微生物的革兰氏染色记录 R

编码：R（SOP-QC-1026）-01

微生物的革兰氏染色记录

一、微生物信息

微生物的来源：

微生物的发现日期：微生物的类型

二、微生物的分离纯化

培养基

名称配制日期有效期至

培养条件

温度培养时间年月日时分至年月日时分

分离纯化的结果

纯菌株的培养特征

三、微生物的革兰氏染色

染色日期原始菌株的来源

试剂试液批号/配制日期有效期至备注

草酸铵结晶紫染色液

卢戈氏（Lugol）碘液

0.9%无菌氯化钠溶液

番红复染液

95%乙醇

香柏油

仪器设备型号生产厂家

显微镜LEICA DM500LEICA 目镜：10×；物镜：100×。

革兰氏染色结果

操作人：年月日复核人：年月日

病理学技术—特殊染色最最全总结(均配图)

结缔组织染色法 1.1 Mallory三色染色法 蓝色：胶原和网状纤维淡蓝色：软骨、粘液、淀粉样变物质红色：神经胶原纤维、肌纤维、酸性颗粒橘红色：髓鞘、红细胞 图表A 1.1.Mallory染色，显示胶原纤维，A组排列规则

1.2. Masson三色染色法 绿色：胶原纤维 红色：肌纤维 橘红色：红细胞 图吕纤维肉瘤 Masson法：胶丿京纤维呈绿色，肌纤维呈红色，红细胞呈黄色。3. 3X 10 图表B 1.2 Mssson三色法 图表C 1.2.Masson三色染色胃癌组织中血管平滑肌

1.3.显示胶原、网状和弹性纤维的三联染色法 红色：胶原纤维 黑色：网状纤维 绿色：弹性纤维 淡黄色：肌肉、红细胞 图14 子宫组织 Weigert间苯二酚法*胶原纤维呈红色，血管壁弹力纤维呈蓝黑色，肌肉呈黄色° 3, 3X10 图表D 4.Weigert间苯二酚法

、胶原纤维染色法 2.2. Van Gieson (V.G)苦味酸-酸性品红法 鲜红色：胶原纤维 黄色：肌纤维、细胞质、红细胞 蓝褐色：胞核 图5 卵巢组织 Van Gieson苏木嘉法^胶原纤维呈红色円血簣壁肌层呈黄色，细胞核是照色。3. 3X 1CI 图表E 2?胶原纤维，Van Gieson(V.G.)苦味酸-酸性品红法 图心肌梗塞myocardial infarction :心肌梗塞后2个月，van Gieson染色,坏死心肌被染成红色的纤维组织所代替，黄色区域为残留的心肌纤维。

2.1天狼星红（Sirius red）苦味酸染色法（参照上图） 红色：胶原纤维 绿色：细胞核 黄色：其他天狼星红苦味酸染色法：（偏光显微镜）I型：强双折光性，呈黄色或红色纤维n型：弱双折光，呈多种色彩疏网状分布川型：弱双折光，呈绿色的细纤维w型：弱双折光的基膜，呈淡黄色

微生物染色(英文)

Role of Special Histochemical Stains in Staining Microorganisms Rashmil Saxena, BFA, HT(ASCP)CM Division of Transplantation Department of Surgery, Indiana University Indianapolis, IN, USA M icroorganisms encountered in routine pathology specimens include bacteria, fungi, protozoa and viruses1. Several histochemical stains help to visualize the first three groups of organisms; however, histochemical stains do not offer an advantage over H&E in the visualization of viruses and immunohistochemistry is the preferred method for this purpose. Histochemical stains also help to identify and classify bacteria, fungi and protozoa. The Giemsa and Gram’s stains help to visualize bacteria as well as classify them on their morphological characteristics. Thus bacteria can be classified into cocci or bacilli and cocci can be further classified into diplococci, staphylococci and streptococci based on their appearances on the Gram and Giemsa stains. The Gram stain also classifies bacteria into Gram-positive and Gram-negative organisms depending upon whether they take up the Gram stain or not; this classification is clinically useful and helps in therapeutic decisions. Some bacteria may not be adequately visualized with the Gram’s and Giemsa stains. Of these, the clinically most significant ones are mycobacteria and spirochetes. Mycobacteria stain with carbol fuschin and resist decolorization with acid-alcohol, leading to their designation as “acid-fast bacilli”. Spirochetes can be stained with a variety of silver stains such as the Warthin-Starry, Dieterle and Steiner stains. Finally, due to the large number of gastrointestinal biopsies in routine practice, a large number of stains are available for visualization of the Gram-negative bacillus, Helicobacter pylori. These include Giemsa, Alcian yellow - toludine blue, Diff-Quik, Genta, and Sayeed stains. A large number of laboratories prefer immunohistochemistry for identification of Helicobacter pylori. The Giemsa stain highlights several protozoa such as toxoplasma, leishmania, plasmodium, trichomonas, cryptosporidia and giardia. Ameba can be highlighted by the PAS stain due to their large glycogen content. Histochemical stains for fungi are discussed separately in this publication. Special Stains for Detection of Bacteria Gram Stain Utility of the Stain: The Gram stain is used to stain both bacillary and coccal forms of bacteria (Fig. 1). The most basic classification of bacteria consists of dividing them into Gram-positive and Gram negative bacteria based on whether they take up the Gram’s stain or not. Although the exact mechanism of staining is not known, bacteria that have large amounts of peptidoglycan in their walls retain the methyl violet stain, i.e., they are gram positive, whereas those that have more lipids and lipopolysaccharides in their cell walls are Gram-negative. The definite diagnosis of a bacterial species requires culture but the Gram stain provides a good initial indication of the nature of infection. 1 Some microbiologists also include viruses as microorganisms, but others consider these as non-living. Lwoff (1957). “The concept of virus”. J. Gen. Microbiol. 17 (2): 239–53. T echnical Articles

