兔巴氏杆菌的分离与鉴定

2019年第8期 吉林畜牧兽医

51

·草食动物·

CaoShi DongWu

兔巴氏杆菌的分离与鉴定

马铁英1，王欣宇2，李昱洁2，邵洪泽2，丁世杰2，任 锐

2*

1.吉林省榆树市动物卫生监督所，吉林榆树 130400；

2.吉林省畜牧兽医科学研究院，吉林长春

130062

多杀性巴氏杆菌是引起畜禽（如兔、猪、牛、鸡等）巴氏杆菌病的病原菌，主要引起动物发生出血性败血症。兔巴氏杆菌病又称为兔出血性败血症，是严重危害养兔业的细菌性传染病之一。采集疑似病死兔病料进行了兔巴氏杆菌的分离鉴定。

1 临床症状

病兔呼吸道症状明显。表现为咳嗽、打喷嚏，鼻孔流出水样或黏液样分泌物，鼻部被毛湿润；严重者呼吸困难。病死兔鼻腔、气管充血，气管内有大量白色黏液；肺脏出血、肿大；肝脏、脾脏瘀血、肿大；肾脏瘀血；膀胱充满尿液。

2 细菌分离

采集病兔心血、肝脏、肺脏。将采集的样品涂布于血琼脂37 ℃培养18 h，挑取单个菌落进行革兰氏染色（结晶紫1 min →碘液1 min →脱色液30 s →复染液10 s），油镜镜检。结果从病死种兔的心肝肺均分离到基本相似的细菌菌落，革兰氏染色镜检为阴性菌。

3 生化鉴定

从新鲜的血琼脂平板上挑取3～5个鉴定为革兰氏阴性菌的菌落，用浊度计调整至0.5 McFarland 标准管。通过接种仪分别接种在美国赛默飞世尔革兰氏阴性菌鉴定板，37 ℃孵育 24 h。通过OptiRead 自动微生物鉴定分析系统进行生化鉴定，结果为FR1：阴性；木糖：阴性；FR3：阳性；麦芽糖：阴性；FR5：阴性；阿拉伯糖：阴性；FR7：阴性；丙二酸：阴性；尿素：阴性；FR12：阴性；海藻糖：阴性；FR4：阴性；果糖：阳性；赖氨酸：阴性；精氨酸：阴性；丙

酮酸：阴性；鸟氨酸：阴性；蔗糖：阳性；FR8：阳性；肌醇：阴性；七叶苷：阴性；TDA：阴性；FR6：阴性；枸橼酸盐：阴性；山梨醇：阳性；FR9：阴性；甘露醇：阳性；FR10：阴性； 阿糖醇：阴性；棉子糖：阴性；纤维二糖：阴性；胍丁胺/鲱精胺：阴性，生化鉴定为多杀巴氏杆菌。

4 分子生物学方法检测

参照农业标准[1]设计引物、样品处理、基因提取、反应体系和反应条件、凝胶电泳分析等操作步骤进行试验。

上游引物P1：5'- ATC CGC TAT TTA CCC AGT GG- 3'。

下游引物P2：5'-GCT GAT AAC GAA CTC GCC AC- 3'。

实验结果扩增产物电泳后通过凝胶成像系统观察，在460 bp 处有目的条带，证明为巴氏杆菌核酸阳性。

5 讨论

兔巴氏杆菌病临床上可表现为败血症、肺炎、鼻炎、结膜炎、中耳炎、脓肿等多种形式的一种传染病。可经呼吸道、消化道或皮肤、黏膜、伤口感染等多种途径传播，呈散发性或地方性流行。幼龄兔多发易发，其它兔在各种不良条件或应激刺激导致兔抵抗力降低时，也可引起发病，给养兔业造成巨大损失，是养兔业最应重视的传染病之一。吉参考文献：

[1] NYT 563-2016 禽霍乱(禽巴氏杆菌病)

