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分子生物学复习资料

分子生物学复习资料
分子生物学复习资料

分子生物学理论资料

1. 结构基因的编码产物不包括(C)

A、snRNA

B、hnRNA

C、启动子

D、转录因子

E、核酶

2. 已知双链DNA的结构基因中,有义链的部分序列是5'AGGCTGACC3',其编码的RNA 相应序列是(C)

A、5'AGGCTGACC3'

B、5'UCCGACUGG3'

C、5'AGGCUGACC3'

D、5'GGUCAGCCU3'

E、5'CCAGUCGGA3'

3. 已知某 mRNA的部分密码子的编号如下(A):

127 128 129 130 131 132 133

GCG UAG CUC UAA CGG UGA AGC

以此mRNA为模板,经翻译生成多肽链含有的氨基酸数目为

A、127

B、128

C、129

D、130

E、131

4. 一般来说,真核生物基因的特点是(D)

A、编码区连续

B、多顺反子RNA

C、内含子不转录

D、断裂基因

E、外显子数目=内含子数目-1

5. 关于外显子说法正确的是(E)

A、外显子的数量是描述基因结构的重要特征

B、外显子转录后的序列出现在hnRNA中

C、外显子转录后的序列出现在成熟mRNA

D、外显子的遗传信息可以转换为蛋白质的序列信息

E、以上都对

6. 断裂基因的叙述正确的是(B)

A、结构基因中的DNA序列是断裂的

B、外显子与内含子的划分不是绝对的

C、转录产物无需剪接加工

D、全部结构基因序列均保留在成熟的mRNA分子中

E、原核和真核生物基因的共同结构特点

7. 原核生物的基因大多与(A)无关。

A、内含子

B、操纵子

C、启动子

D、起始密码子

E、终止子

8. 关于启动子叙述错误的是(D)

A、原核和真核生物均有

B、调控转录起始

C、与RNA聚合酶结合

D、都能被转录

E、位于转录起始点附近

9. 顺式作用元件的本质是(B)

A、蛋白质

B、DNA

C、mRNA

D、rRNA

E、tRNA

10. 关于真核生物的启动子,正确的说法是(B)

A、与RNA聚合酶的ζ因子结合

B、tRNA基因的启动子序列可以被转录

C、都位于转录起始点上游

D、II类启动子调控rRNA编码基因的转录

E、起始转录不需要转录因子参与

11. 原核生物的启动子(B)

A、根据所调控基因的不同分为I、II、III类

B、与RNA聚合酶全酶中的ζ因子结合

C、不具有方向性

D、涉及转录因子-DNA的相互作用

E、涉及不同转录因子之间的相互作用

12. 真核生物的启动子不能控制哪个基因的转录(D)

A、snRNA

B、hnRNA

C、5S rRNA

D、16S rRNA

E、U6 snRNA

13. 增强子是(C)

A、一段可转录的DNA序列

B、一段可翻译的mRNA序列

C、一段具有转录调控作用的DNA序列

D、一段具有翻译调控作用的mRNA序列

E、一种具有调节作用的蛋白质因子

14. poly(A)加尾信号存在于(B)

A、真核I类结构基因及其调控序列

B、真核II类结构基因及其调控序列

C、真核III类结构基因及其调控序列

D、调节基因

E、操纵基因

15. 有关mRNA的叙述正确的是(C)

A、hnRNA中只含有基因编码区转录的序列

B、在3′端具有SD序列

C、mRNA的遗传密码阅读方向是5′→3′

D、在细胞内总RNA含量中所占比例最大

E、mRNA碱基序列与DNA双链中的反义链一致

16. 关于开放读框叙述正确的是(A)

A、是mRNA的组成部分

B、内部有间隔序列

C、真核生物的开放读框往往串联在一起

D、内部靠近5′端含有翻译起始调控序列

E、由三联体反密码子连续排列而成

17. 关于帽子结构说法错误的的是(E)

A、真核生物mRNA的特点

B、位于5'端

C、与翻译起始有关

D、常含有甲基化修饰

E、形成3',5'-磷酸二酯键

18. 真核细胞mRNA的合成不涉及(A)

A、生成较多的稀有碱基

B、3'端加poly(A)尾巴

C、5'端加帽子

D、去除非结构信息部分

E、选择性剪接

19. 有关遗传密码的叙述正确的是(B)

A、一个碱基的取代一定造成它所决定的氨基酸的改变

B、终止密码子是UAA、UAG和UGA

C、连续插入三个碱基会引起密码子移位

D、遗传密码存在于tRNA中

E、真核生物的起始密码编码甲酰化蛋氨酸

20. 密码子是哪一水平的概念(D)

A、DNA

B、rRNA

C、tRNA

D、mRNA

E、snRNA

21. 不能编码氨基酸的密码子是(A)

A、UAG

B、AUG

C、UUG

D、GUG

E、UGC

20. 遗传密码的摆动性常发生在(A)

A、反密码子的第1位碱基

B、反密码子的第2位碱基

C、反密码子的第3位碱基

D、A+C

E、A+B+C

21. tRNA携带活化的氨基酸的部位是(E)

A、反密码环

B、TφC环

C、DHU环

D、额外环

E、CCA

22. 哺乳动物核糖体大亚基的沉降常数是(D)

A、30S

B、40S

C、50S

D、60S

E、70S

23. 信号识别颗粒的成分包括(B)

A、snRNA

B、7SL RNA

C、snRNP

D、SRP受体

E、ribozyme

24. 关于核酶叙述正确的是(A)

A、化学本质是RNA

B、分为DNA酶和RNA酶

C、属于核酸酶

D、底物只能是DNA

E、由核酸和蛋白质组成

25. 下列哪种物质不是核酸与蛋白质的复合物(D)

A、核糖体

B、snRNP

C、SRP

D、核酶

E、端粒酶

26. 哪种情况会导致移码突变( C)

A、倒位

B、颠换

C、插入一个碱基

D、连续缺失三个碱基

E、以上都不对

27. 原核生物的基因组主要存在于(C)

A、质粒

B、线粒体

C、类核

D、核糖体

E、高尔基体

28. 真核生物染色质的基本结构单位是(B)

A、α-螺旋

B、核小体

C、质粒

D、β-片层

E、结构域

29. 关于真核生物结构基因的转录,正确的说法是(B)

A、产物多为多顺反子RNA

B、产物多为单顺反子RNA

C、不连续转录

D、对称转录

E、新生链延伸方向为3′→5′

30. 下列有关真核生物结构基因的说法不正确的是(B)

A、结构基因大都为断裂基因

B、结构基因的转录是不连续的

C、含大量的重复序列

D、结构基因在基因组中所占比例较小

E、产物多为单顺反子RNA

31. 染色体中遗传物质的主要化学成分是(C)

A、组蛋白

B、非组蛋白

C、DNA

D、RNA

E、mRNA

32. 大肠杆菌DNA的复制(C)

A、为单起点单向复制

B、为双起点单向复制

C、为单起点双向复制

D、为多起点双向复制

E、为双起点双向复制

33. 合成冈崎片段不需要(E)

A、dNTP

B、NTP

C、引物酶

D、DNA聚合酶

E、DNA连接酶

34. DNA复制时,模板序列是5'-TAGA-3',将合成下列哪种互补结构(A)

A、5'-TCTA-3'

B、5'-ATCA-3'

C、5'-UCUA-3'

D、5'-GCGA-3'

E、5'-AGAT-3'

35. DNA是以哪种链进行复制的(B)

A、冈崎片段

B、两条亲代链

C、前导链

D、随后链

E、以上都不是

36. DNA半保留复制时需要(B)

A、DNA指导的RNA聚合酶

B、引发酶

C、延长因子

D、终止因子

E、mRNA

37. DNA半保留复制不涉及(D)

A、冈崎片段

B、引物酶

C、DNA聚合酶

D、氨基酰tRNA合成酶

E、DNA连接酶

38. 复制叉前进时,其前方的DNA双螺旋会形成哪种结构(B)

A、负超螺旋

B、正超螺旋

C、右手螺旋

D、左手螺旋

E、松弛状态

39. 大肠杆菌DNA聚合酶Ⅲ的核心酶含有的亚基是 (C)

A、α、β、γ

B、α、β、δ

C、α、ε、θ

D、α、γ、ε

E、β、γ、ε

40. 大肠杆菌DNA聚合酶的哪个亚基可以形成滑卡式结构(B)

A、α

B、β

C、γ

D、δ

E、ε

41. 逆转录病毒基因组复制时所用的引物为(C)

A、RNA

B、DNA

C、tRNA

D、mRAN

E、不用引物

42. 复制起点富含哪种碱基时易被与复制有关的酶和蛋白质识别(B)

A、GC

B、AT

C、AG

D、CT

E、TG

43. 若使15N标记的大肠杆菌在14N培养基中生长2代,提取DNA,则14N-15N杂合DNA分子

与14N-DNA分子之比为(A)

A、1:1

B、1:2

C、1:3

D、2:1

E、3:1

44. 下列哪种紫外线最易造成DNA损伤(D)

A、400—350nm

B、350—320nm

C、320—290nm

D、290—100nm

E、以上都不是

43. 致DNA损伤因素的作用靶点有(E)

A、嘌呤碱

B、嘧啶碱

C、脱氧核糖

D、磷酸二酯键

E、以上都是

44. 最严重的DNA损伤是(C)

A、错配

B、碱基置换

C、DNA双链断裂

D、DNA交联

E、移码突变

45. E.coli的RNA聚合酶中,辨认转录起始点的组分是(B)

A、核心酶

B、ζ

C、α

D、β

E、β'

46. 真核生物中,RNA聚合酶Ⅱ的转录产物是(E)

A、45S rRNA

B、5S rRNA

C、tRNA

D、U6 snRNA

E、hnRNA

47. 真核生物Ⅱ类基因的启动子核心序列通常位于(A)

A、—25区

B、—10区

C、—35区

D、+1区

E、+10区

48. 下列物质中,能够辅助真核生物的RNA聚合酶结合启动子的是(C)

A、起始因子

B、增强子

C、转录因子

D、延长因子

E、ζ因子

49. 下列哪种物质不需要进行转录后加工即可发挥功能(A)

