MS培养基的配制与灭菌 11

MS培养基的配制与灭菌

一、目的要求

1．熟悉组培母液吸取量的计算、琼脂、蔗糖的配制、各种母液的吸取、pH的调节培养基的分装与包装。

2．掌握高压蒸汽灭菌锅的使用方法。

二、仪器与试剂

1.器材：高压灭菌锅、移液管、量筒、培养瓶（三角瓶）、烧杯、玻璃棒、

标签、pH试纸、电炉、电子天平。

2.试剂：配制MS培养基的各种母液、生长调节剂、琼脂、蔗糖、自来水、浓

度为0.1 mol/L和0.5mol/L NaOH以及浓度为0.1 mol/L和0.5mol/L的HCl。

三、方法步骤

（一）MS固体培养基的配制

1.按实验说明进行MS大量元素的称量配置成1000毫升的大量元素母液配置

于试剂瓶中。

2.按培养基配方计算用量，称好凝固剂和糖的用量，取出母液，按顺序放好，

准备好称量用具和溶解用具。

3.在容器内加入相当配制量1/3的水，加入琼脂溶煮，再根据计算依次加入

大量元素、微量元素、铁盐、有机物、生长调节物质等，最后加入蔗糖并搅拌均匀,加水定容，搅拌均匀。

4.调整pH值，使PH为

5.5～

6.0。

5.尽快分装，培养基占容器的1/5--1/4为宜，尽量避免培养基沾到容器内壁或容器口，标记日期。

6.封口。

（二） MS固体培养基的灭菌——高压蒸汽灭菌（湿热灭菌法）

1.洗涤：把组织培养基用的培养皿、三角瓶、试管等玻璃器皿进行彻底清洗。

自然晾干或烘箱干燥。

2.包扎：用纱布把培养皿包扎好。

3.装水：在高压灭菌锅内装入一定量的水。

4.装物品：在灭菌锅内放入含培养基的培养瓶或三角瓶，以及包扎好的玻璃器

皿。

5．灭菌：于温度为121℃时，维持20分钟，即可达到灭菌的目的。

四、注意事项

1．6-BA，NAA用量甚微，取用时要使用移液管，移液管越小越精确。

2．注意配制大量元素母液时防止钙盐与硫酸盐和磷酸盐产生沉淀；

3．铁盐母液用棕色瓶保存。注意pH的调节；

4．灭菌时间和压力、温度的控制；

5．分装要干净，灭菌时锥形瓶尽可能放正，不要使培养基流出。

6．若灭菌时间过长，会使培养基中的某些成分变性失效。

7．开盖后应尽快转移培养瓶，使培养瓶冷却、凝固。一般应将灭菌后的培养瓶储藏于30℃以下的室内放置3d，观察灭菌效果。如果无细菌等的产生，即可使用该培养瓶。

培养基的配制与灭菌实验报告

培养基的配制与灭菌实验报告 （文章一）：培养基的制备与灭菌实验报告xx师范大学远程教育学院生物学实验报告报告题目培养基的制备与灭菌姓名刘伟学号专业生物科学批次/层次指导教师学习中心培养基的制备与灭菌 （一）、目的要求 1. 掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。 2. 掌握培养基的配置原则和方法。 3. 掌握高压蒸汽灭菌的操作方法和注意事项。 （二）、基本原理牛肉膏蛋白胨培养基：是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供细菌生长繁殖之用。高压蒸汽灭菌：主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。将灭菌的物品放在一个密闭和加压的灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅内水沸腾而产生蒸汽。待蒸汽将锅内冷空气从排气阀中趋尽，关闭排气阀继续加热。此时蒸汽不溢出，压力增大，沸点升高，获得高于100℃的温度导致菌体蛋白凝固变性，而达到灭菌的目的。 （三）、实验材料 1. 药品：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol/L的NaOH和HCl溶液。

2. 仪器及玻璃器皿：天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、三角瓶、培养皿、玻璃漏斗等。 3. 其他物品：药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花等。 （四）、操作步骤（一）玻璃器皿的洗涤和包装1．玻璃器皿的洗涤玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。将三角瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中．用毛刷刷洗，然后用自来水及蒸馏水冲净。移液管先用含有洗涤剂的水浸泡，再用自来水及蒸馏水冲洗。洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘干后备用。2．灭菌前玻璃器皿的包装（1）培养皿的包扎：培养皿由一盖一底组成一套，可用报纸将几套培养皿包成一包，或者将几套培养皿直接置于特制的铁皮圆筒内，加盖灭菌。包装后的培养皿须经灭菌之后才能使用。（2）移液管的包扎：在移液管的上端塞入一小段棉花(勿用脱脂棉)，它的作用是避免外界及口中杂菌进入管内，并防止菌液等吸入口中。塞入此小段棉花应距管口约0.5cm左右，棉花自身长度约1~ 1.5cm。塞棉花时．可用一外围拉直的曲别针、将少许棉花塞入管口内。棉花要塞得松紧适宜，吹时以能通气而又不使棉花滑下为准。先将报纸裁成宽约5cm左右的长纸条，然后将已塞好棉花的移液管尖端放在长条报纸的一端，约成45℃角，折叠纸条包住尖端，用左手握住移液管身，有手将移液管压紧．在桌面上向前搓转，以螺旋式包扎起来。上端剩余纸条，折叠打结，准备灭菌。（二）液体及固体培养基的配制过程1．液体培养基配制（1）称量（假定配制1000ml 培养基）按培养基配方比例依次准确地称取