诊断技术。

*通讯作者

第三节 奈瑟菌属

第三节奈瑟菌属(Neisseria) 致病菌脑膜炎奈瑟菌(N. meningitides) 淋病奈瑟菌(N. gonorrhoeae) 一、脑膜炎奈瑟菌(N. meningitides) （一）生物学性状形态与染色肾形，G-双球菌，有荚膜，菌毛培养特性专性需氧，培养基：巧克力培养基，5%CO2 菌落：光滑，透明，不溶血 1．抵抗力对干燥，热力，消毒剂均敏感 （二）致病性致病物质荚膜：菌毛：内毒素：主要致病物质 1．所致疾病流脑，人是其唯一易感宿主三种临床类型：普通型，爆发型，慢性败血病型 （三）免疫性：以体液免疫为主 （四）微生物学检查法标本采集涂片染色镜检分离培养与鉴定快速诊断法 （五）防治原则流脑荚膜多糖疫苗，治疗首选青霉素G ：1云南大学药学院(昆明650091)；2云南沃森生物技术有限公司(昆明6501l8 为制备四价脑膜炎球菌疫苗的需要2005 A群脑膜炎球菌多糖结合物的免疫原性研究上海生物制品研究所朱为2002 脑膜炎奈瑟菌（Neisseria meningitides）感染是细菌性脑膜炎的常见病因，按荚膜多糖可将其分成12个血清群，其中A、B 和C 群感染占所有感染者的90%。全球由脑膜炎球菌引起的脑膜炎发病率在30-50万，病死率约10%，有相当一部分儿童因脑膜炎球菌严重感染而发生致聋等永久后遗症。在我国，A群脑膜炎球菌是主要致病菌群，95%的病例由A群引起。80 年代以来，我国进行了A群脑膜炎球菌荚膜多糖疫苗的大面积接种，有效地控制了发病率。该荚膜多糖是N-乙酰-3-O-乙酰甘露糖胺磷酸盐的线形共聚物，属T细胞非依赖性（TI）抗原，具有中等免疫原性和年龄相关的保护力，不能诱导免疫记忆。现已证实它对2岁以上儿童和成人在短期内有效，但随时间延续保护力下降，尤其在幼龄儿童中。因此有必要改进现有疫苗，提高其对各年龄组（包括婴儿）的免疫效果。近期的研究集中在开发多糖结合疫苗，即将多糖共价结合到蛋白质上，使其转化为T细胞依赖性（TD）抗原，以增强免疫原性和诱导免疫记忆。本文报道将! 群脑膜炎球菌多糖共价结合到精制破伤风类毒素(TT)上制备结合物，观察其在小鼠中的免疫原性。 A+C群脑膜炎球菌多糖一DT结合疫苗与多糖疫苗诱导的抗多糖抗体间的功能活性差异[英]2004 多糖蛋白结合疫苗对预防由一些有荚膜细菌(包括b型流感杆菌、肺炎球菌和C群脑膜炎球菌)引起的侵袭性疾病高度有效。与未结合多糖疫苗相比，多糖一蛋白结合疫苗能在婴幼儿体内诱导更高浓度的血清抗荚膜抗体。而且，结合疫苗诱导的抗体亲和力更高，补体介导的杀菌活性更强。 。在限定剂量时，多糖疫苗诱导的血清抗荚膜抗体预防C群脑膜炎球菌感染婴鼠发生菌血症的效力弱于结合疫苗。结合疫苗组的抗C群抗体的亲和力指数高于多糖疫苗组。两种疫苗在成人中诱导的抗荚膜抗体的功能活性差异，意味着各自激活了不同的B细胞群。 (兰州生物制品研究所崔萱林2001 流行性脑脊髓膜炎是由脑膜炎球菌(Meningococcus)引起的细菌性脑膜炎(简称流脑)，发病急，病死率高，且在各年龄组中都可发生，15岁以下儿童发病占75％以上。脑膜炎球菌根据荚膜多糖的结构可分为12个血清群，其中A、B、c群引发的流脑占90％以上。流脑的流行具有菌群漂移特点，如美国在1945年以前为A群流行，1960年以后以B群为主，1967年以后转为C群流行。我国以A群菌流行为主，B群和C群菌有少量病例，约占lO％左右。因此预防流脑的重点应是A、B、C群流脑球菌引起的疾病。由于流脑菌群的漂移现象，国外多采用多价多糖疫苗用于预防流行性脑脊髓膜炎，目前所使用的主要为A+C群二价疫苗(B群多糖对人体无效，主要研制外膜蛋白为基础的疫苗)，其次为A、C、Y及WI35四价疫苗，其它相关菌群引起的流脑病例已少见。国内目前主要使用A群流脑多糖疫苗，自80年代初使用至今效果很好；对于其它菌群的预防．目前尚未有疫苗出现，因此我们研制了A+C群流脑多糖疫苗，即在现有的A群流脑多糖疫苗中加入C群流脑多糖抗原，形成二价疫苗以预防A、C群流脑球菌引起的脑脊髓膜炎。 A+C群脑膜炎球菌多糖疫苗的制造和检定均按照WHO(生物制品规程》的要求进行，C群流脑多糖原液的主要制造过程借鉴A群流脑多糖原液的生产工艺，在多糖纯化步骤另采用澄清过滤、苯酚抽提控制多糖浓度等措施，使得C群多糖原液的蛋白质和核酸含量符合要求。A群流脑多糖原液为选用的本所常规生产的原液制品。由于多糖原液在制备过程中未进行专门的除类毒素工艺，因而在原液检定中采用鲎试剂法对类毒素含量进行测定，以确保疫苗的安全性。 2岁以下年龄组儿童在接种A+C群脑膜炎球菌多糖疫苗一个月后，虽然同组儿童的免前及免后的血清杀菌抗体滴度有显著差．但血清4倍阳转率较大年龄组儿童低，而且免后血清中的杀菌抗体滴度的整体水平也相对较低。提示低年龄组儿童对多糖疫苗的免疫应答水平较高年龄组儿童低，有关该疫苗人体接种后的安全性和免疫持久性的结果将另文报告。 A群脑膜炎球菌多糖疫苗自80年代在我国研制成功并广泛接种以来效果明显。我国A群带菌率和发病率大幅度下降，预防效果达90％以上。至今在我国引起流脑的脑膜炎球菌仍以A群为主，同时B群和C群的病例也开始出现。欧美国家主要流行菌群由A群转为B群和c群的事实。提示我们在A群脑膜炎被控制之后要防止B群和C群变迁。 1994年法国由法国巴斯德梅里厄血清疫苗研究所(PasteurMerreux)提供生产的A+C群脑膜炎球菌多糖疫苗，申请在我国注册，中国药品生物制品检定所与河南省卫生防疫站协作，在河南省新县进行了人群安全性与免疫原性的现场考核，现将结果报告如下该疫苗较安全，免疫原性较强，且更具免疫持久性。2000 A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗的研制2000杨丽华 (长春生物制品研究所，长春130062)李风祥(中国药品生物制品检定所， 本试验制备的A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗的理化特性及免疫特性与国内外文献报道结果一致。制备的结合疫苗可诱导出高水平的保护性A群脑膜炎球菌多糖抗体和TT抗体。结合疫苗具有很好的免疫原性和安全性。制备工艺稳定，重复性好，可批量生产。本试验为进一步临床评价结合疫苗的人群免疫效果提供了实验基础。本试验选用Tr作为载体蛋白，因为这种蛋白目前已经标准化，作为载体蛋白的同时兼有预防伤风感染的作用，而用TT蛋白对于已经建立起的免疫程序和“自然”免疫并不产生干扰 A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗的制备熊慧玲成都生物制品研究所 预防A群脑膜炎球菌引起的脑脊髓膜炎，我国目前采用A群脑膜炎球菌多糖疫苗，而疫苗接种后，小于1岁的婴儿，即使加强接种产生的抗体只能维持1年，1～1．5岁半的婴幼儿，加强后只能维持2年，1．5～2岁的幼儿，接种1针维持不到1年_l1 。wHO指出，按目前的免疫程序，婴儿在出生后5年内至少需要免疫接种4次才可提供中度抗体水平一。说明A群脑膜炎球菌多糖疫苗在婴幼儿中，尤其在2岁以下，免疫原性低，即使产生抗体，抗体水平也不能长久保持。因而提高疫苗免疫原性，使它能对各年龄组，尤其2岁以下婴幼儿提供高水平的长期保护作用，有特别重要的意义。b型流感嗜血杆菌结合疫苗的成功研制和应用给我们以深刻的启示。和流感嗜血杆菌荚膜多糖一样，A群脑膜炎球菌多糖为半抗原，为非T细胞依赖性抗原，当与蛋白结合后，可转化为T细胞依赖性抗原，可刺激机体产生高水平的保护抗体，重复接种有记忆抗体产生因此，我们进行了A群脑膜球菌多糖结合疫苗的研制，并对经中国药品生物制品检定所检定合格的连续3批 2003 流行性脑脊髓膜炎(流脑)被发现并确认已有l00多年．尽管对此病已有有效的预防和治疗措施，但它仍是一种急性传染病．而且病死率高、继续威胁着人类，尤其是儿童的身体健康。我国目前使用的预防制品是A群脑膜炎球菌多糖疫苗，该疫苗对4岁以上儿童有很好免疫效果，对幼儿免疫效果较差，保护时问较短。而脑膜炎球菌多糖与一种蛋白载体连接构成结合疫苗．可增强其对幼儿的免疫回忆反应，提高预防效果?。卫生部成都生物制品研究所已研制成功“A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗”，并由中国药品生物制品检定所、卫生部成都生物制品研究所、江苏省疾病预防控制中心联合于2002年l0月～2003年1月在江苏省射阳县进行的“A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗临床研究”已圆满结束。现将婴幼儿接种A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗的安全性报告如下本次临床试验表明，3～4月婴幼儿接种A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗具有良好的安全性，但由于该疫苗首次应用于人群，在大规模推广接种前，仍需对其安全性进一步进行观察 C群脑膜炎球菌结合疫苗的质量控制与生产的科学挑战2004 世界卫生组织(WHO)生物制品标准化专家委员会于1976年通过了脑膜炎球菌多糖疫苗的建议，并于1978年和1981年进行了修订。在临床研究中，疫苗的有效率至少达9O% ，证明其在疫苗接种计划中高度有效。然而，不能在幼婴中诱生保护性应答或免疫记忆制约了其在英国婴儿免疫接种计划中的应用。随着b型流感杆菌(Hib)结合疫苗的成功引入，C群脑膜炎球菌(MenC)荚膜多糖结合疫苗的研究取得了显著的进展。临床对照试验已证实它们在所有年龄组中均可诱生针对MenC多糖的保护性水平的抗体，并且作为T细胞依赖性抗原，能诱导免疫记忆和抗荚膜抗体的亲和力成熟。英国引入MenC结合疫苗后，证实该疫苗可提供保护性免疫。WHO已经制定了有关这些新疫苗生产和检定的建议。 脑膜炎球菌是细菌性脑膜炎和败血病的重要病原。根据荚膜多糖在化学和血清学上的不同，脑膜炎球菌可分为若干群，其中A、B、C、Y、Wl35群对人致病。A群在

