细胞培养的个人总结(来自emuch)
总结---细胞培养
一．基本理论概论
原代培养: 也叫初代培养，指直接从体内取出的细胞、组织和器官进行的第一次的培养。
传代培养：将细胞从一个培养瓶转移到另外一个培养瓶即称为传代或传代培养。
细胞系：原代培养物成功传代后，则称之为细胞系。(如细胞系的生存期有限，则称之为有限细胞系；已获无限繁殖能力能持续生存的细胞系，称连续细胞系或无限细胞系。)
细胞株：通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志物称为细胞株。
培养类型：细胞培养，组织培养，器官培养。
细胞生长的方式：贴附生长，悬浮生长
培养细胞的形态（形态不一定，环境改变形态可能改变）：成纤维性型细胞，上皮型细胞（单层膜样生长），游走性细胞（游散生长，常有伪足跟突起）
二．培养过程及要点（切记无菌操作）
（一）工作环境的处理
1. 实验进行前，无菌室及无菌操作台以紫外灯照射30-60 分钟灭菌，以70 % 酒精擦拭无菌操作抬面，并开启无菌操作台风扇运转10 分钟后，才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以70 % 酒精擦拭无菌操作抬面。操作间隔应让无菌操作台运转10分钟以上后，再进行下一个细胞株之操作。
2. 实验用品以70 %酒精擦拭后才带入无菌操作台内。实验操作应在台面之中央无菌区域，勿在边缘之非无菌区域操作。无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如试管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暂时放置，其它实验用品用完即应移出，以利于气流之流通。
3. 小心取用无菌之实验物品，避免造成污染。勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口，亦不要在打开之容器正上方操作实验。容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约45°角取用，尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。吸管口切勿碰到容器瓶口
4. 工作人员应注意自身之安全，须穿戴实验衣及手套后才进行实验。对于来自人类或是病毒
感染之细胞株应特别小心操作，并选择适当等级之无菌操作台(至少Class II)。操作过程中，应避免引起aerosol 之产生，小心毒性药品，例如DMSO 及TPA等，并避免尖锐针头之伤害等。
5. 定期检测下列项目：
CO2 钢瓶之CO2 压力。CO2 培养箱之CO2 浓度、温度、及水盘是否有污染(水盘的水用无菌水，每周更换)。无菌操作台内之airflow 压力，定期更换紫外线灯管及HEPA过滤膜，预滤网(300 小时/预滤网，3000 小时/HEPA)。
6. 水槽可添加消毒剂(Zephrin 1:750)，定期更换水槽的水。
（二）试验用玻璃塑料用品清洗及其消毒灭菌
清洗：
（1）玻璃器皿的清洗（酸液由重铬酸钾，浓硫酸，蒸馏水配置）
浸泡—刷洗—浸酸—冲洗
（2）胶塞的清洗
刚买回的常含滑石粉等杂质，先用自来水冲洗后再按常规方法处理。2%NaoH或洗衣粉煮沸10-20分钟---1%稀Hcl浸泡30分钟或蒸馏水冲洗后再煮沸10-20分钟—晾干备用（3）塑料制品的清洗
2%NaoH浸泡过夜—自来水冲洗--5%稀Hcl浸泡30分钟—自来水和蒸馏水冲干备用。
（1）物理消毒法（紫外线，湿热，烘干，过滤）含碳酸氢钠溶液要过滤，高压会分解，培养液、平衡盐溶液及其它需要灭菌的液体：121℃, 15 磅, 20 分钟；布类、玻璃制品、金属器械等物品：先121℃, 15 磅, 20 分钟，然后在烘箱中烘干；玻璃瓶：干热灭菌170℃, 4 小时。
（2）化学消毒法（70%酒精，千分之一的新洁尔灭）
（3）抗生素：培养用液灭菌或预防培养物污染
（三）培养物的污染及控制
污染种类：
（1）细菌污染：培养细胞受细菌污染后，会出现培养液变混浊，pH改变。污染后细胞发生病理改变，胞内颗粒增多、增粗，最后变圆脱落死亡。
（2）真菌污染：培养细胞受真菌污染后，可见培养液中漂浮着白色或浅黄色的小点，有的散在生长，培养液一般不发生混浊；倒置显微镜下可见丝状、管状或树枝状的菌丝纵横交错在细胞之间或培养基中，有的呈链状排列。
（3）支原体污染：培养细胞受支原体污染后，部分敏感细胞可见细胞生长增殖变慢，部分细胞变圆，从瓶壁脱落。但多数细胞污染后无明显变化，或略有变化，若不及时处理，还会产生交叉污染。
（4）病毒污染：尽管病毒污染的细胞不影响原代培养，但生产疫苗是不安全的。因此，潜在病毒是细胞大量生产和疫苗、干扰素等生物制品制作中的难题。
（5）非同种细胞污染：
污染来源：
（1）不洁的动物组织标本：正常情况下组织来源是不带菌的，但由于取材不小心也会染菌，也有可能动物体本身带菌，不用浓的抗生素清洗，会导致培养污染。
（2）空气：如果无菌操作区与外界隔离不严，空气中会带菌。其次，超净台使用过久，滤板堵塞也会污染。工作时不带口罩外界气流过强会污染。再者，南方空气潮湿，空气中容易带菌，操作不注意会染菌。
（3）清洗消毒：培养用液除菌不彻底，培养器具清洗消毒不彻底。
（4）操作不过关
1、实验前未检查器械和液体是否污染
2、操作者未带口罩帽子，呼出空气中含细菌和支原体
3、培养瓶未用75%酒精擦拭和灼烧
4、操作不当吸管或培养用品接触到污染物，如皮肤，瓶壁
5、操作者说话大声，来回走动，扬起灰尘。
预防和控制
污染是细胞培养的大敌。预防和避免污染是细胞培养成功的关键之一。细胞培养细胞一经污染，多数较难处理。如果污染细胞价值不大，宜弃之；在寻找原因后彻底消毒操作室，复苏或重新购置细胞，再培养。
预防
1、培养用液、器皿要清洗消毒，防止污染。无菌室无菌器械要定期消毒
2、操作者要细心稳重。进入无菌是前要用肥皂洗手，穿好隔离衣帽口罩，检查物品无污染。进入室内要少说话走动打喷嚏要向背后，用酒精棉球擦手，瓶口，并灼烧瓶口。用酒精擦台面，在超净台中央操作，切勿一根吸管用到底，要更换吸管，操作时吸管不能碰到培养瓶口，防止污染，试验完成要做好标记。临走带走物品，用酒精擦台面。不可直接进行下一个试验。
3、防止细胞交叉污染，及早留种保持，防止污染
（一）、使用抗生素：一般对细菌有用。预防用药比污染后用药好，联合用药比单独用药好。一般用青霉素100u/ml,链霉素100ug/ml，清除用药是常量的5-10倍采用5～10倍于常用量的冲击法，加入高浓度抗生素后作用24～48h，再换入常规培养物，有时可能奏效。抗生素常用量和效果如果下：
抗生素细菌真菌支原体常用量
青霉素G＋100u/ml
链霉素G－100ug/ml
庆大霉素G+/G- 200ug/ml
四环素G+/G- 10ug/ml
卡那霉素G+/G- 50ug/ml
两性霉素B + 2ug/ml
制霉菌素+ 25ug/ml
(二)、加温除菌：根据支原体不耐热的特点，可将受支原体污染的细胞至于41摄氏度作用5～10h（最长可达18h），以杀灭支原体。但41摄氏度对细胞本身也有较大影响，故在处理前应先进行预实验，确定出最大限度杀伤支原体而对细胞影响较小的最佳处理时间。（三）、使用支原体特异性血清：抗血清结合支原体。一般支原体污染无太大价值均弃掉。（四）、其他方法：动物体内接种除菌，加巨噬细胞。
动物体内接种：受污染的肿瘤细胞可接种在同种动物皮下或腹腔内，利用动物的免疫功能消灭污染的微生物，而肿瘤细胞却能在动物体内继续生长，待一定时间后从体内取出肿瘤细胞进行培养。
与巨噬细胞共培养：巨噬细胞在体外可存活7～10天，并保持吞噬、消化微生物的能力。利用这一特点，可将少量的污染细胞与足够量的巨噬细胞共培养，从而消除污染。
(四)细胞培养基及常用液体
常用的有TC199,MEM,RPMI-1640,DMEM
细胞培养的基本条件：无菌培养环境，合适的培养基，优质的血清，稳定的温度，合适的气体环境（O2，CO2。5%的CO2对应培养液的NaHCO3为1.97g/L, 10%的CO2对应培养液的NaHCO3为3.95g/L）。
培养基的种类及基本成分（来源分天然培养基，合成培养基。状态分干粉培养基，液体培养基）
一般用合成培养基加血清（氨基酸，碳水化合物，无机盐，缓冲系统PH7.2-7.4，氨基酸及其他辅助因子（2-巯基乙醇（2-Mercaptoethanol，2-Me）的作用一个重要作用是使血清中含硫的化合物还原成谷胱甘肽，能诱导细胞的增殖））
完整的培养基组成：基础培养基80-95%,血清5-20%,碳酸氢钠2g/l，青霉素和链霉素。
保存
1、未加血清的液体培养基一般4度保存12个月，使用时37度预热，液体培养基中L-谷氨酰胺会慢慢分解，长时间后要添加原来量
2、血清：一般4度只能保存一个月，可-20----70度保存，解冻时不可直接拿到室温，须在4度冰箱解冻一天。无需除菌
常用液体
1、PBS,DPBS,Hanks平衡盐溶液，D-Hanks平衡盐溶液
2、常用的消化液EDTA4Na和胰蛋白酶液（用无Ca和Mg的D-Hanks配成0.125%或0.25%,过滤除菌，使用时加入1：1的EDTA4Na，用碳酸氢钠调PH7.4 ，-20保存。加入血清可终止其反应）
3、常用的缓冲液碳酸氢钠和HEPES（羟乙基哌嗪乙硫磺酸）
（五）细胞培养
传代培养
1、悬浮生长细胞传代
离心法传代：1000转/分离心弃上清，沉淀加培养液混匀传代
直接传代法：悬浮细胞沉淀在瓶壁时将上清去除1/2-2/3培养液，然后用吸管吹打为悬液传代
2、半悬浮生长细胞传代
