水样和土样测定方法

标准样品、指示剂的准备与标定

标准酸溶液用分析纯硼砂（Na2B4O7 H2O）放在蔗糖和食盐的饱和水溶液的干燥器内平衡一周。

标准碱用分析纯无水碳酸钠（Na2CO3）在180-200度下烘干4-6小时。

甲基红-溴甲酚绿混合指示剂：0.5克溴甲酚绿和0.1克甲基红溶于100毫升乙醇中。

二硝基酚指示剂：0.2克2，6-二硝基酚或2，4-二硝基酚（C6H3OH(NO2)2）溶于100毫升水中。

硫酸溶液【C( 1/2 H2SO4)=0.1 mol L-1】：将0.3 ml浓硫酸稀释到100 ml。

7N H2SO4 配制方法为：2.8ml*7=19.6ml 浓硫酸【H2SO4，1.84 g cm-3，分析纯】溶解于水中稀释到100ml得到C( 1/2 H2SO4)=7 mol L-1。

水样

一、pH测定方法

（1）测定缓冲液的温度，调节酸度计按钮至缓冲液温度值；

（2）根据温度从说明书上查找在特定温度下响应缓冲溶液的pH值；

（3）调整仪器，用校正按钮（标定）调节pH缓冲溶液6的pH值至特定温度下缓冲液的pH值，用斜率按钮调节pH缓冲液9的pH值至特定温度

下缓冲液的pH值，在将复合电极插入两种缓冲液中时需要用蒸馏水将

其清洗干净。

（4）标定完成后不可再动校正按钮和斜率按钮，然后测定水样的pH值，注意温度按钮应与水样的温度一致，必要时调节。

二、水样总氮总磷同步测定方法：碱性过硫酸钾氧化－紫外分光光

度法

本法总氮最低检出浓度为0.05 mgL-1，测定上限为4 mgL-1。

本法总磷最低检出浓度为0.01 mgL-1，测定上限为0.6 mgL-1。

（1）试剂配制

1、氧化剂溶液：20克过硫酸钾（K2S2O8,分析纯）和3克氢氧化钠（NaOH,

分析纯）溶于水中，稀释至1000ml。

2、氮标准贮备液【ρ(N)＝100 mgL-1】：称取0.7218克105～110

度烘干4小时）溶于水，定容至1000ml其中N=100μg/ml（即0.1mg/ml,

此标液可借用硝酸盐氮测定中的硝酸盐标准液）。

3、氮标准溶液【ρ(N)＝10 mg L-1】：取氮标准贮备液10 ml稀释到100 ml,

即稀释10倍。其中N＝10 mg L-1。

4、磷标准贮备液【ρ(P)＝100 mg L-1】0.4390g 烘干4小时后的

加水约为400ml溶于1000ml 容量瓶中，再加1ml 1+1 H2SO4（即1：1

H2SO4，配制方法为50 ml 浓硫酸[H2SO4，1.84 g cm-3,分析纯]溶解于50 ml水中）

定容至1000 ml。

5、磷标准溶液【ρ(P)＝10 mg L-1】：取磷标准贮备液10 ml稀释到100 ml,

即稀释10倍。其中P＝10 mg L-1。

6、硫酸钼酸铵钼（氧）锑钾贮备液：（a），194.6 ml 浓硫酸加到300 ml水

中，冷却至室温。（b），称取钼酸铵20克，溶于200 ml水中。（c），将

冷却后的a硫酸溶液缓慢加入到b钼酸铵溶液中（注意与磷酸盐测定中

钼酸铵-硫酸混合试剂的顺序不同）。（d），再加入100 ml 0.5％的酒石酸

锑钾（可以直接称取0.5克酒石酸锑钾放入到c溶液中，搅拌）。（e），

定容到1000 ml，至于棕色瓶中保存。

7、钼锑抗显色剂：100 ml硫酸钼酸铵钼（氧）锑钾贮备液+ 1.5克左旋抗

坏血酸，一般只能稳定4小时，在使用前现配。

8、饱和碳酸钠溶液或NaOH溶液（调节待测液的酸碱度）：碳酸钠溶解度

在温度35.4度时溶解度最大，100克水中可以溶解49.7克碳酸钠，在

100度时100克水中可以溶解45.5克碳酸钠。NaOH溶液的浓度根据待

测液的酸碱度而定。

9、二硝基酚指示剂：0.2克2，6-二硝基酚或2，4-二硝基酚（C6H3OH(NO2)2）

溶于100毫升水中。

（2）试验操作步骤

1、氮磷标准溶液系列的配制

分别吸取N=10 mg L-1的磷标准溶液0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0，

7.0 ml和P=10 mg L-1的磷标准溶液0，0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0，3.5 ml

