红细胞渗透脆性实验

红细胞渗透脆性实验

一.原理：

本实验是测定红细胞对不同浓度低渗盐水溶液的抵抗力，这种抵抗力与红细胞表面积和体积的比值有密切关系，表面积大而体积小者对低渗盐水抵抗力较大（脆性减低）；反之，则抵抗力较小（脆性增加）.球形细胞表面积/体积比值减少,脆性显著增加.

二.试剂:

171mmol/LNaCl溶液(10g/L):

取经100度烘干的分析纯氯化钠1.000g置100ml容量瓶中,加少量双蒸溜水溶解后,再加双蒸溜水至刻度

三.操作:

立即滴于各管中,每管1滴(贫血病人可加2滴),轻轻摇匀,室温静置.

3.每次试验均应同时作正常对照.

结果判断

静置室温2小时,观察结果,从高浓度管开始观察,上层溶液开始出现透明红色且管底有红细胞者为开始溶血管;溶液透明红色,管底完全无红细胞者为完全溶血管.

红细胞渗透脆性检验试剂盒(一管法)

适用于体外检测贫血等引起地红细胞渗透脆性病变，特别是红细胞渗透脆性降低一类地贫血症筛查.（如地贫症、严重缺铁性贫血症） 【检验原理】 贫血症者常伴有红细胞渗透脆性地改变.测定红细胞在一定渗透浓度下地溶血率，可筛查是否贫血，特别是溶血率降低引起地贫血.个人收集整理勿做商业用途 【主要组成成分】 组成 由母液（红细胞渗透脆性检测液）；母液（终止红细胞溶血液）；母液（红细胞溶血液）组成；成分 母液采用氯化钠（）、磷酸氢二钠（）、磷酸二氢钠（）制成；母液采用氯化钠制成；母液采用皂素（）制成.个人收集整理勿做商业用途 【贮存条件及有效期】 避光贮存在℃℃环境中，其保质期个月. 和试验液可在室温保存，试验液在℃℃保存；试剂开瓶后有效期为个月. 【适用仪器】 具有波长地分光光度计；普通离心机；水浴箱. 、【样品要求】 新鲜抗凝全血（肝素、、），置℃℃保存.已发生溶血或有血凝块地标本为不合格样品.标本采集后，测试应在三日内完成.个人收集整理勿做商业用途 【检测方法】 【试验液配制】 试验液： 用一个容量瓶（不要用量筒！），上放一个小漏斗.将母液倒入漏斗中.用纯化水洗净装母液地管和盖，将管内余液倒入容量瓶，然后加纯化水于容量瓶中，准确至刻度，混匀后即为试验液.个人收集整理勿做商业用途 试验液： 将母液倒入容量瓶中，加入纯化水，混匀后，即为试验液. 试验液： 将母液倒入容量瓶中，加入纯化水，混匀后，即为试验液. 【实验操作】 取试管一只，加入试验液，放℃，预热分钟. 加入待测抗凝全血μ，立刻混匀，继续放在℃保温分钟. 分钟后，加入试验液.混匀，转分钟，离心分钟. 将上清液轻轻倒入×地比色杯中（切勿搅动试管底地红细胞），于波长读取光密度（以纯化水作空白对照）.（勿倒掉比色杯中地溶液）个人收集整理勿做商业用途 向试管中加入试验液，混匀，待血液全部溶血（透明红色）后，将比色杯中已比色地溶液倒入试管中混匀.个人收集整理勿做商业用途 将混匀后地溶液，倒入比色杯中，再于波长比色，读取光密度. 按下列公式计算出溶血率百分比. 溶血％×％ 【参考值（参考范围）】溶血率％>％为正常溶血率；<％为溶血率降低；（注％为溶血率轻度降低）.个人收集整理勿做商业用途 【检验结果地解释】

实验三 红细胞脆性试验

实验三红细胞脆性试验 [实验目的] 测定红细胞细胞膜对不同低渗溶液的渗透抵抗力。亦即测定正常动物红细胞的渗透脆性。 [实验原理] 正常的红细胞系混悬于等渗的血浆中，若置于高渗溶液内，则红细胞因失去内部液体而皱缩；反之，置于低渗溶液内，则水分进入红细胞，使红细胞两面凹陷的圆盘形变为球形，如继续膨大，即发生破裂溶解，形成溶血。红细胞脆性试验就是测定红细胞对低于0.9％NaCl 溶液的耐受能力。耐受力高者，红细胞不易破裂，即脆性低。反之，耐受力低者，红细胞易于破裂，即脆性高。 凡上层液开始微呈淡红色，而极大部分红细胞下沉，称开始溶血或最小抗力（红细胞的最小抵抗力）。 凡液体呈均匀红色，管底无红细胞下沉，则称完全溶血或最大抗力（红细胞的最大抵抗力）。 正常红细胞的最小渗透抵抗力为0.4~0.5NaCl%溶液，最大渗透抵抗力为0.3~0.35%NaCl 溶液。一般说，刚成熟的红细胞膜的渗透脆性较小，而衰老的红细胞膜的渗透脆性较大。 生理学上将与血浆渗透压相等的溶液称为等渗溶液；而将能维持红细胞正常形态、大小和悬浮于其中的溶液称为等张溶液。等渗溶液不一定是等张溶液（如1.99%的尿素溶液），但等张溶液一定是等渗溶。 [实验动物] 鸡 [器材及药品] 试管，试管架，吸管，新鲜血（或去纤维蛋白血），1％NaCl，蒸馏水。 [方法与步骤] 1．先将试管分别排列在试管架上，按下表把1%NaCl稀释成不同浓度的低渗溶液，每管溶液均为2毫升。 2．采取血液，并在上列各管中各加入大小相等的血液l滴，然后用拇指堵住试管口，将试管慢慢倒置一、二次，使血液与管内盐水混合均匀。

