组培实验报告
专业班级：生物技术2班学号：20120322229 姓名：蒋薇同组人:卢晓燕、王雪娇、杨佳梅、袁蓉、莽斌、林兴龙、刘显浩、关德红、李玉胜
试验日期：2014年3月10日室温：大气压：
试验序号：1 试验名称：组培室的设计及实验仪器设备的使用
一、实验目的
1.了解普通植物组织培养实验室和工厂育苗植物组织培养室的差别；
2.掌握植物组织培养实验室的组成及各分室的功能；
3.学会分析各种类型植物组织培养实验室的优点和缺点；
4.学会常见植物组织培养设备的使用方法。
二、试验原理
1.物组织培养实验室是完成植物组织培养的重要场所，植物组织培养实验室设计合理与否植影响着植物组织培养的成败。
2.植物组织培养实验室有：准备室、接种室、培养室、温室。
①准备室：
在准备室主要进行一些常规实验操作，如各种药品的储备，称量，器皿洗涤，培养基配制，培养基和培养器皿的灭菌，培养材料的预处理等。为了方便管理还可以将准备室进行适当的分区，如划分为药瓶储藏室，洗涤室，培养基配制室及灭菌室等。
⑴药品储藏室
主要用于存放各种化学药品，要求室内干燥、通风、避光、应配制、备药品柜、冰箱等。各类化学试剂应按要求分类存放，需要低温保存的药剂应置于冰箱内保存，有毒药品应按规定存放和管理。
⑵洗涤室
用于玻璃器皿、用具及实验用具的洗涤、干燥和存放;；培养材料的
预处理与清洗：组培苗的出瓶、清洗与整理等。要求有电源、自来水和水槽，上下水道畅通，排水良好，地面耐湿、防滑，便于清洁。应配备工作台、烘箱、晒瓶架、周转筐、毛刷等。
（3）培养基配制室
用于培养基的配制，还可以分为称重分室和配制分室。药品称量需配制各种规格的天平，包括普通天平和分析天平。培养基配制需要配备工作台、蒸馏水器、电炉（电饭锅或微波炉）、水浴锅、磁力搅拌器、过滤装置、酸度计、分注器、各种试管、三角瓶、烧杯、量筒、吸管、移液管及移液管架以及贮藏母液的冰箱、移动式载物台（医用小推车）、周转筐等。
(4)灭菌室
用于培养基、器皿、用具、及其它物品的灭菌。灭菌室根据工作量的大小决定其面积的大小，一般控制在30～50㎡。要求、通风、明亮，墙壁和地面应防潮、耐高温。应配置高压电源和排水设施、高压蒸汽灭菌装置、干热消毒柜或烘箱、细菌过滤装置及移动式载物台、周转筐等。
准备室也可设计成大的通间，使试验操作的各个环节
在同一房间按程序完成，以便于程序化操作与管理，从而提高工作效率。此外还便于培养基的配制、分装和灭菌的自动化操作程序设计，从而减少规模化生产的人工劳动，更便于无菌操作体系的建立。
②无菌操作室（接种室）
无菌操作室也叫接种室，主要用于植物材料的消毒、接种、培养
物的继代转接等无菌操作。由于植物组织培养时间较长，尤其需要防止细菌、真菌污染。因此，接种室内无菌条件控制的好坏直接影响培养物的污染率及接种工作效率等重要指标。接种室面积根据需要和环境控制的难易程度而定，在工作方面的前提下易小不宜大。室内地面、墙面、天花板应采用防水或耐腐蚀材料，符合无尘积累要求，易于清洁和消毒；门窗要求密闭性好，一般用滑动门窗，不能安装风扇，通风换气需通过空气调节装置进行。无菌室内安装紫外灯，每周照射1～2h，每次使用前照射10～30min；定期用甲醛和高锰酸钾（或用臭氧发生器）熏蒸消毒。接种室内应配备超净工作台、灭菌器或酒精灯、酒精瓶及酒精棉球、接种工具、器械支架及移动式载物台。
接种室外还应设置预备室作为缓冲间，一方面可供操作人员更换工作服、工作帽、拖鞋及器皿准备、培养材料处理等，另一方面可减少工作人员将外界尘埃、杂菌等污染物直接带入接种室内。缓冲间与接种室之间最好安装塑钢玻璃及滑动门，以便于观察；而且缓冲间与接种室的门应该错开，也不得同时开启，以防止在工作人员进出时空气对流带入杂菌。缓冲间内应配备鞋架和衣帽挂钩，并备有清洁的工作服、工作帽、口罩及拖鞋；墙顶应安装1~2盏紫外灯，定时照射杀菌。
③培养室：
用于对接种到培养瓶等器皿中的植物离体材料进行控制条件下的培养。培养室内放置培养架，方便操作，.并充分利用空间。培养室的大小可根据生产规模和培养架的大小、数目及其他附属设备而定，其
设计以充分利用空间和节省能源为原则。可采取多室设计方式，每个培养是面积不宜过大，约10～20㎡，以满足不同培养材料对环境条件控制的不同要求，也便于对同室内环境条件的均匀控制。室内天花板和内墙最好用塑钢板或瓷砖装修，地面铺设水模式或瓷砖，以保持室内明亮、平整，并方便清洁和消毒；室内还要安装紫外灯，定时进行杀菌处理。培养室内需要安装空调，以控制室内温度，一般要求保持在20～27℃之间，低于15℃或高于35℃对植物的生长不利。培养室的光源一般使用白色日光灯，光周期可采用自动定时器来控制，光照强度一般控制为1000～6000lx，每天光照时间薇10～16h。需要大量的暗培养时可以增设暗培养室，或使用暗箱培养。培养室内的相对湿度保持在70％～80％为宜。湿度过高，容易使培养及污染；湿度过低，容易使培养基失水变硬，影响培养物生长。在梅雨季节可使用除湿机人工除湿，干燥季节可利用加湿器来增加湿度，也可采取防治水盆的方法来调节湿度。
④温室
组培试管苗在进入大田栽培之前，必须经过一段时间的炼苗，即驯化移栽过程，使其逐渐适应自然条件。北方（长江以北）通常建造日光温室，而南方通常建造连栋温室大棚进行试管苗得分驯化移栽。
⑴日光温室：日光温室又称为钢拱式日光温室、节能温室，主要利用太阳能做热源提供室内温度。这种温室跨度为5~7米，中高2.4~3.0米，后墙用砖砌成，厚50~80厘米，高1.6~2.0米。钢筋骨架，拱架为单片桁架，上弦为∮14~∮16,的圆钢，下弦为∮12~∮14∮,的圆钢，
中间用∮8~∮10的钢筋做拉花，宽15~20厘米，拱架上端搭在中柱上，下端固定在前端预埋水泥基础上。拱架间用三道单片桁架花梁横向拉接，以使整个骨架成为一体。温室后屋面可铺泡沫塑料板和水泥板，抹草泥封盖防寒，后墙没隔4~5米设通风口。
此种温室坚固耐用，采光和通风性好，操作方便，适于北方地区使用，能充分利用太阳能，降低生产成本。
⑵智能连栋式温室：智能连栋式温室有屋脊形连栋温室和拱圆形连栋温室等类型，是由相等的双屋面借纵向侧柱相互连通，可以连续搭接，形成室内串通的大型温室。此类温室又被称为现代化温室，每栋可达数千或上万平方米，框架采用镀锌钢材，屋面用铝合金材料做桁条，覆盖物可采用玻璃、玻璃钢、塑料板材或者塑料薄膜，冬季通过热水、蒸汽或者热风加温，夏季采用通风与遮阳相互结合的方法降温。整栋温室的加温、通风遮阳和降温工作可全部或部分计算机控制。
3.高压灭菌锅、超净工作台等都是组培室必不可少的仪器和设备，只有科学正确的学会它们的使用方法，才能确保组培的成功。
三、主要材料、仪器、试剂
材料：各种植物材料
仪器：⑴分析天平
①介绍: 精确度达0.0001g，用于称量微量元素、植物生长调节剂和一些高精确度的试验品。电子天平一般采用应变式传感器、电容式传感器、电磁平衡式传感器。应变式传感器，结构简单、造价低，但精度有限。
在2009年前不能做到很高精度；电容式传感器称量速度快，性价比较高，但也不能达到很高精度；采用电磁平衡传感器的电子天平。其特点是称量准确可靠、显示快速清晰并且具有自动检测系统、简便的自动校准装置以及超载保护等装置。
厂家：上海奔普仪器科技有限公司
价格：6500元
②使用方法：
1、将天平置于稳定的工作台上避免振动、气流及阳光照射。
2、在使用前调整水平仪气泡至中间位置。
3、电子天平应按说明书的要求进行预热。
4、称量易挥发和具有腐蚀性的物品时，要盛放在密闭的容器中，以免腐蚀和损坏电子天平。
5、经常对电子天平进行自校或定期外校，保证其处于最佳状态。
6、如果电子天平出现故障应及时检修，不可带“病”工作。
7、操作天平不可过载使用以免损坏天平。
8、若长期不用电子天平时应暂时收藏为好。
③注意事项:
一、电子天平的心脏一重力电磁传感器簧片（一般共有六一八片〕细而薄，极易受损，且天平的精度越高，其重力传感簧片也越薄，所以在使用中应特别注意加以保护，不要向天平上加载重量超过其称量范围的物体，绝不能用手压称盘或使天平跌落地下，以免损坏天平
或使重力传感器的性能发生变化，另外称量一个物体以特别是较重的物体〕一般不要超过30秒钟搬动和运输时应将称盘及其托盘取下来。
