分子生物学第四章习题
第4章DNA复制
一、填空题
1．在DNA合成中负责复制和修复的酶是。
2．染色体中参与复制的活性区呈Y开结构，称为。
3．在DNA复制和修复过程中，修补DNA螺旋上缺口的酶称为
4．在DNA复制过程中，连续合成的子链称为，另一条非连续合成的子链称为。
5．如果DNA聚合酶把一个不正确的核苷酸加到3′端，一个含3′→5′活性的独立催化区会将这个错配碱基切去。这个催化区称为酶。
6．DNA后随链合成的起始要一段短的，它是由以核糖核苷酸为底物合成的。
7．复制叉上DNA双螺旋的解旋作用由催化的，它利用来源于ATP水解产生的能量沿DNA链单向移动。
8．帮助DNA解旋的与单链DNA结合，使碱基仍可参与模板反应。9．DNA引发酶分子与DNA解旋酶直接结合形成一个单位，它可在复制叉上沿后随链下移，随着后随链的延伸合成RNA引物。
10．如果DNA聚合酶出现错误，会产生一对错配碱基，这种错误可以被一个通过甲基化作用来区别新链和旧链的判别的系统进行校正。
11．对酵母、细菌以及几种生活在真核生物细胞中的病毒来说，都可以在DNA独特序列的处观察到复制泡的形成。
12．可被看成一种可形成暂时单链缺口（I型）或暂时双链缺口（II型）的可逆核酸酶。
13．拓扑异构酶通过在DNA上形成缺口超螺旋结构。
14．真核生物中有五种DNA聚合酶，它们是A. ；B. ；C. ；D. ；E. ；
15有真核DNA聚合酶和显示3'→5'外切核酸酶活性。
二、选择题（单选或多选）
1．DNA的复制（）。
A．包括一个双螺旋中两条子链的合成B．遵循新的子链与其亲本链相配对的原则
C．依赖于物种特异的遗传密码D．是碱基错配最主要的来源
E．是一个描述基因表达的过程
2．一个复制子是（）。
A．细胞分裂期间复制产物被分离之后的DNA片段
B．复制的DNA片段和在此过程中所需的酶和蛋白质
C．任何自发复制的DNA序列（它与复制起点相连）
D．任何给定的复制机制的产物（如单环）
E．复制起点和复制叉之间的DNA片段
3．真核生物复制子有下列特征，它们（）。
A．比原核生物复制子短得多，因为有末端序列的存在
B．比原核生物复制子长得多，因为有较大的基因组
C．通常是双向复制且能融合
D．全部立即启动，以确保染色体的S期完成复制
E．不是全部立即启动，在任何给定的时间只有大约15%具有活性
4．下述特征是所有（原核生物、真核生物和病毒）复制起始位点都共有的是（）。
A．起始位点是包括多个短重复序列的独特DNA片段
B．起始位点是形成稳定二级结构的回文序列
C．多聚体DNA结合蛋白专一性识别这些短的重复序列
D．起始位点旁侧序列是A-T丰富的，能使DNA螺旋解开
E．起始位点旁侧序是G-C丰富的，能稳定起始复合物
5．下列关于DNA复制的说法正确的有（）。
A．按全保留机制进行
B．按3′→5′方向进行
C．需要4种dNMP的参与
D．需要DNA连接酶的作用
E．涉及RNA引物的形成F．需要DNA聚合酶I
6．标出下列所有正确的答案。（）
A．转录是以半保留的方式获得两条相同的DNA链的过程
B．DNA依赖的DNA聚合酶是负责DNA复制的多亚基酶
C．细菌转录物（mRNA）是多基因的
D．σ因子指导真核生物的hnRNA到mRNA的转录后修饰
E．促旋酶（拓扑异构酶II）决定靠切开模板链而进行的复制的起始和终止7．在原核生物复制子中以下哪种酶除去RNA引发体并加入脱氧核糖核苷酸？（）
A．DNA聚合酶III B．DNA聚合酶II C．DNA聚合酶I D．外切核酸酶MFI E．DNA 连接酶
8．使DNA超螺旋结构松驰的酶是（）。A．引发酶B．解旋酶C．拓扑异构酶D．端粒酶E．连接酶
9．从一个复制起点可分出几个复制叉？（）
A．1 B．2 C．3 D．4 E．4个以上
三、判断题
1．大肠杆菌中，复制叉以每秒500bp的速度向前移动，复制叉前的DNA以大约定3000r/min的速度旋转。( ) （如果复制叉以每秒500个核苷酸的速度向前移动，那么它前面的DNA 必须以500/10.5=48周/秒的速度旋转，即2880r/min）2．所谓半保留复制就是以DNA亲本链作为合成新子链DNA的模板，这样产生的新的双链DNA分子由一条旧链和一条新链组成。( )
3．“模板”或“反义” DNA链可定义为：模板链是被RNA聚合酶识别并合成一个互补的mRNA，这一mRNA是蛋白质合成的模板。( )
4．DNA复制中，假定都从5'→3'同样方向读序时，新合成DNA链中的核苷酸序列同模板链一样。( ) （尽管子链与亲本链因为碱基互补配对联系起来，但子链核苷酸序列与亲链又很大不同）
5．DNA的5′→3′合成意味着当在裸露3′→OH的基团中添加dNTP时，除去无机焦磷酸DNA链就会伸长。( )
6．在先导链上DNA沿5′→3′方向合成，在后随链上则沿3′→5′方向合成。( ) 7．如果DNA沿3'→5'合成，那它则需以5'三磷酸或3'脱氧核苷三磷酸为末端的链作为前体。( )
8．大肠杆菌DNA聚合酶缺失3′→5′校正外切核酸酶活性时会降低DNA合成的速率但不影响它的可靠性。( )
9．DNA的复制需要DNA聚合酶和RNA聚合酶。( )
10．复制叉上的单链结合蛋白通过覆盖碱基使DNA的两条单链分开，这样就避免了碱基配对。( ) （单链结合蛋白与磷酸骨架结合，离开暴露碱基）
11．拓扑异构酶I和II可以使DNA产生正向超螺旋。（）
12．拓扑异构酶I解旋需要ATP酶。（）
13．RNA聚合酶I合成DNA复制的RNA引物。（）
14．当DNA两条链的复制同时发生时，它是由一个酶复合物，即DNA聚合酶III负责的。真核生物的复制利用三个独立作用的DNA聚合酶，Polα的一个拷贝（为了起始）和Polδ的两个拷贝（DNA多聚体化，当MF1将RNA引发体移去之后填入）。( )
四、简答题
1．在DNA聚合酶III催化新链合成以前发生了什么反应？
2．DNA复制起始过程如何受DNA甲基化状态影响？
3．DNA连接酶对于DNA的复制是很重要的，但RNA的合成一般却不需要连接酶。解释这个现象的原因。
4．曾经认为DNA的复制是全保留复制，每个双螺旋分子都作为新的子代双螺旋分子的模板。如果真是这样，在Meselson和Stahl的实验中他们将得到什么结果？
5．描述Matthew和Franklin所做的证明DNA半保留复制的实验。
6．解释在DNA复制过程中，后随链是怎样合成的。
答案
一、填空
1. DNA聚合酶
2. DNA复制叉
3. DNA连接酶
4. 先导链后随链
5. 校正核酸外切
6. RNA引物DNA引发酶
7. DNA解旋酶
8. 单链结合蛋白（SSB）
