基质金属蛋白酶-9在ACS中的意义及其治疗进展

?９４８?ＣＨＩＮＥＳＥＪＯＵＲＮＡＬＯＦＩＮＴＥＧＲＡＴＩＶＥＭＥＤＩＣＩＮＥＯＮＣＡＲＤＩＯ一／ＣＥＲＥＢＲ（）ＶＡＳＣＵＬＡＲＤＩＳＥＡＳＥＡｕｇｕｓｔ２００９Ｖ０１．７Ｎｏ．８

基质金属蛋白酶一９在ＡＣＳ中

的意义及其治疗进展

蒋莹。范金茹

中图分类号：Ｒ５４１．４Ｒ２５６．２文献标识码：Ａ文章编号：１６７２—１３４９（２００９）０８—０９４８—０２

急性冠脉综合征（ＡＣＳ）是指由于冠状动脉急性病变致严重狭窄或闭塞所产生的一组Ｉ临床综合征。冠状动脉粥样硬化斑块破裂并触发血栓形成。是导致ＡＣＳ发生的重要机制。不稳定斑块内过度分泌，降解纤维帽内细胞外基质而加速斑块破裂，继发血栓形成，从而导致ＡＣＳ的发生。因此．慕质金属蛋白酶（ＭＭＰｓ）被认为是影响斑块稳定性的重要因素之一。ＡＣＳ患者血清基质金属蛋白酶一９（ＭＭＰ一９）浓度明显升高．动态检测血清ＭＭＰ一９有助于判断治疗效果和预后。另外ＭＭＰ一９还参与缺血再灌注损伤，心肌梗死后心室重构，充血性心力衰竭进展，心房颤动的发生及维持等。

ｌＭＭＰ一９

１．１ＭＭＰ一９的结构和功能ＭＭＰ一９又称明胶酶Ｂ或９２ｋＤⅣ型胶原，以９２ｋＤ的酶原形式分泌。ＭＭＰ一９前体可由单核细胞、巨噬细胞、破骨细胞、软骨细胞、骨骼肌卫星细胞、内皮细胞及许多肿瘤细胞等分泌，在８７位氨基酸残基或附近被酶解，产生分子量约为８２ｋＤ的活性形式。参与炎症反应、组织构型、创伤修复、基质结合的生长因子的动员及细胞因子的表达。近年研究表明，明胶酶能持续降解间质的纤维类胶原，在细胞外基质重塑中具有重要作用。参与多种生理及病理损伤过程。１．２ＭＭＰ一９活性的调节ＭＭＰ一９以酶原形式分泌到细胞外，通过纤维蛋白溶酶依赖及非依赖性两种途径介导水解去除前肽区激活，选择性的与细胞外基质成分结合。与许多ＭＭＰｓ相同，ＭＭＰ一９的调节主要通过基因转录、酶原激活及ＭＭＰ一９的生理性抑制物（ＴＩＭＰ一１）３个水平实现，使ＭＭＰ一９失活，许多细胞因子如：转化生长因子一Ｂ（ＴＧＦ—Ｂ）、白介素一ｌｆｌ（ＩＬ一１ｐ）、肿瘤坏死因子（ＴＮＦ—ｎ）和白介素一ｌａ（ＩＬ—ｌａ）亦可上调ＭＭＰ一９的表达。通过上述环节间的相互作用，对维持人体ＭＭＰ一９的稳态具有重要的作用。