二、电子天平实际上是测量地球对敞在称盘上的物体的引力即重力的仪器，而由于地球径纬度的不同，各地的重力加速度（9-9. 8m2/s〕并不相同,在使用当地其称量准确度取决于是否进行了正确的校正和校正砧码的精度，假如您发现在广州经校正好的天平，在当地称重有一定误差，这并不表示天平有任何故障请按各型号电子天平说明书介绍的方法用计量部门认可的标准砧码进行校正即可进行准确称量。三、电子天平的校正机构一般分三大类：
全自动校正：内合标准砧码和电机伺服机构，只需按一个功能键即可在数十秒钟内完成校正，一般新型的万分之一克精度以上的电子天平均采用全自动校正机构;
半自动校正：内装标准砧码但无伺服机构，在进入校正程序后，需要手动加载和卸下校正码;
手动校正：天平内没有标准砧码和伺服机构需要手动进入校正程序并外加标准砧码进行校正一般精度较低的天平采用手动校正
四、电子天平是一台对环境高度敏感的精密电子测量仪器，使用时应小心操作，安装台面应无明显振动，不要敞在空调口，若这些条件不能满足，应采取一些改进措施如变更使用地点装上防风墨等同时注意要调整底角螺丝使水平指示器的气泡居中。天平未调好水平也是产生称量误差的原因之一。
⑵粗天平：
①介绍：精确度达0.01g和0.1g，用于称量大量元素、琼脂、糖等用量较大的药品。
厂家：北京信康亿达公司
价格：1680元
②使用方法：
1.要放置在水平的地方。游码要归零。
2.调节平衡螺母(天平两端的螺母)调节零点直至指针对准中央刻度线。
3.左托盘放称量物，右托盘放砝码（左物右码）。根据称量物的性状应放在玻璃器皿或洁净的纸上，事先应在同一天平上称得玻璃器皿或纸片的质量，然后称量待称物质。
4.添加砝码从估计称量物的最大值加起，逐步减小。托盘天平只能称准到0.1克。加减砝码并移动标尺上的游码，直至指针再次对准中央刻度线。
5.过冷过热的物体不可放在天平上称量。应先在干燥器内放置至室温后再称（或在特殊器皿中称量）。
6.物体的质量 =砝码重量+游码所显示的度数
7.取用砝码必须用镊子轻拿轻放，取下的砝码应放在砝码盒中，称量完毕，应把游码移回零点。
8.称量干燥的固体药品时，应在两个托盘上各放一张相同质量的纸，然后把药品放在纸上称量。
9.易潮解的药品，必须放在玻璃器皿上（如：小烧杯、表面皿）里称量。
10.砝码若生锈，测量结果偏小；砝码若磨损，测量结果偏大。
⑶高压灭菌锅
①介绍：高压灭菌锅又名高压蒸汽灭菌锅，可分为手提式灭菌锅和立式高压灭菌锅。利用电热丝加热水产生蒸汽，并能维持一定压力的装置。主要有一个可以密封的桶体，压力表，排气阀，安全阀，电热丝等组成。安全阀：超过额定压力，释放压力；手轮：旋转罗盘式开启盖门，简单方便（适合于40升以上产品）；压力表：指示压力显示；密封圈：自涨式密封圈；底部活动轮；蒸汽收集瓶：3L，聚乙烯材质（适合于内排式和带干燥型）具备产品医疗器械注册证，每台经过技术监督局严格检测（每台设备配一套检测证书）。
厂家：创博环球〔北京〕生物科技有限公司
价格：8000元
②使用方法:
1.在外层锅内加适量的水，将需要灭菌的物品放入内层锅，盖好锅盖并对称地扭紧螺旋。
2.加热使锅内产生蒸气，当压力表指针达到 3
3.78kPa时，打开排气阀，将冷空气排出，此时压力表指针下降，当指针下降至零时，即将排气阀关好。
3.继续加热，锅内蒸气增加，压力表指针又上升，当锅内压力增加到所需压力时，将火力减小，按所灭菌物品的特点，使蒸气压力维持所
需压力一定时间，然后将灭菌器断电或断火，让其自然冷后再慢慢打开排气阀以排除余气，然后才能开盖取物
③注意事项
1.待灭菌的物品放置不宜过紧；
2.必须将冷空气充分排除，否则锅内温度达不到规定温度，影响灭菌效果；
3.灭菌完毕后，不可放气减压，否则瓶内液体会剧烈沸腾，冲掉瓶塞而外溢甚至导致容器爆裂。须待灭菌器内压力降至与大气压相等后才可开盖；
4.已有微电脑自动控制的高压灭菌锅，只需放去冷气后，仪器即可自动恒压定时，时间一到则自动切断电源并鸣笛，使用起来很方便。
⑷超净工作台
①介绍：超净工作台(clean bench)是为了适应现代化工业、光电产业、生物制药以及科研试验等领域对局部工作区域洁净度的需求而设计的。超净工作台原理是在在特定的空间内，室内空气经预过滤器初滤，由小型离心风机压入静压箱，再经空气高效过滤器二级过滤，从空气高效过滤器出风面吹出的洁净气流具有一定的和均匀的断面风速，可以排除工作区原来的空气，将尘埃颗粒和生物颗粒带走，以形成无菌的高洁净的工作环境。
厂家：上海乔跃电子有限公司
价格：9800元
②使用方法：超净台的优点是操作方便自如，比较舒适，工作效率，预备时间短，开机10分钟以上即可操作，基本上可随时使用。在工厂化生产中，接种工作量很大，需经常长久地工作时，超净台是很理想的设备。超净台由三相电机作鼓风动力，功率145～260W左右，将空气通过由特的微孔泡沫塑料片层叠合组的“超级滤清器”后
吹送出来，形成连续不断的无尘无菌的超净空气层流，即所谓“ 有效的特殊空气”，它除去了大于0.3μm的尘埃、真菌和细菌孢子等等。超净空气的流速为24～30m/min，这已足够防止附近空气可能袭扰而引起的污染，这样的流速也不会妨碍采用酒精灯或本生灯对器械等的灼烧消毒。工作人员就在这样的无菌条件下操作，保持无菌材料在转移接种过中不受污染。但是万一操作中途遇到停电，暴露在未过滤空气中的材料便难以幸免污染。这时应迅速结束工作，并在瓶上作出记号，内中的材料如处增殖阶段，则以后不再用作增殖而转入生根培养。如为一般性生产材料，极其丰富也可弃去。如处生根过，则可留待以后种植用。
③注意事项：
超净台电源多采用三相四线，其中有一零线，连通机器外壳，应接牢在地线上，另外三线都是相线，工作电压是380V。三线接入电路中有一定的顺序，如线头接错了，风机会反转，这时声音正常或稍不正常，超净台正面无风（可用酒精灯火焰观察动静，不宜久试），应及时切断电源，只将其中任何两相的线头交换一下位置再接上，就可解决。三相线如只接入两相，或三相中有一相接触不良，则机器声
音很不正常，应立即切断电源仔细检修，否则会烧毁电机。这些常识应在开始使用超净台时就向工作人员讲解清楚，免除不应造成事故与损失。
超净台进风口在背面或正面的下方，金属网罩内有一普通泡沫塑料片或无纺布，用以阻拦大颗粒尘埃，应常检查、拆洗，如发泡沫塑料老化，及时更换。除进风口以外，如有漏气孔隙，应当堵严，如贴胶布，塞棉花，贴胶水纸等。工作台正面的金属网罩内是超级滤清器，超级滤清器也可更换，如使用年久，尘粒堵塞，风速减小，不能保证无菌操作时，则可换上新的。
超净台使用寿命的长短与空气的洁净度有。在温带地区超净台可在一般实验室使用，然而在热带或亚热带地区，由大气中含有量的花粉，或多粉尘的地区，超净台则宜放在较好的有双道门的室内使用。任何情下不应将超净台的进风罩对着开敞的门或窗，以免影响滤清器的使用寿命。
无菌室应定期用70%酒精或0.5%苯酚喷雾降尘和消毒，用2%新洁尔灭抹拭台面和用具（70%酒精也可），用福尔马林（40%甲醛）加少量钾定期密闭熏蒸，配合紫外线灭菌灯（每次开启15分钟以上）等等消毒灭菌手段，以使无菌室经常保持度的无菌状。接种箱内部也应装有紫外线灯，使用前开灯15分钟以上照射灭菌，但凡是照射不到之处仍是有菌的。在紫外线灯开启时间较长时，可激发空气中的氧分子缔合成臭氧分子，这种气分有很强的杀菌作用，可以对紫外线没有直接照到的角落产生灭菌效果。由于臭氧有碍健康，在进入操作之前
应先掉紫外线灯，后十多分钟即可入内。
在超净工作台上亦可吊装紫外线灯，但应装在照明灯罩之外，并错开照明灯的排列，这样在工作时不妨碍照明。若将紫外线灯装入照明灯罩（玻璃板）里面，这是毫无用处的，为紫外线不能穿透玻璃，它的灯管是石英玻璃，而不是硅酸盐玻璃的。
接种室内力求简洁，凡与本室工作无直接关系的物品一律不能放入，以保持无菌状。接种室内的空气与外界空气应绝对隔绝，预留的通气孔道应尽量密闭。通气孔道可设上下气窗，气窗面积宜稍大，需覆上4层纱布作简单滤尘。在一天工作之后，可开窗充分换气，然后再予以密闭。总之，既清洁无尘无菌，又空气新鲜，适宜工作。覆在通气窗上的纱布应经常换洗。但是上述种种措施只是理想的设计方案，往往不易全面做到，其实只严格无菌操作手续，在门窗敞开的室内，有一超净台的保护，接种的污染率仍可控在生产上可以容忍的水准。
