细胞生物学实验指导书.

《细胞生物学》实验指导书

适用专业：生物科学、生物技术

实验目录

实验一植物原生质体的分离与融合 (1)

实验二动物细胞原代培养 (3)

实验三细胞传代培养 (4)

实验四植物细胞骨架的光学显微镜观察 (5)

实验五细胞凋亡的诱导、观察与检测 (7)

实验六环境因素诱变染色体改组的观察 (9)

实验七红细胞膜蛋白的分离及其电泳检测 (11)

实验一植物原生质体的分离与融合

实验项目类型：综合性

所属课程名称：《细胞生物学》

实验计划学时：7学时

一、实验目的

1.掌握原生质体分离的原理与技术；

2.了解细胞融合的基本原理及应用；

3.初步掌握PEG融合法和电融合法。

二、实验原理

植物原生质体是去除了细胞壁的裸露的细胞。原生质体可以从培养的单细

胞、愈伤组织和植物器官（叶等）获得。但一般认为从叶肉组织分离原生质体是

理想的材料，其优点是材料来源方便，供应及时，而且遗传性较为一致。原生质

体的分离通常采用酶解法，对细胞壁成分进行降解后获得。原生质体培养的条件和对营养的要求与组织、细胞相似。但原生质体由于除去了细胞壁，所以需要一定浓度的渗透压稳定剂来保持原生质体的稳定。常用的渗透压稳定剂包括甘露

醇、山梨醇、蔗糖等。其次,还应当考虑取材、酶的种类和纯度、酶液的渗透压、酶解时间及温度等因素对分离原生质体的影响。

2个或2个以上的细胞合并成为1个细胞的现象称为细胞融合。细胞融合的主要方法有病毒法、聚乙二醇（PEG）法和电融合3种方法，其原理基本相同，都是两细胞接触点的膜分子发生重组，然后由于表面张力作用，形成一个球形细胞。

原生质体分离融合和培养的意义：

1.除去了细胞壁为植物细胞之间的融合扫平了障碍，为制造新杂种开辟了道路。植物原生质体融合和培养在植物遗传工程和育种研究上具有广阔的应用前

景。它是植物同源、异源多倍体获得的途径之一，它不仅能克服远缘杂交有性不亲和障碍，也可克服传统的通过有性杂交诱导多倍体植株的麻烦，最终将野生种的远缘基因导入栽培种中，原生质体融合技术可望成为作物改良的有力工具之

一。

2.原生质体可摄入外源DNA，细胞器、细菌或病毒颗粒，这些特性与植物

全能性相结合为高等植物的遗传饰变打下基础。

3.获得细胞无性系和选育突变体的优良起始材料。

三、实验仪器与材料

1.材料：油菜叶子、白菜花

2.溶液或试剂：（1）洗涤液：甘露醇0.7mol/L，CaCl2·2H2O

3.5mmol/L, KH2PO4 0.7mmol/L(pH 5.6)，高压灭菌；

（2）混合酶液：1.5％纤维素酶，1％果胶酶溶于洗涤液中(pH 5.6)。

（3）50%PEG

（4）高pH高钙稀释液：

（5）20%蔗糖溶液

（6）DPD培养基：

3.仪器或其他用具：超净工作台、灭菌锅、显微镜、恒温培养箱、镊子、解

剖刀、剪子、接种针、铝饭盒、锡箔纸、记号笔、橡皮筋、试剂瓶、三角瓶移

液管、培养皿、酒精灯等。

四、实验步骤

(一)原生质体的制备:

1．取材：取新鲜油菜叶和白菜花瓣自来水洗净，再用70%乙醇浸泡30S，0.5％次氯酸钠消毒10min,无菌水冲洗5次.

2．酶解: 材料切成1mm宽细丝,加入适量酶液,置摇床上（60～70rpm），在25～28℃黑暗条件下，酶解5～7h.

3．分离: 用200目网过滤除去未完全消化的残渣,在1000rpm条件下离心5分钟，弃上清。加入3～4ml 洗涤液，相同条件下离心2-5分钟，弃上清，留1ml洗液。用滴管将混有原生质体的1ml洗液吸出，轻轻铺于20％蔗糖溶液上(5ml 离心管装3m1 20％蔗糖溶液)，在1000rpm条件下离心5－10分钟，由于密度梯度离心的作用，生活力强状态好的原生质体漂浮在20％的蔗糖与洗涤液之间，破碎的细胞残渣沉入管底。用200μｌ移液器轻轻将状态好的原生质体吸出(注意尽可能不要吸入下层的蔗糖溶液)，放入另一干净的离心管中，加4ml洗涤液，1000rpm离心2-5分钟，弃上清．

(二)原生质体融合:

1．将原生质体用DPD调节浓度为1×105个/mL。

2．将原生质体混合物滴入小培养皿，静置8～10分钟。

3．然后滴入50％的PEG溶液，静置2分钟。

4．依次间隔5分钟加入0.5ml、1 ml和2 ml高钙高pH洗涤液。注意在第二、三次洗液加入前，用移液器轻轻吸走部分溶液，但不能吸干，否则原生质体

破碎死亡；最后用液体培养基洗l～2次。制片，镜检。

五、实验报告

画出观察到的融合细胞，并计算融合率。

六、思考题

1.你认为要获得数量多、生活力强的原生质体,在实验中应注意那些问题?

增多数量的方法：多取材且尽量切碎，增加酶浓度，提高酶解温度，延长酶

解时间，操作轻柔，勿使原生质体破碎等。

提高生活力的方法：取新鲜材料，采用合适的酶浓度、作用温度和时间等。

2.举例说明原生质体融合的应用价值。

实验二动物细胞原代培养

实验项目类型：基础性

所属课程名称：《细胞生物学》

实验计划学时：4学时

一、实验目的

1.掌握动物细胞原代培养的基本方法和操作过程；

2.熟悉原代培养细胞观察方法。

二、实验原理

用直接从机体获取的细胞进行的培养称为原代培养。原代培养是建立各种细胞系的第一步，该技术可以在体外进行各种类型细胞的增殖、遗传、变异、分化

和脱分化、恶变与去恶变等研究。分为组织块培养法和消化法两种。

三、实验仪器与材料

1.材料:小鼠心、肝、脾、肾等

2.溶液或试剂：

（1）RPMI-1640培养基、小牛血清。

（2）0.25％胰蛋白酶、(pH 5.6)。

（3）Hanks液

3.仪器或其他用具：CO2培养箱、倒置显微镜、超净工作台、高压锅、水浴锅、解剖器械、培养瓶、微量加样器、吸管、移液管、酒精灯、酒精棉球等。

四、实验步骤

1.处死小鼠:将小鼠用颈椎脱臼法处死，放入75％酒精种浸泡消毒。

2.取材：在超净工作台中用灭菌的解剖器械剖开小鼠腹腔，辨认并取下肝脏、脾脏和肾脏，放入灭菌的培养皿中，加入Hanks液清洗，然后加入2mL胰蛋白酶液，研磨并过滤。

3.将液体转移到离心管，1200rpm离心5min收集细胞，加入适量培养液，CO2培养箱培养。

4.观察：逐日在倒置镜下观察细胞生长情况。

五、实验报告

画出细胞贴壁前和贴壁后的形态。

六、思考题

试述细胞原代培养成功的条件?

实验三细胞传代培养

实验项目类型：基础性

所属课程名称：《细胞生物学》

实验计划学时：3学时

一、实验目的

1.熟练掌握贴壁细胞传代的培养方法；

2.观察传代细胞贴壁、生长、繁殖过程中细胞形态的变化。

二、实验原理

离体培养的细胞群体增殖达到一定密度时，细胞的生长和分裂速度就会减慢甚至停止，如不及时分离传代培养，细胞将逐渐衰老死亡。传代培养是指细胞从一个培养瓶以1：2或其它比率转移，接种到另一培养瓶的培养。贴壁培养细胞

的传代通常采用胰蛋白酶消化，把细胞分散成单细胞再传代。

三、实验仪器与材料

1.材料：原代培养的小鼠细胞或Hela细胞

2.溶液或试剂：

（1）RPMI-1640培养基、小牛血清。

（2）0.25％胰蛋白酶、(pH 5.6)。

（3）Hanks液

3.仪器或其他用具：CO2培养箱、倒置显微镜、超净工作台、高压锅、水浴锅、培养瓶、微量加样器、吸管、移液管、酒精灯、酒精棉球等。

四、实验步骤

1．将长成单层的细胞从二氧化碳培养箱中取出，在超净工作台中倒掉瓶内

的培养液，加入少许消化液。(以液面盖住细胞为宜)，静置5～10分钟。

2.在倒置镜下观察被消化的细胞，如果细胞变圆，相互之间不再连接成片，

这时应立即在超净台中将消化液倒掉，加入3～5ml新鲜培养液，吹打，制成细胞悬液。

3．将细胞悬液吸出2ml左右，加到另一个培养瓶中并向每个瓶中分别加3ml 左右培养液，盖好瓶塞，送回二氧化碳培养箱中，继续进行培养。

五、实验报告

分别画出贴壁生长的小鼠细胞和Hela细胞,并说明二者的不同.

六、思考题

写出细胞传代培养成功的条件?