２ＭＭＰ一９与ＡＣＳ

冠心病（ＣＨＤ）其病理基础是动脉粥样硬化（ＡＳ），动脉粥样硬化斑块存在两种状态即稳定和不稳定斑块。ＡＣＳ包括不稳定心绞痛（ＵＡＰ）、急性心肌梗死（Ｑ波及非Ｑ波）及急性缺血性心源性猝死（ＳＣＤ）。其发生是冠脉不稳定粥样斑块的局部破裂，内皮下胶原暴露，激活凝血途径而致血管内血栓形成，完全或不完全堵塞血管导致急性心肌缺血而引起的临床综合征。许多病理机制参与斑块破裂过程，如斑块内Ｔ淋巴细胞、巨噬细胞等炎症细胞的激活及炎症因子的释放，刺激炎症细胞等释放基质金属蛋白酶，破坏斑块的纤维帽等［１］。冠脉斑块中的巨噬细胞可分泌多种基质金属蛋白酶，它们通过对斑块纤维帽的降解及破裂影响，在动脉粥样硬化斑块细胞外基质重构，特别是诱导斑块破裂，诱发ＡＣＳ的发生中有重要作用，在ＡＣＳ的发病机制中起着决定性的作用。其中ＭＭＰ一９与动脉粥样硬化斑块的不稳定性尤为相关。２．１ＭＭＰ一９与ＡＣＳ的发生冠脉内不稳定斑块破裂及血栓形成是导致ＡＣＳ的主要原因。典型的动脉粥样斑块由一个脂质、坏死细胞及其残存物质混合形成的粥样核心和纤维帽组成。纤维帽主要由细胞外基质（ＥＣＭ）组成，其主要成分是胶原，胶原纤维处于动态分解和合成过程中。纤维帽将脂质核心与循环血液隔开，避免血栓形成。斑块纤维帽承受的应力与其他部分相比作用最强。且随着纤维帽的硬度增加，受力部位由纤维帽的中心移到了它的边缘或肩部，故纤维帽的厚度很大程度上决定了斑块的稳定性。而ＭＭＰｓ是调节ＥＣＭ最重要的酶类，因此在ＡＣＳ的形成过程中起着十分重要的作用。ＭＭＰ一９是ＭＭＰｓ家族中最重要的成员，ＴＩＭＰ一１为ＭＭＰｓ的组织抑制剂，正常内皮细胞和平滑肌细胞有ＴＩＭＰ一１和ＭＭＰ一９的表达，但无活性，ＭＭＰ一９和ＴＩＭＰ一１处于平衡状态，维持细胞外基质合成与降解相对平衡和ＥＣＭ成分相对稳定，但在ＡＣＳ的发生过程中，ＭＭＰ一９与ＴＩＭＰ一１失去平衡，ＭＭＰ一９表达增加大于ＴＩＭＰ一１表达增加。使冠脉粥样硬化斑块纤维帽的胶原降解大于合成，导致斑块脆性增加并最终破裂。Ｂｒｏｗｎ等睇］也报道ＭＭＰ一９通常在新近斑块破裂的冠状动脉旋切标本中表达，急性心肌梗死和ＵＡＰ患者的ＭＭＰ一９水平显著升高。２．２ＭＭＰ一９与ＡＣＳ的诊断目前对ＡＣＳ的诊断主要依据患者的临床症状、心电图和心肌坏死生化标志物的变化，缺乏灵敏特异的指标。而对于大多数无特异性症状和明确的心电图心肌缺血改变的患者。生化标志物变化对明确诊断的意义十分重大。ＭＭＰ一９水平与冠心病事件的严重程度呈正相关性。因此。可以将冠心病患者斑清ＭＭＰ一９水平增高作为ＡＣＳ发生的一个危险信号，作为冠心病患者危险分层的一个重要生化监测指标。从理论上来说，ＡＣＳ患者ＭＭＰ一９的表达早于肌酸激酶（ＣＫ）、肌酸激酶同工酶（ＣＫ—ＭＢ）、肌钙蛋白Ｉ和肌钙蛋白Ｔ等心肌损伤标志物，提示ＭＭＰ一９有可能是ＡＣＳ早期诊断的敏感生化检测指标，但仍需实验证实。Ｍａｎｇｉｎａｓ等［３３对ＡＣＳ患者的研究发现，血清ＭＭＰ一９水平明显升高。而且与肌钙蛋白ｌ间存在相关性，但Ｋａｉｌ等［４］发现ＡＣＳ患者中升高的ＭＭＰ一９水平与血清ＣＫ、ＣＫ—ＭＢ升高之间无相关性。ＭＭＰ一９在ＡＣＳ中的诊断价值仍有待进一步研究。

２．３ＭＭＰ一９与缺血再灌注损伤再灌注损伤主要与钙超载、氧自由基大量产生和内皮细胞激活有关。近年来研究表明，心肌缺血再灌注损伤的发展过程与ＭＭＰ一９的表达及活性增强有关。在许多实验性心肌损伤中，如鼠、兔持续冠脉闭塞模型和猪再灌注损伤模型中，ＭＭＰ一９活性增加等。在缺血再灌注心肌，中性粒细胞是ＭＭＰ一９主要来源，同时后者又有助于中性粒细胞迁移、组织破坏、再灌注时激活炎症介质。Ｋａｍｅｄａ等［５３实验发现，在缺血再灌注的心肌中明胶溶解和胶原分解活性增加．其活性增加是由予ＭＭＰ一９的数量的增加、免疫反应

万方数据

中西医结合心脑血管病杂志２００９年８月第７卷第８期?９４９?

