消毒剂NPD检验方法的建立
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BIOTECHWORLD 生物技术世界《药品生产质量管理规范》要求药品生产企业必须符合卫生要求,而消毒是洁净室最基本的操作技术,应当选用检验合格的消毒剂,才能保证洁净室的清洁。因此,消毒剂的消毒效果是其入厂检验的一个重要指标。消毒剂NPD作为目前常用消毒剂,杀菌范围为细菌繁殖体和酵母菌,选择金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和白色念珠
菌作为试验菌株。研究表明[1]
,1.0%吐温80溶液或含0.1%大豆卵磷脂和0.7%吐温80的溶液可以作为消毒剂NPD的中和剂。
1 材料与方法
1.1 材料
NPD(奥星公司);标准菌株:金黄色葡萄球菌(CMCC(B)26003),大肠埃希菌(CMCC(B)44102),白色念珠菌(CMCC(F)98001);不锈钢圆片载体(直径12mm);TSA培养基(北京三药);两种中和剂(自配):1.0%吐温80溶液,0.1%大豆卵磷脂+0.7%吐温80溶液。
1.2 方法
1.2.1 菌液制备
取2~8℃保存的菌种斜面,5.0ml 0.9%NaCl溶液反复吹洗,洗下菌苔,震荡使分布均匀;10倍梯度稀释并计数(0.2ml涂布平板计数),培养。根据计数结果选取合适的稀释级(使菌片的回收为5*105~5*106cfu/片)作为试验所用菌悬液。
1.2.2 中和剂鉴定试验
取两组试管(3个一组)分别加入9ml两种中和剂,各加NPD 1ml (Nt组,中和剂效力试验),混匀,静置5min。每组试管分别放入3种制备好的菌片,振荡混匀,使菌全部转移到试管中,作用10min,梯度稀释并进行平板计数。另取两组试管,各加1ml 无菌水代替NPD(Nc 组,中和剂毒性试验),操作同上。以上试验均三次重复。
记录每个稀释级0.2ml样品的菌落数。选取合适梯度(菌数为30~300cfu)计数,平行平板计数分别为a1和a2,计算Nc和Nt值:
Nc或Nt=lg ［(a1+ a2)/2*10d］
Nc—中和剂毒性测试中试管菌数对数值Nt—中和剂效力测试中试管菌数对数值d—稀释液稀释系数
判定标准:-0.3≤Nc-Nt≤0.3
1.2.3 消毒剂效果验证试验(载体浸泡杀菌法)不锈钢载体(模拟洁净室材质)脱脂处理[2]。吸取每种菌液各10μl,滴加载体表面,接种环涂匀,室温风干成菌片。取3个无菌平皿,各
注入10ml NPD消毒剂(配制浓度1∶256),分别放入每种菌液预先制备的菌片各2个,浸泡5min。移入含5ml中和剂的试管中,振荡混匀,使菌片上的菌完全洗脱,静置10min。吸取0.2ml接种于TSA培养基,培养计数。另取3个无菌平皿,各注入10ml的0.9% NaCl溶液代替NPD,放入2个菌片作为阳性对照。以上试验均三次重复。
计算各组的活菌量(cfu/片),并换算为对数值(N):KL=N0 - N KL—杀灭对数值
N0—对照组平均活菌浓度对数值N—试验组平均活菌浓度对数值判定标准:KL≥3.0
2 结果与分析
2.1 中和剂可行性分析
注:◆和■分别表示1.0%吐温80溶液和0.1%大豆卵磷脂+0.7%吐温80溶液
由表1可以看出,含0.1%大豆卵磷脂和0.7%吐温80的溶液作为中和剂时,Nc-Nt值
均符合标准,而1.0%吐温80溶液作为中和剂时超标,因此,选择含0.1%大豆卵磷脂和0.7%吐温80的溶液作为中和剂。
2.2 消毒剂NPD 效果分析
由表2可以看出,消毒剂NPD的杀灭对数值(KL)均大于3,符合
判定标准,满足实验室日常消毒的要求,能够保证生产药品质量。
3 讨论
目前市场上的消毒剂多种多样,对于不同类型的消毒剂,其对应的中和剂和消毒方法都有所不同,因此,选择合适的中和剂及合适的试验方法很重要。对于奥星的消毒剂NPD通过试验确定了含0.1%大豆卵磷脂和0.7%吐温80的溶液作为中和剂;试验方法选用载体浸泡法,最终确认了消毒剂NPD的消毒效果,保证了生产的清洁消毒,保证了生产环境的无菌性,从而保证了生产药品的质量。参考文献
[1]贾丽丽. 季铵盐的快速测定与杀菌凝胶剂的研究[D]. 北京: 中国人民解放军军事医学科学院,2008.[2]《消毒技术规范》(2002年版).
消毒剂NPD 检验方法的建立
周丛薇
(华药金坦生物技术股份有限公司 河北石家庄 050010)
摘要:目的:新版《药品生产质量管理规范》增加了消毒剂入厂检验的要求,消毒剂NPD作为我厂常用消毒剂,急需建立合适的检验方法,确保消毒剂的作用对象及范围。方法:采用载体浸泡方法,统计杀灭对数值(KL)。结果:中和剂选择含0.1%大豆卵磷脂和0.7%吐温80的溶液效果最佳,试验菌与消毒剂作用5min后浓度明显下降。结论:消毒剂NPD可满足日常消毒的要求,配合消毒剂OXY及杀孢子剂SK,可保证药品生产环境的安全。
关键词:消毒剂NPD 中和剂鉴定试验 载体浸泡法中图分类号:R979.7文献标识码:A 文章编号:1674-2060(2015)06-0009-01
金黄色葡萄球菌
大肠埃希菌
白色念珠菌
0.36±0.015◆
0.32±0.055◆
0.33±0.040◆
Nc-Nt
0.027±0.0058■
0.017±0.0058■
0.027±0.015■
表2 三种试验菌株经NPD 浸泡后KL 值
表1 三种试验菌株与中和剂作用后Nc-Nt 值
金黄色葡萄球菌 大肠埃希菌 白色念珠菌 KL
6.4±0.046
6.4±0.051
6.3±0.24