培养基的配置和灭菌

培养基的制备与灭菌 一、目的要求 1.掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。 2.掌握培养基的配置原则和方法。 3.掌握高压蒸汽灭菌的操作方法和注意事项。 二、基本原理 牛肉膏蛋白胨培养基：是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供细菌生长繁殖之用。 高压蒸汽灭菌：主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。将灭菌的物品放在一个密闭和加压的灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅内水沸腾而产生蒸汽。待蒸汽将锅内冷空气从排气阀中趋尽，关闭排气阀继续加热。此时蒸汽不溢出，压力增大，沸点升高，获得高于100℃的温度导致菌体蛋白凝固变性，而达到灭菌的目的。 三、实验材料 1.药品：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol/L的NaOH和HCl溶液。 2.仪器及玻璃器皿：天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、三角瓶、培养皿、玻璃漏斗等。 3.其他物品：药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花等。 四、操作步骤 （一）玻璃器皿的洗涤和包装 1．玻璃器皿的洗涤 玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。将三角瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中．用毛刷刷洗，然后用自来水及蒸馏水冲净。移液管先用含有洗涤剂的水浸泡，再用自来水及蒸馏水冲洗。洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘干后备用。 2．灭菌前玻璃器皿的包装 （1）培养皿的包扎：培养皿由一盖一底组成一套，可用报纸将几套培养皿包成一包，或者将几套培养皿直接置于特制的铁皮圆筒内，加盖灭菌。包装后的培养皿须经灭菌之后才能使用。 （2）移液管的包扎：在移液管的上端塞入一小段棉花(勿用脱脂棉)，它的作用是避免外界及口中杂菌进入管内，并防止菌液等吸入口中。塞入此小段棉花应距管口约0.5cm左右，棉花自身长度约1~1.5cm。塞棉花时．可用一外围拉直的曲别针、将少许棉花塞入管口内。棉花要塞得松紧适宜，吹时以能通气而又不使棉花滑下为准。 先将报纸裁成宽约5cm左右的长纸条，然后将已塞好棉花的移液管尖端放在长条报纸的一端，约成45℃角，折叠纸条包住尖端，用左手握住移液管身，有手将移液管压紧．在桌面上向前搓转，以螺旋式包扎起来。上端剩余纸条，折叠打结，准备灭菌。 （二）液体及固体培养基的配制过程1．液体培养基配制 （1）称量（假定配制1000ml培养基） 按培养基配方比例依次准确地称取3.0g牛肉膏、10.0 g蛋白胨、5.0gNaCl放入烧杯（或1000ml刻度搪瓷杯）中．牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯。 （2）溶化 在上述烧杯中先加入少于所需要的水量（如约700ml），用玻棒搅匀，然后，在石棉网上

培养基的配制和灭菌

培养基的配制和灭菌 姓名 摘要：培养基是人工配制的供给细菌或其他微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质。培养基须经灭菌后方可使用。培养基一般采用高压蒸汽灭菌法灭菌。此次实验我们配制LB（Luria Broth）培养基和麦康凯（MacConkey）培养基并进行高压蒸汽灭菌，目的是掌握LB培养基和麦康凯培养基的配制方法，了解高压蒸汽灭菌的基本原理及应用范围，并且熟悉培养基的灭菌方法。通过此次实验，我们成功地进行了LB培养基和麦康凯培养基的配制，熟悉了培养基的灭菌方法，达到了预期目的。 关键词：LB培养基麦康凯培养基高压蒸汽灭菌 培养基是人工配制的供给细菌或其他微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质。培养基必须具备下列条件：碳源、氮源、能源、无机盐和生长因子、水分和合适的pH。培养基种类较多，按其营养物来源不同，可分为天然培养基和合成培养基；按其物理状态分为液体、固体、半固体三种类型。在一定的条件下，培养繁殖得到的微生物群体叫做培养物。培养物分为纯培养物和混合培养物。只有一种微生物的培养物叫做纯培养物，含有多种微生物的培养物叫做混合培养物。通常情况下只有纯培养物才能提供可以重复的结果，自然环境中极少存在纯培养物，纯培养物通常是由人工方法获得的。获得纯培养的关键一是所有的相关物品必须无菌，二是分离出单个的微生物细胞并将其培养成一个群体。因此，无菌技术是保证微生物学研究正常进行的关键。 在分离、转接和培养纯培养时，防止其被其他微生物污染的技术称为无菌技术。无菌技术包括灭菌和无菌操作。灭菌是杀死包括芽孢在内的所有微生物。灭菌的目的是让用于分离、培养微生物的器具和基质事先不含任何微生物。微生物培养的常用器具（例如试管、三角瓶、培养皿等）和培养基都需要灭菌。无菌操作要在火焰附近（酒精灯、煤气灯）进行，并且接种工具（接种环、接种针等）需要灼烧灭菌。 培养基一般采用高压蒸汽灭菌法灭菌。高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸气。待水蒸气急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌锅的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。高温使蛋白质、核酸等重要生物大分子发生变性、破坏，以及破坏细胞膜上的类脂成分，导致微生物死亡。在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大。 1.材料和方法 1.1材料和试剂 实验试剂：蛋白胨、酵母粉、NaCl、NaOH、琼脂、麦康凯培养基、去离子水 实验器材：2个300mL三角瓶、2个100mL三角瓶、1个500mL三角瓶、量筒、电子天平、称量纸、称量匙、500mL烧杯或搪瓷缸、试管、pH试纸、电炉、高压蒸汽灭菌锅 1.2方法 1.2.1 LB培养基的配制方法 ①清洗三角瓶。需要清洗2个300mL三角瓶和2个100mL三角瓶。三角瓶用自来水洗净， 然后蒸馏水冲洗2遍，最后沥干。

实验一培养基的配制及灭菌

实验一培养基的配制及灭菌 培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质，用以培养、分离、鉴定、保存各种微生物或积累代谢产物。各类微生物对营养的要求不尽相同，因而培养基的种类繁多。在这些培养基中，就营养物质而言，一般不外乎碳源、氮源、无机盐、生长因子及水等几大类。培养基的配制，一是要求在营养成分上能满足所培养微生物生长发育的需要，二是培养基在使用前不带菌，三是以灭菌后和保存过程中营养成分不发生变化。培养基的灭菌通常在培养基配制后进行，其目的是杀灭培养基中残存的微生物或活的生物残体，保证培养基在贮存过程中不变质，也防止其他生物对培养的污染。 一、实验目的 1．掌握实验室常用玻璃器皿的清洗、干燥和包扎方法。 2．明确培养基的配制原理。 3．掌握配制培养基的一般方法和步骤。 4．了解湿热和干热灭菌的原理，并掌握有关的操作技术。 二、实验原理 灭菌是指杀灭物体中所有微生物的繁殖体和芽孢的过程。消毒是指用物理、化学或生物的方法杀死病原微生物的过程。灭菌的原理就是使蛋白质和核酸等生物大分子发生变性，从而达到灭菌的作用，实验室中最常用的就是干热灭菌和湿热灭菌。 干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。细胞内的蛋白质凝固性与其本身的含水量有关，在菌体受热时，当环境和细胞内含水量越大，则蛋白质凝固就越快，反之含水量越小，凝固缓慢。因此，与湿热灭菌相比，干热灭菌所需温度高（160～170℃），时间长（1～2h）。但干热灭菌温度不能超过 180℃。否则，包器皿的纸或棉塞就会烧焦，甚至引起燃烧。 高压蒸气灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸气。待水蒸气急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸气不能溢出，而增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大。其原因有三：一是湿热中细菌菌体吸收水分，蛋白质较易凝固，因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低，二是湿热的穿透力比干热大，三是湿热的蒸气有潜热存在。这种潜热，能迅速提高被灭菌物体的温度，从而增加灭菌效力。