增高所致。

２．４ＭＭＰ一９与心肌梗死后心室重构心肌梗死急性期ＭＭＰｓ的表达及其在随后心室重构中的作用是近几年的研究方向。心室重构是决定心脏病患者心功能及其预后的主要因素之一，越来越多的证据证明心肌细胞外基质并不是一个静止的结构，而是一个动态的实体，它在心脏适应病理压力的改变中起基本作用，从而促进重构。心肌胶原基质对于维持心肌细胞的排列、协调心肌收缩性及维持心室几何形态发挥着重要作用。目前认为ＭＭＰｓ在左室重构中的主要作用是直接降解ＥＣＭ中的胶原，引起ＥＣＭ退化，从而使心肌排列紊乱，收缩功能异常。Ｒｏｍａｎｉｃ等发现ＭＭＰ一９缺陷鼠心肌梗死后梗死面积缩小，中性粒细胞浸润减少，心脏破裂发生率降低ｒ５］。

３针对ＭＭＰｓ治疗ＡＣＳ研究概况

近年来许多研究表明，ＭＭＰｓ与ＴＩＭＰｓ失衡是造成动脉粥样斑块不稳定的重要原因之一。抑制ＭＭＰｓ活性已成为治疗心血管疾病的一个靶点。因此，人们已开始研究怎样抑制ＭＭＰｓ的活性以达到稳定斑块。预防ＡＣＳ的发生和发展。３．１他汀类调脂药他汀类药物早期应用具有抗炎作用．临床试验证实他汀类行心肌梗死二级预防，能降低病死率和缺血事件发生率，一方面由于其调脂作用，另一方面又与他汀类药物调脂外作用有关，稳定斑块是他汀类药物治疗冠脉粥样硬化的非调脂作用之一。他汀类药物可减少动脉粥样硬化斑块病变中巨噬细胞的含量，降低ＭＭＰｓ的活性，减少斑块基质降解，从而增加斑块纤维帽的稳定性。

３．２血管紧张素转换酶抑制剂（ＡＣＥＩ）和血管紧张素Ｂ（Ａｎ９９）的Ｉ型受受体阻滞剂ＡＣＥＩ和血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇＩＩ）的Ｉ型受受体阻滞剂可影响ＭＭＰｓ活性，其机制可能为：①抗氧化作用，氧自由基可从转录水平上调ＭＭＰｓ表达和从转录后水平直接激活ＭＭＰｓ，而使ＭＭＰｓ净活性增高，氧化应激可部分通过ＭＭＰｓ表达和活性增加参与组织或细胞损伤过程；②拈抗肾素一血管紧张索一醛固酮系统，ＡｎｇⅡ可通过调节纤维蛋白溶酶原激活剂、纤维蛋白溶酶抑制剂系统参与ＭＭＰｓ瀑布系统的激活，增加的合成和活性；③ＡＣＥＩ通过其自由基与ＭＭＰｓ活性中心锌离子结合直接抑制其活性。

３．３ＲＮＡ干扰真核表达载体ＲＮＡ干扰现象是指内源性或外源性与靶基因的转录产物ｔｕＲＮＡ存在同源互补序列的双链ＲＮＡ，在细胞内特异地降解该ｔｕＲＮＡ，从而致使特异性的基因有效封闭的过程。它是最近几年发现和发展起来的新兴的基因阻断技术。其在功能基因组和相关方面的研究中具有许多传统方法无可比拟的特点和优势【６］。

３．４中医药对ＭＭＰ一９的干预作用

３．４．１益心方对ＭＭＰ一９的干预益心方由黄芪、丹参、川芎，葛根，党参、赤芍、石菖蒲、降香、山楂等组成，以益气养心，活血通脉为法立方。闷士钦等［７］研究发现益心方可降低ＭＭＰ一９的表达，治疗组心绞痛的有效率为８３．３％。明显高于对照组的６８．７％；治疗后两组ＭＭＰ一９的含量均明显下降，且治疗组的台量明显低于对照组，提示益心方可降低ＭＭＰ一９的表达。３．４．２血脂康对ＭＭＰ一９的干预血脂康是我国开发研制的调脂中成药，含有他汀类、不饱和脂肪酸、氨基酸、麦角甾醇、生物碱、黄酮类物质，近年开始应用于治疗冠状动脉粥样硬化性心脏病患者。王万粮等［８３用ｍ瞪康治疗不稳定型心绞痛，发现治疗组对患者血清ＭＭＰ一９的干预明显优于他汀组，其机制可能从调脂、抗炎、改善血管内皮功能等方面作用在动脉粥样硬化斑块形成的环节上，干扰了动脉粥样硬化斑块的进一步形成。达成稳定斑块的治疗目的。

