小鼠背部皮肤取材-福尔马林固定

1、选取实验组（敲除鼠）和对照组（WT or Gene+/-小鼠），各个年龄阶段均选2只左右；

2、麻醉小鼠；

3、立刻用剃毛器将小鼠背部皮肤毛发剃去,；如图1，左为剃毛前，右为剃毛后；

4、用碘伏酒精涂抹取皮部位后，用镊子捏起小鼠背部皮肤，用手术剪刀剪取位于头颈部到

尾部之间三分一处的背部皮肤（如图2，红色长方形选框为取皮区域，宽约0.25cm、长约0.5cm左右，白色竖线为小鼠腹中线）；取完皮后，用碘伏酒精涂抹取皮部位，放回饲养笼继续饲养；

5、将获得的背部皮肤以真皮面朝下的方式平铺在滤纸上（由于真皮面脂肪的粘附性，真皮

会吸附于滤纸上），一定要将皮肤铺平（如有皱缩会影响后续的切片！）；

6、将带有长方形皮肤样本的滤纸区域剪下来，置于包埋盒（如图3）中，并在包埋盒上用

铅笔记录皮肤对应的小鼠信息（如基因敲除信息、年龄、性别、取皮时间等），然后将包埋盒浸没于10%的中性福尔马林中固定保存（小鼠皮肤样本固定时间为24-48h为宜，尽量别超过1周）；

7、装有皮肤样本的包埋盒可以置于含有10%中性福尔马林的容器中邮寄。

图1

图2

图3

小鼠肝脏取材步骤

小鼠肝脏组织取材步骤 小鼠肝脏组织取材步骤，并列出完成此次实验所需要的试剂、仪器、材料等相关物品及实验人员安排情况。 材料：小鼠 试剂：DMEM 戊巴比妥钠 75%酒精 PBS 器械消毒液戊二醛 仪器：解剖台备皮刀弯盘组织剪眼科剪手术刀柄刀片血管钳眼科镊 培养皿无菌手套 实验人员安排：小鼠养殖管理组准备工作组实验操作组 实验步骤: 1. 取材前夜禁食，自由饮水。 2. 小鼠称重，按照50mg/kg的比例用5ml的注射器配合针头抽取戊巴比妥钠备用。 3. 正左手的小指和无名指抓住大鼠的尾巴，另外三个手指抓住大鼠的颈部，使大鼠头部向向下。这样腹腔中的器官就会自然倒向胸部，防止注射器刺入时损伤大肠、小肠等器官。右手持注射器，从腹部近腿根处刺入后再腹部皮下穿行深入，动作轻柔，缓慢注射。注射完药物后，缓缓拔出针头，手指按住针口对小鼠腹部轻柔按摩，促进麻醉药物的吸收，掐小鼠尾部检测小鼠麻醉程度。 4.将小鼠四肢固定于解剖台上，暴露小鼠整个胸部和腹部，修剪去腹部毛发，75%酒精消毒。 5.沿腹侧正中线自阴茎上源由下而上剪开腹部皮肤直至剑突，向两侧钝性剥开皮肤与皮下组织，暴露腹壁浅肌层。沿白线钝性分离腹壁肌肉，剪开腹膜，暴露腹腔，将肝脏向上翻起，显露肝门，眼科剪剪除肝脏周围结缔组织和血管。 6.结扎剪断肝门管道系统，钝锐结合完整取出大鼠肝脏，放置于无菌培养皿，生理盐水冲洗，称重并记录。①切取肝左叶约1mm×1mm×1mm组织3块，3-戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH 7.4)或4-戊二醛固定；②左叶肝组织浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定；③右叶肝组织称重记录分装后全部放置于无菌冻存管液氮冰冻保存备用。 7.切取肝左叶约1mm×1mm×1mm组织3块，3-戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4-戊二醛固定；左叶肝组织浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定；右叶肝组织称重记录分装后全部放置于无菌冻存管液氮冰冻保存备用。

皮肤基础知识的详解

皮肤基础学课程大纲 ?认识皮肤 ?皮肤基本结构与功能 ?皮肤的生理功能 ?皮肤类型的划分 ?问题皮肤类型的划分 第一部分：认识皮肤 一、皮肤的重要性 皮肤是青春的标志 皮肤是最牢固耐磨的外套（保护膜） 皮肤是最美丽的衣裳 皮肤是每个人的“财富” 二、皮肤的成分 含有50%—70%的水分 少量无机盐 25%的蛋白质 3%脂肪酸 三、皮肤基本知识

皮肤的面积—2平方米左右 皮肤厚度—4毫米（不包括皮下组织） 全身皮肤中手脚掌皮肤最厚，眼睑最薄 皮肤的重量约占体重8%—15% 皮肤的色素有三种：黑色、黄色、红色第二部分：皮肤基本结构与功能 一、皮肤构造与附属器官 结构：表皮层、真皮层、皮下组织 附属器官：毛发、指甲、汗腺、皮脂腺二、与美容密切有关的是表皮和真皮角质层 透明层 颗粒层 有棘层 基底层 乳突层 弹力纤维 胶原纤维 纤维母细胞 脂肪 表 皮 真 皮 皮 下

（一）表皮层 表皮厚度是—2毫米，她有不断再生的能力，她分5层： 角质层、透明层、颗粒层、有棘层、基底层 表皮—角质层 角质层：是死表皮细胞、具有保护作用、正常情况下会自行脱落、厚薄影响皮肤外观、含10%—20%水分。 角质层是皮肤的最外层，由4-8层的扁平无核的角化死细胞构成，皮肤表层的的角化细胞到一定的时间会自行脱落，同时会有新的角化细胞来补充．角质层是皮肤的第一道防线，其厚度也不一样如手掌,脚掌处最厚,眼睑处最薄 表皮—透明层 透明层位于角质层下，仅见于手掌、脚掌 2-3扁平无核的透明死细胞构成，呈无色透明状，光线可透过，故称透明层可防止体内、外的水、电解质与化学物质透过，起屏障作用 表皮—颗粒层 颗粒层：表皮的“保镖”、防营养流失、与清洁密切有关、能折射紫外线

肝切片的实验报告

肝切片的实验报告 篇一：肝切片实验报告？ 实验九显微摄影――小鼠肝脏结构年级专业 *班 *组学号姓名αβ 500μm 1 m 2 100μm i 100μm 4 50μm 图版说明： 图1：小鼠肝脏横切部分结构，示肝小叶（a），静脉血管（b）。图2：图1（α部位）的放大，示肝小叶（c）。图3：示肝小叶（d）。图4：示静脉血管（e）。 图5：示肝细胞（f），肝细胞细胞核（g）。图6：图2（β部位)的放大，示上皮细胞（h），上皮细胞细胞核（i），肝血窦（j），中 央静脉（k），肝动脉（l），血细胞（m）。结构说明：肝脏是脊椎动物身体内以代谢功能为主的一个器官，并在身体里面扮演着氧化，储存肝 糖，解读等功能。肝脏由肝小叶组 成，肝小叶是肝脏的基本组成成分，它来执行肝脏的基本职能。而肝小叶又是由肝细胞组成，当肝细胞大量损坏时，肝小叶不能正常工作，影响肝脏 正常生理功能，而出现各种各样的症状。肝小叶成棱柱状，中央有一条中央静脉穿过，肝细 胞围绕中央静脉成放射状排列。肝细胞是一种高度分化并具有多种功能的细胞，胞质内各种细胞器丰富而发达，并

