微藻工厂化培养经验分享(附单胞藻的培养配方)

微藻工厂化培养经验分享（附单胞藻的培养配方）

大家好，很高兴今天能跟大家交流一下微藻的规模培育。规模培育在水产养殖方面现在主要运用于大棚生物饵料方面(一定地点建立车间、浓缩之后近距离管道运输到养殖区域)、提取色素添加在饲料中，至于土塘泼洒，如何控制量、增氧和开口饵料这方面正在摸索，需要大家一起总结出经验。今天我跟大家主要跟大家分享一下藻种的工厂化规模化培育。

群里面应该很多人都培育过藻，大家都知道藻种的培育分为一级、二级、三级培养，今天我是简单从一级、二级、三级培养过程可能中遇到的问题、日常管理、接种、藻种营养配方这些方面做一下简单的交流。

因各地环境气候、温度、光照、水质条件不同。不同季节、藻种性质不同，单位水体养殖品种的需求量也不同。所以培养条件、营养盐配方等各有不同。今天我主要是以金藻为例，引申出其他藻种的营养配方，让大家学习一下其中的相似点。

国内大部分水产育苗企业，在育苗生产中都是自备微藻养殖设施，自行生产各类饵料用微藻。但是一般育苗场都普遍缺乏相应的专业技术力量，只能利用各自的藻池和天然水体粗放培养，在饵料微藻种质、生产技术和应用方法上都各自为正，导致微藻种质混乱、供应不稳定、营养成分不平衡、饵料效价低、缺乏多品种集约化生产应用技术；同时，受限于微藻高密度养殖、采收技术和浓缩液保藏技术的限制，国内几乎没有统一的、专业化的饵料微藻质量标准和集中供应点。所以工厂化育苗需要及时的补充藻种，开口饵料非常重要。

首先从工艺流程上来说

一级培养：主要用于保种，主要用的仪器是锥形瓶，其能够完全消毒，所以应用在保种上面特别多。

二级培养：主要是用塑料白桶（聚丙烯材料），生产上也用20L的饮水桶，但是瓶口小，操作不方便，消毒也不彻底；而用氧气袋又易破裂。在南方经常可以见到用玻璃制作的大型鱼缸和氧气袋。

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举报|来自Android客户端2楼2016-03-03 08:04

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知名人士

10

三级培养：主要有小型的10 m3、20 m3、30m3左右的室内水泥池，采光良好，白色透明玻璃钢瓦或塑料薄膜于车间顶部用于培育藻种。

接下来我主要简单的讲一下容器和工具的洗涤、消毒。

培藻过程中所有的容器和工具，比如锥形瓶、矿泉水桶、搅拌棒等必须经过去污渍、肥皂等刷洗，之后再用消毒后的蒸馏水冲洗3-4遍。

消毒的方法一般有加热消毒法、化学试剂消毒法、紫外线消毒法。

一般小型仪器用加热消毒法，比如锥形瓶，方法是在锥形瓶瓶口放一培养皿，瓶中加水，煮沸，煮沸完之后，用牛皮纸或纱布包住，备用，这种方法能杀死营养体的部分芽孢。

大型仪器、工具、培养池用化学药品消毒（漂白粉、酒精、高锰酸钾、铬酸洗液等），漂白粉的有效氯含量一般是30-35%，漂白精的有效氯的含量是漂白粉的2倍，消毒时按1/10000-3/10000的含量配成水溶液，浸泡容器、工具半小时，再用消毒水冲洗3-4次（消毒水既是煮沸、沉淀、过滤其中的水）。

水泥池的消毒可配成高浓度的浆糊状漂白溶液，淋洒池壁，半小时后用消毒水冲洗干净。也可以用较低含量的漂白粉进行全池浸泡后，用消毒水冲洗，停放12小时后才可使用。

酒精消毒一般用于人为操作，如在活化藻种、摇瓶或者搅拌的时候，涂抹手，消毒小的仪器上使用。酒精一般是配置成70-75%左右，杀菌效果是最显著的，使生物蛋白脱水变性凝固，故有杀菌效果。

海水的消毒，一般海水的消毒有过滤和加入化学消毒剂法。因为海水消毒主要用于三级培养，三级大规模培养时候主要用于杀灭有害生物，处理水必须无毒，对培养藻类的生长繁殖影响不大。水消毒必须简单、经济、易行，不然大规模运水特别多的时候培藻成本会加大。

补充：消毒海水时可根据培养的目的和方式选用以下方法之一。

1、加热消毒法：经沉淀、过滤的海水，一般加温至90℃左右维持5分钟或达到沸腾即可。由于海水中的一些对藻类生长有促进作用的有机物在高温时易遭破坏，所以加温时间不宜太长。

2、过滤除菌法：把经沉淀的海水先经砂滤，把大型生物和非生物杂质去除，再用陶瓷过滤罐过滤，除去微小生物。

3、次氯酸钠消毒法：按每立方米海水20毫克有效氯的量加入次氯酸钠溶液，充气10分钟后停气，经6~7小时消毒后，按每立方米水体25克的量加入硫代硫酸钠，强充气4~6小时，用硫酸-碘化钾-淀粉溶液测试，若无余氯即可使用。

4、紫外线消毒：有成型的紫外线消毒器可供选用。但此法不易杀灭较大的浮游动物。最好和过滤法结合使用。

加热消毒我们就不解释了。

主要是过滤除菌消毒，沉淀后的海水经过纱虑池纱虑大型的生物及非生物杂质出去，再经陶瓷过滤罐过滤，除去微小生物，也可两次纱虑，两次纱虑也可以起到比较好的效果。

漂白粉和漂白液消毒的时候，向水中加入漂白粉和漂白液，用硫代硫酸钠中和余氯，中和余氯的过程以及操作流程的具体步骤如下：

氯含量测定

方法一

硫代硫酸钠滴定法

需要的物品:

1%碘化钾溶液(1 g溶于100ml水中)

1.58%硫代硫酸钠溶液(1.58g溶于100ml水中)

HCI 37%

样品溶于一定数量的水中的溶液（即稀释一定倍数）

程序

在滴定瓶中加50ml碘化钾溶液，0.25ml HCI 和1ml样品溶液，这时候瓶中溶液应该变为褐色用硫代硫酸钠滴定，直到瓶中溶液变为澄清（没有颜色）。

每ml硫代硫酸钠可以中和 3.55ppt的氯样品溶液的氯浓度= 硫代硫酸钠的毫升数×3.55 ×100/1000(%) 样品的氯含量=样品溶液的氯浓度×样品稀释倍数

方法二

1．试剂

（1）KI溶液：10%。

（2）淀粉溶液：0.5%。称取0.5克可溶性淀粉于小烧杯中，用少量水搅匀后加入100ml 的沸水中，加入后不断搅拌，并煮沸至溶液透明为止。加热时间不易过长且应迅速冷却，以免降低淀粉指示剂的灵敏性能。如需久存，可加入少量的HgI2或ZnCl2等防腐剂。

（3）H2SO4溶液：2 mol/L。

（4）K2Cr2O7标准溶液：0.1000 mol/L。将K2Cr2O7在150-180℃烘干2小时，放入干燥器中冷却至室温。准确称取1.2258克于100ml烧杯中，加蒸馏水溶解后转入250ml容量瓶中，用水稀释至刻度充分摇匀。

（5）Na2S2O3溶液：0.1 mol/L。将12.5克Na2S2O3 ·5H2O溶解在500毫升新煮沸冷却后的水中，加入0.1克碳酸钠，储于棕色瓶中并摇匀，保存于暗处一周后标定使用。（低浓度的溶液需稀释）

（6）丙二酸：20%溶液。

2．实验步骤

（1）硫代硫酸钠溶液的标定

用25毫升移液管吸取0.1000 mol/L重铬酸钾标准溶液三份，分别置于250毫升碘量瓶中，加入5毫升6N盐酸、5毫升20%KI，摇匀后在暗处放置约5min，待反应完全，用100毫升水稀释。用硫代硫酸钠溶液滴定至溶液由棕色到绿黄色，加入2毫升0.5%淀粉指示剂，继续滴定至溶液由蓝色至亮绿色即为终点。根据消耗的硫代硫酸钠溶液的毫升数计算其浓度。（低浓度的溶液标定类似）

