分子生物学葵花宝典

一、名词解释

1、基因：能够表达和产生蛋白质和RNA的DNA序列，是决定遗传性状的功能单位。

2、基因组：细胞或生物体的一套完整单倍体的遗传物质的总和。

3、端粒：以线性染色体形式存在的真核基因组DNA末端都有一种特殊的结构叫端粒。该

结构是一段DNA序列和蛋白质形成的一种复合体，仅在真核细胞染色体末端存在。4、操纵子：是指数个功能上相关的结构基因串联在一起，构成信息区，连同其上游的调控

区（包括启动子和操纵基因）以及下游的转录终止信号所构成的基因表达单位，所转录的RNA为多顺反子。

5、顺式作用元件：是指那些与结构基因表达调控相关、能够被基因调控蛋白特异性识别和

结合的特异DNA序列。包括启动子、上游启动子元件、增强子、加尾信号和一些反应元件等。

6、反式作用因子：是指真核细胞内含有的大量可以通过直接或间接结合顺式作用元件而调

节基因转录活性的蛋白质因子。

7、启动子：是RNA聚合酶特异性识别和结合的DNA序列。

8、增强子：位于真核基因中远离转录起始点，能明显增强启动子转录效率的特殊DNA序

列。它可位于被增强的转录基因的上游或下游，也可相距靶基因较远。

9、基因表达：是指生物基因组中结构基因所携带的遗传信息经过转录、翻译等一系列过程，

合成特定的蛋白质，进而发挥其特定的生物学功能和生物学效应的全过程。

10、信息分子：调节细胞生命活动的化学物质。其中由细胞分泌的调节靶细胞生命活动

的化学物质称为细胞间信息分子；而在细胞内传递信息调控信号的化学物质称为细胞内信息分子。

11、受体：是存在于靶细胞膜上或细胞内能特异识别生物活性分子并与之结合，进而发

生生物学效应的的特殊蛋白质。

12、分子克隆：在体外对DNA分子按照即定目的和方案进行人工重组，将重组分子导

入合适宿主，使其在宿主中扩增和繁殖，以获得该DNA分子的大量拷贝。

13、蛋白激酶：是指能够将磷酸集团从磷酸供体分子转移到底物蛋白的氨基酸受体上的

一大类酶。

14、蛋白磷酸酶：是具有催化已经磷酸化的蛋白质分子发生去磷酸化反应的一类酶分

子，与蛋白激酶相对应存在，共同构成了磷酸化和去磷酸化这一重要的蛋白质活性的开关系统。

15、基因工程：有目的的通过分子克隆技术，人为的操作改造基因，改变生物遗传性状

的系列过程。

16、载体：能在连接酶的作用下和外源DNA片段连接并运送DNA分子进入受体细胞的

DNA分子。

17、转化：指质粒DNA或以它为载体构建的重组DNA导入细菌的过程。

18、感染：以噬菌体、粘性质粒和真核细胞病毒为载体的重组DNA分子，在体外经过包

装成具有感染能力的病毒或噬菌体颗粒，才能感染适当的细胞，并在细胞内扩增。19、转导：指以噬菌体为载体，在细菌之间转移DNA的过程，有时也指在真核细胞之间

通过逆转录病毒转移和获得细胞DNA的过程。

20、转染：指病毒或以它为载体构建的重组子导入真核细胞的过程。

21、DNA变性：在物理或化学因素的作用下，导致两条DNA链之间的氢键断裂，而核酸

分子中的所有共价键则不受影响。

22、DNA复性：当促使变性的因素解除后，两条DNA链又可以通过碱基互补配对结合形

成DNA双螺旋结构。

23、退火：指将温度降至引物的T M值左右或以下，引物与DNA摸板互补区域结合形成

杂交链。

24、筑巢PCR：先用一对外侧引物扩增含目的基因的大片段，再用内侧引物以大片段为

摸板扩增获取目的基因。可以提高PCR的效率和特异性。

25、原位PCR：以组织固定处理细胞内的DNA或RNA作为靶序列，进行PCR反应的过程。

26、定量PCR：基因表达涉及的转录水平的研究常需要对mRNA进行定量测定，对此采

用的PCR技术就叫定量PCR。

27、基因打靶：是指通过DNA定点同源重组，改变基因组中的某一特定基因，从而在生

物活体内研究此基因的功能。

28、DNA芯片：DNA芯片技术是指在固相支持物上原位合成寡核苷酸或者直接将大量的

DNA探针以显微打印的方式有序地固化于支持物表面，然后与标记的样品杂交，通过对杂交信号的检测分析，即可获得样品的遗传信息。由于常用计算机硅芯片作为固相支持物，所以称为DNA芯片。

29、错义突变：DNA分子中碱基对的取代，使得mRNA的某一密码子发生变化，由它所

编码的氨基酸就变成另一种的氨基酸，使得多肽链中的氨基酸顺序也相应的发生改变的突变。

30、无义突变：由于碱基对的取代，使原来可以翻译某种氨基酸的密码子变成了终止密

码子的突变。

31、同义突变：碱基对的取代并不都是引起错义突变和翻译终止，有时虽然有碱基被取

代，但在蛋白质水平上没有引起变化，氨基酸没有被取代，这是因为突变后的密码子和原来的密码子代表同一个氨基酸的突变。

32、移码突变：在编码序列中，单个碱基、数个碱基的缺失或插入以及片段的缺失或插

入等均可以使突变位点之后的三联体密码阅读框发生改变，不能编码原来的蛋白质的突变。

33、癌基因：是细胞内控制细胞生长的基因，具有潜在的诱导细胞恶性转化的特性。当

癌基因结构或表达发生异常时，其产物可使细胞无限制增殖，导致肿瘤的发生。包括病毒癌基因和细胞癌基因。

34、细胞癌基因：存在于正常的细胞基因组中，与病毒癌基因有同源序列，具有促进正

常细胞生长、增殖、分化和发育等生理功能。在正常细胞内未激活的细胞癌基因叫原癌基因，当其受到某些条件激活时，结构和表达发生异常，能使细胞发生恶性转化。35、病毒癌基因：存在于病毒（大多是逆转录病毒）基因组中能使靶细胞发生恶性转化

的基因。它不编码病毒结构成分，对病毒无复制作用，但是当受到外界的条件激活时可产生诱导肿瘤发生的作用。

36、基因诊断：以DNA或RNA为诊断材料，通过检查基因的存在、结构缺陷或表达

异常，对人体的状态和疾病作出诊断的方法和过程。

37、RFLP：即限制性片段长度多态性，个体之间DNA的核苷酸序列存在差异，称为

DNA多态性。若因此而改变了限制性内切酶的酶切位点则可导致相应的限制性片段的长度和数量发生变化，称为RFLP。

38、基因治疗：一般是指将限定的遗传物质转入患者特定的靶细胞，以最终达到预防或

改变特殊疾病状态为目的治疗方法。

39、反义RNA：碱基序列正好与有意义的mRNA互补的RNA称为反义RNA。可以作为一

种调控特定基因表达的手段。

40、核酶：是一种可以催化RNA切割和RNA剪接反应的由RNA组成的酶，可以作为基因

表达和病毒复制的抑制剂。

41、三链DNA：当某一DNA或RNA寡核苷酸与DNA高嘌呤区可结合形成三链，能特异地

结合在DNA的大沟中，并与富含嘌呤链上的碱基形成氢键。

42、SSCP：单链构象多态性检测是一种基于DNA构象差别来检测点突变的方法。相同长

度的单链DNA，如果碱基序列不同，形成的构象就不同，这样就形成了单链构象多态性。

43、管家基因：在生物体生命的全过程都是必须的，且在一个生物个体的几乎所有细胞

中持续表达的基因。

44、细胞全能性：指同一种生物的所有细胞都含有相同的DNA，即基因的数目和种类是

一样的，但在不同阶段，同一个体的不同组织和器官中基因表达的种类和数目是不同的。

45、SD序列：转录出的mRNA要进入核糖体上进行翻译，需要一段富含嘌呤的核苷酸序

列与大肠杆菌16S rRNA3，末端富含嘧啶的序列互补，是核糖体的识别位点。

46、反义核酸技术：是通过合成一种短链且与DNA或RNA互补的，以DNA或RNA为目标

抑制翻译的反义分子，干扰目的基因的转录、剪接、转运、翻译等过程的技术。

47、核酸探针：探针是指能与某种大分子发生特异性相互作用，并在相互作用之后可以

检测出来的生物大分子。核酸探针是指能识别特异碱基顺序的带有标记的一段DNA或RNA分子。

48、周期蛋白：是一类呈细胞周期特异性或时相性表达、累积与分解的蛋白质，它与周

期素依赖性激酶共同影响细胞周期的运行。

49、CAP：是大肠杆菌分解代谢物基因活化蛋白，这种蛋白可将葡萄糖饥饿信号传递个

许多操纵子，使细菌在缺乏葡萄糖时可以利用其他碳源。

50、顺反子

51、结构域

52、

二、问答题

（一）、病毒、原核、真核基因组的特点？

答：1、病毒基因组的特点：

①种类单一；②单倍体基因组：每个基因组在病毒中只出现一次；③形式多样；④大

小不一；⑤基因重叠；⑥动物/细菌病毒与真核/原核基因相似：内含子；⑦具有不

规则的结构基因；⑧基因编码区无间隔：通过宿主及病毒本身酶切；⑨无帽状结构；

⑩结构基因没有翻译起始序列。

2、原核基因组的特点：

①为一条环状双链DNA；②只有一个复制起点；③具有操纵子结构；④绝大部分为单拷

贝；⑤可表达基因约50%，大于真核生物小于病毒；⑥基因一般是连续的，无内含子；

⑦重复序列很少。

3、真核基因组的特点：

①真核生物基因组远大于原核生物基因组，结构复杂，基因数庞大，具有多个复制起点；

②基因组DNA与蛋白质结合成染色体，储存于细胞核内；③真核基因为单顺反子，而

细菌和病毒的结构基因多为多顺反子；④基因组中非编码区多于编码区；⑤真核基因多为不连续的断裂基因，由外显子和内含子镶嵌而成；⑥存在大量的重复序列；⑦功能相关的基因构成各种基因家族；⑧存在可移动的遗传因素；⑨体细胞为双倍体，而精子和卵子为单倍体。