直接吹打法使细胞从瓶壁脱落下来，进行传代
3、贴壁生长细胞传代
酶消化法传代（1-2ml0.25%酶液，静置2-10分钟后吸除，加培养液吸取1/10-1/40接种于新瓶，加新培养液培养）
大规模细胞培养
1、固定化细胞大规模培养
培养方式。除了海藻酸钙包埋法外,其他固定化基质都是多孔型的,能允许大分子物质自由出入,因此可实现蛋白质产物的连续生产。在凝胶珠和微囊中可使蛋白产物积聚到很高的浓度,给后续的分离纯化处理带来方便,并大大降低了生产成本。
2、细胞的灌注培养方法
在灌注培养中,细胞保留在反应器系统中,收获培养液的同时不断地加入新鲜的培养基。灌注培养的主要优点是连续灌注的培养基可以提供充分的营养成分,并可带走代谢产物,同时,细胞保留在反应器系统中,可以达到很高的细胞密度。同其他方法相比,灌注培养的产率可以提高一个数量级,并可大大降低劳动力消耗。
特殊培养法
1）二倍体细胞培养法
二倍体细胞培养法与一般培养相同，关键在于传代，其传代程序为：
1. 吸除旧培养液注入另瓶中。
2. 用温BSS冲洗1次。
3. 用0.25%温胰蛋白酶消化，加入消化液量以仅覆盖细胞层即可；作用1~5分钟。
4. 待细胞附着松动、细胞质边缘卷起和间隔加大，便终止消化。为防止细胞丢失，可不必再用BSS冲洗，直接向瓶中加入培养液（新旧培养液按2：1新旧混合）。
5. 轻轻反复吹打制成单个细胞悬液。
6. 按一分为二比例接种培养。
2）支持物培养法
加支持物培养法与一般培养法相同，只是在培养前需在培养瓶中加入已经消毒的支持物。1. 支持物制备：如用特氟隆薄膜，无菌条件下启封，用剪刀按需要剪成各种不同大小的块，于培养接种细胞前，先置入培养容器中即可；通常多用盖玻片做支持物，用前先要把盖片用玻璃刀切成一定形态，以便装入培养瓶中，然后按如下顺序处理：自来水浸泡24小时—96%酒精30～60 min—蒸馏水浸泡30～60 min—用干净软布擦拭干净—装入培养皿中—高压或干热灭菌备用。
2. 培养法：初代消化培养、初代组织块培养、传代培养等皆可应用加支持物培养法。接种细胞后，可在任何时间取出支持物，做各种观察或实验。
3）细胞分离（克隆）培养
多孔塑料培养板单细胞克隆法：
1. 消化：取健康待克隆细胞，吸出瓶内培养液，加消化液。
2. 低密度细胞悬液的制备：做克隆细胞时首先需先用消化法制备出分散成单个细胞悬液，然后稀释细胞，使之成为1~2细胞/毫升悬液，最适宜细胞密度为1~2细胞/ml培养液。
3. 接种：先用吸管轻轻吹打细胞悬液，使混悬均匀，继用加样器向塑料培养板每孔内加0.5毫升。接种时要迅速准确，争取在最短时间内加完，以免培养液蒸发，然后迅速盖好盖板，置CO2温箱培养。
4. 标记：培养6~12小时后，待细胞下沉冰贴附于培养板孔底后，从温箱中取出，置倒置光显微镜台上，观察和标记下含有单个细胞的孔，置CO2温箱培养。在培养中一般无需换液，只有在细胞增长过于缓慢时才可进行换液。换液时先吸除旧培养基，但不要吸除过多，余少许，以免细胞干涸。然后再迅速补加新鲜克隆培养液，继续培养3~4周。待孔内细胞增至500~600个时，可进行分离培养。
5. 分离扩大培养：培养86~96小时后进行观察。挑选生长良好的单细胞克隆孔，先吸除旧培养液，用Hanks洗1~2次，继加胰蛋白酶少许，加入量已能覆盖细胞群即可，如过多，应吸除多余消化液。置于倒置显微镜下窥视，待发现细胞变圆时，加入0.1ml含10%血清的克隆培养基，用吸管轻轻吹打，当细胞离开底物悬浮后，一并吸入管内，移入另瓶或皿中，再补加一定量克隆培养液，置CO2温箱中继续培养、增殖，使之形成新的细胞群后，即转用常规培养法培养。
必须保证分离出来的细胞确为一个而不是两个或更多。因此必须提高克隆形成率才易克隆成功，为此常采取以下一些措施：
使用适应性培养基或条件培养基（Conditional Medium）。制备方法：
1. 培养同源细胞（未克隆前时的同一细胞）至半汇合状态时，更换一次培养液，再继续培养24~48小时后，吸出所有培养液。
2. 离心：3000~4000/分离心10分钟，吸取上清液。
3. 滤过：再经直径0.22μm滤孔的滤膜过滤，低温冻存贮备用；用时取1分适应培养基+2分培养基混合使用。
使用饲细胞(Feeder Cells)。制备方法：
1. 取原代培养的人或动物胚胎成纤维细胞，90%汇合时制成细胞悬液，再按105细胞/毫升重新接种培养。
2. 在细胞半汇合时，准备0.25μg/ml的丝裂霉素C，按2μg/106细胞的量加入到培养瓶中过夜；或用射线单次照射，剂量30～50戈瑞。
3. 细胞经上述处理后，Hanks液漂洗两次、更换培养液、再培养24小时，胰蛋白酶消化细胞制成悬液，按5×104（104细胞/cm2）接种入新培养基中。
4. 48小时后，即可用于细胞克隆之用。
底物特殊处理：
1. 制备浓度为1 mg/ml的多聚右旋赖氨酸的水溶液，用以湿润培养瓶底。
2. 倒出多聚赖氨酸溶液，用5ml PBS冲洗一次后，可立即使用，或存数周内使用。
4）球体细胞培养
1. 琼脂铺底的培养瓶：30ml无菌培养瓶，每瓶中加5 ml 2%琼脂培养基，冷却，形成平坦底层后备用。
2. 取生长状态良好已连接成片的细胞，用弯头吸管伸入瓶内，把细胞纵横割划成若干小区后，倒出培养液。
3. 加入0.25%的胰蛋白酶液，在倒置显微镜下边消化边观察，当细胞小区边缘微卷起后便立即终止消化，倒出消化液，用Hanks轻轻漂洗一次，加入新培养液3~5 ml，用吸管把已松动的细胞片吸打下来，分装入1~3个含2%琼脂培养基底层的培养瓶中，置温箱继续培养，数日后便可生长成细胞球体。
4. 换液：培养1~2日后，如需换液，微倾斜培养瓶，令培养液集于培养瓶底角，停片刻，待球体细胞下沉后，吸除部分培养液，再补充新培养液。
5）微载体细胞培养法
1. 微载体选择：先用利用三种小量微载体做培养实验，观察细胞在一定时间内细胞的吸着率和计算细胞数，以得到最大量细胞为佳。
2. 水化：称一定量的微载体放入容器中，按每克微载体加50～100ml的比例，加入无Ca2＋和Mg2＋的磷酸缓冲液（PBS），室温下放置应不少于3小时，并不时轻微搅动，然后再用新鲜PBS洗一次。
3. 消毒：可采用高压蒸汽消毒，也可在水化后用70％酒精浸泡消毒，再用无菌的PBS漂洗一二次。
4. 传代培养：在连续进行微载体培养时，可以不必把细胞从微载体分离下来，可将带有细胞的微载体和新的微载体混合进行培养细胞能移动到新载体上。如果进行其它实验或需要分离细胞进行传代培养时，和常规培养相同，先用EDTA＋胰蛋白酶溶液作用使细胞脱离微载体表面。细胞脱离微载体后，可用自然沉降法，即在室温下静止5分钟，微载体将先自沉在底部，细胞大部分仍在上清中，然后离心上清即可得到细胞。如果需要分离程度较高时，需用孔径为100微米的尼龙网或不锈钢网过滤后，再离心滤过液，就可得到较纯净的细胞。6）悬浮培养法
悬浮培养是使帖壁细胞呈悬浮状态生长。如所需培养的细胞本身属悬浮生长型，则无须做任何处理；在传代时先做离心处理去除旧培养液，添加新培养液即可。但在培养帖附型细胞时，必须进行干扰细胞不能帖附，方法有二：
1．用大培养瓶增加含有铁芯的无毒的聚苯乙烯棒，在培养中进行电磁搅拌，使细胞不能帖壁而成悬浮培养。
2．用试管培养细胞，把试管置入带有旋转鼓的特制温箱中进行培养，旋转鼓不停徐缓转动，干扰细胞帖壁遂成悬浮培养。
细胞计数：细胞数（/ml）=(四格的细胞总数)/4×104×n （n为稀释倍数）
步骤：
1、取50ml 细胞悬浮液与50ml trypan blue (or Erythrosin bluish) 等体积混合均匀于1.5ml 小离心管中。
2、取少许混合液(约15ml) 自血球计数盘chamber 上方凹槽加入，盖上盖玻片，于100 倍倒立显微镜下观察，活细胞不染色，死细胞则为蓝色
3、计数四个大方格之细胞总数，再除4，乘以稀释倍数(至少乘以2，因与trypan blue 等体积混合)，最后乘以104 ，即为每ml 中细胞悬浮液之细胞数。若细胞位于线上，只计上线与右线之细胞(或计下线与左线之细胞)。
4、大格*细胞总数x 2 x 104 / 4= 细胞数/ml ，每一大格的体积= 0.1cm x 0.1cm x 0.01cm = 10-4 ml
细胞凋亡的几种检测方法
1、形态学观察方法
（1）HE（苏木精—伊红染色法）染色、光镜观察：凋亡细胞呈圆形，胞核深染，胞质浓缩，染色质成团块状，细胞表面有“出芽”现象。
（2）丫啶橙（AO)染色，荧光显微镜观察：活细胞核呈黄绿色荧光，胞质呈红色荧光。凋亡细胞核染色质呈黄绿色浓聚在核膜内侧，可见细胞膜呈泡状膨出及凋亡小体。
（3）台盼蓝染色：如果细胞膜不完整、破裂，台盼蓝染料进入细胞，细胞变蓝，即为坏死。如果细胞膜完整，细胞不为台盼蓝染色，则为正常细胞或凋亡细胞。此方法对反映细胞膜的
完整性，区别坏死细胞有一定的帮助。
（4）透射电镜观察：可见凋亡细胞表面微绒毛消失，核染色质固缩、边集，常呈新月形，核膜皱褶，胞质紧实，细胞器集中，胞膜起泡或出“芽”及凋亡小体和凋亡小体被临近巨噬细胞吞噬现象。
2、DNA凝胶电泳
细胞发生凋亡或坏死，其细胞DNA均发生断裂，细胞内小分子量DNA片断增加，高分子DNA减少，胞质内出现DNA片断。但凋亡细胞DNA断裂点均有规律的发生在核小体之间，出现180－200bpDNA片断，而坏死细胞的DNA断裂点为无特征的杂乱片断，利用此特征可以确定群体细胞的死亡，并可与坏死细胞区别。
正常活细胞DNA电泳出现阶梯状（LADDER)条带；坏死细胞DNA电泳类似血抹片时的连续性条带
3、酶联免疫吸附法（ELISA)核小体测定