A、E.coli mRNA

B、E.coli tRNA

C、E.coli rRNA

D、yeast mRNA

E、yeast tRNA

50. RNA编辑发生在(C)

A、成熟的mRNA

B、tRNA和rRNA的前体

C、hnRNA

D、成熟的tRNA和rRNA

E、snRNA

51. 蛋白质的生物合成不需要(B)

A、RAN

B、剪切因子

C、分子伴侣

D、帽子结合蛋白

E、GTP

52. 原核生物的核糖体大亚基是(C)

A、30S

B、40S

C、50S

D、60S

E、70S

53. 真核生物参与蛋白质合成的起始因子有几种(E)

A、1

B、2

C、3

D、4

E、>5

54. 原核生物的翻译起始阶段,帮助fMet-tRNA结合AUG的是(A)

A、IF-2

B、IF-1

C、eIF-2

D、eIF-3

E、eIF-4

55. SD序列与下列哪种rRNA相互作用(C)

A、5S

B、23S

C、16S

D、5.8S

E、18S

56. 原核生物肽链合成的延长阶段,使氨基酰-tRNA进入A位的蛋白质因子是(C)

A、EF-1

B、EF-2

C、EF-Tu

D、EF-G

E、转肽酶

57. 乳糖操纵子中,能结合异乳糖(诱导剂)的物质是(C)

A、AraC

B、cAMP

C、阻遏蛋白

D、转录因子

E、CAP

58. 下列哪项不属于真核生物基因的顺式作用元件(B)

A、激素反应元件

B、衰减子

C、启动子

D、沉默子

E、增强子

59. 与RNA聚合酶相识别和结合的DNA片段是(E)

A、增强子

B、衰减子

C、沉默子

D、操纵子

E、启动子

60. 下列哪一项不是转录的原料(A)

A、TTP

B、ATP

C、CTP

D、UTP

E、GTP

61. 转录生成的RNA链中有(E)

A、dAMP

B、CTP

C、UDP

D、dTTP

E、UMP

62. 在复制和转录中均起作用的是(E)

A、RNA引物

B、DNA聚合酶

C、NMP

D、dNTP

E、蛋白质因子

63. 转录时模板与产物之间不存在的碱基对应关系是(A)

A、A→T

B、T→A

C、A→ U

D、C→ G

E、G→C

64. 真核生物的细胞核RNA聚合酶有几种(C)

A、1

B、2

C、3

D、4

E、5

65. 原核生物的RNA聚合酶有几种(A)

A、1

B、2

C、3

D、4

E、5

66. 抗结核菌药物利福平的作用靶点是RNA聚合酶的(B)

A、α亚基

B、β亚基

C、β′亚基

D、ζ亚基

E、不固定在哪一个亚基上

67. 原核生物mRNA的SD序列可以结合哪种核糖体组分(A)

A、30S亚基

B、40S亚基

C、50S亚基

D、60S亚基

E、以上都不对

68. 在翻译起始阶段发挥作用的蛋白质因子是(A)

A、IF

B、EF

C、RF

D、转肽酶

69. 原核生物中,某种代谢途径相关的几种酶类往往通过何种机制进行协调表达(B)

A、顺反子

B、操纵子

C、转录因子

D、衰减子

70. 细菌优先利用葡萄糖作为碳源,葡萄糖耗尽后才会诱导产生代谢其他糖的酶类,这种现象称为(E)

A、衰减作用

B、阻遏作用

C、诱导作用

D、协调调节作用

E、分解代谢物阻遏作用

71.大肠杆菌的乳糖操纵子模型中,与Operator结合而调控转录的是(A)

A、阻遏蛋白

B、RNA聚合酶

C、调节基因

D、cAMP-CAP

E、启动子

72. 翻译终止阶段,新生多肽链的释放涉及哪种化学键的断裂(E)

A、肽键

B、磷酸二酯键

C、氢键

D、疏水键

E、酯键

名词解释

1. 基因表达: 遗传信息从DNA传递给RNA——转录,再从RNA传递给蛋白质——翻译,使得遗传信息通过蛋白质来发挥生物学功能、表现生物学性状,这个过程称为基因表达。

2. 不对称转录: 在双链DNA的某一区域,一条链被用作模板链来指导转录,另一条链则不转录;对不同的DNA区域来说,模板链并非总是同一条链,这被称为不对称转录。

3. 管家基因: 在所有组织细胞中始终表达的基因,其功能对维持生命活动来说是必不可少的。

4. 顺式作用元件: 顺式作用元件(cis-acting element)指与被调控的目标DNA位于同一染色体上的特定DNA序列,是反式作用因子的结合位点,它们通过与反式作用因子。顺式作用元件本身不编码任何蛋白质,仅仅提供一个作用位点,要与反式作用因子结合而调控基因转录的精确起始和转录效率。

5. 反式作用因子:某些调控因子通过扩散结合于细胞内的多个目标DNA 序列,发生突变后将同时影响不同染色体上等位基因的表达,这样的调控因子称为反式作用因子,其化学本质一般为蛋白质,少数为RNA。

6. RNA 编辑: 指基因转录产生的mRNA 编码区中核苷酸序列发生缺失、插入或置换,导致其序列与其基因编码链序列不同的现象。

7. RNA 反式剪接:从不同DNA 分子转录得到的RNA 经过加工,将外显子连接形成成熟的RNA 分子,这个过程称为RNA 反式剪接。

8. 增色效应:变性时DNA 的双链解开,有序的碱基排列被打乱,增加了对光的吸收,因此变性后DNA 溶液的紫外吸收作用增强,此现象称为增色效应。

9. 减色效应:变性DNA 分子复性形成双螺旋结构时其紫外吸收降低的现象称为减色效应。核酸分子杂交:复性时,不同来源的DNA 之间或DNA 与RNA 之间的互补碱基序列可形成杂交双链DNA DNA-RNA。

10. 基因组:生物体或细胞中一套完整的单倍体遗传物质的总和。

11. 分子伴侣: 是一类在序列上没有相关性但有共同功能的蛋白质,它们在细胞内帮助其他含多肽的结构完成正确的组装,而且在组装完毕后与之分离,不构成这些蛋白质结构执行功能时的组份。12. 核酸的复性: 变性DNA 在适当条件下,两条互补链全部或部分恢复到天然双螺旋结构的现象称为复性。

13.反义RNA:许多小分子调控RNA 能与不同的mRNA 结合,在翻译水平上起调控作用,这些小分子RNA 被称为反义RNA。

14. 启动子:启动子是DNA 中一段特定的核苷酸序列,这段核苷酸序列是RNA 聚合酶在转录起始时对模板DNA 的识别部位和结合部位,是转录过程能否起始的决定部位,其本身不转录

15. 熔解温度: 当50% 的DNA 变性时的温度称为该DNA 的解链温度,即增色效应达到一半时的温度。

17. 基因家族: 基因家族是真核生物基因组中来源相同、结构相似、功能相关的一组基因。

18. 卫星DNA: 有些高度重复DNA 序列的碱基组成和浮力密度与主体DNA 有区别,在浮力密度梯度离心时,可形成不同于主DNA 带的卫星带,称为卫星DNA。

19. 跨越合成: 由特殊的DNA 聚合酶取代停留在损伤位点上的催化复制的DNA 聚合酶,在子链上(模板链上损伤碱基的对面)随机插入核苷酸(正确或错误的),以实现对损伤位点无错或易错的修复。。20. 假基因: 有些基因核苷酸序列与相应的正常功能基因基本相同,但却不能合成出功能蛋白质,这些失活基因称为假基因。

21. 蛋白质拼接: 指将一条多肽链内部的一段氨基酸序列切除,同时将两端的序列连接在一起的后加工方式。

22.端粒酶: 是一种反转录酶,能以自身RNA 为模板,不断合成新的端粒DNA 序列添加到染色体末端,弥补端粒丢失阻止端粒缩短,并可能使得细胞最终逃脱程序性死亡,获得无限增殖能力,即永生化。

23. RNA 剪接: 断裂基因在表达时首先转录成初级转录产物,即前体mRNA;然后经过加工,除去无关的DNA 内含子序列的转录物,形成成熟的mRNA 分子,这种删除内含子、连接外显子的过程,称为RNA 拼接或剪接。

24. SD 序列:原核生物mRNA 的5’端有一段富含嘌呤的序列,由4~5 个碱基组成,可与16S rRNA 的3’端反SD 序列互补配对,便于核糖体识别起始密码子。

25. 同源重组:也称一般性重组,是在两个DNA 分子的同源序列间直接进行交换的一种重组形式。

26.核酸的变性: 核酸在化学、物理因素的影响下,维持核酸双螺旋结构的氢键和碱基堆积力受到破坏,分子由稳定的双螺旋结构松解为无规则线性结构甚至解旋成单链的现象,称为核酸的变性。27. 转座因子: 指可以从染色体基因组上的一个位置转移到另一个位置,甚至在不同染色体

之间跃迁的DNA 序列。

28. 同义突变:突变的密码子编码与原来相同的氨基酸,突变蛋白的结构和功能不发生变化,因此称为同义突变。

29. C 值:一个单倍体基因组的全部DNA 含量总是恒定的,这是物种的一个特征,通常称为该物种的C 值

30. C 值矛盾:指生物体DNA 含量的反常现象,具体包括:C 值并非总是随生物进化等级的提高而增加,亲缘关系相近的生物物种C 值差异巨大,真核生物DNA 的含量远远超过编码蛋白质的需求量。

31. 冈崎片段: 在DNA 的复制过程中,由于滞后链的不连续复制而产生的短的核苷酸片段,称为冈崎片段。

32. 信号肽:一段在一级结构上连续的氨基酸序列,通常有15~60 个氨基酸残基,引导蛋白质分拣。

33. 严谨反应: 细菌在饥饿条件下生长,特别是缺乏氨基酸时,将关闭大部分的代谢活动,主要表现是rRNA 和tRNA 合成大量减少,而蛋白质降解的速度增加,此现象称为严谨反应。

34. 切除修复:先切除DNA 中受损的碱基或核苷酸,重新合成正常的核苷酸,再经连接酶重新连接,前后经历识别、切除、重新合成和重新连接四步,由于不需可见光激活,也叫暗修复。

