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鸡肠道致病菌的分离鉴定试验设计

鸡肠道致病菌的分离鉴定试验设计

鸡肠道致病菌种类:大肠杆菌与沙门氏菌

实验内容:

阶段一:大肠杆菌与沙门氏菌的形态培养特性的观察,实验材料的增菌与直接分离培养。阶段二:识别菌落、做纯培养及三糖铁琼脂接种

阶段三:菌种纯度检查及生化培养基接种

阶段四:生化反应结果观察与沙门氏菌血清学诊断。

阶段一:

1、材料

实验菌种混合菌液甲(大肠杆菌和沙门氏菌),混合菌液乙(产气肠杆菌与普通变形杆菌)观察材料四种细菌的融通培养物、琼脂平板、麦康凯或SS琼脂平板的培养物、三糖铁琼脂培养物。

培养基亚硒酸盐亮绿增菌液或四磺酸钠增菌液;SS琼脂平板、麦康凯、琼脂平板等选择与鉴别培养基。

2、内容与方法

培养特性观察对大肠杆菌、沙门氏菌、产气肠杆菌、普通变形杆菌在常用培养基上的培养特性作仔细观察并相互比较。

形态观察以无菌接种环分别挑取上述四种细菌在麦康凯等琼脂平板上生长的单个菌落。在玻片上制成涂片,待自然干燥后,以火焰固定,用革兰氏染色法染色,镜检。观察没在细菌的形态、大小与排列方式,并作比较。

这四种细菌都是革兰氏阴性而两端钝圆的杆菌,无芽孢和荚膜,大小差异不显著。

增菌培养用无菌2ml刻度吸管吸取混合菌液甲2ml,分别加入亚硝酸盐亮绿增菌液100ml 的试管与四磺酸钠增菌液10ml的试管中各1ml。换另一支无菌吸管,以同样的方法将混合菌液乙接种到两种增菌液中,接种后轻轻摇匀,置37摄氏度恒温箱内培养18---24h。

直接分离培养每种混合菌液用常规划线方法,接种麦康凯琼脂平板和SS琼脂平板各一个。置37摄氏度恒温箱内培养24h后取出,观察每种平板上两种细菌的生长情况,单个菌落的形态,并比较之。

保留活动单个菌落的平板培养物,待阶段二使用。

阶段二

1、材料普通琼脂斜面、三糖铁琼脂等。

2、内容与安排

纯培养从经24h培养的麦康凯琼脂平板上,分别选出4种不同的细菌的单个菌落。然后,用无菌接种环在四个单个菌落的中央表面轻轻取培养物少许,各移植至普通琼脂斜面一管,置37摄氏度恒温箱中培养24后,取出后在冰箱内或室温保存备用。

三糖铁琼脂接种用灭菌接种环从纯培养所选定的四个单个菌落中再次分别挑取细菌少许,各接种一管三糖铁琼脂。接种时,现涂布斜面,后穿刺底层。置37摄氏度恒温箱中培养24h,取出观察其反应情况,并将结果记录在后面的附表内。

阶段三

1、材料

生化培养基蛋白胨水、葡萄糖蛋白胨水、糖培养基、尿素琼脂、醋酸铅琼脂、枸橼酸盐琼

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