双歧杆菌与乳酸菌筛选培养基

BBL培养基 双歧杆菌选择性培养基成份 蛋白胨15.0g 酵母粉2.0g 葡萄糖20.0g 可溶性淀粉0.5g 氯化钠5.0g 5%半胱氨酸10.0mL 西红柿浸出液400.0mL 吐温80 1.0mL 肝提取液80.0mL 琼脂20.0g 蒸馏水520.0mL pH7.0 MRS培养基 乳酸细菌培养基（MRS） 蛋白胨10.0 g 牛肉膏10.0 g 酵母膏 5.0 g 柠檬酸氢二铵[（NH4）2HC6H5O7] 2.0 g 葡萄糖(C6H12O6·H2O) 20.0 g 吐温80 1.0 mL 乙酸钠（CH3COONa·3H2O） 5.0 g 磷酸氢二钾（K2HPO4·3H2O） 2.0 g 硫酸镁（MgSO4·7H2O）0.58 g 硫酸锰（MnSO4·H2O）0.25 g 琼脂18.0 g 蒸馏水 1 000 mL pH 6.2~6.6 当乳酸菌生长代谢出乳酸后，会使pH下降而使颜色由绿变为黄绿，也由于pH 值降低再加上抗生素及厌氧培养的作用，所以一般的微生物不容易在此培养基上生长，因此十分容易鉴别乳酸菌。 2005-03-10 08:08 消息引用收藏分享 奉上一篇实验，以供参考！ 厌氧菌的分离和培养 目前培养厌氧微生物的简便而又有效的技术包括有：厌氧箱培养技术；厌氧罐培养技术；厌氧袋培养技术；亨盖特厌氧滚管技术。这里介绍的是亨盖特厌氧滚管技术。

亨盖特厌氧滚管技术是美国微生物学家亨盖特（Hungate）于1950年首次提出并应用于瘤胃厌氧微生物研究的一种厌氧培养技术。以后这项技术又经历了几十年的不断改进，从而使亨盖特厌氧技术日趣完善，并逐渐发展成为研究厌氧微生物的一整套完整技术。而且多年来的实践已经证明它是研究严格、专性厌氧菌的一种极为有效的技术。 亨盖特厌样滚管培养技术不仅可用于有益厌氧菌如双歧杆菌等的分离、与活菌培养计数，还可以用于有害***菌（如酪酸菌）或病原菌（如肉毒梭状芽孢杆菌）的分离与鉴定。 1材料 1.1 样品 双歧酸奶（液体）、双歧杆菌制剂（固体）。 1.2 培养基 改良MRS培养基，PTYG培养基。 1.3 仪器和器具 亨盖特厌氧滚管装置一套，厌氧管，厌氧瓶，滚管机，定量加样器。 2 流程 铜柱除氧→预还原培养基→稀释用液制备→稀释样品→滚管→培养→计数 3方法 3.1铜柱系统除氧 铜柱是一个内部装有铜丝或铜屑的硬质玻璃管。此管的大小为40—400mm，两段被加工成漏斗装，外壁绕有加热带，并与变压器相连来控制电压和稳定铜柱的温度。铜柱两端连接胶管，一端连接气钢瓶，一端连接出气管口。由于从气钢瓶出来的气体如N2、CO2和H2等通常都含有O2，故当这些气体通过温度约360℃的铜柱时，铜和气体中的微量O2化合生成CuO，铜柱则由明亮的黄色变为黑色。当向氧化状的铜柱通入H2时，H2与CuO中的氧就结合形成H2O，而CuO又被还原成了铜，铜柱则又呈现明亮的黄色。此铜柱可以反复使用，并不断起到除氧的目的。当然H2源也可以由氢气发生器产生。 3.2 预还原培养基及稀释液的制备

乳酸菌菌种的分离筛选方法解读

乳酸菌菌种的分离筛选方法乳酸细菌是一类能利用发酵糖产生大量乳酸的细菌通称。为兼性厌氧菌，杆状或球状，革兰氏阳性菌，无芽孢，不运动。营养要求高，需要提供丰富的肽类氨基酸维生素。在琼脂表面或内层形成较小的白色或淡黄色的菌落。 通常用作为有益微生物的菌种有乳酸乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、粪肠球菌、乳酸片球菌、双歧杆菌、屎肠球菌、戊糖片球菌等。 乳杆菌常用MRS琼脂作半选择培养基。当乳杆菌仅是复杂区系中的部分菌类 时，SL培养基常用作为选择性培养基。对于芽孢乳杆菌常用GYP培养基，链球菌有TYC培养基、MS培养基。M17培养基被用作乳球菌的分离培养基。 嗜酸乳杆菌属于乳杆菌属的一个种。其特性为：杆菌，两端圆，不运动，无 鞭毛。粪肠球菌为革兰氏阳性，圆形或椭圆形。 乳酸片球菌细胞呈球状，直径0.6~1.0μm，在直角两个平面交替形成四联状，一般细胞成对生，单生者罕见，不成链状排列。革兰氏阳性，不运动，兼性厌氧。在MRS培养基上菌落小，呈白色。沿洋菜穿刺线的生长物呈丝状。 乳酸菌在一般琼脂培养基上形成微小菌落，不易观察，所以分离时先富集培养并选择合适的培养基。分离培养基一般添加西红柿、酵母膏、吐温-80等物质，也常常加入醋酸盐，因醋酸盐能抑制部分细菌生长，对乳酸菌无害。 培养基中添加碳酸钙，乳酸溶解培养基中的碳酸钙形成透明圈，作为分离鉴别的依据，通过对生成的乳酸量进行性能鉴定。 乳酸菌生长繁殖时需要多种氨基酸，维生素及微氧，一般菌落比较小。分离培养基一般可添加西红柿酵母膏油酸吐温等物质，均具有促进生长作用。也常常添加醋酸盐抑制有些细菌的生长，对乳酸菌无害。 一.筛选方法： 1.溶钙圈法： 利用一些产酸类细菌在含CaCO3的培养基上产生CaCO3溶解圈，从而筛选出这些产酸类细菌，可用于乳酸菌的筛选。 其中培养基中加入CaCO3的作用是：①鉴别能产生酸的细菌；②中和产生的酸，以维持培养基的PH。 筛选过程：样品预处理→梯度稀释至10-6→选择合适的稀释度涂布→37℃培养

