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RNasefree水和DEPC水区别

RNasefree水和DEPC水区别

RNAase-free 水的配置:

配制方法一是:取市售DEPC 1ml,加入1L待处理水(蒸馏水等)中(即终浓度含0.1% DEPC的水),经猛烈振摇后,于室温静止数小时,然后高压灭菌,以除去降解

DEPC(DEPC分解为CO2和乙醇)。

配制方法二是:采用一般市面所售的超纯水机(带有双UV紫外处理系统的)出来的水,再通过一次性注射器和滤器过滤的方法,最后得到RNasefree水,此种方法较前一种,操

作麻烦,成本较高,但好处就是对实验人员的健康有好处,不会用到有致癌作用的DEPC。

注意:①DEPC是一种潜在的致癌物质,在操作中应尽量在通风的条件下进行,并避免

接触皮肤。②含有Tris缓冲液的溶液中,不能加入DEPC。DEPC即二乙基焦碳酸酯(diethylprocarbonate),可灭活各种蛋白质,是RNA酶的强抑制剂。在各种需要进化

RNA酶的实验中发挥着重要作用,清除环境中的各种RNA酶类,保证实验的RNA不被

降解。在做RNA实验时,实验器具要用“DEPC水”处理过,溶液一般都要用"DEPC处理水"来配制。

Depc有固体粉末和液体两种形态存在,一般市面流通的是液体的。这又会让人把

DEPC和DEPC水混淆。两者区别在于DEPC水是DEPC和水的混合物。DEPC是纯的液

态DEPC化学品。

对于环保和实验安全的考虑,现在分子生物学实验室开始大量使用一种叫外源

RNA酶清除剂的DEPC环保替代品。操作更简单,经济,环保。

DEPC水的配置

是指终浓度含0.1% DEPC的水,在1000ml双蒸水中加入DEPC原液1ml,然后摇匀过夜。里面会残留没分解的DEPC,这些残留的DEPC会影响下游的RNA相关实验。

对于DEPC水和RNasefree水的认识往往会有以下误区:

误区一:重复使用含DEPC的水处理枪头、离心管等。由于DEPC较贵,而且书上说DEPC要用高压灭菌处理去除,于是有些人就萌发了重复使用DEPC的想法,即对含有DEPC的水不进行高压灭菌,从而重复使用含DEPC的水处理枪头、离心管等。节约本是

好事,但这样的节约是无效的。为什么不能重复使用含DEPC的水,因为DEPC在水溶液

中不稳定,极易分解,DEPC在pH6.0和pH7.0的PBS缓冲液中的半衰期分别约为

20min和10min,DEPC在水中的半衰期约为30min。因此,重复使用含DEPC的水就不能

保证枪头和离心管的RNase-free。

误区二:必需长时间高压灭菌来彻底去除DEPC。用DEPC处理过的溶液,在15-

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