9. 引发体10. 错配校正（错配修复）11. 复制起点12. DNA拓扑酶13. 松弛14.αβγδε 15. δε
二、选择
1.BD
2.C
3.C
4.ACD
5.DEF
6. BC
7. C
8.C
9.B
三、判断
√√√X√X√X√X XXX√
四、简答
1．在DNA聚合酶III催化新链合成以前发生了什么反应？
答：DnaA（与每9个碱基重复结合，然后使13个碱基解链）、DnaB(解旋酶)
和DnaC（先于聚合酶III与原核复制起点相互作用。后随链复制需要引发体完成的多重复制起始，引发体由DnaG引发酶与多种蛋白质因子组成。
2．DNA复制起始过程如何受DNA甲基化状态影响？
答：亲本DNA通常发生种属特异的甲基化。在复制之后，两模板-复制体双链DNA是半甲基化的。半甲基化DNA对膜受体比对DnaA有更高的亲和力，半甲基化DNA不能复制，从而防止了成熟前复制。
3．DNA连接酶对于DNA的复制是很重要的，但RNA的合成一般却不需要连接酶。解释这个现象的原因。
答：DNA复制时，后随链的合成需要连接酶将一个冈崎片段的5'端与另一冈崎片段的3'端连接起来。而RNA合成时，是从转录起点开始原5'→3'一直合成的，因此不需DNA连接酶。
4．曾经认为DNA的复制是全保留复制，每个双螺旋分子都作为新的子代双螺旋分子的模板。如果真是这样，在Meselson和Stahl的实验中他们将得到什么结果？
答：复制一代后，一半为重链，一半为轻链；复制两代后，1/4为重链，3/4为轻链。
5．描述Matthew和Franklin所做的证明DNA半保留复制的实验。
答：（1）将大肠杆菌在15N培养基中培养多代，得到的DNA两条链都被标记，形成重链。
（2）细胞移到14N培养基中培养，提取DNA；
（3）将DNA进行氯化铯密度梯度离心，；
（4）经过一定时间后，DNA在离心管聚集成带，每个带的密度均与该点的氯化铯溶液的密度相同；
（5）照相决定每条带的位置和所含的DNA量。
1）经15N培养基，所有DNA都聚集在一条重密度带；
2）经14N培养基一代后，所有的DNA形成一条中间密度带；
3）经14N继续培养基一代，DNA一半是中间密度带，另一半是轻密度带；
4）最后，他们证明第一代的分子是双链，且为半保留复制。
6．解释在DNA复制过程中，后随链是怎样合成的。
答：DNA聚合酶只能朝5'→3'方向合成DNA，后随链不能像前导链一样一直进行合成。后随链是以大量独立片段（冈崎片段）合成的，每个片段都以5'→3'方向合成，这些片段最后由连接酶连接在一起。每个片段独立引发、聚合、连接。
(整理)分子生物学第四章习题
第4章DNA复制 一、填空题 1．在DNA合成中负责复制和修复的酶是。 2．染色体中参与复制的活性区呈Y开结构，称为。 3．在DNA复制和修复过程中，修补DNA螺旋上缺口的酶称为 4．在DNA复制过程中，连续合成的子链称为，另一条非连续合成的子链称为。 5．如果DNA聚合酶把一个不正确的核苷酸加到3′端，一个含3′→5′活性的独立催化区会将这个错配碱基切去。这个催化区称为酶。 6．DNA后随链合成的起始要一段短的，它是由以核糖核苷酸为底物合成的。 7．复制叉上DNA双螺旋的解旋作用由催化的，它利用来源于ATP水解产生的能量沿DNA链单向移动。 8．帮助DNA解旋的与单链DNA结合，使碱基仍可参与模板反应。9．DNA引发酶分子与DNA解旋酶直接结合形成一个单位，它可在复制叉上沿后随链下移，随着后随链的延伸合成RNA引物。 10．如果DNA聚合酶出现错误，会产生一对错配碱基，这种错误可以被一个通过甲基化作用来区别新链和旧链的判别的系统进行校正。 11．对酵母、细菌以及几种生活在真核生物细胞中的病毒来说，都可以在DNA独特序列的处观察到复制泡的形成。 12．可被看成一种可形成暂时单链缺口（I型）或暂时双链缺口（II型）的可逆核酸酶。 13．拓扑异构酶通过在DNA上形成缺口超螺旋结构。 14．真核生物中有五种DNA聚合酶，它们是A. ；B. ；C. ；D. ；E. ；15有真核DNA聚合酶和显示3'→5'外切核酸酶活性。 二、选择题（单选或多选） 1．DNA的复制（）。
A．包括一个双螺旋中两条子链的合成B．遵循新的子链与其亲本链相配对的原则 C．依赖于物种特异的遗传密码D．是碱基错配最主要的来源 E．是一个描述基因表达的过程 2．一个复制子是（）。 A．细胞分裂期间复制产物被分离之后的DNA片段 B．复制的DNA片段和在此过程中所需的酶和蛋白质 C．任何自发复制的DNA序列（它与复制起点相连） D．任何给定的复制机制的产物（如单环） E．复制起点和复制叉之间的DNA片段 3．真核生物复制子有下列特征，它们（）。 A．比原核生物复制子短得多，因为有末端序列的存在 B．比原核生物复制子长得多，因为有较大的基因组 C．通常是双向复制且能融合 D．全部立即启动，以确保染色体的S期完成复制 E．不是全部立即启动，在任何给定的时间只有大约15%具有活性 4．下述特征是所有（原核生物、真核生物和病毒）复制起始位点都共有的是（）。A．起始位点是包括多个短重复序列的独特DNA片段 B．起始位点是形成稳定二级结构的回文序列 C．多聚体DNA结合蛋白专一性识别这些短的重复序列 D．起始位点旁侧序列是A-T丰富的，能使DNA螺旋解开 E．起始位点旁侧序是G-C丰富的，能稳定起始复合物 5．下列关于DNA复制的说法正确的有（）。 A．按全保留机制进行 B．按3′→5′方向进行 C．需要4种dNMP的参与 D．需要DNA连接酶的作用 E．涉及RNA引物的形成F．需要DNA聚合酶I 6．标出下列所有正确的答案。（）
现代分子生物学(第二版)课后答案 第四章生物信息的传递(下)