（二）、乳糖操纵子的作用机制？

答：1、乳糖操纵子的组成：大肠杆菌乳糖操纵子含Z、Y、A三个结构基因，分别编码半

乳糖苷酶、透酶和半乳糖苷乙酰转移酶，此外还有一个操纵序列O，一个启动子P和一个调节基因I。

2、阻遏蛋白的负性调节：没有乳糖存在时，I基因编码的阻遏蛋白结合于操纵序列O 处，乳糖操纵子处于阻遏状态，不能合成分解乳糖的三种酶；有乳糖存在时，乳糖作为诱导物诱导阻遏蛋白变构，不能结合于操纵序列，乳糖操纵子被诱导开放合成分解乳糖的三种酶。所以，乳糖操纵子的这种调控机制为可诱导的负调控。

3、CAP的正性调节：在启动子上游有CAP结合位点，当大肠杆菌从以葡萄糖为碳源的环境转变为以乳糖为碳源的环境时，cAMP浓度升高，与CAP结合，使CAP发生变构，CAP结合于乳糖操纵子启动序列附近的CAP结合位点，激活RNA聚合酶活性，促进结构基因转录，调节蛋白结合于操纵子后促进结构基因的转录，对乳糖操纵子实行正调控，加速合成分解乳糖的三种酶。

4、协调调节：乳糖操纵子中的I基因编码的阻遏蛋白的负调控与CAP的正调控两种机制，互相协调、互相制约。

（三）、真核生物转录水平的调控机制？

答：真核生物在转录水平的调控主要是通过反式作用因子、顺式作用元件和RNA聚合酶的相互作用来完成的，主要是反式作用因子结合顺式作用元件后影响转录起始复合物的形成过程。

1、转录起始复合物的形成：真核生物RNA聚合酶识别的是由通用转录因子与DNA形

成的蛋白质-DNA复合物，只有当一个或多个转录因子结合到DNA上，形成有功能的启动子，才能被RNA聚合酶所识别并结合。

转录起始复合物的形成过程为：T FⅡD结合TATA盒；RNA聚合酶识别并结合T F ⅡD-DNA复合物形成一个闭合的复合物；其他转录因子与RNA聚合酶结合形成一个开放复合物。

在这个过程中，反式作用因子的作用是：促进或抑制T FⅡD与TATA盒结合；促进或抑制RNA聚合酶与T FⅡD-DNA复合物的结合；促进或抑制转录起始复合物的形成。

2、反式作用因子：一般具有三个功能域（DNA识别结合域、转录活性域和结合其他蛋

白结合域）；能识别并结合上游调控区中的顺式作用元件；对基因的表达有正性或负性调控作用。

3、转录起始的调控：

⑴反式作用因子的活性调节：①表达式调节——反式作用因子合成出来就具有活性；

②共价修饰——磷酸化和去磷酸化，糖基化；③配体结合——许多激素受体是反式

作用因子；④蛋白质与蛋白质相互作用——蛋白质与蛋白质复合物的解离与形成。

⑵反式作用因子与顺式作用元件的结合：反式作用因子被激活后，即可识别并结合

上游启动子元件和增强子中的保守性序列，对基因转录起调节作用。

⑶反式作用因子的作用方式——成环、扭曲、滑动、Oozing。

⑷反式作用因子的组合式调控作用：每一种反式作用因子结合顺式作用元件后虽然

可以发挥促进或抑制作用，但反式作用因子对基因调控不是由单一因子完成的而是几种因子组合发挥特定的作用。

（四）、真核生物转录后水平的调控机制？

答：（1）、5，端加帽和3，端多聚腺苷酸化的调控意义：5，端加帽和3，端多聚腺苷酸化是保持mRNA稳定的一个重要因素，它至少保证mRNA在转录过程中不被降解。

（2）、mRNA选择性剪接对基因表达调控的作用

（3）、mRNA运输的控制

（五）、受体的特点？

答：1、高度专一性；2、高度亲和性；3、可逆性；4、可饱和性；5、特定的作用模式（六）、表皮生长因子介导的信号传导途径？

答：表皮生长因子受体是一个典型的蛋白酪氨酸激酶受体，这个信号转导途径的主要步骤是：1、受体二聚化的形成及其磷酸化：表皮生长因子与受体的结合使受体发生二聚化，从而

改变受体构象，使蛋白酪氨酸激酶活性增强，受体自身的几个蛋白酪氨酸残基在激酶的作用下发生磷酸化。

2、募集接头蛋白Grb2：表皮生长因子受体自身被磷酸化后，不仅其激酶活性增强，而且

其构象发生变化，从而适合与含SH2结构域的蛋白分子相结合。Grb2是作为接头蛋白结合到受体上。

3、调控分子SOS的活化：SOS含有可与SH3结构域相结合的富含脯氨酸基序，当Grb2

结合到磷酸化的表皮生长因子受体后，它的两个SH3结构域即可结合SOS，使之活化。

4、低分子量G蛋白Ras的活化：SOS可促进Ras释放GDP，结合GTP的反应，使Ras激

活。活化的Ras作用其下游分子Raf，使之活化。Raf是MAPK级联反应的第一个分子，由此启动了MAPK的三级激活过程。

5、MAPK的级联激活：Raf是一种MAPKKK，它作用于MEK，使之磷酸化而激活，活化的MEK

在作用于MAPK家族的ERK1，使之磷酸化激活由此完成了三级激活。

6、转录因子的磷酸化及转录调控作用：活化的ERK可以转至细胞核内，使某些转录调控

因子发生磷酸化，从而影响基因的转录。

（七）、cAMP信号转导途径？

答：1、组成：胞外信息分子（主要是胰高血糖素、肾上腺素和促肾上腺皮质激素），受体，G蛋白，AC，cAMP , PKA。

2、途径：

?信号分子与受体结合，引起受体构象变化

?受体活化G蛋白

?活化后的G蛋白激活腺苷酸环化酶（AC）

?AC催化ATP生成cAMP

?cAMP活化PKA，PKA使目标蛋白磷酸化，调节代谢酶的活性或调节基因的表达（八）、IP3-Ca2+信号途径：

?信号分子与受体结合，引起受体构象变化

?受体活化G蛋白

?活化后的G蛋白激活PLC

?PLC水解PIP2生成IP3 和DG

?IP3 使钙通道打开，细胞内Ca2+升高

?Ca2+与CaM结合，激活Ca2+-CaM依赖的蛋白激酶

?Ca2+-CaM依赖的蛋白激酶使目标蛋白磷酸化。

（九）、分子克隆中常用的工具酶及良好载体的条件？

答：（1）、常用的工具酶

1、限制性核酸内切酶：是细菌产生的一类能识别和切割双链DNA分子内特定的碱基

顺序的核酸水解酶。

2、DNA连接酶：将两段DNA分子拼接起来的酶。

3、DNA聚合酶：催化单核苷酸链延伸。

4、逆转录酶：依赖于RNA的DNA聚合酶，这是一种有效的转录RNA成为DNA的酶，

产物DNA又称互补DNA。

5、末端脱氧核糖核酸转移酶：将脱氧核糖核酸加到DNA的3末端。

6、碱性磷酸酶：催化去除DNA、RNA等的5磷酸基团。

7、依赖DNA的RNA聚合酶：识别特异性启动子，RNA转录。

（2）、良好载体的条件

1、必须有自身的复制子；

2、载体分子上必须有限制性核酸内切酶的酶切位点，即多克隆位点，以供外源DNA插入；

3、载体应具有可供选择的遗传标志，以区别阳性重组子和阴性重组子；

4、载体分子必须有足够的容量；

5、可通过特定的方法导入细胞；

6、对于表达载体还应具备与宿主细胞相适应的启动子、前导顺序、增强子、加尾信号等DNA调控元件。（十）、蓝-白筛选的原理？

答：某些质粒带有大肠杆菌的半乳糖苷酶基因片段，在半乳糖苷酶基因的基因区外又另外引入了一段含多种单一限制酶位点的DNA序列。这些位点上如果没有克隆外源性DNA片段，在质粒被导入lac-的大肠杆菌后，质粒携带的半乳糖苷酶基因将正常表达，与大肠杆菌的半乳糖苷酶基因互补，产生有活性的半乳糖苷酶，加入人工底物X-gal和诱导剂IPTG后，出现蓝色的菌落。如果在多克隆位点上插入外源DNA片段，将使lac Z基因灭活，不能生成半乳糖苷酶，结果菌落出现白色。由于这种颜色标志，重组克隆和非重组克隆的区分一目了然。（十一）SANGER双脱氧链终止法的原理？

答：DNA链中核苷酸以3’,5’-磷酸二酯键连接，合成DNA所用的底物是 2’-脱氧核苷三磷酸。2’,3’ddNTP与普通dNTP不同，它们在脱氧核糖的3’位置缺少一个羟基。在DNA 聚合酶作用下通过三磷酸基团掺入到延伸的DNA链中，但由于没有3’羟基，不能同后续的dNTP形成磷酸二酯键，因此，正在延伸的DNA链不能继续延伸。在DNA合成反应混合物的4种普通dNTP中加入少量的一种ddNTP，链延伸将与偶然发生但却十分特异的链终止竞争，产物是一系列的核苷酸链，其长度取决于引物末端到出现过早链终止位置间的距离。在4组独立酶反应中分别采用4种不同的ddNTP，结果将产生4组寡核苷酸，它们将分别终止于模板链的A、C、G或T位置。

（十二）、核酸分子杂交的原理？

答：具有互补序列的两条单链核酸分子在一定的条件下（适宜的温度及离子强度等）碱基互补配对结合，重新形成双链；在这一过程中，核酸分子经历了变性和复性的变化，以及在复性过程中个分子间键的形成和断裂。杂交的双方是待测核酸和已知序列。

（十三）、影响杂交的因素？

答：1、核酸分子的浓度和长度：核酸浓度越大，复性速度越快。探针长度应控制在50-300个碱基对为好。

2、温度：温度过高不利于复性，而温度过低，少数碱基配对形成的局部双链不易解离，适宜的温度是较T M值低25度。

3、离子强度：在低离子强度下，核酸杂交非常缓慢，随着离子强度的增加，杂交反应率增加。高浓度的盐使碱基错配的杂交体更稳定，所以进行序列不完全同源的核酸分子杂交时必须维持杂交反应液中的盐浓度和洗膜液中的盐浓度。

