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Ambion公司 mMESSAGE mMACHINE

USER GUIDE

mMESSAGE mMACHINE? Kit Publication Part Number1340M Rev. F

Revision Date November 2011

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TRADEMARKS

The trademarks mentioned herein are the property of Life Technologies Corporation or their respective owners.

Part Number 1340M Rev. F

November 2011

Contents

mMESSAGE mMACHINE ? Kit User Guide About This Guide . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5

Purpose . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5

User attention words . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5

■mMESSAGE mMACHINE ? Kit . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 7

Introduction . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 7

Background . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 7

Materials Provided with the Kit . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8

mMESSAGE mMACHINE ? Kit Procedure . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 9

Preparation of Template DNA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 9

Procedure Overview . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 11

Capped Transcription Reaction Assembly . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 12

Recovery of the RNA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 13

Quantitation of Reaction Products . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 14

Troubleshooting . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 16

Use of the Control Template . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 16

Troubleshooting Low Yield . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 17

Multiple Reaction Products, Transcripts of the Wrong Size . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 19

■APPENDIX A Materials Not Provided with the Kit . . . . . . . . . . . . . . . . . . 21

Materials Not Provided with the Kit . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 21

Related Products Available from Life Technologies . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 21

■APPENDIX B Recipes . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 23

Miniprep for Isolating Transcription-quality Plasmid DNA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 24

■APPENDIX C Additional Procedures . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 27

Analysis of Transcription Products by Gel Electrophoresis . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 27

Optimizing Yield of Long Transcripts . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 28

Optimizing Yield of Short Transcripts . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 29

Spin Column Preparation and Use . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 30

Contents

■APPENDIX D Safety . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 31 General Safety . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 31

Chemical safety . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 31

Biological hazard safety . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 32

Bibliography . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 33

Documentation and Support . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 35

Obtaining SDSs . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 35

Obtaining support . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 35 4mMESSAGE mMACHINE? Kit User Guide

mMESSAGE mMACHINE ? Kit User Guide About This Guide WARNING!

ABBREVIATED SAFETY ALERTS. Hazard symbols and hazard

types specified in procedures may be abbreviated in this document. For the

complete safety information, see the “Safety” appendix in this document.IMPORTANT!

Before using this product, read and understand the information the

“Safety” appendix in this document.

Purpose

The mMESSAGE mMACHINE ? Kit User Guide provides detailed procedures, reference

information and troubleshooting for the kit.

User attention words

Five user attention words may appear in this document. Each word implies a

particular level of observation or action as described below:

Note:Provides information that may be of interest or help but is not critical to the use

of the product.

IMPORTANT!Provides information that is necessary for proper instrument operation

or accurate chemistry kit use.

CAUTION!Indicates a potentially hazardous situation that, if not avoided, may

result in minor or moderate injury. It may also be used to alert against unsafe

practices.

WARNING!Indicates a potentially hazardous situation that, if not avoided,

could result in death or serious injury.

DANGER!Indicates an imminently hazardous situation that, if not avoided,

will result in death or serious injury.

About This Guide

User attention words

Except for IMPORTANTs, the safety alert words in user documentation appear with an

open triangle figure that contains a hazard symbol. These hazard symbols are identical

to the hazard symbols that are affixed to the instrument. See the “Safety” appendix for

descriptions of the symbols.

6mMESSAGE mMACHINE? Kit User Guide

mMESSAGE mMACHINE? Kit

Introduction

Background mMESSAGE mMACHINE? Kits are designed for the in vitro synthesis of large

amounts of capped RNA. Capped RNA mimics most eukaryotic mRNAs found in

vivo, because it has a 7-methyl guanosine cap structure at the 5'end. mMESSAGE

mMACHINE Kit reactions include cap analog [m7G(5')ppp(5')G] in an ultra high-yield

transcription reaction. The cap analog is incorporated only as the first or 5' terminal G

of the transcript because its structure precludes its incorporation at any other position

in the RNA molecule. mMESSAGE mMACHINE Kits have a simplified reaction

format in which all four ribonucleotides and cap analog are mixed in a single solution.

The cap analog:GTP ratio of this solution is 4:1, which is optimal for maximizing both

RNA yield and the proportion of capped transcripts. mMESSAGE mMACHINE Kits

are ideal for the routine synthesis of capped RNAs for oocyte microinjection, in vitro

translation, transfection and other applications.

The high yields are achieved by optimizing reaction conditions for RNA synthesis in

the presence of high nucleotide concentrations. In addition, the RNA synthesized is

protected from degradation by any contaminating ribonucleases that may be present

with RNase inhibitor—a component of the Enzyme Mix. The mMESSAGE

mMACHINE Kit contains all the buffers and reagents necessary for 25transcription

reactions. Using the control template supplied with the kit (Xenopus elongation factor

1α, pTRI Xef), each mMESSAGE mMACHINE reaction will yield approximately

20–30μg of RNA using T3 or T7 RNA polymerase, or about 15–25μg RNA using SP6

RNA polymerase.

7 mMESSAGE mMACHINE? Kit User Guide

mMESSAGE mMACHINE? Kit Introduction

Materials Provided with the Kit The mMESSAGE mMACHINE Kit should be stored in a non-frost-free freezer. Keep all reagents on ice while using the kit; the nucleotides and enzymes are especially labile.

Reagents are included for 25 mMESSAGE mMACHINE reactions.

Amount Component Storage

1.75mL Nuclease-free Water any temp??Store Nuclease-free Water at –20°C, 4°C or room temp.

50μL Enzyme Mix (SP6, T7, or T3)?:

Buffered 50% glycerol containing RNA polymerase, RNase

Inhibitor, and other components

–20°C

50μL10X Reaction Buffer (SP6, T7, or T3)?

salts, buffer, dithiothreitol, and other ingredients

?Components are specifically calibrated for each lot and kit type. Mixing components from different lots, or from kits for different enzymes (SP6, T7, T3) will compromise RNA yield.

–20°C

250μL2X NTP/CAP (SP6, T7, or T3)?: a neutralized buffered solution

containing:

–20°C

100μL GTP? 20mM in SP6 Kits; 30mM in T3 and T7 Kits–20°C 100μL TURBO DNase (2U/μL)–20°C 10μL pTRI-Xef, 0.5mg/mL (Control Template)–20°C 1mL Ammonium Acetate Stop Solution

5M ammonium acetate, 100mM EDTA

–20°C

1.4mL Lithium Chloride Precipitation Solution

7.5M lithium chloride, 50mM EDTA

–20°C

1.4mL Gel Loading Buffer II: a 1–2X gel loading solution for TBE

polyacrylamide and agarose gels

95%formamide

0.025%xylene cyanol, 0.025% bromophenol blue

18 mM EDTA

0.025% SDS

–20°C

SP6 Kits T7 and T3 Kits

ATP10mM15mM

CTP10mM15mM

UTP10mM15mM

GTP2mM3mM

8mMESSAGE mMACHINE? Kit User Guide

mMESSAGE mMACHINE ? Kit User Guide mMESSAGE mMACHINE ? Kit

mMESSAGE mMACHINE ? Kit Procedure

Preparation of

Template DNA Linearized plasmid DNA, and PCR products that contain an RNA polymerase

promoter site can be used as templates for in vitro transcription with the mMESSAGE

mMACHINE Kit. In general, any DNA with a promoter site, that is pure enough to be

easily digested with restriction enzymes can be used for in vitro transcription.

Figure 1Phage Polymerase Promoters: Minimal Sequence Requirements

Template size

The mMESSAGE mMACHINE Kit is designed to function best with templates that

code for RNA transcripts in the 0.3 to 5kb range. The kit can be used to produce

shorter, or longer RNA, but modify the reaction as described in section “Optimizing

Yield of Short Transcripts” on page 29.

Orientation

If sense RNA is needed, it is important to transcribe using the RNA polymerase

corresponding to the phage promoter at the 5', or amino-terminal side of the coding

region of the protein (using promoter 1 in the diagram below). If the template consists

of a plasmid, it should be linearized in the polylinker at the opposite (3' or carboxy-

terminal side) of the protein-coding region.

Antisense (mRNA-complementary) transcripts will be synthesized if the RNA

polymerase corresponding to the RNA phage promoter at the 3', or carboxy-terminal

side of the coding region of the protein is used (using promoter 2 in the diagram below).TAATACGACTCACTATA G G

ATTTAGGTGACACTATA

AATTAACCCTCACTAAA G G –17

+6+1

+1+1T7

SP6T3The +1 base (in bold) is the first base incorporated into RNA during transcription. The underline shows the minimum promoter sequence needed for efficient transcription.5'

3'3'5'

promoter 1promoter 2Transcription using the RNA polymerase corresponding to promoter 1 will

make sense RNA (the same sequence as the mRNA). If the RNA polymerase for

promoter 2 is used, antisense RNA will be transcribed.

ATG............AAAAAA

mMESSAGE mMACHINE? Kit

mMESSAGE mMACHINE? Kit Procedure

Plasmid Templates

DNA should be relatively free of contaminating proteins and RNA. We observe the

greatest yields with very clean template preparations. Most commercially available

plasmid preparation systems yield DNA that works well in the mMESSAGE

mMACHINE Kit. Otherwise, a DNA miniprep procedure that generally yields high

quality template is presented in section“Miniprep for Isolating Transcription-quality

Plasmid DNA” on page 24.

Linearization

Plasmid DNA must be linearized with a restriction enzyme downstream of the insert

to be transcribed. Circular plasmid templates will generate extremely long,

heterogeneous RNA transcripts because RNA polymerases are very processive. It is

generally worthwhile to examine the linearized template DNA on a gel to confirm that

cleavage is complete. Since initiation of transcription is one of the limiting steps of in

vitro transcription reactions, even a small amount of circular plasmid in a template

prep will generate a large proportion of transcript.