实验四植物细胞骨架的光学显微镜观察

实验项目类型：基础性

所属课程名称：《细胞生物学》

实验计划学时：3学时

一、实验目的

了解细胞骨架的结构特征及其制备技术

二、实验原理

细胞骨架是由蛋白质丝组成的复杂网状结构，根据其组成成分和形态结构可分为微管、微丝和中间纤维。它们对细胞形态的维持，细胞的生长、运动、分裂、分化，物质运输，能量转换，信息传递，基因表达等起到重要作用。用适当浓度

的Triton X-100处理细胞时，可将细胞质膜和细胞质中的蛋白质和全部脂质溶解

抽提，但细胞骨架系统的蛋白质不受破坏而被保存，经戊二醛固定，考马斯亮蓝R250染色或间接免疫荧光标记以后，可在显微镜下观察到细胞骨架结构。

三、实验仪器与材料

1.材料：洋葱鳞茎和口腔上皮细胞

2.溶液或试剂：

（1）M-缓冲液

（2）6mmol/L(pH 6.8)磷酸缓冲液

（3）1％Triton X-100（用M-缓冲液配制）

（4）0.2％考马斯亮蓝R250

（5）3％戊二醛

3. 仪器或其他用具：光学显微镜、50ml烧杯、玻璃滴管、容量瓶、试剂瓶、载玻片、盖玻片、镊子、小剪刀、吸水纸、擦镜纸等。

四、实验步骤

1.撕取洋葱鳞叶内表皮若干片，大小约1cm2，置于青霉素小瓶或小烧杯中。

2.用磷酸缓冲液（PBS）浸泡片刻。

3.吸去磷酸缓冲液，用1% TritonX-100处理20分钟。抽提细胞骨架以外的

蛋白质，从而使骨架图像更加清晰。

4.吸去TritonX-100，用M-缓冲液洗3次，每次3分钟。M-缓冲液有稳定细

胞骨架的作用。

5.用3%戊二醛固定15-20分钟

6.用PBS洗3次，每次3分钟

7.考马斯亮蓝染色15分钟

8.蒸馏水洗2次

9.置于载玻片上，盖上盖玻片，在光学显微镜下观察。

五、实验报告

绘出植物细胞骨架微丝结构图。

六、思考题

说出各步骤的目的和一些重要试剂的在此处的作用。

实验五细胞凋亡的诱导、观察与检测

实验项目类型：创新设计性实验

所属课程名称：《细胞生物学》

实验计划学时：9学时

一、实验目的

1.了解细胞凋亡的概念和原理；

2.掌握细胞凋亡诱导的方法；

3.认识细胞凋亡的特征。

二、实验原理

人体内的细胞注定是要死亡的，目前人们已经知道细胞的死亡起码有两种方式，即细胞坏死与细胞凋亡。坏死是细胞受到强烈理化或生物因素作用引起细胞

无序变化的死亡过程。表现为细胞胀大，胞膜破裂，细胞内容物外溢，核变化较慢，DNA降解不充分，引起局部严重的炎症反应。凋亡是细胞受到内、外因子

刺激后发生的由基因调控的生理性死亡行为。其细胞及组织的变化与坏死明显不同。细胞凋亡的形态学变化：首先细胞体积缩小，连接消失，与周围的细胞脱离，然后胞质密度增加，核质浓缩，核膜核仁破碎，DNA降解，胞膜形成小泡，最终为为几个凋亡小体，无内容物外溢，因此不引起周围的炎症反应，凋亡小体可迅速被周围专职或非专职吞噬细胞吞噬。凋亡细胞DNA的有控降解是一种内源性核酸内切酶作用的结果，该酶在核小体连接部位切断染色体DNA，这种降解

表现在琼脂糖凝胶电泳中就呈现特异的梯状Ladder图谱，而坏死呈弥漫的连续图谱。

三、实验仪器与材料

1.鸡血细胞

2.溶液或试剂：生理盐水，20mmol/LCaCl2 顺铂，姬姆萨染色剂，

Tris.HCl,SDS, EDTA, 乙醇，甲醇，蛋白酶K。

3.仪器或其他用具：超净工作台、灭菌锅、显微镜、恒温培养箱、镊子、解

剖刀、剪子、接种针、铝饭盒、锡箔纸、记号笔、橡皮筋、试剂瓶、三角瓶移

液管、培养皿、酒精灯等。

四、实验步骤

(一)细胞凋亡的诱导：

1.采鸡血10ml，加0.85%的生理盐水混匀，1200r/min离心5min，弃上清液（重复三次），制备红细胞悬液，然后加入50ml血细胞保存液混匀放于4℃冰箱中备用。

２.取4个试管，各加入鸡血细胞保存液2ml，在1号管中加入2ml 生理盐水作为阴性对照，2号试管加入2ml 10ug/ml的顺铂溶液作为阳性对照；3号试管中加入2ml 20mmol/L的CaCl2溶液进行胁迫处理；4号试管不加任何物质，实验时煮沸 5 min 使细胞坏死。

（二）细胞凋亡的形态学观察：

1．处理4h 取样，用生理盐水稀释5倍，各取50ul细胞悬液均匀涂布于5片载玻片上，晾干。

2．用甲醇固定2min，然后在载玻片上滴加适量姬姆萨染液染色10min。

3．用蒸馏水轻轻洗去染液，室温晾干，在光学显微镜下观察细胞形态变化。

4．照相，并对试验组细胞进行凋亡计数统计。

（三）DNA 梯状条带的检测：

1．离心收集鸡血细胞，弃上清。

2．加入1ml的细胞裂解缓冲液重悬，转入 1.5ml 离心管中，加入蛋白酶K ，混匀。

（500ug/ml）20μｌ

3．在65℃恒温水浴锅中水浴30min（也可转入37℃水浴12～24h），间歇振荡离心管数次。

4．于台式离心机以12000 rpm离心5min，取上清液入另一离心管中。

5．加2倍体积异丙醇，倒转混匀后，可以看见丝状物，用100ul 吸头挑出，或12,000转/分离心5分钟,弃上清,晾干．

6．用50ulTE缓冲液(pH8.0)溶解沉淀，并加入RNase A(10ug/ul)5ul，于37℃保温10～15分钟。

7．1.2 %琼脂糖凝胶，75 V电压，电泳45 min 左右，

8．紫外灯下观察并照相。（琼脂糖凝胶电泳：称取 1.2克琼脂糖加入100ml 1×TBE),加热使之溶解,取一个凝胶模子,两端用胶布封好,水平放置.将制孔器(即

梳子)放在模子一侧约0.5cm处,其底部距模子约1mm.待琼脂冷至约70℃时,加入10ul 0.5mg/ml EB,混匀,倒入模子,待冷却凝固后,取下梳子,撕去两端胶布,放入电

泳槽中,使有加样孔的一端放在负极一端.在电泳槽中加入1×TBE至超过凝胶表

面约1mm. 加入DNA电泳样：1.5ul DNA (DNA ladder)+3.5ul ddH2O+1ul buffer。打开电源,使电压为10V/cm凝胶.当溴酚蓝走到凝胶的3/4处,停止电泳.紫外灯下检测电泳的情况。）

五、实验报告

画出凋亡细胞与坏死的形态。

六、思考题

列举3种以上检测细胞凋亡的方法。

实验六环境因素诱变染色体改组的观察

实验项目类型：设计性

所属课程名称：《细胞生物学》

实验计划学时：7学时

一、实验目的

1学会鉴别外界条件诱变染色体改组的各种类型，为进行环境监测和诱变育

种提供细胞学方面的依据。

2使大家认识到生活中的各种有害因素，提高自我保护和环保意识。

二、实验原理

目前，由于大量新的化合物的合成，原子能的应用，各种各样工业废物的排

放等都存在污染环境的可能。欲了解这些因素对机体潜在的遗传危害，就需要一套高度灵敏，技术简单易行的系统来监测环境的变化。而生物监测技术是目前进行环境污染，化学诱变物质以及辐射对机体损伤程度监测的一个主要指标。同时，它也为进行辐射防护、新药试验、食品添加剂的安全评价，以及染色体遗传疾病和癌症前期诊断等各个方面提供了很好的手段。用于进行环境因素、诱变物质、辐射损伤的生物检测方法包括染色体畸变类型的检测和微核的检测等。常用于测试的材料有鸭跖草、水葱花、韭菜花等的花穗，以及蚕豆根尖和小白鼠等。一般

来说，处于分裂过程的细胞，对环境因素最敏感，尤其是处于减数分裂时期的花粉母细胞。诱变物质、环境污染及辐射对人类和其它高等生物的遗传损伤，在细胞水平表现为染色体畸变，遗传损伤不仅表现在体细胞，而且也通过生殖细胞扩散和积累。

三、实验仪器与材料

1.材料：大葱花或大葱根尖

2.溶液或试剂：

（1）无水乙醇

（2）盐酸

（3）甲醇

（4）冰醋酸

（5）改良苯酚品红染色液

3.仪器或其他用具：显微镜、解剖针、酒精灯、载玻片、盖玻片、吸水纸等。

四、实验步骤

1．取材：选取处于减数分裂期的花穗剪下15-20cm的花序，或取旺盛分裂的根尖，部分插在自来水中作对照，另一部分插在污水中，处理12～24h，再移到自来水中恢复培养24h。

2．固定：用卡诺氏固定液固定12h，经95%、85%乙醇各30min，70%乙醇4℃保存。

3．制片：剥取花药，用镊子轻轻捣碎，或将根尖酸解10分钟后压片，用改良苯酚品红染色5～10min ，去掉残渣，盖上盖玻片。

4．镜检：用低倍镜找到分裂期细胞，再转用高倍镜，可看到经污水处理过

的细胞中，染色体畸变的类型和微核的数目，分别要比对照组高。微核出现的多少，可作为监测环境污染程度的指标。

五、实验报告

画出观察到的微核和染色体畸变类型并计算染色体畸变率。

六、思考题

列举生活环境中可以导致染色体畸变的因素.