实验二 培养基的配制和灭菌

实验二培养基的配制和灭菌 一、实验目的 微生物的生长发育都有一定的营养需要，培养基即人工培养微生物、为其生长发育提供所需营养的基质。培养基配好后必须经过灭菌方能用于分离培养微生物试验，因此培养基的配制和灭菌是植物病理实验室中最基本的工作，通过本次实验学习植病实验室中常用培养基的配制方法和高压灭菌锅的使用方法。 二、内容、材料和方法 (一)培养基的配制 培养基按组成成分及对这些成分了解的程度分为天然培养基、半组合培养基和组合培养基三类，从物理性质上又分为液体培养基和固体培养基两类，培养基的种类不同，配制方法也有差异，限于时间，本次实验仅配制马铃薯琼脂培养基和牛肉膏蛋白胨培养基。 1马铃薯蔗糖琼脂培养基（PSA） 这是植病实验室最常用的培养基(简称PSA)，主要用于植物病原真菌的分离和培养，有时也用于植物病原细菌。 成分：马铃薯200克 蔗糖 10~20克 琼脂 17~20克 加水至1000毫升 方法：将马铃薯洗净去皮切块，加水煮沸半小时，用双层纱布滤去薯块，补足水量，加入琼脂，加热熔化，再加糖，待完全化后，乘热用双层纱布过滤分装，塞好棉塞高压灭菌。 马铃薯蔗糖琼脂培养基略带酸性，培养真菌无需调节pH，培养细菌则调节pH至中性，此培养基留作下次实验分离培养病原真菌用，故不必调节pH。 5人分作一组，1、2组各作此培养基500毫升，其中200毫升分装试管，每管约10毫

升，灭菌后摆成斜面；其余300毫升，分装在3个250—300毫升的三角瓶中，每瓶装100毫升左右，灭菌后妥善保存，留待下次实验使用。 2肉汁胨培养基（BPA） 这种培养基主要用于细菌的分离和培养 成分：牛肉浸膏 3克 蛋白胨 5~10克 蔗糖 10克 酵母浸膏 1克 琼脂 17~20克 加水至 1000毫升 方法：先将琼脂加热熔化于大部水中，再将其它各成分用少量水化开加入，调节pH至7，趁热用双层纱布过滤，分装，塞棉塞高压灭菌。 牛肉浸膏和酵母浸膏十分粘稠，不易称重，称重时用小烧杯盛装，以玻璃棒沾取，故要先称好杯和棒的重量后，再开始沾取浸膏称重，称后将杯和棒上粘着的浸膏洗净于锅中。 调节培养基pH至中性的方法如下：配成1N的HCl和NaOH，并另分别稀释配成1/20 N 的HCl和NaOH。取培养基2毫升，加蒸馏水毫升，加指示剂溴百里酚蓝指示剂5滴，这时如培养基的测样呈黄色则用有刻度吸管加入1/20 N的NaOH若呈蓝色则加入1/2O N的HCl，使培养基最后呈草绿色即调节到中性，此刻所加酸或碱的毫升数的25倍即等于在1000毫升培养基中所需要加入lN 的NaOH或HCl的毫升数(注意这次是作500毫升培养基)，加蒸馏水稀释的目的防止调节过程中培养基凝固。 调节pH至中性的简便方法是用石蕊示纸。也可以用多孔白色瓷板，在孔中加少量培养基和溴百里酚蓝或其它指示剂1—2滴，根据颜色反应，在所配的培养液中加入少量lN的NaOH或HCl，然后再取样测定，如此反复多次，达到所需求的反应为止。 5人分为一组，3、4两组各作此培养基500毫升，其中200毫升分装试管，每管约100毫升，灭菌后摆成斜面，其余300毫升分装在3个250—300毫升的三角瓶中，每瓶装100毫升左右，灭菌后妥善存放，留待下次实验使用。 此外，1、2、3、4各组均制备15管试管装和2瓶三角瓶装的无菌水。

培养基的配制及灭菌实验报告

竭诚为您提供优质文档/双击可除培养基的配制及灭菌实验报告 篇一：培养基的制备与灭菌实验报告(详细) 一、实验题目：培养基的制备与灭菌 二、实验目的： 1、明确培养基的配置原则，掌握配置方法。 2、了解灭菌的原理，学习掌握灭菌器的使用方法。 三、实验器材： 1、药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、水、琼脂。 2、仪器：三角瓶、培养皿、试管、线绳、棉花、烧杯、报纸、移液管、试管架、铁针、量筒。 四、实验原理： 1、培养基的制备 包括一下几种成分： （1）水分：主要成分。 （2）n源：包括无机氮和有机氮。 （3）c源：主要是含碳有机物、碳氢化合物等。 （4）无机盐：如nacl、Kh2po4等。

微量元素：cu、K、mg、s、p、Zn。 有些还需要添加“生长因子”，通常是维生素类、某些 氨基酸或核酸等。 2、培养基配置的原则 根据不同的培养对象及培养目的，选用不同的培养基，但有机物总量不得超过15%，盐类一般不超过1%。 培养基有以下分类： 按成分：天然培养基、合成培养基、半合成培养基 按状态：固体培养基、半固体培养基、液体培养基 按用途：基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基 培养基配好后应立即灭菌，防止营养物质中的微生物富集。 3、灭菌： 用理化手段杀灭一切微生物的营养体，包括芽孢和孢子，在实验中应对所有仪器、操作场所、药品及培养基灭菌或消毒。 （1）高压蒸汽灭菌：将物品放入封闭的加压灭菌器， 加热使灭菌锅套间的水沸腾产生蒸汽，将冷空气排尽，压力上升，使水沸点变高，导致菌体蛋白质变性，一般0.1mpa、121℃、15~30min可以彻底灭菌，本次实验灭菌20min。若 是含糖培养基，110℃、30min。