4、杂交液中的甲酰胺：甲酰胺能降低核酸杂交的T M值。它有以下优点：在低温下探针更稳定；能更好地保留非共价结合的核酸。

5、核酸分子的复杂性：是指存在于反应体系中的不同顺序的总长度。两个不同基因组DNA变性后的相对杂交速率取决于样品浓度绝对一致时的相对复杂性（即DNA中的碱基数）。

6、非特异性杂交反应：在杂交前应对非特异性杂交反应位点进行封闭，以减少其对探针的非特异性吸附作用。

（十四）、探针的种类和优缺点？

答：1、cDNA探针：通过逆转录获得cDNA后，将其克隆于适当的克隆载体，通过扩增重组

质粒而使cDNA得到大量的扩增。提取质粒后分离纯化作为探针使用。它是目前应用最为广泛的一种探针。

2、基因组探针：从基因组文库里筛选得到一个特定的基因或基因片段的克隆后，大量扩增、纯化，切取插入片段，分离纯化为探针。

3、寡核苷酸探针：根据已知的核酸顺序，采用DNA合成仪合成一定长度的寡核苷酸片段作为探针。

4、RNA探针：采用基因克隆和体外转录的方法可以得到RNA或反义RNA作为探针。（十五）、探针的标记法？

答：1、缺口平移法：此法是利用适当浓度的DNase Ⅰ在DNA双链上随机切割单链，造成单链切口。切口处产生一个5末端和3末端，3末端就可以作为引物，在大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ的催化下，以互补的DNA单链为摸板，依次将dNTP连接到切口的3末端的羟基上，合成新的DNA单链；同时DNA聚合酶Ⅰ的5→3的核酸外切酶活性在切口处将旧链从5末端逐步切除，新合成链不断延伸，从而使原DNA分子上的部分核苷酸残基被标记的核苷酸所取代。

2、随机引物法：随机引物是人工合成的长度为6个寡核苷酸残基的寡聚核苷酸片段的混合物。对于任何一个用作探针的DNA片段，随机引物混合物中都会有一些六核苷酸片段可以与之结合，起到DNA合成引物的作用。将这些引物与变性的DNA单链结合后，以4种dNTP （其中一种是标记物标记的dNTP）为底物，合成与探针DNA互补的切带有标记物的DNA探针。

3、PCR标记法：在PCR反应底物中，将一种dNTP换成标记物标记的dNTP，这样标记的dNTP就在PCR反应的同时掺入到新合成的DNA链上。

4、末端标记法：只是将DNA片段的一端进行标记。

（十六）、PCR的基本原理？

答：PCR是在试管中进行的DNA复制反应，基本原理是依据细胞内DNA半保留复制的机理，以及体外DNA分子于不同温度下双链和单链可以互相转变的性质，人为地控制体外合成系统的温度，以促使双链DNA变成单链，单链DNA与人工合成的引物退火，然后耐热DNA聚合酶以dNTP为原料使引物沿着单链模板延伸为双链DNA。PCR全过程每一步的转换是通过温度的改变来控制的。需要重复进行DNA模板解链、引物与模板DNA结合、DNA聚合酶催化新生DNA 的合成，即高温变性、低温退火、中温延伸３个步骤构成PCR反应的一个循环，此循环的反复进行，就可使目的DNA得以迅速扩增。DNA模板变性：模板双链DNA→单链DNA，94℃。退火：引物＋单链DNA→杂交链，引物的Tm值。引物的延伸：温度至70 ℃左右， Taq DNA 聚合酶以４种dNTP为原料，以目的DNA为模板，催化以引物３’末端为起点的5’→3’DNA 链延伸反应，形成新生DNA链。新合成的引物延伸链经过变性后又可作为下一轮循环反应的模板PCR，就是如此反复循环，使目的DNA得到高效快速扩增。

（十七）、PCR引物设计的基本要求？

答：1、引物长度一般为15～30个核苷酸。过短影响PCR的特异性，过长会提高相应退火温度，使延伸温度超过TaqDNA聚合酶最适温度74℃,影响产物的生成。

2、引物的碱基尽可能随机，避免出现嘌呤、嘧啶碱基堆积现象。3’端不应有连续3个G和C。否则会使引物和模板错误配对。G+C含量一般占45％ -55％。3’端和5’端引物具有相似的Tm值,Tm值计算公式：Tm＝4(G+C)+ 2(A+T)

3、引物自身不应存在互补序列以避免折叠成发夹结构。引物的连续互补序列，一般不超过3bp。

4、两个引物之间不应存在互补序列，尤其应避免3’端的互补重叠。

5、引物与非特异扩增区的序列的同源性不超过70％，引物3’末端连续8个碱基在待扩增区以外不能有完全互补序列，否则易导致非特异性扩增。

6、引物3’端碱基是引发延伸的起点，因此一定要与模板DNA配对。引物3’端最佳碱基选择是G和C，形成的碱基配对比较稳定。

7、引物与模板结合时，引物的5’端最多可以游离十几个碱基而不影响PCR反应的进行。

8、引物的5’端可以修饰，如附加限制酶位点，引入突变位点，用生物素、荧光物质、地高辛标记，加入其它短序列包括起始密码子、终止密码子等。

（十八）、PCR的反应条件？

答：1、PCR反应的缓冲液：

●Tris-HCl缓冲液

●KCl 促进引物的退火，浓度太高时会抑制Taq DNA聚合酶活性。

●加入BSA或明胶有利于保护TaqDNA聚合酶活性。

●必要时加入适量二甲基亚砜(DMSO)或甲酰胺利于破坏模板二级结构，提高PCR反应

特异性。

2、镁离子浓度一般用量1.5-2.0 mmol/L，Taq DNA聚合酶活性需要Mg 2+。Mg 2+浓

度过低，会显著降低酶活性。Mg 2+浓度过高又使酶催化非特异性扩增增强。Mg 2+浓度还会影响引物的退火、模板与PCR产物的解链温度，从而影响扩增片段的产率。

3、底物浓度工作浓度20-200umol/L， dNTPs浓度过高可加快反应速度，也增加碱基的错配率和实验成本。降低浓度会导致反应速度下降，可提高反应的特异性。在PCR反应中，4种dNTP必须以等摩尔浓度配制，以减少PCR反应的错配误差并提高使用效率。

4、Taq DNA聚合酶 75-80℃时具有最高的聚合酶活性，150个核苷酸/秒；具有良好的热稳定性，95℃仍有活性，应用浓度一般为1-2.5u/100ul反应体积。

5、引物 0.1-0.5umol/L。引物浓度偏高会引起错配或非特异性扩增、生成引物二聚体，使目的DNA片段产率下降。退火温度与引物Tm值有关，引物Tm值在55-80 ℃范围较为理想。

6、反应温度和循环次数

（十九）、影响大肠杆菌系统外源基因表达的因素？

答：1、启动子的强弱；2、基因的剂量；3、影响RNA转录和翻译效率的因素：SD序列、mRNA；

4、外源基因密码子的选择；

5、表达产物的大小；

6、表达产物的稳定性。

（二十）、大肠杆菌系统表达外源基因必须具备的条件？

答：1、要求外源基因的编码区不能含有内含子；

2、表达的外源片段要位于大肠杆菌启动子的下游，并形成正确的阅读框架；

3、转录出的mRNA必须有与大肠杆菌16S rRNA3，末端相匹配的SD序列，才能被有效的翻译成蛋白质。

4、蛋白产物必须稳定，不易被细胞内蛋白酶快速降解，且对宿主无害。

（二十一）、真核细胞表达外源基因的条件？

答：1、首先必须具备哺乳动物细胞表达的功能元件。要求哺乳动物细胞表达载体带有能在真核细胞中表达外源基因的真核转录调控元件；

2、注意选择转染的受体细胞，不同类型的细胞具有不同的特性；

3、注意选择适当的选择标记。

（二十二）、转基因动物的概念、原理及应用？

答：1、概念：是指用人工方法将外源基因导入或整合到基因组内，并能稳定传代的一类动物。它的特点是“分子及细胞水平操作，组织及动物整体水平表达”。

2、基本原理：将目的基因或基因组片段用显微注射等方法注入实验动物的受精卵或着床前的胚胎细胞中，使目的基因整合到基因组中，然后将此受精卵或着床前的胚胎细胞再植

入受体动物的输卵管或子宫中，使其发育成携带有外源基因的转基因动物，人们可以通过分析转基因和动物表型的关系，揭示外源基因的功能；也可以通过转入外源基因培育优良的动物品种。

3、应用：建立用于研究外源基因表达调控体系；建立医学中常用的疾病模型；培育动物新品种；药理学和药用蛋白的生产研究。

（二十三）、基因敲除的基本程序？

答：通过DNA同源重组，使得胚胎干细胞特定的内源基因被破坏而造成功能丧失，然后通过胚胎干细胞介导得到该基因丧失的小鼠模型的过程称为基因敲除。

1、打靶载体的构建：同源序列要足够长，要含有筛选用的标志基因。

2、胚胎干细胞的体外培养

3、打靶载体导入胚胎干细胞

4、同源重组胚胎干细胞的筛选

5、基因敲除胚胎干细胞注射入胚泡

6、胚泡植入假孕小鼠的子宫中

7、杂交育种获得纯合的基因敲除动物

（二十四）、DNA芯片的原理？

答：DNA芯片技术就是一种大规模的集成的固相核酸分子杂交，以大量已知碱基序列的寡核苷酸片段为探针，检测样品中哪些核酸序列与其互补，然后通过定性定量分析得出待测样品的基因序列及表达的信息。其方法包括芯片的制备、样品的准备、分子杂交和检测分子。（二十五）、诱变剂的作用机制？