含有 糖原，脂滴等内涵物。细胞器和内涵物的含量与分布常因细胞的功能状况或饮食变化而变动。 一般肝细胞里线粒体含量都比较多，遍布于胞质内，为肝细胞的功能活动不断提供能量。肝细胞核大而圆，居中央，染色质丰富色浅，核膜清楚，核仁1至数个。部分肝细胞（约 25%）有双核，有的肝细胞的核体积较大，为多倍体核。肝血窦位于肝板之间，互相吻合成网状管道。血窦腔大而不规则，血液从肝小叶的周边 经肝血窦流向中央，汇聚到中央静脉。 5 50μm篇二：实验报告(一) 实验名称：实验性空气栓塞实验时间：成绩：实验目的：了解空气栓塞对机体的影响实验材料：家兔，20ml注射器及针头，解剖刀，剪，镊子，面盒，浸有二甲苯的棉球若 干 等实验方法（简要说明）： 1. 先观察家兔的一般状况：活动状态、呼吸频率、嘴唇颜色及瞳孔大小等。 2. 用浸有二甲苯的棉球涂擦一侧耳廓，使局部血管扩张，便于穿刺注射。 3. 用注射器经耳缘静脉注入空气10～15ml，记录时间，

取小鼠脑组织

丁香园上面总结的方法，排版有点乱。 其实过程与大鼠近似，我的经验是： 1. 材料准备；大剪刀、眼科剪、眼科镊、大镊子、滤纸、竹签等； 2. 步骤：处死小鼠，取头颅； 剪开皮肤，漏出颅骨； 用大尖镊子夹住两侧眼眶，用眼科剪稍剪除颅骨中线； 再用眼科镊夹住颅骨从内向外夹，从下向上逐步去除颅骨； 当全脑露出时，再用眼科镊去除脑膜和血管； 然后用竹签从嗅球处向下取出全脑，即可。 3. 注意事项：用力轻柔，否则容易弄破脑部； 用剪刀剪颅骨时，一定要贴壁向上剪，否则容易剪破脑部； 去除脑膜时，不能硬拉，否则容易弄破大脑； 取出全脑时应把头顶朝下，用竹签轻轻取出，离桌面也不要太远、高； 若留病理，建议一定要取完整无损的大脑。 做免疫组化的话，稍微麻烦一点儿，因为脑组织含水量多，要固定的好，就需要先灌注。先麻醉小鼠 剪开胸腔，找到心脏，从心尖入针，剪开右心耳 先用生理盐水灌注直到从心耳流出来的水清亮了 再改用固定液（一般是4%多聚甲醛）灌注至小鼠四肢僵硬 小鼠只需要用注射器就行了，我做的25～35g的小鼠一般用50mLNS+30mL多聚甲醛。具体步骤：常规麻醉小鼠，将其固定，用剪刀剪开胸部皮肤，暴露出皮下组织，剪开时注意钝性分离，以免误伤。然后用镊子提起剑突，用剪刀剪开胸腔，剪断两侧肋骨，暴露整个胸腔，小心误伤肺及心脏、大血管。用镊子撕开心包膜，暴露心脏，用眼科剪剪开右心耳，然后提起心尖将准备好的生理盐水注射器插入左心室，注射，注射时小心针头滑脱。生理盐水灌流至肺和肝的颜色都变成灰白色即可。然后用多聚甲醛灌流，针孔最好是同一个，多聚灌流时小鼠四肢会抽搐，待抽搐结束，小鼠僵硬即可。取下小鼠，用剪刀在颈部离断头颅，用剪刀在小鼠头颅中间皮肤剪一刀，将两边皮肤向下翻用手捏住，暴露整个颅骨，用眼科剪从脊髓端插入椎孔，沿着颅正中线剪开颅骨，注意剪刀向上翘一些，以免误伤脑组织，剪开后用弯眼科镊分离颅骨，小心分离，直至暴露整个大脑，然后用弯镊伸入颅底离断颅底神经，就可以取出整个脑子了。放多聚里固定24h后包埋切片即可。 具体操作如下： 实验操作步骤： 1) 小鼠称重，以每克小鼠0.0025ml 4%戊巴比妥钠剂量的实施腹腔麻醉。也可以用10%的水合氯醛，3-5ul/g腹腔注射麻醉。 2) 将麻醉的小鼠仰放在操作台上，去毛。 3) 解剖小鼠，暴露心脏。 4) 找到心尖部，左手用镊子提起心尖部，右手或左手将灌流针刺破心尖部进针约0.5cm（最好是用小点的针头，用止血钳固定针尖，剪开右心耳。 5) 将灌流器的导管部开口放到生理盐水中里，打开灌流器灌流，直到从右心耳流出的液体为无色，同时小鼠肝脏色淡，肠管肿胀为止，停止灌流。没有灌流器的用注射器或者吊瓶都可以。

常见小鼠给药及采血方法

常见小鼠给药及采血方法 小鼠灌胃 小鼠灌胃方法比较简单，需要关注的只有两点： 一是要保持小鼠的头部和颈部成一直线，方便灌胃针头进入； 二是动作要轻柔，从口角进入，防止损失食道。做的多了自然就熟练了。 具体操作过程如下： 1. 准备灌胃针头。一般可以从市场上面买到，实在没有的话，可以用12号的针头，剪去针尖，用砂纸将头端磨平，也可以用。但是买的灌胃针头的头端用锡或者适宜的方法处理了针头的锐口，自己用砂纸不可能将所有的锐口都磨掉，用这样的针头灌胃，损失小鼠食道的可能性比较大。 2.抓住小鼠，使其头、颈和身体呈一直线。抓小鼠的动作很简单，左手的小指和无名指抓住小鼠的尾巴，另外三个手指抓住小鼠的颈部即可。因为小鼠始终在活动中，若一次抓的感觉不是很顺手，要放开重新抓，不要逞强进行下一步操作。 3. 抓好小鼠就可以灌胃了，一般用1ml的注射器配灌胃针头。灌胃针头从小鼠的嘴角进入，压住舌头，抵住上颚，轻轻向内推进，进入食管后会有一个刺空感，进入食道后就可以推注药液了。（我认为，所谓的灌胃，不必要灌胃针头进入小鼠的胃部，进入食管后就可以推药了，这样对小鼠食道的损伤要小点，特别是要长期灌胃给药的情况下。）当然，灌胃针头也可以再往里面深入一点，防止药液从口中流出。 4. 灌胃容积一般是0.1～0.2ml/10g，最大0.35ml/10g，每只小鼠的灌胃最大容积不超过0.8ml。 小鼠腹腔注射 腹腔注射是常见的给药方式，尤其是在麻醉时。常见的麻醉方法均是麻醉药物腹腔注射。 1. 小鼠腹腔注射可以用1ml的注射器，配合4号针头。 2. 腹腔注射时右手持注射器，左手的小指和无名指抓住小鼠的尾巴，另外三个手指抓住小鼠的颈部，使小鼠的头部向下。这样腹腔中的器官就会自然倒向胸部，防止注射器刺入时损伤大肠、小肠等器官。进针的动作要轻柔，防止刺伤腹部器官。 3. 尤其是对于体重较小的小鼠，腹腔注射时针头可以在腹部皮下穿行一小段距离，最好是从腹部一侧进针，穿过腹中线后在腹部的另一侧进入腹腔，注射完药物后，缓缓拔出针头，并轻微旋转针头，防止漏液。 4. 小鼠腹腔注射的给药容积一般为5～10ml/kg。 小鼠静脉注射