3．在室温下静置~21小时，观察结果。 4．依下列标准判定出有无溶血、不完全溶血或完全溶血的氯化钠百分比浓度。 （1）试管内液体下层为浑浊红色，上层为无色或极淡色的液体，说明红细胞没有溶解。 （2）小试管内液体下层为浑浊红色，说明有未溶解的红细胞，而上层出现透明红色，说明有部分红细胞破坏和溶解，称为不完全溶血。开始出现部分溶血的盐溶液浓度，既为红细胞的最小抵抗力（表示红细胞的最大脆性）。 （3）小试管内液体完全变成透明红色，管底无红细胞沉积，说明红细胞完全溶解，称为完全溶血。引起红细胞最先全部溶解的盐溶液的浓度，既为红细胞的最大抵抗力（表示红细胞的最小脆性）。 （4）记录被检红细胞脆性范围，既开始溶解时的盐溶液浓度与全部溶解时的盐溶液浓度。 [注意事项] 1．配制的各种NaCl溶液必须准确。 2．各管中加入的血滴大小应尽量相等。 3．混匀时轻轻倾倒1～2次，减少机械震动，避免人为溶血。 4．应在光线明亮处判定结果。

分光光度法测定红细胞渗透脆性

生理学实验设计 ————分光光度法测定红细胞渗透脆性

分光光度法测定红细胞渗透脆性 红细胞膜，有人称为鬼影(ghost)，是一种由磷脂、非酰化的胆固醇和糖蛋白等组成膜脂质和主体、膜蛋白质(转运蛋白和表面抗原)与周围膜蛋白质(膜骨架中的收缩蛋白和肌动蛋白以及膜骨架依靠的锚蛋白)所组成。这些成分要保证红细胞在120天寿命内50，000次通过“急流旋涡”仍能生存；要控制Na+和K+在细胞内的浓度，任何导致K+漏出增高超过Na+的漏入，均会导致细胞内单价阳离子和水分的丢失。这些生理功能的完善与否，可用简单且明白的膜渗透脆性试验来了解。 传统的测定方法采用目测观察其溶血情况，观察需要静置几个小时且过程中不能晃动。此法仅能观察到溶血的大致情况，不能量化红细胞破裂的程度。本实验采用分光光度法精确测定红细胞在低渗氯化钠溶液中的溶血情况，本实验操作简单、准确可靠、时间短，能消除常规目测观察的主观误差。 【实验原理】 正常红细胞悬浮于等渗的血浆中，若置于高渗溶液内，则红细胞会因失水而皱缩；反之，置于低渗溶液内，则水进入红细胞，使红细胞膨胀。如环境渗透压继续下降，红细胞会因继续膨胀而破裂，释放血红蛋白，称之为溶血。红细胞对低渗溶液有一定的抵抗力，这一特征称为红细胞的渗透脆性。 【实验目的】 1、理解细胞外渗透压对维持细胞正常形态和功能的重要性。 2、掌握红细胞渗透脆性的实验原理。 3、采用分光光度法精确测定红细胞在低渗氯化钠溶液中的溶血情况。 【实验材料】 1、仪器与试剂 LDZ4-0.8离心机、722S可见分光光度计、维生素C注射液0.5g/ml、桔梗煎剂0.16g/ml、20％氨基甲酸乙酯、肝素（1000U、ml）。 2、动物 家兔，体重（2.5±0.5）kg，雌雄兼用。

机能学实验——红细胞渗透脆性上课讲义

二、影响红细胞渗透脆性的因素有哪些？ 红细胞自身因素;凡能影响红细胞表面积/体积的因素均可影响红细胞渗透脆性，如珠蛋白数量不足或完全缺乏、遗传性球形细胞增多症、自身免疫性溶血性贫血伴继发球形细胞增多、缺铁性贫血、红细胞寿命、等 实验因素：血液放置时间较长（一般不能超过6小时）、低渗盐溶液的浓度不准确、实验器具未清洁干燥、试管编号错误、向试管内滴加血液或混匀含红细胞的液体时动作用力过大、有凝血、抗凝剂用量过多、等 【课前讲解】 一、实验设计的原理 将红细胞悬浮于低渗盐溶液中，水将在渗透压差的作用下渗入细胞，于是红细胞发生膨胀，由正常的双凹圆碟形变成球形，并开始破裂而发生溶血。红细胞在低渗盐溶液中发生膨胀破裂的现象称红细胞渗透脆性。但红细胞对低渗盐溶液具有一定的抵抗力，这种抵抗力的大小可作为衡量红细胞渗透脆性高低的指标。对低渗盐溶液抵抗力小，表示渗透脆性高；相反，则表示渗透脆性低。同一个体的红细胞对低渗盐溶液的抵抗力并不相同。将血液滴入不同浓度的低渗NaCl溶液中可检测其抵抗力的大小，刚开始出现溶血的NaCl溶液浓度为该血液中红细胞的最小抵抗力；出现完全溶血溶液浓度，为该血液中红细胞的最大抵抗力。前者代表红细胞的最大渗透脆性，后者代表红细胞的最小渗透脆性。 生理学上将渗透压与血浆的渗透压相等的溶液称为等渗溶液；能使悬浮于其中的红细胞保持正常体积和形态的溶液称为等张溶液。等渗溶液不一定是等张溶液，如1.9%的尿素溶液虽是等渗溶液，但不是等张溶液；而等张溶液溶液一定是等渗溶液，如浓度为0.85%的NaCl 溶液既是等渗溶液又是等张溶液。 成败关键（注意事项） 1. 血液最好新鲜制备。 2. 准确配制不同浓度的低渗盐溶液。 3. 所有玻璃器皿要求干燥清洁。 4. 向试管内滴加血液时不可用力挤压，不可将血泡沫注入试管。混匀含红细胞的液体时动作应轻，以免造成溶血。 5. 观察溶血情况时以白色为背景。 6. 为使各管加血量相同，加血时持针角度应一致。 一、结果分析 将红细胞悬浮于低渗盐溶液中，水将在渗透压的作用下渗入细胞，于是红细胞发生膨胀，由正常的双凹圆碟形变成球形，并开始破裂而发生溶血。红细胞在低渗盐溶液中发生膨胀破裂的现象称红细胞渗透脆性。但红细胞对低渗盐溶液具有一定的抵抗力，这种抵抗力的大小可作为衡量红细胞渗透脆性的指标。同一个体的红细胞对低渗盐溶液的抵抗力并不相同。生理情况下，衰老的红细胞可变形性减小，变成球形，因而对低渗盐溶液抵抗力低，会先发生破裂，正常人刚开始出现溶血的NaCl溶液浓度为0.46%~0.42%NaCl溶液；而较幼稚