３．４．３参麦注射液联合血塞通注射液对ＭＭＰ一９的干预参麦注射液由人参、麦冬组成，具有益气同脱、养阴生津、补心复脉之功效。现代医学研究证实。参麦注射液可促进心肌产生和释放前列环素，抑制血栓素Ａ：（ＴＸＡ２）生成。促进心肌细胞ＤＮＡ合成与更新，减少或清除自由基，有效加强心肌收缩力，增加冠状动脉血流量。血塞通注射液具有活血化瘀之功效，其有效成分ｉ七总皂甙是一种非特异性钙通道阻断剂。可抑制细胞内钙离子超载所致的平滑肌收缩，并能扩张冠状动脉，降低心肌耗氧量，亦能抑制血小板合成前列环素，从而抑制血小板的黏附和聚集，抑制微缸栓形成。有研究表明凹】参麦注射液联合血塞通注射液能够降低患者血清ＭＭＰ一９，从而治疗ＡＣＳ。

近年来，人们逐渐认识到可降解细胞外基质的ＭＭＰｓ在心血管重塑中扮演着非常重要的角色。越来越多的研究证实ＭＭＰ一９与斑块的炎性反应及稳定性有关。有望成为诊断ＡＣＳ的早期敏感标志物，对其的干预也为治疗ＡＣＳ提供了新靶点。

参考文献：

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作者简介：鞯莹（１９８２一）。女．现为湖南中医药大学在读硕士研究生（邮编：４１０００７）Ｉ范金茹，工作于湖南中医药大学。

（收稿日期：２００９—０３—１６）

（本文编辑郭怀印）

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金属基质蛋白酶9与疾病的研究进展

金属基质蛋白酶9与疾病的研究进展 摘要：金属基质蛋白酶（MMPs）是一组可以选择性降解细胞外基质（ECM）的内肽酶，金属基质蛋白酶9（MMP-9）又名明胶酶B，它是MMPs家族中一个重要成员，能水解弹性蛋白、胶原蛋白、明胶、纤维蛋白等多种细胞外基质成分，在生理情况下参与人体的正常发育，是ECM降解的生理性调节因子。所有MMPs都受金属基质蛋白酶抑制剂所抑制，两者的不平衡导致许多疾病的发生。金属基质蛋白酶抑制剂1（tissue inhibitor of metalloproteinase-1，TIMP-1）为MMP-9特异性抑制剂，目前认为MMP-9与TIMP-1是调节ECM降解、合成的主要酶类，MMP-9/TIMP-1比值失衡是多种疾病发生、发展的重要机制之一。近年研究发现MMP-9还与全身多系统疾病的发生、发展有关，现就MMP-9与多种疾病的相关研究进展进行综述。 关键词：金属基质蛋白酶9；疾病；研究进展金属基质蛋白酶（matrix metalloteinases，MMPs）是一组锌离子依赖的肽链内肽酶，因含金属离子（锌、钙）而得名，现至少已发现26种MMPs，称为MMPs家族，是构成细胞外基质降解最重要的蛋白水解系统。其抑制剂（tissue inhibitor of metalloproteinases，TIMPs）是调节MMPs的重要因素。MMPs

与TIMPs在维持ECM的动态平衡中起重要作用。细胞外基质（extracellullar matrix，ECM）是一类由胶原、蛋白聚糖及糖蛋白等大分子物质组成的动态网状结构，ECM不仅起细胞与细胞之间机械支持和连接作用，也是细胞与细胞之间信号传递的桥梁，现已识别丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、基质金属蛋白酶均能降解ECM[1]。金属基质蛋白酶9（matrix metalloteinases-9，MMP-9）是MMPs家族分子量最大的明胶酶。TIMP-1是MMP-9的重要的生理性抑制剂，二者在维持ECM的动态平衡中起重要作用。MMP-9/TIMP-1比值失衡是多种疾病发生、发展的重要机制之一。近年许多研究发现MMP-9与多种疾病的发生发展密切相关。 1 MMP-9概述 MMP-9是1974年从人中性粒细胞中首次提纯得到，于1989年的金属蛋白酶学会上被正式命名。MMP-9的分子量为92KD，MMP-9基因长7.7kb，含13个外显子，其长度不一，位于染色体的20q11.2-13.1[2]。MMP-9起源于角质形成细胞、单核细胞、中性粒细胞、巨噬细胞和成纤维细胞。在生理PH值时，在金属锌离子的作用下，能够切断任何ECM 成分，调节细胞黏附、作用于细胞外成分或其他蛋白成分而启动潜在生物学功能，直接或间接参与胚胎发育、组织模型重建和场上恢复等正常生理功能。MMP-9其作用底物包括明