革兰氏染色的实验原理

革兰氏染色的实验原理 ●G＋细胞壁的网状结构致密，交联度高，用乙醇处理后，发生脱水作用，肽聚糖层孔径缩小，透性降低，故细菌仍保留初染时的紫色。 ●G－肽聚糖层较薄，交联度低，含较多类脂质，故用乙醇处理后，类脂质被溶解，细胞壁孔径变大，通透性增加，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，细胞被脱色，经沙黄复染呈红色。 涂片固定→结晶紫初染（碱性）→碘液媒染→乙醇（丙酮）脱色→番红复染（碱性）

◆◆◆原理： 当用结晶紫初染后，所有细菌都被染成初染剂的兰紫色，碘作为媒染剂，它能与结晶紫结合成结晶紫-碘复合物，从而增强了染料与细菌的结合力。当用脱色剂处理时，两类细菌的脱色效果是不同的。革兰氏阳性细菌的细胞壁主要有舦聚糖形成的网状结构组成，壁厚，类脂含量低，用酒精脱色时细胞壁脱水，使舦聚糖层的网状结构孔径缩小，透性降低，从而使结晶紫碘复合物不易被洗脱而保留在细胞内，经脱色和复染后仍保留初染剂的兰紫色。革兰氏阴性细菌则不同，由于其细胞壁舦聚糖层较薄，类脂含量较高，，所以当脱色处理时，类脂质被酒精溶解，细胞壁透性增大，使结晶紫-碘复合物比较容易被洗脱出来，用复染剂复染后，细胞被染上复染剂的红色。 ◆◆实验步骤： 1、制片 涂片——干燥——固定 2、初染 滴加结晶紫染色1——2分钟，水洗； 3、媒染 用碘液冲去残水，并用碘液覆盖1分钟； 4、脱色 滴加95%酒精脱色，25-30秒，立即水洗； 5、复染 用番红液复染约2分钟，水洗； 6、镜检 干燥后，用油镜观察。 细菌：细菌是一种具有细胞壁的单细胞微生物，在适宜条件下，能进行无性二分裂繁殖，其形态和结构相对稳定。一般体积微小，通常需要借助光学显微镜才能看到，其测量单位用微米表示。

细胞染色方法总结

Hoechst染色:hoechst可以穿过活细胞膜与细胞核结合(主要为凋亡活细胞)在紫外光下将核染为蓝色. Hoechst染细胞核会影响共聚焦显微镜对该样本其他荧光的观察效果.hoechst 有hoechest33342和hoechst33258两种hoechsts33258，hoechst33342二者区别不大，但是hoechst33342对细胞的毒性作用更小一些，所以一般来说hoechsts33258用于细胞固定后再染色，而hoechst33342则可以对活细胞直接进行染色！ 染色步骤 PI (Propidium Iodide碘化丙啶)染色:是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂，常用于细胞凋亡检测.碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一种核酸染料(红色），它不能透过完整的细胞膜，但凋亡中晚期的细胞和坏死细胞由于细胞膜通透性的增加，PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红.用PI单一染色观测培养细胞，只能表示细胞的坏死情况，而不是凋亡（当然晚期凋亡PI亦可着色）。但是如果您只是想知道细胞的死亡情况，而不是仔细区分坏死或凋亡，那么PI单一染色也可以。但是如果您一定要认定细胞的凋亡，那么PI单一染色显然不够！ annexin-v染色细胞凋亡早期,细胞膜标志发生改变.其中,磷脂酰丝氨酸(Annexin-V,PS)外翻,Annexin-V 在Ca+存在的条件下与其高亲和力特异性结合.这样,Annexin-v 染色阳性,表示细胞处于早期凋亡状态.Annexin-V结合不同的荧光抗体,就可以利用流式细胞仪、荧光显微镜以及共聚焦激光扫描显微镜检测细胞凋亡的发生。Annexin V用FITC标记发绿色荧光；如果用PE标记就发红色荧光。 JC-1染色JC-1是一种阳离子染料，可以在线粒体内聚集，低浓度时主要以单体(monomer)存在，发射光以绿光(～525nm)为主；而在高浓度时则可以形成多聚体(aggregation)，发射光以红光(-590nm)为主。线粒体本身存在一定的极性(polarization)，其外膜为负极，内膜为正极。电位差由Ca2+、Na+和H+流调控。当线粒体状态良好时对JC-l摄取量少，因而在线粒体内主要以单体的形式存在绿光强度/红光强度的比值较高。在线粒体发生去极化(depolarization)时，线粒内JC-l的浓度较高，多以多聚体的形式存在，绿光强度/红光强度的比值降低。JC-1染色的绿光强度/红光强度仅取决于线粒体的膜电势(membrane potential)，而与线粒体的形态、体积和密度都无关，因而能更好地反映线粒体的功能状态。由于凋亡发生的早期存在线粒体的去极性，因此，JC-1染色被用于检测凋亡的早期发生。其实验方法如下。 JC-l染色非常简单。首先可将成品JC-1以DMSO配成储存液(1～5mg/ml)，储存于-20℃，用时以培养液稀释至10ug/ml终浓度。对贴壁细胞可以直接弃去培养液，漂洗细胞后直接加入染色液，10-30min后在荧光显微镜下或者激光共聚焦 下观察。线粒体状态好时细胞以绿色为主，当红光信号增强时，红绿相叠，以橙色为主。该染色运用于悬浮细胞时还可以通过流式细胞仪进行检测，收集红/绿信号强度，计算其强度比。