第四章生物信息的传递（下）----从mRNA到蛋白质 1，遗传密码有哪些特征？ 答：1，密码的连续性，密码之间无间断也没有重叠；2，密码的简并性，许多氨基酸都有多个密码子；3，密码的通用性和特殊性，遗传密码无论在体内还是在体外，无论是对病毒、细菌、动物还是植物而言都是通用的，但是也有少数例外；4，密码子和反密码子的相互作用。 2，有几种终止密码子？它们的序列和别名分别是什么？ 答：3种，UAA、UAG和UGA，别名是无意义密码。 3，简述摆动学说。 答：1966年，Crick根据立体化学原理提出摆动学说，解释了反密码子中某些稀有成分的配对。摆动学说认为，在密码子与反密码子的配对中，前两对严格遵守碱基配对原则，第三对碱基有一定的自由度，可以“摆动”，因而使某些tRNA可以识别1个以上的密码子。认为除A-U、G-C配对外，还有非标准配对，I-A、I-C、I-U，并强调密码子的5’端第1、2个碱基严格遵循标准配对，而第3个碱基可以非标准配对，具有一定程度的摆动灵活性。4，tRNA在组成和结构上有哪些特点？ 答：1.tRNA中含有稀有碱基,除ACGU 外还含有双氢尿嘧啶、假尿嘧啶等；2.tRNA分子形成茎环节构；3.tRNA 分子末端有氨基酸接纳茎；4.tRNA分子序列中很有反密码子。 5，比较原核与真核的核糖体组成。 答：1，真核细胞中的核糖体数量多余原核；2，真核细胞中核糖体RNA占细胞中总RNA的量少于原核；3，原核生物的核糖体通过与mRNA的相互作用，被固定在核基因组上，真核生物的核糖体则直接或间接的与细胞骨架有关联或者与内质网膜结构相连；4，原核生物核糖体由约RNA占2/3及1/3的蛋白组成，真核生物核糖体中RNA 占3/5，蛋白质占2/5。 6，什么是SD序列？其功能是什么？ 答：SD序列是指信使核糖核酸(mRNA)翻译起点上游与原核16S 核糖体RNA或真核18S rRNA 3′端富含嘧啶的7核苷酸序列互补的富含嘌呤的3～7个核苷酸序列(AGGAGG)，是核糖体小亚基与mRNA结合并形成正确的前起始复合体的一段序列。
分子生物学课后题
第一章 1、简述细胞的遗传物质，怎样证明DNA是遗传物质？ 答：核酸是细胞内的遗传物质，包括脱氧核糖核酸(|DNA)和核糖核酸（RNA）两类，DNA是主要的遗传物质，具有储存遗传信息，将遗传信息传递给子代，物理化学性质稳定，有遗传变异能力适合作为遗传信息的特性，T2噬菌体侵染实验证明了DNA是遗传物质，将蛋白质被35S标记和DNA被32P 标记的T2噬菌体分别侵染E.coli后，发现进入宿主细胞的只有32P标记的DNA，而无35S标记物，所产生的子代噬菌体只含有32P标记的DNA，无S标记的蛋白质，因此证明DNA是遗传物质。 2、研究DNA的一级结构有什么重要的生物学意义？ 答：DNA的一级结构是指DNA分子中的核苷酸排列顺序，它反映了生物界物种的多样性和复杂性，任何一段DNA序列都可以反映出它的高度的个体性和种族特异性，另外DNA一级结构决定其高级结构，研究DNA一级结构对阐明遗传物质结构、功能及表达调控都极其重要。 3、简述DNA双螺旋结构与现在分子生物学发展的关系。 答：DNA双螺旋结构具有碱基互补配对原则具有极其重要的生物学意义，它是DNA复制、转录、逆转录等基因复制与表达的分子基础。DNA为双链，维持了遗传物质的稳定性。 4、DNA双螺旋结构有哪些形式？说明其主要特点和区别。 答：主要有B-DNA，A-DNA,E-DNA形式 B-DNA：每一螺周含有10个碱基对，两个核苷酸之间夹角为36度 A-DNA：碱基对与中心倾角为19度，螺旋夹角为32.7度 E-DNA：左手螺旋，每圈螺旋含12对碱基，G=C碱基对非对称地位于螺旋轴附近。 第二章 1、简述DNA分子的高级结构。 答：1、单链核酸形成的二级结构（发夹结构）2、反向重复序列（十字架结构，每条链从5'--3'方向阅读）3、三股螺旋的DNA（一条链为全嘌呤核苷酸链，另一条链为全嘧啶核苷酸链）4、DNA的四链结构5、DNA结构的动态性与精细结构6、DNA的超螺旋结构与拓扑学性质。 2、什么是DNA的拓扑异构体，它们之间的相互转变依赖于什么？ 答：DNA不同的空间分子构象又称拓扑异构体它们之间转换依赖于连环数L。连环数是指双螺旋DNA中两条链相互缠绕交叉的总次数。 3、简述真核生物染色体的组成，它们是如何组装的？ 答：真核生物的染色体在间期表现为染色质，染色质是以双链DNA作为骨架与组蛋白和非组蛋白及少量各种RNA等共同组成的丝状结构的大分子物质、 组装的顺序：DNA—核小体链—纤丝—突环—玫瑰花结—螺旋圈—染色体 4、简述细胞内RNA的分布结构特点 答：成熟的RNA主要分布在细胞质中，无论是真核或原核细胞质中，成千上万种的RNA都分为三大类：1、转运RNA 2、信使RNA 3、核蛋白体RNA。细胞核内的RNA统称为nRNA. 5、简述细胞内RNA的结构特点以及与DNA的区别。 答：1、碱基组成不同，RNA分子主要是A G C U 而DNA以T代替U。 2、RNA分子中的核糖都是D-核糖，而DNA则是D-2-脱氧核糖。 3、RNA分子中有许多稀有，微量碱基，而DNA除个别外，不含有稀有碱基 4、RNA分子中嘌呤碱基与嘧啶碱基不一定相等。 5、RNA分子具有逆转录作用，RNA翻译成蛋白质是遗传物质，是遗传信息的传递结合表达者。 6、RNA分子具有催化功能。 6、引起DNA变性的主要因素有哪些？核酸变性后分子结构和性质发生了哪些变化？ 答：①加热②极端PH值③有机溶剂，尿素和酰胺等 核酸变性后氢键被破坏而断裂，双链变为单链，而磷酸二酯键并未锻裂在A260nm 处呈现增色效应。DNA溶液的黏度大大下降、沉淀速度增加、浮力密度上升。紫外吸收光谱升高。酸碱滴定曲线改变，生物活性丧失等。 7、检测核酸变性的定性和定量方法是什么？具体参数如何？ 答：在DNA变性过程中，紫外吸收光谱的变化时检测变性最简单的定性和定量方法。核酸在260nm 处具有特征的吸收峰，便是为A260nm。以50ug/ml DNA溶液在A260下测定，三者的A260数值为：
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分子生物学试题及答案 一、名词解释 1．cDNA与cccDNA：cDNA是由mRNA通过反转录酶合成的双链DNA；cccDNA是游离于染色体之外的质粒双链闭合环形DNA。 2．标准折叠单位：蛋白质二级结构单元α－螺旋与β－折叠通过各种连接多肽可以组成特殊几何排列的结构块，此种确定的折叠类型通常称为超二级结构。几乎所有的三级结构都可以用这些折叠类型，乃至他们的组合型来予以描述，因此又将其称为标准折叠单位。 3．CAP：环腺苷酸（cAMP）受体蛋白CRP（cAMP receptor protein ），cAMP与CRP结合后所形成的复合物称激活蛋白CAP（cAMP activated protein ） 4．回文序列：DNA片段上的一段所具有的反向互补序列，常是限制性酶切位点。 5．micRNA：互补干扰RNA或称反义RNA，与mRNA序列互补，可抑制mRNA的翻译。 6．核酶：具有催化活性的RNA，在RNA的剪接加工过程中起到自我催化的作用。 7．模体：蛋白质分子空间结构中存在着某些立体形状和拓扑结构颇为类似的局部区域 8．信号肽：在蛋白质合成过程中N端有15~36个氨基酸残基的肽段，引导蛋白质的跨膜。 9．弱化子：在操纵区与结构基因之间的一段可以终止转录作用的核苷酸序列。 10．