中国部分地区人体粪便中双歧杆菌的分离鉴定及具潜在益生特性菌株的筛选

中国部分地区人体粪便中双歧杆菌的分离鉴定及具潜在益生特 性菌株的筛选 本研究采用选择性培养基对河南、四川、西藏、云南、内蒙古和新疆等地区的18份人体粪便样品中的双歧杆菌进行了分离纯化,并采用16S rRNA基因序列分析法对分离到的29株双歧杆菌进行了鉴定。以B.animalis subsp.Iactis V9为参照,通过耐酸性、人工消化液和胆盐耐受试验,筛选出胃肠道转运过程中耐受性较好的4株双歧杆菌。 并对筛选出的双歧杆菌进行了脱脂乳发酵特性和贮藏特性的研究。试验结果表明,从18位中国部分地区健康人体粪便中分离得到29株双歧杆菌,经16S rRNA 基因序列分析法将IMAUFB064、IMAUFB065和IMAUFB091等9株菌鉴定为B. longum,其中河南6株、四川2株和新疆1株；将IMAUFB071、IMAUFB073、IMAUFB084、IMAUFB090和IMAUFB092等20株菌鉴定为B.pseudocatenulatum,其中四川9株、西藏7株、云南3株和内蒙古1株。 29株双歧杆菌中有24株在pH3.0、3.5和4.0的改良MRS培养液中生长良好,初筛出的24株双歧杆菌分别经pH3.0、2.5、2.0人工胃液消化3h后,存活率高于V9(84.97%)的菌株有2株,分别为IMAUFB084(85.98%)和MAUFB073(85.66%),占总菌数的6.90%,各菌株在不同pH值人工胃液中耐受性有显著差异 (P<0.05),随着pH值的降低,供试菌株对模拟人工胃液的耐受性也随之降低。4株复筛出的双歧杆菌在人工肠液消化8h后,其中MAUFB090的存活率为101.8%,高于V9(97.84%),MAUFB073(97.19%)、IMAUFB084(94.38%)和IMAUFB064(89.93%)都低于V9的存活率。 4株双歧杆菌均能耐受2.0%胆盐浓度,但各菌株的延迟时间差异显著

兔巴氏杆菌病有哪些类型

兔巴氏杆菌病有哪些类型 狮子兔(详情介绍) 其实很多健康的宠物兔平时就携带着巴氏杆菌病毒，只是一般在健康的状态下不会发病，而当宠物兔生病或抵抗力下降时就可能会引起该病毒的爆发，该病又可分为多种类型，在此我们来做一下介绍。 1.出血性败血症型：最急性的常无明显症状而突然死亡。生产中以鼻炎和肺炎混合发生的败血症最为多见，可表现为精神萎靡不振，食欲减退但没有废绝，体温升高，鼻腔流出浆液性、黏液性或脓性鼻液，有时腹泻。临死前体温下降，四肢抽搐，病程数小时至3天。 2.传染性鼻炎型：鼻腔流出浆液性、黏液性或脓性分泌物，呼吸困难，打喷嚏、咳嗽，鼻液在鼻孔处结痂，堵塞鼻孔，使呼吸更加困难，并出现呼噜声。由于患兔经常以爪挠抓鼻部，可将病菌带入眼内、皮下等，诱发其他病症。病程一般数日至数月不等，治疗不及时多衰竭死亡。 3.地方性肺炎型：常由传染性鼻炎继发而来。由于獭兔的运动量很小，自然发病时很少看出肺炎症状，直到后期严重时才表现为呼吸困难。患兔食欲不振、体温升高、精神沉郁，有时会出现腹泻或关节肿胀症状，最后多因肺严重出血、坏死或败血而死。 4.中耳炎型：又称斜颈病(歪头症），是病菌扩散到内耳和脑部的结果。其颈部歪斜的程度不一样，发病的年龄也不一致。有

的刚断奶的小兔就出现头颈歪斜，但多数为成年兔。严重的患兔，向着头倾斜的一方翻滚，一直到被物体阻挡为止。由于两眼不能正视，患兔饮食极度困难，因而逐渐消瘦。病程长短不一，最终因衰竭而死。 5.结膜炎型：临床表现为流泪，结膜充血、红肿，眼内有分泌物，常将眼睑粘住。 6.脓肿、子宫炎及睾丸炎型：脓肿可以发生在身体各处。皮下脓肿开始时，皮肤红肿、硬结，后来变为波动的脓肿。子宫发炎时，母体阴道有脓性分泌物。公兔睾丸炎可表现一侧或两侧睾丸肿大，有时触摸感到发热。

兔大肠杆菌病的诊治

兔大肠杆菌病的诊治 本病是由致病性大肠杆菌及其毒素引起的一种爆发性、死亡率很高的仔兔和幼兔的肠道传染病，以水样腹泻或胶冻样粪便及严重脱水为特征的传染病。如不及时诊治，会造成大批死亡。2001年7月12日隆尧县魏庄刘某饲养的400余只獭兔发生本病。经我院诊断与治疗，取得了满意效果。现报告如下。 一、发病情况 2001年7月12日，河北省隆尧县魏庄村刘某饲养的400余只獭兔，其中80只大母兔，20只大公兔，300余只仔兔、幼兔和青年兔，仔兔和幼兔突然发病并出现死亡，每天死亡10-20只左右，随后青年兔也陆续发病死亡。6天共死亡96只，死亡率为32%，7月18日到邢台市兽医院诊治。通过诊治，3天后控制死亡，5天后兔群恢复正常。 二、临床症状 病初未见任何临床症状，突然死亡，随后陆续出现精神沉郁，食欲不振，腹泻，腹部膨胀，粪便细小、成串，外包有透明、胶冻状粘液，随后出现水样腹泻。后期发生水样粪便、污浊、灰褐色、黑色且腥臭，肛门、后肢、腹部和足部的被毛被粘液及水样稀粪沾污，严重时肛门堵塞。病兔四肢发冷、磨牙、流眼，眼眶下陷，迅速消瘦、死亡。 三、病理变化 共剖检12只病死兔，皮下干燥，胃膨大、充满多量液体和气体，胃粘膜充血、出血。十二支肠、回肠、盲肠粘膜均有不同程度的充血、出血，并充满半透明胶冻样液体、并伴有气泡，有的呈红褐色水粥样，有的呈灰褐色粘液状。结肠扩张，有透明胶样粘液。肠道粘膜充血、出血、水肿。胆囊扩张、粘膜水肿。 四、实验室诊断 1、涂片镜检：无菌取胶冻涂片，革兰氏染色镜检，可见两端钝

圆的革兰氏阴性杆菌。 2、分离培养：无菌采取病死兔的肝、脾及肠内的血样物，接种于普通琼脂培养基37℃培养24h后，形成圆形、隆起、光滑、湿润、半透明浅灰色的菌落（直径约２-３mm）。挑取上述菌落接种于麦康凯培养基37℃培养24h，生长出红色菌落；接种于伊红美蓝培养基37℃培养24h，生长出黑色带金属闪光的菌落。再取红色菌落涂片，革兰氏染色，显微镜检查为革兰氏染色阴性、两端钝圆、无夹膜的杆菌。取红色菌落接种于肉汤培养基中，培养24h后，肉汤均匀混浊。 3、生化试验：将上述分离菌株分别接种于葡萄糖、乳糖、甘露醇、麦芽糖和蔗糖发酵管，结果能发酵乳糖、葡萄糖、麦芽糖和甘露醇，产酸产气，对蔗糖少量产酸，产气少。M.R.试验阳性,V-P试验阴性。三糖铁斜面穿刺后，斜面和底面均变黄。 4、动物实验：将培养24h肉汤培养物，用生理盐水1∶1稀释均匀，按0.4，0.3，0.2，0.1ml，腹腔注小鼠（体重13-15g）各4只，空白对照组4只，每只注射（生理盐水与普通肉汤1∶1稀释）0.4ml，结果24-48h后，除空白对照组4只小鼠无异常外，其余各组相继全部死亡。剖检死鼠，呈典型的大肠杆菌病的病理变化，涂片镜检及分离培养结果同上。 5、药敏试验：采用常规纸片法，本菌对恩诺沙星、诺氟沙星敏感，庆大、链霉素中毒敏感，痢特灵低敏,对青霉素不敏感。 根据流行病学、临床症状、病理剖检、实验室检验，本病确定为大肠杆菌病。 五、治疗 经药敏实验，用恩诺沙星、诺氟沙星及中药治疗，效果非常理想。 1、病兔：用2%恩诺沙星注射液，每公斤体重0.5-1ml，每日2次，肌肉注射，连用3-5天。