⑸酸度计
①介绍：是一种常用的仪器设备，主要用来精密测量液体介质的酸碱度值，配上相应的离子选择电极也可以测量离子电极电位MV值，pH
计被广泛应用于环保、污水处理、科研、制药、发酵、化工、养殖、自来水等领域。该仪器也是食品厂、饮用水厂办QS、HACCP认证中的必备检验设备。
厂家：青岛得加利电子有限公司
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②使用方法：
1、校正：先将仪器斜率调节器调节在100%位置，再根据被测溶液的温度，调节温度调节器到该温度值。
2、定位：把复合电极插入仪器。选择一种最接近样品pH值的缓冲溶液，把电极放入这一缓冲溶液里，摇动烧杯，使溶液均匀。待读数稳定后，该读数应是缓冲溶液的pH值，
3、测量：经过pH标定的仪器，即可用来测定样品的pH值。用蒸馏水清洗电极，用滤纸吸干电极球部后，把电极插在盛有被测样品的烧杯内，轻轻摇动烧杯，待读数稳定后，就显示被测样品的pH值。测量完毕套上保护帽，帽内放少量补充液（3mol/L的氯化钾溶液），保持电极球泡湿润。
试剂：各种大量元素、植物生长调节剂、各种有机物质。
四、实验步骤
1.在教室的带领下，参观学校植物组织培养实验室，并设计出植物组织培养实验室的组成。
2.完成植物组织培养实验室常见仪器的使用方法。
3.培养瓶和相关用具的清洗准备。
4.植物材料的准备。
五、试验讨论及思考题解答
1.请绘制出植物组织培养实验室的结构示意图，并说明各分室的结构及功能。
①药品储藏室：主要用于存放各种化学药品，要求室内干燥、通风、避光、应配制、备药品柜、冰箱等。各类化学试剂应按要求分类存放，需要低温保存的药剂应置于冰箱内保存，有毒药品应按规定存放和管理。
②洗涤室：用于玻璃器皿、用具及实验用具的洗涤、干燥和存放;；培养材料的预处理与清洗：组培苗的出瓶、清洗与整理等。要求有电源、自来水和水槽，上下水道畅通，排水良好，地面耐湿、防滑，便于清洁。应配备工作台、烘箱、晒瓶架、周转筐、毛刷等。
培养基配制室：用于培养基的配制，还可以分为称重分室和配制分室。药品称量需配制各种规格的天平，包括普通天平和分析天平。培养基配制需要配备工作台、蒸馏水器、电炉（电饭锅或微波炉）、水浴锅、磁力搅拌器、过滤装置、酸度计、分注器、各种试管、三角瓶、烧杯、量筒、吸管、移液管及移液管架以及贮藏母液的冰箱、移动式载物台（医用小推车）、周转筐等。
③灭菌室：用于培养基、器皿、用具、及其它物品的灭菌。灭菌室根据工作量的大小决定其面积的大小，一般控制在30～50㎡。要求、
通风、明亮，墙壁和地面应防潮、耐高温。应配置高压电源和排水设施、高压蒸汽灭菌装置、干热消毒柜或烘箱、细菌过滤装置及移动式载物台、周转筐等。
④培养室：用于对接种到培养瓶等器皿中的植物离体材料进行控制条件下的培养。培养室内放置培养架，方便操作，.并充分利用空间。培养室的大小可根据生产规模和培养架的大小、数目及其他附属设备而定，其设计以充分利用空间和节省能源为原则。可采取多室设计方式，每个培养是面积不宜过大，约10～20㎡，以满足不同培养材料对环境条件控制的不同要求，也便于对同室内环境条件的均匀控制。室内天花板和内墙最好用塑钢板或瓷砖装修，地面铺设水模式或瓷砖，以保持室内明亮、平整，并方便清洁和消毒；室内还要安装紫外灯，定时进行杀菌处理。培养室内需要安装空调，以控制室内温度，一般要求保持在20～27℃之间，低于15℃或高于35℃对植物的生长不利。培养室的光源一般使用白色日光灯，光周期可采用自动定时器来控制，
光照强度一般控制为1000～6000lx，每天光照时间薇10～16h。需要大量的暗培养时可以增设暗培养室，或使用暗箱培养。培养室内的相对湿度保持在70％～80％为宜。湿度过高，容易使培养及污染；湿度过低，容易使培养基失水变硬，影响培养物生长。在梅雨季节可使用除湿机人工除湿，干燥季节可利用加湿器来增加湿度，也可采取防治水盆的方法来调节湿度。
2.请详细说明高压灭菌锅、超净工作台的操作要点。
⑵超净公作台的操作要点：①接通电源。将电源插入插座，并打开整个超净工作台的总开关后，可以看到按钮面板个电源指示灯亮，表示电源处于接通状态。(通常，实验室的超净工作台总电源开关一直是
处于打开状态)。②清理台面，拉下防尘玻璃挡板，紫外杀菌。若超净工作台内堆放有与本实验无关的物品，可先移出，用酒精棉球清洁台面后可预先放入实验相关的且能以紫外照射的材料进行紫外灭菌。拉下工作台前面的玻璃挡板，并关严。找到按键板，按下标有“杀菌”字样的按钮即可开启紫外灯管(再次按下该按钮则会闭紫外灯)进行杀菌，一般照射30min即可。【注意】可将操作台面大致分为废物回收区、物品放置区和操作区。操作区内尽量不要堆放物品;不要在杀菌的同时开启风机。③开启风机和照明系统，开始实验。紫外杀菌结束前应先开启风机，再关闭紫外灯，最后掀起玻璃挡板开始实验。按钮板面上面标记“开启/停止”字样的按钮是风机的开启和关闭的按钮。正常情况下，风机的最低档在出厂时候已经满足风速要求。使用时可多次按下“风量调节”按钮选择需要的风速大小。按动风量调节按钮后，风速的变化为：“低→高→低”的不断循环，并且有相应的灯指示风量状态。标有“照明”字样的按钮是超净工作台内照明灯的开关，可根据需要开启。【注意】1.试验操作时候尽量避免快速且大幅度移动，以减少对超净工作台内气流的扰乱，避免外界细菌进入。
2.有的超净台同时具有正压和负压系统，一般情况下使用正压系统;当试验的试剂可能有气体逸出，对人员造成刺激性伤害时候，可使用负压风道系统，使所有的气体只在超净台内部循环。④结束试验，清理台面，关闭风机，拉下防尘玻璃挡板。试验后，清理台面废弃物后，用酒精棉球擦拭台面。关闭风机后拉下防尘玻璃挡板。若下面还有试验，可打开紫外灯，为接下来再次使用做好准备。
烟草植物组织培养
烟草植物组织培养实验实验目的一学习和掌握植物组织培养技术，理解植 物细胞的全能性。实验原理二年代初期发展起来的一项生物技术。由于其拥有占地世纪30植物组织培养是从20少、繁殖系数大等特点，现以在全世界的园林植物尤其是花卉的种苗繁育上得到广泛应用。本文着重介绍组织培养技术的理论原理、操作过程、生产技术以及经济核算等方面的内容，使大家对组织培养在园林植物尤其是花卉的种苗繁育的应用有所了解，为以后的实际操作提供依据。在植物组织培养中，主要目标是诱导愈伤组织形成和形态发生，使一个离体的细胞、一块组织或一个器官的细胞，通过脱分化形成愈伤组织，并由愈伤组织再分化形成植物体。从一块外植体形成典型的愈伤组织，大致要经历三个时期：起动期、分裂期和形成期。①起动期是指细胞准备进行分裂的时期。用于接种的外植体的细胞，通常都是成熟细胞，处在静止状态。起动期是通过一些刺激因素（如机械损伤、改变光照强度、增加氧等）和激素的诱导作用，使外植体细胞的合成代谢活动加强，迅速进行蛋白质和核酸的合成。机械损伤能诱导植物体细胞开始分裂，如伤口上会出现愈伤组织。在植物组织培养中沿用了愈伤组织这一名词，但是植物组织培养中诱导外植体细胞分裂形成的愈伤组织，大都不是损伤的结果。外源的生长素类物质对诱导细胞开始分裂效果很好，因此生长素类物、萘乙4-D4-二氯苯氧乙酸2，，质在植物组织培养中得到广泛应用，常用的有生长素（2）细胞分裂素IBA、吲哚丙酸IPA和吲哚丁酸NAA酸、萘乙酰胺NAD和吲哚乙酸IAA））等。分裂期是，KT-30CPPU糠氨基嘌呤（KT）氯吡苯脲（6-（苄氨基嘌呤6-BA、6-指外植体细胞经过诱导以后脱分化，不断分裂、增生子细胞的过程。处于分裂期的愈伤组织的特点是：细胞分裂快，结构疏松，颜色浅而透明。外植体的脱分化因植物种类、器官来源及其生理状况的不同而有很大差别。例如，烟草、胡萝卜等植物的脱分化比较容易，禾本科植物的脱分化比较难；花的脱分化比较容易，茎、叶的脱分化比较难；幼嫩组织的脱分化比较容易，成熟的老组织脱分化比较难。分化期是指在分裂期的末期，细胞内开始出现一系列形态和生理上的变化，从而使愈伤组织内产生不同形态和功能的细胞。这些细胞类型有薄壁细胞、分生细胞、色素细胞、纤维细胞，等等。外植体的细胞经过起动、分裂和分化等一系列变化，形成了无序结构的愈伤组织。