Although we routinely use all types of restriction enzymes, there has been one report

of low level transcription from the inappropriate template strand in plasmids cut with

restriction enzymes leaving 3' overhanging ends (produced by Kpn I, Pst I, etc.;

Schendorn and Mierindorf, 1985).

After linearization

Terminate the restriction digest by adding the following:

?1/20th volume 0.5M EDTA

?1/10th volume of 3M Na acetate or5M NH4acetate

?2volumes of ethanol

Mix well and chill at –20°C for at least 15min. Then pellet the DNA for 15min in a

microcentrifuge at top speed. Remove the supernatant, re-spin the tube for a few

seconds, and remove the residual fluid with a very fine-tipped pipet. Resuspend in

dH2O or TE buffer at a concentration of 0.5–1μg/μL.

Proteinase K treatment

Note that DNA from some miniprep procedures may be contaminated with residual

RNase A. Also, restriction enzymes occasionally introduce RNase or other inhibitors of

transcription. When transcription from a template is suboptimal, it is often helpful to

treat the template DNA with proteinase K (100–200μg/mL) and 0.5%SDS for 30min

at 50°C, follow this with phenol/chloroform extraction (using an equal volume) and

ethanol precipitation.

PCR templates

DNA generated by PCR can be transcribed directly from the PCR provided it contains

an RNA Polymerase promoter upstream of the sequence to be transcribed. PCR

products should be examined on an agarose gel before use as a template in

mMESSAGE mMACHINE to estimate concentration, and to verify that the products

are unique and the expected size.

10mMESSAGE mMACHINE? Kit User Guide

mMESSAGE mMACHINE ? Kit User Guide mMESSAGE mMACHINE ? Kit

mMESSAGE mMACHINE ? Kit Procedure

Procedure

Overview Figure 2Transcription Reaction Assembly and Incubation Preparation of Template DNA

Capped Transcription Reaction Assembly

1. “Thaw the frozen reagents” on page 12

2. “Assemble transcription reaction at room temp” on page 12

3. “Mix thoroughly” on page 12

4. “Incubate at 37°C, 1hr” on page 12

5. “(optional) Add 1μL TURBO DNase, mix well and incubate 15min at 37°C” on page 13

Recovery of the RNA

1. “MEGAclear? Kit” on page 13

2. “Lithium chloride precipitation” on page 13

3. “Spin column chromatography” on page 13

“Phenol:chloroform extraction and isopropanol precipitation” on page 14

mMESSAGE mMACHINE? Kit mMESSAGE mMACHINE? Kit Procedure

Capped Transcription Reaction Assembly 1.Thaw the frozen reagents

Place the RNA Polymerase Enzyme Mix on ice, it is stored in glycerol and will not be frozen at –20°C.

Vortex the 10X Reaction Buffer and the 2X NTP/CAP until they are completely in solution. Once thawed, store the ribonucleotides (2X NTP/CAP) on ice, but keep the 10X Reaction Buffer at room temperature while assembling the reaction.

All reagents should be microfuged briefly before opening to prevent loss and/or contamination of material that may be present around the rim of the tube.

2.Assemble transcription reaction at room temp

The spermidine in the 10X Reaction Buffer can coprecipitate the template DNA if the reaction is assembled on ice.

Add the 10X Reaction Buffer after the water and the ribonucleotides are already in the tube.

The following amounts are for a single 20μL reaction. Reactions may be scaled up or down if desired.

IMPORTANT!The following reaction setup is recommended when the RNA

produced will be 300bases to 5kb in length. For transcripts longer or shorter than this, consider the suggestions in sections“Optimizing Yield of Long Transcripts”

on page 28 and“Optimizing Yield of Short Transcripts” on page 29, respectively.

3.Mix thoroughly

Gently flick the tube or pipette the mixture up and down gently, and then

microfuge tube briefly to collect the reaction mixture at the bottom of the tube. 4.Incubate at 37°C, 1hr

Typically, 80% yield is achieved after a 1hr incubation. For maximum yield, we recommend a 2hr incubation. Since SP6 reactions are somewhat slower than T3 and T7 reactions, they especially may benefit from the second hour of incubation.

A second hour of incubation is recommended for synthesis of <300base

transcripts and for inefficiently transcribed templates. (See sections“Optimizing Yield of Long Transcripts” on page 28 and“Optimizing Yield of Short

Transcripts” on page 29 for optimizing yield from templates coding RNA outside the 0.3–5kb range.

Amount Component

to 20μL Nuclease-free Water

10μL2X NTP/CAP

2μL10X Reaction Buffer

(1μL)(optional) [α-32P]UTP as a tracer

0.1–1μg linear template DNA?

?Use 0.1–0.2μg PCR-product template or ~1μg linearized plasmid template.

2μL Enzyme Mix

12mMESSAGE mMACHINE? Kit User Guide

mMESSAGE mMACHINE? Kit

mMESSAGE mMACHINE? Kit Procedure

If the reaction is trace-labeled:

After the incubation (before or after TURBO DNase treatment), remove an aliquot of trace-radiolabeled reactions to assess yield by TCA precipitation (see step5., “Quantitation by trace radiolabeling” on page 15).

5.(optional) Add 1μL TURBO DNase, mix well and incubate 15min at 37°C

This DNase treatment removes the template DNA. For many applications it may not be necessary because the template DNA will be present at a very low

concentration relative to the RNA.

a.Add 1μL TURBO DNase, and mix well.

b.Incubate at 37°C for 15min.

Recovery of the RNA The degree of purification required after the transcription reaction depends on what will be done with the RNA. Four different methods follow, choose one or more according to your application and resources.

1.MEGAclear? Kit

The MEGAclear Kit was developed specifically for purifying RNA from high

yield in vitro transcription reactions. The quick and simple procedure removes nucleotides, short oligonucleotides, proteins, and salts from RNA. The RNA

recovered can be used for any application that requires high purity RNA.

2.Lithium chloride precipitation

Lithium Chloride (LiCl) precipitation is a convenient and effective way to remove unincorporated nucleotides and most proteins. Lithium chloride precipitation, however, does not precipitate transfer RNA and may not efficiently precipitate RNAs smaller than 300nucleotides. Also, the concentration of RNA should be at least 0.1 μg/μL to assure efficient precipitation. To precipitate from mMESSAGE mMACHINE reactions that are thought to have relatively low yields of RNA, do not dilute the transcription reaction with water prior to adding the LiCl

Precipitation Solution the first substep below.

a.Stop the reaction and precipitate the RNA by adding 30μL Nuclease-free

Water and 30μL LiCl Precipitation Solution.

b.Mix thoroughly. Chill for ≥30min at –20°C.

c.Centrifuge at 4°C for 15min at maximum speed to pellet the RNA.

d.Carefully remove the supernatant. Wash the pellet once with ~1mL 70%

ethanol, and re-centrifuge to maximize removal of unincorporated

nucleotides.

e.Carefully remove the 70% ethanol, and resuspend the RNA in a solution or

buffer? appropriate for your application. Determine the RNA concentration

and store frozen at –20°C or –70°C.

3.Spin column chromatography

Spin columns will remove unincorporated nucleotides, including unincorporated cap analog that may inhibit in vitro translation.

?Life Technologies offers several products for RNA storage, these include:

Nuclease-free Water (not DEPC-treated): Part nos.AM9930–AM9939

THE RNA Storage Solution: Part nos.AM7000, AM7001

TE Buffer: Part nos.AM9860, AM9861

0.1mM EDTA: Part no.AM9912

mMESSAGE mMACHINE? Kit User Guide

mMESSAGE mMACHINE? Kit

mMESSAGE mMACHINE? Kit Procedure

Prepared spin columns such as NucAway? Spin Columns can be used by

following the manufacturer’s instructions. Alternatively, instructions for

preparing spin columns are given in section“Spin Column Preparation and Use”

on page 30.

4.Phenol:chloroform extraction and isopropanol precipitation

This is the most rigorous method for purifying transcripts. It will remove all

enzyme and most of the free nucleotides from mMESSAGE mMACHINE Kit

reactions. Since the RNA is precipitated, this method can also be used for buffer

exchange.

a.Add 115μL Nuclease-free Water and 15μL Ammonium Acetate Stop

Solution, and mix thoroughly.

b.Extract with an equal volume of phenol/chloroform (it can be water-

saturated, buffer-saturated, or acidic), and then with an equal volume of

chloroform. Recover aqueous phase and transfer to new tube.

c.Precipitate the RNA by adding 1volume of isopropanol and mixing well.

d.Chill the mixture for at least 15min at –20°C. Centrifuge at 4°C for 15min at

maximum speed to pellet the RNA. Carefully remove the supernatant

solution and resuspend the RNA in a solution or buffer? appropriate for

your application.

e.Store frozen at –20°C or –70°C.

Quantitation of Reaction Products 1.Quantitation by UV light absorbance

Reading the A260 of a diluted aliquot of the reaction is clearly the simplest way to determine yield, but any unincorporated nucleotides and/or template DNA in the mixture will contribute to the reading. Typically, a 1:100 dilution of an aliquot of a mMESSAGE mMACHINE reaction will give an absorbance reading in the linear range of a spectrophotometer.

For single-stranded RNA, 1 A260 unit corresponds to 40μg/mL, so the RNA yield can be calculated as follows:

A260 x dilution factor x 40 = μg/mL RNA

2.Assessing RNA yield with RiboGreen?

If you have a fluorometer, or a fluorescence microplate reader, Molecular Probes’ RiboGreen? fluorescence-based assay for RNA quantitation is a convenient and sensitive way to measure RNA concentration. Follow the manufacturer’s

instructions for using RiboGreen.

