病毒囊膜蛋白免疫刺激复合物的制备

免疫名词解释

名词解释 1免疫：是指机体通过区别“自己”和“非己”，对非己物质进行识别，应答和予以清除的生物学效应的总和。 2初始淋巴细胞：未接触过抗原的成熟B,T淋巴细胞被称为初始淋巴细胞，分别通过BCR或TCR识别抗原，执行适应性免疫应答。 3免疫细胞：是指所有参与免疫应答或与免疫应答有关的细胞及其前身。 4淋巴细胞归巢：是指淋巴细胞的定向迁移，包括淋巴细胞再循环和白细胞向炎症部位迁移。 5抗原：是指能与TCR或BCR结合，激活T或B细胞增殖，分化，产生效应淋巴细胞或抗体，并与之特异性结合，从而发挥免疫效应的物质。 6完全抗原：是指同时具有免疫原性和免疫反应性的物质，即通常所说的抗原。例如：各种微生物，异种动物血清，细菌的外毒素等。 7半抗原：又称为不完全抗原。是指只有免疫反应性而无免疫原性的小分子物质，如青霉素，磺胺等。当与载体等大分子物质结合后又具有免疫原性。 8抗原决定基：是抗原分子中决定免疫应答特异性的特殊化学基团，是抗原与TCR,BCR或抗体特异结合的最小结构单位。 9抗原的结合价：一个抗原分子中，能和抗体分子结合的抗原表位总数，称为抗原的结合价。一个半抗原相当于一个抗原表位；天然蛋白大分子通常为多价抗原，含有多种，多价抗原表位，可诱导机体产生含有多种特异性抗体的多克隆抗体。10胸腺依赖性抗原：TD-Ag，是指刺激B细胞产生抗体是需要Th细胞的辅助的抗原。如，多数蛋白质抗原。 11胸腺非依赖性抗原:TI-Ag，是指刺激B细胞产生抗体时不需要Th辅助的抗原。可分为 TI-1抗原和TI-2抗原，如细菌脂多糖，聚合鞭毛素。 12共同抗原表位：在不同的抗原之间可以存在有相同或相似的抗原表位，称为共同抗原表位。共同抗原表位可引起交叉反应含有共同抗原表位的不同抗原称为交叉抗原。 13异嗜性抗原：指一类与种族无关的存在于人，动物，植物之间的共同抗原，又名Forssman抗原。 14同种异型抗原：是存在于同一种属不同个体之间的抗原。常见的人类同种异型抗原有血型抗原和组织相容性抗原。 15外源性抗原：并非由APC合成，来源于细胞外的抗原。 16内源性抗原：指在APC内新合成的抗原，如病毒感染细胞合成的病毒蛋白等。17抗体：是免疫系统在抗原的刺激下，由B细胞或记忆B增殖分化为浆细胞所产生的，可与相应抗原发生特异性结合的免疫球蛋白，称为抗体。 18免疫球蛋白：具有抗体活性或化学结构与抗体相似的球蛋白统称为免疫球蛋白。 19互补决定区:Ig的VL与VH均有3个HVR，它们共同组成Ab的抗原结合部位，该部位因在空间结构上可与抗原决定簇形成精密的互补，故高变区又称互补决定区。 20调理作用：是指抗体，补体（C3b,C4b等调理素）促进吞噬细胞吞噬细菌等颗粒性抗原的作用。 21抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用（ADCC)：是一种细胞毒反应，指表达FcR 的具有杀伤活性细胞（如NK,单核巨噬）通过识别Ab的Fc段直接杀伤被抗体包

蛋白质免疫印迹技术的实验研究

万方数据

万方数据

万方数据

蛋白质免疫印迹技术的实验研究 作者：张燕婉， 叶珏， 时那， 孟宪敏， 王来元， ZHANG Yan-wan， YE Jue， SHI Na， MENG Xian-min， WANG Lai-yuan 作者单位：中国医学科学院,阜外心血管病医院中心实验室,北京,100037 刊名： 实验技术与管理 英文刊名：EXPERIMENTAL TECHNOLOGY AND MANAGEMENT 年，卷(期)：2008,25(10) 被引用次数：21次 参考文献(9条) 1.郭尧君蛋白质电泳实验技术 2006 2.Nieman T Detection based on solution-phase chemiluminescence systems 1989 3.李晓军,秦浚川,武建国蛋白印迹技术研究进展[期刊论文]-临床检验杂志 2004(3) 4.Towbin H;Staehelin T;Gordon Electrophoretic franker of proreins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets.Procedure and some appHcations 1979(76) 5.Hauri H P;Bucher K Immunoblotting with monodonal antibodities:Importance of the blocking solution 1986(159) 6.高红,王贵新,王维林,张可仞用蛋白印迹技术初步评价肝母细胞瘤血管内皮生长因子表达的意义[期刊论文]-中华小儿外科杂志 2006(2) 7.Towbin H;Gordon J Immunoblotting and dot immunobinding:current status and outlook 1984(72) 8.Tovey ER;Baldo BA Characterisation of allergens by protein blotting 1987(08) 9.沈关心;龚非力抗体技术实验指南 2006 本文读者也读过(1条) 1.段勇.黄韬.袁育林.刘华.李娅.金克炜.DUAN Yong.HUANG Tao.YUAN Yulin.LIU Hua.LI Ya.JIN Kewei蛋白质免疫印迹技术检测肺癌组织上皮钙粘蛋白的表达[期刊论文]-检验医学2009,24(1) 引证文献(7条) 1.秦双立,徐玥蛋白质印迹法在氟中毒研究中的应用[期刊论文]-山东化工 2015(13) 2.马瑛,马明,沈辉,骆新荣,高庆华不孕奶牛宫颈黏液相关ASA免疫印迹分析[期刊论文]-中国奶牛 2013(06) 3.程娜娜,韩榕He-Ne激光和增强UV-B辐射对拟南芥叶片微管蛋白的影响[期刊论文]-激光生物学报 2013(04) 4.刘娇,华碧春,黄智锋蛋白表达检测技术在中药肝损伤机制研究中的应用进展[期刊论文]-浙江中医药大学学报2013(04) 5.韩继美胶体金免疫层析法对AFP、CEA和FN的快速检测[学位论文]硕士 2009 6.黄斌芳c-Jun基因启动子区的遗传变异与肺癌易感性的研究[学位论文]硕士 2012 7.程娜娜He-Ne激光和增强UV-B辐射对拟南芥叶片微管结合蛋白MAP65-1的影响[学位论文]硕士 2014 引用本文格式：张燕婉.叶珏.时那.孟宪敏.王来元.ZHANG Yan-wan.YE Jue.SHI Na.MENG Xian-min.WANG Lai-yuan 蛋白质免疫印迹技术的实验研究[期刊论文]-实验技术与管理 2008(10)

