当前位置：文档库 › 母种培养基制作

母种培养基制作

实验二武陵山野生食用菌母种的制作与培养

一.目的

1.了解食用菌菌种的来源，菌种的分离方法。

2.掌握PDA培养基的配制、分装、灭菌的方法和食用菌菌种的培养方法。

3.熟悉和掌握无菌操作的原理和操作方法。

二.原理

首先是制作菌种，即通过孢子或组织分离出菌丝体，菌丝体扩大繁殖成为生产菌种；其次是将菌种接种于基质中，生产出食用菌的子实体。食用菌菌种是食用菌菌种生产和科研工作的基本材料。食用菌生产的菌种来源于野生食用菌资源，我国丰富的食用菌资源为我国食用菌产业的发展奠定了坚实的基础。食用菌菌种的最初来源是来自于野生食用菌资源，采用孢子或组织分离法分离得到食用菌菌种，然后把该菌种进行人工驯化、菌种选育，得到具有生产价值的食用菌菌种。母种是食用菌生产的经菌丝体，菌丝体扩大繁殖成为生产菌种；而该过程必须在无菌环境中以无菌操作进行，以防杂菌污染。一般在接种箱，无菌室或超净工作台上进行接种。

接种前要对环境进行消毒，一般是用37%~40%甲醛溶液于接种前按5ml/m3 的量熏蒸半小时。也可用紫外灯照射半小时，以杀死空气中的微生物。

适合食用菌生长繁殖的混合培养料称培养基，由于不同的食用菌生长繁殖需要相应的营养条件及适宜的酸碱度。因此，在配制培养基

时，还要根据所使用的配方，按次序配制培养基，并调节pH等。在液体培养基中加入琼脂等凝固剂后，就可制成试管斜面或在培养皿内倒成平板，成为用途广泛的食用菌母种培养基。

三.实验材料

1.野生食用菌标本。

2.量筒、试管、玻棒、铝锅、电炉、天平、高压灭菌锅、超净工作台、接种钩、酒精灯、火柴、蒸发皿、甲醛、高锰酸钾、70%酒精、无菌平皿

3.培养基配方

（1）PDA培养基马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂18~25g 和水1000ml

（2）完全培养基蛋白胨2.0g、酵母膏2.0g、葡萄糖20g 、MgSO4H2O 0.5g、K2HPO4 1.0g、KH2PO4 1.0g、琼脂20g、水1000ml 四.方法与步骤

（一）培养基的配制

1.把马铃薯洗干净，去皮，挖掉芽眼，切成大约1cm3 的小方块，

在天平上称取200g。

2.把切好的马铃薯小块倒入铝锅中，加水1000ml，煮沸15~30min。

3.用纱布（2~3层）过滤。

4.滤液加水至1000ml，加入蔗糖及琼脂。

5.加热使琼脂完全熔化。

6.趁热加入分装筒。分装于试管中（装量为1/5），塞棉花塞。

7.高压灭菌（121℃,30分钟）后，排成斜面。

（二）菌种分离

1.洗净手并用75%酒精消毒。

2.用75%酒精棉球对采集的野生食用菌子实体表面擦洗（消毒）。

3.用手术刀将食用菌子实体菌盖延菌柄方向切去多余部分，同时切去菌柄极处1cm左右，然后将经上述处理后的菌柄置于无菌培养皿处，用75%酒精浸泡1~2min。

4.用无菌镊子夹住子实体用无菌水冲洗4~5次，重复3.4操作一次。

5.将手术刀，镊子（夹住菌柄）在火焰上灼烧，灭菌冷却。

6.用镊子夹住菌柄，将菌柄切下1cm小段，然后将小段切成长方体，灼烧冷却，进一步切成绿豆大小的方块。

7.灭菌接种针接种。

（三）菌种培养

食用菌母种培养一般放在培养箱中，温度控制视所用菌种而定。一般平菇以22~25℃为宜。

五.高压锅的使用方法

高压锅的使用方法

（1）将待灭菌的物品（如：试管）放在灭菌筒内，包与包之间应留有适当的空隙，以利蒸汽流畅，达到彻底灭菌。

（2）盖上软管插入灭菌桶的槽内，上下对齐，对角拧紧螺栓，切勿漏气。

（3）加热。水沸腾之后，排尽锅内空气（当压力表的指针指到

0.51kg/cm2）时，打开放气阀放气，进行两次放气阀，升压。

（4）待压力达到要求时，保持稳定，并开始计算时间。

（5）达到规定的灭菌时间后，关闭电源，让其自然降压冷却。

（6）待压力完全降到“0”后，松动对角螺栓，取下盖子，从灭菌桶内取出材料。

（7）若灭菌物为试管，则应立即放入特制的木箱内排成斜面。

（8）若灭菌锅用毕后，应把锅内的水倒掉，以免日久腐蚀。

六.作业

P396 1，2，3

MS培养基的作用

MS培养基的作用植物组织培养中常用的一种培养基是ms培养基。 ms培养基的配制步骤这样每次使用时，取其总量的1/20(50ml)或1/200(5ml)，加水稀释，制成培养液。现将制备培养基母液所需的各类物质的量列出，供配制时使用。大量元素(母液Ⅰ)mg/l nh4no333000 kno338000 cacl2·2h2o8800mgso4·7h2o7400kh2po43400微量元素(母液Ⅱ)ki166h3bo31240mnso4·4h2o4460znso4·7h2o1720na2moo4·2h2 o50cuso4·5h2o5cocl2·6h2o5铁盐(母液 Ⅲ)feso4·7h2o5560na2-edta·2h2o7460有机成分(母液Ⅳ)Ⅳa肌醇20000Ⅳb烟酸100盐酸吡哆醇(维生素b6)100盐酸硫胺素(维生素

b1)20甘氨酸400以上各种营养成分的用量，除了母液Ⅰ为20倍浓缩液外，其余的均为200倍浓缩液。上述几种母液都要单独配成1l的贮备液。其中，母液Ⅰ、母液Ⅱ及母液Ⅳ的配制方法是：每种母液中的几种成分称量完毕后，分别用少量的蒸馏水彻底溶解，然后再将它们混溶，最后定容到1l。母液Ⅲ的配制方法是：将称好的feso4·7h2o和na2-edta·2h2o 分别放到450ml蒸馏水中，边加热边不断搅拌使它们溶解，然后将两种溶液混合，并将ph调至5?5，最后定容到1l，保存在棕色玻璃瓶中。各种母液配完后，分别用玻璃瓶贮存，并且贴上标签，注明母液号、配制倍数、日期等，保存在冰箱的冷藏室中。 ms培养基中还需要加入：2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-d)、萘乙酸(naa)、6-苄基嘌呤(6-ba)等植物生长调节物质，并且分别配成母液(0?1mg/ml)。其配制方法是：分别称取这3种物质各10mg，将2，4-d

