番鸭细小病毒在番鸭胚成纤维细胞上的培养

犬的细小病毒病

犬的细小病毒病犬细小病毒病又称犬传染性出血性肠炎，是由犬细小病毒引起的一种急性传染病。临诊表现为肠炎型和心肌炎型。肠炎型以剧烈呕吐、血水样腹泻、脱水、血细胞减少、小肠出血性坏死性肠炎为特征；心肌炎型以急性非化脓性心肌炎为特征。世界各地都有本病暴发的报道，给养犬业造成极大威胁，是危害犬群的最主要传染病之一。 一、流行特点 犬细小病毒病主要经消化道传染，没有明显的季节性，城市饲养宠物犬的感染率比农村饲养的土犬要高。 自然条件下，对本病易感的动物主要是犬，各种年龄和品种的犬均可感染。断乳前后的仔犬易感性最高，往往以同窝暴发为特征。3-4周龄犬感染后呈急性致死性心肌炎的为多；8-10周龄的犬则以肠炎为主，但心肌细胞有核内包涵体。小于4周龄的仔犬和大于5岁的老年犬发病率低。 患病的犬是本病的主要传染源，其腹泻物、尿、唾液和呕吐物中均含有病毒。而康复犬可能从粪尿中长期排毒，污染饲料、饮水、垫草、食具和周围环境。健康易感犬常因接触病犬或食入污染的食物而感染，感染犬出现症状后第47天粪便排毒量最高，91天后病毒含量趋于减少，但传染性可持续1-8个月。 本病初发地区常常呈暴发性流行，各种年龄的犬只往往都能感染，病死率较高。经过一段时间后，往往只有幼龄犬才出现新病例。

犬细小病毒感染肠炎型的发病北和致死率分别为20%-100%和10%-50%，以断乳后的幼犬为最高，小于4周龄的仔犬死亡率最高。 二、临床症状 临诊上犬细小病毒病感染常表现为肠炎型和心肌炎型，极少数病例在同一个体上可同时出现肠炎型和心肌炎型并发。 1、肠炎型 常发于青年犬，潜伏期约1-2周。临诊表现为常常突然出现呕吐、沉郁、发热，继而急性出血性腹泻，粪便黄色或灰黄色，覆以多量黏液和伪膜。一般先呕吐、后腹泻，接着排出番茄汁样乃至带有血液腐臭的血样稀粪，难闻的恶臭味。患病犬精神沉郁，食欲废绝。体温升到40℃以上，血液浓稠，但血清总量减少，白细胞总数显著减少。转氨酶指数上升。后期病犬体温降至常温以下，可视黏膜苍白，呼吸困难，迅速痛脱水，急剧地进行性衰竭而死。病程短的4-5天，长的1周以上。有些病犬只表现间歇性腹泻或仅排拉稀软的粪便。成年犬发病体温一般不升高，症状较轻，有较高的治愈率。 2、心肌炎型 多见于8周龄以下的幼犬，常突然发病，数小时内死亡。感染犬精神、食欲正常，间或呕吐，或有轻度腹泻和体温升高。或有呼吸困难，持续20-30分钟，脉快而弱，可视黏膜苍白，心律不齐，一般多在数小时内因心力衰竭而死亡。极少数轻症病例可以治愈。死亡率为60%-100%。 三、病理变化

犬细小病毒论文综述

犬细小病毒与犬细小病毒病 摘要 1．犬细小病毒 1．1什么是犬细小病毒 犬细小病毒是世界上其中一种最小的病菌，由3个蛋白质组成，是极度简单的病菌。正是由于它是如此简单的生物，这意味着这种病菌很难被分裂，所以要消灭它是非常的难。一般来说他们对绝大部分的清洁剂品免疫，它们能在适当的环境中存活1年。这种病菌对氯胺和甲醛较为敏感，次氯酸盐钠(sodium hypochlorite)，一般来说就是家庭用的漂白水是对付犬细小病菌唯一最常用的消毒剂。世界上有两种犬细小病毒，第一种是在1970年发现的，是不会引起疾病的犬细小病毒。。第二种在1978年发现，而这种是能引发严重疾病的。这种犬细小病毒能引起出血，肠胃炎，在成年犬中有很高的死亡率，还能引发心肌炎使8个礼拜以下的幼犬突然死亡。心肌炎现在已经很少见，这种疾病现今多数以肠炎感染的方式显现。像所有病菌一样，犬细小病毒本身没有复制能力，它们必须依赖一个母体细胞来提供养分。这种病菌通过排泄物和口腔传染。当病菌依附到母体，就是患病的狗狗身上，它就会在咽喉周围和扁桃腺还有淋巴繁殖然后通过血液散布到全身。犬细小病菌的潜伏期是2-14天，但是通常是3-7天。肠部是最易被感染的部位，从十二指肠末端到小肠中段，病毒会深入骨髓，然后不断大量繁殖。病菌依附在排泄物，呕吐物，尿液还有唾液，这些都是很有传染性的。康复的动物在两个礼拜里排泄物里还附带有病菌，但是也有可能长达一年之久。 1．2犬细小病毒的预防措施 注射疫苗：幼犬遗传母体的抗体能阻止感染22个礼拜左右，但是为了确保安全幼犬成长到8个礼拜左右就应该开始注射他们生来第一次的疫苗，在疫苗没有完全注射完毕(第一次注射要注射2-3次，忘了不好意思)之前是要避免带狗出去玩的。 很重要的一点是，如果狗死于犬细小病毒，除了不断要用漂白水清理狗舍和狗日常生活的地方外，要记住这种病毒可以存活1年之久，所以最好等1年以后才养另外一只狗，以免悲剧再发生。如果因细小病毒感染狗入院，兽医一般会隔离管理，主人如果要去看望必须带上手套，面具和特定的靴子进入，以免把病菌带回家里。康复后1-2个礼拜仍然带菌，所以在这段时间内还是应该隔离管理 2．犬细小病毒病 2.1什么是犬细小病毒病 犬细小病毒病是犬的烈性传染性肠道疾病，它引起大的呕吐、腹泻、食欲下降、高热、大量脱水、以致使幼犬和老龄犬死亡。 2.2犬细小病毒病的临床表现 犬接触细小病毒后在3-14天内出现体症，平均发病时间为5-7天。临床症状包括：食欲下降、沉郁、发热、呕吐、腹泻。成年犬开始可不一定出现发热现象，