各种染色技术总结

一、原理： 1、革兰氏染色原理：通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，故遇乙醇脱色处理时，因失水反而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙，因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈无色，再经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。 2、芽孢染色法的原理: 芽孢又叫内生孢子(endosopre)，是某些细菌生长到一定阶段在菌体内形成的休眠体，通常呈圆形或椭圆形。细菌能否形成芽孢以及芽孢的形状、芽孢在芽孢囊内的位置、芽孢囊是否膨大等特征是鉴定细菌的依据之一。 芽孢染色法是利用细菌的芽孢和菌体对染料的亲和力不同的原理，用不同染料进行着色，使芽孢和菌体呈不同的颜色而便于区别。芽孢壁厚、透性低，着色、脱色均较困难，因此，当先用弱碱性染料，如孔雀绿（malachite green）或碱性品红（basic fuchsin）在加热条件下进行染色时，此染料不仅可进入菌体，而且也可进入芽孢，进入菌体的染料可经水洗脱色，而进入芽孢的染料则难以透出，若再用复染液（如番红液）或衬托溶液（如黑色素溶液）处理，则菌体和芽孢易于区分。 用着色力强的染色剂孔雀绿或石炭酸复红，在加热条件下染色，使染料不仅进入菌体也可进入芽孢内，进入菌体的染料经水洗后被脱色，而芽孢一经着色难以被水洗脱，当用对比度大的复染剂染色后，芽孢仍保留初染剂的颜色，而菌体和芽孢囊被染成复染剂的颜色，使芽孢和菌体更易于区分。 3、荚膜染色法的原理:荚膜是包围在细菌细胞外面的一层粘液性物质，其主要成分是多糖类，不易染色，故常用衬托染色法，即将菌体和背景着色，而把不着色且透明的荚膜衬托出来。荚膜很薄，易变形，因此，制片时一般不用热固定。由于荚膜与染料的亲和力弱、不易着色；而且可溶于水，易在用水冲洗时被除去。所以通常用衬托染色法（负染）染色，使菌体和背景着色，而荚膜不着色，

微生物的革兰氏染色实验报告

微生物的革兰氏染色 一、实验目的： 1、学习并初步掌握革兰氏染色法； 2、了解革兰氏染色的原理； 3、巩固显微镜的使用。 二、实验原理： 革兰氏染色是细菌学中最重要的鉴别染色法。染色步骤分为四个部分： 1、初染：加入碱性染料结晶紫固定细菌图片； 2、媒染：加入碘液，碘与结晶紫形成一种不溶于水的复合物； 3、脱色：利用有机溶剂乙醇或丙酮进行脱色； 4、复染：复红配成碳酸复红作为复染剂。 成分占细胞壁干重的% 革兰氏阳性细菌革兰氏阴性细菌肽聚糖含量很高（50~90）含量很低（~10） 磷壁酸含量较高（<50）无 类脂质一般无（<2）含量较高（~20） 蛋白质无含量较高G-和G+细胞壁的比较： 1、阳性（G+）菌细胞壁特点：细胞壁厚，只有一层，主要由肽聚糖构成，肽聚糖含量高，结构紧密，脂类含量低。当乙醇脱色时，细胞壁肽聚糖层孔径变小，通透性降低，结晶紫和碘的复合物被保留在细胞壁内，复染后仍显紫色（如芽孢杆菌）。 2、阴性（G-）菌细胞壁特点：细胞壁薄，由两层构成，内壁层和外壁层，细胞壁中脂类中脂类物质含量较高，肽聚糖含量较低，网状结构交联程度低，乙醇脱色时溶解了脂类物质，通透性增强，结晶紫与碘的复合物易被乙醇抽提出来，因此，革兰氏阴性菌细胞被脱色，当复染时，脱掉紫色的细胞的细胞壁又着上红色（例如大肠杆菌）。 三、实验步骤： 1、取一个载玻片，将其洗净并沿一个方向擦拭干净，直至液体不再其上收缩为止；将接种环整平，用灼烧过的接种环在混匀的菌种中取菌，按常规方法图片，应涂大，不宜过厚。 2、将涂片用火焰固定，不宜烤得太狠，否则菌种呈假阳性。 3、滴加1滴结晶紫染液，染色1min，水洗。 4、滴加革兰氏碘液，作用1min，水洗 5、滴加脱色乙醇，脱色30~40s，不宜脱色太狠，否则菌种呈假阴性。 6、水洗，滴加番红复染液，复染1min，水洗，晾干 7、镜检并拍照。 四、注意事项： 1、选用活跃生长期菌种染色，老龄的革兰氏阳性细菌会被染成红色而造成假阴性。 2、涂片不宜过厚，以免脱色不完全造成假阳性。 3、脱色是革兰氏染色是否成功的关键，脱色不够造成假阳性，脱色过度造成假阴性。实验结果与讨论： 1、结果： 高倍镜下观察的菌体图像：

革兰氏染色法的步骤

革兰氏染色法的步骤 详细阐叙革兰氏染色法的步骤 浏览次数:174次悬赏分:0 |解决时间:2011-5-25 17:44 |提问者:肖箫 2011shaw 最佳答案 革兰氏染色 一、目的:在细胞发放之前,利用标准的革兰氏染色法对即将发放的细胞悬液进行检测,判断细胞悬液中是否含有革兰氏阳性菌或革兰氏阴性菌。 二、原理: 通过结晶紫初染和碘液媒染后,在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物,革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密,故遇乙醇脱色处理时,因失水反而使网孔缩小,再加上它不含类脂,故乙醇处理不会出现缝隙,因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内,使其仍呈紫色;而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差,在遇脱色剂后,以类脂为主的外膜迅速溶解,薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出,因此通过乙醇脱色后仍呈无色,再经沙黄等红色染料复染,就使革兰氏阴性菌呈红色。 三、实验用品准备: 灭菌玻片、10-100ul移液器、10-100ul灭菌移液吸头、100ul-1000ul移液器、100ul-1000ul移液吸头、接种环、酒精灯、打火机、革兰氏染色液、吸水纸、显微镜、香柏油、擦镜纸、计时器 四、操作: 1 涂片:取灭过菌的载玻片于实验台上,用移液枪吸取10ul待检样品滴在载玻片的中央,用烧红冷却后的接种环将液滴涂布成一均匀的薄层,涂布面不宜过大。 2 干燥:将标本面向上,手持载玻片一端的两侧,小心地在酒精灯上高处微微加热,使水分蒸发,但切勿紧靠火焰或加热时间过长,以防标本烤枯而变形。 3 固定:固定常常利用高温,手持载玻片的一端,标本向上,在酒精灯火焰处尽快的来回通过2-3次,共约2-3秒种,并不时以载玻片背面加热触及皮肤,不觉过烫为宜(不超过60℃),放置待冷后,进行染色。 4 初染:在涂片薄膜上滴加草酸铵结晶紫1-2滴,使染色液覆盖涂片,染色约 1min。 5 水洗:斜置载玻片,在自来水龙头下用小股水流冲洗,直至洗下的水呈无色为止。 6 媒染:用100-1000ul移液枪吸取约300ul碘液滴在涂片薄膜上,使染色液覆盖涂片,染色约1min。