实验七、膜蛋白质的分离与鉴定

实验项目类型：综合性

所属课程名称：《细胞生物学》

实验计划学时：8学时

实验目的

1．掌握血影膜的制备及膜蛋白质的电泳分离技术。

2．了解以上实验技术的原理和意义。

实验用品

一、仪器

超速离心机、平板式电泳架＼电泳仪＼移液器＼离心管＼注射器、长针头注射器(50m1)、水浴锅、微量注射器(100μl)、parafilm 纸封、各类吸管、量筒、烧杯等。

二、试剂及样品备制

1．PBS(phosphafe buHer saline)

5 mmol／L Na2HP04 (Mw＝142)

5 mmo1／L NaH2P04 (Mw=140)

145 mmo1／L NaCl (Mw=58.5)

pH7.6

2．磷酸盐缓冲液(pH7.6)

Na2HpO4 5 mmo1／L

NaH2P04 5mmo1／L

3.solution A (Acrylamide Stock Solution),100ml

30%(w/v) acrylamide,0.8%(w/v) bis-acrylamide

Caution: Unpolymerized acrylamide is a skin irritant and a neurotoxin.Always handle with gloves.See Safety Notes.

a.29.2g acrylamide

b.0.8g bis-acrylamide

Add distilled water to make 100ml and stir until completely dissolved .Work under hood and keep acrylamide solution covered with Parafilm until acrylamide powder is completely dissolved.Can be stored for months in the refrigerator.

Separating Gel Buffer),100ml

4.Solution B (4×

a.75ml 2M Tris-HCL (pH8.8) …1.5M

b.4ml 10%SDS … 0.4%

c.46ml H2O

Stable for month in the refrigerator.

Separating Gel Buffer),100ml

5.Solution C(4×

a.50ml 1M Tris-HCL(Ph 6.8) …0.5M

b.4ml 10% SDS …0.4%

c.46ml H2O

Stable for months in the refrigerator.

6.10% ammonium persulfate ,5ml

a.0.5g ammonium persulfate

b.5ml H2O

Stable for months in a capped tube in the refrigerator.

7.Electrophoresis Buffer ,1 liter (2L)

a.3g Tris …25mM

b.14.4g glycine …192Mm

c.1g SDS …0.1%

d.H2O to make 1 L

pH should be approximately 8.3.

Can also make a 10×

stock solution.

Stable indefinitely at room temperature.

8.5× Sample Buffer ,10ml

a.o.6ml 1M Tris-HCL(pH6.8) …60mM

b.5ml 50% glycerol …25%

c.2ml 10% SDS …2%

d.0.5ml 2-mercaptoethanol …14.4mM

e.1ml 1% bromophenol blue …0.1%

f.0.9ml H2O

Stable for weeks in the refrigerator or for months at -20℃.

9.Calculation for X% Separating Gel

Solution A x/3ml

SolutionB 2.5ml

H2O (7.5-x/3)ml

10% Ammonium Persulfate 50ul

TEMED 5ul(10ul if x<8%)

Total Volume 10ml

10.Example of Stacking Gel Preparation

8cm×0.75mm),4ml

Two 5% Stacking Gels(6×

2.3mlH2O

0.67ml Solution A

1.Oml Solution C

30ul 10% Ammonium Persulfate

5ul TEMED

11．染色液

0.04％Comassie brilliant blue R—250

10％HAC

25％Isopropl alcohol

12．脱色液

7.5％HAC

5％MeOH

实验方法

一、血影膜制备方法

实验步骤：

1．取全血5ml 置入离心管中；

2．加入1ml的磷酸盐缓冲液(PBS)，再以1 000r／min 离心5min，温度为4℃；

3．离心后呈现图左所示：弃去上清液和中间的一层淡黄色帽状物(bully coat)，在上清液中主要包括血清和PBS 成份，帽状物中包括白细胞和血小板等，只留下最下层的压积的红细胞(packed RBC)；

4．再重复以上l～2 次，洗涤被压积的红细胞；

5．洗涤后，去上清液，只留下被浓缩的RBC 部份；

6．加入15(20 倍的的磷酸盐缓冲液，并将其与RBC 混合均匀，在常温下(20℃)静置20～25min 进行低渗处理，然后置入高速离心机内(4℃)以10 000～15 000r／min 离心15—20min。

7．离心后呈图左所示:弃上清液和最下层的一块粉红色纽状沉淀，这时在上

清液中主要包括PBS 和血红蛋白，在最下层的钮扣状沉淀中含有大量的蛋白酶，

要清除干净，否则会影响以后的电泳结果，只留下中间的一层血影膜。

8．将团块状的沉淀，重复(按6)洗涤1～2 次，直至血影膜呈乳白色，去上

清液后，即为所制备的样品。

二、样品的电泳分离

1．制备SDS-聚丙烯酰胺凝胶

（1）配制9%分离胶（15ml）：双蒸水6.55ml，1.5M Tris-HCl（pH8.8）3.75ml，30%丙烯酰胺储存液（Acry/Bis）4.5ml，10%SDS 150ml，10%过硫酸铵（APS）50ml，混匀后加入3.75ml TEMED，立即混匀，灌入装好的垂直板中，至距离短

玻璃顶端约2cm处。检查是否有气泡，如果有，用滤纸条吸出。在胶液上面加一

层双蒸水，静置，待凝胶与水的界面清晰时，说明分离胶已聚合（约30分钟），去除水相，用滤纸吸干残存的液体。

（2）配制4%浓缩胶（10ml）：双蒸水6.1ml，0.5M Tris-HCl（pH6.8）2.5ml，30%丙烯酰胺储存液（Acry/Bis）1.3ml，10%SDS 100ml，10%过硫酸铵（APS）50ml，混匀后加入10ml TEMED，立即混匀，灌入垂直板中至短玻璃顶端，插入

梳子，避免产生气泡，静置，约60分钟后，胶聚合，拔去梳子，用电极缓冲液冲

洗加样孔，以去除未聚合的丙烯酰胺。（3）将凝胶固定在电泳槽中，上下槽各加

入1′Tris-甘氨酸电泳缓冲液，驱除两玻璃板间凝胶底部的气泡。样品处理及上样

在Ependorf管中加入蛋白提取液16ml，5×上样缓冲液4ml，充分混匀，与蛋白分

子量标准一起放在100°C沸水中煮5分钟后，用微量加样器上样。为了便于比较蛋白电泳结果和免疫印迹结果，采取对称加样。将电泳装置接通电源。开始电泳时，电压为80V，当样品进入分离胶后，将电压调到150V。继续电泳至样品前沿抵达

分离胶底部，断开电源。采用平板电泳，将胶用注射器注入电泳管或平板腔内，

使胶液高度为110mm 左右，如发现胶液内留有气泡，应及时用长针头注射器清除，灌胶后约15～20mim，用注射器在胶液表面轻轻加入蒸馏水或电泳缓冲液，

以防凝胶表面干结和氧化，在室温下放置4～5h 或过液，以进行固化处理。

2．溶解样品

(1)按1份血影膜加入1 份溶解液混匀。

(2)按总体积加入DTT，使最终浓度为40 mmol／L，大约每毫升含DTT 为12.3mg。

(3)在90～100℃水浴中溶解3min，用自来水冷却至室温

(4)加2～3滴考马斯亮蓝R—250 混匀待用

3．电泳

固化处理完成后，除去凝胶表面的水或电泳缓冲液，并除去底端的纸封或其它隔离物，然后分别向电泳管顶端或平板胶样品孔内加入50t．d(或100pi)溶解的样品，并在其上面加入电泳缓冲液。

按常规凝胶电泳方法加入电泳缓冲液并接通电源，如系圆盘电泳，开始5min 内每管1mA，5min 后每管3～5mA，如系平板电泳，开始5min 内每样1.5mA，之后每样4／u6mA，电泳时间视指示剂(TD)移动情况而定，最快需2～3h，有时需5～6h。

在电泳开始之前，应注意及时清除凝胶上下端存留的气泡。在电泳过程中，

所用时间可根据指示剂考马斯亮蓝R—250 所走的部位而定，当指示剂走向下端

约1-1.5cm 处，即可停止电泳。

4．剥胶、染色

细胞生物学实验指导

细胞生物学实验指导

细胞生物学实验指导目录 一．显微镜的使用 实验一、几种光学显微镜的使用 实验二、参观电子显微镜及生物超薄切片标本制备 二．细胞形态结构 实验三、细胞大小的形态观察——测微尺的使用 实验四、细胞活体染色技术 实验五、植物细胞骨架光学显微观察 实验六、胞间连丝观察 三．细胞化学 实验七、鉴定RNA的细胞化学方法——Branchet反应 实验八、DNA显色的观察——Feulgen反应 实验九、固绿染色法鉴定细胞内酸性蛋白与碱性蛋白 实验十、多糖及过氧化酶的显示 实验十一、核仁组成区的银染显示与观察 四．细胞生理 实验十二、细胞膜的通透性 实验十三、细胞电泳 五．细胞和组织培养技术 实验十四、植物原生质体的分离和融合 实验十五、植物细胞的培养与观察 实验十六、动物细胞融合 实验十七、动物细胞的培养与观察 六．细胞化学成分的分离 实验十八、细胞器的分离、纯化——细胞分级分离 实验十九、荧光的细胞化学测定 实验二十、细胞活力的鉴别 实验一几种光学显微镜的使用