皮肤的构造及功能

皮肤的构造及功能 一、皮肤的构造： 皮肤可分为表皮、真皮、皮下组织。 二、皮肤的概况： 皮肤是人体最大且最重要的器官，皮肤是人体三道防御线中第一道防御线，皮肤是完整的，健康的。皮肤的PH值显弱酸性约是5、5~6、5之间，能抵抗外来细菌的侵入。 正常的皮肤应该具备的状态： 湿润、有光泽、有弹性、色泽细腻、无名闲暇疵、PH值显弱酸性能抵抗细菌的侵入。 表皮 表皮可分为五层： A、角质层：由一些无核无生命的死亡细胞所组成，细胞显扁平状或鱼鳞状排列，坚固可防 水，有保护作用。 B、透明层：只存在于人体的手掌和脚掌，当透明层受到刺激异常增厚，就会产生硬茧。 C、颗粒层：细胞显核形或梭形，细胞之间排列非常紧密，它形成一道天然屏障，可防止水 分的流失，也可以防止外界水分、异物地侵入，在高于体温的状态下，颗粒层细胞间会有裂隙，可使营养物质通过，细胞中有晶体角质主要是折射阳光中的紫外线，晶体角质不能遇到碱，否则会失去其作用。 D、有棘层：由一些不规律的棘细胞组成排列也不规则，细胞之间有淋巴管，里面流着淋巴 液，输送营养给表皮细胞，有棘层和基底层一起构成种子层。 E、基底层：（又叫种子层）是表皮细胞的生化之源，它能产生新生的表皮细胞。角质细胞 通过有丝分裂的方式在基底层产生和发育，向上推至有棘层成熟，推至颗粒层老化死亡，这叫做细胞的角化过程。基底层有色素母细胞能分泌黑色素，黑色素能分泌一种棕黑色物质，它决定人的皮肤的深浅，能吸收紫外线防止皮肤深层受到辐射。 酸性保护膜：覆盖于皮肤最上一层的一种非稳定性结构，它是由皮脂腺分泌的皮脂及汗腺分泌的汗液混合着空气中的灰尘或角质经乳化而形成，是水和油的形成，作用是使皮肤维持微湿微酸性而抗菌，正常的皮肤周期是24~28天。 真皮 真皮位于表皮之下，皮下组织之上，厚度是表皮的七倍，是皮肤中最重要的一层。 A、弹性纤维：维持皮肤良好的弹性，人的皮肤有百分之百的弹性，但是随着年龄的增长或缺少适当的保养和按摩而失去弹性，产生松弛老化现象皱纹的产生，往往也和弹性纤维失去弹性有直接关系。 皱纹分：（1）假性皱纹是因皮肤过分干燥或外界环境因素或弹性纤维轻度萎缩而造成可 逆性皱纹。 （2）真性皱纹是因皮肤弹性纤维严重萎缩或变形而形成的不可逆性皱纹。 B、结缔组织：它位于真皮和表皮的接触处有无数的乳状突出物，含有血管神经并有触觉感，对物体的软硬粗细有所感触，具有保护及连接内部其他细胞组织的功能。 C、毛细血管：它属于循环系统之一，可说是皮肤细胞营养的交通网，主要输送营养与氧气，供应细胞需要及回收毒素。 D、淋巴管：它是皮肤的防御部队，能产生抗体，具有抵抗外来物侵入的功能，有保护作用，

小鼠肝脏过氧化物酶制备与测定

小鼠肝脏过氧化物酶制备与测定

摘要目的分离纯化过氧化氢酶，测定其相关性质。方法采用匀浆、盐析、透析、层析等方法分离纯化过氧化氢酶，采用Lorry 法测定蛋白含量，SDS-PAGE法测定蛋白质相对分子质量，双倒数法测定酶的米氏常数。结论相对分子质量为60.25kD，以过氧化氢为底物时酶的Km值为0.133mol/L，酶层析后的比活为0.686IU/mg。 关键词小鼠过氧化氢酶纯化米氏常数SDS-PAGE 前言过氧化氢酶(Hydrogen Peroxidase)又名触酶(Catalase，CAT),是一种广泛存在于生物组织的氧化还原酶[1]。过氧化氢酶是一种四聚体血晶素酶, 由四个相同四面体排列的亚基组成,每一个亚基相对分子质量约60000，每一个分子都包含有四个高铁血红素基团,分子量在240000左右[2]。 在人体内以肝和肾脏所含过氧化氢酶活性最高, 结缔组织活性最弱,其它组织如红细胞、脾、小肠、肌肉等均含有过氧化氢酶。过氧化氢酶在细胞内主要与线粒体及过氧化物酶体结合, 在红细胞内呈溶解状态。过氧化氢酶是一种与D－氨基酸氧化酶等一系列需氧脱氢酶相偶联的酶, 具有重要的生理功能。过氧化氢酶能将细胞代谢所产生的毒性物质迅速加以清除, 从而起到和谷胱肽过氧化酶共同保护琉基酶、膜蛋白和解毒的作用。近年来, 过氧化氢酶的活性测定被作为与肿瘤和抗衰老有关的酶学指标而受到关注。[3] 近年来，过氧化氢酶活性的测定被作为与肿瘤和抗衰老有关，蛋白质的分离纯化方法是生命科学领域关注的热点之一。[4] 1实验器材 1.1实验动物 昆明小鼠6只，雌雄不限，由河北医科大学动物实验中心提供。 1.2主要仪器 5200型紫外分光光度计（上海元析仪器有限公司），UV-5200 冷冻离心机(湖南相依实验仪器开发有限公司)，BCD-185冰箱（青岛海尔公司），微量移液器，40W匀浆器（江苏国华仪器厂），电泳仪（北京六一） 2实验方法

