超声波平板法检测金黄色葡萄球菌生物被膜的研究

第２６卷第３期２００５年６月

河南工业大学学报（自然科学版）

ＪｏｕｒｎａｌｏｆＨｅｎａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（ＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅＥｄｉｔｉｏｎ）

Ｖ０１．２６．Ｎｏ．３

Ｊｕｎ．２００５

文章编号：１６７３—２３８３（２００５）０３－００２２－０３

超声波平板法检测金黄色葡萄球菌生物被膜的研究

黄静１，韩北忠１，李春雷２，彭坚１，尹利端１

（１．中国农业大学食品科学与营养工程学院，北京１０００８３；２．北京出入境检验检疫局，北京１０００２２）

摘要：以金黄色葡萄球菌（ＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓＡｓ１．８９）形成的生物被膜为研究对象，采用扫描电镜（ＳＥＭ）观察生物被膜的形态结构；对棉花擦拭法和超声波平板法用于生物被膜的活茵计数进行了比较；最后测定了超声波作用不同时间去除生物被膜的量．结果表明：超声波平板法对生物被膜的活菌计数优于棉花擦拭法；超声波作用２ｍｉｎ能去除大部分生物被膜．

关键词：生物被膜；超声波平板法；扫描电镜；银染法

中图分类号：ＴＳ２０１．３文献标识码：Ｂ

０前言

生物被膜近年来引起国内外学者的重视，在我国主要集中在医学领域，食品工业中报道极少．生物被膜是指细菌粘附于接触表面，分泌多糖基质、纤维蛋白、脂质蛋白等，将自身包绕其中而形成的大量细菌聚集膜样物¨，２Ｉ．细菌存在方式主要有两种，浮游形式和粘附在一些接触表面上形成生物被膜．

在食品工业中，生物被膜不仅能引起食品腐败，还能腐蚀加工设备．食品加工环境中大部分食源性病原菌和腐败菌能在不同材料（不锈钢、塑料、玻璃、混凝土等）的接触表面上形成生物被膜．目前已有各种各样的定性和定量方法用于检测和监控粘附在食品接触表面上的生物被膜．棉花擦拭法是国内外研究生物被膜传统的方法，需要用棉花等类似物擦拭粘附在接触表面的生物被膜，应用比较广泛．此方法有一定局限性，一是棉花擦拭时需借助外力，虽然能控制擦拭次数，但很难把握用力强度；二是从接触表面脱落下来的生物被膜粘附在擦拭棉上，须再用漩涡混合器振荡，然后平板计数．用棉花擦拭法无法保证生物被膜完全从接触表面脱离，生物被膜转移量只能达到９０％以上∞Ｊ，而且由于操作复杂，准确性不高，重复

收稿日期：２００５－０２—２２

基金项目：国家质量检验检疫总局科研项目（２００３１Ｋ０５２）

作者简介：黄静（１９８０一），女，湖南郴州人，硕士研究生，研究方向为生物技术在食品中的应用．

性差．

本试验主要研究超声波平板法检测生物被膜，这种方法是在棉花擦拭法的基础上改进而得，具有人为因素影响较小，操作简单，劳动强度较小，准确性高，重复性较好的特点．

１材料与方法

１．１材料

１．１．１菌种

金黄色葡萄球菌（ＡＳ１．８９）：购于中科院微生物研究所国家菌种保藏中心．

１．１．２培养基

胰酶大豆肉汤（ＴｒｙｐｔｏｎｅＳｏｙＢｒｏｔｈ，简称ＴＳＢ）、营养琼脂：北京奥博星生物技术责任有限公司．

１．１．３试剂

氯化钠、氯化钾、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、５０％戊二醛溶液、无水氯化钙、硝酸银、对苯二酚、硫代硫酸钠、乙醇、四氯化锇、醋酸异戊酯均为国产分析纯．

１．１．４仪器

ＫＱ３２００Ｅ超声波清洗器：昆山市超声仪器有限公司；ｓ一５７０扫描电镜：日本ＨＩＴＡＣＨＩ；ＨＣＰ一２临界点干燥仪：日本ＨＩＴＡＣＨＩ；ＩＢ一５离子溅射仪：Ｅｌ本ＥＩＫＯ．

１．１．５载体

不锈钢片３０４：１．０ＣｌＴＩ×３．０ｃｍ；玻璃片：１．０ｃｍ×２．６ｅｍ；实验室普通型载玻片．

万方数据