红细胞渗透脆性(仅供参照)

红细胞渗透脆性试验 [实验目的]：学习测定红细胞渗透脆性的方法 [实验原理]：将红细胞放置于等渗溶液中，红细胞的形态不发生改变。放置于高渗和低渗盐溶液中红细胞的形态均出现改变，置于高渗液中，红细胞出现皱缩；置于低渗液中则发生膨胀，最后破裂，细胞内容物溢入血浆或溶液，这种现象称为溶血。 将血液滴入不同浓度的低渗盐溶液中，可以检查红细胞对低渗溶液的抵抗力。开始出现溶血现象的低渗盐溶液浓度，为该血液红细胞的最小抵抗力（约0.40%~0.45%NaCl 溶液），而完全溶血则为该血液红细胞的最大抵抗力（约0.30%~-0.45%NaCl溶液）。对低渗盐溶液的抵抗力小表示红细胞的脆性大，反之表示脆性小，最大抵抗力到最小抵抗力的范围，称脆性范围。 [实验对象]家兔 [实验器材]试管架、5 ml试管十支、2 ml吸管两支、注射器、1%NaCl溶液、蒸馏水、枸椽酸钠。 [实验步骤] （一）低渗盐溶液的配制 取试管十支，洗净烤干，用玻璃铅笔编号，排在试管架上，参照下表向各试管中加入1%NaCl溶液，然后再加入蒸馏水，每管溶液均2 ml。 试管号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 试管 蒸馏水（ml）0.60 0.70 0.80 0.90 1.00 1.10 1.20 1.30 1.40 1.50 NaCl浓度（%）0.70 0.65 0.60 0.55 0.50 0.45 0.40 0.35 0.30 0.25 （二）枸椽酸钠血的制备 家兔颈部解剖，剥离颈总动脉，插管，将血放入烧杯内，烧杯内事先加入3.8%枸椽酸钠溶液，血与枸椽酸钠溶液的比例为9:1，轻摇烧杯使之混匀。

[观察项目] 用注射器向每个试管内加入兔血一滴，用拇指堵住试管口，将试管颠倒2~3次（不要用力振荡以免溶血），在室温下静置1小时，然后观察各试管的透明度以判断是否溶血。 1、试管内下层为混浊红色，上层为无色或淡黄色液体，说明红细胞尚未破坏。 2、试管内下层为混浊红色，上层为透明淡红色，则表明红细胞部分溶解，才出现溶血的低渗盐溶液的浓度，为红细胞的最小抵力（最大脆性）。 3、试管内溶液呈现透明红色，说明红细胞全部溶解，称为完全溶血，首先引起红细胞全部溶解的低渗盐溶液浓度，即红细胞的最大抵抗力（最小脆性）。 通过试验，记录红细胞的脆性范围。 [思考题] ? 1. 为什么同一个体的红细胞渗透脆性有最大值和最小值？ ? 2. 红细胞渗透脆性实验的临床意义。 ? 3. 输液时为何要输等渗溶液？ 结果分析：将红细胞悬浮于低渗盐溶液中，水将在渗透压的作用下渗入细胞，于是红细胞发生膨胀，由正常的双凹圆碟形变成球形，并开始破裂而发生溶血。红细胞在低渗盐溶液中发生膨胀破裂的现象称红细胞渗透脆性。但红细胞对低渗盐溶液具有一定的抵抗力，这种抵抗力的大小可作为衡量红细胞渗透脆性的指标。同一个体的红细胞对低渗盐溶液的抵抗力并不相同。生理情况下，衰老的红细胞可变形性减小，变成球形，因而对低渗盐溶液抵抗力低，会先发生破裂，正常人刚开始出现溶血的NaCl溶液浓度为0.46%~0.42%NaCl溶液；而较幼稚的红细胞的抵抗力高，较后发生破裂，正常人出现完全溶血的NaCl溶液浓度为0..34%~0.32% NaCl溶液。 红细胞膜对水分子可自由通透，水分子依渗透压梯度进入红细胞，红细胞膨胀破裂而溶血，因此，红细胞在蒸馏水中立即发生溶血。 红细胞膜对尿素分子可自由通透，尿素分子依浓度梯度进入红细胞，而红细胞内的物质不能自由通过红细胞膜，导致红细胞内渗透压增高，水进入细胞，红细胞膨胀破裂而溶血，因此，

红细胞渗透脆性检测试剂盒(过筛法)

红细胞渗透脆性检测试剂盒(过筛法) 简介： 红细胞(Red blood cell ，RBC)也称红血球，是血液中数量最多的一种血细胞，脊椎动物体内通过RBC 运送氧气，RBC 同时还具有免疫功能。在贫血检查中，可通过红细胞渗透脆性试验来检测红细胞膜的缺陷。 Leagene 红细胞渗透脆性检测试剂盒(过筛法)(Erythrocyte Osmotic Fragility Assay Kit)其检测原理是红细胞悬浮于等渗盐水中，能够保持双面凹盘状态，如果渗透压增高，红细胞水分会渗出细胞外而呈现皱缩，如果渗透压降低，则水分会渗入细胞内，使红细胞膨胀以致破裂、溶血。利用这一原理，将红细胞加至一系列的不同浓度的低渗盐水中，检查溶血程度，以便判断红细胞抵抗低渗溶液的能力，该实验被称为红细胞渗透脆性试验。该试剂盒主要用于检测人、动物新鲜血液的红细胞渗透脆性。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。 组成： 自备材料： 1、 小试管 2、 滴管 操作步骤(仅供参考)： 1、 取小试管或恰当容器，依次编号,用同一口径滴管以相同角度依次滴加NaCl solution(5g/L)和ddH 2O 。每次检查应设正常对照。 2、 取新鲜静脉血，不加抗凝剂立即滴入上述1～14号各管中，每管滴加。 3、 轻轻混匀，室温静置。 编号 名称 TC0221 Storage 试剂(A): NaCl solution(5g/L) 100ml RT 试剂(B): ddH 2O 100ml RT 使用说明书 1份 试管号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 试剂(A) (滴) 25 24 23 22 21 20 19 18 17 16 15 14 13 12 试剂(B) (滴) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 NaCl 浓度(g/L) 5.0 4.8 4.6 4.2 4.0 4.2 3.8 3.6 3.4 3.2 3.0 2.8 2.6 2.4