实验设计-小鼠背部皮肤中毛囊干细胞的鉴定

小鼠背部皮肤中毛囊干细胞的鉴定 一、研究背景 毛囊干细胞定植在毛囊隆突部位，具有其它成体干细胞的共性, 即慢周期性、未分化性、多向分化潜能、潜在的高增殖能力和保持细胞静止的能力等特点。谱系分析技术已经证实几乎所有的内皮细胞层内成体毛囊和毛发均起源于隆突部位的细胞。因此，毛囊干细胞可能在毛囊的每一个增殖循环中均发挥重要作用。CD34, K15, K19和Nestin 可能作为毛囊干细胞的表面标记。在毛囊干细胞信号调控中涉及到许多的调控信号, 主要包括WNT信号、BMP信号和NFAT c1等基因的作用。WNT信号通路在调节毛囊干细胞增殖和命运决定中起重要作用, 它在毛囊循环的过程中呈一种动态变化, 在生长期活性最高。B-CATENIN是WNT 信号所激活的一种重要的转录因子。骨形成蛋白信号( BMP ) 也在毛囊形态发生、出生后的重建和通过调节毛发基质前体细胞的分化和增殖来控制毛囊循环中起到重要作用。通过异位表达BMP4或特定的缺失BMP拮抗者noggin而增强的BMP信号将导致毛囊生长延迟和越来越严重的光秃。。在毛发生长期早期, WNT 信号的表达使毛囊干细胞发生增殖和分化, 从而引起表皮相关成分的形成; 但是此阶段过后, BMP 信号中的转录因子表达量升高, 抑制正在进行增殖分化的干细胞, 从而维持干细胞巢中的干细胞数量。毛囊干细胞在体外能够分化成为神经元、胶质细胞、角质化细胞、平滑肌细胞和黑色素细胞。体内实验研究表明巢蛋白和绿色荧光蛋白标记的毛囊干细胞移植到裸鼠皮下能够分化成为血管和神经组织。毛囊干细胞植入到坐骨神经或胫神经离断处的缝隙中，能够促进离断神经的再生并促进受损神经的功能恢复。毛囊干细胞能够转分化为大量的雪旺氏细胞来促进神经元的再生，有助于恢复正常的行走能力。因此，毛囊干细胞移植技术提供了一个有效的、方便的自体来源的干细胞来治疗周围神经损伤。因此，毛囊干细胞在再生医学中可以替代胚胎干细胞治疗各种疾病，而且毛囊干细胞移植较胚胎干细胞移植没有伦理学问题。更为重要的是，与其他来源的干细胞相比，毛囊干细胞更加容易从患者自身获取，在体外经培养扩增后可以直接应用于患者。Jahoda 研究小组证实了毛囊干细胞可以分化为小鼠血液细胞，能够分化成为脂肪细胞和成骨细胞，并且参与组织损伤的修复。毛囊干细胞在毛发再生领域也有极大的应用价值。目前，多数实验以鼠的触须毛囊、外科获取的人头皮样本为毛囊干细胞的组织来源。

大鼠肝脏组织病理切片的制作和 HE 染色

大鼠肝脏组织病理切片的制作和HE 染色 步骤如下： （一）固定与修块 取组织块放入Bouin氏液中，组织块的直径应小于7mm。6小时左右后用双面 刀片将组织块修剪成3-5mm3大小。 （二）脱水与透明 1．75%乙醇50分钟 2．85%乙醇50分钟 3．95%乙醇（I）30分钟 4．95%乙醇（II）30分钟 5．100%乙醇（I）30分钟 6．100%乙醇（II）30分钟 7 1/2 二甲苯（乙醇与二甲苯等体积）20分钟 8．二甲苯（I）20分钟 9．二甲苯（II）10分钟（可依据透明效果而定） 若脱水不好，二甲苯溶液颜色会变混浊。在每一步骤之后，要充分滤干组织 块，一般用筒纸吸干组织块上的液体，以免影响其他液体的浓度，但也要防止组织块干燥。全过程约需要5h。 （三）浸蜡、包埋与修蜡块 1．浸蜡：将60℃恒温箱打开，使石蜡充分溶解，待脱水与透明结束后，将 组织块转入石蜡里，放置于60℃恒温箱120分钟。 2．包埋：将60℃的石蜡倒入纸盒内，然后用小镊子将各组织块按一定的顺 序排列好，使切面朝下。不同组别的同一组织包埋于一个蜡块中，以保证切片和染色条件相同。为防止倒入纸盒内的石蜡底部立刻凝固，可将纸盒置于一玻璃板上（或大培养皿内），然后将玻璃板置于80-90℃左右热水上，包埋时蜡盒底部 要放平，做蜡块的蜡要反复冻融较好。 3．修蜡块：待纸盒内蜡凝固后，用刀片将其修成梯形，组织块与蜡块边缘 之间的距离不得小于2mm。 （四）切片 在载玻片上擦少量甘油蛋白。可滴半滴甘油蛋白于载玻片上，用手指充分抹 匀，呈半干状为佳。切片厚约4-8μm，将切片在55℃左右水浴中展开，展开程度以带黄颜色的组织完全摊平为准。用涂有甘油蛋白的载玻片从水浴中捞取切片，放入37℃烘箱中过夜。每个组织块捞片2张。过夜后，将载玻片置于玻片架上，进行下面的实验。 （五）脱蜡、染色与脱水 倾斜玻片架，将玻片架和载玻片下缘的试剂用筒纸吸干，减轻对其他试剂浓 度的影响。全过程约需要60分钟。 1．脱蜡 （1）二甲苯（I）15分钟 （2）二甲苯（II）15分钟 （3）100%乙醇2分钟 （4）95%乙醇（I）1分钟 （5）95%乙醇（II）1分钟 （6）蒸馏水浸洗1分钟