革兰氏染色液配制

革兰氏染色液 保质期：2-8度一年. 革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，媒染剂碘液进入菌体后与结晶紫结合，革兰氏阳性菌对碘与结晶紫摄取量多且牢固，不易被酒精脱色。革兰氏阴性菌对碘与结晶紫摄取量少，不牢固，易被酒精脱色。为观察方便，脱色后再用一种红色染料如碱性蕃红进行复染。阳性菌仍带紫色，阴性菌则被染上红色。 操作步骤： 1、标本处理： （1）.有菌部位的标本，如痰液、粪便、各种拭子、创面等可直接涂片。（2）.无菌部位的标本，如脑脊液、胸水、腹水、胆汁、尿液、关节液等，应取适量标本（最高可达5-7ml）,经3000rpm 离心10min.，取沉渣涂片染色。 2、涂片制作：菌液涂片时，用接种环沾取菌液点在载玻片上，标本可直接在玻片上涂布；菌落涂片时，先取生理盐水一滴，置玻片上，用接种针挑取菌落在盐水中涂布。制作的涂片应自然干燥，并经火焰固定，固定的温度不宜过高，以玻片背面接触手背不烫为准，否则可能使细菌形态改变。将固定后的涂片进行染色。 3、染色方法： 革兰氏染色的关键在于严格掌握酒精脱色程度，如脱色过度，则阳性菌可被误染为阴性菌；而脱色不够时，阴性菌可被误染为阳性菌。此外，菌龄也影响染色结果，如阳性菌培养时间过长，或已死亡及部分菌自行溶解了，都可能会呈阴性反应。 （1）.加上结晶紫后，染色1分钟，水洗。 （2）.加上碘液后染色1分钟，水洗。 （3）.加上95%酒精,摇动玻片,根据涂片厚度,脱色约30-60秒，水洗,吸去水分。

（4）.加上蕃红后，染色1分钟，水洗。 （5）.吸干或在空气中凉干后，油镜镜检。 4．结果观察：紫色为革兰氏阳性，红色为革兰氏阴性。 注意事项： 1．标本涂片不能太厚，严格按操作要求进行。 2．玻片通过火焰温度不能太高。 3．若涂片较厚，应延长脱色时间，直至不再出现紫色为止。 4．碘液变透明，则不能使用。 5.水洗时动作要轻柔,沿载玻片对角线方向用洗瓶冲洗,以免把菌体冲掉。 革兰氏染色液如果用量少，买现成的比较话算，如果用量大，自己配起来也溶液，就是试剂种类多了点。其配制方法如下： (1)结晶紫(crystal violet)液：结晶紫乙醇饱和液(结晶紫2g溶于20mL95%乙醇中)20mL，1%草酸铵水溶液80mL 将两液混匀置24h后过滤即成。 (2)卢戈(Lugol)氏碘液：碘0.33g，碘化钾0.66g，蒸馏水100mL。先将碘化钾溶于少量蒸馏水中，然后加入碘使之完全溶解，再加蒸馏水至100mL即成。配成后贮于棕色瓶内备用，如变为黄色即不能使用。 (3)95%乙醇：用于脱色，脱色后可选用以下(4)或(5)的其中一项复染即可。 (4)番红溶液：番红O(safranine，又称沙黄O)2.5g, 95%乙醇100mL，溶解后可贮存于密闭的棕色瓶中，用时取20mL与80mL蒸馏水混匀即可。

组织染色总结

组织染色总结1.HE染色 原理：苏木精染液为碱性，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。 应用：观察组织形态,或鉴别坏死/凋亡细胞。 2.Masson染色/ Van Gieson染色 原理：染色原理与阴离子染料分子的大小和组织的渗透有关，小分子量易穿透结构致密、渗透性低的组织；而大分子量则只能进入结构疏松、渗透性高的组织。 应用：区分胶原纤维和肌纤维。 3.EVG染色 原理：VERHOEFF’S VAN GIESON染色，简称EVG染色，组织被含有三氯化铁和碘的苏木精染色后,再用过量的媒染剂(三氯化铁)中断组织与染料的结合。染料被分化液中的大量媒染剂吸引,使其从组织中清除。弹性纤维对铁苏木精具有较强的吸引力, 使染料能比其他组织保留更久。 应用：观察血管弹性纤维的形态及变化。 4.天狼猩红染色 原理：天狼猩红和其衬染液都是强酸性染料，易与胶原分子中的碱性基团结合，吸附牢靠。偏振光镜检查，胶原纤维有正的单轴双折射光的属性，与天狼猩红染色液结合后，可增强双折射，提高分辨率，从而区分两型胶原纤维。 应用：观察组织纤维化程度，以偏振光进行胶原亚型的分区。 5.VonKossa染色 原理：组织切片以硝酸银处理，钙可被银沉积物替换，由强光还原为可见的金属银。 应用：观察组织内病理性钙沉积情况。 6.红油O染色 原理：油红O为脂溶性染料,在脂肪内能高度溶解,可特异性的使组织内甘油三酯等中性脂肪着色。 应用：主要对组织内脂质（如脂滴）染色。