食用菌母种制作-实验一

实验一食用菌母种制作一、目的要求： 1、了解母种培养基制作过程，理解灭菌原理； 2、掌握母种培养基的制备方法； 3、了解无菌操作基本原理，掌握母种的无菌接种培养方法。 4、了解和掌握食用菌组织分离法的方法步骤； 5、熟练分离出栽培用菌种。二、主要仪器设备及药品材料：灭菌锅、超净工作台、酒精灯、电炉、铝锅、漏斗、纱布、菜刀、砧板、烧杯、捆扎绳、硅胶试管塞、试管（18x180mm）、手术刀、镊子、75%酒精、马铃薯、葡萄糖、琼脂、平菇子实体。三、实验步骤与方法: ①培养基的制作 1 PDA培养基配方马铃薯200克,葡萄糖20克,琼脂20克,水1000毫升. 2. 母种培养基的配制 (1)熬制。马铃薯洗净，挖芽去皮。称取200克，切成玉米大小颗粒或薄片。量筒量取1000毫升水，铝锅中煮沸后记时30分钟。四层纱布过滤于量杯中。滤液倒入锅中文火加热，加入葡萄糖和琼脂，不断搅拌，直到琼脂溶化。补足水量至1000毫升。

(2)分装试管。将熬制的培养基用小漏斗趁热分装。培养基高度为试管长度的1/5左右，注意避免培养基沾于试管口外。分装完成后，盖紧硅胶塞。（3）捆把。7支试管为一捆，用牛皮纸包裹试管口，用捆扎绳扎紧。贴上标签，准备灭菌。（4）灭菌。注意加足水量和排气，灭菌完成后降压不能太快。（5）摆斜面，培养基长度约为试管长度的1/2。斜面试管上覆盖洁净的厚毛巾或几层纱布，防止试管产生过多的冷凝水。 ①菌种分离与培养（1）种菇选择。选取无杂菌感染，无病虫害，出菇均匀，适应性强的子实体，要求个体健壮，朵大肉厚，外形规整，出菇早，约七八成熟的新鲜子实体。子实体采收后切去大部分菌柄，放入干净器皿备用。（2）母种分离（组织分离法）。在分离前用75%的酒精棉球擦菇体进行表面消毒，在超净工作台将子实体撕开，用消毒刀片在菌盖与菌柄交接处的组织上取一小块（绿豆大小）移至试管斜面培养基的适当位置，迅速塞上硅胶塞。将分离的试管放在室避光培养7-8天，检查菌丝生长情况。四、实验结果每人制作平菇母种一支。记录母种菌丝的生长情况。五、作业 1.食用菌菌种分离有哪些方法？实际生产中最常用的方法是哪一种？该方法有何优点？

几种常见培养基作用

1.中国蓝平板：含有牛肉粉、蛋白胨、乳糖、琼脂、氯化钠、中国蓝、玫瑰红等成份。是一种弱选择性（亦有学者称为无抑制性）选择培养基。成份中的中国蓝为指示剂，玫瑰红为弱抑制剂，仅能抑制革兰阳性菌生长，而对大肠杆菌没有抑制作用，发酵性革兰阴性杆菌因分解乳糖能力不同，在此平板上的菌落颜色不同，便于鉴别菌种。根据菌落形态，可做出相应的处理或报告。例如：大肠埃希菌菌落呈蓝色；痢疾志贺菌呈淡红色；鼠伤寒沙门菌呈淡红色。 2.巧克力平板：普通营养琼脂成份添加进氯化血红素，万古霉素，辅酶A。用途：除可以分离奈瑟菌，嗜血杆菌外，由于加入了万古霉素，可抑制绝大多数的革兰阳性菌的生长，在分离培养上具有重要意义，不能用血平板来替代。巧克力平板含有嗜血杆菌生长需要的营养因子X因子和V因子。其原理为：绵羊血中的V因子通常处于被抑制状态，加热到80～90℃12Min即可破坏红细胞膜上的不耐热抑制物，可使V因子释放，故嗜血杆菌在加热的血琼脂培养基即巧克力琼脂培养基上生长较佳。 3. TCBS：含酵母膏粉蛋白胨氯化钠柠檬酸钠硫代硫酸钠胆酸钠牛胆粉蔗糖柠檬酸铁溴麝香草酚兰麝香草酚兰琼脂；其中：氯化钠可刺激弧菌的生长；蔗糖是可发酵的糖类；胆酸钠、牛胆粉、硫代硫酸钠和柠檬酸钠及较高的pH（8.6）可抑制革兰氏阳性菌和大肠菌群；霍乱弧菌对酸性环境比较敏感，因此该pH值可增强其生长；硫代硫酸钠与柠檬酸铁反应作为检测硫化氢产生的指示剂；溴麝香草酚兰和麝香草酚兰是pH指示剂。利用指示剂来区分是否发酵蔗糖：副溶血性弧菌不发酵蔗糖，菌落呈蓝绿色。霍乱弧菌发酵蔗糖产酸，菌落呈黄色。TCBS常用于致病性弧菌的选择性分离，是GB2008、SN标准指定培养基。 4.MAC平板：即麦康凯琼脂培养基，用于大肠杆菌和大肠菌群的分离培养(05药典)，主要成分：蛋白胨脙胨猪胆盐(或牛、羊胆盐) 氯化钠琼脂乳糖1%结晶紫水溶液0.5%中性红水溶液。麦康凯平板的原理：利用胆盐来抑制革兰阳性细菌的生长，而对伤寒等沙门菌有促进生长的作用．利用乳糖发酵，中性红的颜色可把分解乳糖和不分解乳糖的细菌区别开．沙门菌及志贺菌呈无色菌落，大肠埃希菌呈桃红色菌落． SS培养基 2.原理培养基中牛肉膏、蛋白胨等为营养物;煌绿、胆盐、硫代硫酸钠、枸橼酸钠等抑制非病原菌生长,而胆盐能促进某些病原菌生长。因大肠埃希菌等能迅速分解乳糖产酸并与胆盐结合成胆酸,故形成中心混浊的粉红色菌落;病原菌不能分解乳糖。菌落呈透明无色,枸橼酸铁能指示硫化氢的产生,使菌落中心呈黑色。硫代硫酸钠有缓和胆盐对志贺菌及沙门菌的有害作用并中和煌绿和中性红染料的毒性作用,且能使大肠埃希菌的红色菌落颜色鲜明。 3.用途用于分离肠道致病菌。 SS琼脂培养基是分离沙门菌及志贺菌属的强选择性培养基,它对大肠埃希菌有较强的抑制作用,而对肠道病原菌则无明显抑制作用。因此,可以增加粪便等标本的接种量,从而提高病原菌的检出率,是目前公认比较满意的培养基。附注:大肠埃希菌属细菌在此培养基虽不易生长,但亦不被杀灭,故挑选病原菌菌落时,应仅挑取菌落的中心部分,否则易将其四周的杂菌一并挑入,影响结果。