答：1、碱基的类似物诱发突变

2、改变DNA的化学结构

3、结合到DNA分子上诱发移码突变

4、紫外线及其他射线引起的DNA分子的变化

（二十六）、突变类型及其遗传效应？

答：1、突变类型：

①点突变：DNA大分子上一个碱基的变异。分为转换和颠换。

②缺失：一个碱基或一段核苷酸链从DNA大分子上消失。

③插入：一个原来没有的碱基或一段原来没有的核苷酸链插入到DNA大分子中间。

④倒位：DNA链内重组，使其中一段方向倒置。

2、突变的遗传效应：

①遗传密码的改变：错义突变、无义突变、同义突变、移码突变

②对mRNA剪接的影响：一是使原来的剪接位点消失；二是产生新的剪接位点。

③蛋白质肽链中的片段缺失：

（二十七）、基因治疗的策略？

答：1、基因置换或称基因矫正：特定的目的基因导入特定的细胞，通过定位重组，让导入的正常基因置换基因组内原有的缺陷基因，不涉及基因组的任何改变。

2、基因添加或称基因增补：通过导入外源基因使靶细胞表达其本身不表达的基因。

3、基因干预：采用特定的方式抑制某个基因的表达，或者通过破坏某个基因而使之不

能表达，以达到治疗疾病的目的。

4、基因标记：基因标记实验是基因治疗的前奏，并不在于直接治疗疾病而是期望能够

提供有关正常细胞生物学和疾病病理方面的信息。

（二十八）、基因诊断常用的生物学技术。

（二十九）、简述重组DNA技术的过程。

刘一秒领袖运营智慧笔记完整版教学提纲

刘一秒领袖运营智慧 笔记完整版 刘一秒领袖运营智慧笔记完整版 《运营智慧》是运营一切的思维程序。 由《运营智慧》生万千法万千制。 《运营智慧》无根无极即生即灭。 我是去求法还是去取经？ 我是要去彼岸还是要进入当下？ 进入第一塔：约定我确不确定我能生岀我想要的和化去我所不想要的。

精品资料 r ? ? ? ? * r ? r ? ? ? ■? ■? 节英纲领 ?? ?? ?r ?? ?? ? ■ ?9 ? ? ■ ? % ■ 凡是人生事业出现问题，本质就是不懂得约定！ 凡是想约没定者就是没有参透背后的本质。 先回头看何为约定 如：我和梦想有一个约定 一说约定 能够形成约定有一个命脉就是：必须是两个独立自主的个体存在。

? ? ? ? ? ■ ■? ?? ?? ?% ■? ?V ?% 神主民主 ?? ?? ?< ■? ?? ?? ?? ?? ? ? ? ? ? > ? ? 我们先回头看，我们人一直被什么主宰？ 我们从靠天主、神主、君主然后到民主，依然没有找到一个组织，良性发展的命脉。 那解决方案是在自主吗？ 自主只是一个基本前提。 出路就回到两个字约定！ 即有自主的人相互约定---- *****最大的背叛就是不成长，因为他不是一个独立自主的人。*** 这样才能开始真正组织有效运作即组织约定。

约定一：变化约定 就是我们公司共同约定，怎么变都属正常。 如：市场化 思八达花五年时间才在大部分人心中完成。 变化约定的3个原则： AV全员未雨稠缪 用在家庭中，企业中，全公司每个人都建立一个意识：下一步变化怎么办？林林有突发事情很正常***** B、全员在线 也就是全公司每个人时刻装着约定，然后扮演我当下的角色！

商业模式转换智慧笔记

商业模式转换智慧 未来企业之间的竞争已经不是产品、价格、服务等竞争，主要是企业商业模式的转换和创新的竞争，过去的成功靠机会，未来的成功靠模式的转换和创新。 进入商业模式 一、什么是商业模式？ 就是你企业在什么样的模式（平台）上进行有效的经营和管理，最后实现企业的价值和责任的最大化。如：商业模式就是造船、造航母；管理模式就是在船上，在航母上训练员工；战略模式就是在船上，在航母上架设导航。 如：航母上的新员工和小船上的特种员工发生对决，最后谁能取胜？ 1、最早的四大商业模式案例： A、奥林匹克 B、麦当劳 C、传销 D、金融产品（保险） 2、中国三大明星的商业模式： A、陈佩斯——从头忙到尾，最后还是赔 B、赵本山——到处是朋友和徒弟，利益他独享 C冯小刚——成本变、利润，利益共分享 3、诚宇包装的商业模式：有钱大家赚，大家持续有钱赚！ 一、业务系统 二、关键资源和能力 三、企业的自由现金流 四、盈利模式 1、产品差价赚钱 2、资本运作赚钱 3、中介赚钱 4、社会影响力赚钱 5、广告赚钱 6、讲话赚钱 到此明了，此路是我开，此树是我栽，此平台是我搭建，要想在我平台上玩，请留下买路钱。 二、企业商业模式平台的构成 到此明了： 1、企业商业模式最主要的是企业的定位，然后设计一个运行操作平台，让每一个人的都得到最大的显现和发挥，最后实现企业价值和责任的最大化。 2、企业的商业模式是由构成企业相关单体因素通过企业的一个强项连接而构成的航母平台，当相关单体因素发生改变时，企业的商业模式就要进行不断的转换和创新。 进入商业模式的转换和创新 作业：社会发展趋势的具体表现形式（写六条） 一、回看社会上的高手是怎样看待商业模式的转换和创新？ 1、习主席说：未来5年内个体户必将消失，取而代之的是商业模式创新的团队（公司）；

《青铜葵花》试题及答案

《青铜葵花》试题及答案 1.青铜不识字，是谁教会了青铜读书写字的：（） A．老师 B．嘎鱼 C．爸爸 D．葵花 2.狂风吹倒了青铜家的房子，他们搭了一个窝棚，青铜用（）做灯给葵花写作业。 A．钨丝 B．干草 C．萤火虫 D．煤油 3.青铜家的那片茨菰田最后怎么样了：（） A．被蝗虫吃掉了 B．被牛糟蹋了 C．被嘎鱼家的鸭吃掉了 D．被人偷采掉了 4.葵花参加春节文艺宣传队演出时所戴的项链是哪里来的：（） A．爸爸妈妈给她买的 B．青铜用冰凌给她做的 C．老师借给她的 D．老师叫女同学借给她的 5.当葵花想到大麦地去看爸爸，坐在小船上漂流发生危险时，是谁救了她：（） A．干校的叔叔们 B．大麦地的乡亲们 C．青铜 D．嘎鱼 6.刘瘸子的到来给大麦地小学的孩子们带来了什么，让他们热闹了一回：（） A．照相 B．卖冰糖葫芦 C．卖冰棍 D．捏泥人 7.奶奶临终前把手镯拿下来，她是想：（） A．送给葵花 B．送给青铜 C．留给儿媳妇

D．留给儿子传下去 8.葵花远走江南回家，为了等葵花回家，青铜一直守在桥上，手里拿着：（） A．纸灯笼 B．纸风车 C．纸船 D．纸伞 9.葵花最终生活在哪里：（） A．青铜家里 B．村长家里 C．城里阿姨家 D．福利院 10.嘎鱼家祖祖辈辈养的是：（） A．鸡 B．鸭 C．鹅 D．鱼 11.葵花刚到干校时，天天要去看大麦地的原因是（） A．她想见到大麦地 B．大麦地有她的亲人 C．大麦地这个名字很好听 D．大麦地是一个村庄 12.青铜为什么会成为哑巴？（） A．失火时被火烧坏了嗓子 B．为了寻找失踪的葵花喊坏了嗓子 C．发高烧烧坏了嗓子 D．被嘎鱼欺负而成为哑巴 13.葵花爸爸一生最为成功的作品是（） A．用青铜制作成的葵花 B．绘画作品葵花 C．种植的葵花田 D．用青铜制作成的各种纪念品 14.爸爸去世之后后，苦命的葵花被送到谁家抚养：（） A ．嘎鱼家 B．青铜家 C．村长家 D．阿姨家

一级建造师复习攻略

为响应必过班老师的号召，给同学们提供一个复习攻略，也是为了新一届同学打气。全文约4000字，修修改改写了一个多星期，希望有帮助，本人没什么文采，但绝对有自信是最好的攻略.有没有之一不清楚。。。. 工作党，一建考过一建机电四科，考前三四个月开始复习，一般晚上下班后学习。 四科都是一个套路： 1、网课一套（吾思必过班提供） 2、资料两套(教材+必过班独家教材) 3、错题笔记本一个(手写，不要用云笔记) 网课：最大的作用是节约复习时间，自己需要学很久的难点，可能老师讲一下就明白了，同时老师会帮你梳理知识间的关联，挺让人省心的。 资料：知识精炼+题，培养做题的感觉，同时帮你更进一步掌握知识点。（官方教材废话多，有网课的话没有必要看官方教材，把讲义打印出来跟着听课就可以了。） 错题笔记本：它记录了你所有的薄弱点，是真正属于你自己的备考财富。 下面从几个方面来说： 一、考试特点 二、报考选科搭配 三、网课老师选择 四、资料选择 五、各科特点及我的复习方法、时长 六、个人建议 一、考试特点 ①、认真复习后实际通过率较高，但坚持认真复习完的人少

对于一建机电专业，毫无疑问教材为王。出题人无论怎么出题，都不可能超出教材的范围。目录框架为主，结合出题类型，判断这一章节是出判断题，还是案例题。一般精讲课程，都会给出明确的方向，这个不必担心。（我下面的截图是17年教材的，最新版的我没看）

一级建造师各个科目之间都是有一定联系的，只有有了系统的理论基础，才能够在实际工程的运用中胸有成竹。 ②、知识点在广不在深，偏题怪题极少 和学生时代的考试不同，一级建造师考试不会把单个知识点挖的特别特别深，然后出一些偏题怪题。因此在复习的时候不要过分的纠结单个知识点的深度，而是要尽量保证所有知识点都学到，不要有漏掉的。 ③、押题在于是哪位老师押，不在于机构。 这句话不太好理解。但我一句话举例：比如X路和X球的总裁班自己出的押题，那就是垃圾。如果必过班找刘平玉，江汉等老师给的押题，那就绝对靠谱。简言之：哪些老师和命题组有一些联系，那这位老师的押题就靠谱。