培养基配制、分装和灭菌

一、实验目的 1了解并掌握培养基的配制、分装方法； 2掌握各种实验室灭菌方法及技术。 二、实验原理 培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。由于微生物具有不同的营养类型，对营养物质的要求也各不相同，加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很多，使用的原料也各有差异，但从营养角度分析，培养基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、生长素以及水分等。另外，培养基还应具有适宜的pH值、一定的缓冲能力、一定的氧化还原电位及合适的渗透压。 琼脂是从石花菜等海藻中提取的胶体物质，是应用最广的凝固剂。加琼脂制成的培养基在98～100℃下融化，于45℃以下凝固。但多次反复融化，其凝固性降低。 任何一种培养基一经制成就应及时彻底灭菌，以备纯培养用。一般培养基的灭菌采用高压蒸汽灭菌。 三、实验材料 1、器皿及材料 天平、称量纸、牛角匙、精密pH试纸、量筒、刻度搪瓷杯、试管、三角瓶、漏斗、分装架、移液管及移液管筒、培养皿及培养皿盒、玻璃棒、烧杯、试管架、铁丝筐、剪刀、酒精灯、棉花、线绳、牛皮纸或报纸、纱布、乳胶管、电炉、灭菌锅、干燥箱。 2、药品试剂 蛋白胨、牛肉膏、NaCl、K2HPO4、琼脂、NaNO3、KCl、MgSO4、FeSO4、蔗糖、麦芽糖、木糖、葡萄糖、半乳糖、乳糖、土豆汁、豆芽计、磷酸铵、5%NaOH溶液、5%HCl溶液。 3、流程 称药品→溶解→调pH值→融化琼脂→过滤分装→包扎标记→灭菌→摆斜面或倒平板。 四、实验步骤 1 培养基的制备 1.1 称量药品 根据培养基配方依次准确称取各种药品，放入适当大小的烧杯中，琼脂不要加入。蛋白胨极易吸潮，故称量时要迅速。 1.2 溶解 用量筒取一定量(约占总量的1/2)蒸馏水倒入烧杯中，在放有石棉网的电炉上小火加热，并用玻棒搅拌，以防液体溢出。待各种药品完全溶解后，停止加热，补足水分。如果配方中有淀粉，则先将淀粉用少量冷水调成糊状，并在火上加热搅拌，然后加足水分及其它原料，待完全溶化后，补足水分。 1.3 调节pH 根据培养基对pH的要求，用5%NaOH或5%HC1溶液调至所需pH。测定pH可用pH试纸或酸度计等。 1.4 溶化琼脂 固体或半固体培养基须加入一定量琼脂。琼脂加入后，置电炉上一面搅拌一面加热，直至琼脂完全融化后才能停止搅拌，并补足水分(水需预热)。注意控制火力不要使培养基溢出或烧焦。 1.5 过滤分装 分装时注意不要使培养基沾染在管口或瓶口，以免浸湿棉塞，引起污染。液体分装高度以试管高度的1/4左右为宜。固体分装装量为管高的1/5，半固体分装试管一般以试管高度的1/3为宜；分装三角瓶，其装量以不超过三角瓶容积的一半为宜。

实验一 MS培养基配制和灭菌

实验一MS培养基配制和灭菌 一．目的和要求： 1. 学会MS培养基的制作方法; 2. 掌握高压灭菌的方法和基本操作。 二、仪器与试剂 1. 仪器：灭菌锅、解剖刀、枪状镊子、烧杯（500ml）、培养皿、移液管等 2. 试剂：MS的Macro-e、Micro-e、有机母液、Fe盐、肌醇蔗糖，琼脂粉，1N NaoH 和1N HCl 三、方法步骤 （一）配方设计: 以MS为基本培养基（mg/L） （二）配制培养基 (1)溶化琼脂：量取300ml左右蒸馏水，加入4.8g琼脂粉，加热溶解直至完全融化。 (2) 各种母液的吸取：Macro-e 50ml Micro-e 1ml 有机成分1ml Fe盐5ml 肌醇10ml 加在一起，倒入烧杯（1L) （3）加入糖:称取30g 蔗糖，溶于溶有琼脂的300ml 蒸馏水中。

（4）根据实验设计，量取生长调节剂:加在一起，倒入烧杯。 （5）定容:加蒸馏水（用量杯）。 （6）调节pH至，用pH试纸进行测定，用1molHcl或1Mol NaoH调节。 （7）分装:30～40 ml/瓶6，培养基勿碰三角瓶口。 （8）用具清理和洗涤：各种母液按原位置摆整齐，用过的量筒，移液管、烧杯、铝锅等用水洗涤干净，然后按次序放回原处。 （三）灭菌：用高压蒸汽消毒器灭菌，其压力为～,温度为120～126℃，保持15~20 min。 具体操作步骤： 1. 加水； 2. 把包扎好的培养基装入高压锅； 3. 盖上热压锅盖,上紧螺帽(注意对角拧紧螺帽)关上气阀和安全阀； 4. 加热； 5. 排除冷空气； 6. 排除冷空气后,关闭放气阀，待压力升到1Kg位置时，开始计算灭菌时间，一般在1Kg 压力(121℃)下灭菌15~20 分钟即可，但要注意保持稳定压力。 7. 灭菌时间达到20 分钟后，停止加热，待压力自动降到0磅时，打开放气阀，打开热压灭菌锅盖(注意对角扭松螺帽)稍待冷后再把培养基取出。 四.作业 1. 总结配制培养基的注意事项。 2. 制作培养基前为何要提前配制母液