培养基制备的基本方法和注意事项

培养基制备的基本方法和注意事项 1.培养基配方的选定同一种培养基的配方在不同着作中常会有某些差别。因此，除所用的是标准方法，应严格按其规定进行配制外．一般均应尽量收集有关资料．加以比较核对．再依据自己的使用目的加以选用，记录其来源。 2 ．培养基的制备记录每次制备培养基均应有记录，包括培养推各称，配方及其来源．和各种成份的牌号。最终pH 值、消毒的温度和时间制各的日期和制备者等，记录应复制一份，原记录保存备查，复制记录随制好的培养基一同存放、以防发生混乱。 3.培养基成分的称取培养基的各种成分必须精确称取并要注意防止错乱．最好一次完成，不要中断。可将配方置于傍侧，每称完一种成分即在配方上做出记号，并将所需称取的药品一次取齐，置于左侧，每种称取完毕后，即移放于右侧。完全称取完毕后．还应进行一次检查。 4.培养基各成份的混合和溶化培养基所用化学药品均应是化学纯的。使用的蒸煮锅不得为铜锅或铁锅，以防有微量铜或铁混入培养基中，使细菌不易生长。最好使用不锈钢锅加热溶化．也可放入大烧杯或大烧瓶中置高压蒸汽灭菌器或流动蒸汽消毒器中蒸煮溶化。在锅中溶化时、可先用温水加热并随时扰动，以防焦化、如发现有焦化现象、该培养基即不能使用，应重新制备。待大部分固体成分溶化后，再用较小火力使所有成分完全溶化．迄至煮沸。如为琼脂培养基，应先用一部分水将琼脂溶化，用另一部分水溶化其它成分，然后将两溶液充分混合。在加热溶化过程中，因蒸发而丢失的水分，最后必须加以补足。 5.培养塞pH 的初步调整培养基各成分完全溶解后，应进行pH 的初步调正，因培养基在加热消毒过程中、pH 会有所变化，例如，牛肉浸液约可降低.而肠浸液pH 却会有显着的升高。因此，对这个步骤，操作者应随时注意探索经验、以期能掌握培养基的最终pH ，保证培养基的质量。 pH 调正后，还应将培养基煮沸数分钟，以利培养基沉淀物的析出。

培养基成分及其作用

培养基成分及其作用植物生长发育需要多种营养和生长调节物质，当其缺乏时，生长发育受阻，形态不正常。在植物组织快繁过程中，培养物生长发育所需的营养和生长因子，主要靠培养基供给。因此，完全培养基的成分除了水分外，还要包括无机营养、有机物营养、生长调节物质及其他附加物等。一、无机营养物无机营养物即无机盐是植物生长发育所必需的，根据植物对无机盐需要的多少，将其分为大量元素和微量元素。 1. 大量元素大量元素在植物体内含量占干物重的0.1-10%，其浓度一般大于0.5mmol/L，包括氮(N)、磷(P)、钾(K)、钙(Ca)、镁(Mg)、硫(S)，若加上碳(C)、氢(H)、氧(O)，则有9种元素。在离体培养中，其C、H、O三元素是从人工加入的糖类获得的，H、O元素也可以从培养基所含的水分中获得，而其余6种矿质元素要从加入的适量的无机盐类来获取。无机氮常以硝态氮(如KNO3)和铵态氮(如NH4NO3)两种形式供应，多数培养基都是二者兼而有之。 2. 微量元素植物所需的微量元素包括铁(Fe)、硼(B)、锰(Mn)、铜(Cu)、锌(Zn)、钼(Mo)、氯(Cl)等，植物对其需要量极微，在植物体内含量占干物重的0.01%以下，起生长发育所需的浓度一般小于0.5mmol/L，稍多则产生毒害。碘(I)虽不是植物生长的必需元素，但几乎在所有的培养基中都含有碘元素，有些培养基还加入了钴(Co)、镍(Ni)、钛(Ti)、铍(Be)，甚至铝(Al)等元素。 3. 铁盐铁是用量较多的一种微量元素，是许多重要氧化还原酶的组成成分，在植物叶绿素的合成过程中起到重要的作用。若以硫酸铁和氯化铁为供铁源，培养基的pH值会达到5.2以上，形成氢氧化铁沉淀，使培养物无法吸收而出现缺铁症，故在培养基配制时，常用硫酸亚铁和EDTA二钠配成螯合态铁，成为有机态铁方被培养物吸收和利用;也可用EDTA铁盐，作为铁的供应源。这些元素参与培养物机体的建造，构成植物细胞中的核酸、蛋白质、叶绿体、酶系统和生物膜所必需的元素。二、有机营养成分

微生物培养基种类大全

摘要：1、营养琼脂（普通琼脂）成份：牛肉浸液（或其它浸液，消化液或肉膏汤）100毫升琼脂（视天气，琼脂质量而定）制法：将上物加热溶解，补足水，调ph至7．6，过滤分装121℃，高压灭菌15分钟。用途：作普通琼脂平皿。2、血琼脂平板（BA）制法：取营养琼脂（PH7．6），加热使其溶解待冷至45-50℃，以灭菌操作于每100毫升营养 1、营养琼脂（普通琼脂) 成份：牛肉浸液（或其它浸液，消化液或肉膏汤) 100毫升琼脂（视天气，琼脂质量而定) 制法：将上物加热溶解，补足水，调ph至7．6，过滤分装121℃，高压灭菌15分钟。用途：作普通琼脂平皿。 2、血琼脂平板（BA) 制法：取营养琼脂（PH7．6)，加热使其溶解待冷至45-50℃，以灭菌操作于每100毫升营养琼脂加灭菌脱纤维羊血或兔血5-10毫升,轻轻摇匀，立即倾注于平板或分装试管，制成斜面备用。用途：1．一般棉拭子均接种此培养基。 2．尿液，脓液 3．分离细菌标本用。 3、基础培养基（肉膏汤BB) 成份：蛋白胨10克牛肉膏5克氯化钠5克水1000毫升制法：将以上各物称好，加水煮沸溶解，用1NNOH校正PH至7．6，过滤分瓶，121℃高压灭菌，20分钟备用。用途：1 作耐药试验，增菌用分装小管。 2 作普通琼脂斜面。 4、血液培养基（大管肉汤培养基) 成份：1 新鲜牛肉浸液1000毫升 2 PABA（对氨基苯甲酸〔相当于10mg/毫升〕) 1g% 1毫升 3 MgSO 4 [相当于0．493/100毫升] 49．3% 1毫升 4 枸椽酸钠0．3g 制法：1 将1号，4号混合液，2号，3号液分装高压灭菌。