于8个（实际为7个，空白不用吸）25 ml比色管中，定容至25 ml。

从中取10 ml于25 ml比色管中，此系列中氮的含量为0，4，8，12，16，20，24，28μg；磷的含量为0，2，4，6，8，10，12，14μg。然后

加入10ml氧化剂溶液，放入高压锅中消煮（120－124度）半小时（压力

到了之后开始计时）。冷却至室温。

取样品10 ml倒入消煮管中，加入10 ml过硫酸钾氧化剂与标准溶液同时消煮。

2、总氮的测定

取消煮后的标准液和水样的上清液，直接在波长200-210nm（实际取205nm）下比色，用b=1cm的石英比色皿比色测定总氮。

3、总磷的测定

吸取标液和水样上清液各10ml于25ml具塞比色管中（此时溶液呈酸性），加入1滴二硝基酚指示剂，用饱和碳酸钠溶液和1mol L-1硫酸调节溶

液呈浅黄色，加入显色剂（现配）2.5ml，加水至25ml刻度后摇匀，20-40

度下还原显色30分钟，在700nm波长处，用b=1cm的玻璃比色皿比色。

三、铵态氮测定方法：靛酚兰比色法

本法总氮最低检出浓度为0.05 mgL-1，测定上限为0.5mgL-1。反应体系的pH 应为10.5-11.7之间。

（1）试剂配置

1、酚溶液：10克苯酚（C6H5OH,分析纯）和100mg硝普钠【Na2Fe(CN)5NO

2H2O】于少量水稀释至1L，贮于棕色瓶，存放在4度冰箱中备用。

2、次氯酸钠碱性溶液：10克氢氧化钠（NaOH，分析纯），7.06克磷酸氢

二钠（Na2HPO4 7H2O,分析纯）｛或9.43克磷酸氢二钠（Na2HPO4 12H2O,

分析纯）｝，31.8克磷酸三钠（Na3PO412H2O,分析纯）和10 ml次氯酸

钠（NaClO,即含有效氯5％的漂白剂溶液）溶于1000ml水中。此试剂

应该与酚溶液同样保存。

3、掩蔽剂：酒石酸钾钠溶液【ρ（KNaC4H4O6 4H2O）=400 g L-1】与EDTA二

钠盐溶液【ρ（C

10H

14

O

8

N

2

Na

2

2H

2

O）=100 g L-1】等体积混合，每100ml

混合液中加0.5ml NaOH【c(NaOH)＝10 mol L-1】，即得清凉的掩蔽剂溶

液。

4、铵态氮标准贮备液【ρ（N）=100 mg L-1】：0.4717克烘干的硫酸铵【（NH4）

2

SO4，分析纯】溶于水，定容至1000 ml.

5、铵态氮标准溶液【ρ（N）=5 mg L-1】：测定当天将铵态氮标准贮备液（试

剂4）稀释20倍，即为【ρ（N）=5 mg L-1】标准液。

（2）标准曲线

分别吸取铵态氮标准溶液【ρ（N）=5 mg L-1】0，0.5，1，2，3，4，5ml 放入50 ml容量瓶中，加水到体积约为30ml，依次加入5 ml酚溶液（试剂1）和5 ml次氯酸钠碱性液（试剂2），摇匀在20度左右下放置1小时后，加入1ml掩蔽剂（试剂3）以溶解可能生成的沉淀物，用水定容至50 ml，用1cm比色皿在525nm波长处进行比色。

用上述方法制定的标准曲线浓度相应地为0，0.05，0.1，0.2，0.3，0.4，

0.5 mg L-1。

（3）样品测定

吸取水样10ml(含2μg－25μg)放入25ml比色管中，加入水到总体积为15ml，依次加入2.5ml酚溶液（试剂1）和2.5ml次氯酸钠碱性液（试剂2），摇匀在20度左右下放置1小时后，加入0.5ml掩蔽剂（试剂3）以溶解可能生成的沉淀物，然后用水定容，用1cm比色皿在625nm波长处进行比色。

注意此法显色反应速度较慢，温度对于显色的影响很大，分温度低时显色时间可适当延长，必要时可将容量瓶放在70－80度的水浴上保温5分钟，以加速显色。注意硝普纳有剧毒。

四、硝态氮测定方法：双波长比色法

本法总氮最低检出浓度为0.08 mg L-1，测定上限为4mgL-1。

（1）硝酸盐标准溶液：0.7218克KNO3(105-110度，烘干2小时，放入干燥器中冷去)溶于水，定容至1000 ml。其中NO3-N＝100 mg L-1。使用时取

5 ml稀释到100ml（稀释到20倍），其中NO3-N＝5 mg L-1。

（2）标准曲线的制作

按下表分别吸取一定量的标准溶液【NO3-N＝5 mg L-1】到50 ml容量瓶中定容，加入1 ml 1 mg L-1 HCl摇匀。

（3）1 mgL-1 HCl (优级纯)。需要较为准确的配置。较粗的配置方法为：通常盐酸为12N，所以只要稀释12倍即可。

（4）样品的测定：10 ml水样+ 0.2 ml 1 mg L-1盐酸，用光程10 mm的石英比

色皿再

五、磷酸盐测定方法：钼锑抗比色法

原理同用碱性过硫酸钾氧化－紫外分光光度法测定水样中总磷的方法。

（1）试剂配置(同碱性过硫酸钾氧化分光光度法)