鸭细小病毒的治疗方法

鸭细小病毒的治疗方法 雏鸭细小病毒病俗称三周病，是由雏番鸭细小病毒引起1~3周龄雏鸭以腹泻、气喘和软脚为主要症状，发病率和病死率较高的传染病。 【临床症状】 根据病程分为急性型和亚急性型。急性型多见于7~14日龄雏番鸭，病雏精神委顿，羽毛蓬松，两翅下垂，尾端向下弯曲，无力走动，厌食，离群，排灰白色或淡绿色稀粪并粘附于肛门周围。咏端发给，张口呼吸，濒死前两脚麻痹，倒地，衰竭死亡。病程2~4天。亚急性型多见于大日龄雏鸭，病雏精神委顿，蹲伏，行走缓慢无力，排黄绿色或灰白色稀粪并粘附于肛门周围。病程5~7天，多数病愈鸭成为颈、尾部脱毛、嘴变短、发育受阻的僵鸭。 【病理变化】 大部分病死鸭肛门周围有稀粪枯附，泄殖腔扩张外翻。心脏变圆，心壁松弛，肾、脾表面有针尖大、灰白色坏死灶，肠粘膜有不同程度的充血和点状出血，尤以十二指肠和直肠后段粘膜出血严重，少数病例盲肠粘膜也有点状出血。 【类症鉴别要点】 （一）鸭病毒性肝炎 患病雏番鸭肝脏肿大，质脆，表面有出血性斑点的特征性病变，可做出初步区别。区别诊断除了血清学试验外，可采用易感雏番鸭和易感雏鸭做感染试验。如仅引起雏番鸭发病死亡，而雏鸭健活，为番鸭细小病毒所致。 （二）鸭霍乱 青年鸭、成年鸭比雏鸭更易感染。患鸭摇头、张口呼吸，瘫痪，剧烈下痢，肝脏肿大，有灰白色、针尖大的坏死灶，心冠状沟脂肪组织有出血斑或出血点，心包积液，十二指肠粘膜严重出血等特征性病变。用肝、脾做触片，用美蓝染色镜检，见有许多两极染色的卵圆形小杆菌，即可区别于雏番鸭细小病毒病。必要时做细菌学检验。 （三）鸭瘟 虽然不同日龄的鸭均可感染，但20周龄以内雏鸭较少流行发生，这是流行病学重要区别。患鸭流泪、两脚软、排绿色稀粪和头肿大为特征性症状，食管和泄殖腔粘膜有假膜和溃疡为主要特征性病变，即可区别于雏番鸭细小病毒病。必要时需做病毒学检验。 （四）番鸭小鹅瘟 在流行病学、临床症状和病理变化等方面，两种病非常相似，区别诊断除血清学试验外，

犬细小病毒治疗方法

犬细小病毒治疗方法 犬细小无特效治疗方法，医生各有各的经验，各有各的处方。但治疗原则基本相同，常采用特异疗法、支持疗法、对症治疗、控制继发感染和中草药治疗。 CPV-1的治疗效果不理想，给新生犬保温、给予适当的营养和水分可大大降低死亡率。 CPV-2无特效治疗药物，临床上常采用以下综合治疗措施。 （1）特异疗法 早期使用高免血清、细小病毒单克隆抗体、干扰素、免疫球蛋白、血浆，在减轻疾病严重程度、缩短治疗疗程上都有一定的作用。 市场上出售的这些产品生产厂家多、品种多，无正式批号的也不少，质量参差不一，价格差异很大。购买时要看厂家、抗体滴度、数量、主要成分含量，用法用量。按说明书上介绍的用量很难达到预期的疗效，特别是价格低廉的血清，其效果更差。应购买使用知名厂家，价格较合理的生物制品使用，切勿贪图便宜。 血清及单抗2ml/kg，肌肉注射，每天1次，连用3～5天。 单抗1～2ml/kg，肌肉注射，每天1次，连用3～5天。 干扰素，成犬每日肌注1～2支（100万国际单位），幼犬每日0.5～1支，连续3～5天。 免疫血浆，10～20/ml，静滴，每天1次，连用3～5天。血浆和单抗，或血浆和干扰联合使用，效果更佳。 （2）对症治疗 止吐：止吐药有助于减少体液流失，减轻患畜痛苦，以及维持肠道营养。首选爱茂尔肌注，必要时用阿托品，胃肠道有出血者忌用胃复安。还可以用昂丹司琼或多拉司琼止吐。 止泻：鞣酸蛋白，施密达都有止泻作用，但因其呕吐，不适宜口服给药，用施密达深部灌肠效果较好。 止血：肾上腺色腙、安甲苯酸、安甲环酸、VK3 ，V～K1均可用于止血，肌注效果不理想，采用联合用药肌注或静滴止血敏、氨甲苯酸有较好的疗效。如果止血无效，可静滴立止血、卡络磺钠。另外全血、血浆、代血浆也有止血作用。 心功能不全者，可静滴生脉注射液1～10ml；V～B12 0.25～0.5mg，肌苷50～100mg，混合肌注。 低蛋白血症：一些幼犬会出现低蛋白血症，输入全血将有助于这个问题的解决，但是如果不需要补充红细胞时，最好输入血浆。低蛋白造成水肿而且输入血浆后并未有所改善，应该考虑使用胶体羟乙基淀粉。理想的血浆蛋白浓度应该维持在2g/dl或则更高。 贫血：有些幼犬严重贫血，这是由于细小病毒肠炎引起的胃肠道失血造成的，或者这个跟细小病毒没有关系的寄生虫引起的。幼犬严重贫血必须输血，全血对动物的贫血和低蛋白血症更有好处。 败血症和内毒素血症：在治疗早期可用糖皮质激素和氟尼辛葡甲胺可能有好处，在脱水被矫正之后不要使用，