红细胞渗透脆性检测试剂盒(Parpart比色法)

红细胞渗透脆性检测试剂盒(Parpart 比色法) 简介： 红细胞(Red blood cell ，RBC)也称红血球，是血液中数量最多的一种血细胞，脊椎动物体内通过RBC 运送氧气，RBC 同时还具有免疫功能。在贫血检查中，可通过红细胞渗透脆性试验来检测红细胞膜的缺陷。 Leagene 红细胞渗透脆性检测试剂盒(Parpart 比色法)(Erythrocyte Osmotic Fragility Assay Kit)采用Parpart 法，又称光电比色法，其检测原理是红细胞悬浮于等渗盐水中，能够保持双面凹盘状态，如果渗透压增高，红细胞水分会渗出细胞外而呈现皱缩，如果渗透压降低，则水分会渗入细胞内，使红细胞膨胀以致破裂、溶血。利用这一原理，将红细胞加至一系列的不同浓度的低渗盐水中，检查溶血程度，以便判断红细胞抵抗低渗溶液的能力，该实验被称为红细胞渗透脆性试验。该试剂盒主要用于检测人、动物血液的红细胞渗透脆性。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。 组成： 自备材料： 1、 小试管 2、 分光光度计 操作步骤(仅供参考)： 1、 配制Parpart NaCl 工作液：按照Parpart NaCl solution ：ddH 2O 的比例配制适量的 Parpart NaCl 工作液。 2、 无菌采血，制成肝素抗凝血或脱纤维血，充分混匀待用。 3、 取小试管或恰当容器，依次编号，按照下表依次加入Parpart NaCl 工作液和ddH 2O ， 即为Parpart NaCl 稀释液，其总体积为4ml 。每次检查应设正常对照。 4、 分别吸取40μl 肝素抗凝血或脱纤维血加入上述Parpart NaCl 稀释液中，立即混匀， 室温(20～30℃)静置。 5、 将各管离心沉淀，取上清液。 6、 用分光光度计检测波长或绿色滤片比色，以含8.5g/L NaCl 的一管(第3管)上清液作为 编号 名称 TC0224 100T Storage 试剂(A): Parpart NaCl solution 20ml 4℃ 试剂(B): ddH 2O 500ml RT 使用说明书 1份

红细胞渗透脆性的测定精编版

红细胞渗透脆性的测定 [目的与原理] 掌握测定红细胞渗透脆性的方法，测定不同鱼类红细胞渗透脆性并理解细胞外液渗透压对维持细胞正常形态与功能的重要性。正常情况下，动物红细胞内的渗透压与血浆的渗透压相等，哺乳动物约相当于0.9％NaC1溶液的渗透压，鱼类的等渗溶液为0.85％～1.0％NaC1溶液。将红细… [目的与原理] 掌握测定红细胞渗透脆性的方法，测定不同鱼类红细胞渗透脆性并理解细胞外液渗透压对维持细胞正常形态与功能的重要性。 正常情况下，动物红细胞内的渗透压与血浆的渗透压相等，哺乳动物约相当于0.9％NaC1溶液的渗透压，鱼类的等渗溶液为0.85％～1.0％NaC1溶液。将红细胞置于等渗溶液中，其形态和容积可保持不变。若将红细胞悬浮于低渗的NaC1溶液中，则水分进入红细胞使之膨胀甚至破裂溶解，但红细胞对低渗溶液具有一定的抵抗力，其抵抗力大小与红细胞膜脆性有关。通常用不同浓度的NaC1溶液来测定红细胞膜的渗透脆性，红细胞膜渗透脆性大的，则对低渗NaC1溶液的抵抗力小，NaC1溶液的渗透压稍有降低，此类红细胞便发生破裂而溶血。反之，脆性小的则对NaC1溶液的抵抗力大，Nac1溶液的渗透压降到很低时才使这些红细胞破裂溶血。刚能引起一部分红细胞溶解的低渗NaCl的浓度可以代表最小抵抗值；使全部红细胞溶解的NaCl浓度为最大抵抗值。通常就以抵抗值表示红细胞的渗透脆性。在刚成熟的红细胞，其膜的渗透脆性较小，而衰老的红细胞膜的渗透脆性较大。 [实验对象] 鲤、鲫或草鱼。 [试剂与器材] 5毫升无菌注射器，消毒棉球，中试管，小试管，试管架，滴管，1%NaCl， 蒸馏水，75%酒精，碘酒，凹瓷盘，1%肝素钠或10%草酸钾溶液，3.8% 枸橼酸钠。[实验步骤] 滴血，将试管夹在两掌心中迅速搓动，使血液与管内NaCl溶液混匀（切勿用力震荡），室温下放置2小时后观察结果。多余血液注入盛有0.1毫升3.8% 枸橼酸钠的试管内。加以混合，以备重复实验使用。 3、观察结果：记录开始溶血和完全溶血的两管NaCl溶液浓度。 按下列标准判断有无溶血、不完全溶血或完全溶血。 （1）上清液无色，管底为混浊红色或有沉淀的红细胞，表示没有溶血。 （2）上清液呈淡红色，管底为混浊红色表示只有部分红细胞破裂溶解，为不完全溶血。开始出现部分溶血的NaCl溶液浓度，即为红细胞的最小抵抗值，也是红细胞的最大脆性。