（2）有效氯含量的测定

取10毫升待测消毒溶液，置于250毫升碘量瓶中，加入2 mol/L 硫酸10毫升，10%碘化钾溶液10毫升，此时溶液出现棕色。盖上盖并振摇混匀后加蒸馏水数滴于碘量瓶盖缘，在暗处放置约5min。打开盖，让盖缘蒸馏水流入瓶内。用硫代硫酸钠溶液（装于25毫升棕色滴定管中）滴定游离碘，边滴边摇匀，待溶液呈浅棕黄色时，加入10滴0.5%淀粉指示剂，溶液立即变蓝色，继续滴定至溶液由蓝色至无色即为终点。记录消耗的硫代硫酸钠溶液的毫升数（V，ml）。

重复测3次，取3次平均值进行以下计算。因1 mol/L硫代硫酸钠标准溶液

营养盐

接下来说一下营养盐的加法。以金藻为例，金藻的生长繁殖过程中必须每个营养元素都有一个最低量，如果低于这个最低量，生长繁殖则会受到抑制，如果某种营养的含量过高也会对藻类产生毒害作用，甚至死亡，因为含量过高会破坏渗透压系统，让藻脱水死亡。

今天我跟大家说一下金藻的营养盐，一般主要的营养盐配方是F/2，营养盐有大量元素、微量元素以及维生素，大量元素一般都是硝酸钠（NaNO3）、磷酸二氢钠（NaH2PO4），微量元素有锌（Zn）、锰（Mn）、钼（Mo）、钴（Co）、铜（Cu）、铁(Fe)，维生素有维生素B1（VB1）：主要是辅助糖类代谢，对能量起到积极的作用、维生素B12（VB12）：有利于铁的利用，促进代谢等发育成熟、维生素B6（VB6）：活化多种酶，有助于VB12的吸收等、生物素（VBH）：脂肪和蛋白正常代谢不可或缺的物质，是一种维持生长、繁殖的营养素。

培藻过程中如果是人工繁殖时，在光照、营养盐、PH适合的情况它会非常大规模的繁殖。此时，水体中的二氧化碳会成为藻类繁殖的限制因子。现在金藻和其它藻在人工繁殖的时候，碳源的补充是非常重要的，因为其它营养盐可以通过正交分解得出最优的含量，而在藻体繁殖过程中光合作用需要大量的二氧化碳，从而导致碳源的需求量增大，这时根据情况人为补充碳源的话会起到非常好的繁殖效果，可通过气石、搅拌等方式补充二氧化碳。

培藻过程中如果是人工繁殖时，在光照、营养盐、PH适合的情况它会非常大规模的繁殖。此时，水体中的二氧化碳会成为藻类繁殖的限制因子。现在金藻和其它藻在人工繁殖的时候，碳源的补充是非常重要的，因为其它营养盐可以通过正交分解得出最优的含量，而在藻体繁殖过程中光合作用需要大量的二氧化碳，从而导致碳源的需求量增大，这时根据情况人为补充碳源的话会起到非常好的繁殖效果，可通过气石、搅拌等方式补充二氧化碳。

培养金藻的时候，一般一、二级用康维方，康维方一般基于F/2配方基础上的一个配方，而三级培养的时候用金藻培养液。

金藻培养液：硝酸钠溶液：磷酸二氢钾溶液:柠檬酸铁氨=100：10：1，1000ml灭菌海水。

在三级培养的时候，营养盐的添加都是1:1000的添加，就是1毫升的营养盐添加到1L的水体中。在生产时可以为了生产等便利，可以放大配方比例，在大规模的培养中1：10000的添加也是可以的。实验结果当然是1:1000最好，但是实验和实际生产中肯定有一定的误差，在实际生产中1:10000也可以正常的培育出高密度的金藻。当然在大规模的培养中1：10000的添加，起到的效果稍微差一点，但也不会差到哪里去。

接种

接下来就是接种，接种其实也是一个很简单的操作，接下来我简单说明下。

金藻在二级培养（高密度扩大培养的时候），能达到700——800万个cell/ML，扁藻能达到100——150万个cell/ML，小球藻也能达到1000万个cell/ML。

接种就是把作为藻种的藻液接入新配好的培养液中，进行丰富培养。

接种的过程虽然简单，但要注意藻种的质量、藻种的密度、接入藻液的数量以及接种的时间等问题。

藻种的质量我们可以根据藻细胞运动、附壁、沉淀、镜检颜色，观察它的质量好坏。金藻是金褐色，硅藻是呈黄褐色，绿藻是鲜绿色，有运动能力会上浮，没有运动能力均匀漂浮在水中。

附壁和沉淀：好的藻种一般没有明显的附壁，如果藻种受到环境因子等各方面的不适宜条件的时候，会大量的聚集沉淀。

镜检的时候一般都是观察颜色和运动，有无杂藻，有无大的原生动物和虫子，水体中的藻种是否过关。

接藻的时候，金藻培育从二级向三级接的时候，金藻藻细胞达到250万/毫升的时候就可以接种了。

一级培养或小型培养可以是1:2或者1:3的接种，二级培养或生产培养可以是1:10、1:20、1:40的接种也可以正常生长。刚说的这些，1:20不清楚，我举一些简单的例子，假设5000Ml 的锥形瓶，培养5000ML的藻液，可以接种1个20L的矿泉水桶，3个20L的矿泉水桶可以接种1m3的保种池，1m3米的保种池可以接种2个5m3的生产池。

接种时间一般选择在早上的8:00——10:00，这时候选择接种是因为藻体的活性随着光照、环境温度的上升，活性是最好的，接种的时候它能够快速的进入到指数生长期。

培养工艺，金藻培养有一次性施肥、混合营养盐的施肥和碳酸氢钠分批次的施肥。金藻在国内现在应该是开放式半连续培养。

日常管理

日常管理是非常重要的一块，跟消毒一样。比如你培养了30m3的水池，如果你培养时从颜色等感觉还行，突然之间有可能全部死亡，可能是你日常管理不规范、不细致，引起杂菌繁殖和无法探知的原因导致培养的藻体全部死亡。

2.2 亚心形扁藻培养液

NaNO3 0.05克

KH2PO4 0.005克

FeC6H5O7 (1%溶液) 0.2毫升

维生素B1 200微克

维生素B12 200毫微克

人尿2毫升

海水1000毫升

3、硅藻培养液配方

3.1、湛江水产学院硅藻培养液

NaNO3 0.08克

KH2PO4 0.008克

FeC6H5O7 (1%溶液) 0.2毫升

Na2SiO3 0.02克

维生素B1 200微克

维生素B12 200毫微克

人尿1.5毫升

海水1000毫升

培养三角褐指藻、小新月菱形藻、钙质角毛藻、牟氏角毛藻。

3.2、中肋骨条藻培养液

KNO3 0.4克

Na2HPO4 ?2H2O 0.04克

K2SiO3 0.02克

Fe(SO4)3 ?7H2O 0.014克

土壤提取液15毫升

“920”植物生长激素4~5国际单位

海水1000毫升

3.3 牟氏角毛藻配方

NH4NO3 5~20毫克

KH2PO4 0.5~1毫克

FeC6H5O7 ?3H20 0.5~2毫克

海水1000毫升

4、金藻培养液配方

4.1 “f /2”培养液

NaNO3 74.8毫克

NaH2PO4 4.4毫克

Na2SiO3 ?9H2O 8.4~16.7毫克

f /2微量元素溶液1毫升

f /2维生素溶液1毫升

海水1000毫升

4.2 等鞭金藻OA-3011培养液（陈椒芬等）

NaNO3 0.06克

K2HPO4 0.004克

FeC6H5O7 0.5毫克

Na2SiO3 0.005克

维生素B1 100~500微克

维生素B12 0.5~1.5毫克

NaHCO3 1克

海水1000毫升

二、微量元素溶液配方

1、A5-B6微量元素溶液配方A5：

H3BO3 2.86克

MnCl2.4H2O 1.81克

ZnSO4.7H2O 0.22克

CuSO4.5H2O 0.08克

Na2MoO4 0.021克纯

水1000毫升

H2SO4 （浓）1滴

B6NH4VO3 229.6毫克

Cr2(SO4)4.24H2O 960.2毫克

NiSiO4.6H2O 447.8毫克

Co(NO3)2.6H2O 493.8毫克

Ti溶液20毫升

0.2摩尔/升H2SO4 1000毫升

Ti溶液配法：把736.6克草酸钛溶解于少量纯水中，加入氢氧化铵使成碱性，发生沉淀。用离心机将沉淀集中，用0.2摩尔的硫酸20毫升溶解。用量：每1000毫升培养液中加入A5、B6溶液各1毫升。