酪蛋白的提取

一、实验目的 1、掌握一种提取蛋白的方法。 2、掌握一种检测牛乳质量的方法。 二、实验原理 酪蛋白是乳蛋白质中最丰富的一类蛋白质，约占乳蛋白的80~82%，酪蛋白不是单一的蛋白质，是一类含磷的复合蛋白质混合物，以一磷酸酯键与苏氨酸及丝氨酸的羟基相结合。它还含有胱氨酸和蛋氨酸这两种含硫氨基酸，但不含半胱氨酸。它在牛乳中的含量约为35g/L，比较稳定，利用这一性质，可以检测牛乳中是否掺假。 酪蛋白在其等电点时由于静电荷为零，同种电荷间的排斥作用消失，溶解度很低，利用这一性质，经牛乳调到pH4.6，酪蛋白就从牛乳中分离出来。酪蛋白不溶于乙醇，这个性质被利用来从酪蛋白粗制剂中将脂类杂质除去。 三、仪器和试剂 仪器：温度计、布氏漏斗、pH 试纸、抽滤瓶、电炉、烧杯、量筒、表面皿、天平等。 试剂： 1. 95%乙醇、乙醚 2. pH4.6乙酸钠缓冲液0.2mol/L 3. 乙醇、乙醚混合液：乙醇∶乙醚=1∶1（体积比） 4. 市售牛乳 四、实验步骤 1.酪蛋白等电点沉淀 将100ml牛乳放到500ml烧杯中，加热至40℃左右的乙酸钠缓冲液，直到pH达4.6左右，用pH试纸或酸度计调试。将上述悬浮液冷却至室温，然后放置5min，用细布过滤，收集沉淀。 2.除脂类杂质 将上述沉淀用少量水洗数次，然后悬浮于30ml95%的乙醇中。将此悬浮液倾于布氏漏斗中，抽滤除去乙醇溶液，再倒入乙醇—乙醚混合液洗涤沉淀两次，最后再用一米洗涤沉淀两次，抽干。将沉淀从布氏漏斗中移去，在表面皿上摊开以除去乙醚，干燥后得到的是酪蛋白纯品。准确称重后，计算出每100ml牛乳所制备出的酪蛋白数量（g%），并与理论产量（3.5g%）相比较，求出实际获得百分率。 一、实验目的 酶是植物体内具有催化作用的蛋白质，植物体内的生化反应，一般都是在酶的作用下进行的，没有酶的催化反应，植物的生命也就停止了，因此对酶的研究是阐明生命现象本质中十分重要的部分。为要研究酶首先要将酶从组织中提取出来，加以分离、纯化，不同的研究目的对酶制剂的纯度要求也不相同，有些工作只需要粗的酶制剂即可，而有些工作则要求较纯的酶制剂，需根据不同情况区别对待。在酶的提取和纯化过程中，自始至终都需要测定酶的活性，通过酶活性的测定以监测酶的去向。 二、实验原理 （一）酶的提取 1.酶的存在位置? 存在于动植物以及微生物的细胞的各个部位。 2.如何将酶从细胞中分离? 从高等植物中提取酶常遇到一些实际问题，首先是细胞中含有许多种酶，每种酶的浓度又很低，只占细胞总蛋白质中的极小部分（叶中的双磷酸核酮糖羧化酶除外），而许多植物组织中蛋白质的含量又很低。此外，各种酶的存在状态不同，有在细胞外的外酶，在细胞内的内酶，内酶中又有与细胞器一定结构相结合的结合酶，也有的存在于细胞质中，提取时都应区别对待，作不