3.Quantitation by ethidium bromide fluorescence

The intensity of ethidium bromide staining can be used to get a rough estimation of the RNA yield.

Ethidium bromide spot assay

If unincorporated nucleotides have been removed, an ethidium bromide spot assay can be used to quantitate RNA concentration. Make a standard curve with several 2-fold dilutions of an RNA solution of known concentration. Start at about 80ng/μL, and go down to about 1.25ng/μL. Make a few dilutions of the unknown RNA, and add ethidium bromide to 1ng/μL to each dilution of both RNAs. Spot 2μL of the standard curve RNA samples and the unknown RNA dilutions onto

14mMESSAGE mMACHINE? Kit User Guide

mMESSAGE mMACHINE? Kit

mMESSAGE mMACHINE? Kit Procedure

plastic wrap placed on a UV transilluminator. Compare the fluorescence of the

RNAs to estimate the concentration of the unknown RNA sample. Make sure that

the sample dilutions are in the linear range of ethidium bromide fluorescence.

This assay will detect as little as 5ng of RNA with about a 2-fold error.

Denaturing gel electrophoresis

If unincorporated nucleotides have not been removed from the reaction, an

aliquot of the mMESSAGE mMACHINE reaction should be run on a denaturing

agarose or acrylamide gel alongside an aliquot of an RNA of known

concentration. See section“Additional Procedures” on page 27 for instructions on

running gels. Stain the samples with ethidium bromide, and simply compare the

intensity of the unknown sample to the known RNA to estimate its concentration.

4.Agilent bioanalyzer and RNA LabChip? Kits

RNA can be evaluated on an Agilent 2100 bioanalyzer using one of their RNA

LabChip Kits to get an idea of what percentage of the transcription products are

full-length. Follow the manufacturer’s instructions for using the bioanalyzer and

the RNA LabChip Kit.

5.Quantitation by trace radiolabeling

TCA precipitation

If a trace amount of radiolabel was included in the mMESSAGE mMACHINE reaction,

it can be used to determine yield. First precipitate with TCA to determine the

proportion of radiolabel that was incorporated into RNA. (TCA will precipitate nucleic

acids as small as 18nt.)

a.Dilute 1μL of the completed mMESSAGE mMACHINE reaction with 1μL

TE Buffer in a nuclease-free 1.5mL microfuge tube, and vortex thoroughly to

ensure that the newly synthesized RNA is completely solubilized.

b.Add 150μL of carrier DNA or RNA (1mg/mL) (Sheared Salmon Sperm

DNA Part no.AM9680 can be used for this) to the diluted reaction products,

and mix thoroughly.

c.Transfer 50μL of the RNA + carrier nucleic acid mixture to aqueous

scintillation cocktail and count in a scintillation counter. This will measure

the total amount of radiolabel present in the reaction mixture

(unincorporated and incorporated counts).

d.Transfer another 50μL of the RNA + carrier nucleic acid mixture to a

12x75mm glass tube, and add 2mL of cold 10%TCA (trichloroacetic acid).

Mix thoroughly and place on ice for 10min. This will precipitate nucleic

acids, but not free nucleotides.

e.Collect the precipitate via vacuum filtration through a Whatman GF/C glass

fiber filter (or its equivalent).

f.Rinse the tube twice with 1mL of 10% TCA and then rinse once with 3–5mL

of 95% ethanol. Pass each of the rinses through the GF/C filter.

g.Place the filter in a scintillation vial, add aqueous scintillation cocktail, and

count in a scintillation counter. This will give the TCA precipitated counts

(radiolabel that was incorporated into RNA).

h.Divide the cpm in Step g. by the cpm in Step c. to determine the fraction of

label incorporated into RNA (multiply by 100 for percent incorporation).

15 mMESSAGE mMACHINE? Kit User Guide

mMESSAGE mMACHINE? Kit

Troubleshooting

Calculation of yield

Once the percent incorporation of radiolabel is known, it can be used to calculate the

mass yield of RNA transcribed in the mMESSAGE mMACHINE reaction. The

concentration of GTP limits the amount of RNA that can be synthesized. For any tracer

other than labeled GTP (e.g. [α-32P] UTP), each 1% incorporation corresponds to about

2μg of RNA synthesized in a T7 or T3 reaction. For SP6 Kits, each 1% incorporation

corresponds to about 1.3μg of RNA synthesized.

In a T7 or T3 reaction, if all four nucleotides are incorporated equally, 39.6μg of RNA

will be produced if all of the 1.5mM of GTP is incorporated into RNA (the sum of the

molecular masses of the 4nucleotides in RNA is about 1320). Since the ratio of cap

analog to GTP is 4:1, this represents a maximal theoretical incorporation of 20% of the

label.

The standard SP6 mMESSAGE mMACHINE reaction contains 1.0mM GTP, so when

that value is substituted in the above equation the maximum theoretical yield for SP6

mMESSAGE mMACHINE reactions is 26.4μg.

Troubleshooting

Use of the Control Template The pTRI-Xef control template is a linearized TRIPLEscript plasmid containing the 1.85kb Xenopus elongation factor 1α gene under the transcriptional control of tandem SP6, T7, and T3 promoters (pTRI-Xef1). Any one of the three RNA polymerases can be used to synthesize the control RNA. When transcribed with the following RNA polymerases, sense transcripts of the indicated length are produced from this template:

These transcripts will produce a 50.2kD protein when translated.

1.Reaction setup

Use 2μL (1μg) of pTRI-Xef in a standard mMESSAGE mMACHINE reaction as described in section“Capped Transcription Reaction Assembly” on page 12.

TCA ppt cpm

Total cpm

% incorporation

100

1% incorporation = 2μg/RNA

For example: if % incorp. = 10%

10 x 2μg = 20μg RNA

1.5mM

106

39.6x10–6g = 39.6μg

1320g

1000mM

20μL39.6x103g

109

x x==

Enzyme Transcript Size

SP6 1.92kb

T7 1.89kb

T3 1.86kb

16mMESSAGE mMACHINE? Kit User Guide

mMESSAGE mMACHINE? Kit

Troubleshooting

2.Expected yield from the control reaction

The yield from the control reaction for T7 and T3 Kits should be 20–30μg of RNA, and 15–25μg with the SP6 Kits. If a [32P]NTP was added to the transcription reaction as a tracer, approximately 15% of the radiolabel should be incorporated.

3.What to do if the control reaction doesn’t work as expected

If the yield of RNA from the control reaction is low, something may be wrong either with the procedure or the kit, or the quantitation is in error.

a.Double check the RNA quantitation

To confirm that the quantitation is correct, verify the yield by an independent method. For example if TCA precipitation was used to assess yield, try also

running an aliquot of the reaction on an agarose gel.

b.Try the positive control reaction again

If the yield is indeed low by two different measurements, there may be a

technical problem with the way the kit is being used. For example, the

spermidine in the 10X Reaction Buffer may cause precipitation of the

template DNA if it is not diluted by the other ingredients prior to adding the DNA. (This is the reason that the water is added first.) Repeat the reaction,

following the procedure carefully. If things still don’t go well, contact

Technical Services for more ideas.

Troubleshooting Low Yield The amount of RNA synthesized in a standard 20μL mMESSAGE mMACHINE reaction should be 15–20μg and may exceed 30μg; however, there is a great deal of variation in yield from different templates. If the yield is low, the first step in troubleshooting the reaction is to use the pTRI-Xef control template in a standard mMESSAGE mMACHINE reaction.

1.Neither my template nor the control reaction works

Double check that you have followed the procedure accurately, and consider

trying the control reaction a second time. If the kit control still doesn’t work, it is an indication that something may be wrong with the kit, call our Technical

Support group for more ideas.

2.The control reaction works, but my template gives low yield

If the transcription reaction with your template generates full-length, intact RNA, but the reaction yield is significantly lower than the amount of RNA obtained with the pTRI-Xef control template, it is possible that contaminants in the DNA are inhibiting the RNA polymerase. A mixing experiment can help to differentiate between problems caused by inhibitors of transcription and problems caused by the sequence of a template. Include three reactions in the mixing experiment,

using the following DNA templates:

Assess the results of the mixing experiment by running 0.5–1μL of each

transcription reaction on a denaturing gel as described in section Appendix C, “Additional Procedures” on page 27.

1. 1μL pTRI-Xef control template

2.experimental DNA template (0.5μg

plasmid or 2–6μL PCR product)

3. a mixture of 1 and 2

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mMESSAGE mMACHINE? Kit

Troubleshooting

a.Transcription of the control template is inhibited by the presence of your

template. (See Figure 3.A)

Figure 3Possible outcomes of mixing experiment

1 – control template

2 – experimental template

3 – mixture of 1 and 2

123

This implies that inhibitors are present in your DNA template. Typical

inhibitors include residual SDS, salts, EDTA, and RNases. Proteinase K

treatment frequently improves template quality.

Treat template DNA with Proteinase K (100–200μg/mL) and SDS (0.5%) for

30min at 50°C, followed by phenol/chloroform extraction and ethanol

precipitation. Carry-over of SDS can be minimized by diluting the nucleic

acid several fold before ethanol precipitation, and excess salts and EDTA can

be removed by vigorously rinsing nucleic acid pellets with cold 70% ethanol

before resuspension.

b.Adding your template to the reaction with the control template does not

inhibit synthesis of the control RNA. (See Figure 3.B)

This result indicates that the problem may be inherent to your template.

i. Use a different polymerase for transcription if possible.

Templates differ in transcription efficiency depending on the initiation

efficiency of their promoter, the presence of internal termination signals, and

their length. If the problem is due to the first or second of these issues,

changing the RNA polymerase promoter used to transcribe the fragment

may alleviate the problem.

ii. Check the amount and quality of template

Another possibility is that the template quantitation is inaccurate. If

quantitation was based on UV absorbance and the DNA prep had

substantial amounts of RNA or chromosomal DNA, the amount of template

DNA may be substantially less than the calculated value.

