湿热灭菌

湿热、干热灭菌及除热原F值计算

湿热灭菌用F0值

F0值计算方法：

根据Arrhenius 一级反应方程式，在恒定温度及保持其它条件不变的情况下，单位时间内被杀灭的微生物数正比于t0时原有的数目：

dN / dt = K ( N0-NK )

（1）

式中，N0----t=0时，存活的微生物数。

NK-----t时被杀灭的微生物数。

N-------t时残存的微生物数。

如果把普通坐标换成半对数坐标，则可得到一直线。

将式（1）积分得：lg Nt = lg N0 –( K / 2.303 ) t （2）

我们定义D值为用以定量描述一定温度下某种微生物在灭菌过程中的热耐受性参数，即一定温度下将微生物杀灭90％或使之下降一个对数单位所需的时间（min）。按定义将t＝D，Nt ＝（1/10）N0代入式（2）并化简得：（K/2.303）D＝lg N0－lg Nt＝lg10＝1

所以D＝2.303 / K 。

我们定义Z值为使某一种微生物的D值下降一个对数单位，灭菌温度应升高的度数。在不大的灭菌温度变化范围内，温度T和D的对数值之间可设定为线性函数，即：

lg D2＝ lg D1+ S（T2－T1）（3）

其中：S为该线性方程的斜率。D1为T1温度下的D值。D2为T2温度下的D值。

得到：（T1－T2）/（lg D2－lg D1）=1/S＝Z （4）不同的微生物孢子，在不同溶液中有各不相同的Z值。而同种孢子的Z值在不同溶液中亦有差异。在没有特定要求时，Z值通常都取10，以简化计算。

F值的数学表达式如下：T-T0

————

F=△t∑10Z

其中△t为测量被灭菌物的时间间隔，T为每个△t测量到的被灭菌物的温度，T0是参比温度。即：F值为在一定温度（T）给定Z值所产生的灭菌效力与参比温度（T0）给定Z值所产生的灭菌效果相同时所相当的时间，其单位为分钟。

对于蒸汽灭菌来说，参比温度即T0为121℃，并通常取Z值为10℃，则得到适用于蒸汽灭菌的F值――F0值，公式变为：T-121

_____

F0=△t∑1010

显然，F0值为一定灭菌温度（T）、Z值为10℃、所产生的灭菌效果与121℃、Z值为10℃所产生的灭菌效力相同时所相当的时间（分钟）。即F0值是将各种灭菌温度使微生物的致死效力转换为灭菌物品完全暴露于121℃使微生物的致死效力。

在FDA的“大输液GMP规范”草案中，F0系指“灭菌过程赋予一个产品121℃下的等效灭菌时间。”

在F0值定义中，T-121

_____

10 10

称为致死率（Lethality Rate），定义为L，即：

T-121

L= _____

＝F0 / FT

意为标准灭菌值F0与T℃灭菌值FT之间的对比关系。

例如以下灭菌过程：△t取1 min，即每分钟测量一次温度。

时间

（min）

123456789101112

温度

（℃）

117118119120121122123122121120119118

则计算其F0值即为：

△t＝1min，Z＝10℃，

其F0＝1×[ 10(117-121)/10 + 10(118-121)/10 + 10(119-121)/10 + 10(120-121)/10 + 10(121-121)/10 + 10(122-121)/10 + 10(123-121)/10 + 10(122-121)/10 + 10(121-121)/10 + 10(120-121)/10 + 10(119-121)/10 + 10(118-121)/10 ]

＝10.35 min。

干热灭菌用FH值

FH值的计算：

干热灭菌系统的验证也可采取与湿热灭菌系统相似的方法，由于在相同的温度下干热对微生物的杀灭效果远低于饱和蒸汽，故干热灭菌需要较高温度或较长的暴露时间。评价干热法灭菌的相对能力时，一般可以采用与湿热灭菌F0值相似的致死率单位和生物指示剂。

F0值为一定灭菌温度（T）、Z值为10℃、所产生的灭菌效果与121℃、Z值为10℃所产生的灭菌效力相同时所相当的时间（分钟）。F0值仅适用于湿热灭菌。

干热系统的F0值与湿热系统的F0值不同点为：评价干热系统的灭菌过程的F0值是将温度与时间条件折算成170℃时的相当时间，而非121℃的相当时间，同时设定Z值为20℃，即FH值。