鸡胚成纤维细胞的制作及培养

鸡胚成纤维细胞培养 1、准备：取各种已消毒的培养用品置于净化台面，紫外线消毒20分钟。开始工作前先洗手、 75%酒精擦拭手至肘部。 2、布局：点燃酒精灯，安装吸管帽。 3、选胚：取9-10日龄鸡胚，（注：鸡胚日龄越小，形成细胞活力越好，但产量较低）用新 洁尔灭消毒蛋壳10分钟后放净化台。用碘酒、酒精消毒蛋壳。用镊子打开气室。 4、用另一套镊子将壳膜打开将鸡胚夹起去头、爪、眼，放灭菌生理盐水中。 5、把组织块置于烧杯中，用Hanks液漂洗2~3次，去除血污；如怀疑组织可能污染，可先 置于含有青链霉素的混合液中30~60分钟。 6、剪切：用眼科剪把组织切成1~2毫米大小的块，以便于消化。 7、处理组织：将已剪碎的组织碎片倒入一个带玻璃珠的灭菌三角瓶中，其中加入0.25%的 胰酶，10个胚约7ml，或加组织消化液，一个胚1ml（组织消化液以及胰酶的配置见微生物指导）结扎瓶口或塞以胶塞。 8、消化：将其置入37℃水浴箱中或用恒温水浴，消化中应不停摇动，如用电磁恒温搅拌器 消化更好。消化时间依组织块的大小和组织的硬度而定。消化10－15分钟。一般约12分钟。视鸡胚日龄大小而定。越小消化时间越短。见组织松软即可。一般不可消化时间太长否则容易导致细胞活力不足。 9、分离：在消化过程中见消化液发混浊时，可用吸管吸出少许消化液在镜下观察，如组织 已分散成细胞团或单个细胞，立即终止消化，加入0.5％的含5％犊牛血清双抗的的水解乳蛋白Hank，s液少许。（制法见微生物试验实习指导），用力震摇，或用吸管吹打。 使细胞分散，脱落。然后用纱布过滤或随即通过适宜不锈钢筛，滤掉尚未充分消化开的组织块。低速（500~1000转/分）离心消化液5分钟，吸出上清（可以不离心吸掉上清），加入适量含有血清的培养液。 10、计数：用计数板计数，如细胞悬液细胞密度过大，再补加培养液调整后，分装入培 养瓶中。对大多数细胞来说，pH要求在7.2~7.4范围，培养液呈微红色，如颜色偏黄，说明液体变酸，可用NaHCO3调整。分装在细胞培养瓶中。视细胞多少而定加入培养基。 培养基为0.5％的含5％犊牛血清双抗的的水解乳蛋白Hank，s液. 11、将其置入co2细胞培养箱中，37度。瓶口需用纱布棉塞或螺旋帽堵塞，纱布塞易 生霉菌，每次换液时需要换新塞。培养24小时进行观察。一般在24－48小时可形成单层细胞。 传代 1. 倾倒培养瓶内旧培养液。 2. 向瓶内加入胰蛋白酶和EDTA混合液少许，以能覆满瓶底为限。 3. 置温箱中2~5分钟，当发现细胞质回缩，细胞间隙增大后，立即终止消化。 4. 吸除消化液，向瓶内注入Hanks液数毫升，轻轻转动培养瓶，把残余消化液冲掉。注意加Hanks液冲洗细胞时，动作要轻，以免把已松动的细胞冲掉流失，如用胰蛋白酶液单独消化，吸除胰蛋白酶液后，可不用Hanks液冲洗，直接加入培养液。 5. 用吸管吸取营养液轻轻反复吹打瓶壁细胞，使之从瓶壁脱离形成细胞悬液。 6. 计数板计数后，把细胞悬液分成等份分装入数个培养瓶中，置温箱中培养。

鸡胚成纤维细胞培养doc

一、鸡胚成纤维细胞的体外培养 鸡胚成纤维细胞在病毒学研究中十分常用。孵化8－12d的鸡胚可用作培养的材料来源。 （一）实验材料 1. 鸡胚：孵化10d的受精蛋数个。孵化方法是将受精蛋放到38.5℃孵卵箱或恒温箱中，静置。每日翻动1—2次，以防止鸡胚粘连到蛋壳上影响发育。箱内湿度(40～70％)可通过在箱底放一盛水盘来维持。鸡胚的孵化期为2ld。孵化前，如遇蛋壳表面污物较多，可用刀片等器具刮除，不要用湿布擦拭，更不能用酒精棉球消毒或者用水洗蛋。孵育前可将受精蛋保存在10℃左右，保存期一般不超过10d。也有人将受精蛋保存在4℃冰箱中。 2. 消化液：含0.25％胰蛋白酶、青霉素100 1U／ml、链霉素100 μg/ml混合消化液。用Hanks 液或HEPES液配制。 3. 培养液：DMEM培养液，添加10％－20％的胎牛血清（FCS）、青霉素100 IU/ml、链霉素100 μg/mL。 4. 其它培养用品：手术器械、平皿、三角瓶或15ml血清瓶、离心管、100目不锈钢筛网、培养瓶或培养板、振荡水浴箱、离心机等。 （二）操作步骤 1)取孵化10d的鸡胚，分别用碘酒与酒精棉球擦拭消毒，晾干。用一已消毒金属器具将受 精蛋大头端击破，用镊子小心夹去破碎蛋壳，然后撕去气室外面的膜，暴露出尿囊绒膜及附着的血管。开口大小以受精蛋内容物不溢出为宜，但不宜太小。用镊子轻轻夹住鸡胚的颈部，小心取出鸡胚，放于无菌培养皿中，除去头部、四肢、内脏和皮肤。 2)胚体用Hanks液或生理盐水清洗3次，切成1－2 mm3的小块，然后转移到容积适中的 三角瓶或15ml血清瓶内。 3)加入适量消化液，一般每10个鸡胚加20 m1消化液，用胶塞密封瓶口。 4)在振荡水浴箱上37℃慢速搅拌5－10 min。加入少量血清钝化胰蛋白酶。然后通过100 目不锈钢筛网，制备细胞悬液，将细胞悬液转移到离心管中。 5)离心（800 rpm，10 min），弃上清液，将细胞沉淀用培养液洗2次。 6)加入培养液，用吸管吹打制成细胞悬液。用血球计数板计数细胞。 7)以0.2～1X06个细胞/ml的密度接种细胞。于37℃、5％CO2培养箱中培养。每2－3d换 液1次。待细胞汇合成片后，可行传代培养。 （三）结果 在倒置显微镜下观察，用8～12d龄鸡胚培养的细胞主要为具有长突起的梭形、星形或三角形的成纤维细胞。用I型和Ⅲ型胶原的抗体作免疫细胞化学分析，培养物以呈阳性反应的成纤维细胞为主。 （四）讨论 鸡胚成纤维细胞在普通培养液中具有生长优势，一般不需特殊处理，经几次传代后就可逐渐排除其它细胞，得到较纯的成纤维细胞。体外培养的胚胎细胞的形态与所取鸡胚的胚龄有关。若用体节前期的胚胎，培养的细胞不是典型的长的或星形的成纤维细胞，而为宽扁的细胞，这可能与胚胎细胞的分化状态有关。