免疫印迹实验报告——wester blot

Western blot实验报告 摘要：目的：学习并掌握western blot分离蛋白及观察方法 方法：western blot 结果：见后文 结论：western blot能很好地分离蛋白 关键词：western blot、分离、小鼠组织、蛋白 Western blot test report Abstract: objective: Learn and master the western blot protein isolated and observation method Methods: western blot：,sds-page and electric transfer Results: see below Key words: Western blot、separate、mouse tissues、protein 前言:免疫印迹又称Western印迹(Western blotting)，与DNA的Southern印迹技术相对应，两种技术均把电泳分离的组分从凝胶转移至一种固相载体(通常为NC膜)，然后用探针检测特异性组分。不同的是，Western blotting所检测的是抗原类蛋白质成分，所用的探针是抗体，它与附着于固相载体的靶蛋白所呈现的抗原表位发生特异性反应。该技术结合了凝胶电泳分辨力高和固相免疫测定特异敏感等诸多优点，具有从复杂混合物中对特定抗原进行鉴别和定量检测，以及从多克隆抗体中检测出单克隆抗体的优越性。该技术的灵敏度能达到标准的固相放射免疫分析的水平而无需对靶蛋白进行放射性标记。目前，Western blotting广泛用于蛋白质研究、基础研究和临床医学的研究。 免疫印迹可分成两个步骤：蛋白质由凝胶转移至固相基质；特异性抗体检测。 蛋白质转移通常由电泳实现，现常用的方法有二：1 半干法：将凝胶和固相基质似三明治样夹在缓冲液湿润的滤纸中间，通电10-30分钟可完成转移；2 湿法：将凝胶和固相基质夹在滤纸中间，浸在转移装置的缓冲液中，通电45分钟或过夜课完成转移。本试验采用湿法转移。免疫印迹用膜通常有硝酸纤维素膜和尼龙膜两种。大多数应用前者。本实验也用硝酸纤维素膜进行转移。 1 试剂与仪器 1.1 试剂（所有试剂均供两组用） 1.1.1 8%电泳分离胶的配制 H2O 6.9ml

PEG法检测循环免疫复合物 临床免疫学实验

PEG法检测循环免疫复合物 【实验目的】 掌握PEG法检测循环免疫复合物的实验步骤，影响因素，结果判断，结果计算方法。【实验原理】 低浓度（3~5%)的聚乙二醇（PEG) 能选择性沉淀免疫复合物。在受检血清中加入PEG，使最终浓度为3.5%，可将血清中免疫复合物沉淀下来，需用分光光度计测定吸光度值(A)表示其相对量。 【实验材料】 1.0.1mol/L硼酸缓冲液：称取硼砂0.4g，硼酸0.51g溶于100ml蒸馏水中，调PH至8.6。 2.4.166%PEG溶液：用硼酸缓冲液配制。PEG的分子量为6000。 3.受检血清，试管，吸管，721分光光度计。 【实验步骤】 1.吸待检血清0.2ml，用硼酸缓冲液0.4ml稀释（血清稀释3倍）。 2.分对照管和测定管： 对照管：硼酸缓冲液2ml+稀释血清0.22ml； 测定管：4.166％PEG 2ml+稀释血清0.22ml（此时PEG最终浓度为3.75％） 3.混匀后两管均放4℃冰箱1h后取出，室温放置10min。 4.用721 0.5×1cm比色杯，检测测定管A450nm值，（对照管调零）。 【实验结果】 待测血清浊度值＝（测定管A－对照管A)×10000=540 【实验讨论】 1.注意在本试验中要求的PEG终浓度为3.75％。 2.受检查血清为何要一定保持新鲜，放冰箱保存不得超过一周（因为即使没有污染，也因血清中聚合IgG的形成而出现假阳性） 3优缺点： ①该试验不但可检测IC，还可获得IC（收集沉淀），简单，快速； ②特异性差，易受血清中大分子物质干扰； ③常作为IC检测的粗筛试验 4.检测IC的理想方法： ①操作简便，敏感； ②可检测各种类型IC； ③能分析IC的大小和组成成分； ④能精确定量，无假阳性

酪蛋白

牛奶中酪蛋白和乳糖的分离及鉴定 班级：2011级化学班学号：2011111102 姓名：陈雄志【摘要】牛奶是我们日常生活中常见的具有较高营养价值的乳制品，尤其是在婴儿及青少年时期，每天一定量的牛奶能促进身体健康成长，其主要营养成分为酪蛋白和乳糖，本实验将从新鲜牛奶中分离出酪蛋白和乳糖，并分别对其进行鉴定。 【关键词】牛奶酪蛋白乳糖分离鉴定 一、实验目的 1.熟悉查阅文献，从而提取新的设计方案 2.了解分离纯化生物大分子物质的一些方法和手段 3。掌握鉴定酪蛋白和乳糖的实验方法 二、实验原理 1.酪蛋白是牛奶中的主要蛋白质，是含磷蛋白质的复杂混合物。蛋白质是两性化合物，当调节牛奶的pH达到酪蛋白的等电点(pH=4．8)时，蛋白质所带正、负电荷相等，呈电中性，此时酪蛋白的溶解度最小，会从牛奶中沉淀出来，以此分离酪蛋白。因酪蛋白不溶于乙醇和乙醚，可用此两种溶剂除去酪蛋白中的脂肪。而乳糖不溶于乙醇，当乙醇混入乳糖水溶液中，乳糖会结晶出来，从而达到分离的目的。 2.酪蛋白的鉴定：在小试管中加入10滴酪蛋白溶液，然后加4滴茚三酮试剂，加热至沸，即有蓝紫色出现，则为酪蛋白。乳糖的鉴定：乳糖是还原性糖，绝大部分以α-乳糖和β-乳糖两种同分异构体型态存在，α-乳糖的比旋光度为+86o，而β-乳糖的比旋光度为+35o,水溶液中两种乳糖可互相转变，因此其水溶液有变旋光现象。 三、仪器与试剂 仪器：恒温水浴槽、100mL量筒、真空泵、布氏漏斗、250mL烧杯、玻璃棒、胶头滴管、精密pH计、旋光仪、电子天平。 试剂：牛奶、10%醋酸溶液、无水乙醇、乙醚、碳酸钙粉末、氢氧化钠溶液、氨水、茚三酮试剂。 四、实验步骤 1.酪蛋白的分离：取100mL新鲜牛奶，在恒温水浴中加热至40℃，恒温5分钟左右，边搅拌边慢慢加入10％醋酸溶液，使牛奶pH=4．8，放置冷却、澄清后，用尼龙布过滤酪蛋