35. 重组修复: 利用同源重组的方法将DNA 模板进行交换以克服损伤对复制的障碍,而随后的复制仍然使用细胞内高保真的聚合酶,在DNA 损伤未被切除或修复的情况下使细胞恢复DNA复制,等到复制完成后再通过其他机理修复残留的损伤。

36. 错配修复: 是在含有错配碱基的DNA 分子中,使正常核苷酸序列恢复的修复方式;主要用来纠正DNA 双螺旋上错配的碱基对,还能修复一些因复制打滑而产生的小于4nt 的核苷酸插入或缺失。

37. SOS 反应:细胞受到致死性威胁,DNA 受到严重损伤时,做出的有利于细胞生存、但以突变为代价的反应,包括易错的DNA 跨损伤合成、细胞丝状化(细胞伸长,但不分裂)和切除修复系统的激活,其中涉及到超过40 个与DNA 损伤修复、复制、突变相关基因的表达。

38. 极性效应: IS 能从DNA 的一个位点插入到另一个位点,导致靶位点基因以及和靶位点基因在同一个操纵子内,但位于靶位点基因下游的基因表达受阻,此现象称为极性效应。

39. 操纵子: 指原核生物数个功能相关的结构基因串联在一起,连同其上游的调控区(包括启动子和操纵基因)以及下游的转录终止信号所构成的基因表达单位,所转录的 RNA 为多顺反子。

40. 分解代谢物阻遏效应: 葡萄糖的某些降解产物抑制利用其他糖类的酶的合成,这种效应称之为分解代谢物阻遏效应。

41.半保留复制由亲代DNA 生成子代DNA 时,每个新形成的子代DNA 中,一条链来自亲代DNA,而另一条链则是新合成的,这种复制方式称半保留复制。

42. 有义链: 与mRNA 序列相同的那条DNA 链称为编码链或称有义链。

43. 反义链:把根据碱基互补原则指导mRNA 合成的DNA 链称为模板链或反义链。

44.无义突变:由于碱基对的取代,使原来可以编码某种氨基酸的密码子变成了终止密码子,导致肽链合成提前结束,此种突变称为无义突变。

45. 错义突变:DNA 分子中碱基对的取代,使得mRNA 的某一密码子发生变化,由它所编码的氨基酸就变成另一种的氨基酸,使得多肽链中的氨基酸序列也相应的发生改变,此种突变称为错义突变。

46. 核酶:是一种可以催化RNA 切割和RNA 剪接反应的由RNA 组成的酶,可以作为基因表达和病毒复制的抑制剂。

47. 密码子简并性: 大多数氨基酸都存在几个密码,由几种密码子编码同一个氨基酸的现象称为密码子的简并性。

48. 同义突变:碱基对的取代并不都是引起错义突变和翻译终止,有时虽然有碱基被取代,但在蛋白质水平上没有引起变化,氨基酸没有被取代,这是因为突变后的密码子和原来的密码子代表同一个氨基酸。

填空题

1. DNA与RNA在组成成分上的基本区别包括,DNA含有(脱氧核糖)、(含氮碱基)、(磷酸),而RNA 含有(核糖)、(含氮碱基)、(磷酸)。DNA的含氮碱基包括(A)、(T)、(G)、(C),而RNA的含氮碱基包括(A)、(U)、(G)、(C)。

2. 细胞中的RNA主要包括(tRNA)、(mRNA)、(rRNA)三种,其中(rRNA)的含量最高。作为蛋白质合成模板的是( mRNA ),负责将氨基酸运到合成场所的是(tRNA ),参与组成核糖体的是(rRNA )。

3. 病毒根据核酸类型可分为(DNA)病毒和(RNA)病毒。

4. 基因表达的主要产物为(RNA)、(蛋白质)。

5. 在真核生物生殖细胞中,端粒长度(保持不变 );而在体细胞中,端粒长度随细胞分裂而

(逐步缩短)。

6.DNA 聚合酶合成DNA 的方向是(5'→3')。RNA 聚合酶合成RNA 的方向是(5'→3')。

7. 原核生物RNA 聚合酶全酶比核心酶多了一个(ζ)亚基,该亚基在RNA 延伸时掉落。

8. 根据对(α-鹅膏蕈碱 )的敏感性差别,真核生物RNA 聚合酶被分为三类。mRNA 由( RNA 聚合酶II)催化合成,rRNA 由 (RNA 聚合酶I) 催化合成,tRNA 和5S rRNA 由(RNA 聚合酶III) 催化合成。

9. 在翻译肽链时,氨酰-tRNA 合成酶将(氨基酸)连接到( tRNA) 3'末端的CCA, (mRNA)中的密码子与( tRNA )中的反密码子识别,决定在新生肽链中加上哪个氨基酸。

10. 当细菌处于饥饿条件下,大部分代谢过程被关闭,积累两种特殊的核苷酸: (ppGpp)、(pppGpp ),这两种核苷酸称为魔斑。

11. DNA 复制时,解链酶等先将DNA 的一段双链解开,形成( 复制点 ),形状像一个叉子,故称为(复制叉)。

12. 发生无义突变时,原来可以翻译某种氨基酸的密码子变成了( 终止密码子 )。发生同义突变时,碱基对的取代并未引起蛋白质序列的变化,这是因为突变后的(密码子)和原来的(密码子 )代表同一个(氨基酸)。

13. 在发生错义突变时,如果氨基酸的替换并不影响蛋白质的功能,这种突变也称为(中性突变)。

14. DNA 在变性时,两条链之间的( 氢键)断裂,而( 共价键)不受影响。

15. DNA 双螺旋中(脱氧核糖)和(磷酸)通过(3',5'-磷酸二酯键)连接形成双螺旋链的骨架,(碱基)位于双螺旋内部。维持双螺旋稳定性的主要因素包括: (碱基对之间的氢键)、(碱基堆积力)、(正负电荷的作用)。

16. 真核生物RNA 聚合酶I 位于(核仁 ), 转录生成(rRNA);RNA 聚合酶II 位于(核质),转录合成(mRNA);RNA 聚合酶III 位于(核质), 转录合成(tRNA)。

17. 真核生物断裂基因由( 外显子)和(内含子)间隔排列组成。在转录mRNA 时,将( 内含子 )去除,同时将(外显子 )连接起来形成成熟的RNA 分子,此过程称为RNA 剪接。

18. 原核生物起始tRNA 携带(甲酰甲硫氨酸),真核生物起始tRNA 携带(甲硫氨酸)。

19. 原核生物启动子的核心区域为(-35 区)、(-10 区 )和(转录起始位点)。

20. 原核生物一条mRNA 上携带有多个基因的信息,即以(多顺反子)的形式存在。而真核生物mRNA 往往只携带一个基因的信息,即(单顺反子)。

21. 核酸探针是能识别特异碱基顺序的带有标记的一段(DNA)或(RNA)分子。

22. 与原核生物mRNA 相比,真核生物mRNA 在5'端有( 帽子 ),在3'端有(Poly A 尾巴)。

简答题

1. 简述RNA 转录的概念及其基本过程。

答:RNA 的转录是以DNA 中的一条单链为模板,游离碱基为原料,拷贝出一条与另一条单链(即编码链)序列完全相同(除了T—U 之外)的RNA 单链的过程,是基因表达的核心步骤。

基本过程包括:

a. 模板的识别:RNA 聚合酶与启动子DNA 双链相互作用并与之相结合。

b. 转录起始:启动子附近的DNA 双链解旋并解链,形成转录泡以促使底物核糖核苷酸与模板DNA 的碱基配对,RNA 链上第一个核苷酸键的产生。

c. 转录延伸:RNA 聚合酶释放ζ因子离开启动子后,核心酶沿模版DNA 链移动并使新生的RNA 链不断伸长。

d. 转录终止:当RNA 链延伸到转录终止位点时,RNA 聚合酶不再形成新的磷酸二酯键,RNA—DNA 杂合物分离,转录泡瓦解,DNA 恢复成双链状态,而RNA 聚合酶和RNA链都被从模板上释放出来,转录完成。

2. 遗遗传密码有哪些特性?

答:a.遗传密码的连续性,密码间无间断也没有重叠,即起始密码子决定了所有后续密码子的位置。

b.遗传密码的简并性,即同一个氨基酸可能由一种以上密码子编码。

c.遗传密码的通用性和特殊性,无论是体内还是体外,也无论是对病毒、细菌、动物还是植物而言,遗传密码都是通用的;但是某些密码子在不同生物中有着相对特殊的作用。

d.遗传密码子与反密码子的相互作用,在蛋白质生物合成过程中,tRNA 的反密码子在核糖体内是通过碱基的反向配对与mRNA 上的密码子相互作用的。

3. 原核生物、真核生物的基因组各有何特点?

原核基因组的特点:

①为一条环状双链 DNA;②只有一个复制起点;

③具有操纵子结构;④绝大部分为单拷贝;

⑤可表达基因约 50%,大于真核生物小于病毒;

⑥基因一般是连续的,无内含子;⑦重复序列很少。

真核基因组的特点:

①真核生物基因组远大于原核生物基因组,结构复杂,基因数庞大,具有多个复制起点;

②基因组 DNA 与蛋白质结合成染色体,储存于细胞核内;

③真核基因为单顺反子,而细菌和病毒的结构基因多为多顺反子;

④基因组中非编码区多于编码区;

⑤真核基因多为不连续的断裂基因,由外显子和内含子镶嵌而成;

⑥存在大量的重复序列;

⑦功能相关的基因构成各种基因家族;

⑧存在可移动的遗传因素;

⑨体细胞为双倍体,而精子和卵子为单倍体。

4.生物体有哪些修复DNA 损伤的机制?写出其基本特征。举例说明DNA 损伤修复与人体疾病的关系。

a.生物体消除各种DNA 分子损伤的机制有光修复、切除修复、重组修复、SOS 反应等。

光修复是在蓝光的诱导下,由修复酶切除TT 二聚体,在复制前完成修复。

b.切除修复不需要光的诱导,切除损伤部位后,重新合成被切掉的部分,在复制前完成修复。

以上两种修复都是避免差错的修复。

c.重组修复通过链的重组置换,拆东墙,补西墙,完成修复,但损伤部位仍保留,所以是引起差错

的修复。

SOS 反应是细胞DNA 受到损伤或复制系统受到抑制后的紧急情况下,细胞为求生存而产生的一系列应急措施。SOS 反应包括诱导产生的避免差错的修复和易错修复,即可诱导上述三种修复,此外还可诱导产生缺乏校对功能的DNA 聚合酶,在不与模板碱基互补配对的情况下合成DNA,完成复制,以保

证细胞的存活,同时也导致了高突变率。DNA 损伤修复机制如果有缺陷,可导致人体出现疾病。比如,抑癌基因Brca1 的蛋白质产物参与重组修复、核苷酸切除修复,若有基因缺陷则患乳腺癌和卵巢癌风险显著增加。好莱坞女星安吉丽娜·朱莉因为携带Brca1 基因缺陷,为了预防癌症,先后切除了乳腺、卵巢、输卵管。

5. 根据DNA 序列复性动力学特征,真核生物基因组序列可分为哪几种类型?各有何特征?