2 取灭菌1，4号混合液用无菌法加入PABA，MgSO4，再分管，行无菌试验三天方可使用。用途：作血，骨髓培养用。 5、肠道杆菌培养基（伊红美兰琼脂) 成份：蛋白胨10克乳糖10克氯化钠5克琼脂25（22)克水1000毫升2%伊红溶液20毫升 0．5%美兰溶液20毫升制法：将蛋白胨，氯化钠琼脂称好，加水1000毫升使溶解，校正PH7．4过滤，补足失水，加入2%伊红溶液20毫升，0．5%美兰溶液20毫升，（115℃高压20分钟)，冷却至50℃左右倾注平板，凝固后存冰箱备用。（高压以后方可再加乳糖) 用途：用作分离沙门氏，志贺氏菌属，也作菌群调查。 1 6、罗文斯坦培养基成份：磷酸二氢钾2．4克硫酸镁0．24克枸椽酸钠0．6克天门冬素3．6克纯甘油（丙三醇) 12毫升水600毫升马铃薯粉30克鸡蛋1000毫升（约3公斤) 2%孔雀绿水溶液20毫升制法：1 除鸡蛋外（还有孔雀绿)。可将其它物品称好，放入大三角瓶包扎好，高压灭菌。 2 鸡蛋用75%酒精泡30分钟，灭菌法打蛋，倒入盛有玻璃珠的灭菌三角烧瓶内充分将鸡蛋摇散。 3 将各成份按比例配好，分装每管约5毫升。 4 间歇灭菌第一次90℃1小时，第二次80℃半小时，第三次80℃半小时（或放85℃烤箱内连续二次)。质控标准： 1 灭菌试验合格。 2 接种结核杆菌要求两星期生长良好。用途：作结核分枝杆菌培养用。

各种培养基的制作方法

配方一萨氏（Sabouraud's）培养基蛋白胨10克琼脂20克麦芽糖40克水1000毫升先把蛋白胨、琼脂加水后，加热，不断搅拌，待琼脂溶解后，加入40克麦芽糖（或葡萄糖），搅拌，使它溶解，然后分装，灭菌，备用。 1.营养肉汤培养基牛肉膏 0.3克蛋白胨 1.0克 NaCl 0.5克水 100毫升 pH 7.0～7.2 在烧杯中加水，称取牛肉膏、蛋白胨和NaCl，加热溶化后，调节pH值至7.0～7.2。分装，加棉塞，高压蒸汽灭菌即成。常用于培养细菌。 2.营养琼脂培养基在营养肉汤培养基中增加20克琼脂即成。常用于培养细菌。 3.肉汁蛋白胨液体培养基牛肉 500克蛋白胨 10克 NaCl 5克 pH 7.1～7.2 取新鲜牛肉500克，去净脂肪、筋腱后，绞碎或剁碎，加水1000毫升浸泡，15℃下放置12小时或50℃下放置半小时。用纱布将肉汁过滤，补足失水。向肉汁中加入蛋白胨和食盐。将肉汁加热，放入苏打（碳酸钠）至红色，调整pH值。分装，高压蒸汽灭菌。将上述已灭菌的培养基用棉花滤去凝集的蛋白质，制成液体培养基，如需制成固体培养基，可在每100毫升液体中加入2克琼脂，加热溶化后，分装，再次进行高压蒸汽灭菌。常用于培养细菌。 4.高氏一号培养基（淀粉琼脂培养基）可溶性淀粉 2克 K2HPO4 0.05克 MgSO4·7H2O 0.05克 KNO3 0.1克 NaCl 0.05克

FeSO4 0.001克琼脂 2克水 100毫升 pH 7.2～7.4 在烧杯中加水95毫升，加热至沸腾，取可溶性溶粉2克，用5毫升水调成糊状，倒入沸水中和匀。再称取其它药品，陆续加入烧杯内（待一种药品溶解后，再加入第二种药品）。待全部药品溶解后，停止加热，补足失水，调pH值至7.2～7.4。分装后，高压蒸汽灭菌。本培养基常用于培养放线菌。 5.马铃薯蔗糖培养基马铃薯 200克蔗糖 10克琼脂 20克水 1000毫升自然pH 称取200克马铃薯片，加水1000毫升，煮沸半小时，用纱布过滤，补足失水。在上述滤汁中加入10克蔗糖、20克琼脂，加热使琼脂熔化。分装后，高压蒸汽灭菌。常用于培养酵母菌。 6.麦芽汁培养基将从啤酒厂买来加有啤酒花的麦芽汁，装入锥形瓶中，加塞高压蒸汽灭菌。常用于培养酵母菌。 7.察氏培养基 NaNO3 2克 K2HPO4 1克 KCl 0.5克 MgSO4 0.5克 FeSO4 0.01克蔗糖 30克琼脂 15～20克水 1000毫升自然pH

细胞培养基种类及用途

基础细胞培养基通常指基础合成培养基，主要成分为氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐、辅助物质（核酸降解物、氧化还原剂等）。据不同细胞和研究目的，选用合适培养基,?还可补加新成分。?如杂交瘤中常用DMEM加丙酮酸钠、2-巯基乙醇（相当于胎牛血清可透析组分的作用）。合成培养基使用时加5-30%血清。 1． 199细胞培养基及其改良品种 1950年Morgan等设计，除BSS外，含有53种成分，为全面培养基，广用于各类细胞培养，广泛用于病毒学、疫苗生产。 2． BME细胞培养基基础Eagle培养基（Basal Medium Eagle），1955年Eagle设计，BSS＋12种氨基酸＋谷氨酰胺＋8种维生素。简单、便于添加，适于各种传代细胞系和特殊研究用，在此基础上改良的细胞培养基品种有MEM、DMEM、IMEM等。 3． MEM细胞培养基低限量Eagle培养基（Minimal Essential Medium），1959年修改，删去赖氨酸、生物素，氨基酸浓度增加，适合多种细胞单层生长，有可高压灭菌品种，是一种最基本、试用范围最广的培养基，但因其营养成分所限，针对生产之特定细胞培养与表达时，并不一定是使用效果最佳或者最经济的培养基。 4． DMEM细胞培养基及其改良品种 DMEM由Dulbecco改良的Eagle培养基，各成份量加倍，分低糖(1000mg/L)、高糖(4500mg/L)。生长快，附着稍差肿瘤细胞、克隆培养用高糖效果较好，常用杂交瘤的骨髓瘤细胞和DNA转染的转化细胞培养。例如CHO细胞表达生产乙肝疫苗、CHO细胞表达EPO。 5． IMEM细胞培养基 IMEM由Iscove's改良的Eagle培养基，增加了几种氨基酸和胱氨酸量。 6． RPMI-1640细胞培养基 Moore等人于1967年在Roswell Park Memorial Institute研制，针对淋巴细胞培养设计，BSS＋21种氨基酸＋维生素11种等，广泛适于许多种正常细胞和肿瘤细胞，也用做悬浮细胞培养 7．Fischer’s细胞培养基用于白血病微粒细胞培养。 8． HamF10、F12细胞培养基 1963年、1969年Ham设计，含微量元素，可在血清含量低时用，适用于克隆化培养。F10适用于仓鼠、人二倍体细胞，特适于羊水细胞培养。 9． DMEM/F12细胞培养基 DMEM和F12细胞培养基按照1:1比例混合效果最佳，营养成分丰富，且可以使用较少血清，或作为无血清培养基的基础培养基。 10． McCoy5A培养基 1959年MeCoy为肉瘤细胞设计，