实验一常用器皿包扎与培养基的配制和灭菌

实验一常用器皿包扎与培养基的配制和灭菌 一、实验目的 1学会常用器皿包扎方法 2学习和掌握配制培养基的一般方法和步骤 3学会实验室灭菌锅的使用方法 二、常用器具和仪器 试管(testtube)，德汉氏小管(Durhamtube)，玻璃吸管 (glasspipette)，吸器，微量加样器(micropipette)，吸嘴(tip)，培养皿(petri dish)，三角瓶(erlenmeyer flask)，接种铲(inoculatingshovel),玻璃涂布器(glassspreade)，接种环(inoculatingloop)，接种钩(inoculating hook)，接种针(inoculating needle)，小塑料离心管(Eppendorf tube)，滴瓶(dropper bottle )，双层瓶(double bottle)，酒精灯⑻ cohol burner)，煤气喷头(coal gas sprinklerhead，试剂瓶，量筒，烧杯，温度计，石棉网，漏斗，烘箱，卧式灭菌锅，手提式灭菌锅，无菌操作台/ 室，过滤除菌设备，厌氧操作设备，小型发酵罐，离心机，培养箱/摇床，冷冻干燥机，蒸馏水器，超声波清洗仪，磁力搅拌器。 三、玻璃器皿的包装 1、培养皿的包装方法一：用旧报纸密密包紧，一般以5-8 套培养皿作一包。包好后用干热或湿热灭菌(见无菌操作技术)。 方法二：将培养皿放入金属(不锈钢)筒内，干热灭菌。金属筒配有盖子，内部还有一个可以放培养皿的带底框架。框架可以从筒内提出，以便装取培养皿。 包好的培养皿 金属筒和内部的框架 塑料培养皿架 2、吸管的包装

培养基的制备与灭菌

培养基的制备与灭菌 实验八培养基的制备与灭菌 一、目的要求 1.掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。 2.掌握培养基的配置方法。 3.掌握干热灭菌和高压蒸汽灭菌的操作方

法。 二、基本原理 正确掌握培养基的配制方法是从事微 生物学实验工作的重要基础。由于微生物种类及代 谢类型的多样性．因而用于培养微生物的培养基的种类也很多，它们的配方及配制方法虽各有差异。但一般培养基的配制程序却大致相同．例如器皿的准备，培养基的配制与分装，棉塞的制作，培养基的灭菌，斜面与平板的制作以及培养基的无菌检查等基本 环节大致相同。 三、实验材料 1.药品：待配各种培养基的组成成分、琼脂、1mol/L的NaOH和HCl溶液。 2.仪器及玻璃器皿：天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、三角瓶、培养皿、玻璃漏斗等。 试纸、记号笔、其他物品：药匙、称量纸、pH3.

棉花等。四、操作步骤（一）玻璃器皿 的洗涤和包装 1．玻璃器皿的洗涤玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。将三角瓶、用量筒等浸入含有洗涤剂的水中．培养皿、试管、移液管然后用自来水及蒸馏水冲净。毛刷刷洗，再用自来水及蒸馏水先用含有洗涤剂的水浸泡，洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘干后备冲洗。用。．灭菌前玻璃器皿的包装2培养皿由一盖一底组成一培养皿的包扎：1（）或者将套，可用报纸将几套培养 皿包成一包，加盖几套培养皿直接置于特制的铁皮圆筒内，灭菌。包装后的培养皿须经灭菌之后才能使用。移液管2）（ 的包扎：在移液管的上端塞入一小勿花(棉段移液管的包扎8-1 图 用脱脂棉)，它的作用是避免外界及口中杂 菌进入管内，并防止菌液等吸入口中。塞入此小段棉花应距管口约0.5cm左右，棉花 自身长度约1~1.5cm。塞棉花时．可用一 外围拉直的曲别针、将少许棉花塞入管口内。棉花要塞得松紧适宜，吹时以能通气而又不

培养基配制及灭菌实验报告单

培养基配制及灭菌实验报告单 班级名字小组成员时间指导老师 一、实验目的 了解培养基的配制原理；掌握配制培养基的一般方法和步骤；了解常见灭菌、清毒基本原理及方法；掌握高压蒸汽灭菌操作方法。 二、实验原理 培养基是人工按一定比例配制的供微生物生长繁殖和合成代谢产物所需要的营养物质的混合物。培养基的原材料可分为碳源、氮源、无机盐、生长因素和水。根据微生物的种类和实验目的不同，培养基也有不同的种类和配制方法。 马铃薯培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养 基。由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供微生物生长繁殖之用。高压蒸汽灭菌方法主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。 平板划线接种法（分离培养法）：是将细菌分离培养的常用技术，其目的是将混有多种细菌的培养物，或标本中不同的细菌（病原菌与非病原菌）使其分散生长，形成单个菌落或分离出单一菌株，便于识别鉴定。平板划线接种方法较多，其中以分段划线法与曲线划线法较为常用。 三、试剂与器材 1.器材 试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、培养基、分装器、天平、牛角匙、高压蒸汽 灭菌锅、pH试纸、棉花、牛皮纸、记号笔、麻绳、纱布、吸管、培养皿、电烘箱、镊子等。 2.试剂 马铃薯、葡萄糖、琼脂、水等 四、实验内容 1.称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2高压蒸汽灭菌：加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排气→取物→无菌检查 五、关键步骤及注意事 1.要严格按配方配制。 2.调pH不要过头。 3.高压灭菌要注意物品不要过多，加热后排除冷空气，到时降压回零取物。 六．讨论 1.如何检验灭菌后培养基是否合格？ 2.高压蒸气灭菌开始之前，为什么要将锅内冷空气排尽？灭菌完毕后，为什么要待降到0时才能打开排气阀，开盖取物？