实验大鼠常见脏器形态学取材方法和注意事项

实验大鼠常见脏器形态学取材方法和注意事项 [取材内容] 大鼠肺组织、大鼠肝脏组织、大鼠胰腺组织、大鼠胃部组织、大鼠空场回肠组织、大鼠肾组织、门静脉血、淋巴组织、大鼠心脏。 [试剂及药品] 戊巴比妥钠或10%水合氯醛、75%酒精、生理盐水、多聚甲醛或福尔马林液、3戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4戊二醛、肝素钠、器械液器械清洗消毒液 [器材] 备皮刀、解剖台、弯盘、组织剪、眼科剪、手术刀柄、刀片、小号弯式血管钳、蚊式血管钳、眼科镊、无损伤血管夹、聚乙烯管、三通管、丝线、培养皿、天平、一次性离2ml、1.5ml 、冻存管、肝素锂真空采血管、微量移液器、高速离心机、注射器10ml、5ml、 2ml、无菌手套、冰箱、冰盒、液氮罐 [取材动物] 大鼠 [取材步骤] 1. 取材前夜禁食，自由饮水。 2. 小鼠称重，按照50mg/kg的比例用5ml的注射器配合针头抽取戊巴比妥钠备用。 3. 正左手的小指和无名指抓住大鼠的尾巴，另外三个手指抓住大鼠的颈部，使大鼠头部向向下。这样腹腔中的器官就会自然倒向胸部，防止注射器刺入时损伤大肠、小肠等器官。右手持注射器，从腹部近腿根处刺入后再腹部皮下穿行深入，动作轻柔，缓慢注射。注射完药物后，缓缓拔出针头，手指按住针口对小鼠腹部轻柔按摩，促进麻醉药物的吸收，掐小鼠尾部检测小鼠麻醉程度。 4.将小鼠四肢固定于解剖台上，暴露小鼠整个胸部和腹部，修剪去腹部毛发，75%酒精消毒。 5.沿腹侧正中线自阴茎上源由下而上剪开腹部皮肤直至剑突，向两侧钝性剥开皮肤与皮下组织，暴露腹壁浅肌层。沿白线钝性分离腹壁肌肉，剪开腹膜，暴露腹腔，将肝脏向上翻起，显露肝门。 6.门静脉血采集：将剪成斜口的聚乙烯管尖端背向肝门方向插入门静脉，抽取门静脉血2ml，无创血管夹夹闭门静脉止血。将抽取门静脉血加入一次性离心管低温静置过夜，4℃离心，3000-3500/min，10分钟，吸出上清液，分装，-80摄氏度保存备用。 7.肝脏取材：结扎剪断肝门管道系统，钝锐结合完整取出大鼠肝脏，放置于无菌培养皿，生理盐水冲洗，称重并记录。①切取肝左叶约1mm×1mm×1mm组织3

分离小鼠表皮和真皮细胞的方法

成鼠分离角化细胞 取皮 1.颈椎脱臼处死小鼠 2.逆着毛发生长方向剪掉小鼠背毛 3.用无菌的解剖工具取下小鼠背部皮肤 4.真皮面向上至于10cm皿中 注意：此时皮肤组织可在冰上放置5-6h，不影响后面的细胞分离。 酶解 5.灭菌。将皮肤依次置于200ml碘伏中2min，70%乙醇中1min，70%乙醇中1min，无菌 PBS中1min 6.真皮面向上置于10cm皿中 7.用无菌的解剖的刮去真皮的脂肪组织和肌肉 注意：尽量刮干净，否则影响制备细胞的质量。 8.10ml的0.25%胰酶，使表皮向上悬于胰酶中，4℃过夜或者37℃2h 分离细胞 9.将组织放入培养皿盖中，表皮向上 10.手术镊压住组织边缘，用无菌手术刀将表皮从真皮上刮除 11.扔掉真皮，将表皮切碎 12.将切碎的表皮放入50ml的Falcon管中，加入8ml胰酶 13.移液器吹打组织悬液至组织块分解。约30~60s 14.加入16mlFAD低钙完全培养基，50μm的细胞过滤器过滤。 注意：过滤器中剩余的组织可用来分离毛发。 15.RT500g离心8min。 16.移除上清 17.8mlFAD低钙完全培养基重悬细胞，转移至14ml无菌Corning管中，500g离心8min 18.4ml加了BSA的PBS重悬细胞 19.取50μl细胞悬液，加入50μl的台盼蓝，计数 20.培养。

胎鼠或初生小鼠分离真皮细胞（E16.5到Day2的小鼠） 准备：0.25%无EDTA胰酶与dispase酶1:1混合液 1.70%乙醇浸泡手术器械进行消毒 2.颈椎脱臼处死小鼠 3.依次置于200ml碘伏中2min，70%乙醇中1min，70%乙醇中1min，无菌PBS中1min灭 菌消毒 4.剪去四肢，尾巴以及头部 5.剥离皮肤，刮除真皮下的多余组织 注意：不要刮太厉害 6.0.25%无EDTA胰酶与dispase酶1:1混合液消化。5只初生小鼠皮肤可置于一个10cm大 皿中，加入15ml混合液，37℃1h 7.手术刀刮除表皮。刮下的表皮可用于分离表皮细胞。每只小鼠可得到约3x106个表皮细 胞 8.将真皮剪碎。0.25%的胶原酶37℃消化至少1h，UP to 2h 9.将消化的细胞悬液转移至10ml离心管中，大力震荡至得到单细胞悬液 10.70μm的过滤器过滤细胞 11.收集滤过的悬液，500g离心4min 12.洗3次 13.计数，接种细胞

皮肤基础知识皮肤构造

人体皮肤构造 一、什么样的皮肤才算健康完美？ 每个人都想拥有完美无瑕、吹弹可破的健康肌肤，到底什么样的皮肤才算完美呢？ ａ.完美的皮肤是弱酸性的,PH值4.５-5.５之间; ｂ．肤色方面：白里透红、亮泽明晰; c．触感方面：持续微润、柔软、嫩滑、细腻、紧实、指按有弹性; d.免疫方面:不易损伤、过敏、自然修复快，具备抵抗外界损伤、侵害、疾病的免疫能力。 二、皮肤的三大组成部分： 认识皮肤的组成结构，可以帮助我们了解皮肤问题出现时，到底是哪个部分有异常，从而进行针对性的改善。 皮肤分为三大层：表皮层、真皮层、皮下组织 表皮:Ⅰ、角质层——保护作用,抵抗摩擦、阻止体液外渗、抵御化学物质侵害。由２0-３0层扁平无核的角化死细胞构成,呈鳞片状。角化过程需28天，水分含量为15% －25%,低于10%以下,皮肤会干燥长细纹、皱纹。 Ⅱ、透明层——保护、折谢光线，防止水分、化学物质及电解质等通过。有2-3层扁平无核的透明死细胞构成，呈无色透明状，光线可以透过,只有手掌、脚掌 等角质层厚的部位皮肤才有此层。 Ⅲ、颗粒层——由3－５层梭形或菱形扁平活细胞构成。角质层过度层，可以 吸收外部营养物质，防止水渗透屏障作用，故可以存水分,对化妆品的有效性起 着重要的作用。 Ⅳ、棘细胞层——由8-12层细胞紧密结合在一起,细胞大且呈不规则的多边形,为表皮层中最厚一层。其主要功能：吸收淋巴液的营养成分，供给基底层养分， 协助基底层细胞分裂。 Ⅴ、基底层——由单层的立方形至圆柱形细胞构成。是表皮层最下层，与真皮层呈