红细胞渗透脆性实验

红细胞渗透脆性实验 Measuring for erythrocyte osmotic fragility 【教学对象与学时】 一、教学对象：五年制本科 二、学时：4学时 【预习要求】 预习红细胞生理特性 【目的要求】 一、操作： 学习用试管法测定红细胞渗透脆性 二、理论： 1.了解红细胞渗透脆性实验的原理。 2. 观察红细胞对不同渗透张力的细胞外溶液的抵抗力，进一步理解细胞外液渗透张力对 维持红细胞正常形态与功能的重要性。 【重点和难点】 一、重点 1. 准确配制不同渗透张力的溶液，掌握正确的红细胞渗透脆性测量方法。 2. 理解红细胞渗透脆性实验的原理。 二、难点 1. 准确配制不同渗透张力的溶液。 2. 掌握正确的红细胞渗透脆性测量方法。 【教学过程设计】 1.课前提问和预习检查。 2.讲解红细胞渗透脆性实验的原理。 3.介绍不同渗透张力溶液的配制法和抗凝血液的制备。 4. 学生分组进行实验，观察红细胞对蒸馏水、1.9%尿素溶液和不同浓度的NaCl溶液的 抵抗力。 5.实验结束前汇总全班实验结果，讨论实验结果，理解实验结果出现的原因。 【课前预习检查或提问】 一、何谓红细胞渗透脆性？其正常值是多少？ 二、影响红细胞渗透脆性的因素有哪些？ 【课前讲解】

一、实验设计的原理 将红细胞悬浮于低渗盐溶液中，水将在渗透压的作用下渗入细胞，于是红细胞发生膨胀，由正常的双凹圆碟形(图1A)变成球形（图1B），并开始破裂而发生溶血。红细胞在低渗盐溶液中发生膨胀破裂的现象称红细胞渗透脆性。但红细胞对低渗盐溶液具有一定的抵抗力，这种抵抗力的大小可作为衡量红细胞渗透脆性的指标。对低渗盐溶液抵抗力小，表示渗透脆性高；相反，则表示渗透脆性低。同一个体的红细胞对低渗盐溶液的抵抗力并不相同。将血液滴入不同浓度的低渗NaCl溶液中可检测其抵抗力的大小，刚开始出现溶血的NaCl溶液浓度为该血液中红细胞的最小抵抗力；出现完全溶血溶液浓度，为该血液中红细胞的最大抵抗力。前者代表红细胞的最大渗透脆性，后者代表红细胞的最小渗透脆性。 生理学上将渗透压与血浆的渗透压相等的溶液称为等渗溶液；能使悬浮于其中的红细胞保持正常体积和形态的溶液称为等张溶液。等渗溶液不一定是等张溶液，如1.9%的尿素溶液虽是等渗溶液，但不是等张溶液；而等张溶液溶液一定是等渗溶液，如浓度为0.85%的NaCl 溶液既是等渗溶液又是等张溶液。 A B 图1. 红细胞形态(A:正常；B：低渗NaCl溶液中球形红细胞). 二、实验方法 1.制备不同浓度的NaCl溶液。先配制1%浓度的低渗NaCl溶液100ml，然后取口径相同 的干净小试管12支，编号排列在试管架上，按下表分别向各试管内加入1%NaCl溶液和蒸馏水后混匀，配制成12种0.68%~0.24%不同浓度的低渗NaCl溶液(图2) 图2 用于配制低渗NaCl溶液的试管

红细胞渗透脆性检测仪测试报告

红细胞渗透脆性检测仪测试报告 1 背景资料 人体红细胞约占血液总体积的40%，红细胞内含量最多的水分和血红蛋白分别占红细胞的65%和32%。红细胞在低渗盐溶液中，水分透过细胞膜进入细胞内，使红细胞逐渐胀大破裂，细胞内血红蛋白溢出即称为低渗性溶血。红细胞对低渗液溶血作用的抵抗能力称为红细胞的渗透脆性。地中海贫血、缺铁性贫血患者红细胞内血红蛋白生成减少，细胞体积较小，渗透脆性比正常人明显减小，因此红细胞渗透脆性在临床上常用于地中海贫血、缺铁性贫血等小细胞性贫血的辅助诊断指标。 2 试验原理 将血液样品与特定渗透压的低渗液混合，将未溶血红细胞作为构成该混合液浊度的主要颗粒，选用一种未溶红细胞对其有较高的吸光度，从红细胞溶出的游离血红蛋白等可溶性有色物质对其有较弱吸光度的特定波长光源作为测定光源，利用不透光法对混合液进行比浊分析，得出AD 值（AD 值与吸光度成反比），通过对AD 值与“金标准”结果的综合分析后确定临界区间。对于诊断系统的准确性评价，首先应知道受试者的真实情况，即哪些是对照组，哪些是病例组，划分它们的标准就是“金标准”。尽管“金标准”不需要十全十美，但是它们应比评价的诊断系统更可靠，且与评价的诊断系统无关。因此在本项目测试方案中，诊断系统为红细胞渗透脆性检测，“金标准”选用基因检测（即常说的PCR）。 3 试验设计及拟采用的方法 （1）预试验：先利用旧的血样做测试，以检测样机的各项性能是否符合测试要求。 （2）利用样机对“金标准”确诊的地贫血样与正常血样进行测试（每个血样重复≥3 次）。 （3）将测得的AD 值综合“金标准”的结果进行分析并确定临界区间。（允许有可接受限度的假阳性存在） 临界区间的确定：在确定的实验条件（测试步骤、温度、时间、试剂配制方法、试剂配制参数等）下，用我们规范的操作方法，对“金标准”确诊的地贫血样与正常血样进行大量检测和统计学分析，观察样机做出的AD 值分布规律是否符合“金标准”确诊的结果；正常血AD 值分布在一个特定区间，而地贫血AD 值分布在另一个特定区间，理论上可能存在个别离散点，但不影响判断，这两个区间的交界处即为临界区间。 （4）拿回来的血样尽量当天或下一天测试完毕。