抗原抗体复合物

抗原抗体复合物(免疫复合物) 免疫复合物即是抗原-抗体复合物。机体内免疫复合物的形成，即是机体防御机制的一部分，也是免疫复合物形成的基础 免疫复合物在体内存在有两种方式，一是存在于血液中的循环免疫复合物（CIC），一是组织中固定的免疫复合物。免疫复合物的检测技术可分为抗原特异性方法和非抗原特异性方法。在大多数情况下，免疫复合物中的抗原性质不太清楚或非常复杂，所以抗原特异性方法并不常用。判定免疫复合物为发病机制的证据有三：①病变局部有IC沉积；②CIC水平显著升高；③明确IC中的抗原性质。第三条证据有时很难查到，但至少要具备前两条，单独CIC的测定不足为凭。人体在健康状态下也存在少量的CIC（大约10～20μg/ml），其生理与病理的界限不易区分。另外，CIC检测的方法太多，其原理各不相同，用一种方法测定为阳性，另一种方法检测可能为阴性；但与免疫组化法一起检测，其意义就大得多。目前已经明确系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、部分肾小球肾炎和血管炎等疾病为免疫复合物病，CIC检测对这些疾病仍是一种辅助诊断指标，对判断疾病活动和治疗效果也有一定意义。在发现紫癜、关节痛、蛋白尿、血管炎和浆膜炎等情况时，可考虑免疫复合物病的可能性，进行CIC和组织沉积IC的检测。另外，患有恶性肿瘤时CIC检出率也增高，但不出现Ⅲ型变态反应的损伤症状，称之为临床隐匿的IC病，然而这种状态常与肿瘤的病情和预后相关。 检测IC的理想方法，应具备以下几个特点： 1、高度敏感性； 2、相对特异性，但又能检测出各种类型和大小的CIC； 3、重复性好； 4、操作简便，可作常规应用； 5、试验前不需要对标本进行加热灭活或特殊的吸收处理。 1978年WHO曾组织进行IC检测方法学研究，发现尚无任何一种技术具备上述所有特点。由于方法的复杂性、敏感性和所检测IC类型的局限性，目前的常用

牛奶中酪蛋白含量的测定

牛奶中酪蛋白的提取及含量测定 一、实验原理 1、牛乳的主要成分：碳水化合物（5%）、脂类（4%）、蛋白质（3.5%）、维生素、微量元素（Ca、P等矿物质）、水（87%） 牛奶中的糖主要是乳糖。乳糖是一种二糖，它由D?半乳糖分子和D?葡萄糖分子通过P -1,4-糖昔键连接而成。乳糖溶于水，不溶于乙醇，当乙醇混入乳糖水溶液中时，乳糖会结晶出来，从而达到分离的目的。 牛奶中的蛋白质主要是酪蛋白和乳清蛋白两种，其中酪蛋白占了牛乳蛋白质的80%。酪蛋白是白色、无味的物质，不溶于水、乙醇等有机溶剂，但溶于碱溶液。而乳清蛋白水合能力强，分散性强，在牛乳中呈高分子状态。 2、等电点沉淀法： 在等电点时，蛋白质分子以两性离子形式存在，其分子净电荷为零（即正负电荷相等），此时蛋白质分子颗粒在溶液中因没有相同电荷的相互排斥，分子相互之间的作用力减弱，其颗粒极易碰撞、凝聚而产生沉淀，所以蛋白质在等电点时，其溶解度最小，最易形成沉淀物。酪蛋白的等电点为4.7左右（不同结构的酪蛋白等电点有所不同），本实验中将牛乳的pH调值4.7时，酪蛋白就沉淀出來。 市售牛奶通常会添加耐酸碱稳定剂來增加粘稠度，以致即使pH调至等电点酪蛋白也沉淀的很少，故实验时可将pH稍微调过多一点再调回等电点。同时，市售牛奶由于生产过程通常导致酪蛋白组分发生变化，因而使pl偏离了 4.7,通常偏酸。3、酪蛋白的提纯 根据乳糖、乳清蛋白等和酪蛋白的溶解性质差异，可以用纯水洗涤来除去乳糖、乳清蛋白等溶于水的杂质，再用乙醇除去脂类，然后过渡到用乙瞇洗涤，由于乙瞇很快挥发，最终得到纯粹的酪蛋白结晶。 4、蛋白质含量的测定（考马斯亮蓝结合法） 考马斯亮蓝能与蛋白质的疏水微区结合，这种结合具有高敏感性。考马斯亮蓝G520的磷酸溶液呈棕红色，最大吸收峰在465nm o当它与蛋白质结合形成复合物时呈蓝色，其最大吸收峰变为595nm o在一定范围内，考马斯亮蓝G520- 蛋白质复合物呈色后，在595nm下，吸光度与蛋白质含量呈线性关系，故可以测定蛋白质浓度。 二、实验器材与试剂 1、器材：恒温水浴锅、离心机、抽滤装置、蒸发皿、精密pH试纸、旋涡混合器、紫外分光光度计、试管四、5mL吸管、50mL容量瓶、100mL ft筒、电子分析天平 2、试剂：鲜牛奶、pH4.7醋酸■醋酸钠缓冲溶液、乙醇■乙艇混合液（95%乙醇、无水乙瞇体积比1： 1）、0.9%NaCl溶液、标准蛋白液（0.1mg/mL牛血清蛋白）、考马斯亮蓝G520染液 三、实验操作记录 1、酪蛋白的制备 将20mL牛奶盛于100mL的烧杯中加热到40*C,在搅拌下慢慢加入预热至40?C、pH4.7的醋酸缓冲溶液20mLo用冰醋酸调节溶液pH至4.7,此时即有大量的酪蛋白沉淀析出。将上述悬浮液冷却至室温，离心Smin (4000r/min),弃去上清液，沉淀即为酪蛋白粗品。