凋亡细胞的DNA断裂使细胞质内出现核小体。核小体由组蛋白及其伴随的DNA片断组成，可由ELISA法检测。
检测步骤
1、将凋亡细胞裂解后高速离心，其上清液中含有核小体；
2、在微定量板上吸附组蛋白体’
3、加上清夜使抗组蛋白抗体与核小体上的组蛋白结合‘
4、加辣过氧化物酶标记的抗DNA抗体使之与核小体上的DNA结合’
4、加酶的底物，测光吸收制。
用途
该法敏感性高，可检测5*100/ml个凋亡细胞。可用于人、大鼠、小鼠的凋亡检测。该法不需要特殊仪器，适合基层工作，但是不能精确测定凋亡细胞发生的绝多对量。
3、流式细胞仪定量分析
细胞发生凋亡时，其细胞膜的通透性也增加，但是其程度介于正常细胞与坏死细胞之间。利用这一特点，被检测细胞悬液用荧光素染色，利用流式细胞仪测量细胞悬液中细胞荧光强度来区分正常细胞、坏死细胞核凋亡细胞。
应用价值
流式细胞仪检测具有以下特点：
1)、检测的细胞数量大，因此其反映群体细胞的凋亡状态比较准确
2)、可以做许多相关性分析
3)、结合被检测细胞的DNA含量的分析，可确定凋亡的细胞所处的细胞周期
（1）检测形态学及细胞膜完整性的Hoechs-PI双染色法
细胞发生凋亡时，其细胞膜的通透性液增加，但其程度介于正常细胞和坏死细胞之间，利用这一特点，被检测细胞悬液用荧光素染色，利用流式细胞仪检测细胞悬液中细胞荧光强度来区分正常细胞、坏死细胞和凋亡细胞。
利用Hoechs-PI染色法，正常细胞对染料有抗拒性，荧光染色很浅，凋亡细胞主要摄取Hoecha 染料，呈现强蓝色荧光，而坏死细胞主要摄取碘化丙啶（PI)而呈强的红色荧光。
（2）DNA片断原位标记法
凋亡细胞DNA片断原位末端检测技术是指在细胞（或组织）结构保持不变的情况下，用荧光素、地高辛或生物素标记的脱氧尿三磷酸（DUTP)和末端脱氧核苷酸转移酶（TdT)相反应与凋亡细胞裂解后3?的羟基（－OH）端结合，经显色反应后检测DNA裂解点的技术。DNA片段原位标记法有二种：
1、原位缺口转移（in situ nick-translation,ISNT)技术，它是利用DNA多聚酶I将标记的核苷
酸连接到断裂DNA的3?－OH端
2、原位缺口末端标记技术（in situ end labelling technique,ISEL)，即TUNEL法，它是利用TdT将标记的DUPT接到3?-OH端。研究证明，TUNEL法的敏感性远高于ISNT，尤其对早期凋亡的检测，TUNEL更为合适。
（3）检测细胞膜成分变化的Annexin V 联合PI法
原理：在细胞凋亡早期位于细胞膜内侧的磷脂酰丝氨酸（PS)迁移至细胞膜外测。磷脂结合蛋白V（Annexin V）是一种钙依赖性的磷脂结合蛋白，它于PS具有高度的结合力。因此，Annexin V可以作为探针检测暴露在细胞外测的磷脂酰丝氨酸。故利用对PS有高度亲和力的Annexin V，将Annexin V标记上荧光素（如异硫氰酸荧光素FITC），同时结合使用PI 拒染法（因坏死细胞PS亦暴露于细胞膜外测，且对PI高染）进行凋亡细胞双染法后用流式细胞仪即可检测凋亡细胞。
结果判断：正常活细胞Annexin V 、PI均低染；凋亡细胞Annexin V高染、PI低染；坏死细胞Annexin V/PI均高染。
应用价值：细胞发生凋亡时，膜上的PS外露早于DNA断裂发生，因此Annexin
V联合PI染色法检测早期细胞凋亡较TUNEL法更为灵敏。又Annexin
V联合PI染色不需固定细胞，可避免PI染色因固定造成的细胞碎片过多及TUNEL法因固定出现的DNA片段丢失。因此，Annexin
V联合PI法更加省时，结果更为可靠，是目前最为理想的检测细胞凋亡的方法。
方法及步骤
A. 直接标记抗体（FITC标记抗体）：
(1) 收集1×106个细胞，800rpm离心5min，4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室温固定40分钟，800rpm离心5min去上清。加2ml PBS重悬洗涤细胞，800rpm离心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的PBS 重悬细胞，冰上孵育10min，800rpm离心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA和饱和剂量的荧光标记抗体(5×105个细胞/20ul抗体)的PBS ,避光冰上放置30min,离心弃上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定，待测即可。
(4) 用流式细胞仪检测荧光值,每管计数10 000个细胞。
B. 未标记抗体间接免疫荧光标记法：
（1）收集2×106个细胞，用冷的PBS 2ml 洗涤细胞一次，800rpm离心5min。
（2）用2ml 4%多聚甲醛室温固定细胞40min,800rpm离心5min；2ml PBS重悬细胞，800rpm 离心5min；
（3）用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重悬细胞，冰上放置10min,800rpm离心5min。
（4）加入饱和剂量未标记抗体，冰上放置40min,800rpm离心5min，用2ml冷的PBS 重悬细胞，800rpm离心5min，洗去未结合一抗，重复一次。
（5）加入荧光标记（FITC）标记的二抗，冰上避光放置40min后，800rpm离心5min，去上清，PBS洗涤两次。
（6）加入0.5ml 1%多聚甲醛重悬细胞；固定待测。
（7）流式细胞仪检测荧光值,每管计数10 000个细胞。
C.细胞周期、细胞凋亡及DNA倍体分析样品（PI染色）的制备：
（1）待测样本制成单细胞悬液，然后200g离心5分钟，弃上清。
（2）用4℃预冷的70%冷乙醇固定，4℃保存，至少固定18小时。
（3）调整细胞浓度为106细胞/毫升，取1毫升细胞悬液，用PBS洗三次，细胞重悬于1
毫升PI染液中，37℃孵育30分钟即可进行流式分析。
（4）PI染液终浓度为50微克/毫升，RNase A终浓度为20微克/毫升。
培养细胞染色体显示法
（1）传代培养细胞染色体显示法
培养细胞—加秋水仙素—采集分裂细胞—离心—低渗处理—预固定—固定—重复固定—制片—染色和封片
1．培养细胞：取处于指数生长期、用较大瓶皿培养的[color=blue]、80％～90％汇合单层培养细胞。
2．加秋水仙素：使用最终浓度为0.02～0.8微克/毫升营养液，温箱继续培养6～10小时；或用低温封闭法：把培养细胞置于4℃条件下6～12小时后，再于37℃温箱继续培养6～10小时处理（加秋水仙素）。
3．采集分裂细胞：可利用分裂中期细胞体变圆与底物附着不牢特点，此时手持培养瓶，左右反复横向水平摇动，令培养液在培养细胞表面反复冲刷。应用此法可使90％的中期分裂细胞从瓶壁脱落，注意勿用力过猛，以防多量非分裂细胞脱落影响观察。
4．离心：收集培养液，1000转/分钟离心5～10分钟。
5．低渗处理：吸除上清液、加入预温至37℃的0.075M KCl溶液，在温箱中静置20～30分钟。
6．预固定：向悬液中加新鲜1：3醋酸、甲醇固定液1ml，用吸管吹打调匀，此措施能起到先使细胞表面轻微固定，可防止固定后细胞粘连成块。
7．固定：离心，同4，吸除上清液，加新鲜固定剂5～10ml；加固定剂时要用一手微斜持离心管，另手用吸管吸取固定剂，把固定剂逐滴滴在离心管壁上，使之慢慢流入离心管中，然后轻轻吹打均匀，置15～20分钟。
8．重复7，末次离心后，小心吸除大部分上清，据悬液中细胞密度大小，余下固定液0.5～1ml。
9．制片：用滴片法制片，按如下步骤：彻底洗净载物片，勿留任何油脂，置冰箱中储备备用。滴片前现从冰箱中取出冷载物片1片，在载物片表面出现细微水气时，立即向片的一侧滴2～3滴细胞悬液，滴片时的距离能保持半米高度才好。滴片后置室温中令其自然干燥，或用吹风机热风吹干亦可。如此制备好的标本可置盒中备用或立即进行染色观察。
10．染色和封片：一般常用Giemsa染色：取干液Giemsa 1份加pH6.8磷酸缓冲液9份混合，染色10分钟后，水洗、晾干、可直接观察。如标本需要保存或做长时间观察，可过二甲苯两次后，用中性树胶封片后，再过二甲苯，然后封片亦可。
（2）人末梢血微量全血培养染色体显示法
1．培养液准备：取15ml培养瓶数个，每瓶内分别充入5ml培养液（pH 7.2），内含：1640培养液（含10％～15％小牛血清），PHA 0.1ml，青霉素100单位和链霉素100微克/毫升培养液
2．抽血针管准备：取2～5ml针管一支，在消毒后的无菌操作台或无菌操作箱中安装好注射器，无菌抽肝素（100 U/ml BBS）少许湿润针管，如动作迅速不用肝素亦可。
3．采血：用棉签75％酒精给患者或献血者的皮肤消毒两次，缚止血带，静脉取血1～2ml。无菌操作迅速向每一瓶培养中加血0.4～0.5ml，如系外出采血，安装针管及分装血液两步骤亦可在无菌条件略差的环境内操作，但动作要迅速，以减少污染；在采血量不多或不应抽血的情况下，亦可在耳垂、手指肚（无名指）用刺血针采血。
4．培养和加秋水仙素：37℃温箱中培养到60～72小时之间，此时细胞分裂相最多，向每培养瓶内加秋水仙素，最终浓度0.02～0.08微克/毫升营养液，再培养4～6小时。
5．低渗：1000转/分钟离心10分钟，吸除上清液，加入预温过的0.075M KCl溶液10ml，
置温箱中低渗处理15～20分钟。
6．其余步骤与处理传代细胞法相同。
（3）羊水细胞培养
1.抽取羊水：无菌抽取羊水10-20ml，立即注入无菌离心管
2.离心分离：1000转/分离心10分钟，弃去上清，留0.5ml.