快复性组分(第一相),高度重复序列;

中度复性组分(第二相),中度重复序列;

慢复性组分(第三相),单一序列。

单一序列(单拷贝序列,single copy sequences):又称非重复序列,一个基因组中只有一个拷贝。慢复性速度,单一序列的复性曲线常只有一个拐点,而重复序列常有多个拐点。结构基因 (蛋白质基因)大多是单拷贝序列。

中度重复序列:复性速度介于单一序列和高度重复序列之间。有十个到几百个拷贝,一般是非编码序列,在基因调控中起重要作用,如人的Alu 序列家族。

高度重复序列:复性速度最快。有几百到几百万个拷贝,如rRNA 基因和某些tRNA基因。

6、DNA 复制和转录有何异同?

相同点:DNA 作为模板,遵循碱基配对规律,生成磷酸二酯键,链延长方向5'→3'。

不同点:

7. 真核细胞细胞核中的RNA 聚合酶有哪几类?各有何功能?

RNA 聚合酶I 位于核仁,催化合成rRNA。

RNA 聚合酶II 位于核质,催化合成mRNA。

RNA 聚合酶III 位于核质,催化合成小分子RNA,如tRNA、5S rRNA 等。

8、原核生物和真核生物的mRNA 结构有什么区别?绘出示意图。

答:

原核生物的mRNA 一般是含有多个ORF 的多顺反子mRNA。ORF 前是核糖体结合位点(RBS),RBS 中含有SD 序列,能被核糖体识别结合,并起始翻译。

真核生物mRNA 通常是只有一个ORF 的单顺反子,只编码一种蛋白质。

9. 简述中心法则的内容,并绘出示意图。

DNA 可作为模板复制,DNA 可作为模板转录出RNA,也可以RNA 为模板逆转录生

成DNA。RNA 可以作为模板复制,RNA 可作为模板翻译出蛋白质。

药学分子生物学题库

前四章 1.tRNA分子结构特征为(C) A.有密码环 B.3’端有多聚A C.有反密码环 D.3’端有C-C-U E.以上都不正确 2.关于2.原核生物启动子结构中,描述正确的是(C) A. –25bp处有Hogness盒 B.–10bp处有GC盒 C. –10bp处有Pribnow盒 D. –35bp处有CAA T盒 E.以上都不正确 3.关于蛋白质生物合成时肽链延伸,叙述不正确是(D ) A.核蛋白体沿着mRNA每移动一个密码子距离,合成一个肽键’ B.受大亚基上转肽酶的催化 C.活化的氨基酸进入大亚基A位

D .肽链延伸方向为C端→N端 E.以上都不正确 4.摆动配对是指( A ) A .反密码的第1位碱基 B.反密码的第2位碱 C.反密码的第3位碱基 D.密码的第1位碱基 E.以上都不正确 5.人类基因组大小(bp)为( B ) A. 3.5×108 B. 3.0×109 C. 2.0 ×109 D. 2.5×109 E.以上都不正确 6.以下有关转录叙述,错误的是(C ) A .DNA双链中指导RNA合成的链是模板链 B .DNA双链中不指导RNA合成的链是编码链 C.能转录RNA的DNA序列称为结构基因 D.染色体DNA双链仅一条链可转录 E.以上都不正确 7.与CAP位点结合的物质是(C )

A.RNA聚合酶 B.操纵子 C.分解(代谢)物基因激活蛋白 D.阻遏蛋白 E.以上都不正确 8.目前认为基因表达调控的主要环节是(C) A.基因活化 B.转录起始 C.转录后加工 D.翻译起始 E.以上都不正确 9.顺式作用元件是指(A ) A.基因的5’侧翼序列 B.基因的3’侧翼序列 C.基因的5’、3’侧翼序列D基因的5’、3’侧翼序列以外的序列 E.以上都不正确 10.反式作用因子是指(b)

分子生物学实验指导(精)

分子生物学实验指导 生物技术教学室编 宁夏大学生命科学学院 2008年8月

实验一分子生物学实验技术多媒体演示 [目的要求] 通过多媒体试验录像进一步掌握分子生物学基本操作技术。 [教学方式] 多媒体光盘演示。 [实验内容] 基本的分子生物学实验操作技术包括核酸凝胶电泳技术;质粒提取;转化;重组体的筛选;PCR技术等。

实验二琼脂糖凝胶电泳检测DNA [目的要求] 通过本实验学习琼脂糖凝胶电泳检测DNA的方法和技术 [实验原理] 琼脂糖凝胶电泳是分离鉴定和纯化DNA片段的常用方法。DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应,DNA分子在高于等电点的pH溶液中带负电荷,在电场中向正极移动。由于糖磷酸骨架在结构上的重复性质,相同数量的双链DNA几乎具有等量的净电荷,因此它们能以同样的速度向正极方向移动。不同浓度琼脂糖凝胶可以分离从200bp至50 kb的DNA片段。在琼脂糖溶液中加入低浓度的溴化乙锭(Ethidum bromide ,EB),在紫外光下可以检出 10ng的DNA条带,在电场中,pH8.0条件下,凝胶中带负电荷的DNA向阳极迁移。 琼脂糖凝胶有如下特点: (1) DNA的分子大小在凝胶基质中其迁移速率与碱基对数目的常用对数值成反比,分子越大迁移得越慢。 (2) 琼脂糖浓度一个特定大小的线形DNA分子,其迁移速度在不同浓度的琼脂糖凝胶中各不相同。DNA电泳迁移率(u)的对数与凝胶浓度(t)成线性关系。 (3) 电压低电压时,线状DNA片段迁移速率与所加电压成正比。但是随着电场强度的增加,不同分子量DNA片段的迁移率将以不同的幅度增长,随着电压的增加,琼脂糖凝胶的有效分离范围将缩小。要使大于2kb的DNA片段的分辨率达到最大,所加电压不得超过5v/cm。 (4) 电泳温度DNA在琼脂糖凝胶电泳中的电泳行为受电泳时的温度影响不明显,不同大小的DNA片段其相对迁移速率在4℃与30℃之间不发生明显改变,但浓度低于0.5%的凝胶或低熔点凝胶较为脆弱,最好在4℃条件下电泳。 (5) 嵌入染料荧光染料溴化乙锭用于检测琼脂糖凝胶中的DNA,染料嵌入到堆积的碱基对间并拉长线状和带缺口的环状DNA,使其刚性更强,还会使线状迁移率降低15%。 (6) 离子强度电泳缓冲液的组成及其离子强度影响DNA电泳迁移率。在没有离子存在时(如误用蒸馏水配制凝胶,电导率最小,DNA几乎不移动,在高离子强度的缓冲液中(如误加10×电泳缓冲液),则电导很高并明显产热,严重时会引起凝胶熔化。

