨，使培养基pH升高，因此可以利用含酚红的尿素培养基筛选鉴别出分解尿素的菌株，C项正确；利用高温条件可以筛选耐热的Taq

高二生物土壤中分解尿素的细菌的分离与计数知识点梳理

高二生物土壤中分解尿素的细菌的分离与 计数知识点梳理 1.培养基一般都含有、、、四类营养物质，另外还需要满足微生物生长对、以及的要求。 2.培养基的分类：按照物理性质可以分为、、;按照化学性质分为和;按照用途分为和。 3.尿素可以为农作物提供肥，但是只有被分解成之后，才能被植物吸收利用。 4.以土壤中能分解尿素的细菌为研究对象，要达到的两个主要目的是： ⑴; ⑵。 (一)筛选菌株 1.原理: 人为提供有利于生长的条件(包括等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。 2.方法：选择培养基 (1)定义：在微生物学中，将允许的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。 (2)配制的的依据：

①在培养基中加入某种化学物质可以做到这一点，加入可以分离出酵母菌和霉菌。加入高浓度的食盐可得到。这里的加入是在培养的培养成分的基础上加入的。 ②培养基中的营养成分的改变也可达到分离微生物 的目的。如培养基中缺乏源时，可以分离固氮微生物。 ③当培养基的某种营养成分为特定化学成分时，也具有分离效果。 ④改变微生物的培养条件，也可以达到分离微生物的目的，如将培养基放在环境中培养只能得到耐高温的微生物。 (二)统计菌落数目 (1)测定微生物数量的常用方法有和。 (2)稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目的原理 当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活细菌。为了保证结果准确，一般设置个平板，选择菌落数在的平板进行计数，并取。统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，因此，统计结果一般用菌落数而不是活菌数来表示。 (三)实验设计 实验设计包括，所需、、用具和药品，具体的以及时间安排等的综合考虑和安排。

大学土壤微生物分离实验报告

从土壤中分离纯培养微生物并作初步观察鉴定 实验报告 生物科学与技术系 09食品（2）班 姓名：xxx 学号：xxx

从土壤中分离纯培养微生物并作初步观察鉴定 【摘要】利用分离纯化微生物的基本操作技术对土壤中的微生物进行分离与纯化，根据菌落形态观察及一系列的生理生化试验的结果，对照种属特征初步鉴定分离纯化的微生物所属的类群。 【关键词】细菌放线菌霉菌划线分离培养基的配制高压蒸汽灭菌 前言： 在自然条件下，微生物常常在各种生态系统中群居杂聚。群落是不同种类微物的混和体。为了生产和科研的需要，人们往往需要从自然界混杂的微生物群体中分离出 具有特殊功能的纯种微生物；或重新分离被其他微生物污染或因自发突变而丧失原 有优良性状的菌株；或通过诱变及遗传改造后选出优良性状的突变株及重组株。这种获得单一菌株纯培养的方法称为微生物的分离纯化技术。纯培养是指一株菌种或一个培养物中所有的细胞或孢子都是由一个细胞分裂、繁殖而产生的后代。 分离纯化技术主要由采集样品、富集培养、纯种分离和性能测定等几个基本环节组成。 实验目的： 1、学习从土壤中分离、纯化微生物的原理与方法。 2、学习、掌握微生物的鉴定方法。 3、对提取的土样进行微生物分离、纯化培养，根据菌落的形态特征判断未知菌的类别。实验原理： 从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。通过如下几种方法可以分离纯化微生物：稀释倒平板法(pour plate method)、涂布平板法(spread plate method)、稀释摇管法(dilution shake culture method)、平板划线分离法（stesak plate method）。 此次实验采取的是平板分离法，该方法操作简便，普遍用于微生物的分离与纯化，其基本原理主要包括两个方面：（一）选择适合于待分离微生物的生长条件或加入某种抑制剂造成只利于待分离微生物生长，而抑制其它微生物生长的环境，从而淘汰大部分不需要的微生物。（二）微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落可以是由一个细