魔斑：当细菌生长过程中，遇到氨基酸全面缺乏时，细菌将会产生一个应急反应，停止全部基因的表达。产生这一应急反应的信号是鸟苷四磷酸(ppGpp)和鸟苷五磷酸（pppGpp）。PpGpp与pppGpp的作用不只是一个或几个操纵子，而是影响一大批，所以称他们是超级调控子或称为魔斑。 11．上游启动子元件：是指对启动子的活性起到一种调节作用的DNA序列，-10区的TATA、-35区的TGACA 及增强子，弱化子等。 12．DNA探针：是带有标记的一段已知序列DNA，用以检测未知序列、筛选目的基因等方面广泛应用。13．SD序列：是核糖体与mRNA结合序列，对翻译起到调控作用。 14．单克隆抗体：只针对单一抗原决定簇起作用的抗体。 15．考斯质粒：是经过人工构建的一种外源DNA载体，保留噬菌体两端的COS区，与质粒连接构成。16．蓝-白斑筛选：含LacZ基因（编码β半乳糖苷酶）该酶能分解生色底物X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷)产生蓝色，从而使菌株变蓝。当外源DNA插入后，LacZ基因不能表达，菌株呈白色，以此来筛选重组细菌。称之为蓝-白斑筛选。 17．顺式作用元件：在DNA中一段特殊的碱基序列，对基因的表达起到调控作用的基因元件。18．Klenow酶：DNA聚合酶I大片段，只是从DNA聚合酶I全酶中去除了5’→3’外切酶活性 19．锚定PCR：用于扩增已知一端序列的目的DNA。在未知序列一端加上一段多聚dG的尾巴，然后分别用多聚dC和已知的序列作为引物进行PCR扩增。 20．融合蛋白：真核蛋白的基因与外源基因连接，同时表达翻译出的原基因蛋白与外源蛋白结合在一起所组成的蛋白质。 二、填空 1． DNA的物理图谱是DNA分子的（限制性内切酶酶解）片段的排列顺序。 2． RNA酶的剪切分为（自体催化）、（异体催化）两种类型。 3．原核生物中有三种起始因子分别是（IF-1）、（IF-2）和（IF-3）。 4．蛋白质的跨膜需要（信号肽）的引导，蛋白伴侣的作用是（辅助肽链折叠成天然构象的蛋白质）。5．启动子中的元件通常可以分为两种：（核心启动子元件）和（上游启动子元件）。 6．分子生物学的研究内容主要包含（结构分子生物学）、（基因表达与调控）、（DNA重组技术）三部分。7．证明DNA是遗传物质的两个关键性实验是（肺炎球菌感染小鼠）、（ T2噬菌体感染大肠杆菌）这两个实验中主要的论点证据是：（生物体吸收的外源DNA改变了其遗传潜能）。 8．hnRNA与mRNA之间的差别主要有两点：（hnRNA在转变为mRNA的过程中经过剪接，）、 （mRNA的5′末端被加上一个m7pGppp帽子，在mRNA3′末端多了一个多聚腺苷酸(polyA)尾巴）。 9．蛋白质多亚基形式的优点是（亚基对DNA的利用来说是一种经济的方法）、（可以减少蛋白质合成过程中随机的错误对蛋白质活性的影响）、（活性能够非常有效和迅速地被打开和被关闭）。 10．蛋白质折叠机制首先成核理论的主要内容包括（成核）、（结构充实）、（最后重排）。 11．半乳糖对细菌有双重作用；一方面（可以作为碳源供细胞生长）；另一方面（它又是细胞壁的成分）。所以需要一个不依赖于cAMP—CRP的启动子S2进行本底水平的永久型合成；同时需要一个依赖于cAMP—CRP的启动子S1对高水平合成进行调节。有G时转录从（ S2）开始，无G时转录从（ S1）开
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分子生物学 第一章绪论 分子生物学研究内容有哪些方面？ 1、结构分子生物学； 2、基因表达的调节与控制； 3、DNA重组技术及其应用； 4、结构基因组学、功能基因组学、生物信息学、系统生物学 第二章DNA and Chromosome 1、DNA的变性：在某些理化因素作用下，DNA双链解开成两条单链的过程。 2、DNA复性：变性DNA在适当条件下，分开的两条单链分子按照碱基互补原则重新恢复天然的双螺旋构象的现象。 3、Tm(熔链温度)：DNA加热变性时，紫外吸收达到最大值的一半时的温度，即DNA分子内50%的双链结构被解开成单链分子时的温度） 4、退火：热变性的DNA经缓慢冷却后即可复性，称为退火 5、假基因：基因组中存在的一段与正常基因非常相似但不能表达的DNA序列。以Ψ来表示。 6、C值矛盾或C值悖论:C值的大小与生物的复杂度和进化的地位并不一致，称为C值矛盾或C值悖论(C-Value Paradox)。 7、转座：可移动因子介导的遗传物质的重排现象。 8、转座子：染色体、质粒或噬菌体上可以转移位置的遗传成分 9、DNA二级结构的特点：1）DNA分子是由两条相互平行的脱氧核苷酸长链盘绕而成；2）DNA分子中的脱氧核苷酸和磷酸交替连接，排在外侧，构成基本骨架，碱基排列在外侧；3）DNA分子表面有大沟和小沟；4）两条链间存在碱基互补，通过氢键连系，且A=T、G ≡ C（碱基互补原则）；5）螺旋的螺距为3.4nm，直径为2nm，相邻两个碱基对之间的垂直距离为0.34nm，每圈螺旋包含10个碱基对；6）碱基平面与螺旋纵轴接近垂直，糖环平面接近平行 10、真核生物基因组结构：编码蛋白质或RNA的编码序列和非编码序列，包括编码区两侧的调控序列和编码序列间的间隔序列。 特点：1）真核基因组结构庞大哺乳类生物大于2X109bp；2）单顺反子（单顺反子：一个基因单独转录，一个基因一条mRNA，翻译成一条多肽链；）3）基因不连续性断裂基因（interrupted gene）、内含子(intron)、外显子(exon)；4）非编码区较多，多于编码序列(9:1) 5）含有大量重复序列 11、Histon(组蛋白)特点：极端保守性、无组织特异性、氨基酸分布的不对称性、可修饰作用、富含Lys的H5 12、核小体组成：由组蛋白和200bp DNA组成 13、转座的机制：转座时发生的插入作用有一个普遍的特征，那就是受体分子中有一段很短的被称为靶序列的DNA会被复制，使插入的转座子位于两个重复的靶序列之间。 复制型转座：整个转座子被复制，所移动和转位的仅为原转座子的拷贝。 非复制型转座：原始转座子作为一个可移动的实体直接被移位。 第三章DNA Replication and repair 1、半保留复制：DNA生物合成时，母链DNA解开为两股单链，各自作为模板(template)按碱
现代分子生物学第四章作业【修订版】