7.PAS染色 原理:PAS染色（Periodic Acid-Schiff stain）又称过碘酸雪夫染色或糖原染色。过碘酸能使细胞内乙二醇基氧化成二醛，醛基与雪夫氏溶液起反应，使无色品红结合成红色，沉着于含糖原的细胞结构上。 应用：观察肝脏、肌肉等组织内糖原的变化；观察肠、胃、肺、支气管等杯状细胞酸性粘液物质变化。 8.阿利新蓝染色 原理：阿利新蓝（Alcian）为类铜钛花青共轭染料，可与组织内含有的阴离子基团如羧基和硫酸根形成不溶性复合物。 应用：常用于软骨组织或早幼粒细胞、巨核细胞染色，可鉴别酸性黏蛋白（硫酸黏蛋白和唾液黏蛋白）、蛋白多糖和透明质酸等成分。 9.甲苯胺蓝染色 原理：甲苯胺蓝为醌亚胺染料，甲苯胺蓝中的阳离子可与组织细胞的酸性物质结合而呈蓝色。 应用：观察软骨组织形态或组织内肥大细胞的数量及分布。 10.尼氏染色 原理：Nissl染色液(Nissl Staining Solution)的有效成分是碱性染料焦油紫(Cresyl violet)，其和RNA或DNA结合后，可染色粗面型内质网上的核糖体，也可染色细胞核，使其呈现斑驳的蓝紫色。 应用：观察脑或脊髓等中枢神经系统内神经元尼氏体的变化。 11.LFB髓鞘染色 原理：Luxol fast blue（LFB，罗克沙尔坚牢蓝）属铜-酚箐燃料，在乙醇溶液中可与髓鞘磷脂特异性结合。 应用：观察神经髓鞘的形态及变化。 12.普鲁士蓝染色 原理：亚铁氰化钾溶液可使三价铁离子从蛋白质中被稀盐酸分离出来，三价铁与亚铁氰化钾反应，生成一种不溶解的蓝色化合物亚铁氰化铁（普鲁士蓝）。 应用：常用于吞噬细胞内三价铁盐的含量测定和定位。 13.番红-固绿染色

革兰氏染色法的过程及原理

革兰氏染色法的过程及原理 一，过程 1 ．涂片 将培养的不同菌分别作涂片（注意涂片切不可过于浓厚），干燥、固定。固定时通过火焰l 一2 次即可，不可过热，以载玻片不烫手为宜。 2 ．染色 ( 1 ）初染加草酸铰结晶紫一滴，约一分钟，水洗。 ( 2 ）媒染滴加碘液冲去残水，并覆盖约一分钟，水洗。 ( 3 ）脱色将载玻片上面的水甩净，并衬以白背景，用95 ％酒精滴洗至流出酒精刚刚不出现紫色时为止，约20 一30 秒钟，立即用水冲净酒精。 ( 4 ）复染用番红液染1 一2 分钟，水洗。 ( 5 ）镜检干燥后，置油镜观察．革兰氏阴性菌呈红色，革兰氏阳性菌呈紫色。以分散开的细菌的革兰氏染色反应为准，过于密集的细菌，常常呈假阳性。( 6 ) 同法在一载玻片上以大肠杆菌与枯草芽孢杆菌混合制片，作革兰氏染色对比。 二，原理 革兰氏染色法（Gram stain ）不仅能观察到细菌的形态而且还可将所有细菌区分为两大类：染色反应呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌，用G＋表示：染色反应呈红色（复染颜色）的称为革兰氏阴性细菌，用G 一表示。细菌对于革兰氏染色的不同反应，是由于它们细胞壁的成分和结构不同而造成的。革兰氏阳性细菌的细胞壁主要是由肤聚糖形成的网状结构组成的，在染色过程中，当用乙醇处理时，由于脱水而引起网状结构中的孔径变小，通透性降低，使结晶紫一碘复合物被保留在细胞内而不易脱色，因此，呈现蓝紫色；革兰氏阴性细菌的细胞壁中肤聚糖含量低，而脂类物质含量高，当用乙醇处理时，脂类物质溶解，细胞壁的通透性增加，使结晶紫一碘复合物易被乙醇抽出而脱色，然后又被染上了复染液（番红）的颜色，因此呈现红色。 革兰氏染色的关键在于严格掌握酒精脱色程度，如脱色过度，则阳性菌可被误染为阴性菌：而脱色，不够时，阴性菌可被误染为阳性菌。此外，菌龄也影响染色结果，如阳性菌培养时间过长，或已死亡及部分菌自行溶解了，都常呈阴性反应。 青霉素作用机制 干扰细菌细胞壁的合成。青霉素你的结果与细胞壁的成分粘肽结构中德D-丙氨酰-D-丙氨酸近似，可与后者竞争转肽酶，阻碍你粘肽的形成，造成细胞壁的缺损，使细菌失去细胞壁的渗透屏障，对细菌起到杀灭作用。 溶菌酶与青霉素对细菌细胞壁的作用 溶菌酶作用机制：是一种能水解致病菌种黏 多糖的碱性酶，只要通过破坏细胞壁中的 N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡萄糖之间的 B-1，4糖苷键，使细胞壁不溶性黏多糖分 解成可溶性糖肽，导致细胞壁破裂内容物流 出而使细菌溶解，溶菌酶还可以和带负电荷 的病毒蛋白直接结合，与DNA，RNA，脱辅

病理学技术—特殊染色最最全总结

结缔组织染色法 Mallory三色染色法 蓝色：胶原和网状纤维 淡蓝色：软骨、粘液、淀粉样变物质 红色：神经胶原纤维、肌纤维、酸性颗粒 橘红色：髓鞘、红细胞 图表 A 染色，显示胶原纤维，A组排列规则 . Masson三色染色法 绿色：胶原纤维 红色：肌纤维 橘红色：红细胞 图表 B Mssson三色法 图表 C 三色染色胃癌组织中血管平滑肌 . 显示胶原、网状和弹性纤维的三联染色法 红色：胶原纤维 黑色：网状纤维 绿色：弹性纤维 淡黄色：肌肉、红细胞