乳杆菌噬菌体的分离鉴定及生物学特性分析

乳杆菌噬菌体的分离鉴定及生物学特性分析乳杆菌作为公认的安全级微生物,具有促消化、抗菌、增强免疫力等多种益生功能,广泛应用于食品工业、医药工程和畜牧业,其中植物乳杆菌、干酪乳杆菌和戊糖乳杆菌较为常用。在发酵工程中,噬菌体的污染可造成不可忽视的后果,严重影响产品品质,甚至导致发酵失败。 本研究通过噬菌体富集法从酸菜中分离出两株烈性乳杆菌噬菌体,分别命名为LpeD和Lpa804,并对这两株噬菌体进行了生物学特性的鉴定。通过电镜观察,噬菌体LpeD和Lpa804均具有典型的二十面体头部和非收缩性尾部,均属于尾噬菌体目、长尾噬菌体科。 根据宿主范围测定结果,噬菌体Lpa804可感染植物乳杆菌(L.plantarum PA106和L.plantarum SC),而噬菌体LpeD可感染戊糖乳杆菌(L.pentosus KLDS1.0413)和植物乳杆菌(L.plantarumKLDSl.0344)。一步生长曲线的测定结果显示,噬菌体LpeD的潜伏期为15min,裂解期为90min,裂解量为194PFU/cell;噬菌体Lpa804的潜伏期为30min,裂解期为105 min,裂解量为221 PFU/cell。 理化因素对噬菌体的影响结果表明,噬菌体LpeD和Lpa804均对热敏感,LpeD 在56℃作用2 min全部失活,Lpa804在63℃作用2 min全部失活。噬菌体LpeD 和Lpa804在pH 4-12的环境中较为稳定,显示了较强的酸碱耐受性。 紫外线照射并不能使噬菌体LpeD和Lpa804完全灭活,二者在紫外线照射20 min后均仍有部分噬菌体颗粒存活。噬菌体LpeD和Lpa804对乙醇和异丙醇较敏感,35%乙醇作用10 min可使LpeD全部失活,25%乙醇作用10 min可使Lpa804 全部失活。 35%异丙醇作用10 min可使LpeD全部失活,25%异丙醇作用10 min可使

实验方案(双歧杆菌的分离)

1 双歧杆菌的分离 1.1 样品 取出生后20天母乳喂养健康婴儿粪便。 1.2 培养基 根据目前的双歧杆菌选择性培养基，以及X-Gal在这方面的应用。选择使用NPNL培养基，在其基础上添加X-Gal。 1.2.1 缓冲蛋白胨水溶液（BP） 成份：蛋白胨10g 磷酸氢二钠2g 葡萄糖5g 磷酸二氢钾2g 氯化钠5g 蒸馏水1000ml 制法：精确称取各种试剂，加人到1000ml的蒸馏水中，加热溶化后分装于250ml的三角瓶中，每瓶90ml，121℃，杀菌15min后置4℃的冰箱中备用。 1.2.2 选择性改良NPNL培养基（苏世彦） 成份：酵母膏5g 淀粉0.5g 蛋白胨10g L-半胱氨酸0.5g 胰蛋白胨5g 溶液A 10ml 大豆蛋白胨5g 溶液B 5ml 葡萄糖10g 溶液C 50ml 乳糖3g 琼脂 15g 吐温80 1g pH 7.2 牛肝提取液150ml 制法：将各成分准确量取后，分别加热溶化，混合摇匀后分装，121℃杀菌10min，备用。 溶液A：K2HPO4 10g、KH2PO4 10g溶于蒸馏水100ml。 溶液B：FeSO4·7H2O 0.2g、MgSO4·7H2O 4g、MnSO4·4H2O 0.135g、NaCl 0.2g溶于蒸馏水100ml。 溶液C：丙酸钠30g、硫酸巴龙霉素400mg、硫酸新霉素200mg、NaCl 6g溶于蒸馏水1000ml。 1.2.3 NPNL培养基(孙雪) 培养基成分及用量：牛肉浸汁粉(oxoid)3g，蛋白胨10g，胰蛋白酶5g，

植胨3g，酵母浸出汁5g，肝浸出汁150ml，葡萄糖10g，可溶性淀粉0.5g，溶液A 10ml，溶液B 5ml，吐温80 1g，盐酸半胱氨酸0.5g，琼脂15g，蒸馏水815ml，X-Gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D- 半乳糖苷)60mg。pH 7.2，121℃，15min 高压灭菌。 溶液A：K2HPO425g，KH2PO425g，蒸馏水250ml。 溶液B：MgSO4·7H2O 0.5g，FeSO4·7H2O 0.5g，NaCl 0.5g，MnSO40.337g，蒸馏水250ml，硫酸新霉素100μg/ml，硫酸巴龙霉素200μg/ml，萘啶酮酸15μg/ml，氯化锂3mg/ml。 1.3 分离方法 取成年人的粪便1g，放人含有9ml缓冲蛋白胨水溶液中，用液枪充分混匀，制成1:10的稀释液，摇匀后取1ml注人含有9ml缓冲蛋白胨溶液中制成1:100的稀释液，在此基础上作10-3~10-9与的稀释，由于肠道中双歧杆菌的菌数一般在109左右，所以取10-4~10-9稀释液用倾注法倒平板，每个稀释液都各取1ml分别注人到两只无菌平皿中，每个稀释度重复3个平板。待培养基凝固后倒置，将温度调至37℃进行厌氧培养48h。用缓冲蛋白胨水溶液做稀释液可以有效地保护双歧杆菌的存活，避免受外界环境因素的影响。 1.4 分离培养 在加人样品稀释液的平皿中，分别注人适量冷却至50℃左右的选择性改良NPNL培养基，然后放人37℃的恒温培养箱中厌氧培养1.4.1 培养特性与镜检特性 双歧杆菌在改良NPNL培养基上，经过厌氧培养以后，菌落直径1-2cm，圆形、凸起，表面光滑，边缘整齐，乳白色，粘稠湿润。经革兰氏染色后镜检，双歧杆菌为革兰氏阳性无芽抱杆菌，呈多形性、典型的双歧杆菌为V字型或Y型；也有直、弯、棒状、匙形等多种形态，排列成单、双、短链、X、Y、V 或栅状；其大小为2-8×0.4-0.6μm，不具英膜和鞭毛，无运动性。 培养48h 后，平板上菌落呈现深蓝色、白色、浅蓝色三种颜色。