雏番鸭细小病毒病研究进展_董嘉文

雏番鸭细小病毒病研究进展 董嘉文李林林孙敏华 （广东省农业科学院兽医研究所，广东省兽医公共卫生公共实验室，广州，５１０６４０） 雏番鸭细小病毒病是由雏番鸭细小病毒（Mus－covy duck parvovirus,MDPV）引起的雏番鸭以喘气、腹泻、脚发软及进行性消瘦为主要症状的一种急性、败血性传染病，其特点是传染性强和死亡率高[1-2]。该病主要发生于3周龄以内的雏番鸭，因此又称雏番鸭“三周病”；发病率和死亡率可达40%以上，是目前番鸭饲养业中危害最严重的传染病之一，严重影响养鸭业的发展。我国是发现和研究番鸭细小病毒最早的国家，1985年以来，在我国福建等南方多省均出现该病[3]，而后，法国、美国和日本等地也相继报道本病的流行。1988年，程由铨等首次分离并鉴定该病的病原为番鸭细小病毒[4]。 １病毒特征 1.1形态特征 MDPV病毒粒子呈球形或六角形，二十面体，无囊膜，直径大小为22～25nm。有实心和空心2种颗粒形态，空心内直径为15nm，衣壳厚度为5nm，壳粒数32，病毒衣壳的壳粒排列规则呈管状结构，壳粒直径为3～4nm。在氯化铯中，实心和空心病毒粒子浮密度分别为1.39~1.42g/cm3和1.38g/cm3[5-6]。 1.2理化特性 MDPV对pH3.0、pH5.0和60℃1h均有抵抗力；对酸、氯仿、乙醚和胰酶不敏感，但对紫外线辐射敏感。对鸡、麻鸭、番鸭、鹅、猪、牛、兔、豚鼠、绵羊和“O”型红细胞无凝集作用。 1.3培养特性 番鸭细小病毒初代分离只能用番鸭胚，而在其他胚中不能增殖，在鸭胚传代适应后可以在鹅胚上生长增殖并引起特征性病变。MDPV也能在番鸭胚和鹅胚的成纤维细胞以及番鸭胚肾细胞上增殖，不能在鸡胚成纤维细胞(CEF)、猪肾传代细胞(PK15)、地鼠肾传代细胞(BHK21)和绿猴肾传代细胞(Vero)上增殖。２流行病学和临床症状 2.1流行病学 雏番鸭是惟一自然感染发病的动物，发病率和死亡率与日龄关系密切，日龄愈小发病率和死亡率愈高，3周龄以内的雏番鸭发病率为20％～60％，病死率为20％～40％不等。30日龄以上的番鸭也可发病，但发病率和死亡率较低，病鸭往往成为僵鸭。病鸭通过排泄物特别是通过粪便排出大量病毒，污染饲料、饮水、用具、人员和周围环境造成传播。如果病鸭的排泄物污染种蛋外壳，则引起孵房内污染，使出壳的雏番鸭成批发病。本病发生无明显季节性，但是由于冬春气温低，育雏室空气流通不畅，空气中氨和二氧化碳浓度较高，故发病率和死亡率较高。而在夏季发病率低，通风较好的情况下，发病率一般为20%～30%。 2.2临床症状 本病的潜伏期4～9d，病程2～7d，病程长短与发病日龄密切相关。根据病程长短可分为最急性、急性和亚急性两种类型。 最急性：多发生于6d以内的病雏，病势凶猛，病程很短，只有数小时，多数病例不表现前驱症状即衰竭，倒地死亡，此型的病雏喙短，偶见羽毛直立、蓬松。临死时两脚呈游泳状，头颈向一侧扭曲。该型发病率低，占整个病雏数的4%～6%。 急性型：主要见于7～14日龄雏番鸭，主要表现为精神委顿，羽毛蓬松，两翅下垂，尾端向下弯曲，两脚无力，懒于走动，厌食，离群；有不同程度腹泻，排出灰白或淡绿色稀粪，并黏附于肛门周围；呼吸困难，喙端发绀，后期常蹲伏，张口呼吸。病程一般为2～4d，濒死前两肢麻痹，倒地抽搐，衰竭死亡。 亚急性型：多见于发病日龄较大的雏鸭，主要表现为精神委顿，喜蹲伏，两脚无力，行走缓慢，排黄绿色或灰白色稀粪，并黏附于肛门周围。病程5～7d，病死率低，大部分病愈鸭颈部、尾部脱毛，嘴变短，生长发育受阻，成为僵鸭。 ３病理学变化 3.1剖检变化 最急性型由于病程短，发病急，病变不明显，仅在肠道出现急性卡他性炎症，并伴有肠黏膜出血，其他内脏无明显病变。 急性型病变较典型，呈全身败血现象。心脏变圆，心壁松弛，尤以左心室病变明显；肝脏稍肿大，少数有明显坏死灶。胆囊显著肿大。胆囊充盈，肾和脾稍肿大，胰腺充血或局灶性出血，表面散布针尖大灰白色病灶。特征性病变在肠道，十二指肠前段有胆汁渗出，十二指肠后段及空肠前段呈急性卡他性炎症， 中图分类号：S858.32文献标识码：A文章编号：1008-3847（2012）10-0002-05

犬瘟热,细小病毒偏方

这个和犬瘟一样．可怕到我打字时手都有点哆嗦... 主要症状：自然感染的潜伏期为7~14天。多呈肠炎症状，少数呈心肌炎综合征。 肠炎型病犬：多发生于3＿4月龄的幼犬，经1＿2天的厌食，排出软便，间或体温升高之后迅速发展成为频繁的呕吐和剧烈腹泻，排出西红柿汁样或洗肉水样的血便，味极腥臭，患犬精神沈郁，迅速消瘦，视力模糊，全身乏力，嗜睡，可视粘膜苍白，舌面皱缩，眼球下陷，皮肤失去弹性。体表温度下降，耳、鼻和四肢末端发凉，心率增速，表明机体极度脱水和循环障碍。 心肌炎型患犬：多发生于1个月到1个半月的仔犬。多突然发病，表现为可视粘膜苍白，衰弱，呼吸困难，听诊有心内杂音，多伴有轻度的腹泻与呕吐。患犬常因心力衰竭而突然死亡，特别是采取补液时，往往在补液中死去，多因心衰与肺水肿所致。 主要治疗方法： 西医的就是打针： １：消炎．止血、止吐控制肠道感染：庆大霉素．地塞米松混合肌肉注射抗生素：甲硝唑(静脉注射或直肠灌注)小诺霉素(肌肉或皮下注射)． 胃复安（止吐）泻痢宝（止泻） ２：补液疗法，用等渗的葡萄糖盐水加入5％碳酸氢钠注射液给予静脉注射。 ３：细小病毒病早期用犬细小病毒高免血清或免疫球蛋白提高患犬的特异性抵抗力 辅助护养：为了避免狗狗因为不进食不喝水而导致体能严重下降，应注意补充葡萄糖液．及补液盐水．板蓝根冲剂．如果狗狗情况有些好转了，喂它一点点清淡的米汤..另外要注意保暖． 多多安慰它．陪伴它．给它信心． 中药疗法（偏方）：“白乌汤”治疗犬细小病毒性肠炎 方剂：白头翁15克，乌梅15克、黄连5克、黄柏5克、郁金10克，诃子10克。 用法：加水1000克，煎数沸，取汤汁候温灌服，每日一剂。如病犬呕吐过于剧烈，可在灌服前2小时左右先注射胃复安注射液；如病犬脱水严重，应辅以输液治疗

细胞原代培养细胞生物学实验报告

细胞生物学实验报告 细胞原代培养 姓名： 学号： 班级： 专业： 同组成员： 一、实验原理

细胞培养是生物学和医学研究中最常用的手段之一，可分为原代培养和传代培养两种。原代培养是直接从生物体获取组织或器官的一部分进行培养。由于培养的细胞刚刚从活体组织分离出来，故更接近于生物体内的生活状态。这一方法可为研究生物体细胞的生长、代谢、繁殖提供有力的手段。同时也为以后传代培养创造条件。 原代培养的方法： 1、组织块法在平皿中用弯头剪把组织尽量剪碎，每个组织块小于1mm3大小。用Hanks 液洗涤2—3次，自然沉淀。用吸管吸去上清液。将组织块贴于培养瓶进行培养。 2、酶消化法将1mm3大小的组织块放入1个三角瓶内加入10—30ml的%的胰蛋白酶。370C磁棒搅拌消化20－30分钟。然后终止消化。用几层无菌纱布过滤。取过滤液，离心800rpm 5—10分钟收集细胞。弃上清，加入带有双抗的培养基，放入培养瓶培养。 取材注意事项： 取材要注意新鲜和保鲜。取材应严格无菌。取材和原代细胞制作时，要用锋利的器械，如手术刀或剃须刀片切碎组织，尽可能减少对细胞的机械损伤。要仔细去除所取材料上的血液（血块）、脂肪、坏死组织及结缔组织，切碎组织时应避免组织干燥，可在含少量培养液的器皿中进行。取材应注意组织类型、分化程度、年龄等，一般来讲，胚胎组织较成熟个体组织容易培养，分化低的较分化高的组织容易生长，肿瘤组织较正常组织容易培养。 二、实验目的 1、理解细胞原代培养原理 2、熟悉细胞原代培养方法与过程 3、了解细胞原代培养的应用 4、独立进行细胞原代培养操作 三、实验材料 手术小直剪刀、眼科直镊子、眼科弯镊子、玻璃平皿、培养瓶、试管、移液管、巴斯德吸管、废液缸、75%酒精棉球、酒精灯。 动物：9-12日龄的鸡胚蛋 四、实验步骤