基质金属蛋白酶

基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs) 基质金属蛋白酶是一个大家族，因其需要Ca++、Zn++等金属离子作为辅助因子而得名，其家族成员具有相似的结构，一般由5个功能不同的结构域组成:（1）疏水信号肽序列;（2）前肽区，主要作用是保持酶原的稳定。当该区域被外源性酶切断后，MMPs酶原被激活;（3）催化活性区，有锌离子结合位点，对酶催化作用的发挥至关重要;（4）富含脯氨酸的铰链区;（5）羧基末端区，与酶的底物特异性有关。其中酶催化活性区和前肽区具有高度保守性。MMPs成员上述结构的基础上各有特点。各种MMP间具有一定的底物特异性，但不是绝对的。同一种MMP可降解多种细胞外基质成份，而某一种细胞外基质成分又可被多种MMP 降解，但不同酶的降解效率可不同。 MMPs几乎能降解ECM中的各种蛋白成分,破坏肿瘤细胞侵袭的组织学屏障，在肿瘤侵袭转移中起关键性作用，从而在肿瘤浸润转移中的作用日益受到重视，被认为是该过程中主要的蛋白水解酶。目前MMPs家族已分离鉴别出26个成员，编号分别为MMP1～26。根据作用底物以及片断同源性，将MMPs分为4类。 Ⅳ型胶原酶为其中重要的一类，它主要有两种形式，一种被糖化，分子量为92kD，命名为MMP-9;另一种非糖化，分子量为72kD，被称为MMP-2。当前对MMP-2，MMP-9的研究较深入。 MMP-2基因位于人类染色体16q21，由13个外显子和12个内含子所组成，结构基因总长度为27kb，与其他金属蛋白酶不同，MMP-2基因5’旁侧序列促进子区域含有2个GC盒而不是TATA盒。活化的MMP-2定位于细胞穿透基质的突出部位，估计其在酶解细胞间基质成分及基底膜的主要成分Ⅳ型胶原中有“钻头”的作用。 此外，已证实MMP-3 和MMP-10能作用于PG、LN、FN、Ⅲ型和Ⅳ型胶原及明胶。MMP-7能作用于明胶和FN。MMP-1的产生范围较广，可由基质纤维母

基质金属蛋白酶_

基质金属蛋白酶_ 基质金属蛋白酶 细胞外基质和基底膜重塑是癌细胞侵袭转移过程中的关键环节，需借助于蛋白降解酶的表达和激活。基质蛋白酶主要有以下数种：丝氨酸蛋白酶类，包括血浆酶原激活剂；半胱氨酸蛋白酶类，包括组织蛋白酶0在内的溶酶体酶；金属蛋白酶类0^1&110^^0^611^565) [1]。金属蛋白酶类在肿瘤侵袭过程中的作用近年来倍受关注，大量证据表明基质金属蛋白酶，特别是基质金属蛋白酶- 2 (matrix metalloproteinase-2, MMP-2)在肿瘤细胞介导的细胞外基质降解中起关键作用，临床研究表明，順?_2活性和表达的增加与人类多种恶性肿瘤侵袭转移潜能及预后密切相关[2?4]。 一.嫩识-2基因及其表达和激活的调节 MMP-2基因位于人类染色体16q21,由13个外显子和12个内含子所组成，结构基因总长度为27此，与其他金属蛋白酶不同，_-2基因5'旁侧序列促进子区域含有2个60盒而不是1414盒[5]。_-2以前酶原的形式由多种细胞分泌，如成纤维细胞、巨噬细胞、内皮细胞和恶性肿瘤细胞等。与其他金属蛋白酶相似，嫩1?-2分子含有氨基末端片段、金属结合片段及竣基末端片段，其中带有高度保守序列PRCGV/NPD的氨基末端具有一个不配对的半胱氨酸残基，该残基与激活位点的锌原子相互作用介导着—_2的前体状态；金属结合片段是公认的锌结合部位，其含旁侧有2个组氨酸的保守序列册4出羧基末端具有类似凝血酶的片段，该片段的具体功能尚未明确。此外，_-2还具有一个 58个氨基酸残基组成的明胶结合片段，此片段与纤维连接素的明胶结合11型基元相似[6]。目前认为，_-2表达和功能的调节发生于转录、分泌、前酶原 的激活、细胞表面的结合以及与来源于肿瘤或宿主细胞的MMP抑制剂的相互作用等多个不同的水平。 MMP-2的转录调节与其他金属蛋白酶相比具有一定的独特性，如佛波醇酯 (phorbol 6316：^通过仙-1位点的介导增加腿?-9和间质胶原酶的表达，而

