广西产拳卷地钱SCoT-PCR引物筛选及反应体系优化

广西产拳卷地钱SCoT-PCR引物筛选及反应体系优化

作者：朱华[1];谢凤凤[1];黎理[1];尚晓红[2];李鹏[1];李平凤[1];;;;;;

作者机构：[1]广西中医药大学,南宁530200;;[1]广西中医药大学,南宁530200;;[1]广西中医药大学,南宁530200;;[2]广西作物遗传改良生物技术重点开放实验室,南宁530007;;[1]广西中医药大学,南宁530200;;[1]广西中医药大学,南宁530200;

来源：壮瑶药研究季刊

年：2017

卷：000

期：001

页码：P.114-122

页数：9

中图分类：R155.54

正文语种：CHI

关键词：拳卷地钱;SCoT-PCR;引物筛选;体系优化

摘要：目的：对影响广西产拳卷地钱SCoTPCR反应的各因素进行优化，建立稳定的反应体系。方法：采用改进的CTAB法提取拳卷地钱基因组DNA；以DNA浓度、Taq聚合酶、Mg2＋、dNTP、引物浓度的5个主要因素进行五因素四水平的正交设计，对拳卷地钱SCoTPCR反应体系进行优化。结果：DNA 条带整齐，无RNA污染、无降解、无弥散的荧光出现、加样孔清晰。紫外检测结果，0D260／280在1．714-2．199之间，拳卷地钱最佳反应体系（50μL）为：DNA模板30ng、MG2＋2mmol／L、dNTP0．2mmol／L、引物0．4μmol／L、TaqDNA聚合酶0．5U。结论：建立并优化了拳卷地钱SCoTPCR反应体系，为拳卷地钱品种鉴定、遗传多样性评价及亲缘关系分析提供实验数据，为药材资源开发利用提供参考依据。