3.培养：加培养液4ml（含小牛血清1ml），用NaHCO3调PH至6.8，置37度培养，在温箱培养7-10天，可见大量成纤维细胞或上皮样细胞生长；加秋水仙素0.02-0.8微克每毫升营养液，作用10-12小时。
4.其余步骤与传代细胞染色体制备方法相同。
一般染色体制片程序
1、取对数生长期细胞一个T75或T25瓶。
2、将培养基换成10ml DMEM(H)+10%FBS+0.1ug/ml秋水仙素的培养基，处理1~2小时。
3、将细胞培养液倒掉，马上加入3~4ml 0.1%胰蛋白酶，并立即摇晃0.5~1min。当在显微镜下看到分裂相细胞脱壁后，马上加入终止液终止消化，并将分裂相细胞收集在一个15ml的离心管中，并在1200r/min离心4min。
4、将上清液倒掉，剩余50ul左右的液在管中，并轻微震动，使细胞沉淀重新悬浮。
5、加入10ml的低渗液（0.075M KCL），第一毫升要逐滴加入，并边加边摇晃。
6、37℃水浴中低渗30min。
7、再加入1ml冰冷的固定液（甲醇：乙酸=3：1 的混合液），并马上摇匀，离心，1000r/min、10min。
8、同步骤4。
9、加入10ml冰冷的固定液，第一毫升要逐滴加入，边加边摇晃。
10、室温下固定30min，然后离心，1000r/min、10min。
11、同步骤4。
12、加入10ml冰冷的固定液，第一毫升要逐滴加入，边加边摇晃。
13、室温下固定15min，然后离心，1000r/min、10min。
14、重复步骤11~13一次。
15、将离心后的上清液倒掉，并加入50~100ul的新鲜固定液重悬细胞。
16、滴片（玻片要求是湿冷的干净的，滴片高度要大于30cm。玻片倾斜角度15~30度左右）
17、镜检。
（六）细胞的冷冻保存与复苏（慢冻速溶）
?当细胞冷到零度以下，可以产生以下变化：细胞器脱水，细胞中可溶性物质浓度升高，并在细胞内形成冰晶。
?如果缓慢冷冻，可使细胞逐步脱水，细胞内不致产生大的冰晶；相反．结晶就大，大结晶会造成细胞膜、细胞器的损伤和破裂。复苏过程应快融，目的是防止小冰晶形成大冰晶，即冰晶的重结晶。
?在细胞冻存时加入保护剂，能大大提高冻存效果。
?常用的低温保护剂是DMSO，它是一种渗透性保护剂，可迅速透入细胞，提高胞膜对水的通透性，降低冰点，延缓冻结过程，能使细胞内水分在冻结前透出细胞外，在胞外形成冰晶，减少胞内冰晶，从而减少冰晶对细胞的损伤。
细胞冻存方法
（1）、冷冻前一日提前更换半量或全量培养基，观察细胞生长情形。
（2）、配制冷冻保存溶液(使用前配制)：将DMSO 加入新鲜培养基中，最后浓度为5-10％，
混合均匀，置于室温下待用。（预先配制冻存液：含20%血清培养基，10% DMSO加基础培养基）
（3）、按常规方法消化处于对数生长期的细胞培养物，制备单细胞悬液，并计算细胞总数；
(4)、将细胞悬液以800～1000r/min离心5min，去上清夜；
(5)、向细胞沉淀物中加入冷冻保护液，轻轻吹打混匀，使细胞密度达1×106～1×107个/ml；
(6)、按每管1～1.5ml的量分装于冻存管内，拧紧管盖；
(7)、再冻存管上做好标记，包括细胞代号及冻存日期。
冷冻保存方法1: 冷冻管置于4℃40 分钟→-20 oC 30 分钟→-80 oC 16～18 小时(或隔夜) →液氮槽vapor phase 长期储存。
注意点：
（1）细胞在-20度冰箱不能超过1h，以免冰晶过大破坏细胞，可跳过-20直接到-80，这样细胞活率低点。
（2）DMSO稀释时会放出大量热，不可直接加到细胞液中要提前配制。
（3）DMSO必须时细胞培养级别的，新买的本身是无菌的，第一次开瓶后立即少量分装于无菌瓶中，4度保存，避免反复冻容产生有毒物质。
细胞复苏（要点动作要快，轻）
（1）、调配37度～40度的温水，或将恒温水浴箱的温度调节至37度～40度；
（2）、从液氮中取出冻存管，立即投入370C～400C 温水中迅速晃动，直至冻存液完全溶解；
（3）、将细胞冻存悬液转移到离心管内，加入约5ml培养液，轻轻吹打混匀；
（4）、将细胞悬液经800～1000r/min(1500)离心5min，弃上清夜；
（5）、向细胞沉淀内加入完全培养液，轻轻吹打混匀，将细胞悬液转移到培养瓶内，补足培养液进行培养。
注意点：
（1）注意安全，以防冷冻管爆炸，带手套用镊子将冷冻管取出，不可用手。
（2）解冻时，液面不可超过冻存管面，以防污染。
[就业平台人员工作总结]就业平台人员工作总结
[就业平台人员工作总结]就业平台人员工作 总结 今年以来，我区就业工作在区委、区政府的正确领导下，在市人社局的具体指导下，以及全区目标单位的共同努力下，认真贯彻落实中央、省、市就业工作会议精神和决策部署，紧紧围绕年度工作目标和三项要点开展就业工作。一是统一思想，坚决落实就业工作实名制;二是主动作为，确保创业担保贷款发放;三是落实政策，完成就业精准扶贫任务。各项主要目标任务均实现"时间过半、任务过半"目标，现将半年工作总结如下。 一、全年目标实现"过半"。 截止6月底，新增就业16109人次，占年度目标的80.55%;帮扶困难群体再就业2308人次，占年度目标的69.93%;扶持创业带动就业3825人次，占年度目标的85%;城镇登记失业率3.0%。组织开展创业意识和创业培训527人，占年度目标的52.7%。形成"15分钟就业圈"方案，拟报市人社局审核后实施。 二、主要工作和措施。 (一)以"春风行动"为主题，开展系列服务活动促就业。年初，在区委区政府的领导下，区人力资源局审时度势，联合大街网举办了为期一天的"千企万人"互联网+""综合招聘会。本次招聘会线上线下邀请到了联邦快递(中国)、卓尔、华中数控等数千家优质企业，提供管理、技术、销售、文员等各类工种的就业岗位达7000余个。本次招聘会突出"互联网+"的特点，分为线上线下两个渠道。此次招聘会目的是
为供需双方搭建有利平台，形成品牌效应。做好企业与社区的对接，优化人力资源结构配置，助推企业转型升级，推动实现更高质量的就业创业。 (二)以"第五届武汉大学生"互联网+"创新创业项目大赛"活动为契机，完善创业环境，打造"硚口"名片。本次大赛由市人民政府主办，市人力资源和社会保障局、硚口区人民政府承办，中国武汉人才市场、相关高校、企业和社会机构协办的公益性赛事，是鼓励大学生参与"大众创业、万众创新"的服务平台。举办此次大赛是区委区政府针对硚口区"老工业区、底子薄、困难多、任务重"的实际情况，审时度势开展的一次大赛，较好地打造了"生态硚口""创业基地"的城市名片，为吸引各大企业和高新人才奠定了基础，也是响应国家"创业带动就业"的有力举措。 (三)主动作为，确保创业担保贷款发放落实。与区财政局、民政局积极沟通协调，传达市局通知精神，大力争取相关部门支持，扩大贷款范围和数额。结合我区财政相对困难的实际，我们做了大量工作，争取兄弟部门的理解。针对去年小额贷款审批时限长、放款慢等问题，今年更换了担保公司和金融机构，并获得了区政府的批准和财政部门的支持。为今年的创业担保贷款任务顺利完成奠定了基础。 (四)落实政策，重点援助，完成就业精准扶贫任务。认真学习领会并执行《关于武汉市社会保险补贴相关问题的处理意见》(武人社函〔xx〕28号)文件精神，落实好促进就业的各项政策。对市内就业困难人员从事个体经营或灵活就业的，继续享受不超过3年的社会保
税源管理科,工作总结
税源管理科,工作总结 篇一：征收管理科工作总结 征收管理科****年工作总结 征收管理科****年在市局征管科、法规科、稽查局和区局各位局长的正确领导和指引下，在各兄弟科、室、所（分局）同志们的密切配合、大力支持下，按照区局党组“树立三个理念、打牢三个基础、实现三个一流”工作思路，以纳税人为本的服务理念，实现税收征管工作规范化、科学化、精细化管理的工作目标，积极推进以税务信息化系统为依托的税收征管基础建设，充分发挥征收管理科决策、监督、指导、协调的优势和能力，经过全科同志的共同努力，较好地完成了征收管理科****年的各项工作任务。现将具体工作情况总结如下： 一、履顺程序，规范个体纳税人定额管理。 ****年1月份由于小规模纳税人征收率由原来的工业6%，商业4%统一下调到3%，同时也为了解决我局个体纳税人定期定额执行期管理混乱，时常出现的未及时进行分月汇总申报造成的违章案源信息问题，达到规范个体纳税人定期定额管理的目的，区局决定对个体纳税人定期定额全部重新定额核定，统一将个体纳税人定期定额执行期止规定为12月31日。我带领全科同志克服了春节提前造成的时间紧、任务重，齐心协力，利用半个月时间完成了全局1146户个体纳税人
的定期定额重新核定工作（其中起征点以上474户，起征点以下672户）。4月份为进一步规范个体纳税人的税收征管，强化“公开、公平、公正、透明”的税收征管理念，根据《个体工商户税收定期定额征收管理办法》（总局令第16号）规定，征收管理科对有关个体纳税人核定定额及停业管理程序重新进行了明确和规范。利用办税服务大厅电子显示屏滚动公示、公布定额以及停业情况。各税务所（分局）利用新添置的定额公示板，张贴定额、停业公示文书接受广大纳税人监督。截止12月31日，我局公示、公布个体纳税人定额信息151户。其 。 础建设。 我们在工作实践中逐步摸索出一条完善信息化系统基础建设的新路子，经局党组研究决定成立“税务信息化系统应用领导小组”，征收管理科负责制定了《××市××区国家税务局税务信息系统应用领导小组工作的实施方案》，对税务信息系统基础建设工作进行统一指挥和协调。领导小组的成立，不仅有效解决信息化系统运行中遇到的问题，使小组成员之间可以互相学习，取长补短，业务能力共同提高，而且也提高了办税效率和纳税人的满意度，促进了全体税务干部对税务信息化系统的有效利用，更好地为税收征管工作服务。