2、“f /2”微量元素溶液

ZnSO4.4H2O 23毫克

MnCl2.4H2O 178毫克

CuSO4.5H2O 10毫克

FeC6H5O7.5H2O 3.9克

Na2MoO42H2O 7.3毫克

CoCl2.6H2O 12毫克

Na2EDTA 4.35克

纯水1000毫升

每1000毫升培养液加1毫升。

三、维生素溶液配方

1、维生素溶液S3

硫胺素盐酸盐0.05克

尼古丁酸（烟酸）0.01克

泛酸钙0.01克

对氨安息香酸1.0克

维生素H 0.1

克肌醇0.5

克叶酸0.2

微克胸（腺）间氮苯0.3克

纯水1000毫升

每1000毫升培养液中加入1毫升。

2、“f /2”微生素溶液

维生素B12 0.5毫克

维生素B1 100毫克

维生素H 0.5毫克

纯水1000毫升

1000毫升培养液中加入1毫升。

现在很多情况下我们都是藻种培养规模培育之后，很多人希望运用到土塘培养方面，土塘水质调控、开口饵料等方面（单位幼苗生物饵料投喂量），但是给土塘如何泼洒、如何控制那个量，起到最好的增氧效果方面，我在天津做的时候我的一个老师建议我别往这方面做，因为各地环境因子等不同，在室外培养受到天气、气候等的影响，不利于培养。

所以我只是以金藻为例，把培育藻的简单的操作和需要注意的一些点跟大家交流一下，希望有能力、有想法的、自己想做的可以往土塘方面发展，因为个人能力有限，各地情况不同，我也总结不了这么多东西。

各种培养基配方

146种培养基配方 1、牛肉膏蛋白胨培养基（培养细菌用） 牛肉膏3g 蛋白胨5g 氯化钠10g 琼脂15~20g pH 7.0~7.2 水1000mL 2、2、高氏（Gause）1号培养基（培养放线菌用） 可溶性淀粉20g 硝酸钾1g 氯化钠0.5g 磷酸氢二钾0.5g 硫酸镁0.5g 硫酸亚铁0.01g 琼脂20g 水1000mL pH 7.2～7.4 配制时，先用少量冷水将淀粉调成糊状，倒入煮沸的水中，在火上加热，边搅拌边加入其他成分，溶化后，补足水分至1000mL。121℃灭菌20min。 查氏（Czapek）培养基（培养霉菌用） 硝酸钠2g 磷酸氢二钾1g 氯化钾0.5g 硫酸镁0.5g 硫酸亚铁0.01g 蔗糖30g 琼脂15~20g 水1000mL pH 自然 121℃灭菌20min。

4、马丁氏（Martin）琼脂培养基（分离真菌用） 葡萄糖10g 蛋白胨5g 磷酸二氢钾1g 七水合硫酸镁0.5g 1/3000孟加拉红 100mL （rose bengal，玫瑰 红水溶液） 琼脂15—20g pH 自然 蒸馏水800mL 112℃灭菌30min。 临用前加入0.03%链霉素稀释液100mL，使每毫升培养基中含链霉素30μg。 5、马铃薯培养基（简称PDA）（培养真菌用） 马铃薯200g 蔗糖（或葡萄糖）20g 琼脂15—20g pH 自然 培养基的配制：马铃薯去皮，切成块煮沸30min，然后用纱布过滤，再加糖及琼脂，熔化后补足水至1000mL。121℃灭菌30min。 6、麦芽汁琼脂培养基 培养基的配制： (1)、取大麦或小麦若干，用水洗净，浸水6—12小时，至15℃阴暗处发芽，上面盖纱布一块，每日早、中、晚淋水一次，麦根伸长至麦粒的两倍时，即停止发芽，摊开晒干或烘干，贮存备用。 (2)、将干麦芽磨碎，一份麦芽加四份水，在65℃水浴中糖化3—4小时，糖化程度可用碘滴定之。加水约20mL，调匀至生泡沫时为止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。 (3)、将糖化液用4—6层纱布过滤，滤液如混浊不清，可用鸡蛋白澄清，方法是将一个鸡蛋白加水约20mL，调匀至生泡沫时为止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。 (4)、将滤液稀释到5—6波美度，pH约6.4，加入2%琼脂即成。121℃灭菌30min。 7、无氮培养基（自生固氮菌、钾细菌）

微藻培养方法汇总

微藻的培养方式，有多种类型，现介绍一些主要的培养方式。 （一）纯培养与单种培养 纯培养与单种培养是按培养的纯度来划分的。 纯培养：是指排除了细菌在内的一切生物的条件下进行的培养。纯培养要求有无菌室、超净工作台等设备条件，容器、工具、培养液等必须严格灭菌。纯培养是科研工作中不可缺少的技术。 单种培养：生产性的培养中，是不排除细菌存在的，为了区别于纯培养而称之为单种培养。 二）一次培养、连续培养和半连续培养该类培养是按采收方式划分的一次培养：又称有限培养，是在一定的容器中，根据藻类需要加入无机和有机营养，配成培养液，把少量的藻种接种进去，然后在适宜于藻类生长的环境条件（温度、盐度、光照、PH 值等）下培养，待藻液达到一定的密度后，便一次性采收或作进一步扩大培养。 连续培养：一般在室内进行，采用自动控温、人工光源、封闭式通气培养。在培养容器内，新的培养液不断流入，达到一定密度的培养液不断流出。培养液的流入量和流出量可根据微藻的生长情况及需要进行人不控制，并保持平衡。在培养过程中，营养物质浓度和藻类细胞相对稳定，产量高，在国外应用较多，我国目前生产上很少采用。 半连续培养：是指在一次培养的基础上，当藻类细胞达到一定密度后，每天收获一部分浓藻液，并加入新的营养液继续培养。半连续培养是生产中常用的方法，每天的收获量根据育苗的需要及藻液的生长情况确定。 三）藻种培养、中继培养和生产性培养该类培养是按培养的规模和目的来划分的藻种培养：在室内进行，一般采用一次性培养法。培养容器为100-3000 毫升的三角烧瓶，瓶口用消毒的纸或纱布包扎。目的是培养和供应藻种。 中继培养：目的在于培养较大量的高密度纯种藻液，供应生产性培养接种使用。中继培养一般在室内用大的玻璃容器或塑料大袋中进行。根据需要可分为一级中继培养和二级中继培养。一级中继培养的容器为10 升的大口玻璃缸（南方各省多用）、10-20 升的细口瓶或鱼苗袋，以封闭式不通气培养为主。二级中继培养的容器为0.2-0.4 立方米的水族箱、0.5-1.0 立方米的玻璃钢水槽、0.5-1.0 立方米的小型水泥池等，以开放式通气一次性培养为主；利用塑料大袋进行二级中继培养也是新兴的、有效的好方法（见图2-13 ）。 生产性培养：可在室内也可在室外，有封闭式培养和开放式培养两种类型。目的是供给育苗中的饵料。培养容器为大型水泥池、大型玻璃钢水槽的塑料大袋；也有用土池

微藻工厂化培养经验分享(附单胞藻的培养配方)