思八达销售智慧笔记

销售智慧 一、发现客户 二、建立连接 三、客户分析 四、化解抗拒 1、建立信赖感 2、塑造价值 A、角度 *销售员要站在顾客一方，让人暖心，切记把自己放在和顾客对立一面。不是在向顾客卖东西，而是要帮顾客选东西。 B、力度 C、逻辑 即用最重要的，最合理顺序，把最重要的话讲给最重要的人。 3、挖掘痛苦 4、种植渴望 5、建立感情 *先吃饭后谈事。饭前谈的是事，饭后谈的是情。 *吃饭的智慧：有人把肚子吃大了，有人把脑袋吃聪明了，有人把钱包吃鼓了。 A、单独相处 B、讲内心深处的话 C、崇拜他 D、依赖一个人 例：北京公司销售小姑娘和商会会长刘慧的故事。 E、感恩一个人（例：大染坊小六子） *一个感恩于你的人是渡你的人，可以激发你内心的无限潜能。 五、促成成交 *成为高手的关键在于在最重要的环节进行最强化的训练。 1、承诺 *顾客在购买时都渴望一个承诺，就像女人嫁人时都渴望一个承诺一样。 2、案例 3、客户见证 4、产品要点 5、引导转介绍 *我们未来的客户在今天客户的生活圈和事业圈里，因为有共同爱好、共同需求和共同消费能力的人会聚在一起。 *转介绍必须具备的三个条件： A、产品品质

B、服务品质 *衡量服务品质的标准只有一个：客户是否愿意给你做转介绍。 C、附加值 案例：亚麻籽油+健康宝典原价83的油加一本成本六元的健康宝典后卖98比以前销售更好。 *如何去给客户提供低成本高附加值的东西是做营销思考的命题。 销售的八大玄机 一、卖完自己卖产品衡量一个企业能否做大：1、平台能否成就员工；2、产品能不能造 福客户；3、产业能不能通向未来。*老板在销售境界。境是爱得深度，界是爱得广度。境界是爱得时间和空间。高管是在销售信念（带团队就是带信念）；员工是在销售素质（如何最快提高素质：到高素质的地方去体验、消费、学习） 二、卖完疗效卖广告 三、卖完价值卖价格 四、卖完特点卖优点案例：阿根廷黑香蕉 五、卖完低价卖差价 六、卖完说明卖承诺 七、卖完故事卖理论 八、卖完痛苦卖快乐 销售的七大死穴： 1、目的性太强 *收起你的目的性，把你的职业素质和专业态度拿出来。 2、急于求成 *在和客户没有建立信任感之前少谈产品。成交就像煮饺子，早了生的，晚了烂了。要遵循成交抛物线定律，在最恰当时机成交。 3、焦点不同步 *要等到客户焦点落下来的时候，抓住时机用最专业的说辞征服客户。 4、节外生枝 案例：海南买深海鱼油。最后销售多嘴一句以后给我电话一样价格给你包邮让13箱的生意变成了13盒。 5、不留余地 顾客在购买时，总想争取最后一分利益，销售必须留最后一张底牌，就像军人必须留最后一个子弹一样。最后拿出来的一定还得是让人有感觉的东西。 6、得意忘形 *顾客掏钱时是比较心疼的。顾客受不了他心疼时而别人很开心。聪明的销售是会表现得是无奈的友好，让顾客觉得杀价胜利了。心理的优势和得意取代了掏钱的不愉快。亲身实例：拉萨选东西老板那个吃亏的样子。老板真乃高手！ 7、不敢成交

华科考博分子生物学历年真题汇总(葵花宝典2016)s

华中科技大学同济医学院考博分子生物学（专业基础）简答题历年试题汇总 1.顺式作用元件有哪些，并加以解释。2015，2012考 2.人类基因组计划的4张图，各自的意义是什么？ 3.癌基因激活的主要途径？ 问答：1.什么是基因治疗，基因治疗的主要策略是什么？基因治疗的技术及主要内容，2015，2014，2013考 问答2.蛋白质组学的主要技术有哪些并解释？2015，2012考 2014简问答题 1.PCR原理，步骤，写出6种PCR衍生技术2013，2014，2009考 2.何谓基因克隆？简述其基本过程。09年 3.重组DNA技术，问答题20分，14年考 4.举例说明基因表达的调控机制。题目太大，原核调控，真核调控？13年 问答5.人类基因定位的常用方法及原理。12年，09年考 简问6.简述反式作用因子的结构特点及作用方式09年 简问7.简述逆转录病毒的结构特点09年考 问答：真核细胞中基因表达的特异性转录调控因子是指什么？根据他们的结构特征可以分为哪些类型？它们和DNA相互识别的原理是什么？2013年考 问答：试述大肠杆菌中表达蛋白质产物的步骤。2013年考 试比较克隆载体、原核载体和真核载体的特点2012年考 2016年真题 英译中名词解释（20分）

反义RNA；操纵子；限制性核酸内切酶；选择性剪切；抑癌基因；基因诊断； RNA干扰；质粒； gene maping；管家基因 简答题。 真核基因组的结构和功能特点20分 人类基因组的结构特征15分 原癌基因的特点15分 蛋白质组研究常用技术有那些，简介其作用。15分 当前基因治疗技术面临的技术问题有哪些？15分 以下为2001-2004年试题及网上答案 基因工程是在分子水平上对基因进行操作的复杂技术，是将外源基因通过体外重组后导入受体细胞内，使这个基因能在受体细胞内复制、转录、翻译表达的操作，又叫分子克隆，DNA 重组技术。 1. 在GENBANK中检索IL-2的mRNA序列；在genecard里检索IL-2高表达的组织；同时检索一下有关文献； 2. 如果考虑使用原核表达系统（通常是大肠杆菌表达系统），将IL-2的成熟肽的基因序列找出（呵呵，我没有检索，不清楚是否有信号肽）进行分析； 3. 根据表达载体，设计含有合适酶切位点的、对应成熟肽编码区的引物； 4. 提取IL-2高表达的组织的mRNA，RT-PCR，T载体克隆或直接酶切克隆至表达载体中、测序。

第十二届《领袖演说智慧》笔记

第十三届《领袖演说智慧》总裁研修班 思八达集团欢迎您！ 复训学员请到会场两侧区域就坐 三弦学员请在最后座位就坐 洗手间在大门口的左右两边，二楼、三楼都有 请将手机调至静音状态 开课期间请不要随意走动 所有学员三天时间都在同一座位就坐，以方阵为单位进行调 一、演说智慧，第一智慧就是要先学会听 你被什么打动，你就活在什么层面 一致性产生影响力 二、说话到底是为了什么 是为了说精彩吗 是为了说全吗 是为了讲完吗 是为了讲幽默吗（幽默是润滑剂，是自然生起的。） 是为了证明自己吗 ↓ 听众根本上就关心你讲的对我有没有用。 讲话的目的就是让人采取行动。 空白是获得最高境界之一。 只要你讲话对别人没有帮助，就立刻闭嘴。 一个心里装不住事的人难有机会成就大业。 当事情发生，你对外讲话就会描述某种情绪，某种感慨，过一段时间再讲，就会沉淀出精华，沉淀出智慧。有智慧就会随机处理。

说话根本上有三种形态： 第一：说服型 第二：告知型 第三：娱乐型 领袖就是要以说服型为主导。 21世纪思想就是老板和员工一起关心顾客。 说服铁三角： 1、气质 2、逻辑 3、激情 气质 逻辑激情 第一：气质（坚定的信念、明确的价值观，全局的思想） 坚定的信念 明确的观念全局的思想 一：坚定的信念： 你对你演讲的内容必须百分之一万的坚信。 最高统帅比的就是看谁坚定。 例如：马云说了什么说服孙正义 1、全世界投资人有的是，马云只有一个。 2、我会用整个生命经营这件事，这就是我的命。 把核心说完闭嘴，这是我尊重你，因为你懂得抓核心。高手过招，点到为止。 再如：章子怡说了什么打动李安，人生开始飞翔

——我会用整个生命对这个角色负责。 李安对章子怡说了什么 1、只跟第一流导演合作。 2、只演电影。 3、在大陆只接受中央台采访。 周凯旋说了什么俘虏了李嘉诚 1、我有钱就跟你合作。 2、跟你合作就是为了天天能看到你，跟你在一起。 3、我爱你就是要跟你一起实现。。。。。。 什么叫信念 信念：就是确定的感觉。如：唐毓曼确定自己是女生。 要像确定你自己的性别一样确定自己所说的话。 你能说服他就是你比他确定——在某一个观点上。 确定来自于体验到和照见。 如比尔·盖茨照见到未来每家桌子上都有一台电脑。 模式一：如何描述自己产业有信念的模式 1、说话的智慧的第二境界就是：知道在什么场合该说什么。 第一目的是：让听众加强对自己产业的信念。听完你演讲，让他觉得自己对自己产业的信念还不够，或者让听众明白了我抓信念是对了。 领袖就是不断的复制思想和信念。 第二目的是：获得别人加盟或购买产品，获得内部的追随和认可。 2、必须讲你做这个产业给你带来的收获（精神、物质等）。 3、必须描述是大势所趋和有多少市场份额。 4、必须选择是跟政策走向一体。 5、必须要讲是你此生难以做完的事。 6、必须站在历史进程上描述你的人生、你的产业。 学会在历史的长河中定位和成就你的人生

量化投资修行之葵花宝典

量化投资修行之葵花宝典 很多朋友问过，顺手认真整理了一下，个人观点，特指“量化组合投资领域”，仅供各位朋友参考 预备知识 预备知识包括：数学、计算机、投资学。 数学方面至少包括微积分、线性代数、优化理论、概率统计基础、线性回归等知识点。当然，数学专业出身最佳，肯定满足条件，一般理工科也都基本满足要求，即使有所欠缺，花一点时间也就自学补上了。 计算机方面有两点：一是要会编程，MATLAB、C++、Java、Python、R等语言或软件只要会用一种就行，但要求比较熟练，有过几万行代码的经验；二是了解数据库和SQL语言，因为量化投资中涉及对海量数据的管理和分析，所以需要建立和维护数据库，并用SQL从数据库按各种形式查询数据。 投资学方面只要通过大学的《投资学》课程就好，像William Sharpe等3人合著的《投资学》，还要好几部其它优秀的《投资学》教程都可以。要是能够通过CFA，那就最好了，知识面更广。 入门阶段 Barra USE3 handbook Barra是量化投资技术提供商，是量化投资先驱。其经典的美国股票风险模型第3版（USE3）手册，详细介绍了股票市场多因子模型的理论框架和实证细节。手册共几十页，不太长，描述规范清晰，不陷入无意义的细节，非常适合于入门。