二、胶原纤维染色法 . Van Gieson（）苦味酸-酸性品红法 鲜红色：胶原纤维 黄色：肌纤维、细胞质、红细胞 蓝褐色：胞核 图表 E 2.胶原纤维，Van Gieson.)苦味酸-酸性品红法 图心肌梗塞 myocardial infarction：心肌梗塞后2个月，van Gieson 染色, 坏死心肌被染成红色的纤维组织所代替，黄色区域为残留的心肌纤维。 天狼星红（Sirius red）苦味酸染色法(参照上图)

黄色：其他 三、网状纤维染色 Gordon-Sweets银氨染色法（梅花开枝图，金色阳光伴树枝）

黄棕色：胶原纤维 淡红色：细胞质（红液复染） 图表 F 3.Gordon-Sweets氢氧化银氨液浸染法 Gomori氏银氨液配制法 图表 G Gomori氏银氨液配制法 四、弹性纤维染色 Gomori醛复红染色法 *甲醛生理盐水液固定的染色效果最佳 图表 H 醛复红染色法 五、显示弹性、胶原纤维的双重组合染色法 蓝绿色：弹性纤维 红色：胶原纤维 黄色：背景

六、肌肉组织染色 △横纹肌组织染色 Mallory磷钨酸苏木精染色法（PTAH） 蓝色：胞核、纤维、肌肉、神经胶质纤维、纤维蛋白、横纹肌黄色或枚红色：胶原纤维、网状纤维软骨基质、骨 微紫色：粗弹性纤维（有时） 紫蓝色或棕黄色：缺血缺氧早期病变的心肌 图表 J .磷钨酸苏木素法 图表 K .磷钨酸苏木素染色液 △早期心肌病变组织染色 染色法（1974年）

染色方法总结

mydye 发表于 2006-3-4 14:37:00 AgNOR染色法: 1、试剂配制： （1）AgNOR染色液： 甲液：明胶2 g 溶于双蒸水至99 ml，在60℃使之完全溶解，再加入纯甲酸1 ml 摇匀待用。 乙液：硝酸银50 g 溶解于双蒸水中至100 ml，4℃冰箱保存。 （2）AgNOR工作液 取甲液10 ml，乙液20 ml 临用前混合。 2、步骤： （1）切片脱蜡至水 （2）双蒸水洗2次 （3）AgNOR 工作液中（25℃）浸染30分钟（暗处进行）（镜下观察）（4）双蒸水洗3次 （5）脱水,透明,封固 3、结果：油镜观察，细胞核及胞质背景为淡黄色， AgNOR呈棕黑色颗粒状。 B 鞭毛染色法: １．试剂配制： 甲液：丹宁酸５克 氯化铁（ＦｅＣｌ3）１．５克 福尔马林（１５％）２．０毫升 氢氧化钠（ＮａＯＨ）１％１．０毫升 乙液：硝酸银（ＡｇＮＯ3）２克 蒸馏水１００毫升 制备乙液时，待硝酸银溶解后，取出１０毫升备用，向余下的９０毫升硝酸银液中滴加浓氢氧化铵，先呈很浓厚的沉淀，再继续滴加至刚刚溶解沉淀成澄清液为止。再将备用的硝酸银溶液慢慢逐滴加入澄清液中，先呈现薄雾，但轻摇则消失，继续边滴加边摇动，待澄清液呈现略有轻微不消散的薄雾状为止。如雾重，则银盐沉淀，不宜使用。 ２．染色方法： （１）将待检菌接种在新制备的肉汤琼脂斜面上，置３７°培养１６—２０小时，备用。 （２）在载玻片的中部相隔一厘米处，用接种环各沾一滴蒸馏水，然后用接种环挑取湿润处的菌苔少许于一端的水滴中，倾斜玻片使培养物流至另一水滴中，两水滴自然相通，菌体从上位自然扩散到下位水滴中，待干燥后染色。 （３）在干燥涂片上加甲液３—５分钟，用蒸馏水冲洗。将残水沥干或用乙液冲去残水后，加适量乙液保持３０—６０秒钟。染色时在酒精灯上稍加热，使染液出现蒸汽即可，用蒸馏水冲洗。 （４）镜检：菌体及鞭毛皆染成茶色。

革兰氏染色法

革兰氏染色法 革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，1884年由丹麦医师、细菌学家汉斯·克里斯蒂安·约阿希姆·革兰氏(Hans Christian Joachim Gram,1853-1938)创立。 方法概述 细菌先经碱性染料结晶紫染色，而经碘液媒染后，用酒精脱色，在一定条件下有的细菌紫色不被脱去，有的可被脱去，因此可把细菌分为两大类，前者叫做革兰氏阳性菌（G+），后者为革兰氏阴性菌（G－）。为观察方便，脱色后再用一种红色染料如碱性蕃红、稀释复红等进行复染。阳性菌仍带紫色，阴性菌则被染上红色。有芽胞的杆菌和绝大多数的球菌，以及所有的放线菌和真菌都呈革兰氏正反应；弧菌，螺旋体和大多数致病性的无芽胞杆菌都呈现负反应。 在治疗上，大多数革兰氏阳性菌都对青霉素敏感（结核杆菌对青霉素不敏感）；而革兰氏阴性菌则对青霉素不敏感（但奈瑟氏菌中的流行性脑膜炎双球菌和淋病双球菌对青霉素敏感），而对链霉素、氯霉素等敏感。所以首先区分病原菌是革兰氏阳性菌还是阴性菌，在选择抗生素方面意义重大。 革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌在化学组成和生理性质上有很多差别，染色反应不一样。 现在一般认为革兰氏阳性菌体内含有特殊的核蛋白质镁盐与多糖的复合物，它与碘和结晶紫的复合物结合很牢，不易脱色，阴性菌复合物结合程度底，吸附染料差，易脱色，这是染色反应的主要依据。另外，阳性菌菌体等电点较阴性菌为低，在相同PH条件下进行染色，阳性菌吸附碱性染料很多，因此不易脱去，阴性菌则相反。所以染色时的条件要严格控制。 例如，在强碱的条件下进行染色，两类菌吸附碱性染料都多，都可呈正反应；PH很低时，则可都呈负反应。此外，两类菌的细胞壁等对结晶紫—碘复合物的通透性也不一致，阳性菌透性小，故不易被脱色，阴性菌透性大，易脱色。所以脱色时间，脱色方法也应严格控制。染色原理 G﹢菌：细胞壁厚，肽聚糖网状分子形成一种透性屏障，当乙醇脱色时，肽聚糖脱水而孔隙缩小，故保留结晶紫-碘复合物在细胞膜上。呈紫色。 Gˉ菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，其脂含量高,乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁，番红染液复染后呈红色。