微藻工厂化培养经验分享（附单胞藻的培养配方） 大家好，很高兴今天能跟大家交流一下微藻的规模培育。规模培育在水产养殖方面现在主要运用于大棚生物饵料方面(一定地点建立车间、浓缩之后近距离管道运输到养殖区域)、提取色素添加在饲料中，至于土塘泼洒，如何控制量、增氧和开口饵料这方面正在摸索，需要大家一起总结出经验。今天我跟大家主要跟大家分享一下藻种的工厂化规模化培育。 群里面应该很多人都培育过藻，大家都知道藻种的培育分为一级、二级、三级培养，今天我是简单从一级、二级、三级培养过程可能中遇到的问题、日常管理、接种、藻种营养配方这些方面做一下简单的交流。 因各地环境气候、温度、光照、水质条件不同。不同季节、藻种性质不同，单位水体养殖品种的需求量也不同。所以培养条件、营养盐配方等各有不同。今天我主要是以金藻为例，引申出其他藻种的营养配方，让大家学习一下其中的相似点。 国内大部分水产育苗企业，在育苗生产中都是自备微藻养殖设施，自行生产各类饵料用微藻。但是一般育苗场都普遍缺乏相应的专业技术力量，只能利用各自的藻池和天然水体粗放培养，在饵料微藻种质、生产技术和应用方法上都各自为正，导致微藻种质混乱、供应不稳定、营养成分不平衡、饵料效价低、缺乏多品种集约化生产应用技术；同时，受限于微藻高密度养殖、采收技术和浓缩液保藏技术的限制，国内几乎没有统一的、专业化的饵料微藻质量标准和集中供应点。所以工厂化育苗需要及时的补充藻种，开口饵料非常重要。 首先从工艺流程上来说 一级培养：主要用于保种，主要用的仪器是锥形瓶，其能够完全消毒，所以应用在保种上面特别多。

二级培养：主要是用塑料白桶（聚丙烯材料），生产上也用20L的饮水桶，但是瓶口小，操作不方便，消毒也不彻底；而用氧气袋又易破裂。在南方经常可以见到用玻璃制作的大型鱼缸和氧气袋。

几种培养基的配方

一. 土壤样品的采集 第一种: 选择植被群落具有代表性的固定样方,除去地面植被和地表覆盖物,每样方采用土壤剖面法和多点混合取样法采样,将土样混匀,用四分法弃去多余样品,取500g装入灭菌信封, 带回实验室后立即进行土壤微生物分离（4℃保存）、计数。 第二种: 在小区内机械抽取 6 株样木，距树干基部0.5 m 呈梅花形分布挖取根系周围0～20 cm、20～40 cm 和40～60 cm 土样，分层充分混合后作为非根际土壤样品。同时采集各层直径小于0.2～0.5 cm 细根上粘附的土壤，分层充分混合作为根际土壤。供微生物分析的鲜土样装入已消毒过的密封塑料袋，带入实验室。 二. 三大类土壤微生物分离与数量测定 1. 细菌的分离与数量测定 (1)以平板表面涂抹法计数。称取土壤鲜样10g在无菌条件下用无菌水配成不同浓度梯度悬浮液，取稀释度为10-3，10-4，10-5，10-6，10-7土壤悬浮液各50μL，接种于盛有灭菌的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基的培养皿中,用无菌刮刀涂抹均匀。每个浓度3个重复，恒温(28 ℃) 培养3d，选取每皿菌落数为15-150的1个稀释度统计菌落数，按下列公式计算细菌数量： 菌数(cfu/ g) = （菌落平均数×稀释倍数）÷干土% （Ⅰ） 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，配方如下： 牛肉膏3.0 g 琼脂18 g 蛋白胨5.0 g 蒸馏水1000mL pH7.0 —7.2 2. 真菌的分离与数量测定 以平板表面涂抹法计数。即称取土壤鲜样10 g ,在无菌条件下用无菌水配成不同浓度梯度悬浮液,取稀释度为10-2，10-3，10-4的土壤悬浮液各50μL，接种于盛有灭菌的马丁- 孟加拉红培养基的培养皿中,用无菌刮刀涂抹均匀。每个浓度3个重复,恒温(25 ℃) 培养5～7 d，选取每皿菌落数为15～150 的1个稀释度统计菌落数计算真菌数量公式同公式（Ⅰ）。 马丁- 孟加拉红培养基，配方如下： 葡萄糖10.0 g MgSO4.7H2O 1.0 g KH2PO41.0 g 琼脂15 g 蛋白胨 5.0 g 孟加拉红(Rose Bangal) 每升加1%溶液0.33mL 1% 链霉素3 mL 蒸馏水1000 mL pH自然 临用前再加入1% 链霉素3 mL

培养基的配制及使用记录

培养基的配制及使用记录 序号操作指导操作参数记录数据签名 1 检查天平是否在校验有效期 内；检查天平是否正常、完好； 使用前对天平进行调零。 天平编号 是否在校验有效期内 是否正常、完好 是否调零 口是/ 口否 口是/ 口否 口是/ 口否 操作者 ______ 2 按右表配方比例，在天平上分 别称取培养基于洁净的烧杯 中，并记录称重与批号，将纯 化水加入上述烧杯中并搅 拌均匀，再定容至规定体积。 名称比例称重批号操作者 ______ 复核者 ______ 3 平板培养基的配制： 将上述定容好的培养基，分装 于500ml规格的三角瓶中或者 小试管中，塞上硅胶塞，用牛 皮纸包扎紧。 配制量ml 操作者 ______ 复核者 ______ 4 将包扎好的培养基，温度 121～125℃湿热灭菌15--20 分钟。待压力和温度下降后取 出，适当冷却。 灭菌锅编号 设定温度 灭菌时间 ℃ 操作者 _______ 5 进无菌室时，按要求更换上无 菌服，更衣穿戴完毕。 着装是否符合规范口是/ 口否操作者 ______ 6 将上述已灭菌的培养基经传递 窗转移至无菌室。在净化操作 台上，无菌操作下倒平板 （15--20ml/90mm皿）。 倒平皿数 试管斜面 副 个 操作者 ______ 7 空白培养实验 将已经冷却的培养基放入培养 箱中空白培养48小时。检测是 否无菌。 培养箱编号 培养箱温度 培养时间 是否无菌 ℃ 口是/ 口否 操作者 ______

8 废弃培养基及培养物在锅内加 热煮沸灭活，收集于废液桶中 定期处理。 煮沸、灭活口是/ 口否 操作者 _______ 复核者 _______ 附：培养基使用记录 使用日期使用去处使用数量(副) 使用者

微藻培养条件研究

微藻培养条件浅析 摘要:微藻利用光和CO 合成蛋白质、糖类、脂类以及色素等大分子物质并放出O2，在人 2 类食品、保健、医药、环保和生物炼制领域具有广阔的应用前景。本文针对目前微藻培养中存在的生产成本高、产率低的问题，主要从营养盐方面入手,浅析了碳、氮、磷等营养元素对微藻生长的影响，并在此基础上，概述了开放式及封闭式两种微藻培养系统。 关键词：微藻；营养盐；培养系统 1引言 藻类是地球上最早进行光合作用的生物体，具有太阳能利用效率高、适应环境能力强等特点。微藻细胞富含蛋白质、多糖、脂类以及色素等，在食品、饲料、医药、精细化工及染料领域己得到广泛的应用。目前，由于培养技术不成熟导致的生产成本高、效率低是限制微藻产业化培养的主要因素。高效、低成本、规模化的微藻培养技术，是实现微藻产业化培养的关键。降低微藻生产成本主要有两种途径:一是降低培养原材料成本，二是提高产量。营养盐成本占微藻培养原料成本比重很大，是影响微藻生长及产物积累的重要因素。在微藻培养中，通过优化营养盐的种类，监控培养中营养盐的水平，能够提高藻细胞或目标产物的产量，同时提高营养盐的利用率，是高效、低成本、规模化微藻培养的基础。 2微藻概述 微藻是指一些微观的单细胞群体，是最低等的、自养的水生生物。微藻能够利用阳光和CO2进行光合作用，合成有机物质并释放出O2，是自然界中光合效率最高、生长最为迅速的原始生物种类之一，其种类繁多，分布广泛。微藻富含蛋白质、氨基酸、多糖、维生素、不饱和脂肪酸和色素等多种高附加值的生物物质，可以概括为以下四类:蛋白质、糖类、脂类、核酸及各种矿物质[1]。不同种类的微藻，各种组分的含量不同。 3营养盐对微藻生长的影响 碳、氮、磷等营养元素是微藻细胞合成的基础。微藻光合作用的底物为CO2和水，产物除了糖类之外，还合成蛋白质、核酸及脂类等一系列生物活性物质，因此，需要氮、磷等元素的参与。碳源、氮源、磷源以及一些微量元素的种类和供应水平，在一定程度上影响着微藻光合作用的能力和水平，从而直接影响微藻的生长。营养盐的形态会影响微藻的生长。Chu 等[2]分别在BBM培养基中添加0.1%的乙酸钠、柠檬酸钠、碳酸氢钠作为碳源培养卷曲纤维藻（Ankistrodesmus convolutus），发现添加乙酸钠作为碳源有利于藻细胞的生长，而添加柠檬酸钠和碳酸氢钠作为碳源对藻细胞的生长没有促进作用。Berman等[3]采用N03-N，NH3-N 以及次黄嘿吟、尿素、赖氨酸等有机氮源培养微藻，发现当使用尿素作为氮源时，蓝藻的生长最快且氮源得率系数最高。 许多研究表明，培养基中碳源、氮源、磷源的水平是影响微藻营养组成的主要因素。微藻对碳源的需求量很大，碳源主要影响藻细胞生长和脂类、糖类等物质的积累。Tang等[4]研究了不同CO2浓度对斜生栅藻(Scenedesmyus obliquus)和蛋白核小球藻(Chlorella pyrenoidosa)总脂含量的影响，发现高CO2水平(30%～50%)有利于总脂和不饱和脂肪酸的积累。然而，Chen等[5]研究异养小球藻(Chorella sorokiniana )在不同的碳氮比(C/N )下细胞内总脂含量和脂肪酸组成时发现:碳源限制或者氮源限制均能促进细胞内油脂合成，且前者更为