实验一培养基的配制及灭菌

实验一培养基的配制及灭菌培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代产物的营养基质，用以培养、分离、鉴定、保存各种微生物或积累代产物。各类微生物对营养的要求不尽相同，因而培养基的种类繁多。在这些培养基中，就营养物质而言，一般不外乎碳源、氮源、无机盐、生长因子及水等几大类。培养基的配制，一是要求在营养成分上能满足所培养微生物生长发育的需要，二是培养基在使用前不带菌，三是以灭菌后和保存过程中营养成分不发生变化。培养基的灭菌通常在培养基配制后进行，其目的是杀灭培养基中残存的微生物或活的生物残体，保证培养基在贮存过程中不变质，也防止其他生物对培养的污染。 一、实验目的 1．掌握实验室常用玻璃器皿的清洗、干燥和包扎方法。 2．明确培养基的配制原理。 3．掌握配制培养基的一般方法和步骤。4．了解湿热和干热灭菌的原理，并掌握有关的操作技术 。 二、实验原理灭菌是指杀灭物体中所有微生物的繁殖体和芽孢的过程。消毒是指用物理、化学或生物的方法杀死病原微生物的过程。灭菌的原理就是使蛋白质和核酸等生物大分子发生变性，从而达到灭菌的作用，实验室中最常用的就是干热灭菌和湿热灭菌。 干热灭菌是利用高温使微生物细胞的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。细胞的蛋白质凝固性与其本身的含水量有关，在菌体受热时，当环境和细胞含水量越大，则蛋白质凝固就越快，反之含水量越小，凝固缓慢。因此，与湿热灭菌相比，干热灭菌所需温度高（160?170C），时间长（1?2h）。但干热灭菌温度不能超过180C。否则，包器皿的纸或棉塞就会烧焦，甚至引起燃烧。 高压蒸气灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅，通过加热，使灭菌锅隔套 间的水沸腾而产生蒸气。待水蒸气急剧地将锅的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸气不能溢出，而增加了灭菌器的压力，从而使沸点增高，得到高于 100C的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。在同一温度下，湿热的杀菌效 力比干热大。其原因有三：一是湿热中细菌菌体吸收水分，蛋白质较易凝固，因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低，二是湿热的穿透力比干热大，三是湿热的蒸气有潜热存在。这种潜热，能迅速提高被灭菌物体的温度，从而增加灭菌效力。

MS培养基的配制,灭菌等注意事项

一、MS培养基母液

注意：1．大量元素按照使用时高10倍的数值称取，分别将各种化合物称量后，除CaCl2·2H2O单独配制外，其余化合物混合在500ml 烧杯中加适量蒸馏水溶解，用玻璃棒搅拌促溶，倒入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度，置小口瓶中保存，贴上标签注明化合物名称（或编号），浓缩倍数，配制日期和配制者姓名，CaCl2·2H2O配制同上置于另一小口瓶中。 2．微量元素母液的配制 按要求浓缩100倍的数值称取，分别将各种化合物称量除铁盐（FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O）作为一组单独配制外，其余化合物可混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后，定容在1000ml容量瓶中，置小口瓶中保存，贴上标签。 3．铁盐配制将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O分别溶于450ml蒸馏水中，加热，（很重要）不断搅拌，溶解后，两液混合，调PH至5.5加水定容至1000ml，置于小口瓶中，贴上标签。 4．有机物母液配制，按母液要求浓缩50倍，除蔗糖按3%单独临时称量外，其余分别称量后，溶解，定容在500ml容量瓶中，置于小口瓶中保存，贴上标签。 5．母液最好在2~4℃的冰箱中贮存，特别是有机类物质，贮存时间不宜过长，无机盐母液最好在一个月内用完，如发现有霉菌和沉淀产生，就不能再使用。

1．制备母液和营养培养基时，所用蒸馏水或无离子水必须符合标准要求，化学药品必须是高纯度的（分析纯）。 2．称量药物采用高灵敏度的天平，每种药品专用一药匙。 ．生长调节剂母液配制： 为了操作方便，节约时间，生长调节剂也可如同配制母液一样，先配成原液，这样配制培养基时只要稍加计算，按需要量取即可。 不同药品在配制时若不溶于水，可用少量不同的溶剂先溶解，萘乙酸（NAA），吲哚乙酸（IAA）,赤霉素（GA3），2，4-D等生长素和玉米素（ZT）可先用少量95%酒精溶解，然后加水，如溶解不完全再加热。激动素（KT）和6-苄基嘌呤（BA）可溶于少量1mol/L的盐酸中，叶酸需用少量稀氨水溶解。 称取50mg生长调节物质，溶解后，在100ml的容量瓶中定容，配制的母液每毫升则含有生长调节物质0.5mg，配制后一般要求在低温（0~4℃）保存，配制培养基时如每升（1000ml）需添加的生长调节剂物质为0.5mg时，则取1ml母液即可。 二、培养基配制和灭菌 一．养培养基配制程序 (一).母液吸取量的计算 配制培养基的升数 公式1：母液吸取量= 母液体积（CC）×——————————

培养基的制备与灭菌实验报告

陕西师范大学远程教育学院生物学实验报告 报告题目培养基的制备与灭菌 姓名刘伟 学号 专业生物科学 批次/层次 指导教师 学习中心

培养基的制备与灭菌 一、目的要求 1.掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。 2.掌握培养基的配置原则和方法。 3.掌握高压蒸汽灭菌的操作方法和注意事项。 二、基本原理 牛肉膏蛋白胨培养基： 是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供细菌生长繁殖之用。 高压蒸汽灭菌： 主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。将灭菌的物品放在一个密闭和加压的灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅内水沸腾而产生蒸汽。待蒸汽将锅内冷空气从排气阀中趋尽，关闭排气阀继续加热。此时蒸汽不溢出，压力增大，沸点升高，获得高于100℃的温度导致菌体蛋白凝固变性，而达到灭菌的目的。 三、实验材料 1.药品：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol/L的NaOH和HCl溶液。 2.仪器及玻璃器皿：天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、三 角瓶、培养皿、玻璃漏斗等。 3.其他物品：药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花等。 四、操作步骤 （一）玻璃器皿的洗涤和包装 1．玻璃器皿的洗涤 玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。将三角瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中．用毛刷刷洗，然后用自来水及蒸馏水冲净。移液管先用含有洗涤剂的水浸泡，再用自来水及蒸馏水冲洗。洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘干后备用。 2．灭菌前玻璃器皿的包装 （1）培养皿的包扎：培养皿由一盖一底组成一套，可用报纸将几套培养皿包成一包，或者将几套培养皿直接置于特制的铁皮圆筒内，加盖灭菌。包装后的培养皿须经灭菌之后才能使用。 （2）移液管的包扎：在移液管的上端塞入一小段棉花(勿用脱脂棉)，它的作用是避免外界及口中杂菌进入管内，并防止菌液等吸入口中。塞入此小段棉花应距管口约0.5cm左右，棉花自身长度约1~1.5cm。塞棉花时．可用一外围拉直的曲别针、将少许棉花塞入管口内。棉花要塞得松紧适宜，吹时以能通气而又不使棉花滑下为准。 先将报纸裁成宽约5cm左右的长纸条，然后将已塞好棉花的移液管尖端

