单克隆抗体的研究进展
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单克隆抗体是一种由骨髓瘤细胞和带有抗体的B淋巴细胞结合形成的杂交瘤细胞,简称单抗,这一合成技术最早由德国医学家Kohler和英国医学家Milstein所共同发明。单克隆抗体的特点在于细胞状态稳定,有一定致癌性,且能产生抗体,其产生的抗体来源于识别一种抗原决定簇的细胞克隆而来,因而均一性较强。自单抗诞生以来,其发展先后经历了鼠源性抗体、嵌合抗体、人源化抗体以及人源性抗体四个不同阶段。近几年来,分子生物学和细胞生物学在理论上均取得了显著的成果,单抗的应用范围也逐渐扩大,其理论更是能够与生物学研究的各个领域相互渗透,这说明应在实践中加紧研发单抗体的制备技术。
1 单克隆抗体的研究发展历程
1.1 鼠源性单抗
在目前生产的单抗中,鼠源性单抗仍占其中较大比重。制备鼠源性单抗首先要从抗原免疫的小鼠中提取脾细胞,将其与骨髓瘤细胞结合,最后再完成单个细胞的克隆,使培养而出的克隆细胞能够分泌抗体。但鼠源性抗体在临床应用中的表现却并不理想,主要是因为鼠源单抗与NK等免疫细胞表面的Fc段受体亲和力较差,其分泌的抗体依赖性细胞介导产生的细胞毒作用不强,而且它与人补体成分的结合效果一般,因此与肿瘤细胞对抗时,其破坏能力十分有限。
1.2 嵌合抗体
抗体的恒定区在整个抗体分子结构中拥有最活跃的免疫原性,而抗体的特异性质则反映在抗体的可变区。从杂交瘤细胞中提取出功能性可变区基因,将其与人体Ig恒定区的基因相连接,再引入合适的表达载体,通过转染宿主细胞来表达人－鼠嵌合抗体。这一合成技术的实质是将鼠源性单抗的抗原结合活性保留下来,并在此基础上最大可能地消除鼠源化部分并用人源化片断取而代之,由于降低了鼠源性抗体的免疫原性,这样就即可以减轻单抗异源性产生的排斥,又能同时维持亲本抗体特异性结合抗原的能力。但是这样生产出来的抗体的鼠源性仍然高达30％左右,容易引发抗小鼠反应。
1.3 人源化抗体
为了解决上述两种抗体中异源性比重过大的问题,必须展开对鼠源抗体加以人源化改造的技术研究,其方法可以有很多种,常用的有重构抗体及表面重塑技术[1]。重构抗体就是互补决定区的移植过程,将鼠抗体的cdr转移至人抗体的对应部位,从而可使抗体的人源化程度提升至90％以上,目前这一方法的应用普及程度和社会认可度较高；而表面重塑技术则是将鼠抗体框架区表面的氨基酸残基加以人源化改造,这一方法仅能完成与人抗体SAR差别显著部位的替换,因此为了在维持抗体活性的同时降低异源性基础,还需另外选择与人抗体表面残基类似的氨基酸进行替换。
1.4 人源性抗体
1.4.1 噬菌体抗体库技术
这一技术应用的原理是将蛋白分子或肽段的基因进行克隆,并复制到丝状噬菌体的基因组遗传物质内,从而与噬菌体的表面蛋白
结合成融合蛋白,这样一来异源分子就将以噬菌体表面的形式出现,这样就可生成一个包含上亿个在体外环境制备的不同抗体的基因数据库[2]。但该技术也有其自身的缺陷,包括库容量不足、氨基酸的修饰受宿主限制等问题。
1.4.2 核糖体展示技术
其基本原理是利用PCR来使目的基因的遗传物质得到扩充,在此过程中再引入启动子、核糖体结合位点及茎环,并将其转入具有耦联转录或翻译的无细胞翻译系统中加以孵育,从而诞生出“mRNA－蛋白质－核糖体”的三元复合体。
2 单克隆抗体在临床上的应用
2.1 用于疾病诊断方面
目前单抗已在疾病的诊断领域取得了广泛应用。第一,能够对淋巴细胞的表面分子进行检测,从而辨别不同分化阶段的淋巴细胞。第二,可以鉴定病原体,因此能够准确判断感染性疾病的发作。第三,可以对体内肿瘤的形成进行诊断。第四,激素类单抗还能用来检测体内的激素含量,获知内分泌的功能状态。
2.2 用于疾病的治疗
2.2.1 抗细胞表面分子
这一类型的单抗能够抑制同种免疫反应,因而可在移植排斥反应的防治应用中发挥重要作用[3]。其中,莫罗单抗是第一种获FDA批准的鼠源性单抗,可用来缓解肾移植病人的异体排斥反应。
2.2.2 抗肿瘤单抗
这种类型主要针对基于CD20抗原的嵌合型单克隆抗体,在进入人体后将会与CD20特异性相融合,这就导致了B细胞的溶解,进而阻碍B细胞增殖,加速了成熟B细胞的衰亡,但对原始B细胞无明显影响。
3 结语
本文通过对单克隆抗体的研究进展进行分析探究,指出单克隆抗体在医学实践中的重要作用,并强调单抗在实践领域的发展应积极应用各种最新理论,加强单抗体的制备技术研究。本文对单克隆抗体的研究发展历程进行了详尽且深入的论述和分析,并对单克隆抗体在临床上的应用进行了一定的介绍说明。参考文献
[1]刘文迪,周玉,卢士英,任洪林,李岩松,増柳善,宋芳,郝亚明.铜完全抗原的合成鉴定及单克隆抗体的制备[J].安徽农业科学,2011,11(29):133-134.
[2]张家禾,周作红,洪伟鸣,刘莉,孟婷,王永娟,管远红,左伟勇.抗恩诺沙星单克隆抗体的制备与鉴定[J].江西农业大学学报,2013,13(05):271-272.
[3]杨正涛,张乃生,史利军,李颖.克伦特罗单克隆抗体的制备及其初步鉴定[J].中国农学通报,2014,11(05):203-205.
单克隆抗体的研究进展
唐亚华 黄红林
(南华大学药物药理研究所 湖南衡阳 421001)
摘要:单克隆抗体是一种由骨髓瘤细胞和带有抗体的B淋巴细胞结合形成的杂交瘤细胞,简称单抗。首先,本文对单克隆抗体的研究发展历程进行了分析和探讨,指出单克隆抗体的发展历程包括鼠源性单抗、嵌合抗体、人源化抗体以及人源性抗体这四大阶段,分别对其优缺点进行了说明；接下来,又对单克隆抗体在临床上的应用进行了说明,从疾病诊断方面及疾病的治疗两方面进行探讨。
关键词:单克隆抗体 抗体应用 肿瘤治疗中图分类号:R392.11文献标识码:A 文章编号:1674-2060(2015)03-0096-01