机能学实验——红细胞渗透脆性

二、影响红细胞渗透脆性的因素有哪些 红细胞自身因素;凡能影响红细胞表面积/体积的因素均可影响红细胞渗透脆性，如珠蛋白数量不足或完全缺乏、遗传性球形细胞增多症、自身免疫性溶血性贫血伴继发球形细胞增多、缺铁性贫血、红细胞寿命、等 实验因素：血液放置时间较长（一般不能超过6小时）、低渗盐溶液的浓度不准确、实验器具未清洁干燥、试管编号错误、向试管内滴加血液或混匀含红细胞的液体时动作用力过大、有凝血、抗凝剂用量过多、等 【课前讲解】 一、实验设计的原理 将红细胞悬浮于低渗盐溶液中，水将在渗透压差的作用下渗入细胞，于是红细胞发生膨胀，由正常的双凹圆碟形变成球形，并开始破裂而发生溶血。红细胞在低渗盐溶液中发生膨胀破裂的现象称红细胞渗透脆性。但红细胞对低渗盐溶液具有一定的抵抗力，这种抵抗力的大小可作为衡量红细胞渗透脆性高低的指标。对低渗盐溶液抵抗力小，表示渗透脆性高；相反，则表示渗透脆性低。同一个体的红细胞对低渗盐溶液的抵抗力并不相同。将血液滴入不同浓度的低渗NaCl溶液中可检测其抵抗力的大小，刚开始出现溶血的NaCl溶液浓度为该血液中红细胞的最小抵抗力；出现完全溶血溶液浓度，为该血液中红细胞的最大抵抗力。前者代表红细胞的最大渗透脆性，后者代表红细胞的最小渗透脆性。 生理学上将渗透压与血浆的渗透压相等的溶液称为等渗溶液；能使悬浮于其中的红细胞保持正常体积和形态的溶液称为等张溶液。等渗溶液不一定是等张溶液，如%的尿素溶液虽是等渗溶液，但不是等张溶液；而等张溶液溶液一定是等渗溶液，如浓度为%的NaCl溶液既是等渗溶液又是等张溶液。 成败关键（注意事项） 1. 血液最好新鲜制备。 2. 准确配制不同浓度的低渗盐溶液。 3. 所有玻璃器皿要求干燥清洁。 4. 向试管内滴加血液时不可用力挤压，不可将血泡沫注入试管。混匀含红细胞的液体时动作应轻，以免造成溶血。 5. 观察溶血情况时以白色为背景。 6. 为使各管加血量相同，加血时持针角度应一致。 一、结果分析 将红细胞悬浮于低渗盐溶液中，水将在渗透压的作用下渗入细胞，于是红细胞发生膨胀，由正常的双凹圆碟形变成球形，并开始破裂而发生溶血。红细胞在低渗盐溶液中发生膨胀破裂的现象称红细胞渗透脆性。但红细胞对低渗盐溶液具有一定的抵抗力，这种抵抗力的大小可作为衡量红细胞渗透脆性的指标。同一个体的红细胞对低渗盐溶液的抵抗力并不相同。生理情况下，衰老的红细胞可变形性减小，变成球形，因而对低渗盐溶液抵抗力低，会先发生破裂，正常人刚开始出现溶血的NaCl溶液浓度为%~%NaCl溶液；而较幼稚的红细胞

红细胞渗透脆性试验[1]

红细胞渗透脆性试验［目的和原理]目的:测定动物的红细胞对低渗溶液的脆性。原理:将红细胞放置于等渗溶液中，红细胞的形态不发生改变.放置于高渗和低渗盐溶液中红细胞的形态均出现改变,置于高渗液中,红细胞出现皱缩；置于低渗液中则发生膨胀,最后破裂,细胞内容物溢入血浆或溶液,这种现象称为溶血。 将血液滴入不同浓度的低渗盐溶液中,可以检查红细胞对低渗溶液的抵抗力。开始出现溶血现象的低渗盐溶液浓度，为该血液红细胞的最小抵抗力（约0．40％～0.45%ＮａＣl溶液），而完全溶血则为该血液红细胞的最大抵抗力（约0．30％～—0.4５%ＮaＣｌ溶液）.对低渗盐溶液的抵抗力小表示红细胞的脆性大，反之表示脆性小，最大抵抗力到最小抵抗力的范围，称脆性范围。...感谢聆听... [实验对象］家兔 ［实验器材］试管架、5 ｍl试管十支、2 ml吸管两支、注射器、1%ＮaCl溶液、蒸馏水、枸椽酸钠。 [实验步骤］ （一）低渗盐溶液的配制 取试管十支,洗净烤干，用玻璃铅笔编号，排在试管

架上，参照下表向各试管中加入１%NaCl溶液,然后再加入蒸馏水，每管溶液均2 ml。 试 管号 试管 12345678910 1%ＮａC ｌ（ｍl）1 ． 40 1. 30 １ ． 20 1 ．1 ０ １ 。 00 ． 90 ． 80 ． 70 ． 60 ０ ． 50 蒸馏水(ml)0. 60 0。 ７ 0。 ８ 0。 ９ １ 。0 ０ １ ． 10 1 ． ２ 1. 30 1 ． 40 1. ５ NａCl浓度（%）０ . ７ 0. 65 ． 60 0。 ５ ５ 0. 50 0. 4 ５ 0。 40 0. ３ ５ 0. 30 ．2 ５ （二)枸椽酸钠血的制备 家兔颈部解剖,剥离颈总动脉，插管，将血放入烧杯内，烧杯内事先加入3.8％枸椽酸钠溶液，血与枸椽酸钠溶液的比例为9：1，轻摇烧杯使之混匀。 ［观察项目］ 用注射器向每个试管内加入兔血一滴，用拇指堵住