现代分子生物学第四章作业（5-13题） 222009317011128 牛旭毅2011.10.15 5，比较原核与真核的核糖体组成？ 答：相同点：核糖体是一个致密的核糖核蛋白颗粒，可以解离为两个亚基，每个亚基都含有一个相对分子质量较大的rRNA和许多不同的蛋白质分子。 不同点：（1）原核生物核糖体由约2/3的RNA及1/3的蛋白质组成。真核生物核糖体中RNA占3/5，蛋白质占2/5。（2）大肠杆菌核糖体小亚基由21种蛋白质组成，分别用S1……S21表示，大亚基由33种蛋白质组成，分别用L1……L33表示。真核生物细胞核糖体大亚基含有49种蛋白质，小亚基有33种蛋白质。 6，什么是SD序列？其功能是什么？ 答：定义：因澳大利亚学者夏因(Shine)和达尔加诺(Dalgarno)两人发现该序列的功能而得名。信使核糖核酸(mRNA)翻译起点上游与原核16S 核糖体RNA或真核18S rRNA 3′端富含嘧啶的7核苷酸序列互补的富含嘌呤的3～7个核苷酸序列(AGGAGG)，是核糖体小亚基与mRNA结合并形成正确的前起始复合体的一段序列。 功能：此序列富含A-G，恰与16SRNA3’端富含T-C的序列互补，因此mRNA 与核蛋白体sRNA容易配对结合。因此SD序列对mRNA的翻译起重要作用。 7，核糖体有哪些活性中心？ 答：核糖体有多个活性中心，即mRNA结合部位、结合或接受AA- tRNA部位（A 位）、结合或接受肽酰-tRNA的部位（P位）、肽基转移部位及形成肽键的部位（转肽酶中心），此外还应有负责肽链延伸的各种延伸因子的结合位点。 8，真核生物与原核生物在翻译起始过程中有什么区别？ 答：原核生物的起始tRNA是fMet-tRNA(fMet上角标），30s小亚基首先与mRNA 模板相结合，再与fMet-tRNA(fMet上角标）结合，最后与50s大亚基结合。 真核生物的起始tRNA是Met-tRNA(Met上角标），40s小亚基首先与Met-tRNA(Met上角标）相结合，再与模板mRNA结合，最后与60s大亚基结合生成起始复合物。真核生物蛋白质生物合成的起始机制与原核生物基本相同，其差异主要是核糖体较大，有较多的起始因子参与，其mRNA具有m7GpppNp帽子结构，Met-tRNA （Met上角标）不甲酰化，mRNA分子5' 端的“帽子”参与形成翻译起始复合物。9，链霉素为什么能预制蛋白质合成？ 答：链霉素是一种碱性三糖，干扰fMet-tRNA与核糖体的结合，从而阻止蛋白质合成的正确起始，并导致mRNA的错读。若以poly（U）作模板，则除苯丙氨酸（UUU）外，异亮氨酸（AUU）也会掺入。链霉素的作用位点在30S亚基上。
分子生物学复习题(有详细答案)
绪论 思考题：（P9） 1.从广义和狭义上写出分子生物学的定义？ 广义上讲的分子生物学包括对蛋白质和核酸等生物大分子结构与功能的研究，以及从分子水平上阐明生命的现象和生物学规律。 狭义的概念，即将分子生物学的范畴偏重于核酸（基因）的分子生物学，主要研究基因或DNA结构与功能、复制、转录、表达和调节控制等过程。其中也涉及与这些过程相关的蛋白质和酶的结构与功能的研究。 2、现代分子生物学研究的主要内容有哪几个方面？什么是反向生物学？什么是 后基因组时代？ 研究内容： DNA的复制、转录和翻译；基因表达调控的研究；DNA重组技术和结构分子生物学。 反向生物学：是指利用重组DNA技术和离体定向诱变的方法研究已知结构的基因相应的功能，在体外使基因突变，再导入体内，检测突变的遗传效应，即以表型来探索基因结构。 后基因组时代：研究细胞全部基因的表达图式和全部蛋白质图式，人类基因组研究由结构向功能转移。 3、写出三个分子生物写学展的主要大事件（年代、发明者、简要内容） 1953年Watson和Click发表了?脱氧核糖核苷酸的结构?的著名论文，提出了DNA的双螺旋结构模型。 1972~1973年，重组DNA时代的到来。H.Boyer和P.Berg等发展了重组DNA 技术，并完成了第一个细菌基因的克隆，开创了基因工程新纪元。 1990~2003年美、日、英、法、俄、中六国完成人类基因组计划。解读人类遗传密码。 4、21世纪分子生物学的发展趋势是怎样的？ 随着基因组计划的完成，人类已经掌握了模式生物的所有遗传密码。又迎来了后基因组时代，人类基因组的研究重点由结构向功能转移。相关学说理论相应诞生，如功能基因组学、蛋白质组学和生物信息学。生命科学又进入了一个全新的时代。 第四章 思考题：（P130） 1、基因的概念如何？基因的研究分为几个发展阶段？ 概念：基因是原核、真核生物以及病毒的DNA和RNA分子中具有遗传效应的核苷酸序列，是遗传的基本单位和突变单位以及控制形状的功能单位。 发展阶段：○120世纪50年代以前，主要从细胞的染色体水平上进行研究，属于基因的染色体遗传学阶段。 ○220世纪50年代以后，主要从DNA大分子水平上进行研究，属于分
关于分子生物学试题及答案
分子生物学试题（一） 一.填空题(,每题1分,共20分) 一.填空题(每题选一个最佳答案,每题1分,共20分) 1. DNA的物理图谱是DNA分子的（）片段的排列顺序。 2. 核酶按底物可划分为（）、（）两种类型。 3．原核生物中有三种起始因子分别是（）、（）和（）。 4．蛋白质的跨膜需要（）的引导，蛋白伴侣的作用是（）。5．真核生物启动子中的元件通常可以分为两种：（）和（）。6．分子生物学的研究内容主要包含（）、（）、（）三部分。 7．证明DNA是遗传物质的两个关键性实验是（）、（）。 8．hnRNA与mRNA之间的差别主要有两点：（）、（）。 9．蛋白质多亚基形式的优点是（）、（）、（）。 10.蛋白质折叠机制首先成核理论的主要内容包括（成核）、（结构充实）、（最后重排）。 11.半乳糖对细菌有双重作用；一方面（可以作为碳源供细胞生长）；另一方面（它又是细胞壁的成分）。所以需要一个不依赖于cAMP-CRP的启动子S2进行本底水平的永久型合成；同时需要一个依赖于cAMP-CRP的启动子S1对高水平合成进行调节。有G时转录从（S2 ）开始，无G时转录从（S1 ）开始。 12．DNA重组技术也称为（基因克隆）或（分子克隆）。最终目的是（把一个生物体中的遗传信息DNA转入另一个生物体）。典型的DNA重组实验通常包含以下几个步骤： ①提取供体生物的目的基因（或称外源基因），酶接连接到另一DNA分子上（克隆载体），形一个新的重组DNA分子。 ②将这个重组DNA分子转入受体细胞并在受体细胞中复制保存，这个过程称为转化。 ③对那些吸收了重组DNA的受体细胞进行筛选和鉴定。 ④对含有重组DNA的细胞进行大量培养，检测外援基因是否表达。 13、质粒的复制类型有两种：受到宿主细胞蛋白质合成的严格控制的称为（严紧型质粒），不受宿主细胞蛋白质合成的严格控制称为（松弛型质粒）。 14．PCR的反应体系要具有以下条件： a、被分离的目的基因两条链各一端序列相互补的 DNA引物（约20个碱基左右）。 b、具有热稳定性的酶如：TagDNA聚合酶。 c、dNTP d、作为模板的目的DNA序列 15．PCR的基本反应过程包括：（变性）、（退火）、（延伸）三个阶段。 16、转基因动物的基本过程通常包括： ①将克隆的外源基因导入到一个受精卵或胚胎干细胞的细胞核中； ②接种后的受精卵或胚胎干细胞移植到雌性的子宫；