【报告】酪蛋白粗提取实验报告

【关键字】报告 酪蛋白粗提取实验报告 篇一：实验一蛋白质含量测定方法的研究 生物化学实验预习报告 实验一蛋白质含量测定方法的研究 一、研究背景 蛋白质含量的测定广泛应用于生产实践、医药卫生等各个领域，如测定牛奶等食品中蛋白质的含量作为其营养成分的参考值，测定病人尿液中蛋白质的含量以检测其是否患有某种疾病等，因而测定蛋白质的含量具有非常重要的意义。由于蛋白质本身具有一系列的特点（如具有等电点、富含有机氮、含有肽键、存在某些含共轭双键的氨基酸残基、可与某些染料结合等），利用它的这些特点可以通过特定的化学反应或者某些物理手段，将一定量的蛋白质转化为可以方便定量测定的其他量，从而达到测定蛋白质含量的目的。蛋白质诸多特点的存在决定了它会有不同的测定方法，同时由于多种非蛋白组分的存在和干扰以及各种方法本身的局限性（适用条件），每一种测定方法都有各自的优缺点，某一种方法并不能在任何条件下适用于任何形式的蛋白质，所以多种测定方法的共存是有意义的。目前常用的蛋白质含量测定方法有四种：凯氏定氮法、Folin-酚法、考马斯亮蓝（G-250）法、紫外法，其中后三种方法最常用。在实际工作中，需要根据所测定对象的具体情况综合考虑各种因素(如实验器材的限制、实验所要求的灵敏度和精确度、所测定蛋白质的种类与性质、溶液中存在的干扰物质、测定所花费的时间等)，有选择性地使用某种方法。 二、研究目标 1.掌握常用的蛋白质含量测定方法的原理和操作流程；（基础目标） 2.了解不同测定方法的优点和局限性，掌握在实际工作中不同测定方法的选择条件；（基础目标） 3.证明非蛋白组分在蛋白质含量测定中存在干扰，并通过分析实验结果确定该干扰在实际工作中是否可以忽略。（高级目标） 三、研究策略 本实验最重要的目的是为了确定非蛋白组分在蛋白质含量测定中存在的干扰是否可以忽略。思路有两种：一种方法是先测定纯蛋白质溶液中蛋白质含量，随后在该溶液中加入非蛋白组分（如嘌呤、嘧啶等吸光物质，Ca2+等金属离子，无机酸或无机碱，甚至某些色素等），测定此时蛋白质含量，对比两次测定结果，计算相对误差，从而得出非蛋白组分的影响程度；另一种方法是直接使用天然的蛋白质粗提取物（含有非蛋白组分，并将其中包含的所有非蛋白组分看成一个影响因素），来测定粗提取物中的蛋白质含量。考虑到第一种方法中涉及到的非蛋白组分的加入量没有标准，这些非蛋白材料（影响因素）实验室内也不一定有，更重要的是该实验所具有的实际意义不大，故决定采用第二种方案。但是方案二所存在的一个问题是所测组分蛋白质含量的真实值未知，测得的结果没有可以参考比较的依据，所以需要另外找一个可以参考的标准。 所采取的策略是先用不同的方法测定已 知标准蛋白质溶液的浓度，三个测定值之间会有一定的相关性（或者说测定值之间的变化符