基质金属蛋白酶酶谱分析法

基质金属蛋白酶酶谱分析法刘　煜　张嘉宁　朱正美 基质金属蛋白酶(m atrix m etallop ro teinases, MM P s)是一组重要的蛋白水解酶,可以水解细胞外基质中胶原、纤维连接蛋白等多种成分[1],参与了人体内许多生理和病理过程,如骨的重建[2]、肿瘤转移[3]等都与MM P s密切相关。近年来研究发现MM P s与生殖过程关系密切[4,5],如在月经的发生,着床与分娩过程都有一定的MM P s的变化,因而对MM P s的活性及种类的分析有着很重要的意义。目前分析MM P s活性及酶量的方法有多种,其中酶谱法是将非还原性SD S2 PA GE电泳分析酶种类与检测酶活性有效结合的一种酶学方法。尤其是具有在电泳中可将组织内与MM P s 紧密结合的组织抑制剂(T I M P s)分离,进而表现出酶的活性,从而达到在分离不同MM P s的同时又可直接显示其活性条带一举两得的特点。鉴于MM P s酶谱分析法具有方法灵敏,结果直观,能同时观察酶与酶原种类和活性等优点,且其方法较简便,适于在不同实验室应用。本研究用早孕子宫内膜样品经组织培养后,将其所分泌的MM P s运用酶谱分析法进行鉴别种类和活性分析,对方法的实验原理及条件进行了介绍,并就其优缺点进行讨论。 一、材料与方法 11材料:丙烯酰胺(A cry),十二烷基磺酸钠(SD S),T riton2X100,Pep statine A,苯甲基磺酰氟(P M SF),N,N2亚甲基丙烯酰胺(B is),1,10菲洛林(1,10phenan th ro line),ED TA,明胶蛋白,DM E M F12无血清培养基,考马斯亮蓝G250,以上均为Sig2 m a公司产品;冰醋酸,甲醇(国产分析纯);72、92×103明胶酶标准品(美国N I H,D r.Stetler2Steven son W G 惠赠)。 21子宫内膜组织块培养:子宫内膜用灭菌冷生理盐水冲洗血迹后,剪成2mm2大小,在24孔培养板中加重量约50m g 孔组织块及1m l培养基后,于5% CO2、37℃条件下,培养5小时,收集上清,-20℃冰箱冻存用于酶谱分析[6]。 31酶谱法:实验原理:MM P s与SD S结合使MM P s结构发生改变,后经SD S2PA GE电泳,将分子量不同的MM P s以及与MM P s结合的组织抑制剂同时分离,再用T rti on2X100除去SD S,在这一过程中引发了MM P s酶原蛋白体外活化机制,酶原在凝胶内除掉一个约10×103的小肽,转变为有活性的酶。MM P s 在体内常以酶原形式分泌并可被纤溶酶等物质激活[7],活化后的MM P s,在除掉SD S后也可以恢复酶活性,在酶谱上称之为活性型MM P s,从而与酶原相区别,由于它在体内已具有水解胶原等基质的作用,因而在功能上的意义要大于相应的酶原。经过酶的复性及酶原的活化后,凝胶内已经具有活性的MM P s则可在适宜的条件下将其所在位置的底物明胶蛋白或其它底物蛋白(制凝胶时已均匀掺入其中)水解,然后用考马斯亮蓝G250染色,再用脱色液脱色,结果见凝胶普遍蓝染,而底物被水解处即可见到清晰的透明条带,根据其透明的程度及面积的大小判断其酶活性的高底,该方法还可以通过变换底物,从而用来研究不同种类的MM P s。如用酪蛋白做底物研究基质溶解素等。 取上述收集的培养上清50Λl加入10Λl样品缓冲液(含1714%SD S,7%蔗糖)混匀后即可进行上样,然后将含有1m g m l明胶蛋白的10%的丙烯酰胺凝胶加入V216垂直电泳槽中,按照L aem n li[8]方法进行电泳,结束后将凝胶置于培养皿中,加入215%T riton2 X100100m l,振荡,重复洗6次,每次5分钟,再用T ris HC l缓冲液(50mmo l L T ris,pH714)冲洗3次,每次5分钟,之后将凝胶放入反应液中(50mmo l L T ris,pH714,200mmo l L N aC l,10mmo l L CaC l2), 37℃培养18小时(该步骤可根据实验要求分别加入1, 10phenan th ro line1mmo l L,ED TA20mmo l L,Pep2 statine A1mmo l L,P M SF20mmo l L等不同的蛋白酶抑制剂,用以鉴定MM P s存在),然后将凝胶置于011%考马斯亮蓝G2250染色液中染色1小时,最后放入脱色液(5%甲醇,715%冰醋酸)中进行脱色[9]。 二、结果 11早孕子宫内膜的MM P s酶谱:应用酶谱法从早 作者单位:116027　大连医科大学生化教研室