可

见：

T-170

_____

FH = △t∑1020

BP1993年版规定仅以灭菌为目的的干热灭菌系统，必须保证其最小FH值大于170℃ 60 min。例如以下灭菌过程：△t取1 min，即每分钟测量一次温度。

时间

温度

则计算其FH值即为：

△t＝1min，Z＝20℃，

其FH＝1×[ 10(168-170)/20 + 10(169-170)/20 + 10(170-170)/20 + 10(171-170)/20 + 10(172-170)/20 + 10(173-170)/20 + 10(174-170)/20 + 10(173-170)/20 + 10(172-170)/20 + 10(171-170)/20 + 10(170-170)/20 + 10(169-170)/20 ]

＝13.75 min。

除热原用FT值

FT值的计算：

评价干热灭菌系统的灭菌能力时，一般可以采用相似于F0值的计算方法。干热系统的F0值与湿热系统的F0值不同点为：评价干热系统的灭菌过程的F0值是将温度与时间条件折算成170℃时的相当时间，而非121℃的相当时间，同时设定Z值为20℃，即FH值。

可

见：T -170

_____

FH = △t∑10 20

BP1993年版规定仅以灭菌为目的的干热灭菌系统，必须保证其最小FH值大于170℃ 60 min。在很多情况下干热既是灭菌又是除热原的方法，在这种情况下因为过程的最终目的是除热原，所以需要极高的和较长的暴露时间。此时对微生物的杀灭效果提了极大的安全程度。因为即使耐热的有机体如枯草杆菌芽孢在除热原温度下其D值仅为几秒钟，其杀灭率已远大于12个log，因此干热作为灭菌、除热原的方法时，考虑的重点即为除热原。

我们根据FEDEGARI公司提供的除热原F值计算方法，此时的FH值由于适用于除热原而定义为FT值，参比温度仍为170℃，但Z值由灭菌时的20℃变为46℃，即：

T-170

________

FT = △t∑1046

当FT值超过除热原标准设定值532 min时，可判定其除热原效果合格。

微生物学实验：湿热灭菌法和干热灭菌法

湿热灭菌法和干热灭菌法 湿热灭菌法是指用饱和水蒸气、沸水或流通蒸汽进行灭菌的方法，由于蒸汽潜热大，穿透力强，容易使蛋白质变性或凝固，所以该法的灭菌效率比干热灭菌法高，是药物制剂生产过程中最常用的灭菌方法。湿热灭菌法可分为： 煮沸灭菌法、巴氏消毒法、高压蒸汽灭菌法、流通蒸汽灭菌法、和间歇蒸汽灭菌法。 影响湿热灭菌的主要因素有： 微生物的种类与数量、蒸汽的性质、药品性质和灭菌时间等。 （1）煮沸灭菌法： 将水煮沸至100摄氏度，保持5-10分钟可杀死细菌繁殖体，保持1-3小时可杀死芽胞。在水中加入百分之一至百分之二的碳酸氢钠时沸点可达105摄氏度，能增强杀菌作用，还可去污防锈。此法适用于食具、刀箭、载玻片及注射器等。 （2）xx消毒法： 一种低温消毒法，因巴斯德首创而得名。有两种具体方法，一是低温维持法：62摄氏度维持30分钟；二是高温瞬时法：75摄氏度作用15-30秒。该法适用于食品的消毒。 （3）流通蒸气灭菌法： 利用常压下的流通蒸汽进行灭菌。 （4）间歇蒸汽灭菌法 （5）高压蒸汽灭菌法：103.4千帕蒸汽压温度达121.3摄氏度，维持15-20分钟。 湿热灭菌法湿热法可在较低的温度下达到与干热法相同的灭菌效果，因为：