一、实验目的 了解几种光学显微镜的结构、工作原理、主要用途和使用方法；掌握使用普通显微镜提高分辨力的方法。 二、实验原理 (一)基本原理 一般实验室经常使用的光学显微镜都是由物镜、目镜、聚光器和光阑组成，普通显微镜它们的放大原理及光路图如下： AB物体．A1B l第一次成像，A2B2第二次成像，O l目镜．O2物镜， F1为O l的前焦点，F2为O2的前焦点 各种光学显微镜的光学放大原理基本相同，各种特殊用途的光镜不过只是在光源、物镜、聚光器等方面作了改动，或在其它方面增设了某些特殊的设备。 (二)几种光学显微镜 l、普通光学显微镜： 普通光学显微镜也叫复式显微镜，是最常见，最简单的显微镜。它适于观察一般固定的，有色的透明度较高的标本。其最大分辨力一般为0.2微米，从构造上可分光学、机械和电子三大系统。 2、暗视野显微镜： 暗视野显微镜是以丁达尔现象(Tyndall phenomenon)(即光的微粒散射现象)为基础设计的,它使用了特殊的聚光器进行斜射照明,因光源中心束不直入物镜，所以视野黑暗，而被检细胞器因斜射照明发生衍射和反射，所以发亮可见。暗视野显微镜可用增加光照方法增加物体与背景的反差，因而可观察到0．2—0．004微米直径的微小粒子，但它分不清被检物的细微构造，它常用于观察物体的存在与运动。而暗视野显微镜与普通光学显微镜的区别，主要在于聚光器的不同，致使照明方法有别。确切地说，称暗视野显微镜为暗视野照明更为贴切。它是照明光线仅照亮被检样品而不进入物镜。使视野背景暗黑，样品明亮的照明方法。 3、相差显微镜： 相差是指同一光线经过折射率不同的介质其相位发生变化并产生的差异。相位是指在某一时间上，光的波动所达到的位置。

(完整版)分子生物学实验技术考试题(卷)库

一、名词解释 1.分配常数：又称分配系数，是指一种分析物在两种不相混合溶剂中的平衡常数。 2.多肽链的末端分析：确定多肽链的两末端可作为整条多肽链一级结构测定的标志，分为氨基端分析和羧基端分析。 3.连接酶：指能将双链DNA中一条单链上相邻两核苷酸连接成一条完整的分子的酶。 4.预杂交：在分子杂交实验之前对杂交膜上非样品区域进行封闭，用以降低探针在膜上的非特异性结合。 5.反转录PCR：是将反转录RNA与PCR结合起来建立的一种PCR技术。首先进行反转录产生cDNA,然后进行常规的PCR反应。 6.稳定表达：外源基因转染真核细胞并整合入基因组后的表达。 7.基因敲除：是指对一个结构已知但功能未知或未完全知道的基因，从分子水平上设计实验，将该基因从动物的原基因组中去除，或用其它无功能的DNA片断取代，然后从整体观察实验动物表型，推测相应基因的功能。 8.物理图谱：人类基因组的物理图是指以已知核苷酸序列的DNA片段为“路标”，以碱基对(bp，kb，Mb)作为基本测量单位(图距)的基因组图。 9.质谱图：不同质荷比的离子经质量分析器分开后，到检测器被检测并记录下来，经计算机处理后所表示出的图形。 10.侧向散射光：激光束照射细胞时，光以90度角散射的讯号，用于检测细胞内部结构属性。

11.离子交换层析：是以离子交换剂为固定相，液体为流动相的系统中进行的层析。 12.Edman降解：从多肽链游离的N末端测定氨基酸残基的序列的过程。 13.又称为限制性核酸内切酶(restriction endonuclease)：是能够特异识别双链DNA序列并进行切割的一类酶。 14.电转移：用电泳技术将凝胶中的蛋白质，DNA或RNA条带按原位转移到固体支持物，形成印迹。 15.多重PCR：是在一次反应中加入多对引物，同时扩增一份模板样品中不同序列的PCR 过程。 16.融合表达: 在表达载体的多克隆位点上连有一段融合表达标签（Tag），表达产物为融合蛋白（有分N端或者C端融合表达），方便后继的纯化步骤或者检测。 17.同源重组：发生在DNA同源序列之间，有相同或近似碱基序列的DNA分子之间的遗传交换。 18.遗传图谱又称连锁图谱(linkage map)，它是以具有遗传多态性的遗传标记为“路标”，以遗传学距离为图距的基因组图。 19.碎片离子：广义的碎片离子为由分子离子裂解产生的所有离子。 20.前向散射光：激光束照射细胞时，光以相对轴较小角度向前方散射的讯号用于检测细胞等离子的表面属性，信号强弱与细胞体积大小成正比。 21.亲和层析:利用共价连接有特异配体的层析介质分离蛋白质混合物中能特异结合配体的目的蛋白或其他分子的一种层析法。(利用分子与其配体间特殊的、可逆性的亲和结合

细胞生物学实验

1. 什么是细胞培养？ 细胞生物学实验 指从动物活体体内取出组织，并将其分散为单个细胞（机械或酶消化），在体外模拟体内的生理环境，使其在人工培养条件下保持生长、分裂繁殖、细胞的接触性抑制以及细胞衰老过程等生命现象。 最常见的细胞一般有两种，一种是原代细胞，另一种是传代细胞。 原代细胞是指动物组织经过胰酶或胶原酶等酶类的消化，使其分散，从而获得单个细胞，再使这些单个细胞生长于培养容器中的过程。大多数组织可以制备原代细胞，但制备的方法略有不同，制备的细胞生长快慢及难易程度也不相同。 不同的原代细胞，其形态也不尽相同。一般将10代以内的细胞称之为原代细胞。 传代细胞一般指无限繁殖的细胞系，理论上这类细胞可以无限次的传代。做实验的时候也会经常使用这类细胞，如Hela、293、Vero 等细胞。 2. 细胞的生长周期 游离期：细胞刚接种到新的培养容器中到贴壁前的一段时期，这个时期的长短由细胞类型决定，从几分钟到几个小时不等。 贴壁期：细胞从游离状态变为贴附到培养器皿表面并展现出一定细胞形态的时期。 潜伏期：细胞在完成贴壁后，并不会马上进行增殖，会进行增殖所必须的物质和能量的储备，这个时候称之为潜伏期。

对数生长期：细胞在完成物质和能量储备后，开始大量的增殖的时期。这个时期的细胞活力旺盛，且状态稳定，我们所做的绝大多数实验都是在这个时期开展的。 停止期：随着细胞的生长，细胞密度越来越大，由于营养物质的消耗、细胞间的接触抑制等因素，细胞生长缓慢，甚至停止生长。这个时候，我们就要给细胞进行传代了，使细胞可以继续进行增殖，保持旺盛的活力。 3. 细胞生长所需要营养条件 细胞的培养所需要的营养成份一般来自于基础培养基（比如DMEM培养基）和血清。 基础培养基：主要是提供细胞生长所需要的氨基酸（组成蛋白质的基本单位）、维生素（细胞代谢中辅酶的组成成分）、无机离子（K+，Na+等）、碳水化合物（碳源和能量来源）和一些激素等营养物质。 血清：主要是提供一些基础培养基不能提供的生长因子和低分子的营养物质，此外它还有促进细胞的贴壁、中和有害重金属离子等作用。如果只提供基础培养基而不提供血清，绝大多数细胞是无法生长的。血清对于我们实验的重要性就不言而喻了，那么什么样的血清才算是合格的血清呢？ 合格的血清需要通过各种检测，包括无细菌，无真菌，无支原体检测，无病毒污染。血清一般呈现为淡黄色，透明状液体，由于含有大量的蛋白质等成分，会略有黏稠。以全式金公司的TransSerum EQ Fetal Bovine Serum (FS201-02)为例，它通过了牛腹泻病毒、牛副

生物学实验原理与技术 教学大纲

生物学实验原理与技术教学大纲 10.1教学任务： 本课程由植物生物学、生理学、微生物学、细胞生物学、遗传学、免疫学、生物化学和分子生物学等方面相关的实验理论知识、实验技术和实验方法组成，是一门与实验课相衔接的实验理论讲授课程，各部分内容在实验课开课前统一进行集中讲授，学生课后预习，为学生进行的实验操作奠定了理论基础。 10.2教学要求： 本课程是各门基础实验课程的前导课，涉及各个实验项目的原理与基本技术方法。因此，要求学生在实验前认真听教师讲解相关基础知识，积极思考、认真记录。课后认真复习、认真回答思考题，并参加每次实验前的预习测试。 10.3教学目的： 使实验课程与理论课程合理衔接，加强学生对实验的相关理论知识的理解与掌握，促进学生充分预习和对即将进行实验的基本技术和基本方法全面的理解。为学生进行的实验操作奠定理论基础。 11．学生应掌握的实验技术及实验能力 本课程是一门与实验课相衔接的实验理论讲授课，涉及8门生物学基础实验课程的实验原理、技术和方法。具体内容包括显微镜技术、分离类胡萝卜素和叶绿素、提取叶绿体色素、观察叶绿素的荧光现象、观察光对叶绿素的破坏作用、测定种子发芽率、观察呼吸运动的调节、麻醉家兔、气管插管、制备蛙类坐骨神经腓肠肌标本、证实反射弧的完整性与反射活动的关系、验证心肌有效不应期较长的特征、观察蛙期前收缩与代偿间歇、钝性分离气管、无菌操作技术、微生物

简单染色方法、血球计数板的使用、灭菌锅的使用方法、微生物分离纯化技术常规微生物涂片观察技术微生物培养技术、菌种保藏技术、无菌操作技术、微生物简单染色方法、血球计数板的使用、灭菌锅的使用方法、微生物分离纯化技术、常规微生物涂片观察技术、微生物培养技术、菌种保藏技术、显微镜技术、观察胀泡的形成、鉴别纺锤体、鉴别姐妹染色单体、植物染色体制片技术、染色体臂形成、观察细胞内多糖的分布、观察细胞内DNA的分布、原代细胞培养、传代细胞培养、细胞的消化分散、观察细胞融合的现象、詹纳斯绿染色、PEG诱导鸡静脉血的化学融合、植物组织培养技术、制作石蜡切片及HE染色、核酸的乙醇沉淀、测定RNA含量、测定核酸含量、定磷法测定核酸的含量、地衣酚法测定RNA含量、预处理组织、匀浆组织、提取核酸、核酸核蛋白（RNP）苯酚分离、剥离凝胶板、自溶处理、超声破碎、制冰盐浴、目测酶活力、免疫小鼠、颈部皮下注射抗原、腹腔注射抗原、统计处理数据、梯度稀释血清、离心分离血清、摘眼球取血、测抗体效价、体外重组DNA、连接DNA片段、凝胶回收DNA、CaCl2法制备感受态、转化外源DNA、PCR扩增、DNA琼脂糖凝胶电泳、碱裂解法提取质粒、蓝白斑筛选、限制性内切酶使用等。 本课程还加入了安全环保及习惯教育内容。主要内容包括火灾预防与逃生常识，触电防护知识，烧烫伤处理方法，实验室有毒废弃物处理常识，实验动物尸体处理常识，实验习惯教育及实验室环保教育等。 12．开设实验项目 开设实验项目一览表