猪细小病毒病的诊断及防治

猪细小病毒病的诊断及防治 猪细小病毒病（Porcine Parvovirus Infection，PPV）是由猪细小病毒感染引起的一种繁殖机能障碍性疾病。该病的特点主要是受感染的母猪，特别初产母猪产出死胎、畸形胎、木乃伊胎、弱仔猪及健康仔猪，而母猪本身无明显的其它症状。目前本病在世界各地猪群中普遍存在，在大多数养猪国家呈地方性流行。我国80年代中后期频繁从国外引种，使 该病在我国迅速传播。目前已在我国各地猪群广泛分布存在，特别是集约化猪场造成相当大的危害，据抗体检测统计：猪场阳性率为100%，种猪群阳性率为27.7％～82.2%，严重危害养猪生产发展。由于许多规模化猪场有本病的存在，应该重视猪细小病毒病的防制。 1 病原 本病的病原体为细小病毒科的猪细小病毒，该病毒的粒子呈圆形或六角形，为20面体对称，无囊膜，直径为18～24纳米，基因为单股DNA。病毒具有血凝特性，能凝集豚鼠、恒河猴、小白鼠、猫、鸡和人O型血的红细胞，其中以豚鼠红细胞的血凝性最好；在培养细胞的细胞核中可产生核内包涵体。据报道，PPV毒株有强弱之分，强毒株（例如NADL-8毒株）感染母猪后可导致病毒血症，并通过胎盘垂直感染，引起胎儿死亡；弱毒株（例如NADL-2毒株）感染怀孕母猪后不能经胎盘感染胎儿，而被用作弱毒疫苗株。

本病毒对热、酸、碱及消毒药的抵抗力均较强，对外界抵抗力极强，在56℃恒温48h，病毒的传染性和凝集红细胞能力均无明显的改变。70℃经2h处理后仍不失感染力，在80℃经5min加热才可使病毒失去血凝活性和感染性。在空圈内可持续存在20周。本病毒能凝集豚鼠、大鼠、小鼠、鸡、鹅、猫、猴和人O型红细胞，其中以豚鼠的红细胞最好。0.5%漂白粉、2%氢氧化钠5min可杀死病毒。 2 流行病学 该病最早于1967年在英国报道，目前呈世界流行，给养猪业造成较大的经济损失。 猪是唯一已知的易感动物，不同年龄、性别的家猪和野猪均可感染。据报道，在一些家禽和试验动物（例如牛、绵羊、猫、豚鼠、小白鼠和大白鼠等）血清中也存在有本病毒的特异性抗体；来自病猪场的鼠类，其抗体的阳性率也比阴性猪场的鼠类为高。 病猪和带毒猪是主要的传染源。急性感染猪的排泄物和分泌物中含有较多的病毒；感染母猪所产的死胎、活胎、仔猪及子宫分泌物中均含有大量病毒；子宫内感染的仔猪至少可带毒9周；有些具有免疫耐受性的仔猪可终生带毒；被感染的公猪，其精细胞、精索、附睾和副性腺均含有病毒，在其配种时很易传染给易感母猪，常引起本病的扩大传播。

番鸭细小病毒病与番鸭常见病的区别诊断

番鸭细小病毒病与番鸭常见病的区别诊断 摘要总结了番鸭细小病毒病与小鹅瘟、雏鸭肝炎、新鸭疫病、鸭瘟、鸭传染性浆膜炎、鸭巴氏杆菌病、鸭副伤寒以及鸭白肌病等番鸭常见病的区别，以供番鸭细小病毒病的鉴别诊断参考。 关键词番鸭；番鸭细小病毒病；鉴别诊断 番鸭细小病毒病是由番鸭细小病毒（Muscovy Duck Parvovirus，MPV）引起的一种以肠炎、腹泻和喘气为临床特征的急性或亚急性传染病。因该病主要侵害1～3周龄雏番鸭，故又称3周病。其发病率和死亡率均很高，病愈鸭大部分成为僵鸭，给养鸭业造成严重的经济损失。根据本病的流行病学特点、症状及病理变化即可对番鸭细小病毒病作出初步诊断，然后对病毒分离和鉴定，通过琼脂扩散试验、荧光抗体试验、酶联免疫吸附试验进行确诊。但番鸭细小病毒病在流行病学、临床症状以及某些组织器官的病理变化方面与小鹅瘟、雏鸭肝炎、新鸭疫病、鸭瘟、鸭传染性浆膜炎、鸭巴氏杆菌病、鸭副伤寒以及鸭白肌病等疾病相类似，需进行区别诊断。 1与小鹅瘟的区别 番鸭小鹅瘟是由鹅细小病毒引起的一种高度接触性和高死亡率的急性传染病。由于两种病的流行病学、临床症状和病理变化均非常相似，区别诊断除血清学外，可采用易感雏鹅和易感雏番鸭作感染试验。用5只5日龄左右的易感雏鹅和5只5日龄左右的易感雏番鸭分别注射被检病料，或被检鹅胚液毒、番鸭胚液毒。若雏鹅和雏番鸭均发病死亡，并且有小鹅瘟特征性病变，为小鹅瘟病毒所致；若仅引起雏番鸭发病死亡，而雏鹅健活，为番鸭细小病毒所致。 2与雏鸭肝炎的区别 雏鸭肝炎是由鸭肝炎病毒引起3周龄以内雏鸭的一种急性传染病。患病雏番鸭根据肝脏肿大、质脆、表面有出血性斑点的特征性病变可作初步区别。区别诊断除了血清学外，可采用易感雏番鸭和易感雏鹅作感染试验。用5只5日龄左右的易感雏番鸭和5只5日龄左右的易感雏鹅，分别注射被检病料，或被检鹅胚液