如果在原来的培养基上继续培养愈伤组织，会由于培养基中营养不足或有毒代谢物的积累，导致愈伤组织停止生长，甚至老化变黑、死亡。如果要让愈伤组织继续生长增殖，必须定期地（如2～4周）将它们分成小块，接种到新鲜的培养基上，这样愈伤组织就可以长期保持旺盛的生长。愈伤组织的形态发生方式经过起动、分裂和分化期产生的愈伤组织，其中虽然发生了细胞分化，但是并没有器官发生。只有满足某些条件，愈伤组织的细胞才会发生再分化，产生芽和根，进而发育成完整植株。愈伤组织的形态发生方式主要有不定芽方式（器官发生型）和胚状体方式两种。不定芽方式是在某些条件下，愈伤组织中的分生细胞发生分化，形成不同的器官原基，再逐渐形成芽和根。胚状体方式是由愈伤组织细胞诱导分化出具有胚芽、胚根、胚轴的胚状结构，进而长成完整植株。这种由愈伤组织中的薄壁细胞不经过有性生殖过程，直接产生类似于胚的结构，叫做胚状体。在植物组织培养中，不定芽方式和胚状体方式是愈伤组织形态发生的两种最常见和最重要的方式。胚状体方式比不定芽方式有更多的优点，如胚状体产生的数量比不定芽多，胚状体可以制成人工种子，等等。 培养基的主要指标为营养的组分，植物生长物质的浓度，特别是后者对外植体的分化1 / 5 矿质营养。矿质营养又叫无机营起着极其重要的作用。培养基的组织成分主要包括： 1. 、养，是指植物在生长发育的过程中所需要的各种化学元素，其中包括大量的元素如N、P 2. Mn、Zn、Cu等，其对植物的生长发育中有着重要的生理作用。FeK和微量元素如、B、维生素。维生素能够以辅酶的形式参与多种酶系的反映，直接影响到蛋白质、糖、脂肪等植物生长物质。其
植物组培实验室配置清单
植物组培实验室建设 目录 1、功能简述 (1) 1)准备室 (1) 2)灭菌室 (1) 3)缓冲间 (2) 4)无菌操作室 (2) 5)培养室 (2) 6)驯化室 (3) 7)温室 (3) 8)辅助实验室（非必要） (3) ①细胞学实验室 (3) ②生理生化分析室 (4) 2、设备及耗材清单 (4) 1)试验设备清单 (4) 2)常备试剂清单 (6) ①MS培养基必备试剂 (7) ②常备激素及辅助试剂 (7)
植物组培实验室建设 1、功能简述 植物组织培养实验室一般应包括准备室、洗涤灭菌室、无菌操作室、培养室、缓冲间，这也是组织培养实验所必须具备的基本条件。要培养成大田苗还要有相应的驯化室、温室。 1)准备室 用途：又叫化学实验室，进行一切与实验有关的准备工作。完成所使用的各种药品的贮备、称量、溶解、器皿洗涤、晾置、培养基配制与分装、培养基和培养器皿的灭菌、培养材料的预处理等。 设备：准备室应具备实验台、药品柜、水池、落水架、仪器、药品、防尘橱（放置培养容器）、冰箱、天平（0.1g、0.0001g分度各一台）、干热消毒柜（可省去）、蒸馏水器（可省去）、酸度计(又称pH计，为节约成本和减少维护可用pH试纸代替)、过滤灭菌器、培养皿、培养瓶、三角瓶、试管、电磁炉、水浴锅、漏斗、量筒、刻度移液管（为操作简便起见可购买移液枪1ml、5ml各一个代替）、玻璃棒、酒精灯、镊子、试管架、琼脂、纱布、棉塞、封口膜、大量元素、微量元素、蔗糖、有机物和植物激素的母液（详细内容见附表）、NaOH、盐酸、滤纸、脱脂棉、橡皮筋、牛皮纸等。 图1 准备室图2 灭菌室 2)灭菌室 用途：完成各种器具的保存、培养基的灭菌等。 1
植物组织培养报告
植物组织培养报告内部编号：（YUUT-TBBY-MMUT-URRUY-UOOY-DBUYI-0128）
大蒜茎尖的组织培养 谢婷婷江宋青万嫣文吕凌宇一、实验目的 掌握植物组织培养的相关理论知识及操作方法； 通过自行设计并完成实验，提高动手能力和思维能力； 利用植物细胞的全能性，使大蒜茎尖经过脱分化作用形成愈伤组织，再分化为有结构的组织和器官，最终增殖培育出大量品质优良的大蒜试管苗。二、实验原理 植物组织培养是利用植物细胞的全能性原理。植物组织培养是在无菌环境下，将离体的植物器官、组织以至单个细胞，在人工配置的培养基上培养，使其能够继续生长，甚至分化发育成一完整植株的过程。植物的组织在培养条件下，原来已经分化停止生长的细胞，又能重新分裂，形成没有组织结构的细胞团，即愈伤组织。这一过程称为“脱分化”。已经脱分化的愈伤组织，在一定条件下，又能重新分化形成输导系统以及根和芽等组织和器官，这一过程称“再分化”。 三、实验材料、试剂和器材 1 供试材料 以购于府前菜场的大蒜为实验材料，实验在丽水学院生态学院组培实验室进行。 2 仪器与设备 超净工作台、培养事、电子天平、烧杯、容量瓶、玻璃棒、量筒、移液
管。 3 试剂 70%酒精、95%酒精、0.1%升汞、蔗糖、琼脂条、6-BA（1.5 mg/L；2.0 mg/L）、2,4-D（2.0 mg/L）、NAA（1.0 mg/L；）、IBA（2.0 mg/L）、10倍的大量元素、100倍的微量元素、100倍的铁盐、100倍的有机物。 四、实验步骤 1.培养基的配制及灭菌 诱导培养基：MS+6-BA 2.0 mg/L+2,4-D 2.0 mg/L 出芽培养基：MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 1.0 mg/L 生根培养基：MS+IBA 2.0 mg/L （1）将MS母液（10倍的大量元素、100倍的微量元素、100倍的铁盐、100倍的有机物）按顺序排列、检查是否失效。 （2）在装有3/4蒸馏水的容器中加入0.7%琼脂和3%蔗糖，加热溶化。（3）依次吸取适量各种母液移到容器中。 （4）用蒸馏水定容到相应体积。 （5）调节pH值(用0.1M的NaOH或HCl调节)至5.8-6.0。 （6）向培养基中加入适量激素。 （7）将配制好的培养基进行分装（20-30ml/瓶）。 （8）用两层称量纸包扎瓶口，并用橡皮筋扎牢，然后在高压灭菌锅中121 ℃下灭菌 20 min 。取出三角烧瓶放在台子上，冷却后备用。接种操作所需的一切用具（烧杯、培养皿、灭菌水等），需同时灭菌。 （9）将灭菌后的培养基于常温下放置一星期，观察有无污染。
组织培养实验报告
植物组织培养实验报告 一、实验目的 1．掌握无菌操作的植物组织培养方法； 2．通过配置ms培养基母液，掌握母液的配置和保存方法； 3．通过诱导豌豆根、茎、 叶形成愈伤组织学习愈伤组织的建立方法； 4．通过诱导豌豆茎、叶形成愈伤组织学习愈伤组织的建立方法； 5．了解植物细胞通 过分裂、增殖、分化、发育, 最终长成完整再生植株的过程, 加深对植物细胞的全能性的理 解。 二、实验原理（一）植物组织培养 植物组织培养是把植物的器官，组织以至单个细胞，应用无菌操作使其在人工条件下， 能够继续生长，甚至分化发育成一完整植株的过程。植物的组织在培养条件下，原来已经分 化停止生长的细胞，又能重新分裂，形成没有组织结构的细胞团，即愈伤组织。这一过程称 为“脱分化作用”，已经“脱分化”的愈伤组织，在一定条件下，又能重新分化形成输导系统 以及根和芽等组织和器官，这一过程称“再分化作用”。（二）植物细胞的全能性 植物细胞的全能性即是每个植物的本细胞或性细胞都具有该植物的全套遗传基因，在一 定培养条件下每个细胞都可发育成一个与母体一样的植株。（三）组织的分化与器官建 成 外植体诱导出愈伤组织后，经过继代培养，可以在愈伤组织内部形成一类分生组织即具 有分生能力的小细胞团，然后，再分化成不同的器官原基。有些情况下，外植体不经愈伤组 织而直接诱导出芽、根。 （四）培养基的组成 培养基中各成分的比例及浓度与细胞或组织的生长或分化所需要的最佳条件相近，似成 功地使用该培养基进行组织培养的主要条件。营养培养基一般由无机营养、碳源和能源、维 生素、植物激素（生长调节剂）和包括有机氮、酸和复杂物质的添加剂组成。 三、实验器材 高压灭菌锅、超净工作台、烘箱、培养室镊子、记号笔、橡皮筋、玻 璃器皿、三角烧瓶、烧杯、量筒、剪刀、棉塞、绳子、牛皮纸、酒精灯、喷雾器等。 四、实验材料 豌豆种子 五、实验药品 药品、70% 酒精、 0.1% 升汞、ms培养基、蒸馏水、naoh、 84消毒液、蔗糖、琼脂 等。 六、实验步骤 （一）培养基母液的配制 表1.ms培养基个成分的含量（单位：mg/l） 表2.ms培养基所需母液以及扩大倍数 名称大量元素微量元素 ca盐 mg盐 fe盐有机肌醇激素 扩大倍数 50 50 50 50 50 100 100 100 定容体积(ml) 500 500 500 500 500 200 200 50 吸取毫升数/l 20 20 20 20 20 10 10 5 （注：吸取毫升数为每升培养基所吸取的母液的体积） 表3.配制母液所需的药品及称取量