兔的病理性解剖

兔的病理学解剖 川农大，动医11级1班，欧阳寒冰临床诊断尚不能确诊的疾病，必须对病兔或尸体进行解剖，进行病理学诊断，再结合临床症状、流行病学特点，对疾病作出确诊。 一、剖检技术 1、剖检前准备 （1）器械准备常用的剖检器械有解剖刀，外科剪、镊子、骨钳、骨剪、载玻片、搪瓷盘等。如需进行微生物检查，需准备灭菌培养皿、灭菌试管、培养基、接种棒、酒精灯。剖检人员还应准备工作服、手套、胶靴等。 （2）药品准备待解剖兔外部检查之后，为了防止剖检过程中兔毛飞扬，可用3%~5%来苏水（或石碳酸、臭药水）溶液或0.1%新洁尔灭溶液或0.05%洗必泰等消毒液侵泡尸体。组织固定液用10%甲醛或95%酒精。剖检人员的消毒用药为3%碘酊、2%硼酸、70%酒精等。 （3）记录表格及设备准备病死兔剖检记录表格，对剖检情况作出详细记录。有条件的土场应准备数码照相机或摄像机，在裒辑那过程中对尸体、病变组织进行拍摄，以便为诊断时观察。 2、剖检地点剖检最好在专门的剖检室（或兽医室等封闭场所）进行，便于清洗和消毒。如现场剖检，应选择远离兔舍和水源的场所进行。 3、剖检术式及步骤取仰卧式，腹部向上，置于搪瓷盘内或

解剖台上，四脚分开固定，腹部用消毒药消毒。 第一步，沿腹中线上起下颌部下至耻骨缝处切开皮肤，再沿中线切口向每条腿切开，然后分离皮肤。检查皮下有无出血，水肿及病变。 第二步，沿腹白线切开腹壁，用镊子挑起腹肌防止刺破肠管。检查腹水的颜色、多少和清浊度。 第三步，打开腹腔后，依次检查腹膜、肝、胆囊、胃、脾脏、肠道、胰、肠系膜、淋巴结、肾脏、膀胱和生殖器官。 第四步，用骨剪剪断两侧肋骨，朐骨。拿掉前胸廓，使胸腔暴露后，依次检查心、肺、胸膜、上呼吸道及肋骨。 第五步，必要时，打开口腔，鼻腔及脑作检查。检查颅腔时，可在枕骨与第一颈椎的关节处断头，将头与尸体分开，把头放在解剖盘上。以两内眼角连成一条线，在此直线两端向枕骨大孔各连1条线，用外科刀沿此3条直线破坏骨组织，拨开头盖骨，再钝性破坏环骨与硬膜连接的组织，去掉头盖骨，用镊子提起脑膜，用剪刀剪开，即可检查颅腔液体的数量、颜色及脑膜的状况。 4、剖检的注意事项 第一，剖检要尽早进行。因为家兔死亡后，尸体还会发生变化，过久会发生尸体腐败，从而掩盖其原来的病变，造成识别困难。另外，剖检应尽量在自然光下进行。在人工光源下，病变器官的色泽不易判断。 第二，剖检前应进行详细的调查，包括病史调查、发病经过、治疗过程、免疫预防情况等。并认真做好剖检尸体前准备，了解其营养

大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定方案

大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定方案 实验原理： 1、大肠杆菌的性质： 大肠杆菌是G--无芽孢直杆菌，在大多数培养基上表现出不同的特性。在麦康凯琼脂平板上是凸起光滑湿润的粉红菌落，革兰氏染色镜检为红色短杆菌。三糖铁琼脂上的反应为斜面和底部都变黄，产气，不产生硫化氢。生化特性为发酵葡萄糖、乳糖、甘露醇、麦芽糖，不发酵蔗糖。MR试验，吲哚试验为阳性，VP试验为阴性，不产生H2S，不能利用枸椽酸盐。半固体中沿穿刺线向四周生长。 2、沙门氏杆菌的性质： 沙门氏杆菌是G-直杆菌。在麦康凯平板上为细小半透明、圆形、无色小菌落，三糖铁斜面下层变黄色，上层仍为红色，穿刺处为变黑产生H2S。能发酵葡萄糖产酸产气，能利用枸椽酸盐，不发酵乳糖不利用蔗糖肌醇，MR阳性，VP阴性，不产吲哚，不分解尿素。 实验材料： 含有大肠杆菌和沙门氏菌的猪肝脏、培养基（琼脂平板培养基、三糖铁琼脂斜面培养基、麦康凯琼脂、生化培养基、SC）、器械（剪刀、记号笔、接种环、酒精灯、显微镜、试管、玻片、培养皿）、药品（消毒酒精、结晶紫、碘液、酸酒精、品红、松柏油） 实验内容及操作程序： 一、培养基制备： 制备普通琼脂培养基、麦康凯平板、SC增菌培养基、生化培养基，制备方法见附1.二、标本制备： （1）取新鲜猪肝脏一小块，火焰表面消毒。 （2）用浸过消毒液的剪刀剪开一个小口于消过毒的猪肝脏。 （3）用接种环在剪开的肝脏小口沾取肝脏液，分别画线于麦康凯培养基和接种于SC中，37°C恒温培养24小时。 三、细菌分离培养： （1）取出培养了24小时的麦康凯平板。挑选麦康凯平板上的凸起光滑湿润的粉红菌落染色镜检，看是否为红色短杆菌，若是，即疑似为大肠杆菌，则取其接种于另一麦康凯平板，37°C 恒温培养24小时。 （2）取出培养了24小时的SC增菌培养基，染色镜检，看是否有疑似沙门氏菌，有则取其中细菌画线接种于麦康凯平板上，37°C恒温培养24小时。 四、细菌的鉴定纯化： （1）检查疑似大肠杆菌的培养基是否长满了粉红色菌落，染色镜检。并取其分别接种于生化培养基上（葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖、肌醇、枸椽酸盐、尿素、MR、VP、H2S），并做穿刺实验于三糖铁上。37°C恒温培养24小时后观察结果。若实验结果满足预期效果，则可判定为大肠杆菌，则将其接种于普通琼脂培养基上传代培养。 （2）检查疑似沙门氏菌的平板上是否长满细菌，染色镜检，看是否满足于沙门氏菌的染色特性。并取其接种于生化培养基上，并作穿刺实验于三糖铁上，37°C恒温培养24小时后观察结果，若结果满足于沙门氏菌的生化特性，则可判定为沙门氏菌，则将其接种于普通琼脂培养基上传代培养。