风电场检修工作总结结尾
风电场检修工作总结结尾 篇一：吉利风电场XX年度检修工作总结 吉利风电场XX年度检修工作总结 XX年吉利风电场在蒙东分公司和集团公司的正确领导下，全体干部职工同心协力、顽强拼搏，克服了东北电限电严重、设备运行不稳定等困难，较好地完成了全年各项工作任务。现将一年来的工作情况汇报如下： 一、发电量完成情况 截至 XX年十一月底，吉利风电场共完成发电量万kwh，上电量万kwh，年可利用小时数小时，综合厂用电率完成%。吉利风电场XX年风电机组可利用率高达%，为风电场较好完成各项指标打下坚实基础。 二、生产方面： 1、加强对运行设备的日常管理，加大设备巡回检查力度及设备测温工作，制订设备检修计划，做到计划检修。 2、积极与东北调和沈阳办事处协调沟通工作，尽最大努力争取电量，做到每度必争，减少限电电量损失。 3、积极督促风机厂家，加强风机设备的检修维护质量，严格执行设备缺陷管理制度，及时消缺，提高风机的可靠性和利用小时数。 4、积极利用停电的机会进行隐患处理。 5、利用春、秋检时机，对电气设备进行预防性试验，
及时分析影响经济运行指标的因素，合理调整运行方式。 三、安全管理方面 1、加强安全思想教育，提高职工的安全意识。利用安全活动日、学习集团公司安全事故案例，观看警示教育片、应急演练等手段，强化职工的安全意识。 2、制订和完善各项规章制度，严格执行“两票三制”等各项规章制度，杜绝习惯性违章。对发生的不安全现象严肃考核。 3、加强设备缺陷管理，严禁设备带病运行。认真开展春、秋检活动，在春、秋检活动中查出设备隐患、缺陷2项，并进行全部处理，确保活动落到实处，不走过场。 4、制订事故预案，积极开展事故预想、反事故演习，提高职工的应变能力。同时开展消防演练，熟练掌握消防工器具的使用方法，严防火灾事故的发生。 5、强化道路交通安全管理，严禁车辆带病行驶，严禁司机酒后驾驶、疲劳驾驶，并对风场道路塌陷地方进行暂时性填充及插警示标识，确保了交通安全。 四、职工教育培训情况 1、制定切实可行的培训计划。培训方式多样化，采取集中授课、跟班检修、技术问答、现场考问、师傅带徒弟（签订师徒合同）等方式提高职工的技术水平。 2、制定考核制度。采取定期考试的方式，检验学员的
实验总结细胞培养方法
实验总结细胞培养方法公司内部档案编码：[OPPTR-OPPT28-OPPTL98-OPPNN08]
一、培养细胞常用配置培养基的配置：基础培养基500ml+胎牛血清50ml+双抗5ml 冻存液的配置：10 % DMSO + 90%胎牛血清 依次比例酌量配置。 超净工作台常规配置 移液器1套（2.5μl、20μl、200μl、1ml），酒精灯1盏，液器1 台，斜架1台，酒精喷壶1个，酒精棉球缸1个，污缸1个， 常规耗材：培养瓶（50㎝2），定量移液管（5ml、10ml），枪头 （1ml、200μl、10μl），培养皿，6/24/48/96孔板，医用脱脂棉球，冻存管 所需试剂：培养基，胎牛血清，双抗，DMSO，胰酶，75%酒精…… 实验前准备：所需的各项高压后的耗材及污物缸放于超净工作台内，用酒精喷壶喷洒实验台面，并关闭工作台打开紫外灯照射30min后开始实验操作。培养基及胰酶恢复常温后使用，可37℃水浴5-10min 二、细胞复苏 步骤：
1. 紫外消毒30min后关闭紫外灯，开启超净台正常工作状态，用酒精消毒操作者的双手。 2. 培养液（DMEM），恒温水浴箱37℃预热20min，备用。超净台内准备一支15ml离心管备用。 3.将所需的培养基确保瓶身干净后酒精消毒放于工作台面内，点燃酒精灯，再将瓶口对准在酒精灯上消毒2-3次，旋开瓶盖后需再次分别消毒瓶口和瓶盖。 4. 从液氮保存罐中取出冻存管，立即放入37℃水浴中，快速摇晃，直至冻存液融化至黄豆粒大小后迅速取出。 5. 将细胞悬液移入15ml离心管，缓慢加入4ml培养液，离心 （1000r/min，5min）。 6. 取出2个培养皿并做好标记（复苏日期等），提前加入5-10ml培养液；离心结束后用1ml培养液悬液混悬沉淀细胞后分别加入培养皿内。 7. 将培养基瓶口和瓶盖消毒2-3次后拧紧，熄灭酒精灯，整理实验台面，取出实验试剂及污缸等，关闭超净工作台。 8. 将培养瓶放入培养箱内培养 注意事项：
税源管理科工作总结XX
税源管理科,工作总结,XX 篇一：税源管理纳税服务工作岗位年度个人工作总结 稅源管理纳税服务工作岗位 =个人原创，绝非网络复制，欢迎下载= 转眼之间，一年的光阴又将匆匆逝去。回眸过去的一年，在×××（改成稅源管理纳税服务岗位所在的单位）稅源管理纳税服务工作岗位上，我始终秉承着“在岗一分钟，尽职六十秒”的态度努力做好稅源管理纳税服务岗位的工作，并时刻严格要求自己，摆正自己的工作位置和态度。在各级领导们的关心和同事们的支持帮助下，我在稅源管理纳税服务工作岗位上积极进取、勤奋学习，认真圆满地完成今年的稅源管理纳税服务工作任务，履行好×××（改成稅源管理纳税服务岗位所在的单位）稅源管理纳税服务工作岗位职责，各方面表现优异，得到了领导和同事们的一致肯定。现将过去一年来在稅源管理纳税服务工作岗位上的学习、工作情况作简要总结如下：一、思想上严于律己，不断提高自身修养一年来，我始终坚持正确的价值观、人生观、世界观，并用以指 篇二：市场管理科XX年工作总结 市场管理科一季度工作总结
一季度，市场管理科紧紧围绕中心三个三建设，在建设技术市场体系方面主要完成了以下工作： 1、贯彻落实有关技术市场管理的法规、政策，认真开展技术合同认定登记和统计工作。根据全国技术合同认定登记统计系统的数据，从1月1日至3月31日，全省共认定登记技术合同317项，成交金额亿元，比上年同期增长%。为了加强对全省技术合同登记机构的监督管理，完成全年技术合同成交额达120亿元的目标任务，我们建立了年初有目标任务、年中、年末有总结、考核的管理机制，要求各机构严格按照《技术合同认定登记管理办法》和《技术合同认定规则》开展技术交易管理和服务工作，贯彻落实技术市场各项优惠政策。按照年初工作部署，一季度，我们首先对全省4家行业技术合同登记站点进行了检查，提出了加强营改增税收政策宣传和继续挖掘潜力，扩大服务覆盖面等工作要求。 2、加强技术市场工作体系建设，在全省范围内新增部分基层技术合同登记站点。技术合同认定登记是各类科技创新主体享受国家技术交易优惠政策的重要依据，登记站的设立应当遵循合理布局、方便登记的原则。为了扩大技术市场优惠政策的涵盖领域，真实地反映我省科技成果转化的状况，XX年拟新增设3家技术合同登记站点。一季度，完成了《关于增设省级技术合同登记站点的工作方案》的制定，并根据
风电运行工作总结
年终工作总结 年即将过去，作为一名运行值班人员，我始终以积极的态度，饱满的热情学习专业技术知识，严格遵守各项运行规程，团结同事，虚心求教，不断提高自己的工作能力，努力干好本职工作，现将入职以来的工作加以总结：（一）工作认真负责，爱岗敬业，以“团队、开拓、拼搏、荣耀”的公司理念来严格要求自己，使自己做到诚信待人，踏实做事，服从领导安排，克服各种困难，始终以积极认真的态度来对待工作，特别是自入职来，风场遇到的两次比较大的线路跳闸故障，努力配合团队进行故障排除，以最快的速度恢复送电，尽可能的为公司减少损失。但由于刚刚入职，自己在工作方法和工作步骤上还有所欠缺，导致在工作效率上不能使自己满意。 （二）在技术上认真学习，理论上不断学习熟记操作规程，运用书籍、互联网等资料介质使自己了解和深入学习风电场和变电站技术方面的知识，在实践上严格遵守运行规程，培养个人独立操作和独立值班的能力，保证不发生误操作事故，并把工作中遇到的问题和取得的经验，注意的事项随时记下来，虚心想领导和同事请教，与日俱增的提高自己的技术文化水平和增加自己的工作经验。
（三）在自我能力提升方面，若把“技术”比作“智商”，那么“能力”就可比作是“情商”。“智商”高，不一定能成功的完成工作，因为一个人的技术力量毕竟是有有限的。能力高的人才能配合同事更有效的、更迅速的完成工作。能力包括协调能力和处理事故的能力，在这两种能力的提升方面，自己还有所欠缺，需要在以后的工作中多下功夫，努力使自己成为一个善于沟通、善于交流的人。 （四）在工作经验的积累方面，本着熟能生巧的原则，同样的工作每次干的体会和收获都不一样，实践当中，注意工作中的每一个细节，比如说工作使用的工具、注意的事项、技术方面的要点和正确的工作步骤。不断的去学习、牢记和熟练。知道自己能成功、效率的完成工作为止。 在这一年的工作中，总体上来说，对自己的工作基本上满意，但还有很多不足之处和不尽人意的地方，需要以后多多改进和修正。 新的一年应该有新的开始，也应该有新的压力，制定新的合理的目标才会有新的突破和新的发展，通过下面几句话来明确自己的工作目标和工作决心： （一）“今天工作不努力、明天努力找工作”，用这句话来时刻警示自己端正工作态度，无论什么样的工作，都要尽自己最大的能力去完成。2009年，公司三期工程有可能进行，这对于我来说，即是一个机会又是一个挑战，所谓机会是可
细胞培养技术个人总结