基质金属蛋白酶在皮肤病中的研究进展

突、枕鳞、部分枕髁和C1、C2的一侧后弓、侧块、椎弓及横突等。在分离C1、C2时注意保护椎动脉。骨质的切除范围包括一侧部分枕鳞、枕骨大孔后外缘、C1后弓、乳突,使乙状窦可被牵拉向外侧从而扩大对岩斜区的暴露角。沿乙状窦内侧5mm 处切开硬膜,硬脊膜的切开于椎动脉穿过寰枕膜处的外侧,硬膜瓣翻向中线侧。牵开小脑即可暴露相关解剖结构。 此区域神经、血管众多,包括Ⅶ～Ⅻ颅神经、C1和C2神经根、椎动脉Ⅴ3、Ⅴ4段、基底动脉、小脑前下动脉、小脑后下动脉、脊髓前后动脉和众多的小穿支。手术的重点在于寻找、暴露及保护椎动脉,椎动脉总是位于神经根的腹侧、下斜肌的下缘[8]。此处有丰富的静脉丛围绕椎动脉。C1横突孔是有价值的骨性标志[9]。 此种入路手术技术要求较高,但对于中、下斜坡区病变,其距离近,视野宽广,不失为一种较理想的手术入路。 3.5　颞底或颞下入路　耳前颞底或颞下入路为经岩骨前部从 前外侧方向到达斜坡的途径。颞底或颞下入路的皮肤切口自耳前颧弓下缘向下向后至颞上线处拐向前,止于眶外上方发际缘。分离颞肌至骨质,截断颧弓后形成颧颞骨窗,颞底部骨质切除可达翼突外侧板附近。处理桥静脉后可将颞叶抬起,解剖颈动脉池、脚间池、环池等脑池,可进一步抬起颞叶,如暴露仍欠佳,可切除部分颞叶。 此入路适合上岩斜区向外上发展,或突入颞下窝的病变。病变须较局限,如较大,则须使用联合入路。 4　小结 手术入路的选择是神经外科手术的重要组成部分,也是手术成功与否的决定性因素之一。在处理岩斜区病变时,手术入路的选择则显得更加重要。在选择手术入路时主要考虑以下 几点:(1)肿瘤的大小、部位及受累及的区域;(2)颅底骨质的改变;(3)脑干受压的程度、方向;(4)基底动脉与肿瘤的位置关系; (5)肿瘤的供血来源及静脉回流以及瘤周水肿;(6)术前神经功 能缺失的程度;(7)患者的年龄和一般状况;(8)术者的经验和对手术的认识程度。术前对影像学资料的精确分析可以提供预测岩斜区肿瘤的危险程度的重要信息,帮助神经外科医师估计手术风险。 参考文献 1　Y https://www.wendangku.net/doc/d915446808.html,teral suboccipital approach for vertebal and verebrobasilar lesions. Neurosurgery ,1986,64:5592562.2　Lorenz o ND.T rans oral approach to extradural lesions of the lower clivus and upper cervical spine :An experience of 19cases.Neurosurgery ,1989,24:37243. 3　Babu RP ,Sekhar LN ,Wright DC.Extreme lateral transcondylar approach : tethnical im provements and less ons earned.Neurosurgery ,1994,81:49259.4　Hakuba TR ,Sen CN ,Sekhar LN.Surgical management of anterionly placed lesions at the cranio 2cervical junction an alternative approach.Acta Neurochir ,1991,108:70277.5　Sam ii M ,G eorge B ,Demalons https://www.wendangku.net/doc/d915446808.html,teral approach to the anterior portion of the foramen magnum.Surg Neurol ,1998,29:484. 6　Sen N ,Carvalho C.Surgical results for meningiomas of the cranio 2cervical junction.Neurosurgery ,1998,39:108621087.7　S pektor S ,Aanclers on C J.Quantitative description of the far lateral transcon 2dylar and transtubercular approach to the clivus.Neurosurgery ,2000,92:824.8　W en HT ,Rhoton A L ,K alsnla T ,et al.M icrosurgical anatomy of the transcon 2dylar ,supercondylar ,and paracondylar extension of the far lateral approah. Neurosurgery ,1997,22:5552557.9　Salas E.Sekhar LS.Z ival LV.Variations of the far lateral transcondylar and transtubercular approach :anatom ical and clinical analysis of 69patients.Neurosurgery ,1999,90:2062219. (收稿日期:2006-08-29) ?综述与讲座? 基质金属蛋白酶在皮肤病中的研究进展 蔡丽　丁政云 作者单位:050011　石家庄市,河北医科大学第四医院皮肤科 基质金属蛋白酶(M MP )是一族锌依赖性内肽酶,可降解细胞外基质中各种蛋白成分,基质金属蛋白酶抑制剂(TI MP )能特异性抑制其活性。基质金属蛋白酶及其抑制剂是细胞外基质合成及代谢平衡中两个重要的酶系,参与多种与细胞外基质蛋白水解重塑有关的生理过程,如组织发生、组织修复、血管形成等,二者表达的失衡与类风湿性关节炎、骨性关节炎、慢性溃疡、皮肤老化、牙周炎以及肿瘤细胞侵袭转移有关[1]。近来研究表明,M MP 及其抑制剂与多种皮肤病发病有密切关系。 1　M MP 简述1.1　M MP 的结构 [2] 　M MP 是一类含有锌离子,活性依赖于钙 离子的蛋白酶,有下列基本结构。(1)信号肽与前肽区:信号肽 位于N -末端,其作用是引导翻译后的产物至胞浆内质网。前肽区内含有保守的PRCG V ΠNPD 序列,其中保守的半胱氨酸在大 多数M MP 酶原活化中有重要作用。(2)催化区:催化区中存在两个锌离子结合区和至少一个钙离子结合区。两个锌离子结合区中,一个位于活性中心内,涉及M MP 的催化过程,称为催化性锌离子;另一个为结构性锌离子。催化区有三个保守的组氨酸残基,是催化性锌离子结合的位点。(3)铰链区与类血红素蛋白结合区:铰链区位于催化区与类血红素蛋白区之间,以二硫键与类血红素结合蛋白区末端氨基酸残基相连。类血红素结合蛋白区含有4个重复序列,与血红素结合蛋白及玻璃粘连蛋白有较弱的同源性。此区的作用认为与大多数M MP 底物特异性有关,同时在M MP 与TI MP 结合中有重要作用。(4)跨膜区:此区存在于膜型基质金属蛋白酶(MT 2M MP )中,有将其固定于细胞膜上的作用。