分子生物学实验复习题

分子生物学实验复习题 1.实验中为什么选用RNA而非DNA作为模板调取目的基 因? 因为真核生物,DNA出了含有编码序列外还含有非编码序列(内含子),而我们只需目的基因这段序列。RNA是经过加工的,没有内含子,通过提取高质量的RNA再进行逆转录即可得到不含内含子的cDNA,即所需的目的基因。2.RNA提取过程中的注意事项有哪些? (1)所有玻璃器皿均应于使用前180℃干烤3h或更长时间,塑料器皿可用0.1%DEPC浸泡或用氯仿洗涤。 (2)全部实验过程最好戴一次性手套,接触可能污染了RNA酶的物品后,应更换手套。 (3)配制的溶液应尽可能用0.1%DEPC在37℃处理12h 以上,然后高压灭菌除去残留的DEPC。不能高压灭菌的试剂,用经DEPC处理过的无菌蒸馏水配制,然后用0.22um 滤膜过滤除菌。 3.逆转录反应,有哪几种引物可用?如何进行选择?(1)引物:OligodT:①长度适宜,一般为15~30个碱基;G+C含量,一般为40%~60%;②4种碱基应随机分布;③引物自身不应存在互补序列;④2个引物之间不应有多于4个碱基的互补;⑤引物3′端不应有任何修饰;⑥引物5′端可以修饰 4.简述用氯化钙方法制备感受态细胞转化原理? (1)正在生长的大肠杆菌在0℃下加入到低渗的CaCl2溶液中,便会造成细胞膨胀成球(感受态细胞)。(2)感受态细胞与外源质粒DNA形成一种粘着在细胞表面上的队DNAase抗性的羧基钙磷酸复合物。(3)42℃下作短暂的热刺激期间,这种复合物便会被细胞吸收。(4)进入受体细胞的DNA分子通过复制,表达实现遗传信息的转移,使受体细胞出现新的遗传性状。(5)将经过转化后的细胞在筛选培养基中培养,即可筛选出转化子。 5.转化过程中要注意哪些因素 细胞生长状态和密度、质粒的质量和浓度、试剂的质量、防止杂菌和杂DNA的污染 6.简述质粒DNA提取原理 在pH12.0~12.6碱性环境中,细菌的线性大分子量染色体DNA变性分开,而共价闭环的质粒DNA虽然变性,但仍处于拓扑缠绕状态。将pH调至中性并有高盐存在及低温的条件下,大部分染色体DNA、大分子量的RNA和蛋白质在去污剂SDS的作用下形成沉淀,二质粒DNA仍然为可溶状态。通过离心,可去除大部分细胞碎片、染色体DNA、RNA 及蛋白质,质粒DNA尚在上清中,然后用酚、氯仿抽提进一步纯化质粒DNA。 7.请列举4种阳性克隆的筛选方法和鉴定方法 (一)采用遗传学方法可筛选特定的重组体DNA 1.利用抗性标记可筛选出带有载体的细菌克隆 2.利用不同标记可筛选出带有重组体的细菌克隆 ①插入灭活法利用特定抗性基因的失活进行筛选②α-互补筛选是利用功能互补的基因片段 (二)核酸杂交法适合从文库中筛选特定的DNA (三)PCR技术可对特定的DNA进行直接鉴定 (四)酶切鉴定是利用限制酶酶切图谱鉴定特定的DNA 8.简单谈一下如何选定酶切鉴定时所用的酶 限制性内切酶的选用必须根据载体和插入片段上酶切微点来确定。 酶切鉴定是必须的,基于下述: 限制性图谱个体特异性,不同的载体或DNA分子物理图谱不同,酶切后片段大小不一样,电泳图谱一样。 统一载体连接不同的DNA片段,不同的载体连接统一片段(片段上也有位点)酶切图谱是不同的。插入法(单酶单切点)或替代法(双酶双位点)酶切,一般来说用3种限制酶切:可鉴定载体及插入片段的大小、方向、切后并电泳分析,以确定是否得到预期的rDNA。 9.简述克隆大鼠的GAPDH基因的主要步骤 ①TRlzol试剂提取小鼠肝脏总RNA②核酸的定量③电泳检测④PCR产物4℃保存或琼脂糖凝胶电泳检测⑤从琼脂糖凝胶中分离回收PCR产物⑥6GAPDH基因的TA克隆、连接、转化 10.Trizo:是直接从细胞或组织中提取总RNA 的试剂,内含 异硫氰酸胍,酚等物质,异硫氰酸胍能迅速溶解蛋白质,导致细胞结构破碎。核酸由于核蛋白二级结构的破坏而解离下来。异硫氰酸胍同时抑制细胞释放出的核酸酶,保持RNA 的完整性。 11.荧光定量PCR中,请说明阈、基线、Ct值的概念。 Baseline(基线): 在PCR开始几个循环内所发散的荧光信号,这段时间内定量PCR仪器还未能检测到PCR产物的扩增,缺省设置为3-15个循环的荧光信号(背景荧光信号)。 Threshold(阈值): 用来确定Ct的荧光强度。是在荧光扩增曲线上认为设定的一个值,它可以设定在荧光信号指数扩增阶段在 任意位置上,一般荧光阈值的设置是基线(背景)荧 光信号的标准偏差的10倍。 Ct值:到达阈值荧光信号所需要的循环数。 12.在做荧光定量PCR实验时要注意些什么? (1)在操作中,应使用不含荧光物质的一次性手套(经常替换)、一次性转移器吸头(带滤嘴自卸式),不能用手直接接触毛细管、离心管的底部。 (2)操作台、移液器、离心机、PCR扩增仪等仪器设备应经常用10%次氯酸或75%乙醇擦拭消毒。每次实验前后用10%次氯酸和70%乙醇擦拭移液器、操作台。 (3)配制反应体系时,应注意移液器的使用方法,所有的液体都要缓慢加至管底,不要加至管壁,所有液体的混匀要用振荡器进行,不能用移液器吹打,反映体系配制完毕后低速离心数秒,避免产生气泡。 13.影响质粒转染效率的因素有哪些? 转化率:转化效率/细胞总数

最新分子生物学实验指导

分子生物学实验指导

分子生物学实验指导 (补充讲义) 南方医科大学生物化学与分子生物学实验教学中心 二OO九年十二月 目录 实验总RNA的提取、定量与RT-PCR……………………………………………… 1 实验质粒DNA的提取、定量与酶切鉴定 (7) 实验蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳 (13) 附录Ⅰ相关试剂盒说明书 (19) 附录Ⅱ相关仪器使用说明书 (19) 实验九总RNA的提取、定量与RT-PCR 一、总RNA的提取与定量 目的: 从细胞中分离RNA是分子生物学实验经常进行的操作之一,所提取RNA的质量是进行其它实验的基础,如Northern杂交,目的基因cDNA的克隆,荧光定量,文库构建等。 原理:

在哺乳动物中,平均每个细胞内大约含有10-5μg RNA,其中rRNA占总量的80%-85%,tRNA和核内小分子RNA占10-15%,而mRNA只占1-5%。rRNA由28S、18S、5S等几类组成,这些RNA分子根据密度和分子大小,通过密度梯度离心、凝胶电泳、离子交换层析进行分离。mRNA分子种类繁多,分子量大小不均一,在细胞中含量少,绝大多数mRNA分子(除血红蛋白、有些组蛋白mRNA以外),在3’端存在20-250个多聚腺苷酸(polyA)。利用此特点,用 oligo(dT)亲和层析柱分离mRNA。 RNA分离的方法有:异硫氰酸胍氯化铯超速离心法,盐酸胍-有机溶剂法,氯化锂-尿素法,蛋白酶K-细胞质RNA提取法等、异硫氰酸胍-酚-氯仿一步法等。目前常用的是Trizol法。 Trizol试剂适用于从细胞和组织中快速分离RNA。TRIzol的主要成分是异硫氰酸胍和酚。异硫氰酸胍属于解偶剂,是一类强力的蛋白质变性剂,可溶解蛋白质主要作用是裂解细胞,使细胞中的蛋白,核酸物质解聚得到释放。酚虽可有效的变性蛋白质,但是它不能完全抑制RNA酶活性,因此Trizol中还加入了8-羟基喹啉、β-巯基乙醇等来抑制内源和外源RNase。在加入氯仿离心后,溶液分为水相和有机相,RNA选择性地进入无DNA和蛋白质的水相中。取出水相用异丙醇沉淀可回收RNA;用乙醇沉淀中间层可回收DNA;用异丙醇沉淀有机相可回收蛋白质。 Trizol试剂可用于小量样品(50~100mg组织、5×106细胞)也适用于大量样品(≥1g组织、>107细胞)。对人,动物,植物组织,细菌均适用,整个提取过程在一小时内即可完成。分离的总RNA无蛋白质和DNA污染,可用于Northern blot,dot blot,ployA筛选,体外翻译,RNase保护分析和分子克隆。在用于RT-

分子生物学实验技术考试题库

一、名词解释 1.分配常数:又称分配系数,是指一种分析物在两种不相混合溶剂中的平衡常数。 2.多肽链的末端分析:确定多肽链的两末端可作为整条多肽链一级结构测定的标志,分为氨基端分析和羧基端分析。 3.连接酶:指能将双链DNA中一条单链上相邻两核苷酸连接成一条完整的分子的酶。 4.预杂交:在分子杂交实验之前对杂交膜上非样品区域进行封闭,用以降低探针在膜上的非特异性结合。 5.反转录PCR:是将反转录RNA与PCR结合起来建立的一种PCR技术。首先进行反转录产生cDNA,然后进行常规的PCR反应。 6.稳定表达:外源基因转染真核细胞并整合入基因组后的表达。 7.基因敲除:是指对一个结构已知但功能未知或未完全知道的基因,从分子水平上设计实验,将该基因从动物的原基因组中去除,或用其它无功能的DNA片断取代,然后从整体观察实验动物表型,推测相应基因的功能。 8.物理图谱:人类基因组的物理图是指以已知核苷酸序列的DNA片段为“路标”,以碱基对(bp,kb,Mb)作为基本测量单位(图距)的基因组图。 9.质谱图:不同质荷比的离子经质量分析器分开后,到检测器被检测并记录下来,经计算机处理后所表示出的图形。 10.侧向散射光:激光束照射细胞时,光以90度角散射的讯号,用于检测细胞内部结构属性。

11.离子交换层析:是以离子交换剂为固定相,液体为流动相的系统中进行的层析。 12.Edman降解:从多肽链游离的N末端测定氨基酸残基的序列的过程。 13.又称为限制性核酸内切酶(restriction endonuclease):是能够特异识别双链DNA序列并进行切割的一类酶。 14.电转移:用电泳技术将凝胶中的蛋白质,DNA或RNA条带按原位转移到固体支持物,形成印迹。 15.多重PCR:是在一次反应中加入多对引物,同时扩增一份模板样品中不同序列的PCR 过程。 16.融合表达: 在表达载体的多克隆位点上连有一段融合表达标签(Tag),表达产物为融合蛋白(有分N端或者C端融合表达),方便后继的纯化步骤或者检测。 17.同源重组:发生在DNA同源序列之间,有相同或近似碱基序列的DNA分子之间的遗传交换。 18.遗传图谱又称连锁图谱(linkage map),它是以具有遗传多态性的遗传标记为“路标”,以遗传学距离为图距的基因组图。 19.碎片离子:广义的碎片离子为由分子离子裂解产生的所有离子。 20.前向散射光:激光束照射细胞时,光以相对轴较小角度向前方散射的讯号用于检测细胞等离子的表面属性,信号强弱与细胞体积大小成正比。 21.亲和层析:利用共价连接有特异配体的层析介质分离蛋白质混合物中能特异结合配体的目的蛋白或其他分子的一种层析法。(利用分子与其配体间特殊的、可逆性的亲和结合

《分子生物学》实验指导(2015-2016)