菌种的分离与培养

菌种的分离与培养在自然界里，食用菌都不是单独存在的，而是和许多细菌、放射菌、霉菌等生活在一起的。所谓菌种分离，就是把这些和食用菌一起生活的杂菌分离出来，通过培养，获得纯的优良菌种。菌种分母种、原种、栽培种。 (一）母种的分离培养食用菌母种的分离，可分为孢子分离法、组织分离法以及基内菌丝分离等。 1.孢子分离法孢子分离法，是用食用菌的有性孢子或无性孢子萌发成菌丝，培养成菌种的方法。这种菌种生活力较强，但孢子个体之间有差异，且自然分化现象较严重，变异大，需经出菇试验才能在生产上应用。（l）单孢分离法：是每次或每支试管只取一个担孢子，让它萌发成菌丝体来获得纯菌种的方法。蘑菇和草菇用单孢分离得到的菌丝，有结实能力，可采用此法分离生产纯菌种。单孢分离生产上较少采用，而且技术复杂，一般采用多孢分离法。（2）多孢分离法：就是把许多孢子接种在同一培养基上，让它们萌发、自由交配来获得食用菌纯菌种的一种方法。具体操作方法，有以下几种：

①种菇孢子弹射法：选择个体健壮、朵形圆正，无病虫害、出菇均匀、高产稳产，适应性强的八九分成熟的种菇，切去大部分，菌柄用无菌水冲洗数遍后再用已灭菌的纱布或脱脂棉、滤纸吸干表面水分。在接种箱或无菌室内，把种菇的菌褶朝下用铁丝倒挂在玻璃漏斗下面，漏斗倒盖在培养皿上面；上端小孔用棉花塞住。培养皿放在一个铺有纱布的搪瓷盘上，静置12～20小时，菌褶上的孢子就会散落在培养皿内。形成一层粉末状孢子印（平菇极淡紫色，蘑菇、草菇为褐色，香菇、金针菇孢子印白色）。用接种针沾取少量孢子在试管中的琼脂外面或培养皿上划线接种。待孢子萌发，生成菌落时，选孢子萌发早、长势好的菌落进行试管培养。还可用孢子采集器收集孢子。方法是选好种菇后，按上述程序，轻轻掀开玻璃钟罩，将种菇柄朝下插在孢子采收器的钢丝架上，放在培养皿正中央。随即盖好玻璃罩，用纱布将钟掌周围塞好。并在纱布上倒少许升汞或无菌水。移入20℃ 左右恒温箱培养。 ②褶上涂抹法：按无菌操作分离时；应选择成熟的种菇，用接种针直接插入褶片之间，轻轻抹取褶片表面子实体尚未弹射的孢子，再在培养基上划线接种。 ③钩悬法：取成熟菌盖的几片菌褶或一小块耳片（黑木耳、毛木耳、白木耳〕，用无菌不锈钢丝（或铁丝、棉线等其他悬挂材料）悬挂于三角瓶内的培养基的上方，勿使接触到培

培养基配制的基本过程

培养基配制的基本过程 1.配制溶液向容器内加入所需水量的一部分，按照培养基的配方，称取各种原料，依次加入使其溶解，最后补足所需水分。对蛋白胨、肉膏等物质，需加热溶解，加热过程所蒸发的水分，应在全部原料溶解后加水补足。配制固体培养基时，先将上述已配好的液体培养基煮沸，再将称好的琼脂加入，继续加热至完全融化。并不断搅拌，以免琼脂糊底烧焦。 2.调节pH值用pH试纸（或pH电位计、氢离子浓度比色计）测试培养基的pH值，如不符合需要，可用10%HCl或10%NaOH进行调节，直到调节到配方要求的pH值为止。 3.过滤用滤纸、纱布或棉花趁热将已配好的培养基过滤。用纱布过滤时，最好折叠成六层，用滤纸过滤时，可将滤纸折叠成瓦棱形，铺在漏斗上过滤。 4.分装已过滤的培养基应进行分装。如果要制作斜面培养基，须将培养基分装于试管中。如果要制作平板培养基或液体、半固体培养基，则须将培养基分装于锥形瓶内。分装时，一手捏松弹簧夹，使培养基流出，另一只手握住几支试管或锥形瓶，依次接取培养基。分装时，注意不要使培养基粘附管口或瓶口，以免浸湿棉塞引起杂菌污染。装入试管的培养基量，视试管和锥形瓶的大小及需要而定。一般制作斜面培养基时，每只15×150毫米的试管，约装3～4毫升（1/4～1/3试管高度），如制作深层培养基，每只20×220毫米的试管约装12～15毫升。每只锥形瓶装入的培养基，一般以其容积的一半为宜。 5.加棉塞分装完毕后，需要用棉塞堵住管口或瓶口。堵棉塞的主要目的是过滤空气，避免污染。棉塞应采用普通新鲜、干燥的棉花制作，不要用脱脂棉，以免因脱脂棉吸水使棉塞无法使用。制作棉塞时，要根据棉塞大小将棉花铺展成适当厚度，揪取手掌心大小一块，铺在左手拇指与食指圈成的圆孔中，用右手食指插入棉花中部，同时左手食指与姆指稍稍紧握，就会形成1个长棒形的棉塞。棉塞作成后，应迅速塞入管口或瓶口中，棉塞应紧贴内壁不留缝隙，以防空气中微生物沿皱折侵入。棉塞不要过紧过松，塞好后，以手提棉塞、管、瓶不下落为合适。棉塞的2/3应在管内或瓶内，上端露出少许棉花便于拔取。塞好棉塞的试管和锥形瓶应盖上厚纸用绳捆札，准备灭菌。 6.制作斜面培养基和平板培养基培养基灭菌后，如制作斜面培养基和平板培养基，须趁培养基未凝固时进行。 (1)制作斜面培养基。在实验台上放1支长0.5～1米左右的木条，厚度为1厘米左右。将试管头部枕在木条上，使管内培养基自然倾斜，凝固后即成斜面培养基。 (2)制作平板培养基。将刚刚灭过菌的盛有培养基的锥形瓶和培养皿放在实验台上，点燃酒精灯，右手托起锥形瓶瓶底，左手拔下棉塞，将瓶口在酒精灯上稍加灼烧，左手打开培养皿盖，右手迅速将培养基倒入培养皿中，每皿约倒入10毫升，以铺满皿底为度。铺放培养基后放置15分钟左右，待培养基凝固后，再5个培养皿一叠，倒置过来，平放在恒温箱里，24小时后检查，如培养基末长杂菌，即可用来培养微生物。