波浪式相接。由黑色素细胞和基底细胞构成。基底细胞有分裂繁殖能力,故又称 生长层。每10个细胞中有一个黑色素细胞，可以吸收阻挡紫外线保护作用，黑 色素细胞过度分裂，沉积，形成各种斑点,堆积在肌肤表层。 真皮层：Ⅰ、乳头层——由疏松结缔组织,有球状的毛细血管和神经末梢,与表皮的营养供给及体温的调节有很大关系。脸部呈红或白，依部分血液量的多少而定，几所有 的炎症,均与乳头层有关。 Ⅱ、网状层——由较厚致密结缔组织构成，结缔组织纤维排列不规则,纵横交错 成密网状,使皮肤富有弹性和韧性。由胶原纤维、网状纤维、弹力纤维组成，占 真皮层9５％。 皮下组织：厚度为真皮层的5倍,由疏松的结缔组织和脂肪小叶形成,含有动脉、静脉、汗腺、神经及深部毛囊，是人体脂肪存放之地，所以亦称为皮下脂肪组织。 三、皮肤有哪些缺一不可的生理功能？ 皮肤的每一种功能都有维持皮肤健康美丽的作用,任何一种功能的残缺都会使皮肤出现各种不适症状，因此需要及时调整。 Ⅰ、保护功能Ⅱ、调节体温功能Ⅲ、分泌和排泄功能Ⅳ、吸收功能Ⅴ、感觉功能Ⅵ、呼吸功能Ⅶ、免疫功能Ⅷ、反应身体健康状况Ⅸ、储存血液功能

小鼠取血方法

1.割(剪)尾采血当所需血量很少时采用本法。固定动物并露出鼠尾。将尾部毛剪去后消毒，然后浸在45℃左右的温水中数分钟，使尾部血管充盈。再将尾擦干，用锐器(刀或剪刀)割去尾尖0.3-0.5cm，让血液自由滴入盛器或用血红蛋白吸管吸取，采血结束，伤口消毒并压迫止血。也可在尾部作一横切口，割破尾动脉或静脉，收集血液的方法同上。每鼠一般可采血10余次以上。小鼠每次可取血0.1ml，大鼠0.3～0.5ml。 2.鼠尾刺血法大鼠用血量不多时(仅做白细胞计数或血红蛋白检查)，可采用本法。先将鼠尾用温水擦拭，再用酒精消毒和擦拭，使鼠尾充血。用7号或8号注射针头，刺入鼠尾静脉，拔出针头时即有血滴出，一次可采集10～50mm3。如果长期反复取血，应先靠近鼠尾末端穿刺，以后再逐渐向近心端穿刺。 3.眼眶静脉丛采血采血者的左手拇食两指从背部较紧地握住小鼠或大鼠的颈部(大鼠采血需带上纱手套)，应防止动物窒息。当取血时左手拇指及食指轻轻压迫动物的颈部两侧，使眶后静脉丛充血。右手持续接7号针头的1ml注射器或长颈(3～4cm)硬质玻璃滴管(毛细管内径0.5-1.0mm)，使采血器与鼠面成45℃的夹角，由眼内角刺入，针头斜面先向眼球，刺入后再转180度使斜面对着眼眶后界。刺入浓度，小鼠约2～3mm，大鼠约4～5mm。当感到有阻力时即停止推进，同时，将针退出约0.1-0.5mm，边退边抽。若穿刺适当血液能自然流入毛细管中，当得到所需的血量后，即除去加于颈部的压力，同时，将采血器拔出，以防止术后穿刺孔出血。若技术熟练，用本法短期内可重复采血均无多大困难。左右两眼轮换更好。体重20-25g的小鼠每次可采血0.2-0.3ml；体重200-300g大鼠每次可采血0.5-1.0ml，可适用于某些生物化学项目的检验。 4.断头取血采血者的左手拇指和食指以背部较紧地握住大(小)鼠的颈部皮肤，并作动物头朝下倾的姿势。右手用剪刀猛剪鼠颈，约1/2-4/5的颈部前剪断，让血自由滴入盛器。小鼠可采用约0.8～1.2ml;大鼠约5-10ml。 5.心脏采血鼠类的心脏较小，且心率较快，心脏采血比较困难，故少用。活体采血方法与豚鼠相同。若做开胸一次死亡采血，先将动物作深麻醉，打开胸腔，暴露心脏，用针头刺入右心室，吸取血液。小鼠约0.5-0.6ml；大鼠约0.8-1.2ml。 6.颈动静脉采血先将动物仰位固定，切开颈部皮肤，分离皮下结缔组织，使颈静脉充分暴露，可用注射器吸出血液。在气管两侧分离出颈动脉，离心端结扎，向心端剪口将血滴入试管内。 7.腹主动脉采血最好先将动物麻醉，仰卧固定在手术架上，从腹正中线皮肤切开腹腔，使腹主动脉清楚暴露。用注射器吸出血液，防止溶血。或用无齿镊子剥离结缔组织，夹住动脉近心端，用尖头手术剪刀，剪断动脉，使血液喷入盛器。 8.股动(静)脉采血先由助手握住动物，采血者左手拉直动物下肢，使静脉充盈。或者以搏动为指标，右手用注射器刺入血管。体重15-20g 小鼠采血约0.2-0.8ml，大鼠约0.4-0.6ml。

肝脏切片

大鼠肝脏脂肪组织石蜡包埋切片 本实验室现提供整体实验课题外包服务，如大鼠肝脏，脂肪组织石蜡切片，免疫组化整体实验代做，小鼠心肌细胞培养，后续Western blot,荧光定量PCR 检测等，因本实验室自己课题量也较多，所对外承接课题数量有限，如有需要的同学请在线提前预约（即将毕业研究生优先）。 制作优质大鼠各器官石蜡切片 1.1标本：大鼠各个脏器———心、肝、脾、肺、肾、大脑、脊髓、胃肠、垂体、胸腺、淋巴结、肾上腺、卵巢、睾丸、子宫、膀胱、附睾。 1.2固定液：中性甲醛溶液，固定时间为24h。 1.3取材：心脏：最大纵断面取1块，厚度为2mm肝脏：右叶纵断面取1块，厚度为2mm；脾脏：纵断面取1块，厚度为2mm肺脏：纵断面取1块，厚度为2mm；肾脏：最大面剖开取一半，包括皮质、髓质和肾盂；大脑：最大面剖开取一半；脊髓：横断面剖开取1块，厚度2~3m;胃：沿大弯侧剪开，纵切一长条，长1cm，宽2mm；肠：横断面切取一段，约2mm；垂体：全包；胸腺：全包；淋巴结：全包；肾上腺：全包；卵巢：全包；子宫：横断面剖开取一段，厚度2mm；睾丸：最大面剖开，取半；附睾：纵断面剖开取半；膀胱：剖开取半。 1.4包埋：胃肠、子宫、膀胱立埋，其余脏器平埋，蜡温为65~70℃。 1.5切片：厚度4μm，摊片水温56℃左右，选取无皱折的4片。 动物组织石蜡切片苏木素-伊红（HE）染色切片置70℃的烤箱中30min 入二甲苯脱蜡20min；入梯度乙醇100%→95%→85%→75%，自来水冲洗2min；入苏木精30min，取出自来水冲洗2min；入盐酸乙醇分化5s，自来水冲洗2min；入伊红5s，自来水冲洗2min；入梯度乙醇75%→85%→95%Ⅰ→95%Ⅱ→100%入二甲苯Ⅰ→二甲苯Ⅱ；中性树胶封片。