《分子生物学》实验指导 实验1 总DNA提取 生物总DNA的提取是分子生物学实验的一个重要内容。由于不同的生物材料细胞壁的结构和组成不同,而细胞壁结构的破坏是提取总DNA的关键步骤。同时细胞内的物质也根据生物种类的不同而有差异,因此不同生物采用的提取方法也不同,一般要根据具体的情况来设计实验方法。本实验介绍采用CTAB法提取植物总DNA的技术。 [实验目的] 学习和掌握学习CTAB法提取植物总DNA的基本原理和实验技术。学习和掌握紫外光吸收法鉴定DNA的纯度和浓度。 [实验原理] 植物叶片经液氮研磨,可使细胞壁破裂,加入去污剂(如CTAB),可使核蛋白体解析,然后使蛋白和多糖杂质沉淀,DNA进入水相,再用酚、氯仿抽提纯化。本实验采用CTAB法,其主要作用是破膜。CTAB 是一种非离子去污剂,能溶解膜蛋白与脂肪,也可解聚核蛋白。植物材料在CTAB的处理下,结合65℃水浴使细胞裂解、蛋白质变性、DNA 被释放出来。CTAB与核酸形成复合物,此复合物在高盐(>0.7mM)浓度下可溶,并稳定存在,但在低盐浓度(0.1-0.5mM NaCl)下CTAB-核酸复合物就因溶解度降低而沉淀,而大部分的蛋白质及多糖等仍溶解于溶液中。经过氯仿/ 异戊醇(24:1) 抽提去除蛋白质、多糖、色素等来纯化DNA,最后经异丙醇或乙醇等沉淀剂将DNA沉淀分离出来。 由于核酸、蛋白质、多糖在特定的紫外波长都有特征吸收。核酸及其衍生物的紫外吸收高峰在260nm。纯的DNA样品A260/280≈1.8,纯的RNA样品A260/280≈2.0,并且1μg/ml DNA 溶液A260=0.020。 [实验器材] 1、高压灭菌锅 2、冰箱 3、恒温水浴锅 4、高速冷冻离心机 5、紫外分光光度计 6、剪刀 7、陶瓷研钵和杵子 8、磨口锥形瓶(50ml) 9、滴管10、细玻棒11、小烧杯(50ml)12、离心管(50ml)13、植物材料 [实验试剂] 1、3×CTAB buffer(pH8.0) 100mM Tris 25mM EDTA 1.5M NaCl 3% CTAB 2% β-巯基乙醇 2、TE缓冲液(pH8.0) 10mmol/L Tris·HCl 1mmol/L EDTA 3、氯仿-异戊醇混合液(24:1,V/V) 4、95%乙醇 5、液氮 [实验步骤] 1、称取2g新鲜的植物叶片,用蒸馏水冲洗叶面,滤纸吸干水分。 2、将叶片剪成1cm长,置预冷的研钵中,倒入液氮,尽快研磨成粉末。 3、待液氮蒸发完后,加入15mL预热(60℃)的CTAB提取缓冲液,转入一磨口锥形瓶中,

药学分子生物学重点

药学分子生物学 绪论 基因诊断:应用分子生物学技术,检测人体某些基因结构或表达的变化,或检测病原体基因组在人体内的存在,从而达到诊断或监控疗效的目的 基因治疗:通过特定的分子生物学技术,关闭或降低异常表达的基因;或将正常的外源基因导入体内特定的靶细胞以弥补缺陷基因;或将某种特定基因导入体细胞表达一产生特定的蛋白质因子,实现对疾病的治疗作用 药物基因组学:研究遗传变异对药物效能和毒性的影响,开辟药物研发的领域、促进合理用药的发展、加强临床前及临床药理的研究并对药物经济学产生重要影响。 第一章核酸的分子结构、性质和功能 DNA双螺旋结构 DNA分子是由两条互补的多核苷酸链组成的。两条链以一定的空间距离,在同一轴上相互盘旋起来构成双螺旋结构。 DNA双链呈反向平行。一条链的走向从5’到3’,另一条链的走向从3’到5’。 A=T,G≡C 各对碱基上下之间的距离为3.4?,每个螺距的距离34 ?,包括10对碱基。 ★中心法则 DNA是自身复制的模板 DNA通过转录将遗传信息传递给中间物质RNA RNA通过翻译将遗传信息表达为蛋白质 在某些病毒中,RNA可以自我复制,并且在某些病毒蛋白质合成中,RNA可以在逆转录酶的作用下合成DNA DNA的结构与功能 一级结构:DNA分子中脱氧核苷酸连接及其排列顺序,是物种间差异的根本原因 1为RNA和蛋白质一级结构编码的信息 2基因选择性表达的调控信息 二级结构:是指通过分子间相互作用形成的双链DNA或称为双螺旋DNA 三级结构:双螺旋DNA进一步扭曲盘绕则形成其三级结构,超螺旋是DNA三级结构的主要形式 三链DNA: DNA分子中的单链与双链相互作用形成的三链结构 1基因表达抑制物:选择性阻断靶基因,抑制其转录 2阻断序列专一性蛋白质的结合,影响DNA与蛋白质结合及DNA复制、转录 RNA的结构与功能 mRNA是蛋白质合成的直接模板,将细胞核内DNA的碱基顺序按互补配对原则,抄录并转送到胞质的核糖体,用以决定蛋白质合成的氨基酸序列 ★核内不均一RNA(hnRNA):真核生物mRNA的原始转录物是分子量极大的前体,在核内加工过程中形成分子大小不等的中间产物,被称为hnRNA ★开放阅读框(ORF):mRNA分子上从起始密码(AUG)开始到终止密码子结束这一段连续的核苷酸序列,即mRNA分子上的编码区。是一个特定蛋白质多肽链的编码序列

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前四章 1.tRNA 分子结构特征为(C) A.有密码环 B.3 ’端有多聚 A C.有反密码环 D.3 ’端有 C-C-U E.以上都不正确 2.关于 2.原核生物启动子结构中,描述正确的是( C ) A. –25bp 处有 Hogness盒 B.–10bp 处有 GC 盒 C. –10bp 处有 Pribnow 盒 D. –35bp 处有 CAA T 盒 E.以上都不正确 3.关于蛋白质生物合成时肽链延伸,叙述不正确是( D ) A.核蛋白体沿着mRNA 每移动一个密码子距离,合成一个肽键’ B.受大亚基上转肽酶的催化 C.活化的氨基酸进入大亚基 A 位 D . 肽链延伸方向为 C 端→N端 E.以上都不正确 4.摆动配对是指(A) A .反密码的第 1 位碱基 B.反密码的第 2 位碱 C.反密码的第 3 位碱基 D.密码的第 1 位碱基 E.以上都不正确 5.人类基因组大小( bp)为(B) A. 3.5 10×8 10× 99 D. 2.510× 9 E.以上都不正确B. 3.0 C. 2.010× 6.以下有关转录叙述,错误的是(C) A .DNA 双链中指导 RNA 合成的链是模板链 B .DNA 双链中不指导 RNA 合成的链是编码链 C.能转录 RNA 的 DNA 序列称为结构基因 D.染色体 DNA 双链仅一条链可转录 E.以上都不正确 7.与 CAP 位点结合的物质是( C) A.RNA 聚合酶 B.操纵子 C.分解(代谢)物基因激活蛋白 D.阻遏蛋白 E.以上都不正确 8.目前认为基因表达调控的主要环节是(C) A.基因活化 B.转录起始 C.转录后加工 D.翻译起始 E.以上都不正确 9.顺式作用元件是指(A) A.基因的 5’侧翼序列 B.基因的 3’侧翼序列 C.基因的 5’、3’侧翼序列 D 基因的 5’、3’侧翼序列以外的序列 E.以上都不正确 10.反式作用因子是指(b) A.具有激活功能的调节蛋白 B. 具有抑制功能的调节蛋白 C.对自身基因具有激活功能的调节蛋白 D.对另一基因具有功能的调节蛋白 E.以上都不正确 11.cAMP 与 CAP 结合, CAP 介导正性调节发生在( C ) A.有葡萄糖及cAMP 较高时 B.有葡萄糖及cAMP 较低时 C.没有葡萄糖及cAMP 较高时 D. 没有葡萄糖及cAMP 较低时 E.以上都不正确 12.乳糖操纵子上Z、 Y 、 A 基因产物是( B )

分子生物学实验复习题附答案(最新整理)

分子生物学复习题 实验一DNA的制备 (1)为什么分子生物学实施时要担心EB? 溴化乙锭(Ethidium bromide)是DNA诱变剂,溴化乙锭可以嵌入碱基分子中,导致错配。具有高致癌性(接触致癌) (2)DNA加样缓冲液的用途是什么? 由于植物细胞匀浆含有多种酶类(尤其是氧化酶类)对DNA的抽提产生不利的影响,在抽提缓冲液中需加入抗氧化剂或强还原剂(如巯基乙醇)以降低这些酶类的活性。 线状DNA大小/kb60-520-110-0.87-0.56-0.44-0.23-0.1 (4)琼脂糖凝胶电泳分离DNA的原理是什么 DNA分子在pH值高于其等电点的溶液中带负电荷,在电场中向阳极移动。DNA分子在电场中通过琼脂糖凝胶而泳动,除了电荷效应以外,还有分子筛效应。由于DNA分子可片段的相对分子质量不同,移动速度也不同,所以可将相对分子质量不同或构象不同的DNA分离。DNA片段迁移距离(迁移率)与碱基对的对数成反比,因此通过已知大小的标准物移动的距离与未知片段的移动距离时行比较,便可测出未知片段的大小。但是当DNA分子大小超过20kb时,普通琼脂糖凝胶就很难将它们分开。此时电泳的迁移率不再依赖于分子大小,因此,就用琼脂糖凝胶电泳分离DNA时,分子大小不宜超过此值。 (5)琼脂糖凝胶电泳时胶中DNA是靠什么发出荧光的?为什么? 溴化乙锭是一种高度灵敏的荧光染色剂,可插入DNA双螺旋结构的两个碱基之间,形成一种荧光络合物。在254nm波长紫外光照射下,呈现橙黄色的荧光。用溴化乙啶检测DNA,可检出10-9g以上的DNA 含量。 (6)制备基因组DNA时用到的以下试剂分别起什么作用? CTAB等离子型表面活性剂,能溶解细胞膜和核膜蛋白,使核蛋白解聚,从而使DNA得以游离出来 氯仿有机溶剂,能使蛋白质变性,并使抽提液分相,因核酸(DNA、RNA)水溶性很强,经离心后即可从抽提液中除去细胞碎片和大部分蛋白质。 无水乙醇上清液中加入无水乙醇使DNA沉淀,沉淀DNA溶于TE溶液中,即得植物总DNA溶液。75%乙醇,乙醇轻轻洗涤管壁 实验二RNA的制备 1.制备RNA时通常要注意些什么?为什么? 应该要注意(1)不要徒手操作,必须带手套;(2)加样时不能够大声说话,防止唾液等进入; 由于RNA分子的结构特点,容易受RNA酶的攻击反应而降解,加上RNA酶极为稳定且广泛存在,因而在提取过程中要严格防止RNA酶的污染,并设法抑制其活性,这是本实验成败的关键。 2.制备的RNA通常有哪些用途?制备的DNA通常又有哪些用途? 研究基因的表达和调控时常常要从组织和细胞中分离和纯化RNA。 质粒DNA构建克隆载体,分离目的基因 3.RNA制备好后是通过什么方法检测其有没有降解的?从胶上检测什么指标来判断RNA质量好坏?为什么?