酪蛋白的初步鉴定

酪蛋白 内容提要：蛋白质是由氨基酸构成的高分子化合物。蛋白质同氨基酸一样是两性电解质，调节蛋白质溶液的pH值可使蛋白质分子所带的正负电荷数目相等，即溶液中的蛋白质以兼性离子形式存在，在外加电场中既不向阴极也不向阳极移动。这时溶液的pH值称为该蛋白质的等电点。在等电点条件下，蛋白质溶解度最小，因此就会有沉淀析出。牛乳中主要含有酪蛋白和乳清蛋白两种蛋白质，其中酪蛋白占了牛乳蛋白质的80%。酪蛋白是白色、无味的物质。不溶于水、乙醇及有机溶剂，但溶于碱溶液。牛乳在pH 4.7时酪蛋白等电聚沉后剩余的蛋白质统称乳清蛋白。乳清蛋白不同于酪蛋白，其粒子的水合能力强、分散性高，在乳中呈高分子状态。提取到酪蛋白后，可以用双缩脲反应、茚三酮反应、黄色反应来鉴定分析。 关键词：酪蛋白制备定性分析鉴定 1、实验目的 （1）学习从牛乳中制备酪蛋白的原理和方法。 （2）对酪蛋白进行分析鉴定。 2、实验原理 牛乳中主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为35g/L。酪蛋白食一些含磷蛋白质的混合物，等电点为4.7。利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的pH调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后便可得到纯的酪蛋白。 双缩脲：尿素加热至180℃左右，生成双缩脲并放出一分子氨。双缩脲在碱性环境中能与铜离子结合生成紫红色化合物，此反应称为双缩脲反应。蛋白质分子中有肽键，其结构与双缩脲相似，也能发生此反应。可用于蛋白质的定性或定量测定。 茚三酮反应：一切蛋白质都能和茚三酮反应生成蓝紫色物质，但能与茚三酮呈阳性反应的不一定就是蛋白质或氨基酸。在定性、定量测定中，应严防干扰物存在。反应分为两步，第一步是氨基酸被氧化形成二氧化碳、氨分子和醛，水合茚三酮被还原成还原型茚三酮；第二步是所形成的还原型茚三酮同另一个水合茚三酮分子和氨缩合生成有色物质。反应的适宜ｐＨ为５－７，同一浓度的蛋白质或氨基酸在不同ｐＨ条件下的颜色深浅不同，酸度过大时甚至不显色。 3、实验试剂、材料与器材 3、1试剂与材料

循环免疫复合物

免疫复合物：抗原与其相应抗体结合形成 局部免疫复合物：沉积于机体某一局部的免疫复合物 可溶性免疫复合物：游离在体液中的免疫复合物 循环免疫复合物：血液中的免疫复合物 一、循环免疫复合物 抗原和相应抗体结合形成的物质称为免疫复合物，免疫复合物和补体、其他免疫活性物质结合，沉积在血管壁，可导致组织损伤及血管炎，引起一系列的疾病，如红斑狼疮，由于免疫复合物能在循环血液中检测到，故称之为循环免疫复合物。 循环免疫复合物的测定虽无特异性诊断意义，但对病情的活动性判断和指导治疗有一定价值，测定循环免疫复合物的方法很多，这里仅介绍临床常用的两种。 1、聚乙二醇法 循环免疫复合物与聚乙二醇作用，以浊度变化表现出来，可根据浊度的大小来反映免疫复合物的多少。如浊度大，则说明血液中循环免疫复合物增多，病情活动，但是对诊断没有特异性价值。 2、冷球蛋白测定 亦可称冷免疫球蛋白，是在低温自然沉淀，加热后又能溶解的蛋白复合物。当血液中出现冷球蛋白时，称冷球蛋白血症，在红斑狼疮病人中较多见。有时见两小腿部皮下紫癜，而血小板检查正常，这是由于冷球蛋白在皮下沉淀的结果，该方法对判断病情变化和指导治疗有参考价值。 二、相关问题 1、问：“红细胞免疫黏附，清除体内CIC”中的“CIC”是什么意思？ 答：循环免疫复合物（Circulationimmunecomplex，CIC）又称可溶性免疫复合物，分子量为50万～100万，沉降系数8.8～19S，它不易被吞噬细胞吞噬，又不能经肾小球排出，可较长时间在血液中循环，一旦大量循环免疫复合物沉积于组织中，则引起组织损伤及相关的免疫复合物病。 CIC阳性常见于： （1）部分自身免疫性疾病，如SLE，类风湿关节炎等； （2）膜增殖性肾炎，链球菌感染后肾炎； （3）传染病，如慢性乙型肝炎，疟疾，麻风等； （4）恶性肿瘤。 2、问：我想检测血中的CIC，如果溶血了，测的结果还准吗？ 答：我觉得CIC是用免疫的方法测定的，所以我觉得抗原抗体的反应，受溶血的影响比较小。3、问：笔者在日常工作中,遇到循环免疫复合物（CIC）检测,检测结果显示CIC浓度较高，想进一步了解是什么性质的CIC，想采用分离剂将其分离，即抗原抗体分离后再检测其抗原或抗体，以进一步确定是什么病原体引起的CIC增高？问题是采用什么分离剂来分离CIC效果比较好？ 答：用低pH可以试试，但是只能在低PH的缓冲体系里是分开的，而且时间不能太长，不然抗体容易失活。如果Ag和Ab的分子量差不少，那可以用分子筛把他们给分开。 循环免疫复合物的沉积