乳酸菌得分离、纯化与鉴定

乳酸菌得分离、纯化与鉴定 第一部分:乳酸菌得分离、纯化 一、实验器材: 1、实验药品新鲜乳酸饮料(市售)、脱脂奶粉、蔗糖、1、6%溴甲酚绿乙醇溶液(溴甲酚绿、无水乙醇)、酵母膏、琼脂、革兰氏染液(结晶紫染液、卢戈氏碘液、95%乙醇、沙黄)、75%乙醇、香柏油、1mol/L NaOH、1mol/L HCl、碳酸钙; 0、4gNaOH固体、4、2ml浓HCL(分析纯) 、20gCaCO3固体、酵母膏20g 、琼脂30g 香柏油、脱脂奶粉100g 、蔗糖10g; 2、仪器与设备高压蒸汽灭菌锅、光学显微镜、培养箱、pH试纸、酸乳瓶、培养皿(φ9或φ12)、试管、300ml三角瓶(带玻珠)、移液管、天平、500ml锥形瓶、250ml锥形瓶、250ml烧杯。 二、实验步骤: 1、培养基配制(BCG牛乳培养基): (A)溶液:取脱脂乳粉100g,水500ml,加入1、6%溴甲酚氯乙醇溶液1ml,混合均匀后分装入三角瓶于高压蒸汽灭菌锅80℃灭菌20 min;(1、6%溴甲苯酚绿(BCG)乙醇溶液用1、6g溴甲酚绿加入20ml无水乙醇中,再加水至100ml制成) (B)溶液:酵母膏10g,水500ml,CaCO3 10g,琼脂20g,加热溶解,用精密pH试纸调节pH到6、8,分装入三角瓶后在103kPa 121℃高压蒸汽灭菌20Min。 以无菌操作趁热将(A)(B)溶液均匀混合。 2、药品配制 2、1 结晶紫:结晶紫乙醇饱与液(结晶紫2g溶于20ml 95%乙醇中)20ml,1%草酸氨水溶液80ml。将两液混匀,放置24小时后过滤即可。 2、2 卢哥氏碘液:碘1g,碘化钾2g,蒸馏水300ml。先将碘化钾溶于少量蒸馏水中,然后加入碘使之完全溶解,再加入蒸馏水300ml即成。 2、3 蕃红溶液:番红2、5g,95%乙醇100ml,溶解后存于密闭得棕色瓶中。用时取20ml与80ml蒸馏水混匀即可。 2、4 0、1%得吕氏美蓝染液:A液:美蓝0、3g,95%乙醇300ml;B液:0、01% KOH 100ml。混合A与B液即成,按1:100稀释即可。 2、4 生理盐水:称取9g氯化钠,溶解在少量蒸馏水中,稀释到1000毫升。 3、菌悬液得配制

微生物学实验报告——双歧杆菌分离

微生物学实验报告 乳酸菌分离纯化——双歧杆菌的分离纯化 2012/6/5 实验目的：从酸奶等富含乳酸菌的物质中分离到具有活性的双歧杆菌并进行初步鉴定。 实验原理：双歧杆菌是动物体肠道内的正常优势生理细菌，革兰氏阳性，无芽孢，没有运动能力，最适生长温度37℃~41℃，专性厌氧。双歧杆菌的细胞呈现多样形态，有短杆较规则形、纤细杆状具有尖细末端形、球形、长杆弯曲形、分枝或分叉形、棍棒状或匙形。单个或链状、V形、栅栏状排列，或聚集成星状。双歧杆菌的菌落光滑、凸圆、边缘完整、乳脂至白色、闪光并具有柔软的质地(7)。 因为双歧杆菌是严格厌氧细菌，所以双歧杆菌的培养条件必须无氧，且培养基要具有低氧化还原电势。培养双歧杆菌最常用的方法是亨盖特厌氧滚管法(1, 5, 7)，此外还有厌氧箱法，厌氧袋法和厌氧罐法等。亨盖特厌氧滚管法是亨盖特（Hungate）于1950年发展起来的一套严格厌氧微生物的培养技术，主要原理是利用铜柱氧化除氧的滚管分离纯化法。亨盖特厌氧滚管法的优点是可以实时检查培养物，无氧效果好且花费不高，但需要专门的仪器和技术性很强的操作。本实验采用的简易厌氧罐法是一种操作简单且成本很低的方法，主要原理是利用焦性没食子酸除去厌氧罐内的氧气。该方法的缺点是焦性没食子酸与NaOH反应过程中会产生一定量的NO，可能不利于细菌的生长；此外，过量的NaOH 会将厌氧罐中的CO2一起除掉，而CO2对多数厌氧菌的生长有促进作用。另外，在同一个培养皿上接种好氧细菌（如大肠杆菌和枯草杆菌）能加强除氧的效果。 本实验所用的培养基参考了NPNL培养基(6)和BS培养基的配方，其中鱼粉、牛肉膏、酵母浸粉、胰蛋白胨的作用是提供氮源、维生素和生长因子，葡萄糖和乳糖为乳酸菌发酵提供糖类底物，磷酸氢二钾和磷酸二氢钾为酸碱缓冲剂，硫酸亚铁、硫酸锰为乳酸菌提供生长因子，氯化钠维持均衡的渗透压。如果在培养基中加入一定浓度的抗生素，比如硫酸卡那霉素（75μg/ml）、硫酸新霉素（30-200μg/ml）、硫酸巴龙霉素（20-200μg/ml）、萘啶酮酸（15或80μg/ml）、氧化锂（3mg/ml）、丙酸钠（10或15g/L）、山梨酸（0.4g/L）等，培养基就成为双歧杆菌的选择性培养基(7)。实验材料：蒙牛冠益乳（含bb-12双歧杆菌），伊利酸牛奶（ABLS益生菌），佳宝、光明原味酸牛奶，双歧杆菌乳酸菌三联活菌片（含长型双歧杆菌Bifidobacterium longum），枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis） 实验方法： 1.培养基 双歧杆菌琼脂培养基【蛋白胨（鱼粉）10.0g，牛肝浸粉5.0g，牛肉膏3.0g，酵母浸粉5.0g，胰蛋白胨8.0g，可溶性淀粉0.5g，磷酸氢二钾1.0g，磷酸二氢钾 1.0g，葡萄糖10.0g，乳糖3.0g，L-半胱氨酸0.5g，琼脂15g，吐温80 1g，溶液A （FeSO4·7H2O 0.2g，MgSO4·7H2O 4.0g，MnSO4·4H2O 0.135g，NaCl 0.2g 于100ml蒸馏水定容）10ml，蒸馏水定容至1L】 枯草芽孢杆菌LB琼脂培养基【胰蛋白胨10g/L，酵母浸粉5g/L，Nacl10g/L，琼脂粉15g/L】 2.简易厌氧罐法 将双歧杆菌琼脂培养基倒入培养皿中，待培养基冷却后，先用接种环取LB琼脂培养基上生长的枯草芽孢杆菌菌落接种在培养皿一侧，再于另一侧划线接种酸奶或三联活菌片的稀释液，按照每L容积1.0g 焦性没食子酸、10%NaOH溶液10ml加入厌氧罐后，立即以凡士林和胶带密封，置于37℃恒温培养2-3天。 图1. 实验中使用的简易厌氧罐