固体培养基的配制及灭菌

实验二固体培养基的配制与灭菌 一、目的要求 1、通过实验的准备工作，掌握培养皿、三角瓶等器皿的洗涤技能； 2、通过固体培养基的配制，掌握配制固体培养基的基本技能； 3、掌握培养基的灭菌方法与分装方法。 二、仪器与用具 1、仪器：各类天平、电炉、高压灭菌锅； 2、用具：烧杯、量筒、玻璃棒、培养皿、三角瓶、标签、pH试纸、报纸或牛皮纸； 3、试剂：0. 1 -1N NaOH，0.1-1N HCl，各类培养基母液，琼脂粉，蒸馏水。 三、方法步骤 （一）相关器皿的洗涤 1、将使用完毕的培养器皿中的培养基残渣清除干净（倒入垃圾桶而非下水道中） 2、用洗衣粉或肥皂水浸泡培养器皿后进行清洗 3、用清水冲洗培养器皿3遍 4、用蒸馏水冲洗1-3遍 5、将清洗干净的培养器皿倒扣于铺好报纸的桌面上或试管架上晾干备用。 （二）培养基的配制 1、将培养基母液按照以下次序摆放于试验台上：大量、微量、铁盐、有机、生长调节物质 2、取适量蒸馏水放入容器 3、按需要量依次取母液（若使用移液管，需专管专用，不可混用；若用量筒，已取出的多余母液严禁倒回原试剂瓶中） 4、加入蔗糖（30g/L）溶解 5、加入蒸馏水，使溶液体积比最终体积略少 6、调节PH值（pH=5.8） 7、加入琼脂（6-10g/L） 8、定容至终体积 （三）培养基的分装与灭菌 1、用三角瓶培养 （1）将上述培养基煮开2-3min，使琼脂溶化均匀 （2）趁热将培养基分装入洗净晾干的三角瓶中 （3）扎好瓶口 （4）高压灭菌 （5）将灭菌后的培养基摆放于平面上，待凝固后存放于20℃以下的洁净橱柜中，并贴好标签备用 2、用培养皿培养 （1）将培养基进行高压灭菌后趁热取出 （2）趁培养基凝固之前，在超净工作台上将灭菌后的培养基分装至无菌培养皿中 （3）将分装好的培养皿平置于超净工作台上，待其凝固，并吹干培养皿盖上的水汽 （4）将凝固吹干后的培养基用干净的保鲜膜包好，存放于20℃以下的洁净橱柜中，并贴好标签备用。 （四）高压灭菌方法 1、用牛皮纸或报纸等将玻璃器皿和金属器械包扎好

实验一 培养基的配制与灭菌技术

实验一培养基的配制与灭菌技术 一、目的要求 1 掌握配制培养基的一般方法和步骤。 2 学习高压灭菌锅的操作方法。 二、基本原理 牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，它含有牛肉膏、蛋白胨和NaCl。其中牛肉膏为微生物提供碳源和能源，磷酸盐、蛋白胨主要提供氮源，而NACL 提供无机盐。在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。琼脂在常用浓度下96℃时溶化，一般实际应用时在下面垫以石棉网煮沸溶化，以免琼脂烧焦。琼脂在40℃时凝固，通常不被微生物分解利用。由于这种培养基多用于培养细菌，因此，要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。 高氏1号培养基是分离和培养放线菌的合成培养基，是由可溶性淀粉作碳源，KNO3作氮源，NaCl，K2HPO4.3H2O，MgSO4.7H2O，FeSO4.7H2O为微生物提供钠、钾、磷、镁、硫等离子。 高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。待水蒸气急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度，导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大，其原因有三：一是湿热中细菌菌体吸收水分，蛋白质较易凝固；二是湿热的穿透力比干热大；三是湿热的蒸汽有潜热存在，这种潜热，能迅速提高被灭菌物体的温度，从而增加灭菌效力。 灭菌的温度及维持的时间随灭菌物品的性质和容量等具体情况而有所改变。通常为15磅/英寸2 (121.3℃)灭菌15—20分钟；不耐高压的培养基则可采用流通蒸汽灭菌或间歇灭菌。含糖培养基用112.6℃（8磅/英寸2）灭菌15分钟。 紫外线灭菌是用紫外线灯进行的，紫外线杀菌机制主要是因为它诱导了胸腺嘧啶二聚体的形成，从而抑制了DNA的复制；由于辐射能使空气中的氧电离成[O]再使O2氧化生成臭氧O3或使水H2O氧化生成过氧化氢H2O2，O3和H2O2均有杀菌作用。紫外线穿透力不大，所以，只适用于无菌室、接种箱的空气及物体表面的灭菌。 三、器材 天平，高压蒸汽灭菌锅，电烘箱，1mol/L NaOH,1mol/L HCl，培养皿，试管，吸管，酒精灯，三角烧瓶，烧杯，量筒，玻棒，接种环，牛角匙，pH试纸(pH5.5—9.0)，棉花，纱布，牛皮纸，记号笔，麻绳。 四、操作步骤 1．称量 培养基的配方见附录Ⅰ。 2．溶化 （1）在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解。待药品完全溶解后，补充水分到所需的总体积。 （2）配制高氏1号培养基时，用少量冷水将淀粉调成糊状，再加入少于所需水量的沸水中，继续加热，使可溶性淀粉完全溶化，再称取其他各成分依次逐一溶化，对微量成分 FeSO4.7H2O可先配成高浓度的贮备液后再加入，方法是先在100ml水中加入1g的 FeSO4.7H2O配成0.01g/ml，再在1000ml培养基中加入1ml的0.01g/ml的贮备液即可。 （3）将马铃薯块放入少于所需水量的水中，在石棉网上加热，搅拌以免马铃薯块糊在烧杯底，煮沸20分钟，经常补充水分，将马铃薯及煮沸液经4层纱布过滤，补充水分到所