①湿热中蛋白吸收水份，更易凝固变性；②水分子的穿透力比空气大，更易均匀传递热能；③蒸汽有潜热存在，每1克水由气态变成液态可释放出529卡热能，可迅速提高物体的温度。 湿热灭菌法一般采用121摄氏度，灭菌20-30min，如果是产孢子的微生物则应采用灭菌后适宜温度下培养几小时，再灭菌一次，以用于杀死刚刚萌发的孢子。 干热灭菌法是指在干燥环境（如火焰或干热空气）进行灭菌的技术。一般有火焰灭菌法和干热空气灭菌法。本法适用于干燥粉末、凡士林、油脂的灭菌，也适用于玻璃器皿(如试管、平皿、吸管、注射器)和金属器具(如测定效价的钢管、针头、摄子、剪刀等)的灭菌。干热空气灭菌法： 是指用高温干热空气灭菌的方法。该法适用于耐高温的玻璃和金属制品以及不允许湿热气体穿透的油脂（如油性软膏机制、注射用油等）和耐高温的粉末化学药品的灭菌，不适合橡胶、塑料及大部分药品的灭菌。在干热状态下，由于热穿透力较差，微生物的耐热性较强，必须长时间受高温的作用才能达到灭菌的目的。因此。干热空气灭菌法采用的温度一般比湿热灭菌法高。 为了保证灭菌效果，一般规定：135-140摄氏度灭菌3-5h；160-170摄氏度灭菌2-4h；180-200摄氏度灭菌0.5-1h。 干热灭菌法： 细菌的繁殖体在干燥状态下，80℃～100℃1小时可被杀死；芽胞需要加热至160℃～170℃2小时才杀灭。干热灭菌的方法有①焚烧： 用火焚烧是一种彻底的灭菌方法，破坏性大，仅适用于废弃物品或动物尸体等；②烧灼： 直接用火焰灭菌，适用于实验室的金属器械（镊、剪、接种环等）、玻璃试管口和瓶口等的灭菌；③干烤： 在干烤箱（hot air sterilizer）内进行，加热至160℃～170℃维持2小时，可杀灭包括芽胞在内的所有微生物。适用于耐高温的玻璃器皿、瓷器、玻质注射器等；④红外线（infrared）：

灭菌与湿热灭菌的基本概念

灭菌与湿热灭菌的基本概念 撰稿人：田耀华发布时间：2009年9月30日阅读次数：512 1几个专用名词的导入 (1)无菌：指物体或任何给定的介质中，没有任何活的微生物存在。 无菌操作：指在整个工艺操作过程中，利用和控制在一定条件下，尽量使产品避免微生物污染的一种操作方法，其所用一切器具原辅材料及环境应预先灭菌，操作必须在无菌操作室进行，操作人员必须按卫生要求程序进入。 (2)除菌：指用特殊滤材将微生物(死与活的)全部阻留而滤除（原已染有的微量可溶性代射物外），以防止热原产生。 (3)消毒：用物理或化学方法杀灭物体上或介质中的病原微生物。 (4热原：是微生物的代谢物，是细菌的一种内毒素，存在于细菌的细胞膜与固体膜之间。 (5)灭菌：应用物理或化学等方法把物体上或介质中所有微生物及芽胞全部杀灭，以获得无菌状态的总过程。灭菌大体可分3大类，即化学药物灭菌，生物药物灭菌和物理法灭菌。其中，物理灭菌法采用加热、光波、辐射、电磁场等物理方法杀有害微生物。物理方法的湿热灭菌更多适用于液体制剂，物理方法灭菌在药品及食品中应用最普遍，湿热灭菌，过滤除菌在可最终灭菌的大、小容量注射剂生产中应用最为广泛。 (6)杀灭时间(KT)：用于生物指示物抗力鉴定时，指受试示物样本，经杀菌因子作用后全部样本无菌生长最短作用时间（min）。 (7)衡量灭菌程度的几个参数：(1)D值（D），杀灭微生物量达90%所需的时间(min)，杀灭对数值，当微生物数量以对数表示时，指消毒前后微生物减少的对数值；(2)杀灭率（KR），在微生物杀灭试验中，用百分率表示微生物数量减少的值；(3)灭菌保证水平(SAL)，指灭菌处理后单位产品上存在活微生物的概率。 2热力灭菌的意义 在制药工业生产中，常用到消毒灭菌设备对有关物品进行消毒灭菌处理。对药品而言，在达到消毒灭菌效果可靠的同时，还要保证药品不受破坏，确保其药效的安全性、有效性和稳定性。就目前而言，在所有可利用的消毒灭菌方法中，热是一种应用最早、效果最可靠、使用最广泛的方法，它可以杀灭一切微生物，包括细菌繁殖体、真菌、原虫、藻类，因此热力灭菌在工业消毒灭菌上深受重视。 压力蒸汽法是所有湿热法、热力法、物理法及所有消毒灭菌方法中的首选方法，因此广泛使用的压力蒸汽消毒灭菌柜是湿热消毒灭菌的经典设备，虽然近年来有关湿热灭菌设备，为适应各种需要，开发了不少新型设备，但其均是在压力蒸汽消毒灭菌柜的基础上发展起来的。 3湿热与干热的根本区别 湿热法和干热法均是利用热力因子杀灭微生物的物理消毒灭菌方法。但它们的杀菌机理有所不同，湿热法主要是通过凝固微生物的蛋白质致其死亡，干热法则是通过脱水干燥使蛋白质氧化、变性、碳化和电解质浓缩中毒而使微生物死亡。它们的操作特点也各异，其根本