细胞生物学实验指导(植物版)

细胞生物学实验 实验一不同显微镜的使用及细胞一般形态结构的观测[实验目的] 通过本实验，使学生巩固普通光学显微镜的使用，学习相差显微镜、暗视野显微镜和荧光显微镜的使用方法，学习显微测量及显微摄影的操作方法，增强对细胞的形态和真实大小的感性认识。 通过本实验操作，要求学生掌握细胞形态结构的基本观测方法与技术，为进一步的细胞生物学研究打好基础。 [实验原理] 应用显微镜的成像原理(详见翟中和等主编《细胞生物学》，第三章第一节)，同时借助显微镜的镜台测微尺和目镜测微尺，两尺配合使用，进行测量和运算，观察细胞形态，得出细胞的大小。 该实验完成需时6学时。 [实验材料、试剂和仪器] 一、仪器 普通光学显微镜、相差显微镜、暗视野显微镜、荧光显微镜、显微拍摄系统、37℃温箱、镜台测微尺、目镜测微尺等。 二、材料 洋葱根尖切片标本，念珠藻永久装片，兔肝细胞标本，夹竹桃花丝毛细胞，人口腔上皮细胞等。 三、试剂 生理盐水，10μg/mL罗丹明123染液（溶于甲醇，避光于4℃保存） [实验步骤] 一、暗视野显微镜观察夹竹桃花丝毛细胞 1、取一张清洁的载玻片，滴上一滴生理盐水。用镊子轻轻夹下一根夹竹桃花丝，置生理盐水中，盖上盖玻片，略微压片，用滤纸条吸去盖玻片四周多余的水分。 2、将上述装片置于显微镜载物台上，在10×物镜下找到夹竹桃花丝毛细胞清晰的图像。 3、换上暗视野聚光器，调节至最佳位置，通过聚光器上的调中螺旋调节聚光器的中心位置，得到最好的暗视野图像效果。 4、观察夹竹桃花丝毛细胞内部的显微结构和细胞质环流现象，并拍照。 5、换用高倍物镜观察时，要换用与高倍镜相匹配的暗视野聚光器，重复以上调节步骤。 二、相差显微镜观察夹竹桃花丝毛细胞 1、取一张清洁的载玻片，滴上一滴生理盐水。用镊子轻轻夹下一根夹竹桃花丝，置生

(完整版)细胞生物学实验测试题

细胞生物学实验测试题 1、试述荧光显微镜的原理和用途。（并操作） 原理：荧光显微镜是以紫外线为光源，用以照射被检物体，使之发出荧光，然后在显微镜下观察物体的形状及其所在位置。 （滤光镜片：获得所需波长的激发光；光源：高压汞灯） 用途：荧光显微镜用于研究细胞内物质的吸收、运输、化学物质的分布及定位等。细胞中有些物质，如叶绿素等，受紫外线照射后可发荧光； 另有一些物质本身虽不能发荧光，但如果用荧光染料或荧光抗体染色后，经紫外线照射亦可发荧光，荧光显微镜就是对这类物质进行定性和定量研 究的工具之一。 2、试述酸性磷酸酶显示法的原理及主要步骤。 原理：酸性磷酸酶（ACP）是溶酶体的标志酶，通常酸性磷酸酶在pH 为5左右时发挥作用能水解磷酸酯而释放出磷酸基，PO43-与底物中硝酸 铅反应生成磷酸铅沉淀物。由于这些沉淀物是无色的，需再与黄色的硫化 铵反应，生成棕黄色到棕黑色的硫化铅沉淀而被显示出来。其反应过程如 下： β-甘油磷酸钠+酸性磷酸酶→甘油+PO43- PO43-+Pb(NO3)2 →Pb3(PO4)2↓ Pb3(PO4)2+(NH4)2S →PbS↓(棕黑色) 主要步骤： 1、前处理：获取小白鼠或大白兔腹腔液（猪肝） 2、制片： （1）、将腹腔液（肝细胞悬液）滴一滴于冰冻的干净载玻片上，用牙签涂开，自然干燥。 （2）、放入10%中性福尔马林固定液中固定30min。 （3）、蒸馏水中漂洗,3-5次。（洗去固定液） （4）、磷酸酶作用液，37°C，30Min。 （5）、蒸馏水中漂洗3次，5min一次。（洗去游离铅离子） （6）、1%硫化铵处理（3-5min）; （7）、吉姆沙染液复染15min;（使细胞核、轮廓显示出来） （8）、制片观察。 结果：阳性细胞内有大小不等的棕色或棕黑色的颗粒即为酸性磷酸酶。 对照实验：标本放入作用液前先用高温（50℃）处理 30min，使酶失去活 性，做好标记，其他步骤相同。 3、试述DNA的Feulgen染色法的原理及主要步骤。 原理：DNA经稀盐酸（1mol/L HCL溶液）处理后，可使嘌呤碱与脱氧

细胞生物学实验指导(精)

细胞生物学实验指导 细胞生物学的发展总是依赖于技术和实验手段的进步,所以学习细胞生物学的技术和方法至关重要。 实验一普通显微镜及其使用（装片观察） 一、目的要求： 1、掌握显微镜的构造、油浸系的原理、使用方法、保护要点。 2、参观了解其他各类显微镜。 二、材料：普通光学显微镜及其他显微镜、细菌标本片、香柏油、二甲苯、擦镜纸。 三、方法和步骤： 1、介绍普通光学显微镜的构造 机械部分：镜座、镜臂、镜筒、转换器、载物台、调焦螺旋。 光学部分：接目镜、物镜、反光镜、聚光器。 2、油镜的原理及使用方法 原理：油镜头的晶片细小，进入镜中的光线亦少，光线经聚光器，通过载玻片进油镜时，由于空气介质和玻璃介质的折射率不一样，光线因折射而损失，使视野更暗。在载玻片和油镜之间加上和玻璃折光系数相同的香柏油，光线直接进入镜头，不发生折射，视野明亮，便于观察。 3、如何维护显微镜：机械部分的维护，光学部分的维护。 4、注意事项： （1）观察油镜载片时，先在载片上有菌影的地方滴1-2滴香柏油，然后放载物台中央，眼侧面看，慢慢降低油镜浸入香柏油中，镜头几乎接触标本。再用左眼在接目镜观察，同时慢慢旋动粗螺旋提起镜筒至能模糊看到物象时，再转动微调螺旋，直至看清晰为止。注意镜头离开油，就不能看清，重新按刚才的步骤进行。 （2）油镜使用过后，立即用擦镜纸擦拭镜头，如油渍已干，则可用香柏油粘二甲苯擦拭镜

头，再用干净擦镜纸擦去二甲苯。 5、观察几种细菌标本片。 6、示教看相差显微镜和荧光显微镜。 四、作业及思考题： 1、油镜的原理是什么？ 2、光线强弱如何调节？与哪些部件有关？ 实验二、细胞膜的渗透性 实验目的 了解细胞膜的渗透性及各类物质进入细胞的速度。 实验原理 将红细胞放入数种等渗溶液中，由于红细胞对各种溶质的透性不同，有的溶质可以渗入，有的不能渗入，渗入的溶质能够提高红细胞的渗透压，所以促使水分进入细胞，引起溶血，由于溶质透入速度互不相同，因此溶血时间也不相同。 实验用品 一、器材 50ml烧杯, 试管（1～10cm）, 10ml移液管, 试管架。 二、材料 羊血。 三、试剂0.17mol/L氯化钠，0.17mol/L氯化胺，0.17mol/L醋酸胺，0.17mol/L硝酸钠，0.12mol/草酸胺，0.12mol/硫酸钠，0.32mol/葡萄糖，0.32mol/甘油，0.32mol/乙醇，0.32mol/丙酮。 实验方法 一、羊血细胞悬液 取50ml小烧杯一个，加1份羊血和10份0.17mol/L氯化钠，形成一种不透 明的红色液体，此即稀释的羊血。

细胞生物学实验

实验室规则和要求 一般规定 1.上课第一天请先熟悉环境，牢记“安全”是进行任何实验最重要的事项。 2.在实验室内请穿著实验衣（最好长及膝盖下），避免穿著凉鞋、拖鞋（脚 趾不要裸露）。留有长发者，需以橡皮圈束于后，以防止引火危险或污染实验。 3.在实验室内禁止吸烟、吃东西、饮食、化妆、嚼口香糖、嬉戏奔跑，食 物饮料勿存放于实验室的冰箱中，实验桌上勿堆放书包、书籍、衣服外 套及杂物等。 4.所有实验仪器、耗材、药品等均属实验室所有，不得携出实验室外。每 组分配之仪器、耗材请在课程开始前确定清点与保管，课程结束后如数 清点缴回。公用仪器请善加爱惜使用。实验前后，请把工作区域清理擦 拭，并随时保持环境清洁。 5.实验前详阅实验内容，了解实验细节的原理及操作，注意上课所告知的 注意事项。实验进行中有任何状况或疑问，随时发问，切勿私自变更实 验程序。打翻任何药品试剂及器皿时，请随即清理。实验后，适切记下 自己的结果，严禁抄袭，确实关闭不用之电源、水、酒精灯及瓦斯等。 6.身体不适、睡眠不足、精神不济或注意力无法集中，请立即停止实验。 实验时间若延长，请注意时间的管制及自身的安全，不可自行逗留实验 室。 7.实验完毕，请清理实验室、倒垃圾、灭菌、关闭灯光及冷气，离开实验 室前记得洗手。 8.任何意外事件应立即报告教师或实验室管理人员，并应熟知相关之应变 措施。