烟草植物组织培养
烟草植物组织培养实验 一实验目的学习和掌握植物组织培养技术。深刻理解植物细胞的全能性。 二实验原理 植物组织培养是从20世纪30年代初期发展起来的一项生物技术。由于其拥有占地少、繁殖系数大等特点，现以在全世界的园林植物尤其是花卉的种苗繁育上得到广泛应用。本文着重介绍组织培养技术的理论原理、操作过程、生产技术以及经济核算等方面的内容，使大家对组织培养在园林植物尤其是花卉的种苗繁育的应用有所了解，为以后的实际操作提供依据。 在植物组织培养中，主要目标是诱导愈伤组织形成和形态发生，使一个离体的细胞、一块组织或一个器官的细胞，通过脱分化形成愈伤组织，并由愈伤组织再分化形成植物体。从一块外植体形成典型的愈伤组织，大致要经历三个时期：起动期、分裂期和形成期。①起动期是指细胞准备进行分裂的时期。用于接种的外植体的细胞，通常都是成熟细胞，处在静止状态。起动期是通过一些刺激因素（如机械损伤、改变光照强度、增加氧等）和激素的诱导作用，使外植体细胞的合成代谢活动加强，迅速进行蛋白质和核酸的合成。机械损伤能诱导植物体细胞开始分裂，如伤口上会出现愈伤组织。在植物组织培养中沿用了愈伤组织这一名词，但是植物组织培养中诱导外植体细胞分裂形成的愈伤组织，大都不是损伤的结果。外源的生长素类物质对诱导细胞开始分裂效果很好，因此生长素类物质在植物组织培养中得到广泛应用，常用的有生长素（2，4-二氯苯氧乙酸2，4-D、萘乙酸NAA、萘乙酰胺NAD和吲哚乙酸IAA、吲哚丙酸IPA和吲哚丁酸IBA）细胞分裂素（6-苄氨基嘌呤6-BA、6-糠氨基嘌呤（KT）氯吡苯脲（KT-30，CPPU））等。分裂期是指外植体细胞经过诱导以后脱分化，不断分裂、增生子细胞的过程。处于分裂期的愈伤组织的特点是：细胞分裂快，结构疏松，颜色浅而透明。外植体的脱分化因植物种类、器官来源及其生理状况的不同而有很大差别。例如，烟草、胡萝卜等植物的脱分化比较容易，禾本科植物的脱分化比较难；花的脱分化比较容易，茎、叶的脱分化比较难；幼嫩组织的脱分化比较容易，成熟的老组织脱分化比较难。分化期是指在分裂期的末期，细胞内开始出现一系列形态和生理上的变化，从而使愈伤组织内产生不同形态和功能的细胞。这些细胞类型有薄壁细胞、分生细胞、色素细胞、纤维细胞，等等。外植体的细胞经过起动、分裂和分化等一系列变化，形成了无序结构的愈伤组织。如果在原来的培养基上继续培养愈伤组织，会由于培养基中营养不足或有毒代谢物的积累，导致愈伤组织停止生长，甚至老化变黑、死亡。如果要让愈伤组织继续生长增殖，必须定期地（如2～4周）将它们分成小块，接种到新鲜的培养基上，这样愈伤组织就可以长期保持旺盛的生长。愈伤组织的形态发生方式经过起动、分裂和分化期产生的愈伤组织，其中虽然发生了细胞分化，但是并没有器官发生。只有满足某些条件，愈伤组织的细胞才会发生再分化，产生芽和根，进而发育成完整植株。愈伤组织的形态发生方式主要有不定芽方式（器官发生型）和胚状体方式两种。不定芽方式是在某些条件下，愈伤组织中的分生细胞发生分化，形成不同的器官原基，再逐渐形成芽和根。胚状体方式是由愈伤组织细胞诱导分化出具有胚芽、胚根、胚轴的胚状结构，进而长成完整植株。这种由愈伤组织中的薄壁细胞不经过有性生殖过程，直接产生类似于胚的结构，叫做胚状体。在植物组织培养中，不定芽方式和胚状体方式是愈伤组织形态发生的两种最常见和最重要的方式。胚状体方式比不定芽方式有更多的优点，如胚状体产生的数量比不定芽多，胚状体可以制成人工种子，等等。 培养基的主要指标为营养的组分，植物生长物质的浓度，特别是后者对外植体的分化起着极其重要的作用。培养基的组织成分主要包括：1. 矿质营养。矿质营养又叫无机营养，
组培实验室管理制度
组培实验室管理制度 组培实验室是重要的研发场所，为了让实验室更好的运转，提高研发能力，加强实验室科学化管理和规范实验室工作人员行为规范，特制定本规章制度。 研发人员的管理制度： 一、工作人员必须严格遵守公司规章制度，按时上下班，如需请假应按照公司请假流程上报经上级领导同意后方可，未经上级领导同意私自离岗或不到岗的，视为旷工。不得在工作时间早退、迟到、串岗、脱岗等，违反者按公司的奖罚条例处理。 二、研发技术人员是公司宝贵的人才，在完成工作任务的同时，不断努力学习，查阅专业文献，了解业内最新研究进展，部门会定期组织专业技术交流会, 提高自己的业务水平和专业技术水平。 三、工作人员应树立严谨的科学发展观，养成实事求是、戒骄戒躁和严肃认真的科学态度和培养良好的工作态度。 四、工作人员进接种室之前，要在缓冲室换拖鞋，在接种室里面，要更换实验 服，配戴一次性帽子、口罩以及手套，以免造成污染。接种的时候注意酒 精灯，以免造成烫伤或者严重的着火。五、工作中应养成细心观察和及时记录的良好学习精神和习惯，在公司指定的实验记录本上记录每天实验内容和问题，并及时整理项目资料，完善公司数据库。 六、定期进行工作总结和汇报，同事之间，上下级之间及时了解实验进展, 对遇到问题及时处理和解决 七、实验室内一切用具和物品不得擅自带出实验室，建立健全设备仪器登记建档和领用手续，工作人员不得将个人物品以及食物带入接种室。
八、作为研发人员，谨记保密条例，工作笔记一律不得带出公司。 九、实验室不得私自接待参观学习的人员。非实验室工作人员不得随意进出实验室。 十、实验室担负着苗木科学研发的科研工作，工作人员开展工作时应本着严谨、严肃和专注的工作态度与敬业精神，上班时间不做与工作无关的事情，如闲聊、听音乐、刷微信、看微博、打游戏等。 实验室的管理制度： 一、随时保持工作场所清洁和干燥，贵重仪器专人看护，责任到人，使用后及时清理、擦拭，定期维护和保养，做到台面、桌面、地面、水槽、仪器五净。 二、仪器、药品、工具等用后要立即归还原位，随时保持工作场所的整洁，节约用水，用电及消耗性药品、试剂，定期盘查常用药品及试剂，定期申购。 三、定期整理培养架，每个培养架的擦拭，根据植物不同、每个阶段不同而适当的开灯管。不用的灯管及时关掉，以免浪费并且造成培养室温度增高。一旦发现污染瓶苗应及时清理，严令禁止在培养室内打开污染器皿。注意培养室的清扫以及消毒， 四、凡属技术文件、药剂配方资料、技术专项辅导资料、新技术新品种创新研发等相关资料，按公司保密条例统一交由指定人员负责管理，未经批准，任何个人不得泄露、篡改和与其他人员或部门传阅，对于各自使用的实验记录本，定期由上一级领导批示，签名，用完后交由指定人员保管并领取下一本，严格做好保密工作，如有违规，公司将追究行政及经济责任。 五、高压灭菌器等危险仪器，正常工作时间外不得使用，若实验任务紧急确需使用时，应事先得到实验室负责人批准方可。当高压灭菌器处在高压工作时，工作人员不
烟草组培苗实验步骤
烟草叶片的组织培养 一、实验原理与实验步骤 在植物组织培养中，主要目标是诱导愈伤组织形成和形态发生，使一个离体的细胞、一块组织或一个器官的细胞，通过脱分化形成愈伤组织，并由愈伤组织再分化形成植物体。从一块外植体形成典型的愈伤组织，大致要经历三个时期：起动期、分裂期和形成期。 植物材料：烟草植株 药品：（2,4-D、NAA、6-BA浓度均可）、1mol/L NaOH、1mol/L HCL 蒸馏水、70%酒精0.01%升汞 仪器：玻璃杯、玻璃棒、pH试纸(5.5-9.0) 、1瓶无菌水、1个无菌烧杯、1包无菌滤纸、 1个无菌白瓷板、培养瓶若干移液器、微波炉、灭菌器、超净工作台、酒精灯、解剖刀、镊子 二、实验方法与步骤