湿热灭菌

湿热灭菌 湿热灭菌法比干热灭菌法更有效。湿热灭菌是利用热蒸汽灭菌。在相同温度下，湿热的效力比干热灭菌好的原因是：①热蒸汽对细胞成分的破坏作用更强。水分子的存在有助于破坏维持蛋白质三维结构的氢键和其他相互作用弱键，更易使蛋白质变性。蛋白质含水量与其凝固温度成反比(表2-1)；②热蒸汽比热空气穿透力强，能更加有效地杀灭微生物：③蒸汽存在潜热．当气体转变为液体时可放出大量热量，故可迅速提高灭菌物体的温度。 多数细菌和真菌的营养细胞在60℃左右处理15min后即可杀死，酵母菌和真菌的胞子要耐热些，要用80℃以上的温度处理才能杀死，而细菌的芽胞更耐热，一般要在120℃下处理15min才能杀死。湿热灭菌常用的方法有常压蒸汽灭菌和高压蒸汽灭菌。 表2-1蛋白质含水量与其凝固温度的关系 蛋白质含水量/% 蛋白质凝固点/℃ 50 56 25 74-80 18 80-90 6 145 (一)常压蒸汽灭菌 (1)常压蒸汽灭菌是湿热灭菌的方法之一，在不能密闭的容器里产生蒸汽进行灭菌。在不具备高压蒸汽灭菌的情况下，常压蒸汽灭菌是一种常用的灭菌方法。此外，不宜用高压蒸煮的物质如糖液、牛奶、明胶等，可采用常压蒸汽灭菌。这种灭菌方法所用的灭菌器有阿诺氏(Aruokd)灭菌器或特制的蒸锅，也可用普通的蒸笼。由于常压蒸汽的温度不超过100℃，压力为常压，大多数微生物的营养细胞能被杀死，但芽胞细菌却不能在短时间内死亡，因此必须采取间歇灭菌或持续灭菌的方法，以杀死芽胞细菌，达到完全灭菌。 1)巴氏消毒法是用于牛奶、啤酒、果酒和酱油等不能进行高温灭菌的液体的一种消毒方法，其主要目的是杀死其中的无芽胞病原菌(如牛奶中的结核分枝杆菌或沙门氏菌)，而又不影响其特有风味。巴氏消毒法是一种低温消毒法，具体的处理温度和时间各有不同，一般在60-85℃下处理15-30min。具体的方 法可分两类，第一类是较老式的，称为低温维持法，例如在63℃下保持30min可进行牛奶消毒；另一类是较新式的，称为高温快速法，用于牛奶消毒时只要在85℃下保持5min即可。但是巴氏消毒法不能杀灭引起Q热的病原体--伯氏考克斯氏体(一种立克次氏体)。 2)间歇灭菌法又称分段灭菌法。适用于不耐热培养基的灭菌。方法是：将待灭菌的培养基在100℃下蒸煮30-60min，以杀死其中所有微生物的营养细胞，然后置室温或20-30℃下保温过夜，诱导残留的芽胞萌发，第二天再以同法蒸煮和保温过夜，如此连续重复3天，即可在较低温度下达到彻底灭菌的效果。例如，培养硫细菌的含硫培养基就应用间歇灭菌法灭菌，因为其中的元素硫经常规的高压灭菌(12l℃)后会发生熔化，而在100℃的温度下则呈结晶状。