药品 1.使用任何药品，请先看清楚标示说明、注意事项，翻阅物质安全资料， 查明是否对人体造成伤害，使用完毕请放回原位。 2.新配制的试剂请清楚注明内容物、浓度、注意事项及配制日期，为避免 污染，勿将未用完的药剂倒回容器内。 3.挥发性、腐蚀性、有毒溶剂（如甲醇、丙酮、醋酸、氯仿、盐酸、硫酸、 -巯基乙醇、甲醛、酚等）要在排烟柜中戴手套量取配制，取用完应随即盖好盖子，若不小心打翻试剂，马上处理。 4.有毒、致癌药剂例如丙稀酰胺（神经毒）、溴化乙啶（突变剂）、SDS（粉 尘）请戴手套及口罩取用，并勿到处污染，脱下手套后，养成洗手的好 习惯。 5.使用后的实验试剂和材料，应放在专用的收集桶内。固体培养基、琼脂 糖或有毒物品不得倒入水槽或下水道中。 6.使用刻度吸管取物时，切勿用嘴吸取，请用自动吸管或吸耳球。 仪器 1.使用仪器前先了解其性能、配备及正确操作方法，零件及附件严禁拆卸， 勿私自调整，并注意插座电压（110V或220V）之类别。 2.使用离心机时，离心管要两两对称、重量平衡，离心机未停下不得打开 盖子。冷冻离心机于开机状态时，务必盖紧盖子，以保持离心槽之低温并避免结霜。 3.电源供应器有高电压，切勿触摸电极或电泳槽内溶液，手湿切勿开启电 源。

细胞生物学发展简史

细胞生物学发展简史公司内部编号：（GOOD-TMMT-MMUT-UUPTY-UUYY-DTTI-

细胞生物学发展简史 一细胞的发现和细胞学说的建立 1665年，英国学者Robert Hooke用自制的显微镜观察栎树软木塞的薄切片，发现了其中有许多蜂窝状的小室，并将这些小室命名为cell。实际上当时看到的是植物细胞的细胞壁。此后，生物学家用cell一词描述生物体的基本结构单位，中文翻译为细胞。Hooke对有关细胞的首次描述见于1665年他的《显微图谱》中，因此人们认为细胞的发现是在1665年。 真正观察活细胞的是荷兰科学家Antony von Leeuwenhoek，他用设计较好的显微镜观察池塘水中的原生动物、蛙肠道内的原生动物、人类和哺乳动物的精子，并于1674年在观察鱼的红细胞时描述了细胞核的结构。 由以上可见，细胞生物学的基础建立于17世纪，并且Hooke和Leeuwenhoek两位科学家为此做出了重要贡献。 在Hooke发现细胞后的近170年中，人们用光学显微镜相继发现了一些不同类型的细胞，但对细胞的认识基本上没什么新的进展。直到19世纪30年代，显微镜制造技术有了明显的改进，分辨率提高到1μm以内；同时还由于切片机的制造成功，从而对细胞的观察有了许多新的进展，细胞核、核仁、细胞的原生质等被揭示，人们才真正认识到细胞的生物学意义。 1838~1839年，德国植物学家Scheleiden（1838年）和动物学家Schwann （1839年）总结前人的工作，综合了植物和动物组织中细胞的结构，提出了“细胞学说（cell theory）”，指出“一切生物，从单细胞生物到高等动、植物都是由细胞组成的；细胞是生物体结构和功能的基本单位”。后来德国科学家

(完整版)16考研厦大生科院初试第一,分享备考经验+复试环节

16考研厦大生科院初试第一，分享备考经验+复试环节 本人是华侨大学的，2016届考厦大生科院，是聚英厦大考研网的学员，今年以初试第一，复试第七名的成绩考进厦门大学生命科学院，广大研友的要求分享一下我的备考经验：包括初试经验分享（已更新），考研时间规划和所用书籍，包括初复试环节和复习注意事项，十分详尽，希望同学们做好笔记~ 环节一、初试 1.考研初试分数分配 初试科目： 英语：100 政治100 832生物化学：150 620细胞生物学150 厦大生科院近几年分数线： 2014年：322分2015年：310分2016年：310分 近几年生命科学院专业课压分比较严重，所以与厦大理科基本保持一致，而厦大理科线每年浮动小，如果没有重大改革，分数线不会有较大变化。总体来说，厦大生科院较之其他学院，虽然分数线比较低，但试卷题目难度大，而且招生特点是宁缺毋滥，近两年都收不满，都需要调剂，调剂的原则上要求考生是985/211的院校出身。 2.620细胞生物学的初试情况 2016年620试卷分数分配 选择题15题，30分；名词解释5题，30分；问答题2题，30分；英译汉3题，30分；实验题3题，30分。 其中选择题、名词解释、问答题最基础，但是以16年情况来看，出的偏题怪题比较多，这类题型主要来自中科院生物学的往年考研题，大家可以关注一下。而英译汉的题型要求熟记基本名词解释的英文，重点掌握关于癌症和癌细胞、生态系统。实验题基本上是厦大生命科学院常用的一些实验技术，重点掌握蛋白质与蛋白质之间的相互作用。另外2015年及之前每年都有考到RNA干扰，但2016年没考，该技术很可能会被基因编辑CRISPR所取代，16年复试有考，要重视这个动向。 关于初试的目标分数，建议至少要考到320分，因为如果初试分数太低，复试很容易被淘汰。由于厦大生科院专业课压分比较严重，主观题给的分数低，政治和英语的平均分最好都要过60,620分子生物细胞学和832生物化学平均要达到100分，这样总分加起来：60+60+100+100=320分，初试基本上没有问题。 在这里推荐一下聚英厦大的英语政治的暑期强化班和最后冲刺班，会邀请北京的大牛老师像陈正康、李海洋来讲课，一方面你可以把握一下考试重点在哪里，另一方面尤其是英语可以学到很多非常实用的应试技巧。专业课的话，推荐聚英官网的《620分子细胞生物学复习全书》和《620分子细胞生物学实验用书》，可以帮你梳理知识点，把握核心考点。 2017厦大生科院考研资料

细胞生物学实验指导书09年

实验一普通光学显微镜的构造和使用 一、目的要求 1了解显微镜的基本构造和使用方法 2 掌握油镜的原理和使用方法 二、显微镜的基本结构及油镜的工作原理 1．显微镜的基本构造 光学部分：接目镜、接物镜、照明装置（聚光镜、虹彩光圈、反光镜等）。 机械部分：镜座、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、载物台转移器、粗调节器、细调节器等部件。 2．显微镜的放大倍数和分辨率 放大倍数=接物镜放大倍数×接目镜放大倍数 显微镜的分辨率：表示显微镜辨析物体（两端）两点之间距离的能力3．油镜的使用原理 当光线由反光镜通过玻片与镜头之间的空气时，由于空气与玻片的密度不同，使光线受到曲折，发生散射，降低了视野的照明度。若中间的介质是一层油（其折射率与玻片的相近），则几乎不发生折射，增加了视野的进光量，从而使物象更加清晰。 三、器材 1．永久切片 2. 溶液或试剂：香柏油、二甲苯。 3. 仪器或其他用具：显微镜、擦镜纸等。 四、操作步骤 1．观察前的准备 （1）显微镜的安置，检查零件是否齐全，镜头是否清洁。 （2）调节光源 2．显微镜观察

（1）低倍镜观察 （2）高倍镜观察 （3）油镜观察：高倍镜下找到清晰的物象后，提升聚光镜，在标本中央滴一滴香柏油，使油镜镜头浸入香柏油中，细调至看清物象为止。3．显微镜用毕后的处理 观察完毕，上升镜筒，用擦镜纸和二甲苯清洗镜头，后将镜体全部复原。 五、思考题 1．用油镜观察时应注意哪些问题？在载玻片和镜头之间滴加什么油？起什么作用？ 2．为什么在使用高倍镜及油镜时应特别注意避免粗调节器的误操作？ 实验二胞间连丝的观察 一、实验目的 观察植物细胞的胞间连丝，加深对胞间连丝功能的认识． 二、实验原理 植物细胞的细胞壁上有许多原生质的细丝，称胞间连丝。相邻细胞的胞间连丝相互联接，在细胞间的物质运输与信息传递中起桥粱作用，并使细胞的各种生理活动协调一致，使植物体成为统一的有机体。用合适的植物细胞为材料，经简单处理，即能方便地看到胞间连丝。 三、实验材料 红辣椒表皮细胞临时装片、柿胚乳细胞间胞间连丝切片 四、实验步骤

生物学一级学科(专业)攻读硕士学位研究生培养方案

生物学一级学科（专业）攻读硕士学位研究生培养方案 （专业代码：） 一、培养目标 本学科培养的研究生，要热爱祖国，崇尚科学，诚实守信；应能较好地掌握辨证唯物主义的原理与方法，具有良好的科学素养和合作精神，学风严谨，谦虚、进取、敬业，有较强的事业心和社会责任感；具有健康的身体和心理素质。 本学科研究生应掌握扎实宽广的生物学基础理论和系统的各自相关的专业知识与实验科研技能，掌握一门外语（一般为英语）；具有从事科学研究工作或独立担负专门技术工作的能力。毕业后可从事生命学科及相关学科的科研、教学、环境保护及科技管理等方面的工作。 二、二级学科各专业及研究方向 1. 植物学 2. 动物学 3. 微生物学 4. 遗传学 5. 发育生物学 6. 细胞生物学 7. 生物化学与分子生物学 8. 海洋生物学 9. 生物物理学