微生物染色设备的制作流程

图片简介: 本技术介绍了一种微生物染色装置，涉及医疗卫生临床检验设备领域，包括箱体，箱体内设有放置台和安装台，安装台上设有试管，试管底部设有控制试管启闭的开关机构；箱体内位于放置台的下方设有水池，还包括用于驱动水池升降的驱动机构，水池连通有控制水流进和流出的执行机构；箱体底部设有用于产生热风的送风装置，箱体顶壁开设有通孔；开关机构、驱动机构和执行机构信号连接有控制器；箱体内壁固接有位于水池上方的环形导流带，环形导流带远离箱体内壁的一侧向箱体内壁弯曲；水池底部设有环形导轨，环形导轨内滑动连接有滑动杆，滑动杆的顶端固接有高于水池的帆状物，帆状物能够将风能转换为动能，帆状物靠近水池内壁的一侧能够与水池内壁接触。 技术要求

1.一种微生物染色装置，包括箱体，箱体内设有用于放置载玻片的放置台，放置台的上方设有安装台，安装台上设有用于盛装染色液的试管，试管底部设有控制试管启闭的开关机构；箱体内位于放置台的下方设有水池，还包括用于驱动水池升降的驱动机构，水池连通有控制水流进和流出的执行机构；箱体底部设有用于产生热风的送风装置，箱体顶壁开设有通孔；开关机构、驱动机构和执行机构信号连接有控制器；其特征在于： 所述箱体内壁固接有位于水池上方的环形导流带，所述环形导流带远离箱体内壁的一侧向箱体内壁弯曲；所述水池底部设有环形导轨，环形导轨内滑动连接有滑动杆，滑动杆的顶端固接有高于水池的帆状物，所述帆状物能够将风能转换为动能，帆状物靠近水池内壁的一侧能够与水池内壁接触。 2.根据权利要求1所述的微生物染色装置，其特征在于：所述帆状物为与滑动杆的顶端固接的帆叶，所述帆叶倾斜设置，滑动杆靠近水池内壁的一侧设有刮板，刮板与水池内壁接触的一侧设有刷毛。 3.根据权利要求1所述的微生物染色装置，其特征在于：所述环形导流带包括固定部和弹性形变部，所述环形导流带通过固定部与箱体内壁固接，所述环形导流带的弹性形变部位于放置台的上方，所述箱体顶壁设有多个电动推杆，电动推杆输出端的端部与环形导流带的弹性形变部固接，电动推杆与控制器信号连接。 4.根据权利要求3所述的微生物染色装置，其特征在于：箱体内顶壁固接有步进电机，步进电机输出轴端部与所述安装台同轴固接；安装台沿其周向开设有多个圆孔，所述试管放置在圆孔上；放置台上开设有与试管中心位置对应的用于放置载玻片的凹槽，试管底部还设有与控制器信号连接的反射式光电传感器，步进电机与所述控制器信号连接，控制器信号连接有计时器，计时器设有第一时间阈值、第二时间阈值、第三时间阈值和第四时间阈值，当反射式光电传感器检测到载玻片反射信号时，控制器同时控制步进电机停止、开关机构打开、计时器开始计时和执行机构放水，当计时器计时第一时间阈值结束后，控制器控制微型电磁阀关闭；当计时器计时第二时间阈值结束后，控制器启动驱动机构将水池上升至将载玻片浸没；当计时器计时第三时间阈值结束后，控制器控制驱动机构复位，同时控制电动推杆的输出端收回；当计时器计时第四时间阈值结束后，控制器同时控制步进电机启动、计时器清零和电动推杆复位。

革兰氏染色的机理和步骤

1.革兰氏染色的机理和步骤 机理：G+、G-主要由其CW化学成分的差异而引起对乙醇的通透性，抗脱色能力的差异。主要有肽聚糖的厚度和结构所决定。 G+的CW:肽聚糖层厚，脂质含量低。乙醇脱色时CW脱水，孔径减少，透性降低，不易脱色，呈初染得蓝紫色。 G-的CW：肽聚糖层薄，脂质含量高。乙醇脱色时，类脂被乙醇溶解，透性升高，细胞被复染显红色。 步骤：①涂片：在干净的载玻片上滴一滴水，用接种环挑取菌体均匀涂布于水中。 ②固定：将玻片靠近酒精灯火焰，蒸干水分，但不要烤焦。 ③初染：用碱性颜料结晶紫对菌液涂片进行初染。 ④媒染: 以碘液媒染1min，水洗，吸干水分。(细胞内形成结晶紫与碘的复合物，增强相互作用） ⑤脱色(关键步骤）：以95%的乙醇脱色30s，应适当振荡均匀，是乙醇脱色完全。 ⑥水洗，吸干。 ⑦复染：??(第2张）复染30s，水洗吸干。 ⑧干燥镜检。 2、用渗透皮层膨胀学说解说芽孢耐热机制。 芽孢的耐热性在于芽孢衣对多价阳离子和水分的透性很差，以及皮层的离子强度很高，这就使皮层产生了极高的渗透压去夺取芽孢核心中水分，其结果造成皮层的充分膨胀和核心的高度失水，正是这种