2019-2020学年 人教版 选修1 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 作业

课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 题型一选择培养基的作用及配制方法 1．从混杂的微生物群体中选择优良的单一纯种的方法不包括() A．根据微生物对碳源需求的差别，使用含不同碳源的培养基 B．根据微生物对特殊营养物质的需求，在培养基中增减不同的特殊营养物质 C．根据微生物对抗生素敏感性的差异，在培养基中加入不同的抗生素 D．根据微生物耐热性的不同，利用高温、高压消灭不需要的杂菌 答案 D 解析利用高温、高压消灭不需要的杂菌的同时也会将需要筛选的微生物杀死，因此不能通过该方法得到目的微生物，D错误。 2．某混合样品中微生物R含量极少，要得到大量的R，比较理想的方法是采用() A．天然培养基 B．稀释涂布平板法 C．利用适合R生长但同时抑制或阻止其他种类微生物生长的选择培养基D．用显微镜直接观察、寻找，再培养 答案 C 解析在培养过程中可以通过选择该微生物能生长繁殖而抑制其他微生物生长繁殖的培养基，使微生物R能在该培养基上成为优势菌种而大量繁殖，C 正确。 3．可以鉴定出分解尿素的细菌的方法是() A．在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂 B．在以尿素为唯一氮源的培养基中加入二苯胺试剂 C．在以尿素为唯一氮源的培养基中加入苏丹Ⅲ试剂 D．在以尿素为唯一氮源的培养基中加入双缩脲试剂

答案 A 解析分解尿素的细菌与其他细菌的重要区别是分解尿素的细菌能以尿素为氮源，该细菌合成的脲酶将尿素分解成了氨，氨会使培养基的碱性增强，pH 升高。在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养某种细菌后，如果pH升高，指示剂将变红，我们可以准确地鉴定出该种细菌能够分解尿素。 题型二菌落数目的统计方法 4．下列不属于菌种计数方法的是() A．平板划线法B．稀释涂布平板法 C．镜检法D．滤膜法 答案 A 解析平板划线法可用于菌种的纯化和分离，不能用于计数，A错误；稀释涂布平板法常用来统计样品中活菌数目，镜检法也是测定微生物数量的常用方法，B、C正确；滤膜法常用于检测水样中大肠杆菌数目，通常是将已知体积的水样过滤后，将滤膜放到伊红美蓝培养基上培养，根据培养基上黑色菌落的数目，计算出水样中大肠杆菌数量，D正确。 5．下列关于统计菌落数目的方法的叙述，不正确的是() A．采用平板计数法获得的菌落数往往少于实际的活菌数 B．当样品的稀释度足够高时，一个活菌会形成一个菌落 C．为了保证结果准确，一般采用密度较大的平板进行计数 D．在某一浓度下涂布三个平板，若三个平板统计的菌落数在30～300间且差别不大，则应以它们的平均值作为统计结果 答案 C 解析当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，因此统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，A正确；当样品的稀释度足够高时，一个活菌会形成一个菌落，B正确；一般选择菌落数在30～300的平板进行计数，密度过大会不好计数，影响结果的准确性，C错误；涂布三个平板，作为重复组，若三个平板统计的菌落数在30～300间且相差不大，取其平均值作为统计结果能增强实验的说服力与准确性，D正确。 题型三细菌分离与计数的实验设计 6．下列关于测定土壤中微生物的数量，正确的叙述是()

人教版生物选修一同步导学限时训练5 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 含解析

限时规范训练五 1.下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是( ) A.KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、尿素、琼脂、水 B.KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、琼脂、水 C.KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、尿素、琼脂、水 D.KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水 [答案] A [解析] 能选择出分解尿素的细菌的培养基必须以尿素为唯一氮源，B、D两项不符合。C项缺少有机碳源，分解尿素的微生物不能正常生长。 2.从土壤中分离能分解尿素的细菌，可以利用选择培养基，其成分中一定有( ) ①尿素②有机氮化物 ③无机盐④有机碳化物 ⑤水⑥无机碳化物

A.①③④⑤ B.②③④⑤ C.①③⑤⑥ D.②③⑤⑥ [答案] A [解析] 分离能分解尿素的细菌，故培养基中应以尿素为唯一氮源，另外，水、无机盐和碳源、能源是细菌生长所必不可少的。有机碳在这里既是碳源又是能源，因为分解尿素的细菌是异养微生物，所以不能利用无机碳化物。 3.测定土壤中细菌数量一般选用104、105和106倍的稀释液进行平板培养，而测定真菌的数量一般选用102、103和104倍稀释液，其原因是( ) A.细菌个体小，真菌个体大 B.细菌易稀释，真菌不易稀释 C.细菌在土壤中数量比真菌多 D.随机的，没有原因 [答案] C [解析] 土壤中的微生物大约70%～90%是细菌，真菌的数量比细菌数量少。样品的稀释度越高，在平板上生长的菌落数目就越少。在实际操作中，通常选用一定稀释范围内的样品液进行培养，以保证获得菌落数在30～300之间，适于平板计数，所以细菌的稀释倍数要高于真菌的稀释倍数。 4.想要对土壤中分解尿素的细菌进行分离与计数，下列操作需要在酒精灯火焰旁进行的有( ) ①土壤取样②称取土壤 ③稀释土壤溶液④涂布平板