常用培养基的配制

常用培养基的配制（一）营养琼脂培养基【用途】供细菌总数测定、保存菌种、细菌纯化、一般细菌培养、血琼脂培养基基础之用。【成分】牛肉膏 3g NaCl 5g 蛋白胨 10g 琼脂 20g 【pH值】7.2±0.2 【制法】上述成分称取38g加蒸馏水1000ml，经121.3℃ 30min高压灭菌备用。（二）蛋白胨水培养基【用途】供细菌培养、吲哚试验之用。【成分】蛋白胨 10g 氯化钠 5g 【pH值】7.6 【制法】将上述成分溶于1000ml蒸馏水中，过滤，分装于试管，每管2～3ml，经121.3℃20min高压灭菌备用。（三）半固体培养基【用途】供观察细菌动力、菌种保存、H抗原位相变异试验等。【成分】蛋白胨 10g 氯化钠 5g 琼脂 2.5～3g 【pH值】7.6 【制法】上述成分加入1000ml蒸馏水中，加热溶解，分装于试管，每管3～4ml，经121.3℃ 20min高压灭菌备用。（四）营养肉汤培养基【用途】供一般细菌培养、转种、复苏、增菌等，也可用于消毒效果的测定。【成分】蛋白胨 10g 氯化钠 5g 牛肉粉（牛肉浸汁） 3g 【pH值】7.2±0.2 【制法】将上述成分溶于1000ml蒸馏水中，分装小试管，每管2～3ml，经121.3℃ 20min 高压灭菌备用。（五）葡萄糖蛋白胨水培养基【用途】供甲基红试验及V-P试验之用。【成分】蛋白胨5g 葡萄糖5g K2HPO4 (K2HPO4·3H2O) 5g (0.65g) 【pH值】7.0～7.2 【制法】将上述成分溶于1000ml蒸馏水中，过滤，分装试管，每管2～3ml，经112.6 ℃ 20min高压灭菌备用。（六）伊红美蓝培养基（EMB培养基）

食用菌菌种的制作与培养

食用菌菌种的制作与培养 ---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 一、母种制作（一）母种培养基制作 1.母种培养基的种类母种是菌种生产的关键，要求纯度高，不能混生杂菌，同时母种的菌丝体较为纤细，分解培养料的能力较弱。因此，母种菌丝体需要培养在营养丰富，易被吸收，表面光滑易于鉴别有无杂菌感染的琼脂培养基上。适合母种菌丝生长的琼脂培养基种类很多，常用的有下列几种：（1）马铃薯—葡萄糖—琼脂培养基马铃薯（去皮）200克琼脂20克葡萄糖（或蔗糖）20克水1000毫升（2）麦芽汁—葡萄糖—琼脂培养基干麦芽250克琼脂15～20克葡萄糖（或蔗糖）10克水1000毫升（3）胡萝卜—葡萄糖—琼脂培养基胡萝卜100克琼脂20克葡萄糖（或蔗糖）20克水1000毫升（4）蘑菇汁—葡萄糖一琼脂培养基（适用于蘑菇）鲜蘑菇250克琼脂20克葡萄糖（或蔗糖）20 克水1000毫升（5）蛋白胨—葡萄糖—琼脂培养基蛋白胨2克葡萄糖20克磷酸氢二钾2克维生素B1（硫胺素）0.5毫克磷酸二氢钾0.5克琼脂18克硫酸镁0.5克水l000毫升 2.母种培养基的制法以最常用的马铃薯—葡萄糖—琼脂培养基的制法为例介绍如下：先将马铃薯去皮，洗涤，切成小块加水1000毫升，煮沸15～20分钟，取双层纱布过滤，取其滤液，加入琼脂和葡萄糖（或蔗糖），用文火加热使其溶化，最后补足水分，使其容量仍为1000毫升。趁热分装于试管中，装量约为试管长度的1/5左右，装管时要注意不使培养基沾污试管壁和试管口。试管口塞上大小合适的棉花塞，塞入试管口内的长度为棉塞总长的3/5。塞好棉塞后，每10

培养基的主要成分及其作用

培养基的主要成分及其作用培养基是用人工方法配制而成，适合微生物生长繁殖需要的混合营养基质。适宜的培养基不仅用于细菌的分离、纯化、传代及菌种保存等，还可用于研究细菌的生理、生化特性。因此，掌握培养基的制备技术及其原理，是进行细菌学检验的重要环节和必不可少的手段。细菌的生长繁殖除需要一定的营养物质，如含氮化合物、糖类、盐类、类脂质及水外，有的还需加入特殊营养物质，如维生素的辅助生长因子或某些其他特殊因子；有的则需加入指示剂或抑制剂，以利于细菌的分离和鉴定。 1．营养物质营养物质提供细菌生长繁殖所需的能量、合成菌体的原料以及激活细菌酶的活性和调节渗透压等作用。细菌需要的营养物质主要有氮源、碳源、无机盐及生长因子。 (1)蛋白胨：是由动物或植物蛋白质经酶或酸碱分解而产生的中间产物，是培养基中最常用的成分之一，主要供给细菌氮源，合成菌体蛋白质、酶类等，另外还具有缓冲作用。由于蛋白质的来源和消化程度不同，因而制得的蛋白胨质量相差很大。按照生产原料的性质，蛋白胨可分为植物胨和动物胨两类。蛋白胨经喷雾干燥成粉末，吸水性较强，保存时应干燥密封，防止潮解结块。 (2)肉浸液：系用新鲜牛肉(去掉脂肪、肌膜及肌腱等)浸泡煮沸制成的肉汤。肉浸液中包括含氮和非含氮两类浸出物，还有一些生长因子。作为细菌生长所需要的氨源和碳源，由丁加热后大部分蛋白质凝固，仅留少部分氨基酸和其他含氮物质，不能满足细菌生长需要，故在制作培养基时，一般需加1％～2％蛋白胨和％的NaCl。 (3)牛肉膏：又称牛肉浸膏，是肉浸液加热浓缩而得到的一种棕黄色至棕褐色的膏状物。其中不耐热的物质如糖类已被破坏，故其营养价值不及肉浸液，但因无糖，可作为肠道细菌鉴别培养基的基础成分。 (4)糖(醇)类：含有细菌所需的碳源。制备培养基所应用的糖(醇)类很多，常用的糖类有单糖(如葡萄糖、阿拉伯糖等)、双糖(如乳糖、蔗糖等)、多糖(如菊糖、淀粉等)：醇类有甘露醇、卫矛醇及侧金盏花醇等。在培养基中加入糖(醇)类物质，除提供细菌作为碳源和能源外，主要利用细菌对糖(醇)类利用能力的差异鉴别细菌。 (5)血液：血液除能增加培养基中蛋白质、多种氨基酸、糖类及无机盐等营养成分外，尚能提供辅酶、血红素等特殊生长因子。此外，还可以观察细菌的溶血现象。