酪蛋白的制备

实验5 酪蛋白的制备 一、目的 1、学习从牛奶中制备酪蛋白的原理和方法。 2、掌握等电点沉淀法提取蛋白质的方法。 二、原理 牛乳中的主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为35g/L。酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电点为4.7。利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的pH调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后便可得到纯酪蛋白。 三、材料、试剂与器具 （一）材料 新鲜牛奶 （一）试剂 1、95%乙醇 1 200mL 2、无水乙醚 1 200mL 3、0.2mol/L pH4.7醋酸——醋酸钠缓冲液300ml 先配A液与B液 A液：0.2mol/L醋酸钠溶液称NaAC·3H2O 54.44g，定容至2000ml。 B液：0.2mol/L醋酸溶液，称优纯醋酸（含量大于99.8%）12.0g定容至1000ml。 取A液1770ml，B液1230ml混合即得Ph4.7的醋酸——醋酸钠缓冲液3000ml。 4、乙醇——乙醚混合液 乙醇：乙醚=1 ：1（V/V） （二）器具 1、离心机 2、抽滤装置 3、精密pH试纸或酸度计 4、电炉 5、烧杯 6、温度计 四、操作步骤 （一）酪蛋白的粗提 100mL牛奶加热至40℃。在搅拌下慢慢加入预热至40℃、pH4.7的醋酸缓冲液100mL.用精密pH试纸或酸度计调pH至4.7。 将上述悬浮液冷却至室温。离心15分钟（3000 r /min）。弃去清液，得酪蛋白粗制品。（二）酪蛋白的纯化 1、用水洗涤沉淀3次，离心10分钟（3 000r/min），弃去上清液。 2、在沉淀中加入30mL乙醇，搅拌片刻，将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。用乙醇—乙醚混合液洗沉淀2次。最后用乙醚洗沉淀2次，抽干。 3、将沉淀摊开在表面上，风干；得酪蛋白纯品。 （三）准确称重，计算含量和得率。 含量：酪蛋白g/100 mL牛乳（g%）

医学免疫学重点

1、免疫系统的组成 免疫器官和组织 免疫细胞（如淋巴细胞、树突状细胞、NK细胞、单核巨噬细胞、粒细胞、肥大细胞等） 免疫分子（如免疫球蛋白、补体、各种膜分子及细胞因子等） 2、淋巴细胞归巢和再循环 淋巴细胞归巢：指血液中淋巴细胞选择性趋向迁移并定居于外周免疫器官的特定区域或特定组织的过程。 淋巴细胞再循环：指定居在外周免疫器官的淋巴细胞，由输出淋巴管经淋巴干、胸导管或右淋巴导管进入血液循环；经血液循环到达外周免疫器官后，穿越HEV，重新分布于全身淋巴器官和组织的反复循环过程。 3、抗原的基本特征 抗原具备两种特性：一是免疫原性，即抗原被T、B细胞表面特异性抗原受体识别及结合，诱导机体产生适应性免疫应答的能力。二是免疫反应性，即抗原与其所诱导产生的免疫应答效应物质特异性结合的能力。同时具有这两种特性的物质称为完全抗原或免疫原，各种微生物和大多数蛋白质属之。有些小分子物质虽能与相应的抗体结合而具有免疫反应性，但不能诱导免疫应答，即无免疫原性，称为半抗原。 4、TD-Ag和TI-Ag的特点 TD-Ag TI-Ag 结构特点复杂，含多种表位含单一表位 表位组成B细胞和T细胞表位重复B细胞 T细胞辅助必需无需 MHC限制性有无 激活的B细胞B2 B1 免疫应答类型体液免疫和细胞免疫体液免疫 抗体类型IgM、IgG、IgA等IgM 免疫记忆有无 5、影响抗原免疫原性的主要因素 （1）抗原分子的理化与结构性质：包括抗原物质本身的异物性、化学属性、分子量、分子结构、分子构象、易接近性、物理性状等；

（2）宿主的特性：包括遗传因素，年龄、性状与健康状态； （3）抗原进入机体的方式：抗原进入机体的量、途径、次数、频率及免疫佐剂的应用和佐剂类型等。 6、抗体的结构及其功能 （1）结构：抗体的基本结构是由两条完全相同的重链和两条完全相同的轻链通过二硫键连接的呈“Y”形的单体。在重链近N端的1/4或轻链近N端的1/2区域内氨基酸多变，称为可变区，其余部分称为恒定区。在CH1和CH2之间还有铰链区，有利于“Y”形的两臂同时结合两个相同的抗原表位。除此之外，某些类别的抗体还含有其他辅助成分，如J链和分泌片。 （2）功能：○1识别并特异性结合抗原：在体内表现为抗菌、抗病毒、中和毒素等免疫效应，在体外可出现抗原抗体结合反应；○2激活补体：IgG（IgG1~ IgG3）、IgM与抗原结合后可通过经典途径激活补体，聚合的IgA、IgE和IgG4可通过旁路途径激活补体；○3结合Fc受体：IgG、IgE可通过其Fc 段与表面具有Fc受体的细胞结合，发挥调理吞噬、粘附、介导ADCC及超敏反应等；○4穿过胎盘：IgG 可穿过胎盘进入胎儿体内，对于新生儿抗感染具有重要意义；○5免疫调节：抗独特型抗体可参与独特型-抗独特型免疫网络的调节。 7、各类抗体分子结构和功能的异同点 IgM IgD IgG IgA IgE 重链μδγαε 亚类数无无 4 2 无 辅助成分J 无无J，SP 无 主要存在形式五聚体单体单体单体/二聚体单体 抗原结合价 5 2 2 2,4 2 溶细菌作用+ ？+ + ？ 胎盘转运- - + - - 结合吞噬细胞- - + + - 结合肥大细胞、嗜碱性粒细胞- - - - + 结合SPA - - + - - 介导ADCC - - + + - 经典途径补体激活+ - + - - 旁路途径补体激活- ？+（IgG4）+（IgA1）- 其他作用初次应答 早期防御 B细胞标志 再次应答 抗感染 黏膜免疫 Ⅰ型超敏反 应，抗寄生虫