分子生物学实验心得体会

关于分子生物学实验的体会 梁慧媛(生技01 级) 不知不觉间,一年的时间就这样流逝了,与分子生物实验相伴,对我而言,的确不同寻常。并不仅仅是学习生物学实验技术和方法的宝贵经历,它意味着更多。 首先是实验条件、实验过程、实验设计的完备性,从这里可以初步感受到生物学研究的科学性与严肃性,自己可以得到宝贵的机会,亲身体会生物学研究的苦辣酸甜。一直一直喜欢,得到正确实验结果时刻的畅快感,那是无法言明的欣慰感,一次身心彻底地放松,可以将所有一整天来积累的疲劳抛之身后,即使仅仅是小小的成功,也会让我们兴奋不已。在整理资料,将一年来保存的记录一遍一遍的翻看,重温其中的特别滋味,我,轻轻地笑了。我,喜欢这里,喜欢生物学。 失误是常有的,经历过吃惊、后悔、无奈,检讨分析,最后重新开始。一波三折的记忆清晰的印在脑海中,这种深深的挫折感,再试一次的勇气,我会一生记取的。一年间,随着对生物学实验知识和技能的进一步学习,我更坚定了自己学习生物学的志向,感谢分子生物学实验的"试炼" 。 分子生物学实验心得体会 刘东强(生科01 级) 分子生物学实验室本科生第一次接触到了真正培养实验能力的实验课,它不同于我们在大二开的植物、动物、微生物等实验课。在这些课上,主要以制备样品并观察样品的形态、结构特征为主,这是由于我们当时正值大二,专业知识还远不够。 随着以后理论课学习的深入,我们开始了分子生物学实验的学习,这无疑对于深刻巩固我们理论课上学到的知识是有帮助的,也进一步加深了对原有知识的理解,如启动子的概念、类型、PCR的原理等。另外,在实验课中,我们掌握并学会如何运用分子生物学研究中的一些基本实验技术,如质粒的提取、总RNA 的制备、PCR 技术等。 我们的实验动手能力通过亲身接触实验过程并亲自设计一些实验得到了提高,使我们不再象刚开始做分子生物学实验的时候照搬实验指导上的实验步骤,而是通过我们自己的思考,根据现有的实验条件,对原有的步骤作必要的改进。 此外,通过这门实验课的学习,我们形成了严谨的态度,如有时得出的实验结果与理论不符,我们渐渐养成了仔细分析实验结果的习惯,查找在实验设计或操作过程中出现的问题,同时对理论知识认识得更清楚。 总之,我认为,分子生物学实验课,是称得上实用、精彩、有意思的好实验,对于今后我的研究或工作很有价值 刘佳凝(生技01 级) 一学期的分子生物学实验对我来说很重要,同时通过一学期的实践让我给分子生物学有了较深入地体会: 1、很感谢由我系生化组老师们编写的这本实验指导。里面的实验原理与操作步骤都清晰易懂,有助于我

药学分子生物学

绪论 一、分子生物学的发展简史 (一)孕育阶段(1820~1950年代); 1、达尔文进化论 2、遗传学规律的诞生 3、遗传因子在哪里? 4、生命的遗传物质是DNA 5、RNA也是重要的遗传物质 (二)创立阶段(1950~1970年代); 1、DNA双螺旋结构的确立 2、遗传信息如何传递—中心法则 3、DNA如何复制—半保留复制 4、基因表达如何调控—操纵子学说 5、DNA如何编码蛋白质—密码子(三)发展阶段(1970年代以后); 1、逆转录酶的发现 2、DNA测序技术的诞生 3、PCR技术的诞生 4、基因工程的诞生 5、人类基因组计划 6、克隆技术的旋风 7、诱导性多能干细胞(iPS) 8、microRNA 9、芯片技术 10、组学:基因组学,转录组学,蛋白质组学,代谢组学 11、CRISPR/Cas系统 二、分子生物学在医药科学中的应用(一)发病机制 1、遗传性疾病:寻找突变基因 2、病原微生物:从分子水平确定其致病机理 3、肿瘤、肥胖等疾病 (二)疾病诊断 PCR技术、核酸杂交、基因芯片等(三)疾病治疗 基因治疗、试管婴儿、三亲婴儿(四)法医学 身份鉴定、亲子鉴定等 (五)医药工业 1、DNA重组技术与新药研究 (1)小分子代谢产物(维生素、氨基酸、抗生素、染料、生物多聚体的前体等) (2)亚单位疫苗、合成肽疫苗(3)细胞因子、血液因子、激素(4)糖(糖肽+有机小分子化合物)、核酸(反义核酸、肽核酸)、脂类等 (5)新型反应器(动物、植物等)2、药物基因组学、药物蛋白质组学与现代药物研究 (1)药物疗效与基因多态性相关,个体差异大(如非典型抗精神病药氯氮平) (2)发现新的靶基因 (3)在蛋白质组水平上研究发病机理 3、中医药 (1)对中医理论的解释 (2)中药:种质鉴定、育种、新的活性成分提取技术 三、“药学分子生物学”教学大纲绪论、细胞 核酸的分子结构、性质和功能 染色质、染色体、基因和基因组 可移动的遗传因子和染色体外遗传因子 DNA的复制、突变、损伤和修复 转录、转录后加工 蛋白质的生物合成-翻译及翻译后过程 基因表达的调控 基因编辑 外源基因表达与基因工程药物 药物生物信息学基础

现代分子生物学_复习笔记

现代分子生物学 复习提纲 第一章绪论 第一节分子生物学的基本含义及主要研究内容 1 分子生物学Molecular Biology的基本含义 ?广义的分子生物学:以核酸和蛋白质等生物大分子的结构及其在遗传信息和细胞信息传递中的作用为研究 对象,从分子水平阐明生命现象和生物学规律。 ?狭义的分子生物学:偏重于核酸(基因)的分子生物学,主要研究基因或DNA的复制、转录、表达和调控 等过程,也涉及与这些过程相关的蛋白质和酶的结构与功能的研究。 1.1 分子生物学的三大原则 1) 构成生物大分子的单体是相同的 2) 生物遗传信息表达的中心法则相同 3) 生物大分子单体的排列(核苷酸、氨基酸)的不同 1.3 分子生物学的研究内容 ●DNA重组技术(基因工程) ●基因的表达调控 ●生物大分子的结构和功能研究(结构分子生物学) ●基因组、功能基因组与生物信息学研究 第二节分子生物学发展简史 1 准备和酝酿阶段 ?时间:19世纪后期到20世纪50年代初。 ?确定了生物遗传的物质基础是DNA。 DNA是遗传物质的证明实验一:肺炎双球菌转化实验 DNA是遗传物质的证明实验二:噬菌体感染大肠杆菌实验 RNA也是重要的遗传物质-----烟草花叶病毒的感染和繁殖过程 2 建立和发展阶段 ?1953年Watson和Crick的DNA双螺旋结构模型作为现代分子生物学诞生的里程碑。 ?主要进展包括: ?遗传信息传递中心法则的建立 3 发展阶段 ?基因工程技术作为新的里程碑,标志着人类深入认识生命本质并能动改造生命的新时期开始。 ? 第三节分子生物学与其他学科的关系 思考 ?证明DNA是遗传物质的实验有哪些? ?分子生物学的主要研究内容。 ?列举5~10位获诺贝尔奖的科学家,简要说明其贡献。 第二章染色体与DNA

分子生物学常用实验指南

生命科学系 2011-2012学年度分子生物学实验 (0801班)

2011-2012学年度分子生物学实验指导 实验一大肠杆菌感受态细胞的制备 (3) 实验二质粒DNA的转化 (4) 实验三质粒DNA的提取 (5) 实验四琼脂糖凝胶电泳检测DNA (7) 实验五PCR基因扩增 (9) 实验六DNA重组 (10) 实验七蓝白斑筛选实验 (11) 实验八DNA酶切技术 (13)

实验一大肠杆菌感受态细胞的制备 一、实验目的:掌握大肠杆菌感受态细胞的制备技术 二、实验原理:感受态——细菌处在容易吸收外源DNA的状态。 我们选用经过基因改造的生物工程菌株——大肠杆菌top10菌株为材料,在0℃、CaCl2低渗溶液处理,细胞壁破坏,细胞成为球型原生质体。因而具备了吸收外源DNA的能力。 三、仪器:1.超净工作台 2.低温离心机 3.恒温摇床 4.紫外分光光度仪 四、材料与试剂: 1.大肠杆菌top10菌株 2. 0.1mol/L CaCl2溶液500mL、 0.2mol/L CaCl2溶液50mL 3..LB液体及固体培养基 4.50%甘油500mL(灭菌) 五、实验操作步骤: 1.从大肠杆菌top10菌株平板上挑取一个单菌落,接种于3mL LB液体培养基中, 37℃振荡(200r/min)培养过夜。 2.次日早上取0.4mL菌液转接到40mL LB液体培养基中,37℃震荡培养2~3h.(A600 应在0.4~0.5之间) 3.将菌液置冰浴中10min。(同时将0.1mol/L CaCl2溶液、50%甘油预冷) 4.取菌液1.5mL,4℃离心2min(3500r/min).弃上清,再加菌液1.5mL,4℃再离 心一次,弃上清,倒置以便使培养液流尽。 5.用冰冷的0.1mol/L CaCl2溶液1mL悬浮细胞(轻轻涡旋使悬浮),立即置冰浴保 温30min。 6.4℃离心2min(3500r/min),弃上清,加入100μL冰冷的0.2mol/L CaCl2溶液、 100μL50%甘油轻轻手摇悬浮,置冰浴上,接着进行质粒DNA转化,或-70℃保存。