注意： 1、大量元素按照使用时高10倍的数值称取，分别将各种化合物称量后，除CaCl2·2H2O单独配制外，其余化合物混合在500ml烧杯中加适量蒸馏水溶解，用玻璃棒搅拌促溶，倒入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度，置小口瓶中保存，贴上标签注明化合物名称（或编号），浓缩倍数，配制日期和配制者姓名，CaCl2·2H2O配制同上置于另一小口瓶中。 2、微量元素母液的配制 按要求浓缩100倍的数值称取，分别将各种化合物称量除铁盐（FeSO4·7H2O 和Na2-EDTA.2H2O）作为一组单独配制外，其余化合物可混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后，定容在1000ml容量瓶中，置小口瓶中保存，贴上标签 3、铁盐配制将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O分别溶于450ml蒸馏水中，加热，（很重要）不断搅拌，溶解后，两液混合，调PH至5.5加水定容至1000ml，置于小口瓶中，贴上标签。 4、有机物母液配制，按母液要求浓缩50倍，除蔗糖按3%单独临时称量外，其余分别称量后，溶解，定容在500ml容量瓶中，置于小口瓶中保存，贴上标签。5．母液最好在2~4℃的冰箱中贮存，特别是有机类物质，贮存时间不宜过长，无机盐母液最好在一个月内用完，如发现有霉菌和沉淀产生，就不能再使用。（1）制备母液和营养培养基时，所用蒸馏水或无离子水必须符合标准要求，化学药品必须是高纯度的（分析纯）。 （2）称量药物采用高灵敏度的天平，每种药品专用一药匙。 生长调节剂母液配制： 为了操作方便，节约时间，生长调节剂也可如同配制母液一样，先配成原液，这样配制培养基时只要稍加计算，按需要量取即可。 不同药品在配制时若不溶于水，可用少量不同的溶剂先溶解，萘乙酸（NAA），吲哚乙酸（IAA）,赤霉素（GA3），2，4-D等生长素和玉米素（ZT）可先用少量95%酒精溶解，然后加水，如溶解不完全再加热。激动素（KT）和6-苄基嘌呤（BA）可溶于少量1mol/L的盐酸中，叶酸需用少量稀氨水溶解。 称取50mg生长调节物质，溶解后，在100ml的容量瓶中定容，配制的母液每毫升则含有生长调节物质0.5mg，配制后一般要求在低温（0~4℃）保存，配制培养基时如每升（1000ml）需添加的生长调节剂物质为0.5mg时，则取1ml母液即可。 三、培养基配制和灭菌 本次实验使用 （1）愈伤组织诱导及其幼芽分化培养基:MS+2,4-D 0.5 mg/L +6-BA 1.0 mg/L；（2）幼芽增殖培养基：MS+6-BA 1.0 mg/L +NAA 0.2 mg/L； （3）生根培养基：MS+NAA 0.2 mg/L。 注意事项：上述培养基均在MS固体培养基溶化后降低到50左右后，加入相应激素所得， MS固体培养基的配置过程在此不作过多赘述
植物组织培养实验报告
植物组织培养实验报告 学院：生命科学技术学院 班级：11生物技术(制品) 学号：2011192017 姓名：李鹏
植物组织培养实验报告 实验一植物组织培养母液的配制 一、实验目的 1.了解植物组织培养基本培养基的组分及其作用。 2.学习掌握植物组织培养MS培养基的配制方法。 二、实验原理 培养基是植物组织培养中离体组织赖以生存和发育的条件。大多数培养基的成分是有无机盐、有机化合物（碳源、维生素、肌醇、氨基酸等）、生长调节物质、水分和其他附加物等五大类物质组成。 无机盐类由大量元素和微量元素组成。大量元素中，氮类化合物主要以硝酸类和铵类化合物的形式存在，但在培养基中多用硝酸类，也可以将硝酸类和铵类混合使用；磷和硫常用磷酸盐和硫酸盐来提供；钾是培养基中主要的阳离子；钙、钠、镁的需要量较少。微量元素包括碘、锰、铜、锌、钴、铁。培养基中的铁离子，大多数以螯合物的形式存在，即硫酸亚铁与乙二胺四乙酸二钠的混合。 有机化合物包括碳源、维生素、肌醇、氨基酸等。培养中的植物组织和细胞的光合作用较弱，因此，需要在培养基中附加一些碳水化合物物来提供营养需要。培养基中的碳水化合物通常为蔗糖。蔗糖除了作为培养基的碳源和能源外，对维持培养基的渗透压也起着重要的作用。在培养基中加入维生素有助于细胞的分裂和增长。一般包括VB1、B6、烟酸、生物素、叶酸、泛酸钙、VC。肌醇在糖类的相互转化、维生素和激素的利用等方面具有重要的催进作用。 常用的植物生长调节物质包括以下三类：①生长素类：吲哚乙酸（IAA）、萘乙酸（NAA）、二氯苯氧乙酸（2,4-D）②细胞分裂素：玉米素（ZT）6-苄基嘌呤（6-BA）和激动素（KT）。③赤霉素：组织培养中使用的赤霉素只有一种，即赤霉酸（GA3）。 培养基中的其他附加物包括人工合成和天然的有机物附加物。其中最为常见的为酵母提取物。琼脂作为培养基的支持物，也是最常用的邮寄附加物，他可以是培养基呈固体状态，以利于组织和细胞的培养。 植物组织培养是否成功，在很大的程度上取决于培养基的选择之上。目前普遍使用的是MS培养基。MS固体培养基可用于诱导愈伤组织，或用于胚胎、茎段、茎尖及花药的培养等。MS培养基的硝酸盐、钾和铵的含量略高于其他的培养基，也是它被普遍使用的原因之一。 三、实验材料、试剂、配方和仪器设备 1．试剂 NH 4NO 3 ,KNO 3 ,KH 2 PO 4 ,CaCl 2 ·2H 2 O ,MgSO 4 ·7H 2 O,FeSO 4 ·7H 2 O Na 2-EDTA,MnSO 4 ·4H 2 O,ZnSO 4 ·7H 2 O,H 3 BO 3 ,KI,Na 2 MoO 4 ·2H 2 O CuSO 4 ·5H 2 O,CoCl 2 ·6H 2 O,肌醇，甘氨酸，盐酸硫胺素，盐酸吡哆醇，烟酸， 蒸馏水。 2.仪器设备 电子天平，烧杯（50ml、100ml、500ml）量筒（1000ml、100ml、25ml），容量瓶(1000ml、500ml、100ml)，移液管（10ml，5ml，1ml）试剂瓶，玻璃棒数支，药匙，称量纸等。
植物组培实验报告
姓名班级学号实验日期 科目植物生理学实验实验名称Effects of Hormones on Morphogenesis in Plant Tissue Culture 合作者指导教师成绩 Effects of Hormones on Morphogenesis in Plant Tissue Culture Introduction The technology of plant tissue culture is based on the principle of totipotency which means the capacity to generate a whole plant from any cells or an explant.During the plant tissue culture,the hormones affect largely on morphogenesis,such as Auxin and Cytokinin.And the content and ratio of these hormones can make different results.NAA is the routine reagent of auxine and6-BA is the reagent of cytokinin.For the tissue culture,we prepare the Murashige and Skoog’s medium(MS medium).The MS medium contains hormones,macronutrients and micronutrients(detailed ingredients are in Table 2-1).The pH in the medium will be adjusted with1M NaOH.We should prepare10MS media with hormones. During the whole operation of tissue culture,six potential source of contamination are air,water, growth media,equipment,explant and people.We use the laminar flow hood to remove most of microbes from air flow.The water and the media have