三、学制与学习年限 全日制硕士研究生的学制为3年，在校学习期限为2-4年。3年制硕士研究生可申请提前毕业，最长提前时间不能超过一年。成绩优秀，提前完成论文、且在SCI刊物上发表与毕业论文有关的研究论文者，硕士论文经学位委员会指定的3人以上指导小组预答辩，推荐进行硕士论文答辩方可向学校申请。 四、培养方式 1．根据宽口径、厚基础的原则，本学科按生物学一级学科招收硕士研究生，按一级学科开设专业基础课程，在学生进入到实验室后，由导师或导师组对学生进行专业知识和专业技能的培训，完成相应的专业学习。 2．本学科鼓励开展硕士研究生的“三种经历”工作，即海外学习经历、第二校园经历和社会实践经历，在海外学习经历、第二校园经历中实行双导师合作培养。 五、应修总学分数 硕士生的课程学习一般为一年，应修总学分不少于30学分，其中必修课不少于22学分（含前沿讲座与社会实践），选修课不少于8学分；具体课程见课程设置一览表。 六、课程的类别及设置 硕士研究生课程分为必修课与选修课两大类，具体课程见课程设置一览表。 1、必修课22学分

细胞生物学实验

细胞培养基本理论 一细胞培养概述 细胞培养（cell culture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。 群体培养（mass culture）将大量细胞置于培养瓶中，让其贴壁或悬浮生长，形成均匀的单层细胞或单细胞悬液。 克隆培养（clone culture）即将少数的细胞加入培养瓶中，贴壁后彼此间隔距离较远，经过繁殖每一个细胞形成一个集落，称为克隆。 组织培养（tissue culture）指把活体的组织取出，分成小块，直接置于培养瓶底或通过胶原纤维血浆支持物的培养瓶底来进行培养。 特点：1.，组织不失散，细胞保持原有的组织关系。2，形成生长(cut growth)或形成由扁薄细胞构成的单层细胞培养物。3，在体外生长时，细胞间呈相互依存、互相影响的关系。 器官培养（organ culture）将活体中器官或器官一部分取出，在体外生长、生存，并使其保持器官原有的结构和功能特征的培养。 特点：1，培养的器官在合适的条件下能生长和分化，存活数周或1 年。2，观察受限，只能用组织切片的方法观察或用透射电镜、扫描电镜观察。 细胞培养优点：.1．活细胞：同时、大量、均一性、重复性；2．可控制：各种物理、化学、生物等因素可调控；3．研究方法多样：倒置、荧光、电子、激光共焦显微镜、流式细胞术、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记；4．应用广：不同物种、年龄、组织，正常或异常缺点：人工所模拟的条件与体内实际情况仍不完全相同；当细胞被置于体外培养后， 生活在缺乏动态平衡的环境中，时间久了，必然发生变化。 三细胞的形态和类型由不同生长方式造成的差异 呈悬浮生长时，因生长在液体环境中，胞内渗透压高于周围液体环境，因此胞体基本呈圆形。呈贴附于支持物上生长的细胞，开始为圆形，很快过渡成扁平形，并逐渐恢复至原先的细胞形态. 细胞来源：成纤维型细胞；上皮型细胞；其它，不定型 细胞按生长方式：贴壁型细胞（Monolayer cells）；悬浮型细胞（Suspension cells）绝大多数有机体细胞属贴壁型细胞，只有少数细胞类型如某些肿瘤细胞和白细胞可在悬浮状态下生长。 按细胞形态(贴壁细胞）：成纤维型细胞；上皮型细胞；其它，不定型 贴壁型生长细胞或锚着依存性细胞 处于体外培养状态下的贴附生长型细胞在形态上表现单一而失去了在体内原有的某些特征。形态各异反映其胚层起源。如来源于内外胚层的细胞多呈上皮型；来自中胚层的则易呈成纤维细胞型。分为成纤维型细胞；皮型细胞；游走型细胞；多形型细胞 贴壁型细胞形态比较 成纤维型细胞：梭形或不规则三角形；中央有卵圆形核；胞质向外伸出长短不同的突起；中胚层间质起源 上皮型细胞：扁平不规则多角形；细胞中央有圆形核；紧密相连单层膜样生长；内、外胚层细胞如皮肤、表皮衍生物、消化管上皮等 游走型细胞：散在生长，一般不连成片；细胞质经常伸出伪足或突起；活跃的游走或变形运动；羊水细胞培养的早期 多形细胞型：难以确定规律和稳定的形态；如神经组织的细胞等

细胞生物学实验员招聘实验考试

细胞生物学实验 1 考核方式 平时实验记录，实验报告，实验操作，考试笔试 2 考核内容 仪器设备使用；所开设实验：实验原理、步骤作用、试剂作用、结果分析、注意事项、实验异常原因分析；其它：实验安全，试剂使用注意事项，试剂配制，试剂标签包括的内容，等等。 2.1仪器设备使用 本课程重点掌握：普通双目显微镜，离心机，微量取液器，组织匀浆机 一般通用仪器：电子天平，恒温水浴，恒温培养厢，低温冰箱，烧杯，量筒，容量瓶，离心管，血球计数板。 生物技术专业加：系统显微镜及其自动曝光系统 2.2 开设实验 细胞化学：细胞总体蛋白和碱性蛋白的定位 理解运用固绿染色原理（例：pH5.5固绿染色的是哪些蛋白质？） 蛋白质两性电解质性质 固绿染色特点 细胞内蛋白质酸碱性 10%福尔马林作用？ 5%三氯乙酸作用？ 染色异常的原因分析 实验成功需要注意事项？ 细胞化学：孚尔根（Feulgen）DNA染色法 理解运用实验原理。 固定液有什么作用？ 热盐酸处理的作用？ Schiff试剂的有效成分是什么？ 漂洗液的有效成分是什么，有什么作用？ 显示DNA时，根材料的哪部分最好？ 显微镜下怎样分辨细胞的间、前、中、后、末五个时期？ 一个良好的压片至少具备哪些特征？（列举3个） 实验成功的关键是什么？ 细胞生理：细胞膜的通透性 理解运用实验原理。 能够从实验数据推理，得出结论。（例：从下表中数据和描述，你能得出什么结论？）从EXCEL制图。 三线表制作。 图表格式的规范。（例：指出下表格式的欠规范之处）。 细胞分离技术：叶绿体的分离及荧光观察 掌握细胞分离的一般原理。取样原则？保护方法？细胞裂解方法及选择？ 差速离心。

细胞生物学实验实验报告

细胞生物学实验 班级：生科142 姓名：旷江 学号：10143131 组号： 2 小组成员：旷江、韦立尧、莫霞指导老师：范立强、李鹏飞 华东理工大学 应用生物学系

摘要 本次细胞生物学实验通过细胞形态与结构的观察技术，细胞化学，细胞生理，细胞培养与分析，细胞周期分析，细胞成分分离与分析，细胞增殖与染色等技术对动植物细胞进行细胞形态结构的观察、细胞生理过程的研究、细胞培养与细胞分析、细胞冻存与复苏等，以此来研究动植物细胞的结构、功能和各种生命规律。 关键词：细胞增殖、细胞染色、冻存复苏、生理过程、形态结构

Abstract The cell biology experiment was carried out by cell morphology and structure observation technique, cytochemistry, cell physiology, cell culture and analysis, cell cycle analysis, cell fractionation and analysis, cell proliferation and staining. Observation of cell physiological processes, cell culture and cell analysis, cell cryopreservation and resuscitation, in order to study the structure of animals and plants, functions and a variety of laws of life. Key words: cell proliferation, cell staining, cryopreservation, physiological processes, morphological structur

细胞生物学实验教案大全

细胞生物学实验教案 【经典学习资料，收藏必备】

实验一、细胞形态结构与几种细胞器的观察 【实验目的】 在普通光学显微镜下识别细胞和细胞器的形态结构，掌握生物绘图的方法。 【实验原理】 细胞在形态上是多种多样的，有球形、椭圆形、扁平形、立方形、梭形、星形等。虽然细胞的形状各异，但是它们却有共同的基本结构特点，都由细胞膜（动物）、细胞壁（植物）、细胞质和细胞核组成。细胞中的各种细胞器，如线粒体、高尔基体、中心体、核仁、染色体等，一般经过一定固定染色处理后，大多数在光学显微镜下是可以看见的（图）。细胞器的形态结构在普通光学显微镜下与电子显微镜下所看到的结构有很大的差别。 （自拍图） （a）（b） （c）（d） 图 1 细胞形态结构 a. 柿胚乳细胞示胞间连丝； b. 马蛔虫受精卵分裂中期示中心粒； c. 兔的神经细胞中高尔基体； d.小鼠肝细胞线粒体 【实验仪器、材料和试剂】 1. 仪器：复式显微镜、擦镜纸 2．材料：洋葱根尖切片、小白鼠肝切片、兔神经节切片、马蛔虫受精卵切片3．香柏油或石蜡油、二甲苯 【方法与步骤】