培养基制作

四、培养基的制备（一）背景知识介绍细菌和其它生物体一样，在进行培养增殖的过程中，需要一个营养丰富、环境条件适宜的场所。培养基是由适合于细菌生长繁殖的营养物质配制而成的营养基质。制备培养基的目的在于给细菌创造良好的营养条件。由于细菌具有不同的类型，人们对细菌的研究目的也不同，应配制适合不同细菌生长以及按实验要求设计的不同培养基。但从营养角度分析，培养基一般均应含有满足细菌生长发育的水分、碳源、氮源、无机盐类等。另外，培养基还应具有适宜的酸碱度（pH值）和一定的缓冲能力。 1.培养基的类型由于培养基名目繁多，种类各异。一般按培养基的成分、培养基的外观状态、培养基的功能把培养基分为不同的类型。按培养基成分的了解可分为：（1）天然培养基：（基本培养基）是指利用动、植物或其提取物制成的培养基，例如，培养细菌的肉膏蛋白胨培养基、培养酵母菌的麦芽汁培养基等。此种培养基取材方便、营养丰富、种类多样、配制方便。但是其中的成分不甚清楚，不利于做精确的科学实验。我们的实验常使用此类培养基。（2）组合培养基：（合成培养基）是指用多种高纯化学试剂配制成的、各成分的量都确切知道的培养基。例如培养细菌的葡萄糖铵盐培养基；培养放线菌的淀粉硝酸盐培养基。此培养基价格较贵，配制较烦琐，有利于做精确的科学实验。我们的实验一般都不用。（3）半合成培养基：是在天然培养基中加入少量已知的化学物质配制而成的。如培养细菌的牛肉膏蛋白胨培养基。按培养基外观的物理状态，可分为：（1）固体培养基：在液体培养基中加入1％～2％琼脂作凝固剂，就可以制成遇热可融化、冷却可凝固的固体培养基。琼脂又名洋菜，其熔点是96℃，凝点是40℃，所以在一般细菌培养温度下呈固体状态。固体培养基在微生物的科研和实验中，具有极其广泛的用途，如菌种的分离鉴定、菌落计数、菌种的保存等。前面的细菌实验研究中，我们主要用此培养基。（2）液体培养基：是指未加凝固剂、呈液态的培养基。其组成成分均匀，细菌能充分接触和利用养料，适宜作生理研究用。（3）半固体培养基：在液体培养基中加入0.2％～0.5％的琼脂制成的培养基，可用于观察细菌的运动。

母种培养基的配制

母种培养基的配制 1.器具试管刀天平铝锅棉塞纱布漏斗烧杯量筒 2.常用的母种培养基配方 ①马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）：马铃薯（去皮）200g，葡萄糖20g。琼脂20g，水1000ml，{如果需要配制250ml的培养基，那么马铃薯、葡萄糖、琼脂的比例是50:5:5}，也可用蔗糖取代葡萄糖，即为PSA培养基。还可以添加磷酸二氢钾3g，硫酸镁1.5g，维生素B1 10㎎，即为马铃薯综合培养基。广泛适用于各种食用菌母种的分离，培养和保藏。 ②马铃薯玉米粉培养基：马铃薯（去皮）200g，蔗糖20g，玉米粉50g，琼脂20g，磷酸二氢钾1g，硫酸镁0.5g，水1000ml。本配方适合于香菇、黑木耳、猴头菌的培养。 ③马铃薯黄豆粉培养基：马铃薯200g，蔗糖20g，琼脂20g，黄豆粉20g，碳酸钙10g，磷酸二氢钾1g，硫酸镁0.5g，水1000ml。适用于蘑菇、草菇。 ④葡萄糖蛋白胨琼脂培养基：葡萄糖20g，蛋白胨20g，琼脂20g，水1000ml。 ⑤蛋白胨、酵母、葡萄糖琼脂培养基：蛋白胨2g，酵母膏2g，硫酸镁0.5g，磷酸二氢钾0.5g，磷酸氢二钾1g，葡萄糖20g，维生素B1 20㎎，琼脂20g，水1000ml。

具体步骤 1.计算。按照选定的培养基配方，计算各种成分的用量。 2.称量。用天平秤取各种物质，马铃薯去皮去芽眼，削掉青绿部分，对不易称量的成分，可用玻棒和烧杯称重，微量元素等需要量少，难以称准时，可先配成较浓的原液，再从中取出需要的量。 3.配制。若配制合成培养基，先量取蒸馏水，加入琼脂，加热溶化；再加入称好的其他物质。为避免发生沉淀造成营养损失，加入的顺序一般是先加缓冲剂，再依次加入主要元素、微量元素和维生素等；若各种成分均不发生沉淀，也可一起加入。 4.煮汁，去滤液。马铃薯切成1㎝见方的小块或2~3㎜厚的薄片，加水约1200ml煮沸，再用文火保持20~30分钟、并适当搅拌，使营养物质充分溶解出来，然后用4层预湿的纱布过滤，取其滤液。5.补足水量，加药品溶化。补足水量至1000ml，然后往滤液中加入琼脂，小火加热，搅拌至琼脂完全溶解，再加入葡萄糖和其他营养物质使其溶化后，用PH试纸检测其PH值，可根据需要使用氢氧化钠和盐酸，调整适宜的酸碱度，进行分装。注意开锅搅拌，防止溢出或焦底。 6.分装试管。制备好的培养基应趁热分装，可用玻璃试管，首先把较大的玻璃漏斗固定在滴定架上，下接一段乳胶管和玻璃管，用弹簧夹夹住胶管。手拿试管，分装量掌握在试管长度的四分之一。注意分装时，培养基不能粘在试管口壁上，否则会污染棉塞。 7.赛棉塞。注意要松紧适度8.高压锅灭菌30分钟