总结---细胞培养 一．基本理论概论 原代培养: 也叫初代培养，指直接从体内取出的细胞、组织和器官进行的第一次的培养。 传代培养：将细胞从一个培养瓶转移到另外一个培养瓶即称为传代或传代培养。 细胞系：原代培养物成功传代后，则称之为细胞系。(如细胞系的生存期有限，则称之为有限细胞系；已获无限繁殖能力能持续生存的细胞系，称连续细胞系或无限细胞系。) 细胞株：通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志物称为细胞株。 培养类型：细胞培养，组织培养，器官培养。 细胞生长的方式：贴附生长，悬浮生长 培养细胞的形态（形态不一定，环境改变形态可能改变）：成纤维性型细胞，上皮型细胞（单层膜样生长），游走性细胞（游散生长，常有伪足跟突起） 二．培养过程及要点（切记无菌操作） （一）工作环境的处理 1. 实验进行前，无菌室及无菌操作台以紫外灯照射30-60 分钟灭菌，以70 % 酒精擦拭无菌操作抬面，并开启无菌操作台风扇运转10 分钟后，才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以70 % 酒精擦拭无菌操作抬面。操作间隔应让无菌操作台运转10分钟以上后，再进行下一个细胞株之操作。 2. 实验用品以70 %酒精擦拭后才带入无菌操作台内。实验操作应在台面之中央无菌区域，勿在边缘之非无菌区域操作。无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如试管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暂时放置，其它实验用品用完即应移出，以利于气流之流通。 3. 小心取用无菌之实验物品，避免造成污染。勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口，亦不要在打开之容器正上方操作实验。容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约45°角取用，尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。吸管口切勿碰到容器瓶口 4. 工作人员应注意自身之安全，须穿戴实验衣及手套后才进行实验。对于来自人类或是病毒 感染之细胞株应特别小心操作，并选择适当等级之无菌操作台(至少Class II)。操作过程中，应避免引起aerosol 之产生，小心毒性药品，例如DMSO 及TPA 等，并避免尖锐针头之伤害等。 5. 定期检测下列项目： CO2 钢瓶之CO2 压力。CO2 培养箱之CO2 浓度、温度、及水盘是否有污染(水盘的水用无菌水，每周更换)。无菌操作台内之airflow 压力，定期更换紫外线灯管及HEPA 过滤膜，预滤网(300 小时/预滤网，3000 小时/HEPA)。 6. 水槽可添加消毒剂(Zephrin 1:750)，定期更换水槽的水。 （二）试验用玻璃塑料用品清洗及其消毒灭菌 清洗： （1）玻璃器皿的清洗（酸液由重铬酸钾，浓硫酸，蒸馏水配置） 浸泡—刷洗—浸酸—冲洗 （2）胶塞的清洗 刚买回的常含滑石粉等杂质，先用自来水冲洗后再按常规方法处理。2%NaoH或洗衣粉煮沸10-20分钟---1%稀Hcl浸泡30分钟或蒸馏水冲洗后再煮沸10-20分钟—晾干备用 （3）塑料制品的清洗 2%NaoH浸泡过夜—自来水冲洗--5%稀Hcl浸泡30分钟—自来水和蒸馏水冲干备用。
大规模细胞培养技术
大规模细胞培养技术简介 大规模培养技术应用简介通过大规模体外培养技术培养哺乳类动物细胞是生产生物制品的有效方法。上世纪60-70 年代，就已创立了可用于大规模培养动物细胞的微载体培养系统和中空纤维细胞培养技术。近十数年来，由于人类对生长激素、干扰素、单克隆抗体、疫苗及白细胞介素等生物制品的需求猛增，以传统的生物化学技术从动物组织获取生物制品已远远不能满足这一需求。随着细胞培养的原理与方法日臻完善，动物细胞大规模培养技术趋于成熟。 所谓动物细胞大规模培养技术( large-scale culture technology )是指在人工条件下(设定ph、温度、溶氧等) ，在细胞培养工厂 (Cosmo Cat.No. 1101-400 or 1101-800 )或生物反应器( bioreactor )中高密度大量培养动物细胞用于生产生物制品的技术。目前可大规模培养的动物细胞有鸡胚、猪肾、猴肾、地鼠肾等多种原代细胞及人二倍体细胞、cho(中华仓鼠卵巢) 细胞、BHK-21( 仓鼠肾细胞)、Vero 细胞(非洲绿猴肾传代细胞，是贴壁依赖的成纤维细胞)等，并已成功生产了包括狂犬病疫苗、口蹄疫疫苗、甲型肝炎疫苗、乙型肝炎疫苗、红细胞生成素、单克隆抗体等产品。 在过去几十年来，该技术经有了很大发展，从使用转瓶(roller bottle) 、CellCube 等贴壁细胞培养，发展为一次性细胞培养工厂( Made by Cosmo )或生物反应器 (Bioreactor )进行大规模细胞培养。第一代细胞培养技术核心问题是难以产业化或者说是规模化生产：一是在工艺生产时不能大规模制备产品；二是非批量生产容易导致产品质量的不均一性；三是难以对同批生产进行生产和质量控制。 随着生物技术的发展，迫切需要大规模的细胞培养，特别是培养表达特异性蛋白的哺乳动物细胞，以便获得大量有用的细胞表达产物。采用玻璃瓶静置或旋转瓶的培养方法，已不能满足所需细胞数量及其分泌产物。因而必须为工业化生产开创一种新的技术方法。自70 年代以来，细胞培养用生物
税源管理年度工作总结
税源管理年度工作总结 税源管理年度工作总结范文 税源管理年度工作总结今年以来，税源管理一科在县国税局的统一领导下，真对所管辖的纳税户多，征管区域大、范围广的实际情况，按照县局目标管理的总体要求，通过合理分工，全体人员坚持依法治税，齐心协力，以税收收入为中心，以管理服务为基础，与时俱进，进一步夯实税收征管基础，在去年的工作基础上，全面完成了县局下达的税收工作任务，使税收征管上了一个新台阶，具体工作做法总结如下： 一、以组织税收收入为中心，坚持依法治税。为了确保税收收入的完成，管理一科及时将县局下达的税收任务，落实到每一个人，每一户企业。 同时依托ctias等信息，深入企业调查研究，分析企业生产经营变化等情况，着力强化税收管理，全年一共组织税收收入5809.59万元；（其中增值税4793.26万元、企业所得税1016.33万元）,代收个人利息所得税339.91万元。较去年比增长2236.44万元，(其中:增值税增长1391.85万元,企业所得税增长844.59万元)，代收利息税增长37.37万元,全面超额完成了县局下达的各项税收任务。 二、合理分工，提高效力。根据税源管理一科管户广、企业分散等特点，年初根据县局目标管理的要求，和工作岗位体系，工作任务等，结合每人的具体情况。
将工作职责落实到人，使每个人的工作职责分明，细化分工，相互协作，充分发挥了每个人的作用。按照科长负责全面，管理员按南北区域划分、行业划分的原则。具体做出了较为合理的分工,调动了全体人员的工作积极性,充分发挥了全体人员的工作热情,使全科各项工作能及时、全面地完成。办事效力显着提高，为纳税人提供优质服务打下了良好基础。 三、加强税收征管质量和数据质量的落实管理，坚持依法治税。 根据县国税局的要求，年初制订了管理一科工作计划,并组织全科认真学习，使每个人明确自己的岗位责任。按照市局征管质量和数据质量要求，及时对每个纳税户每月的征管质量和数据质量进行跟踪，出现问题及时处理，确保了税收征管质量和数据质量的提升，提高了征管“五率”。加强了增值税一般纳税人的税收管理，把住认定调查关，对照一般纳税人的标准，对未达标的企业，如企业的生产规模，财务核算不够健全，防伪税控的防盗设备不达标准等，及时提出了整改意见。企业被认定增值税一般纳税人怎样进行税收申报等业务，专管员及时进行辅导，使初认定一般纳税人的企业在税收申报方面及时、完整不出错。对不符合一般纳税人条件的企业，在年检时提出取消资格意见，XX年取消了二户不符合一般纳税人资格的企业。对服装针织企业实行验货制度，会昌晋昌服饰织造有限公司，从XX年至今一直配合坚持验货，会昌县海鑫服饰有限公司由于财务混乱，通过半年多的辅导仍未改正，管理员入时提出取消增值税一般纳税人意见，取消了该企业的增值税一般纳税人资格。
风机检修个人工作总结
风机检修个人工作总结 尊敬的各位领导，各位同事大家好： 伴随着时间的流逝，我们XX风电即将翻开崭新的一页，踏上新的征程，蓦然回首2011已经过半。在过去的半年里，工作中有苦有乐，偶尔有些许惆怅，但更多的是喜悦！功过倶全，不妨在此复述一二。 一，安全方面 公司一贯的宗旨是“安全生产、以人为本”，在这方面，每次开例会时一如既往从不厌其烦的宣传，督促员工认真执行并达到行之有效的结果。闲暇之余，也会和大家一起探讨以往电力企业发生过的事故，从中发现问题，总结经验教训，杜绝了人身伤亡类事故的发生。 二，工作 认真贯彻预防为主的方针，每天上班时着重加强设备的巡查检视工作，提高工作效率增加工作安全系数及时排除工作中的安全隐患，反复叮嘱员工遵守操作规程，杜绝事故发生。对于设备的故障总是及时发现，及时安排消缺，使整个风电场正常确保当日的安全生产。每天晚上休息时间，根据风机的运行情况还要预先把第二天的工作大概摸排一下，以便次日的工作能更加有序的进行。 三，检修
风电场有很多时候事故是突发性的，做到了不讲条件，随叫随到，稳定再走。 今年3月份的#3风机箱变抢修期间、带领检修人员不畏严寒，在零下二十多度，大风沙的天气下，忘我的工作，为#3风机提前运行做出了应有的贡献；2月份和4月份的线路故障排查期间，每次冒着严寒带领检修人员从夜晚一直工作到第二天白天，不计薪酬的，不辞辛劳地逐条线路，逐个箱变的排查，直至最终的故障排除；风电场的用水系统由于是几家共用的，所以水系统压力变化不好控制，以至于风电场的水系统多次出现漏水，生活区无水的现象发生。没有用水对于一个身处戈壁的群体是多么可怕的事情，我急大家所急，多次联系自来水厂家人员来风场抢修，保障了风场建设和生活用水的供给；针对近期的XX一期风机验收，每天积极的联系XX场家人员验收，终于在今天7月初完成了30台风机的验收工作；对于“四查一改”，认真从自身查起，对于工作中的不足，努力的改正。对于管辖的设备，仔细的排查，不放过每一次的隐患，力求详尽，经最大的可能查找任何可能存在的不安全隐患，彻底排除、整改，保证设备的安全进行。对于新进场的人员积极的组织安全知识学习，讲解、积极的组织培训新员工对风机知识方面的学习，为新员工能早一天的进入现场作业打下了坚实的基础。 四，学习