鸡胚成纤维细胞的制备

鸡胚成纤维细胞的制备 一、材料和试剂 1、鸡胚：9-10日龄发育良好的SPF胚 2、试剂：0.25％胰酶，MEM培养基，新生牛血清，1万IU双抗，3%谷氨酰胺，7.5%碳酸氢钠 3、仪器和器材：，带6-8层纱布的100ml烧杯两个，直径9cm的平皿两个，中号镊子四把，倒置显微镜，培养箱，50ml细胞培养瓶，10ml刻度吸管两根、5ml刻度吸管，250ml生理盐水瓶两个，无菌的细胞培养瓶，灭菌好的PBS，酒精棉球，废液缸等 二、操作步骤 1、操作前的准备： ○1预热培养用液：把已经配制好的装有培养液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴锅内预热。 ○2用75％酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手。 ○3正确摆放使用的器械：保证足够的操作空间，不仅便于操作而且可减少污染。 ○4点燃酒精灯：注意火焰不能太小。 ○5准备好将要使用的消毒后的培养瓶。 ○6取出预热好的培养用液：取出已经预热好的培养用液，用酒精棉球擦拭好后方能放入超净台内。 2、成纤维细胞制备： ①将选好的9-10日龄的发育良好的SPF胚用5%的碘棉消毒蛋壳气室部位，再用酒精棉脱碘。 ②无菌取出鸡胚，放入灭菌的玻璃皿内，用PH7.2的PBS冲洗一次，去头，四肢和内脏。 ③再用PH7.2的PBS冲洗两次。 ④用镊子捏成小块（2-3mm3）, 用PH7.2的PBS冲洗两次。 ⑤鸡胚约加4ml0.25%胰酶溶液，38℃消化30min，期间15min轻摇一次。 ⑥期间配制细胞培养液： 培养基：MEM 双抗：2% 7.5% 碳酸氢钠：2% 牛血清：6% 3% 谷氨酰胺：1% ⑦消化结束，弃掉胰酶消化液，用PH7.2的PBS冲洗两次，再用细胞生长液冲洗一次。 ⑧加入适量的细胞生长液，用刻度吸管反复吹打（使细胞充分分散）。 ⑨将细胞分散液倒入带6-8层纱布的100ml烧杯中（过滤之前先用少许细胞培养液润湿纱布），加入适量培养液（40ml/胚），过滤。 ⑩重复步骤⑨的操作重虑一遍。 11计数，要求每1ml滤液中约含活细胞100万-150万个。 ○ 12分装置个培养瓶中（7-8ml/瓶），置37℃培养箱培养。 ○

番鸭细小病毒特效药

番鸭细小病毒特效药 番鸭细小病由细小病毒引起，是雏番鸭的一种急性传染病。病理变化是纤维素性肠炎、胰脏呈点状坏死，以3周龄内的雏番鸭多发，最早是3日龄发病。病鸭张口呼吸、喘气，消瘦、拒食、蹲伏，十二指肠内容物呈松散栓子状，表层有脱落的黏膜附着。1日龄用番鸭二联苗每羽皮下注射1头份。发病鸭每羽肌肉注射番鸭二联高免血清1～2毫升，可适当加入氨苄青霉素或庆大霉素等抗菌类药以防继发感染。 特点：治疗小鹅瘟、鹅副黏、鸭瘟、鸭流感、鸭副粘、番鸭细小病毒等混合感染，一针治愈。 【商品名】鸭毒抗（北京国浩高科）--番鸭细小病毒特效药 【主要成份】维生素C（载体为鸭同源精制血清抗体） 【药理作用】本品是用引起鸭瘟、鸭流感、鸭副粘、番鸭细小病毒等病毒病原浓缩精制疫苗免疫健康鸭群，产生高效价抗体后，收集血清，采用酶切技术提取IgG、IgM、IgA Fab片段加保护剂制备而成。IgG是血清中最主要的抗体蛋白，占总免疫球蛋白量的75％，能够促进单核巨噬细胞的吞噬作用（调理作用），中和细菌毒素的毒性（中和毒素）以及与病毒抗原结合使病毒失去感染宿主细胞的能力（中和病毒）；IgM在抗感染免疫的早期起着十分重要的作用；血清型IgA可介导调理吞噬ADCC 作用，分泌型IgA是机体粘膜防御系统的主要成分，是防止病原体入侵机体的第一道防线。 【适应症】本品对鸭瘟、鸭流感、鸭副粘、番鸭细小病毒、小鹅瘟、鹅副黏等病毒性疾病的紧急预防和治疗有特效。 【用法用量】肌肉注射；1ml/kg，预防量减半。 【注意事项】1、注射：本品打开后应在24小时内用完，勿与活疫苗同时使用。 2、若有细菌混合感染，应配合抗生素同时使用。 【包装】250ml/瓶×30瓶/件 【贮藏】避光，阴凉处常温可保存6个月，冷藏时间更长，可保存1-2年。建议冷藏保存。

犬细小病毒病概述

犬细小病毒病概述 摘要：犬细小病毒病（Canine parvoviral disease）又称犬传染性胃肠炎，是由犬细小病毒（Canine parvovirus CPV）引起犬的一种急性传染病。以出血性肠炎和非化脓性心肌炎为主要特征。危害各年龄犬，对犬类危害极大。本文对犬细小病毒病做详细的概述，希望对此病有深入的认识。 关键词：犬细小病毒病；细小病毒；治疗；预防 犬细小病毒病临床上以出血性肠炎和非化脓性心肌炎为主要特征，危害各年龄段犬，尤其是幼犬，有时感染率可达100%，死亡率为10%~60%。除犬外，其他犬科和鼬科动物，如貂、狼、狐等也可感染。 1.病原 病原为犬细小病毒Ⅱ型（Canine parvovirusⅡ）属细小病毒科（Parvoviridae），细小病毒属（Parvovirus）。病毒颗粒无囊膜，直径20~25nm，20面体对称。在氯化铯中的浮密度1.43g/cm2。基因组为单分子线状单股DNA。病毒在4℃和25℃都能凝集猪和恒河猴的红细胞，但不能凝集其他动物的红细胞。该病毒对外界因素抵抗力较强，与60℃环境可存活1h，80℃可耐30min，在偏酸（pH3）环境和偏碱（pH9）环境中病毒仍有感染性。该病毒对0.5%福尔马林或0.5%过氧乙酸和5%~6%次氯酸钠，紫外线等较敏感，对氯仿和乙醚不敏感。如果将含病毒的粪便和肠管冷藏于低温环境，其感染性可长期保持。本病毒与猫泛白细胞减少症病毒（猫细小病毒）有密切的抗原组分关系。后者的疫苗具有抗本病毒感染的效能。CPV~2发现20多年来，出现了抗原性漂移，目前有a、b两个压型，2a在1979年出现，2b则始于1984年前后。二者致病性未见差异。 2.致病机理 病毒从口咽部进入，在咽淋巴结复制，而后通过血流扩散全身。具有相应受体的S期细胞感染后死亡，或者细胞分裂被抑制。在血流及淋巴器官中的所有白细胞包括淋巴细胞、单核细胞及血小板均遭破坏，剩余的周边白细胞增生，病毒在其内复制，成为细胞毒作用的靶细胞。肠腺的肠上皮细胞对病毒十分易感，这些细胞感染后失去绒毛尖，无吸收能力，因而导致腹泻。 3.流行病学