小鼠解剖

实验一小鼠大体解剖 注意事项：请按教师的指令进行操作，谨防被小鼠咬伤； 如发生意外，请立即报告老师！ 一、实验目的 1. 掌握小鼠的抓取和固定方法； 2. 掌握小鼠的解剖方法； 3. 熟悉脏器系数的测定方法 4. 了解一般实验动物的抓取和固定方法 5. 了解一般实验动物的生物样本的采集方法 二、实验内容 1. 小鼠的抓取和固定 正确的抓取固定动物，是为了不损害动物健康，不影响观察指标，并防止被动物咬伤，保证实验顺利进行。抓取固定动物的方法依实验内容和动物类而定。抓取固定动物前，必须对各种动物的一般习性有所了解，抓取固定时既要小心仔细，不能粗暴，又要大胆敏捷，确实达到正确抓取固定动物的目的。 （1）单手抓取固定法 小鼠性情较温顺，挣扎力小，比较容易抓取和保定。抓取时，用左手拇指和食指捏住小鼠尾巴中部（图1）放在格板或铁笼上。趁着小鼠试图挣脱的瞬间，迅速用另外三个手指压住小鼠的尾巴根部握入手掌（图2）；放松拇指和食指，用另外三个手指控制小鼠，然后用食指和拇指捏住小鼠头部两边疏松的皮肤提起小鼠（图3），完成抓取保定。注意，抓小鼠尾巴应抓住尾巴中部或根部，不能仅捏住小鼠尾巴的尾端，因为这时小鼠的重量全部集中到尾端，如果小鼠挣扎，有可能弄破尾端。 在进行解剖、手术、心脏采血、尾静脉注射时，可将小鼠用线绳捆绑在木版上，或固定在尾静脉注射架及粗试管中。 图1 图2 图3 （2）双手抓取固定法

抓取时先用右手抓取鼠尾提起，置于鼠笼或实验台向后拉，在其向前爬行时，用左手拇指和食指抓住小鼠的两耳和颈部皮肤（图4），将鼠体置于左手心中，把后肢拉直，以无名指按住鼠尾，小指按住后腿即可（图5）。这种在手中固定方式，能进行实验动物的灌胃、皮下、肌肉和腹腔注射以及其他实验操作。 如进行解剖、手术、心脏采血和尾静脉注射时，则需将小鼠作一定形式的固定，解剖手术和心脏采血等均可使动物先取背卧位（必要时先行麻醉），再用大头针将鼠前后肢依次固定在腊板上。尾静脉注射时，可用小鼠尾静脉注射架固定（图6），先根据动物大小选择好合适的固定架，并打开鼠筒盖，手提鼠尾巴，让动物头对准鼠筒口并送入筒内，调节鼠筒长短合适后，露出尾巴，固定筒盖即可进行尾静脉注射或尾静脉采血等操作。 图4 图 5 2. 小鼠的处死方法 （1）颈椎脱臼处死法 此法是将实验动物的颈椎脱臼，断离脊髓致死，为小鼠最常用的处死方法。操作时实验人员用右手抓住鼠尾根部并将其提起，放在鼠笼盖或其他粗糙面上，用左手拇指、食指用力向下按压鼠头及颈部，右手抓住鼠尾根部用力拉向后上方，造成颈椎脱臼，脊髓与脑干断离，实验动物立即死亡。 （2）断头处死法 此法适用于鼠类等较小的实验动物。操作时，实验人员用左手按住实验动物的背部，拇指夹住实验动物右腋窝，食指和中指夹住左前肢，右手用剪刀在鼠颈部垂直将鼠头剪断，使实验动物因脑脊髓断离且大量出血死亡。 3 .小鼠解剖步骤 （1）处死小鼠 将小鼠采用颈椎脱臼法处死后，置台秤上称重。 图6

利用石蜡切片对小鼠肝脏组织器官细微结构的观察

摘要：本文采用石蜡永久制片和光学显微摄像的方法对经过环磷酰胺处理过的小鼠肝脏的显微结构进行了研究，分析环磷酰胺对小鼠肝脏的显微结构产生的影响。结果表明，一定剂量的环磷酰胺对肝脏具有损伤作用。 关键词：小鼠肝脏石蜡切片 环磷酰胺( Cyclophosphamide, Cp) 是人工合成的氮芥类烷化剂。可以抑制细胞增殖，非特异性杀伤抗原敏感性小淋巴细胞，限制其转化为免疫母细胞，可以作为细胞周期非特异性广谱抗肿瘤药，被广泛用于治疗急慢性淋巴细胞性白血病、恶性淋巴瘤、多发性骨髓瘤等；但同时可以引起剂量依赖性肝损伤的副作用——原因可能是环磷酰胺主要代谢物丙烯对肝脏有毒副作用，能引起肝细胞坏死，肝小叶中心充血，同时伴有氨基转移酶含量升高的现象。 1 材料与仪器 1.1 实验材料 小白鼠 1.2 实验仪器： 镊子、毛笔、蜡杯、溶蜡箱、酒精灯、切片机、载玻片、盖玻片、染色缸、光学显微镜。1.3 试剂： 中性福尔马林固定液、各浓度酒精、二甲苯、石蜡、伊红染液、苏木精染液、加拿大树胶 2 实验方法 2.1 取材 用左手拇指和食指捏住小白鼠头的后部，并用力下压，右手抓住鼠尾，用力向后上方拉，即可使颈椎脱臼，小白鼠瞬间死亡。取肝组织。 2.2 固定 将小鼠肝脏块投入中性福尔马林固定液中固定。 2.3 脱水 将组织经各浓度酒精各1 h，95%、100% 的酒精各两次，每次30 min。 2.4 透明 将组织块置于酒精二甲苯混合液中15 min，再将组织块置于二甲苯中透明两次，每次10 min。最后将组织块置于二甲苯石蜡混合液中20 min。