分子生物学第四章练习题
假定你从一新发现的病毒中提取了核苷酸，请用最简单的方法确定：（1）它是DNA还是RNA？（2）它是单链还是双链？--类型：分析题 答：确定碱基比率。如果有胸腺嘧啶，为DNA，如果有尿嘧啶，则为RNA。如果为双链分子，那么A与T(或U)的量以及G与C的量应相等。 RNA 是由核糖核酸通过（）键连接而成的一种（）。几乎所有的RNA都是由（）DNA（）而来，因此，序列和其中一条链（）。--类型：填空题 --答案：磷酸二酯；多聚体；模板；转录；互补 多数类型的RNA是由加工（）产生的，真核生物前体tRNA的（）包括（）的切除和（）的拼接。随着（）和（）端的序列切除，3’端加上了序列（）。在四膜虫中，前体TRNA 的切除和（）的拼接是通过（）机制进行的。--类型：填空题 --答案：前体分子；加工；内含子；外显子；5’；3’；CCA；内含子；外显子；自动催化 Rnase P 是一种（），含有（）作为它的活性部位，这种酶在（）序列的（）切割（）。--类型：填空题 --答案：内切核酸酶；RNA；tRNA；5’端；前体RNA C0t1/2实验测定的是（）。--类型：填空题 --答案：41 RNA的复性程度 假定摆动假说是正确的，那么最少需要（）种TRNA来翻译61种氨基酸密码子。--类型：填空题 --答案：32 写出两种合成后不被切割或拼接的RNA：（）和（）。--类型：填空题 --答案：.真核生物中的5SrRNA；原核生物中的mRNA 原核细胞信使RNA含有几个其功能所必需的特征区段，它们是：( ) --类型：选择题--选择：(a)启动子，SD序列，起始密码子，终止密码子，茎环结构(b)启动子，转录起始位点，前导序列，由顺反子间区序列隔开的SD序列和ORF 尾部序列，茎环结构(c)转录起始位点，尾部序列，由顺反子间区序列隔开的SD序列和0RF，茎环结构(d)转录起始位点，前导序列，由顺反子间区序列隔开的SD序列和0RF，局部序列 --答案：d
2013-2014现代文理学院分子生物学章节练习题第4章练习题
第四章生物信息的传递下-从mRNA到蛋白质 练习题 一、选择题【单选题】 1．下列氨基酸活化的叙述哪项是错误的 A.活化的部位是氨基酸的α-羧基 B.活化的部位是氨基酸的α-氨基， C.活化后的形式是氨基酰-tRNA D.活化的酶是氨基酰-tRNA合成酶 E.氨基酰tRNA既是活化形式又是运输形式 2．氨基酰tRNA的3’末端腺苷酸与氨基酸相连的基团是 A.1’-OH B.2’-磷酸 C.2’-OH D. 3’-OH， E.3’-磷酸 5．代表氨基酸的密码子是 A.UGA B.UAG C.UAA D.UGG E.UGA和UAG 6．蛋白质生物合成中多肽链的氨基酸排列顺序取决于 A.相应tRNA专一性 B.相应氨基酰tRNA合成酶的专一性 C.相应mRNA中核苷酸排列顺序 D.相应tRNA上的反密码子 E.相应rRNA的专一性 9．能出现在蛋白质分子中的氨基酸哪一种没有遗传密码 A.色氨酸 B.甲硫氨酸 C.羟脯氨酸 D.谷氨酰胺 E.组氨酸 11．下述原核生物蛋白质翻译特点错误的是 A.翻译与转录偶联进行 B.各种RNA中mRNA半寿期最短 C.起始阶段需A TP D.有三种释放因子分别起作用 E.合成场所为70S核糖体 18．氨基酰-tRNA合成酶的特点是 A.存在于细胞核内 B.只对氨基酸的识别有专一性 C.只对tRNA的识别有专一性 D.催化反应需GTP E.对氨基酸、tRNA的识别都有专一性 23．蛋白质合成时肽链合成终止的原因是 A.已达到mRNA分子的尽头 B.特异的tRNA识别终止密码子 C.释放因子能识别终止密码子并进入A位 D.终止密码子本身具酯酶作用，可水解肽酰基与tRNA之间的酯键 E.终止密码子部位有较大阻力，核糖体无法沿mRNA移动24．下列关于翻译的描述错误的是 A.氨基酸必须活化成活性氨基酸 B.氨基酸的羧基端被活化 C.活化的氨基酸被搬运到核糖体上 D.体内所有的氨基酸都有相应的密码 E.tRNA的反密码子与mRNA上的密码子按碱基配对原则反向结合 1、单项选择题参考答案及解析： 1．B 2．D 3．C 信号肽是指用于指导蛋白质的跨膜转移（定位）的N-末端的氨基酸序列（有时不一定在N端） 一般由15～30个氨基酸组成。包括三个区：一个带正电的N末端，称为碱性氨基末端：一个中间疏水序列．以中性氨基酸为主，能够形成一段d 螺旋结构，它是信号肽的主要功能区；一个较长的带负电荷的C末端，含小分子氨基酸，是信号序列切割位点．也称加工区。当信号肽序列合成后，被信号识别颗粒(SRP)所识别，蛋白质合成暂停或减缓，信号识别颗粒将核糖体携带至内质网上4．D 5．D 解析：mRNA分子中共有64个密码，其中61个代表20种氨基酸，有一个起始密码－AUG（在蛋白质生物合成的起始阶段，即代表蛋白质合成的起始，也是蛋氨酸的密码），3个终止密码－UAA、UAG及UGA，所以答案A、B、C、E均为终止密码，只有答案D是代表氨基酸（色氨酸）的密码。6．C 7．E 8．B 用排除法9．C 10．B 11．C 翻译起始阶段需要GTP供能，而活化阶段是ATP供能12．C解析：能引起合成中的肽链过早脱落终止其合成的是嘌呤霉素，其作用机理是：嘌呤霉素的结构与酪氨酰-tRNA（Tyr-tRNAtyr）相似，可取代一些氨基酰-tRNA进入核糖体A位。当延长中的肽链进行移位时，肽链移入A位非正常氨基上时，易脱落，使肽链合成提前终止。氯霉素是与大亚基结合，抑制原核生物肽链延长过程；四环素族抑制氨基酰-tRNA与原核生物核蛋白体结合，抑制其蛋白质生物合成；链霉素是与原核生物小亚基结合，引起读码错误，使毒素类的细菌蛋白异常而失活；放线菌酮仅抑制真核生物转肽酶活性，抑制蛋白质合成。13．C page141，因为A位是进位的，任何新掺入的氨基酸都要在A位上，随后新生的链转移到P位，因为这样上一个tRNA才能被释放，空载之后去携带下一个同类氨基酸14．A 15．C 16．D 17．C 18．E 19．D 20．E 见page136，释放因子有两类三种，其中第一类是识别终止密码子的，而第二类是刺激第一类释放的21．D 22．