细胞培养总结
细胞培养学习总结 --贴壁细胞培养技术 一、细胞培养一般流程： ㈠、复苏： 1、实验前做好相关准备工作（水浴锅37℃；超净工作台的无菌环境；准备 好实验相关仪器和试剂）。 2、把冻存管从液氮灌中取出来，立即投入37℃（≦40℃）水浴锅中，晃动 冻存管，使液体在1min以内全部融解（关键步骤），用酒精棉擦拭其外壁，放到超净工作台里。 3、把上述细胞悬液吸到15ml的离心管中，加入适量培养基，(用培养基把 冻存管洗一遍，把粘在壁上的细胞都洗下来，转移时不要直接倒，以防污染)，1000转离心1-3min（可根据所培养细胞调整）。 4、吸弃上清液，加适量培养基把细胞吹散成细胞悬液，转移到培养瓶中， 加适量完全培养基（常为覆盖培养瓶底面即可）。 5、标好细胞种类和日期、培养人名字等，放到CO2培养箱中培养，细胞贴 壁后再换培养基。 6、注意观察细胞生长状态，及时换液或传代。 ㈡、换液： 1、实验前做好相关准备工作（超净工作台的无菌环境；准备好实验相关仪 器和试剂）。 2、取出培养瓶，用75%酒精消毒后放入超净实验台。 3、吸弃旧培养液，用适量（如2ml）PBS（磷酸盐缓冲液）清洗细胞（可根 据细胞状态洗1-2遍，一般从没有细胞的那一侧倒掉）。 4、加入适量新鲜完全培养基，放回培养箱继续培养。 ㈢、传代：
1、实验前做好相关准备工作（超净工作台的无菌环境；准备好实验相关仪 器和试剂）。 2、取出培养瓶，用75%酒精消毒后放入超净实验台。 3、吸弃旧培养液，用适量（如2ml）PBS（磷酸盐缓冲液）清洗细胞（可根 据细胞状态洗1-2遍）。（前面步骤同换液） 4、加适当的胰蛋白酶（0.05%）(能覆盖细胞就行)，放入细胞培养箱中消化 1-2min（根据不同类型细胞而定）。 5、细胞都变圆后加如入等体积的完全培养基终止消化。 6、用滴管缓慢吹打细胞，使细胞都悬浮起来成细胞悬液，吸到15ml的离心 管中，1000转离心1-3min。 7、倒掉上清液，加1-2ml完全培养基，将细胞吹散成单个细胞。 8、根据细胞浓度把细胞传到几个培养瓶中，加入适量完全培养基（一般癌 细胞一个培养瓶分2个），放回培养箱中继续培养。 ㈣、冻存： 1、实验前做好相关准备工作（预先配置好冻存液放入4℃保存，常为 10%DMSO+90%血清，配制过程中加入DMSO要缓慢，且边滴边摇；超净工作台的无菌环境；准备好实验相关仪器和试剂）。 2、取出培养瓶，用75%酒精消毒后放入超净实验台。 3、吸弃旧培养液，用适量（如2ml）PBS（磷酸盐缓冲液）清洗细胞（可根 据细胞状态洗1-2遍）。 4、加适当的胰蛋白酶（0.05%）(能覆盖细胞就行)，放入细胞培养箱中消化 1-2min（根据不同类型细胞而定）。 5、细胞都变圆后加入等体积的完全培养基终止消化。 6、用滴管缓慢吹打细胞，把细胞都悬浮起来成细胞悬液，吸到15ml的离心 管中，1000转离心1-3min。（同细胞传代中步骤） 7、倒掉上清液，加入预制的冻存液制成细胞悬液，分装到灭菌的冻存管中， （注意不要加满，预留其结冰后的空间，一般1.8ml的冻存管加入≦1.5ml 的细胞悬液）。
云平台推进工作总结
前湖小学云平台推进工作总结 自云平台教师账号发布以来，我校积极贯彻上级相关会议和文件要求，本着边建边用的原则，借助云平台开展活动，取得了较好的效果。 一、云平台账号开通情况 教师账号除年龄大的外，其他全体教干教师账号全部开通，并正常运行。 二、云平台数据情况 一个多月，我校全体教干教师共发表文章；发表视频；群组论坛帖子；文章浏览量；视频观看量位居全镇前列。 三、设备情况 我校为新建校，电化教学设备配备标准高，数量多，宽带光纤直接到各科室，现在启用的各室网络均已接通。 四、管理要求及具体建设情况 我们成立了云平台工作领导小组，专人负责云平台的管理和指导，制度约束和鼓励，活动推进等方式推进云平台使用。 1、加强机构平台建设，方便教师网络交流 我们利用机构平台，为教师进一步搭建了各类管理平台、应用平台、资源建设平台等，如教务管理平台、后勤管理平台、政教管理平台、安全管理平台等管理平台，方便部门负责人上传发布相关信息，开展活动，同时也方便教师了解学校各部门信息，参与网络活动，提高了学校教育管理的透明度，提升了管理效益。还开展了网络教研平台，方便教师参与网络教研活动，提高了教研效益，促进了教师专业成长。 2、加强制度建设，促进云平台建设效益 出台《玉山镇朱仓小学云平台管理要求》，要求教干教师按要求建设自己的云空间，完成上传任务，积极参加学校开展的网络教研活动，通过制度约束教干教师，让云平台的各功能充分发挥功效，引导教师积极反思，促进其专业成长。 3、开展网络教研活动，促进云平台功能发挥 为了让云平台充分发挥其功效，促进教师专业成长，我们开展了尝试着开展了一些网络教研活动，取得了较好的效果，一是利用云平台开展了网络理论学习活动，通过云平台提供的评论、投票、分享等功能，老师们参与网络教研活动不受时空限制，我们要求教师利用教余时间认真学习领会，把自己的所思所获以博文的形式发表在云平台中，同时将自己的观点在网络教研平台上以评论的形式发表，老师们的观点得以碰撞，思想得到进一步的交流提升，所学得以内化。其次利用例会时间，面对面进行研讨交流，统一认识，随机确定主讲人，阐述自己的见解，通过面对面的交流，充分发挥了以点带面的辐射作用，理论学习效果提升明显。最后学校教务处对此次活动进行总结提升。 除了网络理论学习活动，我们还用云平台提供的魔方课堂功能，开展了网络集体备课活动，目前这项活动正在进行中。 4、奖惩规定 为了鼓励教师积极参与到云平台建设中来，我们正在研究奖惩规定，目前这项工作正在讨论，这个规定主要从以下几个方面考虑： 一是云平台数据量化列入综合量化
2016年税源管理年度工作总结范文_税务工作总结
2016年税源管理年度工作总结范文_税务工作总结 2016年税源管理年度工作总结范文s("fzoom");s("hzh0");s("hzh1");s("hzh2");税源管理一科在县国税局的统一领导下，真对所管辖的纳税户多，征管区域大、范围广的实际情况，按照县局目标管理的总体要求，通过合理分工，全体人员坚持依法治税，齐心协力，以税收收入为中心，以管理服务为基础，与时俱进，进一步夯实税收征管基础，在去年的工作基础上，全面完成了县局下达的税收工作任务，使税收征管上了一个新台阶，具体工作做法总结 一、以组织税收收入为中心，坚持依法治税。为了确保税收收入的完成，管理一科及时将县局下达的税收任务，落实到每一个人，每一户企业。同时依托ctias等信息，深入企业调查研究，分析企业生产经营变化等情况，着力强化税收管理，全年一共组织税收收入5809.59万元；（其中增值税4793.26万元、企业所得税1016.33万元）, 代收个人利息所得税339.91万元。较去年比增长2236.44万元，(其中:增值税增长1391.85万元,企业所得税增长844.59万元)，代收利息税增长37.37万元,全面超额完成了县局下达的各项税收任务。 二、合理分工，提高效力。根据税源管理一科管户广、企业分散等特点，年初根据县局目标管理的要求，和工作岗位体系，工作任务等，结合每人的具体情况。将工作职责落实到人，使每个人的工作职责分明，细化分工，相互协作，充分发挥了每个人的作用。按照科长负责全面，管理员按南北区域划分、行业划分的原则。具体做出了较为合理的分工,调动了全体人员的工作积极性,充分发挥了全体人员的工作热情,使全科各项工作能及时、全面地完成。办事效力显著提高，为纳税人提供优质服务打下了良好基础。 三、加强税收征管质量和数据质量的落实管理，坚持依法治税。根据县国税局的要求，年初制订了管理一科工作计划,并组织全科认真学习，使每个人明确自己的岗位责任。按照市局征管质量和数据质量要求，及时对每个纳税户每月的征管质量和数据质量进行跟踪，出现问题及时处理，确保了税收征管质量和数据质量的提升，提高了征管“五率”。加强了增值税一般纳税人的税收管理，把住认定调查关，对照一般纳税人的标准，对未达标的企业，如企业的生产规模，财务核算不够健全，防伪税控的防盗设备不达标准等，及时提出了整改意见。企业被认定增值税一般纳税人怎样进行税收申报等业务，专管员及时进行辅导，使初认定一般纳税人的企业在税收申报方面及时、完整不出错。对不符合一般纳税人条件的企业，在年检时提出取消资格意见，xx年取消了二户不符合一般纳税人资格的企业。对服装针织企业实行验货制度，会昌晋昌服饰织造有限公司，从xx年至今一直配合坚持验货，会昌县海鑫服饰有限公司由于财务混乱，通过半年多的辅导仍未改正，管理员入时提出取消增值税一般纳税人意见，取消了该企业的增值税一般纳税人资格。 四、加强税源分析和税收计划管理。管理一科为了加强税收计划考核，实行了重点税源分析和税收预测工作，规定每月10日前报送本月税收预测，每季20日前向县局报送下一季度的税收预测计划，为了保证计划的准确性，管理一科要求重点企业每月20日前报送税收预测表，税收管理人员根据企业报送的税收预测进行认真分析，通过计划管理，使我县税收收入计划得到有效的组织入库。 五、开展纳税评估工作和“四小票”的审核工作。根据纳税评估工作要求，我科利用评估系统软件对增值税一般纳税人全面进行了纳税评估，对评估出较大问题的企业进行约谈五户次，转实地核查的一户，通过约谈和核查，一方面从管理上对企业多一份约束力，另一方面企业自身也对纳税事宜多一份认识。“四小票”是增值税一般纳税人取得的用于增值税进项抵扣的票据，根据国税总局系统对开具和取的“四小票”的比对出现的错误数据进行核查，通过核查大部份是人为操作出现误填误录情况，未发现人为有意识的偷税行为。 六、推行电子多元化申报制度。根据市国税局要求，我管理一科电子多元化申报工作，按照县国税局统一按排，进行了扎实的宣传和动员工作，上半年对一般纳税人网上申报面达60%，小规模纳税人电话申报面达100%。下半年网上申报面，除新认定的二户商贸企业外