鸡胚成纤维细胞的制作及培养

鸡胚成纤维细胞的制作及培养 鸡胚成纤维细胞培养 1、准备:取各种已消毒的培养用品置于净化台面，紫外线消毒20分钟。开始工作前先洗手、 75%酒精擦拭手至肘部。 2、布局:点燃酒精灯，安装吸管帽。 3、选胚:取9-10日龄鸡胚，(注:鸡胚日龄越小，形成细胞活力越好，但产量较低)用新 洁尔灭消毒蛋壳10分钟后放净化台。用碘酒、酒精消毒蛋壳。用镊子打开气室。 4、用另一套镊子将壳膜打开将鸡胚夹起去头、爪、眼，放灭菌生理盐水中。 5、把组织块置于烧杯中，用Hanks液漂洗2~3次，去除血污;如怀疑组织可能污染，可先 置于含有青链霉素的混合液中30~60分钟。 6、剪切:用眼科剪把组织切成1~2毫米大小的块，以便于消化。 7、处理组织:将已剪碎的组织碎片倒入一个带玻璃珠的灭菌三角瓶中，其中加入0.25%的 胰酶，10个胚约7ml，或加组织消化液，一个胚1ml(组织消化液以及胰酶的配置见微 生物指导)结扎瓶口或塞以胶塞。 8、消化:将其置入37?水浴箱中或用恒温水浴，消化中应不停摇动，如用电磁恒温搅拌器 消化更好。消化时间依组织块的大小和组织的硬度而定。消化10,15分钟。一般约12

分钟。视鸡胚日龄大小而定。越小消化时间越短。见组织松软即可。一般不可消化时间 太长否则容易导致细胞活力不足。 9、分离:在消化过程中见消化液发混浊时，可用吸管吸出少许消化液在镜下观察，如组织 已分散成细胞团或单个细胞，立即终止消化，加入0.5,的含5,犊牛血清双抗的的水 解乳蛋白Hank，s液少许。(制法见微生物试验实习指导)，用力震摇，或用吸管吹打。 使细胞分散，脱落。然后用纱布过滤或随即通过适宜不锈钢筛，滤掉尚未充分消化开的 组织块。低速(500~1000转/分)离心消化液5分钟，吸出上清(可以不离心吸掉上清)， 加入适量含有血清的培养液。 10、计数:用计数板计数，如细胞悬液细胞密度过大，再补加培养液调整后，分装入培 养瓶中。对大多数细胞来说，pH要求在7.2~7.4范围，培养液呈微红色，如颜色偏黄， 说明液体变酸，可用NaHCO调整。分装在细胞培养瓶中。视细胞多少而定加入培养基。3 培养基为0.5,的含5,犊牛血清双抗的的水解乳蛋白Hank，s液. 11、将其置入co2细胞培养箱中，37度。瓶口需用纱布棉塞或螺旋帽堵塞，纱布塞易生霉菌，每次换液时需要换新塞。培养24小时进行观察。一般在24,48小时可形成单

雏番鸭细小病毒

雏番鸭细小病毒 又名番鸭喘泻病，俗称三周病。雏番鸭细小病毒（MPV），无囊膜，球形，单股DNA 病毒。对酸、热等灭活因子有很强的抵抗力，对紫外线照射敏感。病毒存在于肝、脾、肾、胰等哭官和肠道中。 流行特点 自然感染只有番鸭，2～4周龄雏番鸭多发病，尤以10日龄左右雏番鸭发病最多。发病率27～62，病死率22～50%。其他禽类未见病例报道。本病呈地方流行性。病鸭和带毒鸭是传染源。成年番鸭感染后不发病，但排毒；可垂直污染种蛋，把病毒传给刚出壳的雏番鸭，孵坊成为传播媒介；随粪便污染饲料、饮水、工具等而水平传播。主要经消化道传染。以秋冬季多见该病。 主要症状 潜伏期4～16天，病程2-7天。 最急性：出壳后6天内的雏番鸭，多数见倒地即死。偶见羽毛蓬松，临死前两脚乱划，头颈向一侧扭弯。发病数约4～6%. 急性：见于7～14日龄雏番鸭。表现精神萎顿，厌食羽毛蓬松，翅下垂，尾端向下弯曲，脚软不走，离群；腹泻，排淡绿色或灰白色稀粪，混有粘膜，并附着肛门四周；张口喘气，喙端发绀，常蹲伏。死前倒地抽搐，衰竭而死。病程2～4天。 亚急性：由急性转来，或日龄较大的雏番鸭。表现精神萎顿，喜蹲伏，脚软少动，排黄绿或灰白色稀粪，并附着肛门四周。病程5～7天，死亡少，病愈番鸭颈部、羽部脱毛，生长受阻成僵鸭。 剖检特征 全身呈败血现象。大部分病死鸭肛门周围有拉稀粘附，泄殖腔扩张，外翻。十二指肠前段有多量胆汁，全小肠呈卡他炎症，粘膜表面有大量出血点，或有粘膜脱落，或有炎性涌出物；有的病例肠粘膜上附着散在的纤维素性凝块，呈黄绿色或暗绿色；盲肠和直肠粘膜也有出血点。胰脏苍白，表面有数量不等的针头大灰白色坏死点，心脏变圆，心肌松弛。肝、脾、肾、胰稍肿大，表面散布针尖大灰白色病灶。 诊断 根据本病的流行特点、临床症状病变可以作出初步诊断。必要时采病鸭的肝、脾、胰等组织和病初期及恢复期双份血清送实验室作病毒分离，鉴定及血清学实验确诊。在临诊中要注意本病常与雏番鸭小鹅瘟、病毒性肝炎和鸭疫里氏杆菌病及与它们的混合感染进行区别诊断。 预防方法 1、严格执行兽医卫生防疫消毒制度，认真做好孵坊和育雏室清洁卫生消毒工作是防治本病的一项重要措施。 2、（1）种番鸭的主动免疫种番鸭在开产前15天左右用1:100稀释的鹅胚化或番鸭胚化种番鸭弱毒苗1毫升皮下或肌肉注射，4个月后再加强免疫一次。 （2）雏番鸭的主动免疫未经免疫的种番鸭群、或免疫4个月以上未作加强免疫的种番鸭群的种蛋卵化的雏番鸭群，在出壳48小时内应用1:50-1:100稀释的鹅胚化或番鸭胚化雏番鸭弱毒疫苗或细胞弱毒疫苗进行免疫，每羽皮下注射0.1毫升+1L-2 800羽/瓶，分开稀释，混合注射，免疫后7天内严格隔离饲养。 3、本病无特效的治疗药物，仅依靠被动免疫获得一定的保护。在本病流行区域，或已被本病毒污染的孵坊，雏番鸭出壳后应立即皮下注射高免血清或卵黄抗体，每羽0.5毫升其保护率可达95%左右。对已经感染发病率雏番鸭的同群未病的雏番鸭，每只皮下注射0.8-1.0