培养基的配制及灭菌

培养基的配制及灭菌 一．实验目的 1.三角瓶，培养皿，试剂瓶，试管，枪尖盒等仪器的清洗。 2.三角瓶棉塞的制作，三角瓶，吸管，培养皿，试剂瓶，试管，枪尖盒的包装 与灭菌。 3.高温蒸汽灭菌原理的学习。 4.LB和MacConkey培养基的制作与灭菌。 二．实验原理 1.高温灭菌的原理： 由于培养基配置过程中并非是无菌操作，所以要通过立即灭菌来防止配制过程中混入的杂菌利用培养基中的营养物质进行繁殖从而破坏培养基的性能。 高压蒸汽灭菌是生物试验应用最广，效果最好的一种湿热灭菌法。在密闭的蒸锅内，其中的蒸汽不能外溢，压力不断上升，使水的沸点不断提高，从而锅内温度也随之增加。在0.1MPa的压力下，锅内温度达121℃。在此蒸汽温度下，可以很快杀死各种细菌及其高度耐热的芽孢。 注意：①使用高压蒸汽灭菌前一定要完全排除锅内空气，使锅内全部是水蒸气，灭菌才能彻底。否则在同一压力下，锅内实际温度和理想温度就会有差距，不能达到最好灭菌效果。②在使用灭菌锅前切勿忘记加水，水加至与三角搁架相平，以防灭菌锅烧干而引起炸裂事故。③使用完后要等到压力降为零再打开锅盖，否则会因为锅内外压力不平衡而导致棉塞蹦出造成污染，也容易伤害到操作者。 2.培养基的配置原理： 微生物的生长依赖于可利用的营养物质和适宜的生长环境。培养基是用于培养，转移，贮存微生物的固体，半固体或液体的营养物质。培养基中含有微生物所需的全部营养物质，包括碳源、氮源、能源、无机盐、水分和生长因子。适宜的pH对微生物的生长是必不可少的。 培养基的物理状态有三种：液体、半固体和固体。这些培养基的主要区别是在固体和半固体培养基里面加了固化剂------琼脂。当将琼脂加入溶液中时，在98℃能融化成有一定粘性的液体。并在42℃凝固。琼脂具有的特性有：不易被微生物降解；接近无色等。对于固体培养基需要加入琼脂量约为 1.4%~1.6%，半固体培养基加入约0.6%~0.8%。 培养基在配制过程中容易受到污染，因此必须进行灭菌，同时不能将培养基中的营养物质破坏。 三．实验材料 1.培养基与试剂：蛋白胨，酵母粉，NaCl固体,NaOH液体,琼脂，MacConkey。 2.仪器：三角瓶，培养皿，试剂瓶，试管，枪尖盒，电子称，高压蒸汽锅，电 炉，药匙，称量纸，量筒或搪瓷缸，烧杯，pH试纸。

培养基的配制与灭菌

培养基的配制与灭菌 1目的 1.1了解并掌握培养基的配制、分装方法 1.2掌握各种实验室灭菌方法及技术。 2原理 培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。由于微生物具有不同的营养类型，对营养物质的要求也各不相同，加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很多，使用的原料也各有差异，但从营养角度分析，培养基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、生长素以及水分等。另外，培养基还应具有适宜的pH值、一定的缓冲能力、一定的氧化还原电位及合适的渗透压。 琼脂是从石花菜等海藻中提取的胶体物质，是应用最广的凝固剂。加琼脂制成的培养基在98～100℃下融化，于45℃以下凝固。但多次反复融化，其凝固性降低。 任何一种培养基一经制成就应及时彻底灭菌，以备纯培养用。一般培养基的灭菌采用高压蒸汽灭菌。 3材料 3.1器皿及材料 天平、称量纸、牛角匙、精密pH试纸、量筒、刻度搪瓷杯、试管、三角瓶、漏斗、分装架、移液管及移液管筒、培养皿及培养皿盒、玻璃棒、烧杯、试管架、铁丝筐、剪刀、酒精灯、棉花、线绳、牛皮纸或报纸、纱布、乳胶管、电炉、灭菌锅、干燥箱。 3.2药品试剂 蛋白胨、牛肉膏、NaCl、K2HPO4、琼脂、NaNO3、KCl、MgSO4、FeSO4、蔗糖、麦芽糖、木糖、葡萄糖、半乳糖、乳糖、土豆汁、豆芽计、磷酸铵、5%NaOH 溶液、5%HCl溶液。 4流程 称药品→溶解→调pH值→融化琼脂→过滤分装→包扎标记→灭菌→摆斜面或倒平板。

5步骤 5.1培养基的制备 5.1.1称量药品 根据培养基配方依次准确称取各种药品，放入适当大小的烧杯中，琼脂不要加入。蛋白胨极易吸潮，故称量时要迅速。 5.1.2溶解 用量筒取一定量(约占总量的1/2)蒸馏水倒入烧杯中，在放有石棉网的电炉上小火加热，并用玻棒搅拌，以防液体溢出。待各种药品完全溶解后，停止加热，补足水分。如果配方中有淀粉，则先将淀粉用少量冷水调成糊状，并在火上加热搅拌，然后加足水分及其它原料，待完全溶化后，补足水分。 5.1.3调节pH 根据培养基对pH的要求，用5%NaOH或5%HC1溶液调至所需pH。测定pH 可用pH试纸或酸度计等。 5.1.4溶化琼脂 固体或半固体培养基须加入一定量琼脂。琼脂加入后，置电炉上一面搅拌一面加热，直至琼脂完全融化后才能停止搅拌，并补足水分(水需预热)。注意控制火力不要使培养基溢出或烧焦。 5.1.5过滤分装 先将过滤装置安装好（图3-1）。如果是液体培养基，玻璃漏斗中放一层滤纸，如果是固体或半固体培养基，则需在漏斗中放多层纱布，或两层纱布夹一层薄薄的脱脂棉趁热进行过滤。过滤后立即进行分装。分装时注意不要使培养基沾染在管口或瓶口，以免浸湿棉塞，引起污染。液体分装高度以试管高度的1/4左右为宜。固体分装装量为管高的1/5，半固体分装试管一般以试管高度的1/3为宜；分装三角瓶，其装量以不超过三角瓶容积的一半为宜。 5.1.6包扎标记 培养基分装后加好棉塞或试管帽，再包上一层防潮纸，用棉绳系好。在包装纸上标明培养基名称，制备组别和姓名、日期等。 5.1.7灭菌 上述培养基应按培养基配方中规定的条件及时进行灭菌。普通培养基为121℃