Also, check an aliquot of the template DNA on an agarose gel to make sure it

is intact and that it is the expected size.

iii. Extend the reaction time

Another parameter that can be adjusted is reaction time. Extending the

standard 1hr incubation to 4–6hr or even overnight may improve yield.

18mMESSAGE mMACHINE? Kit User Guide

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Troubleshooting

Multiple Reaction Products, Transcripts of the Wrong Size 1.Reaction products produce a smear when run on a denaturing gel

If the RNA appears degraded (e.g. smeared), remove residual RNase from the DNA template preparation before in vitro transcription. Do this by digesting the DNA prep with proteinase K(100–200μg/mL) in the presence of 0.5% SDS for 30 min at 50°C, follow this with phenol/chloroform extraction. The RNase Inhibitor that is present in the transcription reaction, can only inactivate trace RNase

contamination. Large amounts of RNase contamination will compromise the size and amount of transcription products.

2.Reaction products run as more than one band, or as a single band smaller than

expected

a.Sample is not adequately denatured in the gel

If the amount of RNA produced is acceptable, but the size of the product is

unexpected, consider that the RNA may be running aberrantly due to

secondary structure. Sometimes the RNA will run as two distinct bands on a native agarose gel, but when the same RNA is run on a denaturing gel, it will migrate as a single band of the expected size.

b.Premature termination of transcription

If denaturing gel analysis shows the presence of multiple bands or of a single band smaller than the expected size, there may be problems with premature termination by the polymerase. Possible causes of this are sequences which

resemble the phage polymerase termination signals, stretches of a single

nucleotides, and GC-rich templates.

?Different phage polymerases recognize different termination signals, so using a different polymerase promoter may help.

?Termination at single polynucleotide stretches can sometimes be alleviated by decreasing the reaction temperature (Krieg, P.A. 1990). We

suggest testing 30°C, 20°C and 10°C. However, decreasing the reaction

temperature will also significantly decrease the yield of the reaction.

?There is a report that single-stranded binding (SSB) protein increased the transcription efficiency of a GC rich template (Aziz and Soreq, 1990).

3.Reaction products are larger than expected

a.Persistent secondary structure

mMESSAGE mMACHINE products occasionally run as 2bands; 1larger

than the expected size, and 1 at the expected size. This may occur with

transcripts from the pTRI-Xef control template, even when the RNA is

denatured during the electrophoresis. This phenomenon occurs because of

persistent secondary structure. To verify this, the band that migrates at the

expected size can be excised from the gel and run in a second denaturing gel.

If the RNA runs as a doublet in the second gel also, it is a good indication

that the larger band is simply an artifact of electrophoresis.

b.Circular template

Longer-than-expected transcription products will be seen if any of the

template molecules are circular. This is typically caused by incomplete

digestion of a plasmid template. Since the RNA polymerases are extremely

processive, even a small amount of circular template can produce a large

amount of RNA.

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20mMESSAGE mMACHINE? Kit User Guide

最全的央企集团旗下上市公司一览

《史上最全的央企集团旗下上市公司一览》 1 中国核工业集团公司:中核科技(000777)、东方锆业(002167) 2 中国核工业建设集团公司 3 中国航天科技集团公司:中国卫星(600118)、航天电子(600879)、航天机电(600151)、航天动力(600343)、中航光电(002179) 4 中国航天科工集团公司:航天电器(002025)、航天通信(600677)、航天长峰(600855)、航天科技(000901)、中兴通讯(000063)、航天信息(600271)、航天晨光(600501) 5 中国航空工业集团公司:中航飞机(000768)、中航机电(002013)、中航重机(600765)、贵航股份(600523)、深天马A(000050)、中航地产(000043)、飞亚达A(000026) 、哈飞股份(600038)、洪都航空(600316)、*ST东安(600178)、中航电子(600372)、中航动控(000738)南方食品(000716)、成发科技(600391)、中航动控(000738)、成飞集成(002190)、中航资本(600705) 6 中国船舶工业集团公司:中国船舶(600150)、*ST钢构(600072)、广船国际(600685) 7 中国船舶重工集团公司:风帆股份(600482)、鑫茂科技(000836)、乐普医疗(300003)、中国重工(601989) 8 中国兵器工业集团公司:中集集团(000039)华锦股份(000059)、光电股份(600184)、北方导航(600435)、北方创业(600967)、晋西车轴(600495)、凌云股份(600480)、北方国际(000065)、北方股份(600262) 9 中国兵器装备集团公司:长安汽车(000625)、中国嘉陵(600877)、天兴仪表(000710)、江铃汽车(000550)、湖南天雁(600698) 10 中国电子科技集团公司:沙河股份(000014) 、天通股份(600330)、华东电脑(600850)、四创电子(600990)、卫士通(002268)、太极股份(002368)、杰赛科技(002544) 11 中国石油天然气集团公司:中国石油(601857)、山煤国际(600546)、大庆华科(000985)、石油济柴(000617) 12 中国石油化工集团公司中国石化(600028)、上海石化(600688)、泰山石油(000554)、荣丰控股(000668)、*ST仪化(600871)、四川美丰(000731)、江钻股份(000852) 13 中国海洋石油总公司:海油工程(600583)、中海油服(601808) 14 中国国家电网公司:国电南瑞(600406)、置信电气(600517) 15 中国南方电网有限责任公司:文山电力(600995)

房地产营销策划总经理助理简历模板

房地产营销策划总经理助理简历模板个人基本简历姓名：*** 国籍：中国目前所在地：天河区民族：汉族户口所在地：湛江身材：160 cm kg 婚姻状况：未婚年龄：30 培训认证：诚信徽章：求职意向及工作经历人才类型：普通求职应聘职位：房地产：房地产策划、房地产营销与房地产开发、工作年限：8 职称：无职称求职类型：全职可到职日期：随时月薪要求：5000--8000 希望工作地区：广州个人工作经历：公司名称：起止年月：XX-05 ～ XX-02广州博兴物业管理有限公司公司性质：所属行业：担任职务：总经理助理工作描述：主要职责：完成博兴购物广场策划

所必需的市场调研、项目定位、招商策略工作。培训及指导所策划项目招商部门的员工，加深招商人员对项目的理解。在公司经营计划、招商策略、资本运作等方面向总经理提供具体的解决方案；跟踪公司经营目标达成情况，提供分析意见及改进建议；细化转达总经理向各部门安排的工作，并跟进其完成；根据总经理的安排，约见外部单位领导，接待来访公司的领导、客户或其它来客. 离职原因：公司名称：起止年月：XX-03 ～ XX-05北海永高房地产开发有限公司公司性质：所属行业：担任职务：策划经理工作描述：协助开展北海星海名城项目前期营销策划及制定项目营销总案，编制楼盘的整体营销方案，包括价格策略、市场推广、货量推销安排与统一执行，楼盘现场策划推广活动的组织开展，公司企业品牌活动的组织和实施，完成项目策划所必需的市场调研、项目定位、营销策略工作，并以书面的形式提交发展商确认。培训及指导所策划项目销售部门的员工，加深销售人员对项目的理解，提高成交额。协助销售经理完成佣金结算及收佣工作，维护公司利益，避免风险。协助总监建立和维护同发展商、利益相关

不看后悔日化线和专业线产品区别知识普及

不看后悔，日化线和专业线产品区别知识普及第一部分、护肤品的发展第二部分、关于专业线护肤品的介绍 1.什么是专业线护肤品 2.专业线护肤品和日化线的区别 3.推崇专业线护肤品不等推崇美容院第一部分、护肤品的发展史什么上溯到古埃及时代的东西我就不写了，GOOGLE一下大把，我只从原料、配方的角度讲一下。用偶们大家都很容易懂的词句哈~ 最早的护肤品基本上都是是纯粹物理保护性的护肤品。举个例子吧，都是类似于：蛤蜊油，甘油，绵羊油，蛇油等。就是油脂类（动物油，植物油，矿物油）产品，配方很单一简单，主要就是针对肌肤干燥和气候干燥，在肌肤表面覆盖上一层油，防止水分散发，起到保湿的作用，由于价格便宜，配方简单刺激也小，所以有些肌肤干燥的人至今仍然很喜欢它们。它们除了保湿，没有其他任何护肤作用，不会深入到肌肤深层。同时，因为是油脂类产品，所以容易引起毛孔堵塞，起痘痘，不适合油性混合性肌肤的人使用。而且涂在脸上有油腻感，不舒服。

哐当一下，时代进步了，我们的乳化工艺快速发展。从这个时候开始，水和油通过乳化工业，配合乳化剂，就能够融合在一起，变成不同质地的乳液乳霜。鼓掌！！！也就出现了所为的“油包水”和“水包油”。 “油包水”，油分多于水分，成乳霜状，锁水能力相对强一点；“水包油”，水分多于油分，成乳液状，对油性皮肤或在夏季有很好的作用。同时乳化剂型更能够添加有效护肤成分。产品适合不同肤质的人使用,对油性肌肤来说是好消息。现在好多人因为乳霜涂抹后的肤感直接判定东西的好坏，就是个很大的误区，那和功效成分没丁点关系，只是乳化剂使用的比例和种类不同罢了~扯远了，这个等到误区那一部分再具体讲。接下来在第二代的基础上就逐渐开始添加各种护肤成分了。从天然植物活性萃取到胶原蛋白、胎盘素，生长因子类物质如EGF、FGF等，胜肽peptide, 神经酰氨ceramide等等。卟啦卟啦卟啦~~~hoho~就发展到了现在。第二部分、专业线护肤品的的介绍讲这个前，还是有必要先讲一下，护肤品是有两大类之分的：日化线和专业线。介绍专业线之前先有必要说一下两者的区别。从品牌上讲，日化线的牌子非常之多，低端的像大宝、小护士，中端的像玉兰油、欧莱雅，高端点的像国内拿的出手的好像也就佰草集了，国外那就多了去了，什么资*堂、兰*、雅*兰*等等，嘿嘿~不管是那个档次，牌子大家总还是朗朗上口的。专业线可就不行了，几乎拿不出品牌来，并且基本都是只有行业内知道。像现在的丸美、自然堂这些以前都是做专业线的，后来转型日化线了，至于产品是不是也彻底转成日化线水平的偶不清楚。