红细胞渗透脆性试验

红细胞渗透脆性试验 [目的和原理]目的：测定动物的红细胞对低渗溶液的脆性。原理：将红细胞放置于等渗溶液中，红细胞的形态不发生改变。放置于高渗和低渗盐溶液中红细胞的形态均出现改变，置于高渗液中，红细胞出现皱缩；置于低渗液中则发生膨胀，最后破裂，细胞内容物溢入血浆或溶液，这种现象称为溶血。 将血液滴入不同浓度的低渗盐溶液中，可以检查红细胞对低渗溶液的抵抗力。开始出现溶血现象的低渗盐溶液浓度，为该血液红细胞的最小抵抗力（约0.40%~0.45%NaCl 溶液），而完全溶血则为该血液红细胞的最大抵抗力（约0.30%~-0.45%NaCl溶液）。对低渗盐溶液的抵抗力小表示红细胞的脆性大，反之表示脆性小，最大抵抗力到最小抵抗力的范围，称脆性范围。 [实验对象]家兔 [实验器材]试管架、5 ml试管十支、2 ml吸管两支、注射器、1%NaCl溶液、蒸馏水、枸椽酸钠。 [实验步骤] （一）低渗盐溶液的配制 取试管十支，洗净烤干，用玻璃铅笔编号，排在试管架上，参照下表向各试管中加入1%NaCl溶液，然后再加入蒸馏水，每管溶液均2 ml。 蒸馏水（ml）0.60 0.70 0.80 0.90 1.00 1.10 1.20 1.30 1.40 1.50 NaCl浓度（%）0.70 0.65 0.60 0.55 0.50 0.45 0.40 0.35 0.30 0.25 （二）枸椽酸钠血的制备 家兔颈部解剖，剥离颈总动脉，插管，将血放入烧杯内，烧杯内事先加入 3.8%枸椽酸钠溶液，血与枸椽酸钠溶液的比例为9:1，轻摇烧杯使之混匀。 [观察项目] 用注射器向每个试管内加入兔血一滴，用拇指堵住试管口，将试管颠倒2~3次（不要用力振荡以免溶血），在室温下静置1小时，然后观察各试管的透明度以判断是否溶血。 1、试管内下层为混浊红色，上层为无色或淡黄色液体，说明红细胞尚未破坏。 2、试管内下层为混浊红色，上层为透明淡红色，则表明红细胞部分溶解，才出现溶血的低渗盐溶液的浓度，为红细胞的最小抵力（最大脆性）。 3、试管内溶液呈现透明红色，说明红细胞全部溶解，称为完全溶血，首先引起红细胞全部溶解的低渗盐溶液浓度，即红细胞的最大抵抗力（最小脆性）。

机能学实验红细胞渗透脆性

影响红细胞渗透脆性的因素有哪些？红细胞自身因素; 凡能影响红细胞表面积/体积的因素均可影响红细胞渗透脆性，如珠蛋白数量不足或完全缺乏、遗传性球形细胞增多症、自身免疫性溶血性贫血伴继发球形细胞增多、缺铁性贫血、红细胞寿命、等 实验因素：血液放置时间较长（一般不能超过 6 小时）、低渗盐溶液的浓度不准确、实验器 具未清洁干燥、试管编号错误、向试管内滴加血液或混匀含红细胞的液体时动作用力过大、有凝血、抗凝剂用 量过多、等 【课前讲解】 一、实验设计的原理将红细胞悬浮于低渗盐溶液中，水将在渗透压差的作用下渗入细胞，于是红细胞发生膨 胀，由正常的双凹圆碟形变成球形，并开始破裂而发生溶血。红细胞在低渗盐溶液中发生膨胀破裂的现象 称红细胞渗透脆性。但红细胞对低渗盐溶液具有一定的抵抗力，这种抵抗力的大小可作为衡量红细胞渗透脆 性高低的指标。对低渗盐溶液抵抗力小，表示渗透脆性高；相反，则表示渗透脆性低。同一个体的红细胞对 低渗盐溶液的抵抗力并不相同。将血液滴入不同浓度的低渗NaCl 溶液中可检测其抵抗力的大小，刚开始出现溶血的NaCl 溶液浓度为该血液中红细胞的最小抵抗力；出现完全溶血溶液浓度，为该血液中红细胞的最大抵抗力。前者代表红细胞的最大渗透脆性，后者代表红细胞的最小渗透脆性。生理学上将渗透压与血浆的渗透压相等的溶液称为等渗溶液；能使悬浮于其中的红细胞保持正常体积和形态的溶液称为等张溶液。等渗溶液不一定是等张溶液，如1.9% 的尿素溶液虽是等渗溶液，但不是等张溶液；而等张溶液溶液一定是等渗溶液，如浓度为0.85% 的NaCl 溶液既是等渗溶液又是等张溶液。 成败关键（注意事项） 1. 血液最好新鲜制备。 2. 准确配制不同浓度的低渗盐溶液。 3. 所有玻璃器皿要求干燥清洁。 4. 向试管内滴加血液时不可用力挤压，不可将血泡沫注入试管。混匀含红细胞的液体时动作应轻，以免造 成溶血。 5. 观察溶血情况时以白色为背景。 6. 为使各管加血量相同，加血时持针角度应一致。 一、结果分析将红细胞悬浮于低渗盐溶液中，水将在渗透压的作用下渗入细胞，于是红细胞发生膨胀，由正 常的双凹圆碟形变成球形，并开始破裂而发生溶血。红细胞在低渗盐溶液中发生膨胀破裂的现象称红细胞渗 透脆性。但红细胞对低渗盐溶液具有一定的抵抗力，这种抵抗力的大小可作为衡量红细胞渗透脆性的指标。 同一个体的红细胞对低渗盐溶液的抵抗力并不相同。生理情况下，衰老的红细胞可变形性减小，变成球形，因 而对低渗盐溶液抵抗力低，会先发生破裂，正常人刚开始出现溶血的NaCl 溶液浓度为 0.46%~0.42%NaCl 溶液；而较幼稚的红细胞的抵抗力高，较后发生破裂，正常人出现完全溶血的NaCl 溶液浓度为0..34%~0.32% NaCl 溶液。 红细胞膜对水分子可自由通透，水分子依渗透压梯度进入红细胞，红细胞膨胀破裂而溶血，因此，红细胞在蒸馏水中立即发生溶血。

红细胞孵育渗透脆性检测试剂盒(比色法)