湿热灭菌条件

一、湿热灭菌条件 湿热灭菌设备的灭菌条件设计有如下要求：①确立灭菌釜内具有均一热分布所需要的各种规程，要求从产品达到灭菌温度时起，直至加热结束整个过程中温度都能够保持在±0．5℃的波动范围以内；②检查每种灭菌物装载方式的热分布是否一致，是否都能够获得良好的热分布状态；③灭菌釜内部及灭菌物的温度不得低于预定的灭菌工序所规定的温度；④确定灭菌釜抽真空所需的时间，满足热分布的要求；⑤确定灭菌物达到灭菌温度的时间；⑥确定灭菌后可以将设备冷却至40℃以下所需的时间。 由于无菌保证值与污染菌耐热性以及污染量有关，因此在药品生产的各个环节均应采取各种有效的手段(包括除菌过滤等措施)来降低待灭菌产品的微生物污染。湿热灭菌的标准灭菌时间F0不小于8。 二、热压灭菌法及设备 热压灭菌是在密闭高压灭菌器内，利用大于常压的饱和水蒸气杀灭微生物的方法。本法是最可靠的湿热灭菌法。湿热灭菌法一般要求F0在8～12之间。热压灭菌所需的温度及与温度对应的压力及时间见表。 表热压灭菌所需温度、压力与时间关系 蒸汽温度（℃）表压力kPa(kg/cm2) 时间（min）适用灭菌范围 100 115.5 0 40～60 耐热而不宜热压灭菌者68.6（0.7）30 溶液剂、橡胶制品 121.5 98.0（1.0）20 金属制品 126.5 137.3（1.4）15 不常用 热压灭菌所用的设备较多，其原理基本相似。热源以直接通入饱和高压蒸汽为主，也有灭菌设备本身可以加水，再以煤气、电热等加热水成为蒸汽。使用热压灭菌设备时必须严格按照操作规程检查各部件的可靠安全性，灭菌时先排尽器内冷空气使压力同温度相符，如果冷空气没有排尽，则压力表上所示压力是蒸汽同残留空气二者的总和，而不是单纯的蒸汽压力，结果表上压力虽然达到而温度并未达到单纯蒸汽在该压力下应有的温度，灭菌就不完全。此外，由于水蒸气被空气稀释，可妨碍水蒸气同被灭菌物品接触，而降低了热压灭菌效果。 1．卧式热压灭菌柜构造如图所示，它是我国制剂工业生产使用最普遍的一种灭菌设备。该设备全部用坚固的合金制成并带有夹套，用具有一定压力的饱和蒸汽作为加热介质。卧式热压灭菌柜结构简单，操作维护容易，价格低廉。但由于设计上的缺陷，