been autoclaved.The tools should be kept sterile in the70%alcohol and flamed by alcohol burner.And we sterilize the explants with Ca(ClO)2and70% ethanol and sterile water. We use the NAA to induce the callus to generate root. Materials Fresh young leaves of tobacco(Nicotiana tabacum) MS medium:NH4NO3,KNO3,CaCl2,MgSO4,KH2PO4,MnSO4?H2O,ZnSO4?7H2O,KI,Na2MoO4?2H2O,CuSO4?5H2O,CoCl2?6H2O,Na2EDTA,FeSO4?7H2O,Nicotinic acid,Pyridoxine HCl(VB6), Thiamine HCl(VB1).Glycine,Mesoinositol. Agar,HgCl2,NAA,6-BA.2%Ca(ClO)2,sterile distilled water,70%ethanol,Beaker,Balance,10 Bottles,pH test strips,Laminar flow hood,Tween-80,Scissor,Forceps,Scalpels,Alcohol lamp. Method Part1:Prepare10bottles of culture. 1.Wash10bottles and dry them for a group. 2.Our group’s task:Weigh50mg6-BA and mix with sterile distilled water to be50mL1mg/ml solution in a bottle and mark the stock solution name,the date,and our group number. 3.Other groups prepare the MS medium culture,agar,NAA and sugar.In Table2-1,MS=100ml A+ 1ml B+10ml C+5ml D+10ml E.Every3group prepare1L medium=MS+1mg/ml6-BA+ 0.2mg/L NAA+3%sugar+0.7%agar.Boil the solution with induction cooker to mix thoroughly. 4.Adjust the pH of medium to 5.8with1M NaOH or HCl. 5.Repackage the1L medium to the bottles of3groups.10bottles of each group,30ml for each bottle. 6.Sterilize the culture bottles by autoclaving at115℃for30min.Store them at room temperature. Part2:Operation of plant tissue culture. 1.The space in the laminar flow hood has been sterilized by UV light for15min.We place all items in well order to start working. 2.Rinse4young leaves as explants in tap water for10-30min.The next operations are all aseptic.
烟草的组织培养技术
烟草的组织培养技术 一、目的与要求 1.验证“植物细胞全能性”理论。 2.学习用生长调节剂对植物器官发生的诱导方法。 二、实验原理 植物组织培养是指在无菌条件下，分离、并在培养基中培养离体植物组织（器官或细胞）的技术。植物组织培养的理论依据是植物细胞的全能性，即植物体的每个活细胞都有相同的遗传组成，在适当条件下具有繁殖出完整植株的能力。植物组织当中原本已经分化的细胞，组织、器官一旦脱离原有的机体环境，成为离体状态，在适宜的营养和外界条件下，就会表现出细胞的全能性，从已经分化的细胞通过脱分化，成为重新具有分裂能力的胚性细胞，并能再分化重新生长发育成完整的植株。 愈伤组织：是指一个离体的细胞、一块组织或一个器官的细胞，通过脱分化不断分裂、增生子细胞，这些细胞分裂快，结构疏松，颜色浅而透明，逐渐形成了无序结构的细胞团。 脱分化：已经分化的细胞，发生生理、生化的改变，退回到胚性细胞的过程。 再分化：经过脱分化的细胞或组织再次获得分化成不同功能的细胞、组织、器官或完整植物体。 三、材料和用具 1.材料：无菌烟草叶盘（已经诱导成芽），拟南芥。 2.用具：超净工作台、高压灭菌锅、培养箱、电子天平、移液器、手术解 剖刀、大、小镊子、30ml烧杯、500ml烧杯、药勺、玻璃棒、培养 瓶、平皿、试纸（PH5.4-7），报纸等。 3.试剂：MS培养基、0.5mol/LNaOH、1mol/L HCl。 四、操作步骤 （一）诱导培养基配制（见表1）
1.加MS储液（储液配置见附表） 大量元素和微量元素的母液都是高浓度的，为防止混合后发生沉淀，建议加完大量元素后先加水（约总体积3/4），再加各微量元素和有机成分。 铁盐也是微量元素，因为易发生沉淀，所以与其它微量元素分开配。储液中的铁盐存于棕色瓶中。配好的储液应当4℃保存。表1是4瓶培养基（1组）的配置方案。 表1 诱导培养基配制表 成分实际称取量 蒸馏水120 ml MS母液15 mL 蔗糖 4.5 g 用蒸馏水粗略定容至100ml pH值 5.8 琼脂 1.2 g 2.加蔗糖（3%）（m/v）。蔗糖是碳源，同时起到维持渗透压的作用。 3.调pH=5.8。pH过低，高温处里时间过长，都可能会使培养基不凝。 4.加琼脂（0.7-0.8%）（m/v）琼脂粉是固化剂、支持物。 （二）灭菌 1.培养基、解剖刀、镊子、平皿需在高压灭菌锅120℃，灭菌15min。 2.接种前打开无菌间和超净台紫外灯照射30min。 3.用肥皂洗手和手腕。进入无菌间，先用70%酒精或新洁尔灭喷手。关掉 无菌间棚顶紫外灯，打开超净台风机，关掉超净工作台上的紫外灯。（三）接种 1.坐在超净工作台前，用70%酒精棉球擦拭双手、培养瓶和超净台面。 2.待手上的酒精干了，点燃酒精灯。 3.将培养瓶的盖子旋松，但不要打开，放到无菌风道侧面备用。 将镊子、解剖刀在酒精灯外焰上灼烧，待其冷却后，放到培养皿上备用。 4.用镊子和解剖刀取出一块叶盘，放到平皿上，切取烟草叶芽1-2块，插 入培养基。
植物组织培养实验报告
植物组织培养实验报告 摘要：以大豆子叶为外植体，在MS培养基上附加不同浓度、不同种类的植物激素，以研究不同激素组合和不同浓度对大豆子叶愈伤诱导率的影响，并练习无菌操作。实验结果显示第2组即MS+6-BA（2.0mg/L)+NAA(1.0mg/L)和第 3 组即MS+KT（0.5mg/L)+2,4-D(1.0mg/L) 培养基中愈伤组织诱导率较高，为较佳的愈伤组织诱导组合。 关键词：大豆；植物组织培养；无菌操作；愈伤组织 1.材料与方法 1.1实验材料：大豆子叶 1.2实验试剂与仪器 （1）试剂：75%酒精、MS干粉、蔗糖、琼脂、植物生长调节剂（NAA、2，4-D、KT、6-BA）、无菌水、升汞、NaOH溶液 （2）仪器：超菌净工作台、圆纸片、培养皿、封口膜、称量纸、千分之一天平、不锈钢杯子、移液枪、试管、高压灭菌锅、注射器、酒精灯、镊子、手术刀、搁置架、烧杯、电炉。 1.3实验方法 1.3.1培养基的配制与灭菌 1.3.1.1 配制培养基的准备阶段 （1）准备80个培养试管及封口膜，2个小培养皿、1个大培养皿，用洗衣粉、自来水洗净，再用蒸馏水把每个培养试管、润洗一下。带晾干后将试管编号1-80；（2）在称量纸上用百分之一天平分别称取1.5g 琼脂4份，7.5g 蔗糖4份，在烧杯里用千分之一天平上称取1.185g MS干粉4份（烧杯不要清洗）；