建筑工程公司的组织机构结构图-共13页

房地产开XXXX 发××公司组织架构图

房地产开发××公司各部门职能说明书一、董事会职能 1、执行总公司的诀议。 2、决定公司的经营计划和投资方案。 3、审订公司的年度财务预算方案、决算方案。 4、审订公司的利润分配方案和弥补亏损方案。 5、审订公司增加或者减少注册资本的方案以及发行公司债券的方案。 6、拟订公司合并、分立、解散清算的方案。 7、聘任或解聘项目公司总经理，根据总经理的提名，聘任或者解聘项目公司副总经理、财务负责人，决定其报酬事项。 8、审定公司的基本管理制度。 9、负责对公司运营的监督管理。二、总经办职能 1、拟订项目公司的总体发展规划及其实施方案、项目的基本建设计划及执行工作(政策)。 2、负责总体发展规划及实施、管理 3、向董事会提出经营预算和费用预算。 4、领导项目公司的经营活动，实现经董事会批准的预算利利润指标。 5、保证项目公司能提供符合标准的服务 6、收集客户的反映，研究市场的需求，不断调整项目公司的经营方向，项目公司不断得到发展塑造本项目公司形象。

7、决定广告基调，指导广告战略。 8、代表本项目公司对外开展公关活动。 10、按既定模式管理公司。 11、建立和完善公司的工作程序和规章制度。 13、向董事会提出组织系统表，人员编制和工资总额计划。 14、决定本项目公司主管层（含主管层）以上人员的任免职奖惩 15、向董事会提出营业状况和财务状况报告，接受质询，将决议事出有因项转达所属人员，并执行该项决议。 16、审核人事行政部所制定的各项人事制度，包括员工手册、公司CI形象、规章制度、福利薪金、各岗位责任制等的审订。 17、负责督导行政部、财务部的各项工作和事务。 18、亲临现场处理本项目公司紧急事件，确保企业正常运作。 19、支持协调会议，仲裁及防止各部门之间的冲突。 20、发现并消除公司的安全隐患，为大规模的改造向董事会提出预算外开支汁划。 21、保证员工和客人在公司内的安全。 22、抓好企业文化建设。三、营销策划部职能 1、根据公司有关经营发展战略，制订年度、季度、月度推广方案，呈报总经理。 2、负责根据销售部各时期的租售计划，制订相应的推广策划方案，配合销售部招商工作的开展。 3、根据公司有关推广工作的要求，实施各项推广方案及措施。

房地产策划总经理助理个人简历

房地产策划总经理助理个人简历目前所在地：天河区民族：汉族户口所在地：湛江身材：160cmkg 婚姻状况：未婚年龄：30 培训认证：诚信徽章：求职意向及工作经历人才类型：普通求职应聘职位：房地产：房地产策划、房地产营销与房地产开发、工作年限：8职称：无职称求职类型：全职可到职日期：随时月薪要求：5000--8000希望工作地区：广州个人工作经历：公司名称：起止年月：XX-05～XX-02广州博兴物业管理有限公司公司性质：所属行业：担任职务：总经理助理工作描述：主要职责：完成博兴购物广场策划所必需的市场调研、项目定位、招商策略工作。培训及指导所策划项目招商部门的员工，加深招商人员对项目的理解。在公司经营计划、招商策略、资本运作等方面向总经理提供具体的解决方案；跟踪公司经营目标达成情况，提供分析意见及改进建议；细化转达总经理向各部门安排的工作，并跟进其完成；

根据总经理的安排，约见外部单位领导，接待来访公司的领导、客户或其它来客. 离职原因：公司名称：起止年月：XX-03～XX-05北海永高房地产开发有限公司公司性质：所属行业：担任职务：策划经理工作描述：协助开展北海星海名城项目前期营销策划及制定项目营销总案，编制楼盘的整体营销方案，包括价格策略、市场推广、货量推销安排与统一执行，楼盘现场策划推广活动的组织开展，公司企业品牌活动的组织和实施，完成项目策划所必需的市场调研、项目定位、营销策略工作，并以书面的形式提交发展商确认。培训及指导所策划项目销售部门的员工，加深销售人员对项目的理解，提高成交额。协助销售经理完成佣金结算及收佣工作，维护公司利益，避免风险。协助总监建立和维护同发展商、利益相关者之间的关系，提高公司的知名度和美誉度。离职原因：公司名称：起止年月：XX-05～XX-12广州至道策划顾问有限公司公司性质：所属行业：担任职务：策划主任

中材科技：2020年第一季度报告正文

中材科技股份有限公司2020年第一季度报告正文证券代码：002080 证券简称：中材科技公告编号：2020-019 中材科技股份有限公司2020年第一季度报告正文

第一节重要提示公司董事会、监事会及董事、监事、高级管理人员保证季度报告内容的真实、准确、完整，不存在虚假记载、误导性陈述或者重大遗漏，并承担个别和连带的法律责任。所有董事均已出席了审议本次季报的董事会会议。公司负责人薛忠民、主管会计工作负责人薛忠民及会计机构负责人(会计主管人员)冯淑文声明：保证季度报告中财务报表的真实、准确、完整。

第二节公司基本情况一、主要会计数据和财务指标公司是否需追溯调整或重述以前年度会计数据 √ 是□ 否追溯调整或重述原因同一控制下企业合并非经常性损益项目和金额 √ 适用□ 不适用单位：元

对公司根据《公开发行证券的公司信息披露解释性公告第1号——非经常性损益》定义界定的非经常性损益项目，以及把《公开发行证券的公司信息披露解释性公告第1号——非经常性损益》中列举的非经常性损益项目界定为经常性损益的项目，应说明原因 □ 适用√ 不适用公司报告期不存在将根据《公开发行证券的公司信息披露解释性公告第1号——非经常性损益》定义、列举的非经常性损益项目界定为经常性损益的项目的情形。二、报告期末股东总数及前十名股东持股情况表 1、普通股股东总数和表决权恢复的优先股股东数量及前10名股东持股情况表单位：股

公司前10名普通股股东、前10名无限售条件普通股股东在报告期内是否进行约定购回交易□ 是√ 否公司前10名普通股股东、前10名无限售条件普通股股东在报告期内未进行约定购回交易。 2、公司优先股股东总数及前10名优先股股东持股情况表 □ 适用√ 不适用

(完整版)交美特的一点知识普及

交美特的一点知识普及无铬锌铝涂层是为满足世界各国的VOC法规和汽车行业规定的环保要求而开发出的表面处理新概念，无铬锌铝涂层作为锌铬涂层的更新换代产品已经首先被汽车制造行业普遍认可和接受。无铬锌铝涂层目前实现了产业化的产品屈指可数：一种是由美国MCI公司推出的G eomet（交美特）涂层，一种是德国DELTA公司推出的Delta涂层；以上两种涂层已在发达国家普遍使用；还有一种就是由我公司推出的BNC?水性无铬锌铝涂层。一．防腐机理无铬锌铝涂层的外观呈亚光银灰色，光泽较锌铬涂层略暗，是一种将超细锌鳞片和铝鳞片叠合包裹在特殊粘结剂中的无机涂层。无铬锌铝涂层从四个方面对钢铁基体提供保护作用。二．环境效益水性无铬锌铝涂料不使用有机溶剂,不含有毒的金属（如镍、铅、钡和汞）以及六价铬或三价铬，符合美国环保署（EPA）、美国职业安全和健康行政部门（OSHA）的相应规范和世界各大汽车制造厂商的标准要求。三．性能特点 1．涂层薄无铬锌铝涂层的厚度通常为8-10μm； 2．无氢脆涂覆过程不采用酸洗，避免了氢脆的产生； 3．抗双金属腐蚀大多数锌层与铝或钢紧密配合时会产生典型的双金属微电池腐蚀，而无铬锌铝涂层中的铝鳞片能够消除上述现象的发生。 4．耐有机溶剂作为一种无机涂层，能够耐受有机溶剂； 5．耐热性涂层即使经3小时300°C高温热处理后，也保持优异耐蚀性； 6．导电性涂层中叠合在一起金属锌、铝薄片允许电流通过并传导到基体； 7．耐蚀性对于螺纹零件来说，8～10μm的无铬锌铝涂层可以耐720h盐雾试验不出现红锈；而对于非螺纹紧固则可以达1000h。单纯的无铬锌铝涂层的耐盐雾腐蚀性能稍逊于锌铬涂层，但在模拟真实自然环境的循环腐蚀试验中的表现与锌铬涂层相当。四．涂覆工艺无铬锌铝涂层与锌铬涂层在涂覆生产工艺上是相近的。在对零件进行前处理以后，无铬锌铝涂层同锌铬涂层一样，采用常规的浸渍→离心、喷涂或浸渍→沥液→离心的涂覆工艺。通过调整涂覆过程的工艺参数可以得到不同的涂层厚度。五．固化方式浸渍-离心后的零件在170℃条件下固化（指金属零件温度）加热维持15分钟后得到涂层；然后将零件取出，冷却后进行第二次涂覆。经涂覆后的零件进行第二次固化加热，一温区为170℃，固化时间为15—20分钟；二温区在300℃条件下烘烤固化（此为金属零件温度峰值）25—30分钟，对两遍涂层一并进行最终的处理。 √浸渍-离心后的零件在180℃条件下固化（指金属零件温度）加热15分钟左右，然后再升高至320℃加热35分钟左右。冷却后将零件进行第二次涂覆固化后，再进行一次表面封闭处理。