细胞培养基种类与基本成分

细胞培养基种类与基本成分 是应用最广泛的培养基。其他如M199、IMDM、L15培养基等也用于某些细胞的培养。其具体的特征及应用如下： 1、BME细胞培养基 基础Eagle 培养基 (Basal Medium Eagle)，1955 年Eagle 设计，BSS+ 12 种氨基酸+谷氨酰胺+ 8种维生素。简单、便于添加，适于各种传代细胞系和特殊研究用，在此基础上改良的细胞培养基品种有MEM、DMEM、IMDM等。 2、MEM细胞培养基 又称低限量Eagle 培养基 (Minimal Essential Medium) ，1959 年在Eagle's基础培养基 (BME )上修改而来，删去赖氨酸、生物素，氨基酸浓度增加，适合多种细胞单层生长，有可高压灭菌品种，是一种最基本、试用范围最广的培养基，但因其营养成分所限，针对生产之特定细胞培养与表达时，并不一定是使用效果最佳或者最经济的培养基。 3、DMEM细胞培养基 DMEM 是由Dulbecco 改良的Eagle 培养基, 起初是为小鼠成纤维细胞设计的。DMEM的氨基酸浓度是MEM的两倍，维生素浓度是MEM的4倍，采用双倍的HCO3-和CO2浓度起到更好的缓冲作用。最初的配方中葡萄糖含量为1000 mg/L,后来为了某些细胞的生长需要，将葡萄糖含量又调整为4500 mg/L, 这就是大家常说的低糖和高糖了。 低糖适于依赖性贴壁细胞培养，特别适用于生长速度快、附着性较差的肿瘤细胞培养。高糖更适合高密度悬浮细胞培养，也适用于附着性较差，但又不希望它脱离原来生长点的克隆培养，也可用于杂交瘤中骨髓瘤细胞和DNA转染的转化细胞的培养。例如CHO细胞表达生产乙肝疫苗、CHO细胞表达EPO。 4、IMDM细胞培养基 Guilber 和Iscove 将Dulbecco' Medium 改良为Iscove's Medium,用于培养红细胞 和巨噬细胞前体。此种培养液含有硒、额外的氨基酸和维生素、丙酮酸钠和HEPES o并用硝酸钾取代了硝酸铁。IMDM 还能够促进小鼠B淋巴细胞，LPS 刺激的

利用微藻制备生物能源的研究进展

利用微藻制备生物能源的研究进展 郝国礼刘佳陈超李兴杰姜峰 （唐山师范学院，生物技术，唐山063000） 摘要：随着全球范围内的能源需求不断增加，化石燃料日趋枯竭，环境污染日益严重，因此开发可再生、环保的替代燃料已成为经济可持续发展最重要课题之一。微藻具有巨大的生物能源生产潜力。本文结合目前能源微藻在藻种选育、影响微藻产油因素以及生产工艺方面的研究现状和微藻综合利用发展中存在的问题,综述了近年来各国在微藻能源开发方面的重要科研工作,以及微藻能源与低碳的关系，并对微藻能源开发的相关研究方向和进展进行了评述。 关键字：能源微藻；低碳；影响因素；工艺流程；综合利用 Advances in production of bio-energy from microalgae Hao Guoli Liu Jia Chen Chao Li Xingjie Jiang Feng （Tangshan Teachers College, Department of Biological Sciences, 08 Technical Class）Abstract:With the increasing demand of worldwide energy, depletion of fossil fuels, and the increasingly serious environmental pollution, the exploration of renewable and environmentally friendly alternative fuels has become one of the most important subjects of sustainable economic development .Microalgae has enormous potential for bio-energy production. In this paper, algae species selection, factors that affect the oil-production of microalgae, current situation of production process and problems in the development of utilization are all included to review the recent scientific effort of many countries in exploring microalgae. Furthermore, the relationship between microalgae energy and low carbon life, and direction and progress of microalgae-energy were also made a comment. Keywords: Energy Microalgae; low-carbon; Factors; Process; Utilization 1研究背景 世界经济的现代化，得益于化石燃料的开发与应用。然而，由于人们的过度开采，化石燃料终将会枯竭。化石燃料的利用，也造成环境的严重污染，因此，清洁的可再生能源的开发成为了各国研究的重点, 目前专家学者研究的主要范围包括风能、水能、太阳能、生物能源等。根据国际能源总署统计，生物能源是目前最被广泛使用的可再生能源。生物质能是绿色植物通过叶绿体将太阳能转化为化学能而贮存在生物质内部的能量。生物能源是可再生能源的一种，它具有潜在大规模替代汽油和柴油的可能性，因此一直是国内外研究的热点。到目前为止，生物能源的发展

146种常见培养基的配方

146种常用培养基配方 THE COMPOSITION OF MEDIA 培养基及成分 1. Acetobacter Medium (醋酸菌培养基) Glucose (葡萄糖) 100g Yeasst extract (酵母膏) 10g CaCO3 20g Agar (琼脂) 15g Distilled water (蒸馏水) 1000ml Adjust (调) pH to 6.8 适用范围：恶臭醋酸杆菌混浊变种 2. Nutrient Agar (营养肉汁琼脂) Pepton (蛋白胨) 5g Beef extract (牛肉膏) 30g NaCl 5g Agar (琼脂) 15g Distilled water (蒸馏水) Adjust (调) pH to 7.0-7.2 [Note]：When cultivation of Bacillus，5mg of to MnSO4.H2O may be added . It is favorable to promote spore formation . 适用范围：产气气杆菌、粪产碱杆菌、蜡状芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌蕈状变种、地衣形芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌、尘埃芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌深黑变种、苏云金芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌蜡螟亚种（青虫菌）、苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种、苏云金芽孢杆菌猝倒亚种、产氨短杆菌、黄色短杆菌、谷氨酸棒状杆菌、北京棒杆菌、大肠埃希氏菌（大肠杆菌）、铜绿假单胞菌（绿脓杆菌）、凸形假单胞杆菌、荧光假单胞菌、弯曲假单胞菌、恶臭假单胞菌、假单胞杆菌、藤黄八叠球菌、亚黄八叠球菌、尿素八叠球菌、金黄色葡萄球菌、运动发酵单孢菌 3. Azotobacter Medium (固氮菌培养基) KH2PO4 0.2g K2HPO4 0.8g MgSO4.7H2O 0.2g CaSO4.2H2O 0.1g Na2MoO4.2H2O Trace(微量) Yeast axtract(酵母膏) 0.5g Mannitol(甘露醇) 20g FeCl3 Tract(微量) Distilled water (蒸馏水) 1000ml Agar (琼脂) 15g Adjust (调) pH to 7.2 适用范围：固氮菌、胶质芽孢杆菌 4. Corn Meal Medium (玉米粉培养基) Maize flour (玉米粉) 5g Peptone (蛋白胨) 0.1g Glucose (葡萄糖) 1g Tap water (自来水) 1000ml