A 23．C 24．D稀有氨基酸(Rare amino acid)存在于蛋白质中的20种常见氨基酸以外的其它罕见氨基酸，它们没有对应的遗传密码，都是在肽链合成后由相应的常见的氨基酸经过化学修饰衍生而来的氨基酸。蛋白质的稀有氨基酸中，4-羟基脯氨酸和5-羟基赖氨酸是两个重要的氨基酸，它们是胶原蛋白的重要组成成分，而胶原蛋白是哺乳动物体内最丰富的蛋白质。此外，与核酸形成复合物的蛋白某些稀有氨基酸质中的往往含有被修饰的氨基酸。例如，染色体上的组蛋白(histone)中含有被甲基化、乙酰化或磷酸化的氨基酸。N-甲酰甲硫氨酸(N-formylmethionine)是所有原核生物的蛋白质合成时N端的起始氨基酸。25．E 26．A见page133图4-17 27．B解析：蛋白质合成过程中，当mRNA上出现终止密码（UAA、UAG、UGA）时蛋白质合成终止，mRNA第142号密码UGA为终止密码，所以多肽链含有141个氨基酸。28．D 解析：遗传密码具有通用性，所以蛋白质生物合成的起始密码都是AUG，同时也为Met编码。原核生物的起始密码只能辨认甲酰化的蛋氨酸（N-甲酰蛋氨酸）。所以大肠杆菌中初合成的各种多肽链N 端第一个氨基酸是N-甲酰蛋氨酸 29.C30.D 31.B 32.B33.D 注意方向5-3.34.D 35.C 36.B 37.A 38.B 二、不定项选择题【至少两个正确选项的选择题】4．肽链的一级结构修饰： A. N-端修饰 B.个别氨基酸共价修饰， C.肽链水解修饰 D.辅基连接 E.亚基聚合5．tRNA反密码中除有AUGC外，常含有I，它可与密码中哪些碱基配对 A.U B.C C.A D.G E.T 6．下述关于翻译过程正确的是 A.氨基酸随机地结合在tRNA上 B.多肽链的合成是从羧基端向氨基端延伸 C.mRNA沿着核糖体移动 D.生长中的多肽链最初是连结在tRNA上 E.内质网是蛋白质合成场所 10．遗传密码的简并性指的是 A.一些三联体密码子可缺少一个嘌呤碱或嘧啶碱 B.密码子中有许多稀有碱基 C.大多数氨基酸有一组以上的密码子 D.一些密码子适用于一种以上的氨基酸 E.不同种属的生物中都相同，在翻译中可表现为某些密码优先使用特性， 18．肽链合成后的加工包括 A.切除肽链起始端的(甲酰)蛋氨酸残基 B.切除部分肽段 C.二硫键的形成 D.某些氨基酸的羟化、磷酸化 E.连接糖链 19．氨基酰-tRNA合成酶的作用是 A.使氨基酸活化 B.对氨基酸的识别无专一性，对tRNA的识别有专一性 C.促使相应的tRNA与活化氨基酸连接 D.精氨酸可由6种tRNA携带，因此要求有6种氨基酰-tRNA 合成酶催化 E.氨基酰-tRNA合成酶有校正活性 二、【不定项选择题参考答案】 1．AC AC位于N端，疏水特征是为了与膜结合2．ABC 3．BD 4．ABC 5．ABC 见page114图4-4. 6．CD 解释：新加入的氨基酸7．ACDE解析：原核生物翻译与转录无核膜间隔，均在胞质，所以是边转录边翻译，
(完整版)分子生物学》试题及答案
《分子生物学》考试试题B 课程号：66000360 考试方式：闭卷 考试时间： 一、名词解释（共10题，每题2分，共20分） 1. SD 序列 2. 重叠基因 3．ρ因子 4．hnRNA 5. 冈崎片段、 6. 复制叉(replication fork) 7. 反密码子(anticodon)： 8. 同功tRNA 9. 模板链(template strand) 10. 抑癌基因 二、填空题（共20空，每空1分，共20分） 1.原核基因启动子上游有三个短的保守序列,它们分别为____和__区. 2.复合转座子有三个主要的结构域分别为______、______、________。 3.原核生物的核糖体由_____小亚基和_____大亚基组成，真核生物核糖糖体由_____小亚基和_______大亚基组成。 4.生物界共有___个密码子，其中__ 个为氨基酸编码，起始密码子为__ _______；终止密码子为_______、__________、____________。 5. DNA生物合成的方向是_______，冈奇片段合成方向是_______。 6.在细菌细胞中，独立于染色体之外的遗传因子叫_______。它是一
种_______状双链DNA，在基因工程中，它做为_______。 三．判断题（共5题，每题2分，共10分） 1.原核生物DNA的合成是单点起始，真核生物为多点起始。( ) 2.在DNA生物合成中，半保留复制与半不连续复制指相同概念。( ) 3.大肠杆菌核糖体大亚基必须在小亚基存在时才能与mRNA结合。( ) 4.密码子在mRNA上的阅读方向为5’→ 3’。( ) 5.DNA复制时，前导链的合成方向为5’→ 3’，后随链的合成方向也是5’→ 3’。（） 四、简答题（共6题，每题5分，共30分） 1.简述三种RNA在蛋白质生物合成中的作用。 2.蛋白质合成后的加工修饰有哪些内容? 3.简述人类基因组计划的主要任务。 4.简述现代分子生物学的四大研究热点。 5.何谓转座子?简述简单转座子发生转座作用的机理。 6.简述大肠杆菌乳糖操纵子与色氨酸操纵子在阻遏调控机制上有那些区别？ 四、问答题（共2题，共20分） 1.叙述蛋白质生物合成的主要过程。（10分） 2.请叙述真核基因的表达调控主要发生在那些环节？分别是怎样进行 的？（10分）
分子生物学题(含答案)
1.哪些因素引起DNA的突变？简要叙述生物体存在的修复方式。 突变引起的物理因素：辐射、紫外线等，化学因素：聚乙二醇，致癌物质等，生物因素：仙台病毒等。 修复方式：错配修复恢复错配 切除修复（碱基、核苷酸）切除突变的碱基和核苷酸片段 重组修复复制后的修复，重新启动停滞的复制叉 DNA直接修复修复嘧啶二体或甲基化DNA SOS系统DNA的修复，导致变异 2.描述乳糖操纵子的调控机制。（看不懂题目，乱写的） 乳糖操纵子的调控属于可诱导调节。在以乳糖为碳源的培养基中，在单个透过酶分子的作用下，少量乳糖分子进入细胞，又在单个β-半乳糖苷酶分子作用下转变成异构乳糖。某个异构乳糖与结合在操纵区上的阻遏物结合后使后者失活离开操纵区，开始了lac mRNA的生物合成。Lac mRNA翻译后生成大量的透过酶和β-半乳糖苷酶，加速了乳糖分子的转变。当乳糖分子都被消耗完毕时，阻遏物仍在不断被合成，有活性的阻遏物浓度超过了异构乳糖浓度，使细胞重新建立起阻遏状态，导致lac mRNA合成被抑制。mRNA半衰期短，不到一个世代生长期，mRNA几乎从细胞消失，透过酶和β-半乳糖苷酶的合成也趋于停止。 3.简述DNA半保留复制的概念。 