房地产公司各部门

房地产公司各部门岗位职责总经理岗位职责 1. 全面负责公司的经营管理工作，提出和把握公司发展建设总体目标和方向。 2. 制定公司经营管理目标、成本目标和利润目标，审核确定公司分配制度。 3. 负责公司内部组织机构配置以及各级经营管理人员的选聘。 4. 负责拓展开发公司的对外经营业务，与地方政府及相关职能部门协调联络，确保关系顺畅。副总经理岗位职责协助总经理全面负责公司经营管理工作；受总经理委托，临时主持公司日常经营管理工作；根据开发意图，与设计单位进行对接，在设计阶段为后续的成本控制工作打下基础；督促、指导工程管理部的工作；完成总经理交办的其它工作。行政总监岗位职责 1. 在总经理直接领导下，负责公司行政和财务管理方面的工作。 2. 负责督办招聘、培训、选拔、任用、调配、解聘、绩效考核及奖惩等方案的制定及组织实施。

3. 负责对财务部各项工作进行审核，监督公司的成本控制工作。 4. 完成总经理交办的其它工作。销售总监岗位职责 1. 在总经理直接领导下，负责公司销售方面工作，拟定销售方案。 2. 负责销售方面日常行政管理工作和销售工作计划的审定，检查、控制以及部门员工的考评工作。 3. 负责销售方面涉及方案推广、销售策略、价格策略、销售策划报告、宣传媒介等方案的制定。 4. 负责实施销售费用（包括广告推广费用）的审核、控制。 5. 负责对下属分工授权、检查，颁布制度对其业绩进行评估。 6. 负责售出商品房的审核，编制销售情况报表。 7. 负责员工的销售回款和与财务部的协调工作。 8. 完成总经理交办的其它工作。总经理助理岗位职责 1. 协助总经理协调工程管理方面的相关事宜。 2. 协助总经理协调与物业公司的相关事宜。 3. 协助总经理制定公司中长期经营管理发展规划。

纯铁基础知识普及

纯铁基础知识普及碳含量小于0.04%的钢称为工业纯铁，工业纯铁的纯度在99.6%～99.8%之间。按照用途分类，纯铁分为电磁纯铁和原料纯铁两大类，其中电磁纯铁主要用作各种直流磁性原件，原料纯铁主要作为各种炉料使用。 1、国内外纯铁发展情况国外对于纯铁研究比较早的是美国、西德、前苏联、日本。其中日本在七十年代到九十年代电磁纯铁发展迅猛。随着冶炼低碳钢技术的发展，电磁纯铁开始在电工用钢领域占据了独特的地位。由于它在直流磁场下具有磁性能优势，因此，在磁屏蔽、直流电机等方面得到充分应用。我国从一九五五开始研发，并逐步研制成具有中国特色的产品。从1955年开始，在国内太钢最早研制纯铁，且一直是国内纯铁科研和生产的主要单位，太钢纯铁的发展基本上代表了中国电磁纯铁的发展。近年来，随着我国电子、电讯等产业的迅速发展，纯铁已广泛应用于日常生活，电力、机械、交通等各个领域，成为了现代社会电子、计算机、通信等高技术产业的物质基础。同时，纯铁产品在气象、医疗、军事等领域也发挥着越来越重要的作用。目前国内生产原料纯铁的厂家主要有太钢、首钢、鞍钢，生产电磁纯铁的厂家主要有太钢、宝武钢铁。 2、太钢纯铁简介工业纯铁是太钢的传统名牌产品，有将近50年的研制历史，曾多次荣获省、部、国家银奖和金奖，在国内具有很高的知名度，历年产品开发量及市场占有率居国内第一位。电磁纯铁、原料纯铁国家标准均由太钢负责起草。作为国内主要纯铁生产企业，太钢纯铁在国内树立了良好的品牌形象。太钢工业纯铁品种齐全，用途广泛，其中电磁纯铁DT4系列作为质优价廉的软磁材料用于继电器、电声器、磁及盘、电磁阀、直流电机、充磁机、粒子加速器、仪表（如电镜、示波器、显像管）、磁屏蔽（如电讯及机要场所防干扰屏蔽车、屏蔽室，核磁共振屏蔽室等）以及自动控制系统，另外用于武器装备及控制系统（如9910工程、航空、航天——如“神舟宇宙飞船”用材料等）；电磁纯铁DT8和高真空气密性纯铁DT9用于尖端科技领域；原料纯铁用于超低碳不锈钢、粉末冶金、铝镍钴和钕铁硼永磁材料等。

【DOC】-房地产公司总经理助理岗位职责

【DOC】-房地产公司总经理助理岗位职责房地产公司总经理助理岗位职责篇一:房地产总经理助理岗位职责.doc 总经理助理岗位职责 1、在总经理领导下负责办公室的全面工作，努力作好总经理的参谋助手，起到承上启下的作用，认真做到全方位服务。 2、在总经理领导下负责企业具体管理工作的布置、实施、检查、督促、落实执行情况。 3、协助总经理作好经营服务各项管理并督促、检查落实贯彻执行情况。 4、负责各类文件的分类呈送，请集团领导阅批并转有关部门处理。 5、协助总经理调查研究、了解公司经营管理情况并提出处理意见或建议，供总经理决策。 6、做好总经理办公会议和其他会议的组织工作和会议纪录。做好决议、决定等文件的起草、发布。 7、做好企业内外文件的发放、登记、传递、催办、立卷、归档工作。 8、负责保管使用企

业图章和介绍信。 9、负责企业内外的公文办理，解决来信、来访事宜，及时处理、汇报。 10、负责上级领导机关或兄弟单位领导的接待、参观工作。 11、主要是根据不同开发企业的内部规章制度而定，一般情况下，总经理助理主要是公司内部部门的协调、企业制度的制定、协助总经理做好对外经营、决策。 12、工程部经理助理主要是对已批准实施的项目进行先期与政府相关部门的对接、各种手续的办理、协助经理做好项目招标、施工过程中各项预定目标的执行、落实、监督、检查等。 13、类似的书籍你可在网上搜索，例如:涉及到土地、规划、招标等法律法规方面的，房地产开发与管理方面的、建设工程项目管理方面的等等。 14、总经理助理工作内容:辅助总经理进行日常工作，包括整理文件、对总经理提出建设性的意见、任务下达、客户接待、合同谈判及签订等。 15.总经理助理协助总经理制定、贯彻、落实各项经营发展战略、计划，实现企业经营管理目标。

房地产公司总经理助理岗位职责

篇一：房地产公司总经理助理岗位职责重大经营决策。 2、对公司运作与各职能部门进行管理，协调部门之间关系； 3、配合处理外部公共关系； 5、产业营销与开发项目方案的审核。 6、组织制定销售管理制度、品牌宣传和项目招商工作。 7、完成董事长临时交办的其他任务。篇二：房地产公司总经理助理岗位职责 1．协助总经理做好综合．协调各部门工作和处理日常事务； 2．及时收集和了解各部门的工作动态，协助总经理协调各部门之间有关的业务工作，掌握全公司主要活动情况； 3．协助总经理收集各部门重要报表，并校对各项重要数据，根据核对结果对各部门进行绩效考核，并根据绩效评价结果实施对员工的奖惩工作； 4．负责召集公司办公会议和其他有关会议，做好会议记录，并检查督促会议决议的贯彻实施； 5．负责公司行政文书档案的管理工作及各部门文书资料收集归档管理工作，进行业务

指导；

6．负责组织公司通用管理标准规章制度的拟定、修改和编写工作，协助参与专用管理标准及管理制度的拟定、讨论、修改工作； 7．协助总经理与施工方建立良好的合作关系，并负责做好公司重要来宾的接待安排及重要会议的组织与会务工作； 8．完成公司领导交办的其他工作任务。篇三：房地产公司总经理助理岗位职责 1、协助总经理制定战略计划、年度经营计划及各阶段工作目标分解； 3、协助总经理对公司运作与各职能部门进行管理、协调内部各部门关系，尤其是业务部门间的日常工作关系以及事务处理，必要时可单独召集业务沟通会议或工作会议； 4、配合总经理处理外部公共关系（政府、重要客户等）； 5、跟踪公司经营目标达成情况，提供分析意见及改进建议； 6、在公司经营计划、销售策略、资本运作等方面向总经理提供相关解决方案； 7、撰写和跟进落实公司总经理会议、专题研讨会议等公司会议纪要； 8、协助总经理进行公司企业文化、企业战略发展的规划，配合管理办开展企业文化工作； 9、完成其他临时交办的任务。

中国建筑设计公司排名

中国建筑设计公司排名 1 上海现代建筑设计（集团）有限公司 2 中国建筑设计研究院 3 铁道第二勘察设计院 4 铁道第三勘察设计院 5 铁道第一勘察设计院 6 国家电力公司成都勘测设计研究院 7 铁道第四勘察设计院 8 长江水利委员会长江勘测规划设计研究院 9 中国石油集团工程设计有限责任公司 10 中讯邮电咨询设计院 11 国家电力公司中南勘测设计研究院 12 同济大学建筑设计研究院 13 中国石化工程建设公司 14 中国联合工程公司 15 中京邮电通信设计院 16 北京国电华北电力工程有限公司 17 上海市政工程设计研究院 18 北京市建筑设计研究院 19 深圳市建筑设计研究总院 20 中交第二公路勘察设计研究院 21 北京市市政工程设计研究总院 22 国家电力公司西北电力设计院 23 中冶集团武汉勘察研究院有限公司 24 国家电力公司西南电力设计院 25 中交第一公路勘察设计研究院 26 黄河勘测规划设计有限公司 27 国家电力公司华东勘测设计研究院 28 浙江省电力设计院 29 深圳市勘察测绘院 30 江苏省电力设计院