生物：2.2《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》学案(4)(新人教版选修1).doc

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 【导学诱思】 1．尿素只有被分解成之后，才能被植物吸收利用。 2．以土壤中能分解尿素的细菌为研究对象，要达到的两个主要目的是： ⑴；⑵。 3．PCR（）是一种在体外将。此项技术的自动化，要求使用耐高温的DNA聚合酶。 思考：怎样找耐高温的酶呢？ 4．实验室中微生物的筛选应用的原理是：人为提供有利于生长的条件（包括等），同时抑制或阻止其他微生物生长。 5．选择培养基是指。 6．常用来统计样品中活菌数目的方法是。即当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在的平板进行计数。另外，也是测定微生物数量的常用方法。 7．比较教材中两位同学的操作方法，哪位同学的结果接近真实值？你认为这两位同学的实验需要改进呢？如需要，如何改进？ 8．一般来说，统计的菌落数往往比活菌的实际数目。这是因为 。因此，统计结果一般用而不是活菌数来表示。 9．设置对照实验的主要目的是，提高实验结果的可信度。 10．对照实验是 。 11．实验设计包括的内容有：、、和，具体的实验步骤以及时间安排等的综合考虑和安排。 12．不同种类的微生物，往往需要不同的培养和培养。在实验过程中，一般每隔24小时统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时的记录作为结果，这样可以 。 13．无菌操作应注意什么问题？ ⑴ ⑵ ⑶ 14．在进行多组实验过程中，应注意做好标记，其目的是。 思考：应标记哪些内容？怎样操作更有利于实验的进行？ 15．对所需的微生物进行初步筛选，只是分离纯化菌种的第一步，要对分离的菌种进行

土壤中枯草芽孢杆菌的分离和筛选

土壤中枯草芽孢杆菌的分离和筛选 2013023123刘倩倩 一、实验目的 1.掌握枯草芽孢杆菌的分离筛选的基本原理，熟练掌握无菌接种技术、微生物分离筛选技术和微生物形态观察技术。 2.了解枯草芽孢杆菌的分布、营养、生长等特点，以及它所具有的产淀粉酶的功能。根据这些特点进行分离和筛选，从而得到纯菌株。 二、实验原理 枯草芽孢杆菌属革兰氏阳性菌，芽孢0.6～0.9×1.0～1.5微米，椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色，在液体培养基中生长时，常形成皱醭。需氧菌。有的菌株是α-淀粉酶和中性蛋白酶的重要生产菌；有的菌株具有强烈降解核苷酸的酶系。广泛分布在土壤及腐败的有机物中。选择含淀粉丰富的土壤为最佳，80度的水浴处理样品1小时，目的是杀死微生物营养体，残留芽胞。 利用稀释涂布法，在淀粉的培养基培养，培养1-3天后，观察。然后，进行初筛与纯化，利用显微镜进行革兰氏染色，确认是否为枯草芽孢杆菌。再复筛，测定其淀粉酶活，最后确定菌株。 三、实验材料 （1）选择培养基 本次实验进行产淀粉酶的枯草芽孢杆菌的筛选，所以应选淀粉培养基。 配方：牛肉膏 5.0g 蛋白胨 10.0g 氯化钠 5.0g 可溶性淀粉 10.0g 琼脂 20g 蒸馏水 1000ml 调整pH至7.2 配置时应先把淀粉用少量蒸馏水调成糊状，再加入到融化好的培养基中。 （2）溶液或试剂

