谈奶牛性控冻精技术
摘 要：提高对性控冻精技术实践效果宣传力度，通过重点区域、重点小区的示范使用，使广大养殖户意识到性控冻精的使用价值，从而慢慢接受并使用性控冻精；政府各部门制定优惠政策，加大对奶牛养殖的扶持力度，调动奶农的养殖积极性；加大对性控冻精技术的研究资金投入，着力降低性控冻精生产的成本。
关键词：奶牛；性控冻精；技术使用
目前奶牛的主要繁殖方式是人工授精技术，从成本、效果来看，应用性控精液（X精液）通过人工授精来获得雌性犊牛是最佳途径，也是我们要推广的奶牛性别控制技术。
1 性控精液获得方法
性控精液的获得方法主要是流式细胞仪法，牛精液中Ｘ精子和Ｙ精子的DNA含量差异大更加容易分离，目前Ｘ精子的分离准确度可达90％以上。流式细胞仪分离法其主要流程包括采集精液——精液品质检测——合格者染色——流式细胞仪分离——性控精液冷冻——解冻。在精液分离冷冻处理过程中，精细胞可能受到许多因素的干扰，如：采集到处理的间隔时间、高度稀释、核染色、机械压力（通过检索仪时、激光照射、离心、冷冻等）。有研究表明，采集到处理的间隔时间越长，分离处理的效果越差，间隔时间一般不应超过24h，造成分离效果下降的原因，可能是在间隔时间内，环境因素会造成线粒体产生的活性氧（ROS）增加，较高的ROS水平将会使精子线粒体发生膨胀，诱导线粒体膜通透性发生改变，释放细胞色素Ｃ及其他凋亡相关因子损伤精子，损伤的精子又进一步增加ROS的生成，最终导致精液品质下降。另外，在精液冷冻解——冻过程中会造成部分精子的损伤和死亡，从而，产生更多对精细胞有害的ROS，精细胞的氧化损伤程度与精子冷冻效果有密切关系。为此，研究者一直以来，致力于研究精液冷冻保存的方法，探索选择合适的染色液、稀释液、鞘液、收集液、保存液、抗氧剂种类以及合适的冷冻保存方式，来提高精液冷冻保存的效果。稀释液的种类和配方对精液的冷冻效果非常重要，组成稀释液的主要成分包含糖类、盐类、蛋白类及一些抗冻保护剂。常用的糖类有葡萄糖、蔗糖、乳糖和果糖等，稀释液的糖类物质不仅为精细胞提供能量，还具有一定的防冻作用，甘油是一种常用的抗冻保护剂，因为甘油浓度对精子活力和顶体完整率有一定影响，对精细胞有一定的毒害作用，因此在运用中应注意控制其浓度。有研究发现，卵黄配合抗冻剂甘油对精液的冷冻保存也具有重要的作用。一般，卵黄的适宜添加量在15～20％，再进行充分搅拌混匀。添加抗氧化剂主要是抑制精细胞内的自由基的生成，预防不饱和酸发生过氧化，从而对精细胞膜起到保护作用。添加的抗氧化剂种类主要有维生素和一些酶类，维生素Ｃ和维生素Ｅ在具有重要的抗氧化作用，稀释液中添加维生素Ｅ能够增强牛精子抗氧化酶活性，可以使精子冷冻—解冻后的质量得到提高，其添加的适宜剂量为1.5mg/ml。在冷冻稀释液中添加维生素Ｃ对荷斯坦种公牛Ｘ精子的影响发现，随着解冻时间的延长，维生素Ｃ能够减缓精子的死亡，而解冻时间短则效果不明显，其适宜添加量为4～6mg/ml，并且发现荷斯坦公牛Ｘ精子在解冻后，其精子活率、质膜完整率及顶体完整率都有显著提高。对奶牛性控冻精生产工艺进行改进发现，改进后的精子活率、顶体完整率、母牛受胎率、犊牛性别控制准确率以及精液中抗氧化物酶活性都有显著提高，在大幅度降低成本的同时加快了分离速度，并且提高了每支细管中的有效精子含量。值得注意的是，在冷冻处理前可以对精子进行优选，将死精畸形精进行剔除，可以有效降低冷冻处理后的死精数，使得ROS产生减少，从而提高精液品质。
2 输精技术
性控冻精有效精子数远低于常规冻精，价格高于常规冻精，因此如何提高受胎率，节省成本就显得非常关键了。在运用性控冻精输精时，不仅要严格掌握好输精时间，而且要有过硬的输精技术，才能达到理想的受胎率。有很多资料表明：性控冻精输精部位不同，受胎率也不同，而且存在明显差异。子宫角深部输精比子宫体输精受胎率高出很多，效果也更好。但也对人工授精员提出了更高的标准、更严的要求。在输精时要求做到：慢插、轻拉、缓出，输精完毕，套管口不应有血迹，具体如下：（1）输精前用纸巾将阴户擦干净，严禁用消毒水清洗阴户；（2）进枪时，以35°～40°角向上插入5～10cm，避开尿道口后，再改为略向前下方进入阴道；（3）从直肠把握子宫颈；（4）内外两手协调操作；（5）不应以外面手强硬操作；（6）轻柔地使输精枪通过子宫颈，滑向子宫体内至子宫体前沿，达卵泡侧子宫角深部大弯处；（7）输精枪到达输精部位后缓慢注入精液；（8）输精完毕，缓慢退出输精枪，按摩子宫直至外阴有强烈收缩最佳；（9）如需促排可在输精后肌注LRH-A325～50μg。
3 奶牛性控冻精应用的体会
对专业技术工作，态度一定严谨、认真负责，业务娴熟。充分掌握实施对象的全面情况，如种精液的保管，种精液的解冻时间的问题，精子活力是否达到3.5以上，有效精子数应不少于1000万个。还有输精时间和次数的考虑，一般发情开始后或排卵前12h 左右适宜输精，发情期内输精1～2次，相隔8～12h为佳。做好工作前牛只及操作人员，器具的卫生检查和卫生消毒处理，备品的摆放，技术工作无小事，无死角，为工作人员及牛只创造优质的环境，防止应激情况的出现。临床来看，母牛的受精效果是，子宫正常的与患病的牛只的情期受孕率比为62%和46%，差异非常明显。力争达到卫生检查工作、并做好患牛治诊断，主要是确保母牛受孕成功。
参考文献
[1] 赵永静.提高种公牛精液品质的几项措施[J].养殖技术顾问，
2014，（10）：54-56.
谈奶牛性控冻精技术
马 莹
（济南畜牧技术推广站，山东济南 250031）
211