培养基湿热灭菌

培养基湿热灭菌 湿热灭菌法是指用饱和水蒸气、沸水或流通蒸汽进行灭菌的方法，以高温高压水蒸气为介质，由于蒸汽潜热大，穿透力强，容易使蛋白质变性或凝固，最终导致微生物的死亡，所以该法的灭菌效率比干热灭菌法高。 一、方法 煮沸灭菌法；巴氏灭菌；间歇灭菌；高压蒸汽灭菌等。 （1）煮沸灭菌法：是指将待灭菌物置于沸水中灭菌的方法。煮沸时间通常为30-60分钟。该法灭菌效果较差，常用于注射器、注射针等器皿的消毒。 （2）巴氏灭菌：利用病原体不是很耐热的特点，用适当的温度和保温时间处理，将其全部杀灭。但经巴氏消毒后，仍保留了小部分无害或有益、较耐热的细菌或细菌芽孢。 （3）间歇蒸汽灭菌法：利用反复多次的流通蒸汽加热，杀灭所有微生物，包括芽胞。方法同流通蒸汽灭菌法，但要重复3次以上，每次间歇是将要灭菌的物体放到37℃孵箱过夜，目的是使芽胞发育成繁殖体。若被灭菌物不耐100℃高温，可将温度降至75℃～80℃，加热延长为30～60分钟，并增加次数。适用于不耐高热的含糖或牛奶的培养基。 （4）高压蒸汽灭菌法：103.4千帕蒸汽压温度达121.3℃，维持15-20分钟。 二、对培养基的影响 1、形成沉淀物：有机物，如多肽类沉淀；无机物，如磷酸盐、碳酸盐等沉 淀。 2、破坏营养，提高色泽：褐变，产生氨基酸、焦糖或黑色素。 3、改变培养基的PH，一般为降低PH 4、降低培养基浓度，气温低时会增加冷凝水 三、解决方法

温度的选择 培养基灭菌过程中，除微生物被杀死外，还伴随着培养基成分被破坏，在加热下氨基酸及维生素等受破坏。在生产中必需选择既能达到灭菌目的，又能使培养基成分破坏减至最少的条件。 灭菌过程微生物死亡是属于一级反应动力学类型，在其它条件不变时，反应速度常数κ与温度的关系可用阿累尼乌斯方程式表示： lnk=lnk0-Ea/RT 达到相同的灭菌效果，提高灭菌温度可以明显缩短灭菌时间，并可减少培养基因受热时间长使营养成分遭到破坏的损失。

湿热灭菌法

湿热灭菌法 常用的灭菌方法有湿热灭菌法、干热灭菌法、气体灭菌法、辐射灭菌法和过滤除菌法。可根据被灭菌物品的特性采用一种或多种方法组合灭菌。只要产品允许，应尽可能选用最终灭菌法（即产品分装至包装容器后再灭菌）灭菌。若产品不适合采用最终灭菌法，可选用过滤除菌法或无菌生产工艺达到无菌保证要求，只要可能，应对非最终灭菌的产品作补充性灭菌处理（如流通蒸汽灭菌）。 （一）湿热灭菌法 本法系指将物品置于灭菌柜内利用高压饱和蒸汽、过热水喷淋等手段使微生物菌体中的蛋白质、核酸发生变性而杀灭微生物的方法。该法灭菌能力强，为热力灭菌中最有效、应用最广泛的灭菌方法。药品、容器、培养基、无菌衣、胶塞以及其他遇高温和潮湿不发生变化或损坏的物品，均可用本法灭菌。流通蒸汽不能完全杀灭细菌孢子，一般可作为不耐热无菌产品的辅助灭菌手段。 湿热灭菌条件通常采用121℃*15min、121℃*15min或116℃*40min的程序，也可采用其他温度和时间参数。总之，必须保证对热稳定的物品，可采用过度杀灭法，其SAL应<=10(-12)。热稳定性较差产品的标准灭菌时间F。［指当灭菌温度为121℃，生物指示菌的耐热参数D值为1min，灭菌温度系数Z值为10.0℃时的标准灭菌时间（121℃下计算的微生物等效灭活率）］一般不低于8min，如产品的热稳定性很差时，可允许湿热灭菌的F。低于8min，此情况下，应在生产全过程中，对产品中污染的微生物严加监控，并采取各种措施降低微生物污染水平，确保被灭菌产品达到无菌保证要求。 采用湿热灭菌时，被灭菌物品应有适当的包装和装载方式，不能排列过密，以保证灭菌的有效性和均一性。 湿热灭菌工艺验证时，应进行热分布试验、热穿透试验和生物指示剂验证试验。以确定灭菌柜空载及不同装载时腔室中的热分布状况及可能存在的冷点；在空载条件下，确认121℃时腔室各点的温度差值应<1℃；使用插入实际物品或模拟物品内的温度探头，确认灭菌柜在不同装载时，最冷点物品的标准灭菌时间（F。）达到设定的标准；用生物指示剂进一步确认在不同装载时冷点处的灭菌物品达到无菌保证水平。本法常用的生物指示剂为嗜热脂肪芽孢杆菌孢子。 1、热分布试验的操作：空载状态下的热分布试验：①整个灭菌腔室内的温度探头应均匀分布，将水平和垂直区均覆盖在内；②说明温度探头在腔室内的数量及位置，并有图示；③在排水口处，在靠近设备本身的温度传感/控制器的位置，应再放置一支探头；④在灭菌温度稳定期，各处温度应基本保持一致（如各点之间的温度差在1℃范围内）；⑤重复试验至少3次，以证明在该工艺条件下的温度均一性、重现性、并且与规定标准相符；⑥每种装载方式下的热分布试验；⑦在产品容器内以及腔室均匀放置测温探头以确定在装载状态下升温缓慢的位置。此试验应在最大和最小装载方式下分别进行。 测定不同装载方式对产品的热力学效果的影响，通过实验应得到以下参数： ①保温阶段的最高和最低温度（温度范围）及平均温度；②最小和最大F。值；③保温时间。复试验装载3次，以证明在该工艺条件下的温度均一性、重现性、并且与规定标准相符。 2、热穿透试验：通过在产品容器内均匀分布测温探头以确定在灭菌时相应装载方式下的冷点。应分别在最大和最小装载方式下进行此试验，以确定不同装载方式对被灭菌物品的热力学效果的影响，通过实验应能获得如下数据：各点间的最大和最低温度（温度范围）保温阶段各点的平均温度、各点的最小及最大F。值、以及各点的保温时间。 通过热穿透试验应达到以下目的：①测试数据应证明，在灭菌保温阶段整个腔室内各容器内的温度应不超过士1℃，各容器内温度之间的最大温差应不超过2℃；②根据灭菌参数确定合适的产品灭菌程序；