1、磷标准贮备液【ρ(P)＝100 mg L-1】0.4390g 烘干4小时后的

加水约为400ml溶于1000ml 容量瓶中，再加1ml 1+1 H2SO4（即1：1

H2SO4，配制方法为50 ml 浓硫酸[H2SO4，1.84 g cm-3,分析纯]溶解于50 ml水中）

定容至1000 ml。

2、磷标准溶液【ρ(P)＝10 mg L-1】：取磷标准贮备液10 ml稀释到100 ml,

即稀释10倍。其中P＝10 mg L-1。

3、硫酸钼酸铵钼（氧）锑钾贮备液：（a），194.6 ml 浓硫酸加到300 ml水

中，冷却至室温。（b），称取钼酸铵20克，溶于200 ml水中。（c），将

冷却后的a硫酸溶液缓慢加入到b钼酸铵溶液中（注意与磷酸盐测定中

钼酸铵-硫酸混合试剂的顺序不同）。（d），再加入100 ml 0.5％的酒石酸

锑钾（可以直接称取0.5克酒石酸锑钾放入到c溶液中，搅拌）。（e），

定容到1000 ml，至于棕色瓶中保存。

4、钼锑抗显色剂：100 ml硫酸钼酸铵钼（氧）锑钾贮备液+ 1.5克左旋抗

坏血酸，一般只能稳定4小时，在使用前现配。

5、饱和碳酸钠溶液或NaOH溶液（调节待测液的酸碱度）：碳酸钠溶解度

在温度35.4度时溶解度最大，100克水中可以溶解49.7克碳酸钠，在

100度时100克水中可以溶解45.5克碳酸钠。NaOH溶液的浓度根据待

测液的酸碱度而定。

6、二硝基酚指示剂：0.2克2，6-二硝基酚或2，4-二硝基酚（C6H3OH(NO2)2）

溶于100毫升水中。

（2）标准曲线的制作：

按下表分别吸取一定量的标准溶液【P＝10 mg L-1】到50 ml容量瓶中，加入1滴二硝基酚指示剂，用饱和碳酸钠溶液和1mol L-1硫酸调节溶液呈浅黄色，加入显色剂（现配）5.0 ml，加水约至30 ml，在温度为20-40度下还原显色

（3）试验步骤

吸取水样各10ml于25ml具塞比色管中，加入1滴二硝基酚指示剂，用饱和碳酸钠溶液和1mol L-1硫酸调节溶液呈浅黄色，加入显色剂（现配）

2.5ml，加水至25ml刻度后摇匀，在温度为20-40度下还原显色30分钟，

在700nm波长处，用b=1cm的玻璃比色皿比色。

六、生物有效磷的测定（BAP）

（1）试剂配制

1、0.11M NaOH：称取4.4克NaOH溶解于1000 ml水中定容。

2、其它试剂如前面测定水样中磷酸根含量。

（2）操作步骤

20 ml 未过滤的地表径流样品+ 180 ml 0.1M NaOH 定容到200 ml振荡17小时过滤，测定得BAP(以下步骤同溶解性活性磷)。BPP=BAP-SP。

水样中各种形态的磷之间的关系

总磷（total phosphorus, TP）：未过滤样品用碱性过硫酸钾氧化－紫外分光光度法测定所测定的磷。

溶解态总磷(soluble total phosphorus, STP)：过滤后样品用碱性过硫酸钾氧化－紫外分光光度法测定所测定的磷。

颗粒态磷(particulate phosphorus, PP)：PP=TP - SRP, PP= TP－STP

溶解态磷，活性磷，溶解态活性磷(soluble phosphorus, SP; soluble reactive phosphorus, SRP)：用0.45μm滤膜过滤后的水样直接用钼锑抗方法测定的磷。

生物有效颗粒态磷(bioavailable particulate phosphorus, BPP)：径流液颗粒物中以及被吸附在颗粒物表面的无机磷和有机磷，这部分磷可能被生物吸收利用。BPP=BAP-SP

生物有效磷（bioavailable phosphorus, BAP）：径流液中可以被生物利用的磷。BAP= SRP + BPP。

土壤样品

一、全氮的测定：开氏消煮－半微量滴定法

二、铵态氮的测定：KCl浸提（20克土：100 ml KCl）－靛酚兰比色法

三、硝态氮的测定：水浸提（5克土：25ml水，0.1克硫酸钙，振荡半小时）－双波长比色法

四、全磷的测定：浓硫酸、髙氯酸－钼锑抗比色法

五、速效磷的测定：Olsen-P测定方法

六、水溶性磷：H2O-P

七、CaCl2-P

八、Mehlich 3-P

九、PSI, DPS