2.5 透蜡 将组织块置于已溶化的石蜡中，放入溶蜡箱保温，共三次，前两次45 min，第三次 30 min。 2.6 包埋 向纸盒中倒入少许石蜡，将组织块用镊子夹取到纸盒中，放入盛有冷水的盆中使其凝固。2.7 切片 右手摇动转轮，让蜡块切成蜡带，左手持毛笔将蜡带提起，当切成的蜡带到一定长度时，将蜡带放在纸上。 2.8 贴片、展片 选取蜡带放置在载玻片上。将载玻片放置在机器上进行展片，待蜡带完全展开时将载玻片拿下，放入盒内。 2.9 脱蜡复水 将石蜡切片经二甲苯Ⅰ脱蜡 20 min，二甲苯Ⅱ脱蜡 10 min，然后放入各级酒精溶液中各2 min，蒸馏水中2 min。 2.10染色 将石蜡切片在苏木精染液中浸40min，然后蒸馏水涮洗几次至发蓝（约2min），镜检。 2.11 脱水Ⅰ、复染、脱水Ⅱ 将镜检合格的石蜡切片依次在各级酒精中浸2min，再在伊红水溶液浸二十至三十秒，再依次在95%、纯酒精Ⅰ、纯酒精Ⅱ中各浸 3 min。 2.12 透明 将石蜡切片放入二甲苯Ⅰ、Ⅱ中各 3 min。 2.13封藏：中性树胶封存 将载玻片取出，在切片中央滴一滴树胶，用镊子盖上盖玻片。 3 小鼠肝脏石蜡切片观察 见下图：

小鼠肝脏缺血再灌注损伤模型

小鼠肝脏缺血再灌注损伤模型 缺血再灌注损伤，即缺血器官、组织重新获得血液供应，不仅不能使组织、器官功能恢复，反而加重了功能代谢障碍及结构破坏。对麻醉动物的肝中叶和肝左叶的门静脉和肝动脉进行阻断和再通，由于肝脏中叶和左叶血流的阻断和再通，引起肝脏中叶和左叶明显的再灌注损伤。肝脏缺血过程中由于肝细胞内ATP 迅速耗尽，导致乳酸酮体等的堆积，及线粒体氧化磷酸化功能低下，引发代谢性酸中毒，缺血过程中细胞缺氧使ATP含量下降，导致肝细胞内外Ca2 +重新分布，即Ca2 +内流，引起线粒体的损伤。再灌注过程中由于氧自由基的爆发性增多，中性粒细胞的聚集，kupffer细胞的激活，细胞凋亡及其他多种细胞因子的作用，使得肝细胞膜损伤，内皮细胞损伤及肝脏微循环障碍等导致肝脏功能代谢障碍及结构破坏。 1.实验动物 SPF级Balb/C小鼠，雄性，周龄为4w~6w，体重为20g~22g。 2.实验分组： 实验分六组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组，每组15只动物。 3.实验周期 0h、3h、6h、12h、24h、72h 4.建模方法 1 小鼠术前1 2 h禁食，自由饮水。 2 3%戊巴比妥钠80mg/kg腹腔注射麻醉，麻醉成功后将小鼠平躺在手术台上胶带固定四肢，将小鼠腹部术去毛，用碘酒和75％乙醇术区消毒。 3 取腹正中切口1cm，打开腹腔，小心分离出肝脏左、中叶之肝蒂（左、中叶肝脏供血的门静脉和肝动脉）。 4 用无创血管夹夹闭中叶和左叶的门静脉和肝动脉，使约70%的肝脏缺血，以防止发生严重肠系膜静脉淤血。0.5min后，与非阻断的右叶相比，肉眼可见阻断叶明显变白，说明阻断成功，用止血钳夹闭皮肤切口临时关闭腹腔，同时将小鼠放在37℃恒温加热垫上保温。 5 完成持续缺血60min后，重新打开腹腔，迅速取出血管夹，恢复缺血肝血流，

小鼠部分组织的石蜡切片制作

小鼠部分组织的石蜡切片制作 一、实验原理：利用脱水剂除去组织中的水分，再用透明剂二甲苯可以去除脱水剂酒精，而二甲苯可以溶解石蜡并将其导入到已脱水的组织细胞中，然后用熔化的石蜡对组织进行包 埋，冷却后即可将柔软的组织包埋在石蜡中，使其具有一定硬度，且不改变其大小和形状。用旋转切片机可将其切为极薄的薄片，经染色、脱水、装片后在显微镜下可以清晰地观察其 组织结构。 二、材料与用具 1 ?材料：小鼠肝脏、脾脏等。 2 ?用具：溶蜡箱、蜡杯、不同熔点的石蜡、酒精灯等。 三、实验内容与步骤 1 .取材及固定 取小鼠，采用拉颈处死或麻醉处死法将其杀死，取其脾脏和肝脏，切为边长约为0.5cm的组 织块。用先用0.85%的生理盐水漂洗以洗去血液与污渍，如果是管状组织则必须把管腔中污 物洗净，可用注射器自一端向管腔中注射生理盐水数次，使其管腔冲洗干净，切忌不可用刀 或其他器具刮之。 由动物身上切取的组织必须是新鲜的，材料越新鲜越好，一般不应超过死后24 hr。如果是 管状器官或是其中有分泌之消化液，则死后应迅速采取，以免组织自溶或上皮剥落。 取下的材料马上进行固定，采用FAA固定液，固定液的用量与组织块体积之比一般在20:1 , 固定时间2 hr以上，超过24hr时可继续浸泡或转入70%酒精中保存。不应使组织块贴于容器壁上，应记录固定液的名称，材料的种类，动物品种及开始固定的时间。 2 .冲洗 固定后的组织块在进行脱水前用70%酒精洗去固定液。 3 .脱水和硬化 经过固定后的组织在水洗后要进行脱水，脱水的目的将组织内的水分用酒精或其他溶剂置换 出来，使组织逐渐变硬，便于油类或其他透明及浸入，为熔化的石蜡浸渗到组织中创造条件。 常用的脱水剂是不同浓度的酒精，因为酒精与水有很大的亲和力，酒精浓度可以逐渐升高，置换出组织中的水。脱水必须充分，脱水不充分会影响透明和浸蜡。脱水过程要逐级上升，不能操之过急，跳级脱水会引起组织块强烈的收缩变形。 脱水所用的酒精浓度及过程如下： 30%> 5C%> 7%> 80%> 9%> 95%> 10（% （I ）> 10（% （n ） 组织块在各级较低浓酒精（小于70% ）中脱水的时间应视组织块的大小而定，大小不超过 0.5立方厘米的组织块脱水时间为6?12 hr，在高浓度酒精中（大于70%）脱水时间为3 hr 左右。组织块在无水酒精中需经过两次处理，以保证脱净水分。由于无水酒精有使组织变脆 的缺点，故在无水酒精中脱水的时间不宜过长，一般应在15?30 min左右。在脱水瓶中酒 精的量与组织块之比约为50:1。 简化步骤如下： 70% （一夜）——80% （1 hr）——90% （30 分）——95% （30 分）——100% （15 分）——酒精+二甲苯（15分）——二甲苯（3分）——石蜡+二甲苯（30分）——石蜡（80分） 4 .透明 透明是石蜡切片法切片前必经的一步。其目的在于用矿物油或植物油等透明剂置换出无水酒 精，以便于熔化的石蜡浸渗到组织间隙中，故透明剂必须是能分别与石蜡和酒精相溶的。经