系统学习阶段 系统化学习1：Quantitative Equity Portfolio Management（QEPM），Ludwig Chincarini 偏学术风格 偏学术界的作者撰写的关于量化股票组合投资的系统教程。尤其是前几章概述部分写得非常精彩、易懂、准确。把该领域的各个方面高屋建瓴地串讲了一遍。后面部分的章节似乎略有些学术了，但也值得一读。 由于其较高的可读性，适于初学者学习。 系统化学习2：Active Portfolio Management（APM）， Grinold & Kahn 偏业界风格 业界先驱所著，作者均曾任Barra公司的研究总监。本书深度相对较深，描述也偏实践，介绍了许多深刻的真知。并且书中很多论述精彩而透彻。该书被奉为量化组合投资业界圣经。不过该书有些章节撰写得深度不一，初学者容易感到阅读起来有点困难。所以推荐：首次阅读不必纠结看不懂的细节，只要不影响后续阅读就跳过具体细节；有一定基础后，建议经常反复阅读本书。 系统学习3：Quantitative Equity Portfolio Management（QEPM），Qian & Hua & Sorensen APM的补充 业界人士所著。针对性地对APM没有展开讲的一些topic做了很好的深入探讨。建议在APM之后阅读。该书风格比较数学，不过对数学专业背景

分子生物学葵花宝典

一、名词解释 1、基因：能够表达和产生蛋白质和RNA的DNA序列，是决定遗传性状的功能单位。 2、基因组：细胞或生物体的一套完整单倍体的遗传物质的总和。 3、端粒：以线性染色体形式存在的真核基因组DNA末端都有一种特殊的结构叫端粒。该 结构是一段DNA序列和蛋白质形成的一种复合体，仅在真核细胞染色体末端存在。4、操纵子：是指数个功能上相关的结构基因串联在一起，构成信息区，连同其上游的调控 区（包括启动子和操纵基因）以及下游的转录终止信号所构成的基因表达单位，所转录的RNA为多顺反子。 5、顺式作用元件：是指那些与结构基因表达调控相关、能够被基因调控蛋白特异性识别和 结合的特异DNA序列。包括启动子、上游启动子元件、增强子、加尾信号和一些反应元件等。 6、反式作用因子：是指真核细胞内含有的大量可以通过直接或间接结合顺式作用元件而调 节基因转录活性的蛋白质因子。 7、启动子：是RNA聚合酶特异性识别和结合的DNA序列。 8、增强子：位于真核基因中远离转录起始点，能明显增强启动子转录效率的特殊DNA序 列。它可位于被增强的转录基因的上游或下游，也可相距靶基因较远。 9、基因表达：是指生物基因组中结构基因所携带的遗传信息经过转录、翻译等一系列过程， 合成特定的蛋白质，进而发挥其特定的生物学功能和生物学效应的全过程。 10、信息分子：调节细胞生命活动的化学物质。其中由细胞分泌的调节靶细胞生命活动 的化学物质称为细胞间信息分子；而在细胞内传递信息调控信号的化学物质称为细胞内信息分子。 11、受体：是存在于靶细胞膜上或细胞内能特异识别生物活性分子并与之结合，进而发 生生物学效应的的特殊蛋白质。 12、分子克隆：在体外对DNA分子按照即定目的和方案进行人工重组，将重组分子导 入合适宿主，使其在宿主中扩增和繁殖，以获得该DNA分子的大量拷贝。 13、蛋白激酶：是指能够将磷酸集团从磷酸供体分子转移到底物蛋白的氨基酸受体上的 一大类酶。 14、蛋白磷酸酶：是具有催化已经磷酸化的蛋白质分子发生去磷酸化反应的一类酶分 子，与蛋白激酶相对应存在，共同构成了磷酸化和去磷酸化这一重要的蛋白质活性的开关系统。 15、基因工程：有目的的通过分子克隆技术，人为的操作改造基因，改变生物遗传性状 的系列过程。 16、载体：能在连接酶的作用下和外源DNA片段连接并运送DNA分子进入受体细胞的 DNA分子。 17、转化：指质粒DNA或以它为载体构建的重组DNA导入细菌的过程。 18、感染：以噬菌体、粘性质粒和真核细胞病毒为载体的重组DNA分子，在体外经过包 装成具有感染能力的病毒或噬菌体颗粒，才能感染适当的细胞，并在细胞内扩增。19、转导：指以噬菌体为载体，在细菌之间转移DNA的过程，有时也指在真核细胞之间 通过逆转录病毒转移和获得细胞DNA的过程。 20、转染：指病毒或以它为载体构建的重组子导入真核细胞的过程。 21、DNA变性：在物理或化学因素的作用下，导致两条DNA链之间的氢键断裂，而核酸 分子中的所有共价键则不受影响。 22、DNA复性：当促使变性的因素解除后，两条DNA链又可以通过碱基互补配对结合形 成DNA双螺旋结构。

最快速让你知道思八达刘一秒智慧课程的核心

最快速让你知道思八达刘一秒智慧课程的核心！ 国内四大课程：《运营》《影响》《宗教》《演说》 企业中就两大问题：一是事的问题，一个是人的问题。 1、《运营智慧》主要讲"事",通过机制打造势，围绕纲领对外传递企业整体印象； 《运营》属于硬件、有形层面的课程，就像小轿车，核心纲领就是发动力要能正常工作，如：老板是企业的发动机和方向盘、其他各个部门分别是刹车系统、传动系统、润滑系统、空调系统、减震系统和轮胎等；学运营就像学修车，学会对企业问题的几大部件进行标准对照和自我检测。 2、《影响智慧》主要讲“人”，核心点就是用“爱”去经营人的动力化解阻力（能量），提升 企业整体的影响力（能量）； 《影响》属于软件、无形层面的课程，就像考驾照、练技术，影响练的是驾驭企业技术。3、《宗教智慧》通过宗教背后的文化帮助企业找到自己的魂，经营人的精神世界； 学完《运营和影响》终于达到了人车合一，可是运营是小车和影响等于C照，要想把企业做强、做大和基业长青，必须考A 照；会驾驭大车，开小车更是没有问题。 4、《演说智慧》发挥本事的本事，企业每向前一步都离不开老板的一张嘴，如何用语言的力量 说服员工、合作者、股东、上下游、政府媒体等等； 一个房间如果没有窗户，黑乎乎一片，谁也不知道里面装的是什么？学《演说》就是给您的企业打开一扇窗户，让明媚的阳光和新鲜空气都能照射进来，由此而变得美好和生机勃勃。 国外一大课程：《三弦智慧》老板真正解脱之门，参透弦外之音，无形无相，一切为我所用，所用为众生！ 《智慧系统》给企业植入智慧基因让企业高中基层三位一体，思想一致、灵魂一致，生出新的思维意识系统，由输血变造血，生生不息。可以用一句话来概括《智慧系统工程》：（精华中的精华、牛奶中的乳珍、蜂蜜中的蜂王浆、手机中的战斗机等等） 1、《运营智慧》-“分”学员上完运营智慧心中多数会装一个字，那就是分。学完运营，企业机制没有根本改变，所学一切都是苍白，改革改的就是给谁干，干完怎么分。想不想分是胸怀问题，敢不敢分是魄力的问题，分的好不好那是能力和智慧的问题。分的清楚，合的才长久。愿不愿意分？敢不敢分？怎么分？给谁分？分多少？什么时候分？把这一个“分”字弄明白，企业都会发生翻天覆地的变化。 2、《影响智慧》-“爱”人最终比的就是影响力，影响力就是爱力。只要心中的爱没有增加，一切不会根本改变。什么是真正的爱？企业以何种方式去爱民？ 3、《宗教智慧》-“魂”企业为谁而存在？为谁而请命？企业存在的意义和目的是什么？什么是企业的魂？通过我们的产品或服务让人们生活更美好玩意更幸福就是企业的魂。找到魂者，一切都是享受，找不到魂者，一切都会成为负担。 4、《演说智慧》-“活”演说的核心目的是什么？是为了讲全讲完讲精彩吗？是对人有帮助让人行动吗？还是在人心中激起一种东西，把听众的心激活？ 《三弦智慧》-“化”一切智慧德相本身俱足，谁也无法再加些什么，只能唤醒。最伟大的老师永远是自己，随时可以对接一切、消化一切，当生则生、当灭则灭。学会自我引导的力量，随时随地一日千里，波澜壮阔。一切为我所用，所用为众生。 《智慧系统》：“生”智慧系统是生出系统的系统。五生：生境界、生智慧、生人才、生机制、生利润，生生不息。

思八达课程：106期全员生发决策层笔记

106期《全员生发智慧系统》决策层笔记 高层笔记： 一、你选谁，你就和谁在一个水平上。（你被什么打动就活在什么层面上） 二、讲话讲的好不好，是能力问题么？是经验问题么？(你当下的造化超不过你一分半钟的显现。) 从体验入：（体验讲话） 看大多数人讲话的问题： A、抓不住核心 你说出来的话要对人有所帮助，让他立刻采取行动。对人没有帮助，立刻闭嘴。 B、没有影响力 你能影响多少人，就能组建多大的团队，就能成就多大的事业。（深入他的内心） C、场一大就紧张 造成讲话这些问题的核心是什么？（与实相合） 1、首先看讲话人的出发点，即境界有什么不同。

境界：A:想表现什么，想证明什么。 B：想把事说清楚 C：想帮助听众 2、看不同的境界，讲话人的关注点（方向）有什么不同。 方向：A：关注点在自己身上 B：关注点在事上 C：关注点在对方身上 3、看不同的境界，不同的方向，讲话的策略和操作有什么不同？ 策略：A：想说好、说全、说精彩 B：说准确到位 C：让对方接收到 操作：A：可以准备，假、大、空 B：真实、简单、自然 C：发自内心，充满慈悲 由此可见：讲话的好坏和经验、能力关系不大，它决定于讲话的境界。境界决定方向、策略和操作。