失水的核心才赋予芽孢极强的耐热性。 3、引起微生物培养过程中PH变化的几种可能反应，并说明如何能够维持微培PH稳定。 答：培养过程中，由于营养物质被分解利用，代谢产物的形成与积累，会导致PH变化。 （第2张中的图） 还与培养基的C/N比有关，C/N高，经培养基后PH显著下降，C/N 低，经培养基后PH明显上升。 PH调节：①加入缓冲剂--------常用:一氢二氢磷酸盐，K2HPO4 呈碱性，KH2PO4 酸性，只在一定的PH范围内调节（6.4--7.2） ②大量产酸的菌株，加CaCO3调节，CaCO3难溶于水，不会使培养液的PH过度增加，但可不断中和微生物产的酸。 ③培养液中存在天然的缓冲系统，如AA，肽，Pr均属两性电解质，也起缓冲的作用。 ④过酸：治标------加NaOH、Na2CO3中和，治本-----加适量氮源：NaNO3、Pr、NH3·H2O；增加通风量。 ⑤过碱：治标-----H2SO4、HCl中和，治本----加适量碳源:G类，脂类;减小通风量。 3、抗生素法和菌丝过滤法为何能浓缩营养缺陷型突变株？ 抗生素法（青霉素法）：适用于细菌。原理：青霉素抑制肽聚糖链间的交联，组织了合成完整的CW，野生型B处于正常生长繁殖，所以对青霉素敏感，可被抑制或杀死；营缺B在基本培养基上休眠状态

革兰氏染色法的过程及原理

革兰氏染色法的过程及原理一，过程 1 ．涂片将培养的不同菌分别作涂片(注意涂片切不可过于浓厚)，干燥、固定。固定时通过火焰l 一 2 次即可，不可过热，以载玻片不烫手为宜。 2 ．染色 ( 1 )初染加草酸铰结晶紫一滴，约一分钟，水洗。 ( 2 )媒染滴加碘液冲去残水，并覆盖约一分钟，水洗。 ( 3 )脱色将载玻片上面的水甩净，并衬以白背景，用95 ％酒精滴洗至流出酒精刚刚不出现紫色时为止，约20 一30 秒钟，立即用水冲净酒精。 ( 4 )复染用番红液染1 一2 分钟，水洗。 ( 5 )镜检干燥后，置油镜观察．革兰氏阴性菌呈红色，革兰氏阳性菌呈紫色。以分散开的细菌的革兰氏染色反应为准，过于密集的细菌，常常呈假阳性。 ( 6 ) 同法在一载玻片上以大肠杆菌与枯草芽孢杆菌混合制片，作革兰氏染色对比。二，原理 革兰氏染色法( Gram stain )不仅能观察到细菌的形态而且还可将所有细菌区分为两大类：染色反应呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌，用G+表示：染色反应呈红色(复染颜色) 的称为革兰氏阴性细菌，用G 一表示。细菌对于革兰氏染色的不同反应，是由于它们细胞壁的成分和结构不同而造成的。革兰氏阳性细菌的细胞壁主要是由肤聚糖形成的网状结构组成的，在染色过程中，当用乙醇处理时，由于脱水而引起网状结构中的孔径变小，通透性降低，使结晶紫一碘复合物被保留在细胞内而不易脱色，因此，呈现蓝紫色；革兰氏阴性细菌的细胞壁中肤聚糖含量低，而脂类物质含量高，当用乙醇处理时，脂类物质溶解，细胞壁的通透性增加，使结晶紫一碘复合物易被乙醇抽出而脱色，然后又被染上了复染液 (番红)的颜色，因此呈现红色。 革兰氏染色的关键在于严格掌握酒精脱色程度，如脱色过度，则阳性菌可被误染为阴性菌：而脱色，不够时，阴性菌可被误染为阳性菌。此外，菌龄也影响染色结果，如阳性菌培养时间过长，或已死亡及部分菌自行溶解了，都常呈阴性反应。 青霉素作用机制 干扰细菌细胞壁的合成。青霉素你的结果与细胞壁的成分粘肽结构中德D-丙氨酰-D-丙氨酸近似，可与后者竞争转肽酶，阻碍你粘肽的形成，造成细胞壁的缺损，使细菌失去细胞壁的渗透屏障，对细菌起到杀灭作用。 溶菌酶与青霉素对细菌细胞壁的作用 溶菌酶作用机制：是一种能水解致病菌种黏 多糖的碱性酶，只要通过破坏细胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡萄糖之间的B-1，4糖苷键，使细胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，导致细胞壁破裂内容物流出而使细菌溶解，溶菌酶还可以和带负电荷的病毒蛋白直接结合，与DNA RNA脱辅基蛋白形成复盐，使病毒失活，因此该酶具有抗菌消炎，抗病毒等作用 判断细菌有无鞭毛的方法 电镜观察，鞭毛染色，半固体穿刺培养，菌落形态观察 描述细菌与古细菌在细胞膜上的主要化学区别 在革兰氏阴性菌的表层，有由肽葡聚糖形成的细胞壁，在壁的外面，又有由蛋白质、磷脂质、脂多糖形成的膜层，与里面的细胞质膜相对应，特称此层为细菌外膜。夕卜膜比细胞质膜的磷脂质含量低，但脂多糖的含量则比较高。夕卜膜的蛋白质与细胞质膜不同，主要部分为数种蛋白质所构成。其主要蛋白质的部分与特异的内面的肽葡聚糖以共价键结合。脂多糖存在于外膜的最外层。在