兔大肠杆菌病

本病是由致病性大肠杆菌及其毒素引起的一种爆发性、死亡率很高的仔兔和幼兔的肠道传染病，以水样腹泻或胶冻样粪便及严重脱水为特征的传染病，如不及时诊治，会造成大批死亡。今年7月10日河北省威县某饲养场饲养的500余只獭兔发生本病。经邢台市兽医院诊断与治疗，取得了满意效果。 发病情况 今年7月10日，河北省威县某饲养场饲养的500余只獭兔，其中80只大母兔，20只大公兔，400余只仔兔、幼兔和青年兔，仔兔和幼兔突然发病并出现死亡，每天死亡20只左右，随后青年兔也陆续发病死亡。6天共死亡128只，死亡率为32%，7月16日到邢台市兽医院诊治。通过诊治，3天后控制死亡，5 天后兔群恢复正常。 临床症状 病初未见任何临床症状，突然死亡，随后陆续出现精神沉郁，食欲不振，腹泻，腹部膨胀，粪便细小、成串，外包有透明、胶冻状粘液，随后出现水样腹泻。后期发生水样粪便、污浊、灰褐色、黑色且腥臭，肛门、后肢、腹部和足部的被毛被粘液及水样稀粪沾污，严重时肛门堵塞。病兔四肢发冷、磨牙、流眼，眼眶下陷，迅速消瘦、死亡。 根据流行病学、临床症状、病理剖检、实验室检验，本病确定为大肠杆菌病。 治疗 经药敏实验，用恩诺沙星、环丙沙星及中药治疗，效果非常理想。 1.病兔：用恩吉诺（主要成分：恩诺沙星等）注射液，每公斤体重0.5-1ml，每日2次，肌肉注射，连用3天。 2.病兔群与健康群饲料内混喘痢杀（主要成分：环丙沙星等）按说明饲喂，连用5天。 3.应用一些收敛止泻的中草药治疗：方剂为郁金45g、银花45g、连翘45g、大黄50g、栀子20g、诃子 35g、白芍20g、黄芩20g、黄柏20g，水煎服（此方剂供本场500只左右的兔一天服用）连用3天。采取以上治疗措施后3天控制死亡，5天兔群恢复正常。 分析与讨论 1.大肠杆菌在自然界分布很广，又经常存在于兔的肠道内，在正常情况下不引起发病。当饲养管理不良，气候环境突变或其他疾病等协同作用时，导致肠道菌系紊乱，仔兔、幼兔抗病力降低，即引起发病。病兔体内排出的大肠杆菌，其毒力增强，污染饲料、饮水与环境，又经消化道感染其他健康兔，引起流行，造成大批死亡。所以控制本病的发生必须以预防为主，平时要加强饲养管理，注意通风换气和环境卫生消毒，给予稳定全价平衡饲料，及时发现随时隔离，将会有助于控制和消除本病。

食品中双歧杆菌检验方法

食品中双歧杆菌检验方法 环凯针对目前乳制品行业及质量监测单位检验双歧杆菌的需求及情况，对双歧杆菌检验相应的培养基进行了改进，使得双歧杆菌检出率较之前有很大的改进。扩充并完善了相关的微生物检测试剂，使得技术操作人员能更准确、快捷的检测出目标菌。 环凯依据GB 4789.34-2012食品卫生微生物学检验双歧杆菌检验，推出成套的双歧杆菌检验解决方案，为生产企业及检验单位提供方便。 图1：GB 4789.34-2012双歧杆菌检验流程图 表1：实验操作所用培养基及生化试剂 功能阶段实 验 序 产品序 号 产品名称规格类别

号 稀释液1 CP0630 生理盐水 225mL× 10袋 盒（袋装） 平板分离2 027330 双歧杆菌琼脂培养基（BBL 琼脂培养基） 250g 瓶（干粉） 生理生化 3 029010 革兰氏染色液 10mL×4 支 盒 4 029161 过氧化氢酶试剂 2mL×10 支 盒（西林 瓶） 5 027340 PYG液体培养基基础250g 瓶（干粉）SR0300 PYG液体培养基配套试剂 （A、B各一支添加于100 ml 基础培养基中） 2种×5支 /盒 盒（西林 瓶） 6 027350 TPY液体培养基250g 瓶（干粉） 7 029010 革兰氏染色液 10mL×4 支 盒 8 029080 甘油 2mL×10 支 盒（西林 瓶） 9 075060 D-阿拉伯糖20支 盒（西林 瓶） 10 075400 D-核糖20支 盒（西林 瓶） 11 075070 D-木糖20支 盒（西林 瓶） 12 075080 D-半乳糖20支 盒（西林 瓶） 13 075010 D-葡萄糖20支 盒（西林 瓶） 14 075550 D-果糖20支 盒（西林 瓶） 15 075380 D-甘露糖20支 盒（西林 瓶） 16 075110 L-鼠李糖20支 盒（西林 瓶） 17 075100 卫矛醇20支 盒（西林 瓶） 18 075120 肌醇20支 盒（西林 瓶）

家兔的一般解剖程序及提示病

兔病解剖检查程序 1、病理剖检方法 取仰卧式，腹部向上，置于搪瓷盘内或解剖台上，四脚分开固定，腹部用消毒药消毒。沿腹中线上起下颌部下至耻骨缝处切开皮肤，再沿中线切口向每条腿切开，然后分离皮肤。检查皮下有无出血，水肿及病变。沿腹白线切开腹壁，用镊子挑起腹肌防止刺破肠管。检查腹水的颜色、多少和清浊度。打开腹腔后，依次检查腹膜、肝、胆囊、胃、脾脏、肠道、胰、肠系膜、淋巴结、肾脏、膀胱和生殖器官。用骨剪剪断两侧肋骨，朐骨。拿掉前胸廓，使胸腔暴露后，依次检查心、肺、胸膜、上呼吸道及肋骨。必要时，打开口腔，鼻腔及脑作检查。 1、兔的解剖 (1)将已处死的家兔腹面朝上置于解剖盘上，用水湿润腹中线的毛，用解剖剪在腹部开一V形小口，再向后将皮肤剪开至泄殖孔前缘，向前剪开皮肤至下颌，然后用镊子提起皮肤，用解剖刀向左右两侧剥离皮肤与皮下肌肉。 (2)用镊子提起腹壁，用解剖剪剪开一小口，再沿腹中线剪开腹壁（向前至胸骨剑突，向后至泄殖孔前缘），用骨剪剪断胸骨骨侧的肋骨，移去胸骨，打开腹腔。 （3）将内脏的各系统（消化系统:口腔、食管、嗉囊、由肌胃、腺胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠和直肠、肝脏、胆管以及胰脏。循环系统：心脏、脾脏以及血管等。呼吸系统：肺脏、气管、支气管、鼻、气囊等。泌尿系统：肾脏、输尿管、泄殖腔。生殖系统：卵巢、输卵管、子宫等）取出观察有无病变的发生。 2、检查内容及提示相应疾病 （1）外部检查在剥皮之前检查尸体的外表状态。检查内容包括品种、性别、年龄、毛色、特征、体态、营养状况以及被毛、皮肤、天然孔、可视粘膜等参照上面检查方法），注意有无异常，同时注意尸体变化（尸冷、尸僵、有无腐败等），以判定死亡的时问、体位。若体表脱毛、结痂提示疥螨病、皮肤毛癣菌；体毛污染提示由球虫病、大肠杆菌病、魏氏梭菌病等引起的拉稀。 （2）皮下检查主要检查皮下有无出血、水肿、炎性渗出、化脓、坏死、色泽等。④皮下出血提示兔病毒性出血症；皮下组织出血性浆液性浸润提示兔链球菌病；皮下水肿，可提示粘液瘤病；颈前淋巴结肿大或水肿提示李氏杆菌病。②皮下化脓病灶提示葡萄球菌病、兔痘、多杀性巴氏杆菌病；乳房和腹部皮下结缔组织化脓，脓汁乳白色或淡黄色油状，则提示化脓性乳房炎。⑧皮下脂肪、肌肉及粘膜黄染提示肝片吸虫病。 （3）上呼吸道检查主要查鼻腔、喉头粘膜及气管环间是否有炎性分泌物、充血和出血。①鼻腔内有白色粘稠的分泌物提示巴氏杆菌病、波氏杆菌病等；鼻腔出血提示中毒、中暑、兔病毒性出血症等。②鼻腔流浆液性或脓性分泌物则提示巴氏杆菌病、波氏杆菌病、李氏杆菌病、兔痘、绿脓杆菌病等。③喉头、气管