那么，在我们人生的其他方面是不是也如此呢？（怎么用？） 如：老板办企业招人 境界：A：请人帮我挣钱 B：找一批志同道合的人成就一件事 C：成就员工 方向：A：和员工形成利益共同体 B：和员工形成事业共同体 C：和员工形成精神共同体 策略：A：用利益吸引人 B：用事吸引人 C：用精神、灵魂、文化吸引人 操作：A：交换 B：一起做事 C：一体精神（成就人） 由此可见：人生中的许多问题是和境界有关系的，是境界决定了我们

分子生物学(下)

分子生物学（下） 1、原核基因调控机制的类型与特点 1.负转录调控：调节基因的产物是阻遏蛋白，起阻止结构基因转录的作用。 (1)负控诱导:阻遏蛋白不与诱导物结合时,结构基因不转录; (2)负控阻遏:阻遏蛋白与诱导物结合时,结构基因不转录. 2.正转录调控:调节基因的产物是激活蛋白. (1)正控诱导系统:诱导物的存在是激活蛋白处于活性状态; (2)正控阻遏系统:诱导物使激活蛋白处于非活性状态. 2、乳糖操纵子和色氨酸操纵子 大肠杆菌乳糖操纵子：乳糖——开动大肠杆菌乳糖操纵子——表达利用乳糖的三个酶——细菌利用乳糖。 乳糖操纵子的控制模型内容 （1）Z、Y、A基因的产物由同一条多顺反子的mRNA分子所编码； （2）该mRNA的启动区（P）位于阻遏基因（I）与操纵区（O）之间，不能单独起始半乳糖苷酶和透过酶基因的高效表达； （3）操纵区是DNA上的一小段序列（26bp），是阻遏物的结合位点； （4）当阻遏物与操纵区结合时，Lac mRNA的转录起始受到抑制； （5）诱导物通过与阻遏物结合，改变它的三维构象，使之不能与操纵区相结合，激发Lac mRNA 的转录。 大肠杆菌色氨酸操纵子：加入色氨酸——阻遏色氨酸操纵子—相关合成酶基因关闭。 色氨酸操纵子与负控阻遏系统 Trp体系参与生物合成而不是降解; Trp合成分5步,有7个基因参与. 组成包括:阻遏基因（R）、启动区(P)、操纵区（O）、前导区（L）、弱化区（a）和结构基因区； Trp操纵子的转录调控包括阻遏系统和弱化系统. 3、原核与真核基因表达调控的异同 4、DNA水平的表达调控 染色质的丢失：不可逆 核的全能性（totipotency）：细胞核内保存了个体发育所必需的全部基因 基因扩增(gene amplification)：增加基因的拷贝数 非洲爪蟾卵母细胞rRNA基因卵裂时，扩增2000倍，达1012个核糖体 药物：诱导抗药性基因的扩增；肿瘤细胞：原癌基因拷贝数异常增加 基因重排(gene rearrangement)：将一个基因从远离启动子的地方移到距它很近的位点从而启动转录。如免疫球蛋白基因重排 DNA甲基化(DNA methylation)： mCpG，即“CpG岛”：在DNA上成串出现，通常被甲基化，极易自发脱氨形成胸3腺嘧啶。 甲基化(methylated)程度高，基因表达降低； 去甲基化(undermethylated)：基因表达增加 DNA甲基化能引起染色体结构、DNA构象、DNA稳定性及DNA与蛋白质相互作用方式改变——控制基因表达 染色质(chromatin)或染色体(chromosome)结构对基因表达的调控 （1）“开放”型活性染色质结构对转录的影响：转录发生前，染色质在特定区域被解旋松弛，使转录因子与启动区DNA结合——诱导转录。 （2）“灯刷型”染色体上的环形结构与基因的转录活性：两栖类动物卵细胞减数分裂

107思八达基层学习笔记

《全员生发智慧系统》 境界 方向操作 策略 说明：此思维系统（程序）中 A．境界决定方向 B．方向决定策略 C．策略决定操作 D．操作决定结果 如：以工作为例

第一塔：境界 （境界就像一枚盖子，挡住无数人的突破和显现，不管做什么事情，根本就有一枚盖子） 如：父母的境界左右着孩子。再如：团队领导的境界阻碍着团队员工。再如：自己的境界阻碍了自己的显现。（如：把自己当基层会出现两种结果：1.只做基层的事。2.只会做基层的事。） 进入境界金字塔 成事成人 成就 说明：成长才能成事

成事才能成就 成就才能成人 一、成长 核心通道：体验 先问自己： 成长是教出来的吗？如：遇事不要慌，上台不紧张。 为什么学了很多，懂了很多却用不出来？如：吸烟有害健康。 老板为什么比我们有就境界？ 一切都是体验出来的 由此触摸到：所谓成长就是踩着各种体验向上升华。（必须投资时间和金钱去尽情体验） 1.设计体验 (设计什么都不如设计体验) 三个阶段： A．别人设计自己的体验。 B．自己设计自己的体验。 C．自己设计别人的体验。

2.消化体验 （顺着自己的感受或存在的结果，反向触摸，想要的答案自然出现）如：绽放 为什么比原来更绽放？A.感染 B.氛围 C.场的力量 再如：没钱 为什么没钱？A.不勤奋 B.没本事 C.做的事没有价值 3.为我所用 （把自己的感受和体验提炼成一种思想，用来指导自己或别人的当下或未来） 如：听课听不懂 A.缺乏体验---连接体验 B.维茨不够---提高维茨 如：解决问题 （对话永远高于对抗） 再如：讲课 A.讲不出来 B.讲不好 玄机就在于主动体验还是被动体验 二、成事 用好三个命脉： 1.立场：（选择一切从立场进入） 先问自己三个问题：①我在谁的地盘上 ②我为谁说话 ③我是谁的人

葵花宝典 CISSP真题录

1．状态检测防火墙什么时候实施规则变更备份？B A 防火墙变更之前 B 防火墙变更之后 C 作为完全备份的一部分 D 作为增量备份的一部分 2．哪项违反了CEI？ B A 隐瞒之前的犯罪记录行为 B CISSP从业者从事不道德行为 3．FTP的风险？B A 没有目标认证 B 明文传输 4．L2TP是为了通过什么协议实现？ A A PPP B PCP 5．VOIP在语音通信过程当中，弱点? B A 没有目标认证 B 没有源认证 6．(1) 假如：T为IDS控制成本费用200000美元 E为每年恢复数据节省费用50000美元 R是为实施控制措施之前的每年恢复费用100000美元 问：实际投资回报为： A -50000 B -100000 C 100000 D 150000 A (投资回报就是控制前-控制后, 投资回报负值就是省了多少，正值就是赚了多少) (2) 问年度预期损失ALE怎么计算： B A (R+E)/T B（R-E）+T C (R-T)*E D T/(R-E) 7．ipsec隧道模式下的端到端加密，ip包头 B A 加密，数据不加密 B和数据一起加密 C 不加密，数据加密 8．实施一个安全计划，最重要的是：B

A 获取安全计划所需的资源 B 与高层管理者访谈 9．安全要求属于： B A. ST安全目标 B. PP C . TOE 10．TOE属于 A A CC B 可信计算机 11．公司进行信息安全评估，打算把所有应用程序维护外包，问对服务提供商什么是最重要的？ C A BIA B 风险管理 C SLA 12．公司运维外包服务，问什么时候跟服务提供商确定安全要求？ A A 合同谈判 B 合同定义 1.外部审计师违反了公司安全要求，问惩罚判定来源： C A 公司安全要求 B 外部审计公司要求 C 双方协议 2.公司实施一个纵深防御政策，问由内到外的层次设计？A？ A 边界场地出入口办公区计算机机房 B 围墙场地出入口计算机机房办公区域 3.802.1 b具有什么功能？ 共享密钥 4.SSL协议双向认证，部分使用，除了客户端验证服务器，还有？ A A 服务器对客户端自我验证 B 客户端对服务器自我验证 5.可重复使用是在CMMI的哪个阶段？第二个 A、不可预测 B、可重复 C、可定义 D、可管理 E、可优化

思八达《水性营销的秘密》

《水性营销的秘密》—课程笔记 主讲老师：王童字：孝德 ★如果我们不了解我们的生命，生命对于我们来说就意味着一种惩罚。 ★智慧对于我们的生命最重要。 ★学而知不足，教而知困，知不足而内省，困而自强。 ★虽非圣贤，志在圣贤。 ★做人就做从黑暗走向光明的人。 ☆问题：如何让一个人永远无法逃出监狱？——让这个人永远不知道自己身处监狱。 ★世界上的四种人： 1、从光明走向光明的人； 2、从黑暗走向光明的人； 3、从光明走向黑暗的人； 4、从黑暗走向黑暗的人。 ☆大家是带着怎样的期待走进这个课堂，希望课程结束之后有什么样的收获？ 1、每个人都希望得到快乐，逃避痛苦； 2、获得智慧，解决生活中的问题和烦恼； 3、帮助他人。 ★激情、信念如同河流，既软绵绵又不屈不挠，这就是和谐的力量。当你成为如同水一般的人时，就能源远流长。 ★如果一个人是正确的，那么他的世界就是正确的。 ★人生的喜怒哀乐来自三个层面： 1、如何与自己相处； 1）人生要有方向感和使命感，人活着的真正意义是什么，我们生从何来，死往何去我们自己都清楚么。 ★人生要面对物质世界和精神世界，当两者不平衡的时候，就会迷茫和纠结。通则不痛，痛则不通。 2）有正确的、智慧的价值观、世界观和人生观，懂得正确的为人处世之道。3）有宁静、平和的心灵。当人心止如水的时候，就容易生智慧。