犬细小病毒病

犬细小病毒病 犬细小病毒病(Canine parvovirus infection)又称犬传染性出血性肠炎，是由犬细小病毒(canine parvovirus，CPV)引起的犬的一种急性传染病。临诊特征是剧烈呕吐、出血性肠炎、血性水样便、脱水、白细胞显著减少和心肌炎。可分为肠炎型和心肌炎型，肠炎型以小肠出血性坏死性炎为特征，心肌炎型则表现为急性非化脓性心肌炎。 1977年，Eugster和Naira在美国通过电镜在患出血性腹泻犬的粪便中首先发现了细小病毒粒子。1978年，McCandlish应用犬肾细胞分离了细小病毒。 我国于1982年由中国人民解放军兽医大学首次分离出犬细小病毒，随后本病在东北、华北和西南等地区的警犬和良种犬中陆续发生和蔓延，并已分离获得多株病毒，研究报道逐渐增多。世界各地都有本病暴发的报道，给养犬业造成极大威胁，是危害犬群的最主要传染病之一。 【病原】犬细小病毒为细小病毒科(Parvoviridae)细小病毒属(Parvovirus)的一个成员，具有细小病毒属的典型形态和结构。病毒粒子细小，直径20～22nm，呈六角形或圆形，二十面体对称，无囊膜，衣壳由32个长为3～4nm的壳粒组成。在氯化铯中的浮密度是1．43g/cm3。基因组为单股DNA，5 233bp，分子质量为1．5×106u。 CPV病毒粒子有VPl、VP2和VP3共3种多肽，其中VP2为衣壳蛋白主要成分。 病毒在4℃和25℃都能凝集猪和恒河猴的红细胞，但不能凝集其他动物的红细胞。本病毒与猫泛白细胞减少症病毒(猫细小病毒)有较密切的抗原关系。后者的疫苗具有抗本病毒感染的效能。已报道发现了CPV抗原漂移的变异株，对猪和恒河猴的红细胞无血凝性，丢失了与猫泛白细胞减少症病毒的抗原相关性。 本病毒能在多种不同类型的细胞内增殖，如猫胎肾原代细胞，犬胎肾、脾、胸腺和肠管原代细胞，小貂肺细胞系(CCL-64)、浣熊唾液腺细胞及牛胎脾细胞等。目前常用MDCK和F81等传代细胞分离培养该病毒。在F81细胞上形成明显CPE，表现为细胞脱落、崩解和破碎。在MDCK细胞上CPE不明显，有时出现细胞圆缩，并常形成核内包涵体。 本病毒对外界环境具有较强的抵抗力。在室温下能存活3个月；在60℃能存活1h；pH3处理1h不影响其活力。对甲醛、β-丙内酯、羟胺和紫外线敏感，能使之灭活，但对氯仿、乙醚等有机溶剂则不敏感。 【流行病学】犬是该病的主要宿主，各种年龄和品种的犬均可感染。断乳前后的仔犬易感性最高，往往以同窝暴发为特征。3～4周龄犬感染后呈急性致死性心肌炎的较多；8～10周龄的犬则以肠炎为主，但心肌细胞有核内包涵体。小于4周龄的仔犬和大于5岁龄的老犬发病率低，一般分别为2％和16％。也曾有貉、狼、狐和浣熊感染发病的报道。 病犬是本病的主要传染源，其腹泻物、尿、唾液和呕吐物中均含有病毒。康复犬可能从粪、尿中长期排毒，污染饲料、饮水、垫草、食具和周围环境。健康犬因接触病犬或食人污染的食物而感染。临诊发病后的第4～7d粪便排毒量最高，9～14d后病毒含量趋于减少，但传染性可持续30d到8个月。经胎盘垂直感染的可能性也存在。本病主要经消化道传染。 新疫区在早期由于易感性高和犬群密集，大小犬只都感染，可导致暴发性流行，病死率较高。几个月后，则只有在小犬中发生新病例。本病无明显季节性。城市犬感染率较高。

鸡成纤维细胞传代培养

辽宁农业职业技术学院毕业论文 系别：生物技术系 专业名称：兽药生产与营销 论文题目：鸡胚成纤维细胞传代 学生姓名：郐永琳 指导教师：裴春生 评阅人： 成绩： 二O一O年六月二十日

评阅人评语： 评阅人签字： 年月日

目录 摘要 (1) 关键词 (1) 前言 (1) 1材料 (1) 1.1仪器 (1) 1.2种蛋 (1) 1.3犊牛血清 (1) 1.4溶液 (1) 2方法 (2) 2.1鸡胚的选择与孵化 (2) 2.2鸡胚原代细胞制备 (2) 2.3细胞传代 (4) 3结果与分析 (4) 4讨论 (4) 4.1温度 (4) 4.2P H (5) 4.3气体 (5) 4.4细胞接种量 (5) 4.5无菌条件 (5) 5结论 (5) 参考文献 (6) 致谢 (6)

鸡胚成纤维细胞传代 摘要：采用10日龄SPF鸡胚，进行消化，制备原代细胞，当细胞长成良好单层时，按1:2比例进行细胞传代，找出鸡胚细胞传代方法和情况。其结果是：按本实验室方法进行鸡胚传代，传至20代以上细胞形态没有发成变化，细胞生长良好。细胞数量大大增加。为病毒的研究和疫苗生产提供条件。 关键词：鸡胚；传代；生长特性 前言 细胞培养的方法是将机体的各种组织从机体中取出，经各种酶（常用胰蛋白酶）、螯合剂（常用EDTA）或机械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖。细胞在培养瓶长成致密单成后，已基本饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，就必须传代（再培养）。也是将细胞保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种操作的必经过程，在这个过程中可以掌握其操作过程又能观察到细胞的生长情况。 1 材料 1.1 仪器 培养箱、培养瓶、玻璃漏斗、吸管、移液管、纱布、水浴锅、手术剪、镊子、培养皿、烧杯、瓶塞、培养盘、蛋托、超净工作台、显微镜、三角烧杯、95%酒精、75%酒精棉、碘酒棉、废液缸等。 1.2 种蛋 SPF种蛋，由北京梅里亚维通实验动物技术有限公司提供。 1.3 犊牛血清 多用胎牛或犊牛血清。由颈动脉无菌放血。采血前先向瓶内加些等渗盐溶液湿润瓶避，采血后置室温或37℃温箱内待血液完全凝固后，有灭菌玻棒将血块自瓶壁分离。随后再置室温或4℃冰箱内一天，即可吸取血清，如有少量红细胞可离心沉淀除去。经滤过除菌分装，置-20℃冻存，使用前56℃水浴中灭活30min。 1.4 溶液 1.4.1 Hank，s液NaCl16g、Na2HPO40.304g、KCl 0.8g、KH2PO40.12g、MgSO40.4g、C6H12O6 2g、CaCl20.28g、酚红2mL、水解乳蛋白10g、加蒸馏水至2000mL高压灭菌116℃30min。 1.4.2 酚红苯酚红1g、NaOH0.12g加蒸馏水至200mL。