31 国家电力公司中南电力设计院 32 中冶集团北京钢铁设计研究总院 33 国家电力公司昆明勘测设计研究院 34 中国电子工程设计院 35 国家电力公司华东电力设计院 36 广东省电力设计研究院 37 大庆油田工程设计技术开发有限公司 38 中冶赛迪工程技术股份有限公司 39 国家电力公司西北勘测设计研究院 40 中国建筑西北设计研究院 41 国家电力公司东北电力设计院 42 中国石化集团洛阳石油化工工程公司 43 上海市机电设计研究院 44 山东电力工程咨询院 45 北京首钢设计院 46 中国冶金建设集团包头钢铁设计研究总院 47 武汉钢铁设计研究总院 48 中国石化集团上海工程有限公司 49 中国电子系统工程第四建设有限公司 50 广西电力工业勘察设计研究院 51 湖南省交通规划勘察设计院 52 广州市城市规划勘测设计研究院 53 河北省电力勘测设计研究院 54 中国寰球工程公司 55 北京国电水利电力工程有限公司 56 江苏省交通规划设计院 57 沈阳铝镁设计研究院 58 中国纺织工业设计院 59 中水东北勘测设计研究有限责任公司 60 四川省水利水电勘测设计研究院 61 中国航空工业规划设计研究院 62 华南理工大学建筑设计研究院 63 贵阳铝镁设计研究院

不看后悔,日化线和专业线产品区别知识普及 (2)

“油包水”，油分多于水分，成乳霜状，锁水能力相对强一点；“水包油”，水分多于油分，成乳液状，对油性皮肤或在夏季有很好的作用。同时乳化剂型更能够添加有效护肤成分。产品适合不同肤质的人使用,对油性肌肤来说是好消息。现在好多人因为乳霜涂抹后的肤感直接判定东西的好坏，就是个很大的误区，那和功效成分没丁点关系，只是乳化剂使用的比例和种类不同罢了~扯远了，这个等到误区那一部分再具体讲。接下来在第二代的基础上就逐渐开始添加各种护肤成分了。从天然植物活性萃取到胶原蛋白、胎盘素，生长因子类物质如EGF、FGF等，胜肽peptide,神经酰氨ceramide等等。卟啦卟啦卟啦~~~hoho~就发展到了现在。第二部分、专业线护肤品的的介绍讲这个前，还是有必要先讲一下，护肤品是有两大类之分的：日化线和专业线。介绍专业线之前先有必要说一下两者的区别。从品牌上讲，日化线的牌子非常之多，低端的像大宝、小护士，中端的像玉兰油、欧莱雅，高端点的像国内拿的出手的好像也就佰草集了，国外那就多了去了，什么资*堂、兰*、雅*兰*等等，嘿嘿~不管是那个档次，牌子大家总还是朗朗上口的。专业线可就不行了，几乎拿不出品牌来，并且基本都是只有行业内知道。像现在的丸美、自然堂这些以前都是做专业线的，后来转型日化线了，至于产品是不是也彻底转成日化线水平的偶不清楚。就品牌来讲，如果日化线打5颗星的话，专业线只能打2颗星了。从原料上来讲，日化线主要是矿物油（强生的BABY油就是矿物油，大的品牌还是会选用好的植物基础油或者动物油的，这就是一分价钱一分货的道理了）、精细化

房地产公司总经理助理职位说明书[118280]

房地产公司总经理助理职位说明书[118280] 房地产开发公司总经理助理职位说明书岗位名称：总经理助理岗位职责： 1、协助总经理进行开发策略研究和产品定位分析,为企业决策提供建议。 2、负责统筹物业公司的内部管理工作，协助副总经理协调各部门、各职能单位之间的工作关系。 3、制定或协助制定年度工作计划，并对计划的实施进行过程控制。 4、协助总经理实施公司内部管理，确保计划与整体定位、目标相适应。 5、贯彻执行国家的的方针、政策、法令和主管部门的各项规章制度，对董事会负责，同时努力经营好物业管理公司。 6、定期、不定期的听取员工的意见和建议，不断完善企业的经营管理。 7、以身作则，关心员工，提高企业凝聚力，使员工以高度热情和责任感完成本本职工作。 8、完成董事长和总经理授权或交办的其他工作任务。任职条件： 1、30岁以上，本科以上学历，经济管理、地产建筑、法律或相关管理专业毕业。 2、3年以上相关管理工作经验，熟悉企业各项规范、规程，具有专业能力和丰富的现场处理经验，善于根据市场变化、发展需求和市场竞争需要，制定企业经营方针、经营策略，具有较强的客户关系处理能力。 3、个人素质：对公司整体经营工作有一定的认识理解能力、分析能力、创新能力 4、严谨、细致、耐心、务实的工作作风，执行力强 5、出色的协调及沟通能力，必要的人力资源和法律、房地产开发、物业知识。 6、具有敬业精神，作风正派，清廉公正，具备良好的职业道德。 7、全面了解国家方针政策，熟悉国家经济法规、合同法规、财经纪律和其他有关规定。 8、善于全面掌握企业经营管理中各个重要环节的基本情况，具有较强的整体控制和协调能力 9、具备较强的办公室事务管理能力及良好的文字和语言表达能力，善于沟通、处理协调各方面的公共关系，办事干练细致，能熟练操作电脑。感谢您的阅读！

建筑工程施工组织机构

组织机构 1、施工组织结构的建立我公司针对此工程严格实行“项目法”施工，新组建一个由公司副总经理亲自挂帅的工程指挥小组，由公司优秀的项目经理组建的项目经理部来负责此工程的具体施工管理。同时向业主承诺：针对此工程项目，我公司推选的项目班子。实行项目经理责任制，项目经理将对选题、工期、安全、成本及文明施工全面负责。各施工管理职能部门在项目经理部的直接指导下做到有计划的组织施工，确保工程选题、工期、安全等方面达到目的要求。项目经理部采用老、中、青相结合的方式。把老同志的丰富经验、中年同志的稳重干练、年轻同志的开拓进取精神有机结合，形成强有力的项目班子。其项目部主要人员均来自施工生产管理第一线的骨干力量，年富力强、精力充沛，而且个人素质高，专业技术水平强。 2、施工组织结构框图（见后） 3、施工组织机构的启动与高效 ①根据本工程各方面情况及特点，有针对性的组建项目班子，并且人选一旦经过甲、乙双方确认，全班人选将处于启动状态，未进场之前可根据设计要求积极为本工程做好开工前的准备工作（材料、机

械、技术等准备工作与策划工作），并且以无条件满足本工程需要为前提，未经业主同意中途不得变换人选。 ②根据项目经理部的工作实际。具体明确每个项目管理人员的责、权、利，使全体管理人员有条不紊、忙而有绪地开展工作，从而较大幅度提高项目经理的工作效率，有效加强管理整体实力，使项目经理部管理体系有更多的精力和时间来分析运筹各种复杂的管理局面，做到项目整体下活一盘棋，充分发挥每个棋子的作用，并且决策有的放矢，成竹在胸，不打无把握之仗。 ③以制定的各项目管理制度来指导、督促、规范每个管理人员的工作质量、效率。变“人管理人”“人盯人”为“制度管理人”，做到项目管理“有章可循，执法必严、违章必纠”，这样形成军令如山，赏罚分明的先进管理模式。 ④我公司项目管理历来将工程的社会效益看重于经济效益，将项目职业道德作为专项考核制度，并在项目管理中大力提倡和推广，我们将一如既往地实行这一制度，以赢得客户的信任及市场的回报。具体做法是把项目施工职业道德的具体含义、指标分解落实到项目每个管理人员和操作人头上并与他们的收益挂勾，形成了自觉抵制施工质量粗糙和材料以次充好、偷工减料、弄虚作假等不良行为。施工质量做到业主与监理是否在场都一个样，让业主和用户放心享受精品工程的高品质使用价值。 4、施工组织机构高效动作保障措施 ①组织强有力的项目班子，选派思想好、业务精、能力强、善合作、服务好的管理人员进入项目管理班子。 ②建立健全项目经理、工长、内业、材料、机械、劳资等岗位责任制，由公司工程指挥小组定期对各专业进行考核。 ③强化激励与约束机制，制定业绩评比，奖罚办法，定时组织项目经理部管理人员会议，检查工作质量 ④建立公司工程指挥小组现场办公制，每半月召开一次现场办公会，重点帮助解决项目的资金、质量、进度等难题，以确保资金为前提，带动项目各项工作的高效运转。 ⑤每周召开由项目经理主持的班组协调会，对本周的工作进行评议，对下周的工作进行协调安排。 ⑥监理单位每半月召开一次监理例会，项目部主要管理人员及配合单位主管参加，重点解决质量、进度、施工技术等难点。明确各项问题的解决办法及时间，并形成会议纪要。 ⑦实行劳动用工管理，选派组织能力强，技术水平高，并经过专业培训能打硬仗的作业队伍，树立连续作战的精神，确保工期的按时或提前完成。 2、主要施工顺序：

