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鸭胚成纤维细胞培养技术的改良_项碧飞

四川畜牧兽医・2008・06期・总第212期

辑S I C H U A N X U M U S H O U Y I

6

细胞培养技术是一门以模拟体内生长环境、使其在体外继续生长增殖的“活体”实验技术,它具有能够简化细胞生长环境、明确生长条件、施加实验因素方便、容易获得直接活体观察结果以及方便控制培养产物等特点,从20世纪初被创立以来,在细胞学、遗传学、病毒学、免疫学和基因功能组学等多领域中扮演重要角色,“解决生物学问题的关键最终将在细胞中找到”。鸭胚成纤维细胞(DEF )培养是广泛用于病毒分离、鉴定和复制,以及中和抗体检测的常规技术。鉴于鸭胚成纤维细胞比较难以培养以及本实验室未建立比较完备的鸭胚成纤维细胞培养技术,笔者通过实践和对传

统工艺的改进,就鸭胚成纤维细胞的培养技术进行了改良与探索,发现采用半胚不过滤法可以快速简单制备大量活鸭胚成纤维细胞。

1材料与设备1.1

材料

Hanks 液;胰蛋白

酶;DMEM 高糖培养基购自Sig-

ma 公司(USA);胎牛血清购自HyClone 公司(USA );11日龄非

免疫受精鸭胚,购自四川省原种鸭场。

1.2设备荧光倒置显微镜

(Olympus IX71,Japan );CO 2培养箱(Thermoforma USA );25mL 细胞培养瓶购自Corning 公司(USA)。

2方法

2.1

原代鸭胚成纤维细胞的制备

2.1.1

取胚体

取10~13日龄

的鸭胚1~2个,用照蛋器逐个观察,画出气室,取发育良好的活胚,气室朝上置于蛋盘内,分别用碘酒酒精棉球消毒蛋壳。

常规法

将胚体剪去掉头、

颈部前1/3、内脏和四肢,放入平

皿内,直接用HANKS 液冲洗2~

3次(洗去血液及黏性物质)。

半胚法将胚体剪去眼睛

和内脏团,放入平皿内,其他同

常规法。

全胚法将胚体取出后,直

接用HANKS 液冲洗,不加处

理。

2.1.2剪切用眼科剪将胚体

在青霉素小瓶内充分剪碎为

0.5~1mm ,用3倍体积的HANKS

液反复洗涤2~3次至悬液清凉,悬液用无尖的枪头洗出(本步目的为洗去残余的血液)。

2.1.3消化冷消化

将盛有洗涤后的

组织块倒入薄玻璃瓶,加入5倍体积的0.25%胰蛋白酶溶液,后将其放置4℃冰箱过夜(或12~

18h )。

热消化

将盛有洗涤后的

组织块倒入薄玻璃瓶,加入10倍体积的0.25%胰蛋白酶溶液后,直接放入37℃水浴锅中30

min ,其间10min 轻轻混匀一次,

直至组织块边缘呈现絮状、蓬松茸毛状物时为止,停止消化。

鸭胚成纤维细胞培养技术的改良

项碧飞,孟宇航,郭春华,张兴友,常

(西南民族大学生命科学与技术学院,四川成都610041)

中图分类号:S814.5

文献标识码:B

文章编号:1001-8964(2008)06-0029-02

摘要:细胞培养技术是现代生物科学中发展十分迅速的一种实验技术,从20世纪初被创立以来,在细胞学、

遗传学、病毒学、免疫学和基因功能组学等多领域中扮演重要角色。笔者通过实践对鸭胚成纤维细胞培养技术的改良与探索,发现采用半胚不过滤法可以快速简单有效地制备大量活鸭胚成纤维细胞。

关键词:细胞培养技术;鸭胚成纤维细胞;改良

收稿日期:2008-04-21

作者简介:项碧飞(1981-),男,苗族,四川叙永,在读硕士研究生,动物遗传育种与繁殖专业。

通讯作者:郭春华(1957-),女,四川内江人,教授,博士,主要从事动物遗传育种及动物营养的教学与科研工作。

试验研究

杨庆红

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