微藻工厂化培养经验分享附单胞藻的培养配方

微藻工厂化培养经验分享附单胞藻的培养配方 文件编码（008-TTIG-UTITD-GKBTT-PUUTI-WYTUI-8256）

微藻工厂化培养经验分享（附单胞藻的培养配方）大家好，很高兴今天能跟大家交流一下微藻的规模培育。规模培育在方面现在主要运用于大棚生物饵料方面(一定地点建立车间、浓缩之后近距离管道运输到养殖区域)、提取色素添加在饲料中，至于土塘泼洒，如何控制量、增氧和开口饵料这方面正在摸索，需要大家一起总结出经验。今天我跟大家主要跟大家分享一下藻种的工厂化规模化培育。 群里面应该很多人都培育过藻，大家都知道藻种的培育分为一级、二级、三级培养，今天我是简单从一级、二级、三级培养过程可能中遇到的问题、日常管理、接种、藻种营养配方这些方面做一下简单的交流。 因各地环境气候、、光照、水质条件不同。不同季节、藻种性质不同，单位水体养殖品种的需求量也不同。所以培养条件、营养盐配方等各有不同。今天我主要是以金藻为例，引申出其他藻种的营养配方，让大家学习一下其中的相似点。 国内大部分水产育苗企业，在育苗生产中都是自备微藻养殖设施，自行生产各类饵料用微藻。但是一般育苗场都普遍缺乏相应的专业技术力量，只能利用各自的藻池和天然水体粗放培养，在饵料微藻种质、生产技术和应用方法上都各自为正，导致微藻种质混乱、供应不稳定、营养成分不平衡、饵料效价低、缺乏多品种集约化生产应用技术；同时，受限于微藻高密度养殖、采收技术和浓缩液保藏技术的限制，国内几乎没

有统一的、专业化的饵料微藻质量标准和集中供应点。所以工厂化育苗需要及时的补充藻种，开口饵料非常重要。 首先从工艺流程上来说 一级培养：主要用于保种，主要用的仪器是，其能够完全消毒，所以应用在保种上面特别多。 二级培养：主要是用塑料白桶（材料），生产上也用20L的饮水桶，但是瓶口小，操作不方便，消毒也不彻底；而用氧气袋又易破裂。在南方经常可以见到用玻璃制作的大型鱼缸和氧气袋。

微藻培养条件研究

微藻培养条件研究 【摘要】微藻因其特定的生理习性，在能源、环保、食品等领域有巨大的应用潜力，但目前大规模、高纯度培养微藻在实际中难于实现。因此，对微藻培养条件需要进行深入研究。本文根据近几年国内外对微藻的研究，对各种因子（N、P、光照、CO2等）对微藻生长过程及副产物产量的影响进行分析，为优化微藻培养条件改进垫定基础。 【关键词】微藻；培养条件 前言 微藻种类繁多、生长方式独特、产物丰富多样，使其在食品、医药、能源等领域有广泛的应用前景。但目前大规模、高纯度培养微藻在实际中难于实现。因此，对微藻培养条件需要进行深入研究。本文根据近几年国内外对微藻的研究，对各种因子（N、P、光照、CO2等）对微藻生长过程及副产物产量的影响进行分析，为优化微藻培养条件改进垫定基础。 1.微藻概况 微藻在陆地、海洋广泛分布，其生长周期短、速度快、繁殖能力强、个体较小，通常呈单细胞、丝状体或片状体，结构简单、以单细胞或集群生活，大部分能进行自养光合作用，少部分为异养生长，营水生、陆生、气生、共生的低等植物。微藻营养丰富、光能利用度高，可将H2O、CO2和无机盐转化为有机源，是地球有机资源的初级生产力。 2.培养条件对微藻生长繁殖的影响 2.1氮源对微藻生长的影响 2.1.1氮浓度对微藻的影响 谢仁荣通过单因子分析法测定不同浓度的KNO3对丛粒藻生长的影响，得出当KNO3浓度为0时，葡萄藻几乎无生长。随着KNO3浓度的提高，丛粒藻的生长速率逐渐增大；当KNO3浓度大于200mg/L时，继续增加KNO3的浓度，其生长速率增大已不太明显，但可延长葡萄藻的对数生长期，导致最后生物量的增加[1]。因此，在对数生长期添加适量氮源对获得较高的生物量是有利的。 2.1.2不同类型的氮源对微藻的影响 叶林超等研究了NH4HCO3、（NH4）2SO4、NaNO3、NH2CONH2、NH4C1和NH4H2PO4 6种氮源对小球藻生长的影响，得出在第3—5d时小球藻的生长指标达到最大值，添加NH4HCO3对小球藻生长的促进作用最明显，其细胞密度、

微藻接种及培养

接种就是把藻种接到新配好的培养液中的整个操作过程。接种过程虽很简单，但应注意藻种的质量、接种藻液的数量和接种的时间三个问题。 1、藻种的质量 藻种的质量对培养结果影响很大，一般应选取无敌害生物污染、生活力强、生长旺盛的藻种来接种培养。外观藻液的颜色正常，且无大量沉淀，无明显附壁现象发生。 2、藻种的数量 接种量和接种密度对提高产量甚为重要。接种量是指藻种的绝对数量；接种密度是指藻种接种后的密度。接种量，总的原则是“宜大不宜小”。室内利用三角烧瓶、细口玻璃瓶等进行藻种培养时，接种的藻液量与新配制的培养液量的比例为1:2—4。二级培养和三级培养由于培养容器容量大，接种量可根据具体情况灵活掌握，但最少不低于1:50.（一般我们三级接种是1:20） 3、接种的时间 一般来说，接种时间最好是在上午8—10时，不宜在晚上。因为不少藻类晚上藻细胞下沉，而白天藻细胞有趋光上浮的习性，尤其是具有运动能力的种类更明显。上午8—10时一般是藻细胞上浮明显的时候，此时接种可以吸取上浮的且运动能力强的藻细胞做藻种，弃去底部沉淀的藻细胞，起着择优的作用。

1、按微藻营养模式的不同，培养方式可分为光自养、混合营养和异养三种。 （1）光自养培养 光自养是微藻的自然营养方式。微藻的光合自养生长受到很多环境因素的影响，包括营养条件、光照、温度、pH和通气条件等。优化上述因素以满足微藻生长的需要，是光合自养条件下实现微藻高密度培养的前提条件。目前实现微藻高密度光合自养培养主要采用三种方法：优化微藻培养基和培养条件，采用不同稀释比及分批补料培养避免底物抑制，或采用连续培养提高微藻生产率，以及开发具有高光能传递效率的光生物反应器。 优化培养基和培养条件可以提高微藻的生物量和代谢产物的积累。在发状念珠藻细胞光合自养培养过程中，以BG11为基础培养基，采用中心组合设计对培养基成分进行优化，在优化后的培养基中培养20d，发状念珠藻细胞干重和多糖产量分别较优化前增加了50.6%和34.9%。康瑞娟等在15L气升式光生物反应器中进行了鱼腥藻7120的光合自养培养条件优化，在细胞生长的适宜条件下，变光强培养5d，藻细胞干重达到1.5g/L，与文献报道相似条件相比体积产率提高2.4倍。 分批补料培养是在微藻分批培养中，以某种方式向培养系统补加一定物料的培养技术。通过向培养系统中补加物料，可以使培养液中的营养物浓度较长时间地保持在一定范围内，既能保证微藻生长的需要，