湿热灭菌法的具体方法有哪些

湿热灭菌法的具体方法有哪些 细菌在我们生活中无处不在，给我们的生活造成了极大的影响。因此，在生活中接触到了不少灭菌的方法，其中比较典型的就是湿热灭菌法，很多时候都需要采用湿热灭菌法进行杀毒。所以，湿热灭菌法的具体方法是大家关心的事项。那么，湿热灭菌法的具体方法有哪些?下面咱们就来详细了解一下吧。 影响湿热灭菌的主要因素有：微生物的种类与数量、蒸汽的性质、药品性质和灭菌时间等。 (1)流通蒸气灭菌法：是指在常压条件下，采用100摄氏度流通蒸气加热杀灭微生物的方法，灭菌时间通常为30-60分钟。该法适用于消毒以及不耐高热制剂的灭菌，但不能保证杀灭所有芽孢，是非可靠的灭菌方法。 (2)间歇蒸汽灭菌法：利用反复多次的流通蒸汽加热，杀灭所有微生物，包括芽胞。方法同流通蒸汽灭菌法，但要重复3次以上，每次间歇是将要灭菌的物体放到37℃孵箱过夜，目的是

使芽胞发育成繁殖体。若被灭菌物不耐100℃高温，可将温度降至75℃～80℃，加热延长为30～60分钟，并增加次数。适用于不耐高热的含糖或牛奶的培养基。 (3)高压蒸汽灭菌法：103.4千帕蒸汽压温度达121.3℃，维持15-20分钟。 湿热灭菌法湿热法可在较低的温度下达到与干热法相同的灭菌效果，因为：①湿热中蛋白吸收水份，更易凝固变性;②水分子的穿透力比空气大，更易均匀传递热能;③蒸汽有潜热存在，每1克水由气态变成液态可释放出529卡热能，可迅速提高物体的温度。 湿热灭菌法一般采用121℃，灭菌20-30min，如果是产孢子的微生物则应采用灭菌后适宜温度下培养几小时，再灭菌一次，以用于杀死刚刚萌发的孢子。 上面就是对湿热灭菌法的具体方法有哪些的介绍，希望对大家的认识有帮助。湿热灭菌法的方法还是很多的，都是比较简单的一些措施，我们可以详细的进行了解，在平时的生活中就能够用到了，不过其中不少方法都是需要专业设备的，可以选择自己合适的。