房地产公司总经理助理岗位职责

篇一:房地产公司总经理助理岗位职责大经营决策。 2、对公司运作与各职能部门进行管理,协调部门之间关系; 3、配合处理外部公共关系; 5、产业营销与开发项目方案的审核。 6、组织制定销售管理制度、品牌宣传与项目招商工作。 7、完成董事长临时交办的其她任务。篇二:房地产公司总经理助理岗位职责 1.协助总经理做好综合.协调各部门工作与处理日常事务; 2.及时收集与了解各部门的工作动态,协助总经理协调各部门之间有关的业务工作,掌握全公司主要活动情况; 3.协助总经理收集各部门重要报表,并校对各项重要数据,根据核对结果对各部门进行绩效考核,并根据绩效评价结果实施对员工的奖惩工作; 4.负责召集公司办公会议与其她有关会议,做好会议记录,并检查督促会议决议的贯彻实

施; 5.负责公司行政文书档案的管理工作及各部门文书资料收集归档管理工作,进行业务指导; 6.负责组织公司通用管理标准规章制度的拟定、修改与编写工作,协助参与专用管理标准及管理制度的拟定、讨论、修改工作; 7.协助总经理与施工方建立良好的合作关系,并负责做好公司重要来宾的接待安排及重要会议的组织与会务工作; 8.完成公司领导交办的其她工作任务。篇三:房地产公司总经理助理岗位职责 1、协助总经理制定战略计划、年度经营计划及各阶段工作目标分解; 3、协助总经理对公司运作与各职能部门进行管理、协调内部各部门关系,尤其就是业务部门间的日常工作关系以及事务处理,必要时可单独召集业务沟通会议或工作会议; 4、配合总经理处理外部公共关系(政府、重要客户等); 5、跟踪公司经营目标达成情况,提供分析意见及改进建议; 6、在公司经营计划、销售策略、资本运作等方面向总经理提供相关解决方案;

商会知识普及

商会架构是怎样的现阶段，对商会的管理通常是“二元化管理”——即分别需要业务主管单位、登记机关各一个。对于商会内部的架构，通常是遵循会员（代表）大会——理事会——会长会议三个层次。其中， 1、会员大会是商会内部的最高权力机构，进行选举理事会、通过或修改商会章程等。通常是3-5年才召开一次。 2、理事会根据会员大会的授权，行使选择会长、副会长、秘书长等人选、审核商会经费报告、审议会长工作报告等事宜。通常每年举行一次，特殊情况可以临时召开。 3、会长会议是商会的日常决策机构，并领导秘书处工作。秘书长通常为会长会议成员。每年定期或根据工作需要召开。 4、秘书处负责商会的日常行政工作。可以下设办公室、法律部、会员部、经济部等职能部门，工作人员可以兼专职结合。如果需要更详细的信息，可以参考《商会章程》或者关于商会工作的

专业书籍。商会如何发挥作用：在市场经济的环境下，企业更需要商会组织中国入世后，经济越来越融入世界经济之中，国内市场与国外市场越来越融合，企业要做大、做强，就必须面向国内外市场。在这个过程中，如何发挥行业商会的作用就显得非常重要，因为作为单个企业，在市场经济活动中一定会碰到许多干扰，比如用户与消费者、媒体、政府，以及同行业的各种竞争手段等等。对这样的现象，单个企业去应付，力量有限，只有形成一个行业组织，通过群体的力量，才能在这些问题出现的时候有一个应对的条件和平台，商会就是要起到这样的作用。同时，单个企业需要在行业中参与一些行业共性问题的探讨和研究，只有这样，企业才能不断克服困难，不断发展。因此，在发展市场经济环境中，企业是非常需要行业商会的。同时，商会在中国几十年，在国外几百年的发展历史也充分说明了这一点。商会如何为企业服务按照建立社会主义市场经济的要求，必须加快政府职能的转变，关键是要实行政企分开，把对企业生产经营的直接管理变为间接管理，

建筑工程公司的组织机构结构图

房地产开X X X X 发有限公司组织架构图

房地产开发有限公司各部门职能说明书一、董事会职能 1、执行总公司的诀议。 2、决定公司的经营计划和投资方案。 3、审订公司的年度财务预算方案、决算方案。 4、审订公司的利润分配方案和弥补亏损方案。 5、审订公司增加或者减少注册资本的方案以及发行公司债券的方案。 6、拟订公司合并、分立、解散清算的方案。 7、聘任或解聘项目公司总经理，根据总经理的提名，聘任或者解聘项目公司副总经理、财务负责人，决定其报酬事项。 8、审定公司的基本管理制度。 9、负责对公司运营的监督管理。二、总经办职能 1、拟订项目公司的总体发展规划及其实施方案、项目的基本建设计划及执行工作 (政策)。 2、负责总体发展规划及实施、管理

3、向董事会提出经营预算和费用预算。 4、领导项目公司的经营活动，实现经董事会批准的预算利利润指标。 5、保证项目公司能提供符合标准的服务 6、收集客户的反映，研究市场的需求，不断调整项目公司的经营方向，项目公司不断得到发展塑造本项目公司形象。 7、决定广告基调，指导广告战略。 8、代表本项目公司对外开展公关活动。 10、按既定模式管理公司。 11、建立和完善公司的工作程序和规章制度。 13、向董事会提出组织系统表，人员编制和工资总额计划。 14、决定本项目公司主管层（含主管层）以上人员的任免职奖惩 15、向董事会提出营业状况和财务状况报告，接受质询，将决议事出有因项转达所属人员，并执行该项决议。 16、审核人事行政部所制定的各项人事制度，包括员工手册、公司CI形象、规章制度、福利薪金、各岗位责任制等的审订。 17、负责督导行政部、财务部的各项工作和事务。

【DOC】-房地产公司总经理助理岗位职责

10、负责上级领导机关或兄弟单位领导的接待、参观工作。 11、主要是根据不同开发企业的内部规章制度而定，一般情况下，总经理助理主要是公司内部部门的协调、企业制度的制定、协助总经理做好对外经营、决策。 12、工程部经理助理主要是对已批准实施的项目进行先期与政府相关部门的对接、各种手续的办理、协助经理做好项目招标、施工过程中各项预定目标的执行、落实、监督、检查等。 13、类似的书籍你可在网上搜索，例如:涉及到土地、规划、招标等法律法规方面的，房地产开发与管理方面的、建设工程项目管理方面的等等。 14、总经理助理工作内容:辅助总经理进行日常工作，包括整理文件、对总经理提出建设性的意见、任务下达、客户接待、合同谈判及签订等。 15.总经理助理协助总经理制定、贯彻、落实各项经营发展战略、计划，实现企业经营管理目标。 16.工作内容:协助总经理制定战略计划、年度经营计划及各阶段工作目标分解;起草公司各阶段工作总结和其他正式文件;协助总经理对公司运作与各职能部门进行管理、协调内部各部门关系，尤其是业务部门间的日常工作关系以及事务处理，必要时可单独召集业务沟通会议或工作会议;配合总经理处理外部公共关系(政府、重要客户等);跟踪公司经营目标达成情况，提供分析意见及改进建议;在公司经营计划、销售策略、资本运作等方面向总经理提供相关解决方案;

中材科技股票投资价值分析报告

中材科技股票投资价值分析报告一、背景简介中材科技股份有限公司是一家集研发设计、产品制造与销售、成套技术与装备于一体的公司，是目前中国最大的特种纤维复合材料行业，高新技术企业和技术装备研发中心，也是中国国防工业最大的特种纤维复合材料配套研制基地。公司拥有国家专利31项，专有技术67项，公司生产的先进复合材料成功应用于我国自主研制的“神舟”系列载人飞船。高强玻璃纤维及制品、玻璃微纤维纸、高温过滤材料、先进复合材料、工程复合材料，并从事万吨级玻璃纤维池窑拉丝工程、大型非矿工程的设计、核心装备制造和技术服务。二、宏观经济分析去年第四季度至今年的各月份中，工业增加值连续降低，在控通货膨胀的各措施下，需求在降低，经济运行在降速。4 月份公布的进出口、工业增加值、投资、货币信贷等数据表明，当前经济增长态势不容乐观。4月一系列宏观经济数据显示，当前内需、外需均较疲软，4月新增信贷不足7000亿元，显著低于市场预期。经季节调整法调整后，4月出口和进口同比增速分别为7.2%和4.8%，均低于市场预期，显示外需和内需形势严峻。工分析师估算4月GDP增速折年率料已跌破7.5%的政策目标水平。低于预期的经济金融数据折射出

需求端严重不足：一方面，外需在短期内难见起色。欧债危机一波未平一波又起，欧美经济状况不佳导致我国出口市场需求趋于萎缩，市场对未来国际贸易环境信心不足。另一方面，地方融资平台和房地产两大需求端一直受到较严厉调控。在此背景下，中国人民银行下调存款类金融机构人民币存款准备金率0.5个百分点。从中可以看出，国家将进一步采取相应的经济措施，确保经济的良好运行。但是，经济的运行前景仍旧不容乐观。三、行业分析欢送“十一五”迎来“十二五”之际，《新材料产业“十二五”发展规划》随之出台。规划提出，到2015年，总产值达到2万亿元，年均增长率超过25%；研发投入明显增加，重点新材料企业研发投入占销售收入比重达到5%；打造10个创新能力强、具有核心竞争力、新材料销售收入超150亿元的综合性龙头企业，建成若干主业突出、产业配套齐全、年产值超过300亿元的新材料产业基地和产业集群。 “十二五”新材料产业预期发展目标还提出，新材料产品综合保障能力提高到70%，关键新材料保障能力达到50%，实现碳纤维、钛合金、耐蚀钢、先进储能材料、半导体材料、膜材料、丁基橡胶、聚碳酸酯等关键品种产业化、规模化。从中可以看出国家在“十二五”期间对新材料行业的重视与支持。同时，也可以看出新材料行业的发展契机。

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