每个子代分子的一条链来自亲代DNA，另一条链则是新合成的，这种复制方式被称为DNA的半保留复制。 4.对生物体转录和复制的特征进行说明比较？（网上找的） DNA复制和RNA转录在原理上是基本一致的，体现在：①这两种合成的直接前体是核苷三磷酸，从它的一个焦磷酸键获得能量促使反应走向合成；②两种合成都需要RNA聚合酶和四种核苷酸；③两种合成都是以DNA为模板；④合成前都必须将双链DNA解旋成单链；⑤合成的方向都是5’→ 3’。 DNA复制和RNA转录的不同点体现在：①复制和转录所用的酶是不同的，复制用的是DNA聚合酶，而转录用的是RNA聚合酶；②所用前体核苷三磷酸种类不同，DNA复制用四种脱氧核糖核苷三磷酸，即dA TP、dGTP、dCTP、dTTP，而RNA转录用四种核糖核苷三磷酸，即A TP、GTP、CrP、UTP做前体底物；③在DNA复制时是A与T配对，而RNA转录是A与U配对；④DNA复制时两条链均做模板，而RNA转录时只以其中一条链为模板；⑤DNA复制是半不连续的，可产生冈崎片段，而RNA转录是连续的；⑥DNA复制时需RNA做引物，而RNA转录无需引物；⑦DNA复制时需连接酶的参与，而RNA 转录时不需要。 5.阐述蛋白质生物合成途径 氨基酸的活化→翻译的起始（核糖体结合mRNA且甲硫氨酰-tRNA*结合到核糖体）→肽链的延伸（后续AA-tRNA与核糖体的结合，肽键生成，移位）→肽链终止→蛋白质前体加工→蛋白质的折叠 6.简要叙述真核生物mRNA的转录后加工的方式，这些加工方式各有何意义 RNA的编辑：某些RNA，特别是mRNA前体的一种加工方式，如插入、删除或取代一些核苷酸残基，导致DNA所编码的遗传信息的改变。因为经过编辑的mRNA序列发生了不同于模板DNA的变化。 生物学意义：校正作用有些基因突变在突变过程中丢失的遗传信息可能通过RNA的编辑得以回复
现代分子生物学实验教程
现代分子生物学实验技术教材 目 录 第一章 质粒DNA的分离、纯化和鉴定 第二章 DNA酶切及凝胶电泳 第三章 大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 第四章 RNA的提取和cDNA合成 第五章 重组质粒的连接、转化及筛选 第六章 基因组DNA的提取 第七章 RFLP和RAPD技术 第八章 聚合酶链式反应(PCR)扩增和扩增产物克隆 第九章 分子杂交技术 第一章 质粒DNA的分离、纯化和鉴定 第一节 概 述 把一个有用的目的DNA片段通过重组DNA技术,送进受体细胞中去进行繁殖和表达的工具叫载体(Vector)。细菌质粒是重组DNA技术中常用的载体。 质粒(Plasmid)是一种染色体外的稳定遗传因子,大小从1-200kb不等,为双链、闭环的DNA 分子,并以超螺旋状态存在于宿主细胞中。质粒主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中，它具有自主复制和转录能力,能在子代细胞中保持恒定的拷贝数,并表达所携带的遗传信息。质粒的复制和转录要依赖于宿主细胞编码的某些酶和蛋白质，如离开宿主细胞则不能存活,而宿主即使没有它们也可以正常存活。质粒的存在使宿主具有一些额外的特性,如对抗生素的抗性等。F质粒(又称F因子或性质粒)、R质粒(抗药性因子)和Col质粒(产大肠杆菌素因子)等都是常见的天然质粒。 质粒在细胞内的复制一般有两种类型:紧密控制型(Stringent control)和松驰控制型(Relaxed control)。前者只在细胞周期的一定阶段进行复制,当染色体不复制时,它也不能复制,通常每个细胞内只含有1个或几个质粒分子,如F因子。后者的质粒在整个细胞周期中随时可以
复制,在每个细胞中有许多拷贝,一般在20个以上,如Col E1质粒。在使用蛋白质合成抑制剂-氯霉素时,细胞内蛋白质合成、染色体DNA复制和细胞分裂均受到抑制,紧密型质粒复制停止,而松驰型质粒继续复制,质粒拷贝数可由原来20多个扩增至1000-3000个,此时质粒DNA占总DNA的含量可由原来的2%增加至40-50%。 利用同一复制系统的不同质粒不能在同一宿主细胞中共同存在,当两种质粒同时导入同一细胞时,它们在复制及随后分配到子细胞的过程中彼此竞争,在一些细胞中,一种质粒占优势,而在另一些细胞中另一种质粒却占上风。当细胞生长几代后,占少数的质粒将会丢失,因而在细胞后代中只有两种质粒的一种，这种现象称质粒的不相容性(Incompatibility)。但利用不同复制系统的质粒则可以稳定地共存于同一宿主细胞中。 质粒通常含有编码某些酶的基因,其表型包括对抗生素的抗性,产生某些抗生素,降解复杂有机物,产生大肠杆菌素和肠毒素及某些限制性内切酶与修饰酶等。 质粒载体是在天然质粒的基础上为适应实验室操作而进行人工构建的。与天然质粒相比,质粒载体通常带有一个或一个以上的选择性标记基因(如抗生素抗性基因)和一个人工合成的含有多个限制性内切酶识别位点的多克隆位点序列,并去掉了大部分非必需序列,使分子量尽可能减少,以便于基因工程操作。大多质粒载体带有一些多用途的辅助序列,这些用途包括通过组织化学方法肉眼鉴定重组克隆、产生用于序列测定的单链DNA、体外转录外源DNA序列、鉴定片段的插入方向、外源基因的大量表达等。一个理想的克隆载体大致应有下列一些特性： （1）分子量小、多拷贝、松驰控制型； （2）具有多种常用的限制性内切酶的单切点； （3）能插入较大的外源DNA片段； （4）具有容易操作的检测表型。 常用的质粒载体大小一般在1kb至10kb之间，如PBR322、PUC系列、PGEM系列和pBluescript （简称pBS）等。 从细菌中分离质粒DNA的方法都包括3个基本步骤:培养细菌使质粒扩增；收集和裂解细胞;分离和纯化质粒DNA。采用溶菌酶可以破坏菌体细胞壁,十二烷基磺酸钠(SDS)和Triton X-100可使细胞膜裂解。经溶菌酶和SDS或Triton X-100处理后,细菌染色体DNA会缠绕附着在细胞碎片上,同时由于细菌染色体DNA比质粒大得多,易受机械力和核酸酶等的作用而被切断成不同大小的线性片段。当用强热或酸、碱处理时，细菌的线性染色体DNA变性,而共价闭合环状DNA(Covalently closed circular DNA，简称cccDNA)的两条链不会相互分开，当外界条件恢复正常时，线状染色体DNA片段难以复性,而是与变性的蛋白质和细胞碎片缠绕在一起,而质粒DNA 双链又恢复原状,重新形成天然的超螺旋分子,并以溶解状态存在于液相中。 在细菌细胞内,共价闭环质粒以超螺旋形式存在。在提取质粒过程中，除了超螺旋DNA外，