国内微藻研究现状

国内对于微藻的利用及研究进展 摘要：在世界能源危机的影响下，生物质能源由于其环保性，被认为是一个最具有发展潜力的石油替代品。其中微藻就展现了在生物能源方面的重要角色。微藻是一类单细胞或简单多细胞的微生物，其生长快速，能够有效的固定，在细胞内合成油脂用于生物燃料的生产。 CO 2 近些年来，在世界能源危机的影响下，社会各界对于寻求新的可再生能源方面的关注度不断的提高。人们已在沼气，生物醇类，生物柴油等方面取得一定的成效。但面对世界对燃料的巨大需求量，人们要不断的研究开发更高效的生物能源获取方式。 藻类作为一种重要的可再生资源，具有分布广、生物量大、光合高效、含脂量高的优点。其中的微藻在此方面更是具有突出地位。随着世界各国各科研机构对微藻的研究的不断深入，利用微藻改善大气环境，生产生物燃料已成为现实。本文结合国内外对微藻研究的进展，综述利用微藻的优势，生产生物柴油的微藻的筛选，生物柴油的生产技术手段，以及生产中存在的问题和展望等。 1 微藻开发的优势地位 微藻是一类数目巨大的可再生资源，具有较高的CO2固定效率。利用微藻开发生物质能源的优势地位可以总结为一下几点：光和效率高，适应能力强，且不占用耕地；细胞结构简单，含油脂量高；微藻燃烧值高，环境友好。同时，微藻通过细胞代谢产生藻多糖、蛋白质、色素、氨基酸等，为丰富的人体必须营养活性成分，可以作为功能保健品和某些疾病的专方或辅助药物。 微藻不论是在减排CO2方面，还是在生物新能源的开发上都是十

分重要的。微藻是一类单细胞或简单多细胞的微生物，生长迅速，固定CO2和储存太阳能的效率是陆生植物的10-50倍。因此，微藻的产业化生产可以用于CO2减排，缓解地球的温室效应。同时，微藻较高的油脂含量，特别是一些微藻在异养或营养限制的条件下，油脂含量可达20%-70%。若按微藻含油脂量30%计算，年产油脂微藻1.5-2.5万吨，可制备微藻生物柴油3000-5000吨，能有效转化CO2约2.7-4.5万吨。 2 利用微藻生产生物能源的研究现状 目前利用微藻开发可再生能源的领域包括：制备生物柴油，微藻产烃，厌氧发酵制备甲烷等。利用微藻生产生物柴油的同时，藻渣可以用于动物饲料、有机肥料和甲烷生产。 2.1 产油微藻的筛选和高富含培养研究 目前国内研究较多的产油微藻有：小球藻、硅藻，小环藻等。大多数的微藻的油脂含量在20%以上；经过特殊培养，微藻油脂含量可以达到50%以上。通过基因工程改良和培养条件的控制，微藻的产油效率会更高，生物能源的生产量也会更高。 提高微藻细胞油脂含量的最主要方式是高油藻的筛选培育和基因工程构建，通过改变微藻的培养方式也可以，控制微藻的代谢途径，也可以达到提高微藻细胞含油率的效果。研究发现，微藻细胞的含油率会受培养光照、温度、盐度、氮源、硅和Fe3+的影响。 氮源对各种微藻的脂类组成起着关键性作用。氮源限制培养可以提高总脂含量。温度对微藻的油脂含量影响因藻种类而不同，但总体

16种培养基配方

1．营养肉汤 成分：蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化钠5g，蒸馏水1000mL，pH7.4。 制法：按上述成分混合，溶解后校正pH，121℃高压灭菌15min。 2．营养琼脂培养基 成分：蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化钠5g，琼脂17g，蒸馏水1000mL，pH7.2。 制法：将除琼脂外的各成分溶解于蒸馏水中，校正pH，加入琼脂，分装于烧瓶内，121℃，15min高压灭菌备用。 3．MRS培养基 成分：蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母粉5g，K2HPO4 2g，柠檬酸二铵2g，乙酸钠5g，葡萄 （琼脂15~20g），蒸馏水1000mL。糖20g，吐温80 1mL，MgSO4 .7H2O 0.58g，MnSO4 4H2O 0.25g， 制法：将以上成分加入到蒸馏水中，加热使完全溶解，调pH至6.2~6.4，分装于三角瓶中，121℃,灭菌15min。 4．脱脂乳培养基 成分：牛奶，蒸馏水。 制法：将适量的牛奶加热煮沸20~30min，过夜冷却，脂肪即可上浮。除去上层乳脂即得脱脂乳。将脱脂乳盛在试管及三角瓶中，封口后置于灭菌锅中在108℃条件下蒸汽灭菌10~15min，即得脱脂乳培养基。 5．培养基A 成分：蛋白胨10.0g，酵母提取物1.0g，葡萄糖10.0g，NaCL5.0g，琼脂15.0g，水1000mL。制法：将以上成分加入到蒸馏水中，加热使完全溶解，调pH至7.0~7.2，分装于三角瓶中，121℃，灭菌15min。 6．PTYG培养基 成分：胰胨Tryptone（Oxoid）5g，大豆蛋白胨5g，酵母粉（Oxoid）10g，葡萄糖10g，吐温80 0 1mL，琼脂15~20g，L-半胱氨酸盐酸盐0.05g，盐溶液4mL。 制法：将以上成分加入到蒸馏水中，加热使完全溶解，调pH至6.8~7.0，分装于三角瓶中，115℃灭菌30min。 盐溶液制备：无水氯化钙0.2g，K2HPO4 1.0g，KH2PO4 1.0g，MgSO4 。7H2O 0.48g，NaCO3

培养基配制及适用性检查标准操作规程

目的： 建立培养基配制及适用性检查的标准操作规程，规范实验人员的操作流程。范围： 适用于微生物检验人员对培养基的规范管理。 依据： 《药品生产质量管理规范（2010年修订）》、《中华人民共和国药典》2015年版第四部 职责： 1.微生物检验员：负责实验室所需求的培养基管理工作，使日常检验可以顺利进行。 2.微生物检验主管：负责对日常配制培养基的规范操作进行监督。 内容 1 培养基的申购 根据检验项目、工作量和工作进度的需求，提前一个月进行所需的培养基申购。申购时需指定培养基供应商，必要时进行供应商审计。

2 培养基的验收 培养基到货后，微生物室检验员应进行验收。验收内容包括核对品名、数量、规格、生产厂商，应与申购单一致；检查培养基包装有无破损、包装是否完整、产品是否在有效期内。 验收合格后，登记于《培养基领用台账》（附记录文件编号：SMP-10-QC-009-02（00））。 3 培养基的贮藏 未开封的脱水培养基贮存于阴凉室，使培养基处于低温、干燥、和避光条件下。已开封的脱水培养基应盖紧，贮存于阴凉库。 灭菌好的培养基应进行预培养72h检查无菌后，置4～8℃冷藏保存待用。灭菌后培养基储存期为7天。 4 培养基的配制 培养基的配制和使用应填写《培养基配制及使用记录》（附记录文件编号：SMP-10-QC-009-02（00））。 培养基配制批号原则：原材料批号-配制日期：比如2011年1月1日配制的培养基，培养基干粉批号000000，配制批号为:000000-110101。配制好的培养基贴《培养基标签》（附记录文件编号：R-SMP-10-QC-009-03）。（注：同一天同一培养基配置多次的，在原批号后加“-”加“数字”表示，如000000-110101-01）培养基配制方法 使用商品化脱水合成培养基时，应严格按照厂商提供的使用说明配制，如重量/体积、pH、灭菌条件和操作步骤等。实验室使用各种基础成分制备培养基时，应按照配方准确配制，并记录相关信息如：培养基名称和类型及试剂级别，每