红细胞孵育渗透脆性检测试剂盒(比色法) 简介： 红细胞(Red blood cell ，RBC)也称红血球，是血液中数量最多的一种血细胞，脊椎动物体内通过RBC 运送氧气，RBC 同时还具有免疫功能。在贫血检查中，可通过红细胞渗透脆性试验来检测红细胞膜的缺陷。 Leagene 红细胞孵育渗透脆性检测试剂盒(比色法)(Erythrocyte Incubated Osmotic Fragility Assay Kit )检测原理是将患者血液置于37℃孵育24h ，使红细胞代谢继续进行，由于葡萄糖的消耗，储备的ATP 减少，导致需要能量的红细胞膜对阳离子的主动传递受阻，造成钠离子在红细胞内聚集，细胞膨胀，孵育渗透脆性增加，某些有细胞膜缺陷以及某些酶缺陷的红细胞的葡萄糖和ATP 很快被耗尽时，孵育渗透脆性明显增加，该实验被称为红细胞孵育渗透脆性试验。该试剂盒主要用于检测人、动物血液的红细胞孵育渗透脆性，并计算红细胞中性脆性(MCF)。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。 组成： 自备材料： 1、 小试管 2、 比色杯 3、 分光光度计 操作步骤(仅供参考)： 1、 取肝素抗凝血，分成2份，1份立即实验，另1份密闭37℃孵育24h 后再作实验。 2、 取小试管或恰当容器，依次编号,按照下表稀释成不同浓度。每次检查应设正常对照。 3、 分别吸取40μl 肝素抗凝血加入上述NaCl 稀释液中，轻轻混匀，室温(20℃)静置30min 。 名称 编号 TC0227 50T Storage 试剂(A): NaCl phosphate buffer 100ml 4℃ 试剂(B): ddH 2O 100ml RT 使用说明书 1份 试管号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 试剂(A) (ml) 3.4 3.0 2.8 2.6 2.4 2.2 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 0.8 0.4 试剂(B) (ml) 0.6 1 1.2 1.4 1.6 1.8 2.0 2.2 2.4 2.6 2.8 3.2 3.6 NaCl 浓度(g/L) 8.5 7.5 7.0 6.5 6.0 5.5 5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 2.0 1.0

生理学实验教案——红细胞的渗透脆性

红细胞的渗透脆性 一、实验目的及原理 目的：测定动物的红细胞对低渗溶液的脆性。 原理：将红细胞放置于等渗溶液中，红细胞的形态不发生改变。放置于高渗和低渗盐溶液中红细胞的形态均出现改变，至于高渗液中，红细胞出现皱缩；置于低渗液中则发生膨胀，最后破裂，细胞内容物溢入血浆或溶液，这种现象称为溶血。 将血液滴入不同浓度的低渗盐溶液中，可以检查红细胞对低渗溶液的抵抗力。开始出现溶血现象的低渗盐溶液浓度，为该血液红细胞的最小抵抗力（约0.40％~0.45％ NaCl溶液），而完全溶血则为该血液红细胞的最大抵抗力（约0.30％~0.35％ NaCl溶液）。对低渗盐溶液的抵抗力小表示红细胞的脆性大，反之表示脆性小，最大抵抗力到最小抵抗力的范围，称脆性范围。 二、实验准备 1.实验对象：家兔 2.实验药品：1％氯化钠、蒸馏水 3.实验器材：5ml试管10支、2ml滴管2支、5ml注射器、试管架、棉签 4.环境：安静的实验室 三、实验学时 1学时 四、实验方法 1.低渗盐溶液的配制 取试管10支，洗净烤干，编号后依次排列于试管架上，参照下图向各试管中加入1％ NaCl溶液，然后再加入蒸馏水，每管溶液均2ml。

2.采血 从家兔颈总动脉取血2ml，立即向每个试管各加血液1滴，轻摇试管，使血液与盐溶液充分混合。静置30分钟。 3.实验观察 按各试管液体颜色和透明度判断是否溶血、部分溶血或完全溶血。 ①未发生溶血试管内下层为混浊红色，上层为无色或淡黄色液体，说明红细胞尚未破坏。 ②部分溶血试管内下层为混浊红色，上层为透明淡红色，表示红细胞部分溶解，最先出现部分溶血的盐溶液为红细胞的最大脆性（即最小抵抗力）。 ③完全溶血试管内溶液呈透明红色，管底无红细胞，说明红细胞全部破裂。最先出现完全溶血的盐溶液为红细胞的最小脆性（即最大抵抗力）。 五、实验结果 认真完成实验，将实验结果记录于下表。 红细胞的渗透脆性 观察项目试管编号 未发生溶血 部分溶血 完全溶血

红细胞渗透脆性试验

红细胞渗透脆性试验 [原理] 本试验是测定红细胞对不同浓度低渗盐水溶解的抵抗力。当红细胞置于低渗盐水中，水逐渐渗入细胞内，使红细胞膨胀成球形，当到达一定限度后，细胞内的血红蛋白便开始漏出。其抵抗力与红细胞表面积和体积比值有密切关系，表面积大而体积小者，对低渗盐水抵抗力较大(渗透性减低)；反之，则抵抗力较小(渗透性增强)。球形细胞表面积和体积比值减小，渗透脆性增强；球形细胞表面积和体积比值增大，则渗透脆性也明显降低。 [试剂] 1．双草酸盐抗凝剂：草酸铵1．28．，草酸钾0．88，加蒸馏水至100ml。 每管加O．2ml，100℃烘干备用。 2．18／d1氯化钠溶液(NaCl)：准确称取经100℃烘干的分析纯氯化钠，置于100m1容量瓶内，先加少量的蒸馏水溶解后，再加双蒸馏水至刻度。 [操作] (1)取12支清洁干燥试管，编号排列，然后分别取1g/dlNaCl溶液和蒸馏水， 按表1-3-1加入试管中。 (2)取静脉血’2m1，以双草酸盐抗凝或不用抗凝剂直接就原针头加血于不同 浓度的氯化钠试管中，每管1滴(约0．05ml），轻轻摇匀，然后置室温 2小时，各管离心沉淀；观察上清液开始溶血管和无细胞的完全溶血管。 (3)如需作孵育红细胞渗透脆性试验，可多取血2ml，置于另一双草酸盐抗凝 试管内，加塞后置37℃孵箱内培育24小时，取出再按上述操作程序胁定 开始溶血管和完全溶血管氯化钠浓度。 (4)每次试验应同时作正常对照。 [结果观察]。 室温静置2小时，离心观察结果，从高浓度管开始逐管观察：上层溶液开始出现透明红色、且管底有红细胞管，为开始溶血管；溶液透明红色、管底完全无红细胞管，为完全溶血管。 [ 参考值] 开始溶血：0．0044—0．0048(0．44—0．48％)。 完全溶血：0．0024-0．0028(0．24—0．28％)。 换算系数：＝％×0．01 编写：伍海波制定日期：2011.12.1