药学分子生物学题库

前四章 1.tRNA分子结构特征为(C) A.有密码环 B.3’端有多聚A C.有反密码环 D.3’端有C-C-U E.以上都不正确 2.关于2.原核生物启动子结构中,描述正确的是(C) A. –25bp处有Hogness盒 B.–10bp处有GC盒 C. –10bp处有Pribnow盒 D. –35bp处有CAAT盒 E.以上都不正确 3.关于蛋白质生物合成时肽链延伸,叙述不正确是(D ) A.核蛋白体沿着mRNA每移动一个密码子距离,合成一个肽键’ B.受大亚基上转肽酶的催化 C.活化的氨基酸进入大亚基A位 D .肽链延伸方向为C端→N端 E.以上都不正确 4.摆动配对是指( A ) A .反密码的第1位碱基 B.反密码的第2位碱 C.反密码的第3位碱基 D.密码的第1位碱基 E.以上都不正确 5.人类基因组大小(bp)为(B ) A. 3.5×108 B. 3.0×109 C. 2.0 ×109 D. 2.5×109 E.以上都不正确 6.以下有关转录叙述,错误的是(C ) A .DNA双链中指导RNA合成的链是模板链 B .DNA双链中不指导RNA合成的链是编码链 C.能转录RNA的DNA序列称为结构基因 D.染色体DNA双链仅一条链可转录 E.以上都不正确 7.与CAP位点结合的物质是(C )

A.RNA聚合酶 B.操纵子 C.分解(代谢)物基因激活蛋白 D.阻遏蛋白 E.以上都不正确 8.目前认为基因表达调控的主要环节是(C) A.基因活化 B.转录起始 C.转录后加工 D.翻译起始 E.以上都不正确 9.顺式作用元件是指(A ) A.基因的5’侧翼序列 B.基因的3’侧翼序列 C.基因的5’、3’侧翼序列D基因的5’、3’侧翼序列以外的序列 E.以上都不正确 10.反式作用因子是指(b) A.具有激活功能的调节蛋白 B.具有抑制功能的调节蛋白 C.对自身基因具有激活功能的调节蛋白 D.对另一基因具有功能的调节蛋白 E.以上都不正确 11.cAMP与CAP结合,CAP介导正性调节发生在(C ) A.有葡萄糖及cAMP较高时 B.有葡萄糖及cAMP较低时 C.没有葡萄糖及cAMP较高时 D.没有葡萄糖及cAMP较低时 E.以上都不正确

分子生物学考试复习题

习 题 第一章 1.什么是分子生物学? ⑴广义的分子生物学:蛋白质及核酸等生物大分子结构和功能的研究都属于分子生物学的范畴,即从分子水平阐明生命现象和生物学规律。 ⑵狭义的分子生物学:偏重于核酸(基因)的分子生物学,主要研究基因或DNA 的复制、转录、表达和调控等过程,当然也涉及与这些过程相关的蛋白质和酶的结构与功能的研究。 2.列举分子生物学发展历程中的10个重大事件。 1944年,著名微生物学家Avery 等在对肺炎双球杆菌的转化实验中证实了DNA 是遗传物质。 1953年,Waston 和Crick 提出了DNA 双螺旋模型。 1954年,Gamnow 从理论上研究了遗传密码的编码规律,后来Nirenberg 等于1961年破译了第一批遗传密码。Crick 在前人基础之上提出了中心法则。 1956年, A. Kornberg 在大肠杆菌中发现了 DNA 聚合酶I ,这是能在试管中合成DNA 的第一种核酸酶。 1961年,F. Jacob & J. Monod 提出调节基因表达的操纵子模型。 1967年,Gellert 发现了DNA 连接酶。 1970年,Smith 和Wilcox 等分离得到第一种限制性核酸内切酶。 1970年,Temin 和Baltimore 在RNA 肿瘤病毒中发现逆转录酶。 1972~1973年,H. Boyer 和P. Berg 等发展了重组DNA 技术,并完成了第一个细菌基因的克隆。 1975~1977年,Sanger 、Maxam 和Gilbert 发明了DNA 序列测序技术。1977年第一个全长5387bp 的噬菌体 X174基因组测定完成。 1981年,Cech 等发现四膜虫26S rRNA 前体自剪接作用,发现了核酶(ribozyme )。 1982年,Prusiner 等在感染瘙痒病的仓鼠脑中发现了阮病毒(Prion )。 1985年,Saiki 等发明了聚合酶链式反应(PCR )。 1988年,McClintock 发现可移动的遗传因子(转座子)。 。。。 2001年,RNAi 干扰机制的发现。 ,端粒及端粒酶的发现。 2006年,成功获得诱导干细胞(iPS 细胞) 2010年,获得第一个“人造细胞” 3.简述分子生物学的研究内容与研究热点。 ⑴研究内容 ①DNA 重组技术(基因工程) ②基因的表达调控 ③生物大分子的结构和功能研究(结构分子生物学) ④基因组、功能基因组与生物信息学研究 ⑤基因的表达调控 ⑥生物大分子的结构和功能研究(结构分子生物学) ⑦基因组、功能基因组与生物信息学研究 ⑵分子生物学的研究热点及领域 ①结构生物学(Structural Biology ) ②分子发育生物学(Molecular Developing Biology ) ③分子细胞生物学 (Molecular Cell Biology) ④分子神经生物学(Molecular Neurobiology ) ⑤分子肿瘤学(Molecular Tumorology ) 4.根据你所学的知识谈谈分子生物学在生命科学以及社会经济活动中的地位与作用。 ⑴人口与粮食 ;⑵健康与疾病 ; ⑶环境与生态 ;⑷能源与资源 5.简述分子生物学发展史中的三大理论发现和三大技术发明。 理论: ⑴1940年艾弗里(O.Avery )等人通过肺炎球菌的转化试验证明了生物的遗传物质是DNA ,而且证明了通过DNA 可以把一个细菌的性状转移给另一个细菌; ⑵1950年沃森(J.D.Watson )和克里克(F.Crick)发现了DNA 分子的双螺旋结构及DNA 半保留复制机理; ⑶1960年关于遗传信息中心法则的确立。 技术: ⑴限制性内切核酸酶; ⑵DNA 连接酶; ⑶基因载体的发现 6. 21世纪是生命科学的世纪。20世纪后叶分子生物学的突破性成就,使生命科学在自然科学中的位置起了革命性的变化。试阐述分子生物学研究领域的三大基本原则,三大支撑学科和研究的三大主要领域? ⑴三大基本原则: ①构成生物大分子的单体是相同的,共同的核酸语言,共同的蛋白质语 言 ②生物遗传信息表达的中心法则相同 ③生物大分子单体的排列(核苷酸、氨基酸)的不同 ⑵三大支撑学科:Cytology 、Genetics 、Biochemistry ⑶研究的三大主要领域: ①基因的分子生物学:基因的概念、结构、复制、表达、重组、交换 ②结构生物学:生物大分子的结构与功能、生物大分子之间的互作 ③生物技术理论与应用 第二章 一.名词解释: 1、基因: 基因是合成一种功能蛋白或RNA 分子所必需的全部DNA 序列,即DNA 分子中含有特定遗传信息的一段核苷酸序列,是遗传物质的最小功能单位。 2、端粒酶: 端粒酶是参与真核生物染色体末端的端粒DNA 复制的一种核糖核蛋白酶。由RNA 和蛋白质组成,其本质是一种逆转录酶。它以自身的RNA 作为端粒DNA 复制的模版,合成出富含脱氧单磷酸鸟苷Deoxyguanosine Monophosphate(dGMP)的DNA 序列后添加到染色体的末端并与端粒蛋白质结合,从而稳定了染色体的结构。 3、假基因:与正常基因结构相似,但没有正常功能的DNA 序列 4、Alu 序列家族:Alu 重复序列是哺乳动物基因组中SINE 家族的一员,约有50万份拷贝。由于这种DNA 序列中有限制性内切核酸酶Alu 工的识别序列AGCT ,所以称为Alu 重复序列。Alu 序列两端各有一个正向重复序列,末端有一个poly(A)尾。 5、断裂基因: 编码某一RNA 的基因中有些序列并不出现在成熟的RNA 序列中,成熟RNA 的序列在 基因中被其他的序列隔开 6、重叠基因: 是指两个或两个以上的基因共有一段DNA 序列,或是指一段DNA 序列成为两个或两个以上基因的组成部分。 7、变性: DNA 双螺旋区的氢键断裂,使双螺旋的两条链完全分开变成单链,这一链分离的过程叫做变性。 8、复性:变性DNA 在适当条件下,两条彼此分开的链又可以重新地合成双螺旋结构的过程(退火)。 9、C 值矛盾:在真核生物中,每种生物的单倍体基因组的DNA 总量总是恒定的,称为C 值,形态学的复杂程度与C-值的不一致称为C 值矛盾. 10、中心法则:指遗传信息从DNA 传递给RNA ,再从RNA 传递给蛋白质,即完成遗传信息的转录和翻译的过程。也可以从DNA 传递给DNA ,即完成DNA 的复制过程。这是所有有细胞结构的生物所遵循的法则。 11、增色效应:指在DNA 变性的过程中,他在260nm 的吸收值先是缓慢上升,达到某一温度时及骤然上升. 二、填空题 1.病毒ΦX174及M13的遗传物质都是 单链DNA 。 2.AIDS 病毒的遗传物质是 单链RNA 。 3.X 射线分析证明一个完整的DNA 螺旋延伸长度为 3.4nm 。 4.氢 键负责维持A-T 间(或G-C 间)的亲和力 5.天然存在的DNA 分子形式为右手 B 型螺旋。 6.证明DNA 是遗传物质的两个关键性实验是 肺炎双球菌转化实验、T 噬菌体侵染实验 这两个实验中主要的论点证据是:生物体吸收的外源DNA (而并非蛋白质)改变了其遗传潜能。 7.DNA 是 两条核苷酸链 通过 氢键 连接起来的 双螺旋结构。DNA 和RNA 的最大区别是在 碱基种类 。 8.超螺旋是有 的 。有 正 超螺旋和 负 超螺旋两种。 三、选择题(单选或多选) 1.证明DNA 是遗传物质的两个关键性实验是:肺炎球菌在老鼠体内的毒性和T2噬菌体感染大肠杆菌。这两个实验中主要的论点证据是( C )。 A .从被感染的生物体内重新分离得到DNA 作为疾病的致病剂 DNA RNA 蛋白质 复制转录翻译逆转录RNA 复制

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