HUVEC细胞培养心得
HUVEC 培养交流讨论： 各位仁兄，我查了一下，关于HUVEC 的贴子有几千篇，不知有那位知道的多的能给总结一下？我想应该有以下几 1、讲清HUVEC 与ECV304区别 2、HUVEC 原代与细胞株的关系、区别问题 3、能否总结一下国内有哪些单位可以买到HUVEC ？是原代还是细胞株？ 4、培养中到底添加ECGS 还是ECGF ？ 5、有些推荐细胞的应该讲清自己的是原代还是细胞株，能养多少代。 希望能抛砖引玉。 票数+收藏2回帖16浏览2686我也要发帖 举报 ? 浙江医院招聘浙江省老年医学研究所（临床医学） ? 请教关于HUVEC 细胞的培养 ? 求购HUVEC ? 【互助小组】正在养或已经养过HUVEC 的请进。 docter_zhao ? 0 2004-08-03 15:14 消息 引用 分享 huvec 必需加ECGS 及肝素，否则很难生长增殖 举报 ? zjqlucky ? 15 ? 5 ? 7 2004-08-03 17:27 消息 引用 分享 docter_zhao wrote: huvec 必需加ECGS 及肝素，否则很难生长增殖 这个好像也未必吧，我养的原代的huvec 只用20％胎牛血清的RPMI1640也长的很好呀，只是传ecgs 能传这么多代吧 票数+收藏1 举报 ? 2004-09-08 00:20 消息 引用 分享 我们曾试过用m199或DMEM 加20％胎牛血清原代培养，感觉效果不佳，后来加了ECGS 及肝素，发现细胞长得能有改变 票数+收藏1 举报 引用 分享 huvec 是脐静脉内皮细胞,不是那么难养,细胞可以从脐带自己提取,卖现成的细胞株也不贵,用内皮细胞的配套培email-sinian19988@https://www.wendangku.net/doc/ed5485524.html,
监管平台建设工作总结
监管平台建设工作总结 一、建设初期、未雨绸缪 1、在招标文件中明确对各投标单位在数据采集、填报、审核所用到的人、设备的要求，同时将信息平台建设作为业主关心的问题之一写入招标文件，让各单位在招投标阶段就对信息平台建设有所了解进而有所重视； 2、积极配合开发单位开展对口化需求分析工作。由于信息平台建设涉及的专业、业务流程较多，因此在需求分析阶段需要将需求分析工作分散到各个职能部室进行，而工程技术部作为牵头部门负责管理整个平台建设； 3、在中标单位确定后适时安排人员培训，使各单位信息平台负责人真正地了解信息平台建设的目的、内容、数据采集、填报及审核的方法等等。 二、建设中期、EDCA循环（E代表开发、D代表使用、C代表检查、A代表实施） 信息平台自投用来以其简洁的界面、较为完善的功能、较为简单的操作赢得了用户的一致好评，这些都为数据的及时、准确和完整提供了保证，但信息平台乃新生事物，不可能一步到位，需要经历EDCA 这样一个过程去不断完善。 1、E
要求开发单位在项目部设置一名对管道施工有一定了解的协调人员，负责收集项目部、各参建单位在使用信息平台过程中所提出的各类问题，而后尽快解答。 2、D 用户使用信息平台上报、审核、汇总进而分析数据，因此信息平台建设完全依据项目划分进行架构，如此相应的用户权限、所需要上报的数据类型、数量等等皆一目了然，同时为了让数据填报、审核人员知道应该填什么数据、审什么数据、什么样的数据是合格的，项目部先后制定下发了《大港石化—济南—枣庄成品油管道工程项目信息管理平台管理办法》共计3版次。 3、C 项目部注重检查在信息平台建设工作中的重要性，检查不仅能检验前一段时间填报数据的及时、准确及完整，同样可以指导下一步数据填报、审核行为，检查亦是对信息平台本身功能上的检验，通过用户反馈及所提出的合理化建议去完善信息平台，总之一切工作紧紧围绕数据的及时性、准确性和完整性展开。信息平台建设作为“一把手工程”必须得到所有参建单位领导的重视，否则工作很难开展，为此，项目部先后组织了四次专项检查，第一次检查过后对各单位进行了打分、排名及下发不符合通知单，一是让各单位领导知道自己在全线同类单位中的位置，二是有利于项目部有的放矢地开展帮助提高工作，前三次检查间隔均为1个月，第四次2个月，通过下发不符合通知单
社区协税护税工作总结
社区协税护税工作总结 篇一：乡20XX年协税护税总结 **乡20XX年协税护税工作总结 ***乡始终把协税护税工作当成一项重要任务来抓，20XX年全乡实现地税收入417万元，国税收入230万元，均超额完成任务。在今后的工作中，我们将再接再厉，力争圆满地完成20XX年的协税护税工作。 一是强化宣传，营造依法纳税的良好氛围。通过制作宣传版面、悬挂宣传条幅、张贴标语、发放宣传手册、出动宣传车等形式，深入宣传与税收相关的法律法规，提高纳税人的纳税意识，让依法纳税光荣、偷税漏税可耻的观念深入人心，开创协税护税工作新局面。 二是加强部门协作，形成工作合力。加强工商、财政、税务、安监等部门的沟通协调，相关部门凝成一股绳，心往一处想，劲往一处使，齐抓共管，建立协税护税组织网络，多管齐下，解决协税护税过程中遇到的困难和问题。 三是加大协税护税力度，做到应收尽收。我们将组织国税所、地税所、财税所、工商所的工作人员，深入街道和村组，认真进行税源普查，抓大不放小，突出重点，全面兼顾，据实核定税额，据实征收，强化征管手段，坚持依法征收，依法管理，坚决打击偷逃漏税行为，确保税源不流失。
四是强化优质服务，积极培植税源。在征税的同时，做好服务工作，为纳税人提供政策和信息支持，积极主动帮助纳税人解决一些实际困难和问题，用热情周到的服务来赢得纳税人的信任。积极搭建招商平台，开展招商引资活动，落实优惠政策，为入驻商户提供宽松、和谐的环境，做到巩固现有的，培植将来的，力争形成税源的良性增长。五是加强队伍建设，落实责任制。积极组织工作人员学习税法知识，交流税收经验，提高征收水平；加强作风建设，严格执行税收征收纪律；明确相关部门在协税护税工作中的职责，建立绩效考核制，实行季考核、年总评，并根据考核结果，对做出突出贡献的单位和个人给予奖励，积极调动各方工作的积极性，确保圆满完成全年的目标任务。篇二：协税护税办20XX年工作总结 协税护税办20XX年工作总结 20XX年，协税办以科学发展观为统揽，以谋发展、保增长、调结构、促转型为主线，以组织收入工作为中心，按照“抓大不放小”的原则，不断创新机制、完善服务、强化征收，确保了税收的应收尽收，促进了辖区经济平稳较快发展。现将工作总结如下： 一、税收完成情况 20XX年全年任务8701万元，1—11月，我办税收预计完成8057万元，占全年任务的92.5%，比去年同期的6860万元增长了17.4%，增收收1197万元。 二、税源工作开展情况 （一）领导重视，加强税源经济建设
风电场工作总结
工作总结 某某风电场地处XX省某某市经济开发区，风电场共分两期，一、二期共安装99台某风机，一期工程在2011年10月并网发电，二期工程在2012年11月23日并网发电。2013年风电场在上级公司领导的正确引导下，坚持以安全生产为前提，以经济效益为中心，认真扎实开展各项工作，取得了一些成效，现将2013年主要工作汇报如下： 一、2013年主要工作完成情况 （一）安全生产 继续完善风电场安全管理网络，安全指标层层分解，安全责任得到有效落实。风电场自场长到值长再到运维员工逐级签订了《安全生产目标责任书》，每月召开安全例会对前一阶段的安全情况进行总结，并举办一到两次安全日活动，切实增强员工的安全责任意识；定期开展应急演练和反事故演习，不断提高员工的应急处理能力。认真贯彻落实上级有关安全生产的文件、会议精神，加大安全检查力度和问题整改力度，积极配合上级公司开展的安全检查活动，对查出的各类问题积极落实整改，跟踪闭环。 先后组织开展了风电场“全场停电应急预案”演练、“全场消防应急及逃生”等各项应急演练，根据上级公司指示开展“风
电场春季、秋冬季安全检查”等一系列专项安全检查活动。定期组织学习各类安全事故，每月开展《安规》培训及考试；组织风电场开展月度、季度“生产安全事故隐患”排查活动，并结合各类专项安全检查，做到不走过场，不留死角，不放过任何隐患和问题，认真解决安全生产各项工作存在的突出问题和薄弱环节，主动解决问题和隐患。 （二）生产指标完成情况 1.某某风电场2013年生产指标完成情况如下： 发电量：XXXIII万kwh、上网电量：XXXIII万kwh、可利用小时为XXXIII小时，位居全省前列，风机可利用率XXXIII%，综合场用电率XXXIII%，2013年弃风电量XXXIII万kwh。 （三）生产管理情况 1、为了应对发电量任务很重的严峻形势，风电场专门召开了“优化运行抢发电”专题会，认真分析了目前风电场存在的一些问题和优化空间，同时也借鉴了其他风电场一些好的经验，制定了风机功率曲线优化、风功率预测系统优化、AGC策略优化等多项技改方案，尤其在风机负荷性能优化方面取得了明显成效，为公司创造更多效益。 2. 设备管理 为加强风电场设备管理，风电场重新修编了设备台账、运检