（3）剪小圆纸片40，均分在两个小培养皿小能从中自由取出为宜；剪大圆纸片10，均分在两个大培养皿中。然后分别用报纸包好。 （4）把接种工具手术刀、镊子、剪刀等用报纸包好。 1.3.1.2 配制培养基 （1）在装有MS干粉的烧杯中按下表加入植物生长调节剂 实验所用的所有激素浓度均为0.5mg/mL 激素的加样量(ml) 编号培养基配置 6-BA NAA KT 2,4-D 1 MS+6-BA（1.0mg/L)+NAA(0.5mg/L) 0.5 0.25 2 MS+6-BA（2.0mg/L)+NAA(1.0mg/L) 1.0 0.5 3 MS+KT（0.5mg/L)+2,4-D(1.0mg/L) 0.25 0.5 4 MS+KT（1.0mg/L)+2,4-D(2.0mg/L) 0. 5 1.0 （2）用量筒量取250ml（稍多）蒸馏水，取一个不锈钢杯子加入150ml蒸馏水和称量好的琼脂，在电炉子加热沸腾2min，再加入混合好的MS培养基1号和蔗糖，混合沸腾2min，用剩余的蒸馏水定容至250ml； （3）当温度降到60℃左右时，将溶液pH 调至5.8，一般加4滴NaOH溶液即可；（4）取编号1-20的培养试管，用大量注射器以每瓶12.5ml 左右培养基分装在培养试管中，用封口膜封口，4支一捆捆扎好。 （5）用相同的方法配置2-4号培养基，并分装、捆扎。 1.3.1.3高压湿热灭菌 （1）将包好的接种工具，包好的培养皿，以及分装好的试管一起放到高温灭菌
2,4- D和6-BA对烟草组织培养的影响
2,4- D和6-BA对烟草组织培养的影响刘璐华南师范大学生命科学学院 08生物科学一班 20082501055 摘要：以烟草为实验材料，在不同配方的培养基（①MS + 6-BA0.5 mg/L + 2,4- D0.5mg/L ②MS + 2,4-D0.5mg/L ③MS + 6-BA2.0mg/L + 2,4-D0.5mg/L）中进行组织培养， 观察其愈伤组织的形成及分化。通过实验，我们得出，6-BA与2,4- D配合使用， 可以更有效地诱导愈伤组织的形成。单独使用2,4- D可促进愈伤组织根的分化，而 6-BA则可以有效地诱导愈伤组织芽的分化，且6-BA浓度为2.0mg/L时的效果比浓 度为0.5 mg/L时要好。 关键词：烟草组织培养2,4- D 6-BA 烟草(Nicotiana tabacum L.) ，属茄科烟草属，是植物组织培养的模式植物。生长调节物质是植物组织培养中不可缺少的一类物质，虽然用量极少，但它们对外植体愈伤组织诱导起着重要的调节作用，其中以生长素类和细胞分裂素最为常用。常用的生长素类有2,4- D、NAA、IAA、IBA，而细胞分裂素类主要有KT、6-BA、ZT、2-iP、4-PU和TDZ。 本研究以烟草叶片为材料，结合本小组和其他两组的实验结果，探讨2,4-D对愈伤组织形成与分化的作用，以及它和不同浓度6-BA共同使用的效果。 1 材料与方法 1.1材料 烟草（Nicotiana tabacum L.） 1.2方法 1.2.1配制MS培养基母液和植物生长调节物质母液。[1] 1.2.2配制培养基和灭菌。[1]培养基的配方为①MS + 6-BA0.5 mg/L + 2,4- D0.5mg/L（我们第2实验小组所做）②MS + 2,4-D0.5mg/L（由第1实验小组所做）③MS + 6-BA2.0mg/L + 2,4-D0.5mg/L（由第7实验小组所做） 1.2.3外植体（烟草叶片）的消毒与接种。[1]观察记录各组的愈伤组织生长情况以及污染情况。 1.2.4愈伤组织的继代培养。将愈伤组织转入配方为MS + 6-BA1.0mg/L + NAA0.5mg/L的培养基上进行继代培养，观察记录生长情况。 2 结果分析 2.1愈伤组织的形成 培养开始的3天内，外植体在形态上并无明显变化，只是其体积比接种时稍微大了一些。5天后，外植体从切口处开始膨大并出现黄色小颗粒，形成愈伤组织，外植体隆起且边缘有卷曲现象。而污染方面，我们第2组一共接种16瓶培养基，有5瓶出现了霉菌污染，污染率为31.25% 。 对比三个实验组的愈伤组织，可以发现，我们第2实验小组的愈伤组织生长情况与第7
植物组织培养实验室(组培室)规划设计
植物组织培养实验室 (组培室规划设计 2009年 05月 31日星期日 10:18一、实验室要求 理想的组织培养实验室应该建立在安静、清洁、远离污染源的地方, 最好在常年主风向的上风方向, 尽量减少污染。规模化生产的组织培养实验室最好建在交通方便的地方, 便于培养产品的运送。 实验室的建设均需考虑两个方面的问题:一是所从事的实验的性质, 即是生产性的还是研究性的, 是基本层次的还是较高层次的; 二是实验室的规模, 规模主要取决于经费和实验性质。 无论实验室的性质和规模如何,实验室设置的基本原则是:科学、高效、经济和实用。一个组织培养实验室必须满足 3个基本的需要:实验准备 (培养基制备、器皿洗涤、培养基和培养器皿灭菌、无菌操作和控制培养。此外,还可根据从事的实验要求来考虑辅助实验室及其各种附加设施,使实验室更加完善。 在进行植物组织培养工作之前,首先应对工作中需要哪些最基本的设备条件有个全面的了解, 以便因地制宜地利用现有房屋, 或新建、改建实验室。实验室的大小取决于工作的目的和规模。以工厂化生产为目的,实验室规模太小,则会限制生产,影响效率。在设计组织培养实验室时, 应按组织培养程序来没计, 避免某些环节倒排, 引起日后工作混乱。植物组织培养是在严格无菌的条件下进行的。要做到无菌的条件, 需要一定的设备、器材和用具, 同时还需要人工控制温度、光照、湿度等培养条件。 二、实验室组成 (一基本实验室 基本实验室包括准备室、洗涤灭菌室、无菌操作室、培养室、缓冲间,是组织培养实验所必须具备的基本条件。如进行工厂化生产,年产 4万 -20万, 需 3-4间实验用房,总面积 60平方米。
组培实验报告
学号姓名 学院 专业、班级 实验课程名称红豆杉愈伤组织的诱导培养 1. 实验设备及材料 （1）主要实验用具和仪器 冰箱，普通天平，分析天平，各种型号的试剂瓶（棕色和白色）、电炉，三角瓶，移液管，量筒，烧杯，容量瓶，玻璃棒，医用口杯，精密pH试纸（pH5.4~7.0），药勺，称量纸，标签纸，封口膜，橡皮筋，电炉，高压蒸汽灭菌锅、100ml三角瓶、500ml 搪瓷杯、25ml量筒、10ml和5ml吸管、解剖刀、已灭菌培养皿、酒精棉球、小块纱布、已灭菌培养皿和滤纸、枪状镊子、眼科手术剪、手术刀、酒精灯、100ml三角瓶、500或1000ml搪瓷杯、50ml量筒等。 （2）药品和试剂 硝酸铵、硝酸钾、氯化钙、硫酸镁、磷酸二氢钾、碘化钾、硫酸锰、硫酸锌、钼酸钠、硫酸铜、氯化钴、乙二胺四乙酸二钠、硫酸亚铁、甘氨酸、盐酸硫胺素、盐酸吡哆素、烟酸、肌醇、2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)、NAA（α-萘乙酸）、6-BA （6-苄基腺嘌呤）、浓盐酸、氢氧化钠、95%酒精、蒸馏水等。MS培养基母液、琼脂、蔗糖、生长调节物质、蒸馏水、1mol·L-1HCl、1mol·L-1NaOH、愈伤组织继代培养基、75％酒精。（3）实验材料 红豆杉种子 处于脱分化进程中的外植体 2．实验方法步骤及注意事项 I、MS培养基母液和常用试剂的配制 （1）培养基的成分 目前，不论液体培养还是固体培养，大多数植物组织培养中所用的培养基都是由无机营养物、碳源、维生素、生长调节物质和有机附加物等几大类物质组成。 （2）培养基的配制方法 配制培养基的最简单的方法是用市售培养基干粉溶解在蒸馏水里，加上蔗糖、琼脂和其他必要的补加物，再加入蒸馏水使之达到最终的容积。最后调节pH值，高压灭菌，于是制成所需要的培养基。 如果没有培养基干粉，则可采用以下两种方法来配制： 一个是按照配方规定的数量分别称量出各种成分，分别使它们溶解于水，然后再将它们混合在一起。 另一个是先配制一系列的浓缩贮备液(母液)，贮存在2～4℃冰箱内，待配培养基时取出，按比例稀释配用。此法较为常用。 （3）MS培养基母液的配制 母液的配制有两种方法：