母种分离常用培养基

母种分离常用培养基培养基都含有水分、碳源、氮源、无机盐以及生长因素等。碳源的主要原料是糖类、淀粉、纤维素物质。代表物质是葡萄糖、蔗糖、玉米粉、麸皮、米糠、锯木、棉籽壳等。氮源是食用菌细胞质和细胞核中蛋白质和核酸的主要元素。氮源主要有氨基酸、蛋白胨、尿素、硫酸银、含有氮素的物质有玉米、棉籽壳。培养基中的无机盐虽用量不多；但不可缺少。它主要是酶类的组成成分，调节各种生命代谢活动。如磷酸二氢钾、硫酸镁。生长因素需要量很少，是培养基中的特殊营养物质，它是维持食用菌正常生长所不可缺少的生长因素。如马铃薯、麸皮、米糠等都含有丰富的生长因素，维生素也属此类。食用菌母种分离用培养基一、通用培养基 1、马铃薯——蔗糖——球脂培养基（PDA）：马铃薯煮汁1000毫升蔗糖20克琼脂20克PH值5.5～6.0 制法：先将新鲜无病害的马铃薯洗净，去皮后切成小薄片，称200克，加水1000毫升，煮沸20分钟后过滤，其滤汁为马铃薯煮汁。然后加琼脂和蔗糖煮溶，后补足水分至1000毫升，装管（瓶）灭菌备用。一般食用菌母种的分离和培养都适合此培养基。 2.、葡萄糖——麦芽膏——酵母膏培养基（GMY）：麦芽膏10克葡萄糖11克酵母膏4克琼脂18克水加至1000毫升PH值自然麦芽膏可用麦芽汁代替，10克麦芽膏可用麦芽汁代替。二、粮食类 3、高粱培养基（特别适于平菇类生长）：高粱粉30克琼脂10克水1000毫升 4、麦粒培养基：小麦粒200克糖5克碳酸钙15克水500毫升PH值自然制法：取小麦200克洗净，置锅中加水500毫升，煮沸20分钟，用纱布过滤，加入其他成分，煮5分钟，水汁分装至试管的1／3长度为好。 5、玉米粉培养基：玉米粉30克蛋白胨20克蔗糖20克琼脂18克水1000毫升pH值自然 6、黄豆饼粉培养基：黄豆饼粉40克葡萄糖或蔗糖20克琼脂18克水1000毫升PH值自然制法：称黄豆饼粉40克用清水调成糊状，再加水1000 毫升，煮沸后30分钟，过滤，用热水补足1000毫升，加入琼脂蔗糖溶化即可分装试管。 7、每管大米3克，水4毫升，摆成斜面装入高压锅内，1.2公斤/平方厘米压力下灭菌40分钟，或装入家用高压锅内，自孔口喷射水蒸汽时盖上限压阀，开始计算时间，维持50分钟即可。 8、稻谷或麦粒若干，先煮透，要求熟而不烂，然后捞起沥干，加入1%石灰粉拌匀，装入试管。 9、玉米800克，葡萄糖20克，琼脂20克，淘米水1500毫升。先将玉米粒置于淘米水中煮至有少量玉米粒爆裂时过滤，在滤液（如滤液不足1000毫升则加清水补足）中加入琼脂、葡萄糖，加热，搅拌，至琼脂全部溶化，然后分装试管，灭菌后取出摆斜面即成。 10、酸性培养基（供分离菌种及培养猴头菌）：马铃薯（去皮）200～250克糖20克琼脂25克柠檬酸1％～5％（灭菌后加人）水1000毫升。 11、麸皮2/3，玉米粉1/3，石灰适量。将麸皮、玉米粉、石灰加水润湿至含水量65%，然后装入试管，压成斜面。三、粪草类 12、粪汁培养基（供筛选蘑菇菌种）：马厩肥150克玉米粉（取汤）30克琼脂20～30克水1000毫升。 13、粪草培养基（适于制作蘑菇菌种）：粪草(粪：草=6：4、堆积发酵15～20天) 90斤米糠或麸皮 8 斤碳酸钙 1斤糖 1斤水适量。 14、羊屎培养基（蘑菇）：在侵漉屎中，加入1％～3％碳酸钙或1％石灰。四、木屑类

细胞培养各种培养基简介

DMEM、RIPA1640、F12、L15等细胞培养基的基本知识培养细胞的完全培养基由基础培养基（如MEM）和添加剂（如血清或无血清培养用的某些确定的激素及生长因子）组成，培养基的配方一直在改进，其中包括抗生素和抗有丝分裂剂等等。一、基础培养基绝大多数培养基是建立在平衡盐溶液(BSS)基础上，添加了氨基酸、维生素和其它与血清中浓度相似的营养物质。最广泛应用的培养基是Eearle`s MEM 的混合物，其中含有13种必须氨基酸、8种维生素。而Ham`s F12 也包括非必须氨基酸，维生素的范围亦很广，另外常规含有无机盐和代谢添加剂（例如核苷酸）。MEM/F12 这两种培养基各取1/2，形成神经生物学最通用的培养基。Dulbecco`s改良培养基——DMEM，现应用于快速生长的细胞，同MEM 含有相同的营养成分，但浓度高出2~4倍。选择某种培养基，应仔细了解成分表，应知道大多数情形下培养基都有不足。例如，有些培养基在氨基酸中包括有谷氨酸，而这种培养基虽广泛用于神经生物学领域，但它对某些对谷氨酸敏感的可能有细胞外毒性损伤的神经元而言，则并非最佳选择，特别是如果神经元生长在缺乏胶质的环境中时。F12中含有硫酸亚铁，据报道也有神经毒效应。在所有这些培养基中，谷氨酸比其他氨基酸有更高的浓度，这是因为它具有不稳定性以及在许多细胞培养中它常用作碳源。对于神经元的培养常常在基础培养基中增加葡萄糖的含量到0.6%或者加入丙酮酸（若培养基中这两种物质缺乏时）。MEM与F12均要用5%的CO2来平衡，DMEM含更高浓度的NaCO3，要用10%的CO2来平衡，当然也可以在较低CO2浓度下使用。这些基础培养基的组成成分是建立在对不同细胞系生长的研究之上的，但通常在原代培养中使用也能有比较令人满意的结果。原则上，HEPES作为缓冲剂可用来代替碳酸氢盐，以解除需要高浓度CO2培养环境的限制。实际操作中并非如此简单。显然，溶解的CO2与碳酸氢盐对良好的细胞生长是重要的。Leiboviz`s L15培养基可用来在大气环境中令神经细胞生长，该培养基采用了与众不同的BSS作基础，它含有高浓度的氨基酸来提高缓冲能力，培养基中使用半乳糖作碳源，以阻止培养基中乳酸形成，少量溶解的CO2由丙酮酸代谢产生。这一培养基的优点是明显的，特别是在保持较高CO2有困难时，例如在长时间的显微操作及生理学研究中。L15培养基已用来成功的培养了外周神经元，但尚未在CNS神经元的发育研究中全面检测过。二、血清细胞在单纯的基础培养基中不能存活，在特殊类型的细胞培养中必须提供某些痕量营养物质及生长因子才能使细胞得以生长并维持生长状态。基础培养基常常要添加血清，血清终浓度多为5~20%。特殊用途的血清来源须用经验确定，广泛应用的血清种类有马血清与胎牛血清。胎牛血清中富含有丝分裂因子，常选其作增殖细胞用的血清，也用于细胞系和原代培养。而马血清常常用来作有丝分裂后的神经元培养。然而，很多人也将胎牛血清