2、如何与他人相处； ★不和谐的人际关系，都是因为“自我”和“私”的膨胀。 ★重要但不紧急的事情： 1）健康 2）人际关系 3、如何与大自然相处。 ★不知道如何与大自然相处，就会导致各种各样的自然灾害。 ★人类已经到了改变自己行为的时候了，否则我们的地球就会很危险。 ★我们面对的人生好比一条河流，要达到成功、快乐、幸福的彼岸，就需要有工具（船）和本领（游泳）。★工具和本领就是我们做人的智慧。 ★世事洞明皆学问，人情练达即文章。 ★截止到2008年，世界上的孔子学院已经有300多家，预计到2012年，孔子学院将达到500多家。 ☆什么是儒家文化？ ★宋朝的开国皇帝赵匡胤和弟弟赵光义，在短时间内使国家得到巨大的建设效果，原因是他们共同任用一个宰相——赵普，使得国家迅速得到了大治。赵普说这是论语的效用，故曰：半部论语治天下。可以从侧面看出儒家文化在治理国家方面的巨大威力。 ★孔老夫子的生平简介： 孔子是春秋战国时期鲁国人，其母颜征在，生孔子的时候，家门口来了一只麒麟，口中含着一块玉牌，上面刻着：水精子，继衰周而为素王。（①水精子：水月童子，文殊菩萨，传统文化中智慧精神的象征。②素王：没有帝王的地位和名分，但有帝王之实的君王。）孔夫子学无常师，三十岁的时候学有所成，成为当时天下最有学问的人。51岁的时候被任用为中都宰，使中都的治安达到“行之三月，路不拾遗，行之一年，四方择之。”后来官居大司寇，相当于国家的司法部长，同时兼行宰相的职权。鲁国渐渐强大起来，使邻国十分惶恐。后来齐国用糖衣炮弹腐化鲁国的君主，并且使他们远离了孔子。55岁的时候，孔子辞官，带着弟子周游列国，推行政治主张。但是当时各国崇尚武力，孔子推行的“仁道”得不到采纳。在69岁的时候回到了鲁国，晚年致力于著书立说。71岁的时候在鲁国郊外有猎人将怪兽打成重伤，但是当时的人们都不认识这是什么怪兽。孔子看到此景十分感伤，说只有圣人出生的时候麒麟才会出现，而如今

《青铜葵花》试题及答案

《青铜葵花》试题及答案 1、青铜不识字,就是谁教会了青铜读书写字得:() A.老师 B.嘎鱼 C.爸爸 D、葵花 2.狂风吹倒了青铜家得房子,她们搭了一个窝棚,青铜用( )做灯给葵花写作业、 Ａ。钨丝 B.干草 Ｃ、萤火虫 D、煤油 3.青铜家得那片茨菰田最后怎么样了:( ) A、被蝗虫吃掉了 B。被牛糟蹋了 C。被嘎鱼家得鸭吃掉了 D.被人偷采掉了 4.葵花参加春节文艺宣传队演出时所戴得项链就是哪里来得:( ) A.爸爸妈妈给她买得 B、青铜用冰凌给她做得 C.老师借给她得 D。老师叫女同学借给她得 5.当葵花想到大麦地去瞧爸爸,坐在小船上漂流发生危险时,就是谁救了她:( ) A、干校得叔叔们 B、大麦地得乡亲们 C、青铜 Ｄ、嘎鱼 6。刘瘸子得到来给大麦地小学得孩子们带来了什么,让她们热闹了一回:( ) A。照相 B、卖冰糖葫芦 C。卖冰棍 Ｄ、捏泥人 7、奶奶临终前把手镯拿下来,她就是想:( ) Ａ.送给葵花 B。送给青铜 C。留给儿媳妇 Ｄ.留给儿子传下去 ８。葵花远走江南回家,为了等葵花回家,青铜一直守在桥上,手里拿着:( ) A.纸灯笼 B.纸风车 Ｃ.纸船

D、纸伞 ９、葵花最终生活在哪里:( ) A.青铜家里 B、村长家里 C.城里阿姨家 D.福利院 10。嘎鱼家祖祖辈辈养得就是:( ) A、鸡 B.鸭 C.鹅 D、鱼 11.葵花刚到干校时,天天要去瞧大麦地得原因就是( ) A。她想见到大麦地 Ｂ。大麦地有她得亲人 C.大麦地这个名字很好听 D.大麦地就是一个村庄 12。青铜为什么会成为哑巴？( ) A。失火时被火烧坏了嗓子 Ｂ、为了寻找失踪得葵花喊坏了嗓子 C.发高烧烧坏了嗓子 D.被嘎鱼欺负而成为哑巴 １3。葵花爸爸一生最为成功得作品就是( ) A.用青铜制作成得葵花 B。绘画作品葵花 C。种植得葵花田 Ｄ、用青铜制作成得各种纪念品 14.爸爸去世之后后,苦命得葵花被送到谁家抚养:( ) A .嘎鱼家 B。青铜家 Ｃ.村长家 Ｄ、阿姨家 15.嘎鱼爸爸与青铜爸爸打架得原因就是:( ) A。嘎鱼爸爸说青铜家偷吃了她家得鸭子 B.青铜爸爸说嘎鱼家偷吃了她家得鱼 C、嘎鱼欺负了青铜与葵花 Ｄ.青铜与葵花欺负了嘎鱼 16。为了供孩子上学,青铜全家一起做了一件什么事情:( )

思八达智慧系统学习笔记

思八达学习笔记 6月5日：应平老师 玩 找到童年的感觉 以玩的心态，认真的做事！ 形玩神不玩！ 形散神不散！ 为什么这么累？因为我们天天在干不该干的事，所以我们没有时间去干我们应该干的事！如：重要沟通。 Why？ 因为我们不能打造一个自动运转的场，经营企业就是经营场！ 场的巨大特征：一旦运转起来就不再需要任何外力和能量！ 妓女，嫖客，经理人！ 投资一家公司看符合不符合产业方向，然后帮助打造自动运转的场，什么是场？场就是一群可自动运转的能量体的组合。 打造场的五大步骤、一大法门！ 五大步骤： 第一步：造场 ★中层管理里面就是选人。 ★选人三大标准：A、认可你的人；B、能做事的人；C、有超强行动力的人。 ★复试加培训：必须要有公司高层（如：老板），讲造势和未来能多大。 因为执行力的前提是：相信！必须把你所讲的文化、融会贯通到你整个培训过程。 销售：打一个有趣的电话、找一个有趣的人、顺便谈一个有趣的合作！ ★面试五大命题：

A、你为什么要从事这一类的工作？（背后的价值观和理由是什 么？） B、你过往工作经历是什么？（知道他能不能胜任我们的工作） C、你的优劣势是什么？ D、你今天来的感觉和体会是什么？（核心命脉） E、如果录取你，你将如何开展工作？ 第二步：定场——定其心 ★你不定他心，必无事生非！ ★前三天让他忙 ★正面力量从自身产生，屈指可数，但我们负面能量会自动从内心产生。 ★给他讲故事(成功人士的故事)，故事讲完，就挑选认可你的人！ ★展示公司团队，上级产品 第三步：捧场——育人（燃起势） ★如何激发员工心中的正面能量，让他们如同一团火一样燃烧起来？★秘诀：向场很好、很旺的公司、团队学习！ 具体操作： 1、任何时候对员工要有帮助，帮助其有结果（3+2策略），有活 动、有体验（必须要有早会，能让员工有活力），不讲消极话、只讲积极话（让其知其然而知其所以然、执行力的前提——相 信） 例如：确定其和自己是一伙人，前三个客户必须由经理本人带他相见，负责谈、签单、收款，第四、五个客户由其自己亲自操作，经理观看不语。（A、签单；B、学到东西） 小领导的焦点在干事、在签单，大领导的焦点在育人，培养其才能！过三遍策略：A、模拟；B、做一遍；C、放电影——从客户办公室出来回放一遍 2、 PK机制

思八达集团简介

思八达集团简介 1、刘一秒介绍 刘一秒（男），思八达创始人、广受认可的中小企业家创业导师。1998年南下深圳创业，因为智慧，获得人生和事业的成功，转而把弘扬智慧确定为自己一生的事业。 人生有限，亲身经历过草根创业的困惑与艰辛，刘一秒深知，在复杂多变的世界里，能否“正确地做事”和“做正确的事”，避免走弯路，是企业持续成功之关键。面对中国这一全球最大的创业群体，如果能结合自身实践，总结前人经验，系统生发出当下智慧，将给中国庞大的草根企业家以根本的解脱，于国于民都是一件伟大的事业。 刘一秒结合中国中小民营企业家，特别是不被人关注和关怀的草根民营企业家阶层的实际问题，潜心研究，孜孜以求，最后生发出了符合中国中小民营企业家实际的系列智慧课程。一推出就获得了巨大反响，不仅在许多企业家身上“立竿见影”，更促使一批通过学习智慧课程而使人生事业获得解脱的企业家，转而投身于此，形成了一个以弘扬智慧为核心，为中国中小民营企业家请命的“思八达智慧企业家讲师团”。 他所创立的思八达致力于提升中小民营企业家群体的人生境界，“先富带后富，先福帮后福”，让企业获得智慧，实现自我造血功能和可持续发展。短短数载，已经成为国内行业领跑者，也因此被中小民营企业家和业界公认为“中国创业家孵化器”，形成了具有时代特征的创业家“互助组”、“合作社”，走出了中国特色的创业孵化之路，刘一秒也因此被誉为“中国中小民营企业家的‘创业教父’”。

2、思八达是谁？ 思八达于2002年由刘一秒先生发起创立。 思八达的纲领是创建“中国创业家孵化器”，致力于引导、提升、服务中国中小民营企业，寻找从偶然走向必然之途，不断孵化行业隐形冠军和新型领军企业。 思八达作为商业智慧传播机构，通过传播草根创业的原生智慧，造就中国新一代商业精英和创业家群体，并为他们营造智慧服务平台与智慧交流平台，进而成为千千万万中小民营企业家的精神家园。3、思八达的核心价值 思八达的核心价值是为“老板换芯片，为企业找魂”，为企业的持续发展注入生生不息的原动力。 4、思八达的使命 思八达的使命是：弘扬创业精神，传播商业智慧，孵化具有社会责任感的创业家群体，实现“产业报国”，为中华民族的伟大复兴贡献力量。 5、思八达能做什么？ 第一类： 原创研讨会。思八达禀承原创性原则，经十余年的锤炼，已成功推出备受学员欢迎的智慧系列品牌研讨会（《运营智慧》、《影响智