一、洋葱根尖切片细胞的观察 先用低倍镜观察根尖的纵切面，注意分生区、伸长区、成熟区细胞的异同，然后再仔细观察细胞的形态结构，特别注意细胞的形状、大小，以及细胞壁、细胞核、核仁、细胞质、液泡的形态结构。 二、兔神经节细胞切片高尔基体的观察 先在低倍镜下找到兔神经节细胞，然后转用高倍镜观察，可看到细胞内淡黄色的背景上有黄褐色的细胞核，核的周围分布着许多深褐色的（硝酸银镀染）高尔基体，呈弯曲的线状，颗粒状，少量分散在细胞质。 三、小白鼠肝细胞切片线粒体的观察 先用低倍镜后用高倍镜观察，可见到许多肝小叶，每小叶有许多紧密排列成索状的多角形的肝细胞，细胞中央有大而圆的细胞核。这时，转用油镜观察，可见到细胞质内分布着许多被苏木精染成深紫色的线粒体，呈颗粒状和线状。 四、马蛔虫受精卵切片中心体的观察 1．取马蛔虫受精卵切片，在显微镜下找到充满子宫腔的受精卵，每个马蛔虫受精卵外围有一层较厚的卵膜，膜内有宽大的围卵腔，各围卵腔内有处在不同分裂期的卵细胞。找到分裂中期的细胞，在细胞中央被染成蓝色条状或棒状的结构，这就是染色体。在染色体两侧可见各有一个较小的，亦被染成蓝色的小粒，称中心粒。在中心粒的周围可见呈放射状的星丝。 实验一、细胞的显微测量 【实验目的】 掌握显微测微计的基本原理及使用方法。 【实验原理】 细胞长度、面积、体积的测量是研究正常的或病理组织细胞的基本方法之一。在显微镜下用来测量细胞长度的工具叫显微测量计，由目镜测微尺（ocular micrometer）和镜台测微尺（stage micrometer）组成，两尺要配合使用。目镜测微尺是放在目镜内的一直径为2cm圆形玻片上，里面有100等分格的刻度尺。每一小格表示的实际长度随不同的显微镜、不同放大倍数的物镜而不同。镜台测微尺是一块特制的载玻片，在它的中央由一片圆形盖片封固着一具有精细刻度的标尺，标尺全长为lmm，分为100等份的小格，每小格的长度为0.01 mm（10μm），标尺的外围有一小黑环，便于找到标尺的位置。显微测量时，先用镜台测微尺标定目镜测微尺每小格所表示的实际长度。在测量细胞时，移去镜台测微尺，换上被测标本，用目镜测微尺即可测得观察标本的实际长度。 【实验仪器、材料和试剂】 （一）仪器：显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、解剖剪、解剖镊、注射器、载玻片、盖玻片、试管、无菌采血针 （二）材料：血涂片 （三）试剂：生理盐水、瑞氏（Wright）染色液 【方法与步骤】

常用分子生物学和细胞生物学实验技术介绍

常用分子生物学和细胞生物学实验技术介绍 (2011-04-23 11:01:29)转载▼ 标签：分子生物学细胞生物学常用实用技术基本实验室技术生物学实验教育 常用的分子生物学基本技术 核酸分子杂交技术 由于核酸分子杂交的高度特异性及检测方法的灵敏性，它已成为分子生物学中最常用的基本技术，被广泛应用于基因克隆的筛选，酶切图谱的制作，基因序列的定量和定性分析及基因突变的检测等。其基本原理是具有一定同源性的原条核酸单链在一定的条件下（适宜的温室度及离子强度等）可按碱基互补原成双链。杂交的双方是待测核酸序列及探针（probe）,待测核酸序列可以是克隆的基因征段，也可以是未克隆化的基因组DNA和细胞总RNA。核酸探针是指用放射性核素、生物素或其他活性物质标记的，能与特定的核酸序列发生特异性互补的已知DNA或RNA片段。根据其来源和性质可分为cDNA探针、基因组探针、寡核苷酸探针、RNA探针等。 固相杂交 固相杂交（solid-phase hybridization）是将变性的DNA固定于固体基质（硝酸纤维素膜或尼龙滤膜）上，再与探针进行杂交，故也称为膜上印迹杂交。 斑步杂交（dot hybridization） 是道先将被测的DNA或RNA变性后固定在滤膜上然后加入过量的标记好的DNA或RNA探针进行杂交。该法的特点是操作简单，事先不用限制性内切酶消化或凝胶电永分离核酸样品，可在同一张膜上同时进行多个样品的检测；根据斑点杂并的结果，可以推算出杂交阳性的拷贝数。该法的缺点是不能鉴定所测基因的相对分子质量，而且特异性较差，有一定比例的假阳性。 印迹杂交（blotting hybridization）

细胞生物学实验步骤

冻存细胞的复苏 1、于液氮罐中取出冻存管。 2、37℃水浴锅中摇动，使之快速融化。 3、超净台内酒精棉球擦拭，打开冻存管，吸出细胞悬液，注入离心管中，再滴加2倍培养液，混匀。 4、离心：1500转/分，3分钟，弃上清。 5、吸取2-3ml培养液加入到离心管中，吹打制悬，接种到培养瓶中，37℃培养。 组织块法培养骨骼肌细胞 1、将新生大鼠处死，再用酒精棉球擦拭其全身消毒，带入超净台内于肩关节和髋关节处剪取四肢（去爪），置培养皿中。 2、PBS液中，清理血污，剥去皮肤。 3、用PBS液洗涤两次，并剔除脂肪，结缔组织，血液等杂物。 4、用将肌组织从骨骼上剪切下来，PBS液清洗后转移至干净培养皿中。 5、加少量培养液，将组织剪成1mm3小块，用吸管将其转移到培养瓶，贴附与瓶底面。翻转瓶底朝上，将培养液加至瓶中，培养液勿接触组织块。入37℃培养箱静置0.5-1小时，轻轻翻转培养瓶，使组织浸入培养液中（勿使组织漂起），37℃继续培养。 贴壁细胞的传代和冻存 1、超净台中打开细胞培养瓶，用吸管将培养液吸出。 2、加入PBS液，使其覆盖培养瓶底部，轻轻摇动后倒掉。 3、加入消化液，以覆盖整个培养瓶底部，盖好瓶盖，于倒置显微镜下观察，待 见到细胞质回缩、细胞间隙增大后于超净台内倒掉消化液。 4、加培养液终止消化。 5、用吸管吸取培养瓶中的培养液，反复吹打瓶壁，制备细胞悬液。 6、将细胞悬液吸入离心管中，离心1500转/分，3分钟，倒掉上清。 7、加入3ml培养液于离心管中，吹打制悬。 8、取2ml细胞悬液进行接种后，剩余细胞悬液继续离心1500转/分，3分钟。 9、去上清，加入1ml冻存液，制悬，转移到冻存管，再按照-4℃1小时→-20℃ 2小时→-80℃2小时→液氮的顺序进行冻存。 细胞计数

细胞生物学实验方法与技术

第二节细胞生物学实验方法与技术 细胞生物学是生命科学中的重要分支，它以生命基本单位细胞为研究对象，应用近代物理、化学和实验生物学方法，从显微、亚显微和分子水平来揭示细胞生命活动及规律，其中包括细胞的生长、发育、分裂、分化、遗传、变异（包括癌变）、兴奋、运动、代谢、衰老与死亡等基本生命现象，并且利用与调控细胞的行为活动，已达到为生产实践尤其为医药卫生事业服务。当前细胞生物学与医药保健事业联系的较为紧密的热点问题主要有以下几种：1）真核细胞基因结构及其表达调控；2）细胞膜、膜系、受体与信号传递研究；3）细胞生长、分化、衰老、癌变、死亡，尤其是程序性细胞死亡的研究；4) 细胞工程，包括基因工程及体细胞核移植的研究。 一、细胞培养常用方法 1、细胞原代培养（primay culture）又称初代培养，即直接从机体取下细胞、组织、或器官、让他们在体外维持与生长。原代细胞的特点是细胞或组织刚离开机体，他们的生物状态尚未发生很大的改变，一定程度上可反映他们在体内的状态，表现出来源组织或细胞的特性，因此用于药物实验尤其是药物对细胞活动、结构、代谢、有无毒性或杀伤作用等研究是极好工具。常用的原代培养方法有组织快培养法及消化培养法。前者方法简单，细胞也较易生长，尤其是培养心肌有时能观察到心肌组织块的搏动。细胞从组织块外长并铺满培养皿或培养瓶后即可进行传代。 2、细胞的传代培养当细胞生长至单层汇合时，便需要进行分离培养否则会因无繁殖空间、营养耗竭而影响生长，甚至整片细胞脱离基质悬浮起来直至死亡。为此当细胞达到一定密度时必须传代或再次培养，目的是借此繁殖更多的细胞，另一方面是防止细胞的退化死亡。 二、器官培养方法 器官培养（organ culture）是指用特殊的装置使器官、器官原基或它们的一部分在体外存活，幷保持其原有的结构和功能。器官培养可模拟体内的三维结构，用于观察组织间的相互反应、组织与细胞的分化以及外界因子包括药物对组织细胞的作用。 器官培养方法很多，最经典的方法即表玻皿器官培养法；一种最常用的方法是不锈钢金属网格法及Wolff培养法和扩散盒培养法，实验者可根据情况选择采用。 三、放射自显影术测定 放射自显影术（autoradiography）是利用放射性同位素电离辐射对核子乳胶的感光作用，显示标本或样品中放射物的分布、定量以及定位的方法。放射性同位素能在紧密接触的感光乳胶中记录下它存在的部位和强度，准确显示出形态与功能的定位关系。现已可将放射自显影术与电镜以及生物分子结合起来。不但可以研究放射性物质在组织和细胞内的分布代谢，而且可以揭示核酸合成及其损伤等改变，目前已在生命科学各领域被广泛应用。 四、染色体分析技术 染色质或染色体是遗传物质在细胞水平的形态特征。前者是指当细胞处于合成期时遗传物质经碱性染料着色后，呈现出细丝状弥漫结构；当细胞进入分裂期时，染色质细丝高度螺旋化凝聚为形态有特征的染色体。特别是在分裂中期，复制后的染色体达到最高程度的凝聚，称为中期染色，是进行染色体形态观察分析的最佳时期。染色体分析应用领域越来越广，主要用于以下几方面：1）为临床诊断提供新手段；2）研究不育和习惯性流产发生的遗传基础； 3) 通过检查胎儿的染色体，预防有染色体异常患儿出生（先天愚型）；4）根据染色体的多肽性进行亲子和异型配子的起源研究；结合DNA重组技术可以将基因定位于染色体的具体