基质金属蛋白酶

基质金属蛋白酶 【关键词】肠肿瘤；基质金属蛋白酶；肿瘤坏死因子受体 Effects of matrix metalloproteinase9 on the expression of tumor necrosis factor receptorl in human colon carcinoma cell lines 【Abstract】 AIM: To study the effects of matrix metalloproteinase9 (MMP9) on the expression of tumor necrosis factor receptorl (TNFRl) and migratory and invasive potentials in human colon carcinoma cells. METHODS: Immunofluorescence staining was applied to examine the expression of TNFRl in SW1116 in human colon carcinoma cell lines. The expression of TNFRl was assayed by flow cytometry in human colon carcinoma SW1116 cells treated with iMMP9 at different concentrations and at different time periods of culture. RESULTS: TNFRl was expressed in SW1116 cells and MMP9 downregulated the expression of TNFRl on cell surface in a dose and timedependent manner. CONCLUSION: MMP9 decreases the expression of TNFRl on the surface of human colon carcinoma cells, which may be a factor associated with invasive and metastasis potentials of colon carcinoma. 【Keywords】 intestinal neoplasms; matrix metalloproteinase; TNFR 【摘要】目的：研究基质金属蛋白酶9 (MMP9)对大肠癌细胞肿瘤坏死 因子受体1 (TNFRl)表达的影响以及促进大肠癌侵袭和转移的可能途径.方法: 通过免疫荧光法研究TNFRl在大肠癌细胞SW1116中的表达；用MMP9干预培养