牛肉膏 1.25g 蛋白胨 2.5g 氯化钠 1.25g 可溶性淀粉 2.5g 琼脂 5g 碘11克，碘原液2毫升，碘化钾42克，可溶性淀粉2克，磷酸氢二钠45.23克，柠檬酸8.068克，氯化钴25克，重铬酸钾3.34克， 100毫升0.01NHCL。（3）仪器或其他用品 平板培养皿 10个、试管15支、三角瓶2个、烧杯3个、称量纸、高压蒸汽灭菌锅、干燥箱、恒温培养箱、超净工作台、无菌涂布器、电热恒温水浴、500ml 量筒、显微镜、无菌吸管、无菌培养皿、无菌刻度吸管、酒精灯、记号笔、火柴、试管架、接种钩、滴管等。 四、实验步骤 倒平板→制备梯度稀释液→涂布→培养→初筛→复筛→纯化→保存（1）实验前准备 制备淀粉培养基，无菌水，在121摄氏度下灭菌20min。倒平板。把接种工具，培养基，和其他用品全部在超净工作台上摆好，进行紫外线灭菌30min。（2）制备土壤稀释液 取土样时最好选取如花坛等地方的土样，选好采样地点，产去表层5cm，去5-15cm处。用无菌器具规范采样几十克，装入无菌的塑料袋或纸袋中扎好，记录采样时间、地点、采样环境等以备考证。采样后应尽快分离。振摇约二十分钟，使土样与水充分混合，将细胞分散。放入盛有99ml无菌水三角瓶中，常压80 度的水浴处理样品1小时后，取出。 用一支1ml无菌吸管从中吸取1ml土壤悬液加入盛有9ml无菌水的大试管中充分混匀，然后用无菌吸管从此试管中吸取1ml加入另一盛有9ml无菌水的试管中，混合均匀，以此类推，制成10-2 、10-3、10-4、10-5不同稀释度的土壤溶液。 （3）涂布 将上述每种培养基的三个平板底面分别用记号笔写上10-3、10-4、10-5三

高中生物选修一学案12：2.2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

土壤中分解尿素的细菌的分离和计数 [学习重难点] 重点：对土样的选取和选择培养基的配制。 难点：对分解尿素的细菌的计数。 [课前预习] 1.实验室中微生物筛选的原理是人为提供①目的菌株生长的条件(包括② 等)，同时③其他微生物生长。根据该原理所设计的培养基，称作④培养基。 2.测定微生物数量的常用方法有①和显微镜直接计数法。当样品的② 足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个③。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在④的平板进行计数。每克样品中的菌株数= ⑤。一般情况下统计的菌落数比活菌的实际数目⑥。 3.在设计实验时，一定要涂布至少3个平板作为重复组，才能增强实验的 ①。设置对照的主要目的是排除实验组中②对实验结果的影响，提高实验结果的③。 4.绝大多数的细菌分布在距地表约3～8cm的土壤中，因此取样时一般要①。对土壤样品液需要进行稀释，测定土壤中细菌、放线菌和真菌的数量，分别选用 ②、③和④倍的稀释液进行平板培养。要将1mL样品稀释10倍的做法是⑤。 5.不同种类的微生物，往往需要不同的培养①和培养培养时间。在实验过程中，一般每隔24小时统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时的记录作为结果，这样可以防止因培养时间不足而导致②。要对分离的菌种进行一步的鉴定，还需要借助生物化学的方法，即在以③为唯一氮源的培养基中加入④，在培养某细菌后指示剂变⑤，可以初步鉴定该细菌能够分解尿素。 [课堂探究] 一、研究思路 1.以下是分离土壤中分解尿素的细菌的培养基成分表，据表分析：

（1）表中的KH2PO4、NaHPO4和MgSO4为细菌提供①，葡萄糖为细菌提供 ②，尿素为微生物提供③。从物理性质上看该培养基属于④培养基。（2）如果将利用蛋白质和多肽为唯一氮源的微生物培养在该培养基上，能否长出相应的菌落？①。能够在该培养基上生长繁殖的微生物只能是②。所以从功能上看该培养基属于③培养基。 2.三位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中细菌数量。在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下统计结果： 甲同学涂布了一个平板，统计的菌落数是260； 乙同学涂布了三个平板，统计的菌落数是210、240和250，取平均值233； 丙同学涂布了三个平板，统计的菌落数是21、212和256，取平均值163； （1）一个菌落就是一个细菌吗？①。一个菌落可以代表样品中的一个活菌吗？②。事实上，统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，原因是③。（2）在三位同学的统计中，只有一位同学的统计是正确的，另两位同学的统计不正确的原因是：①。（3）除了上述方法外还可以用显微镜直接测定微生物的数量，通过显微镜直接计数法得到的一定是活菌数吗？①。要得到活菌数应该采取的措施是②。 3.在做本课题实验时，A同学从对应106倍稀释的培养基中筛选出大约150个菌落，而其他同学在同样的稀释度下只选择出大约50个菌落。 （1）你认为出现A同学这种结果的原因可能是什么？①。针对你提出的可能原因，设计对照实验，帮助A同学排除影响实验结果的因素：②。 （2）在探究实验中，实验设计要遵循①等原则，即实验组和对照组只有②不同，其它条件都相同。这样可以排除任何其他可能原因的干扰，确保实验结果是③引起的，从而提高实验结果的④。 二、实验设计 以下是土壤中某样品细菌的分离与计数实验流程：