海洋微藻培养技术的研究进展08051122赵飞

海洋微藻培养技术的研究进展 学院：海洋学院 班级：080511 学号：08051122 姓名：赵飞 指导老师：曹春晖 日期：2011-12-10

摘要：海洋微藻不仅富含蛋白质、脂肪和碳水化合物这三大类人类所必需的物质，而且还 含有各种氨基酸、维生素、抗生素、高不饱和脂肪酸以及其它多种生物活性物质。近年来丰 富的海洋微藻资源成为人们探讨的热点，海洋微藻的培养技术已经引起了国内外学者的广泛 关注。本文概括性介绍海洋微藻的主要培养技术，其中包括一、二、三级培养，细胞的固定 化培养与光生物反应器培养。 关键词：特点培养条件培养方式固定化培养光生物反应器技术展望 Study of marine microalgae cultivation technology advances Abstract：Marine microalgae not only rich in protein, fat and carbohydrates necessary for the three categories of human material, but also contains various amino acids, vitamins, antibiotics, high unsaturated fatty acids and other bioactive substances. The rich resources of marine microalgae in recent years become a hot spot of marine microalgae cultivation technology has attracted wide attention from scholars. This general description of the main culture of marine microalgae, including one, two, three training, culture and immobilized cell bioreactor light. Keywords：Features Culture conditions Training methods Immobilized culture Photobioreactor Technology Foresight 随着全球性资源短缺压力的日益增加，世界沿海国家都把主要注意力集中于海洋生物的 开发利用。由于海洋微藻具有生长速度快、光合效率高、无性繁殖和适应性强等特点，是蛋 白质、精细化工和医药开发的重要资源，现已成为世界各国研究的热点[1]。因此，开发、培 养和利用海洋藻类将是长远解决人类食品资源和能源的重要途径。当今人们对微藻的开发和 研究进入了一个崭新时期，微藻的培养和产品开发成为新兴的生物技术产业，海洋微藻培养 技术也随着人们对微藻认识的加深不断发展。 一些发达国家已把细胞工程、基因工程、细胞固定化和生物反应器等为基础的生物技术 作为育种手段和优化培养条件，用于微藻类的开发研究，其重点是开发具有高附加值的精细 化工产品和医药品[2]。因此把生物技术与传统的育种技术结合起来，在微藻类的开发中，将 产生巨大的社会效益和经济效益。 1.微藻的特点 微藻是一类光能自养型单细胞生物，能有效地利用光能将、和无机盐转化为有 机资源，是地球有机资源的初级生产力，迄今已知的藻类约有3万余种，其中微藻约占70%。从1987年至今，新发现的具有开发价值的药用海洋天然产物已达434种。微藻具备如下特点：

常见食用菌液体菌种培养基配方大全

常见食用菌液体菌种培养基配方大全 大家对食用菌的培养基配方都非常熟悉，但是却没有将培养基配方统一归纳出来，在此跟大家一起分享常见的10种食用菌液体菌种培养基配方。 (1)平菇培养基配方 马铃薯100克，红糖15克，葡萄糖10克，麦麸30克，蛋白胨1.5克，磷酸二氢钾1.5克，硫酸镁0.75克，维生素B11片，聚氧丙稀甘油0.3毫升，pH值自然; (2)金针菇培养基配方 马铃薯100克，红糖15克，葡萄糖10克，麦麸40克，蛋白胨2.0克，磷酸二氢钾2.0克，硫酸镁1.0克，维生素B11片，聚氧丙稀甘油0.3毫升，pH值自然; (3)白灵菇培养基配方 马铃薯100克，红糖15克，葡萄糖10克，麦麸40克，蛋白胨2.0克，磷酸二氢钾2.0克，硫酸镁1.0克，维生素B11片，聚氧丙稀甘油0.3毫升，pH值自然; (4)香菇培养基配方 马铃薯100克，红糖15克，葡萄糖10克，麦麸40克，蛋白胨2.0克，磷酸二氢钾2.0克，硫酸镁1.0克，维生素B11片，聚氧丙稀甘油0.3毫升，pH值自然; (5)杏鲍菇培养基配方

马铃薯100克，红糖15克，葡萄糖10克，麦麸40克，蛋白胨2.0克，磷酸二氢钾2.0克，硫酸镁1.0克，维生素B11片，聚氧丙稀甘油0.3毫升，pH值自然; (6)鸡腿菇培养基配方 马铃薯100克，红糖12克，葡萄糖12克，麦麸40克，蛋白胨2.0克，磷酸二氢钾2.0克，硫酸镁1.0克，维生素B11片，聚氧丙稀甘油0.3毫升，pH值自然; (7)黑木耳培养基配方 马铃薯100克，红糖15克，葡萄糖10克，麦麸40克，蛋白胨2.0克，磷酸二氢钾2.0克，硫酸镁1.0克，维生素B11片，聚氧丙稀甘油0.3毫升，pH值自然; (8)猴头菇培养基配方 马铃薯100克，红糖15克，葡萄糖10克，麦麸45克，蛋白胨2.5克，磷酸二氢钾2.0克，硫酸镁1.0克，维生素B11片，聚氧丙稀甘油0.3毫升，pH值自然; (9)双孢菇培养基配方 马铃薯100克，红糖15克，葡萄糖10克，麦麸50克，蛋白胨2.0克，酵母膏1.0克，磷酸二氢钾2.0克，硫酸镁1.0克，维生素B11片，聚氧丙稀甘油0.3毫升，pH 值自然; (10)灰树花培养基配方 马铃薯100克，红糖15克，葡萄糖15克，麦麸45克，蛋白胨3.0克，磷酸二氢钾2.0克，硫酸镁1.0克，维生素B11片，聚氧丙稀甘油0.3毫升，pH值自然;

培养基配制及适用性检查标准操作规程

目得: 建立培养基配制及适用性检查得标准操作规程,规范实验人员得操作流程。 范围: 适用于微生物检验人员对培养基得规范管理。 依据: 《药品生产质量管理规范(20１0年修订）》、《中华人民共与国药典》2015年版?第四部 职责: １、微生物检验员:负责实验室所需求得培养基管理工作,使日常检验可以顺利进行。 ２、微生物检验主管:负责对日常配制培养基得规范操作进行监督。 内容 １培养基得申购 根据检验项目、工作量与工作进度得需求,提前一个月进行所需得培养基申购。申购时需指定培养基供应商,必要时进行供应商审计。 2 培养基得验收 ２、1 培养基到货后，微生物室检验员应进行验收。验收内容包括核对品名、数量、规格、生产厂商，应与申购单一致；检查培养基包装有无破损、包装就就是否完整、产品就就是否在有效期内。 2、2 验收合格后,登记于《培养基领用台账》（附记录文件编号：SＭP-10－QC-０

09-02(00))。 ３培养基得贮藏 3、１未开封得脱水培养基贮存于阴凉室,使培养基处于低温、干燥、与避光条件下。已开封得脱水培养基应盖紧,贮存于阴凉库。 3、2灭菌好得培养基应进行预培养７2h检查无菌后，置4~８℃冷藏保存待用。灭菌后培养基储存期为７天。 ４培养基得配制 4、1培养基得配制与使用应填写《培养基配制及使用记录》(附记录文件编号：ＳMP-10-QＣ-0０9-０2(00））。 4、2培养基配制批号原则：原材料批号-配制日期：比如２011年１月1日配制得培养基,培养基干粉批号0０0０00,配制批号为:０00０00－１10101。配制好得培养基贴《培养基标签》（附记录文件编号：R-SMP-１0－ＱC－009-０3)。(注:同一天同一培养基配置多次得,在原批号后加“-”加“数字”表示,如00０0００－1１０101-０１) ４、3培养基配制方法 4、3、1 使用商品化脱水合成培养基时,应严格按照厂商提供得使用说明配制，如重量/体积、pH、灭菌条件与操作步骤等。实验室使用各种基础成分制备培养基时,应按照配方准确配制,并记录相关信息如:培养基名称与类型及试剂级别,每个成分物质含量、制造商、批号,pH值,培养基体积／分装体积,灭菌条件(灭菌方式、温度及时间)，配制日期、人员等,以便溯源。 4、３、2 水、容器具要求:培养基配制均采用纯化水,特殊说明时采用去离子水与蒸馏水。培养基配制所用容器与配套器具应洁净。对热敏感得培养基如糖发酵培养基其分装容器应先进行预灭菌,以保证培养基得无菌性。 4、３、3 称量与分装: 快速称量所需量得脱水合成培养基（必要时佩戴口罩或在通风柜中操作,以防吸入含有有毒物质得培养基粉末)。以免吸潮。先加入适量得水,充分混合。注意避免培养基结块,然后加水至所需得量。根据说明书要求选择就就是否加热。分装体积不超过容器体积得2/３。配制斜面等含琼脂得培养基也需加热煮沸至完全溶解后分装。 4、4 pH 值得测定与调整 pＨ值采用pH计进行检测,温度25±２℃。取配后培养基10ml进行灭前ｐH测定。另取２0ml于５０ml三角瓶与同批配制培养基同时灭菌冷却至25±2℃检测灭后PＨ。灭菌前后pH应按下表进行控制。灭菌前可使用浓度约为40g/L(约1mｏl/L）得氢氧化