酪蛋白的提取与测定

牛乳中酪蛋白的制备与浓度测定 一、实验目的 1、学习从牛乳中分离酪蛋白的原理和方法 2、掌握等电点沉淀法提取蛋白质的方法 3、了解紫外吸收法测定蛋白质浓度的原理，熟悉紫外分光光度计的使用 4、学会用考马斯亮蓝结合法测定蛋白质浓度 二、实验原理 1、准备酪蛋白原理：牛乳中主要含有酪蛋白和乳清蛋白两种蛋白质，其中酪蛋白占了牛乳蛋白质的80%。牛乳在PH4.7时酪蛋白等电聚沉后剩余的蛋白质统称为乳清蛋白。酪蛋白是白色、无味的物质，不溶于水、乙醇等有机溶剂，但溶于碱溶液。乳清蛋白不同于酪蛋白，其粒子的水和能力很强，分散性高，在乳中呈高分子状态。本法利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的PH调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后便可得到纯的酪蛋白。 2、紫外吸收法测定蛋白质浓度的原理：大多数蛋白质由于有酷氨酸和色氨酸的存在，在紫外光280nm有吸收高峰，可以进行蛋白质含量的测定。但是核酸在280nm也有吸收，干扰测定，不过核酸的最大吸收峰在260nm，通过测定在280nm和260nm时A的比值，然后通过计算消除核酸存在的影响，可以求得有核酸存在时蛋白质的浓度。 3、考马斯亮蓝结合法测定蛋白质浓度原理：考马斯亮蓝能与蛋白质的疏水微区相结合，这种结合具有高敏感性。考马斯亮蓝G250的磷酸溶液呈棕红色，最大吸收峰在465nm。当它与蛋白质结合形成复合物时呈蓝色，其最大吸收峰改变为595nm，考马斯亮蓝G250—蛋白质复合物的高消光效应导致了蛋白质定量测定的高敏感度。 在一定范围内，考马斯亮蓝G250—蛋白质复合物呈色后，在595nm下，吸光度与蛋白质含量呈线性关系，故可以用于蛋白质浓度的测定。 三、实验器材与试剂 1、制备酪蛋白： 烧杯、玻璃棒、量筒、精密PH试纸、离心机、布氏漏斗、表面皿、恒温水浴锅 牛奶、醋酸缓冲液、冰醋酸、95%乙醇、无水乙醚 2、紫外光吸收法： 紫外可见光分光光度计、容量瓶50ml(×1)、石英比色皿 0.9%NaCl、1mol/LNaOH溶液、1mol/L乙酸溶液 3、考马斯亮蓝法： 紫外可见光分光光度计、试管1.5cm×15cm(×9)、玻璃比色皿 牛血清白蛋白（0.1mg/ml）、考马斯亮蓝、0.9%NaCl 四、实验步骤 制备酪蛋白

蛋白质免疫印迹(Western Blot )实验步骤和原理及注意事项

蛋白质免疫印迹（Western Blot ）实验步骤和原理及注意事项 1.收集蛋白样品(Protein sample preparation) 可以使用适当的裂解液。收集完蛋白样品后，为确保每个蛋白样品的上样量一致，需要测定每个蛋白样品的蛋白浓度。根据所使用的裂解液的不同，需要采用适当的蛋白浓度测定方法。因为不同的蛋白浓度测定方法对于一些去垢剂和还原剂等的兼容性差别很大。BCA法。 2. 电泳(Electrophoresis) (1) SDS-PAGE凝胶配制 (2) 样品处理 在收集的蛋白样品中加入适量浓缩的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液。例如2X或5X的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液。使用5X的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液可以减小上样体积，在相同体积的上样孔内可以上样更多的蛋白样品。 100℃或沸水浴加热3-5分钟，以充分变性蛋白（根据蛋白分子的大小，煮沸时间可适当变化，一般不低于5min。煮沸只是变性蛋白，而不是分解，一般加了抑制酶不会分解。煮沸对于SDS-PAGE凝胶电泳是必须的，只有煮沸,才能消除蛋白质的立体二级结构,伸展为一维线性结构,所以一般来讲二聚体都会解体,才能完全按照分子量跑电泳,加的蛋白Marker才有指示分子量的意义。蛋白样品变性后与SDS充分结合，SDS使每个氨基酸带相同的电荷,使整个蛋白呈线性结构. 抗体因为要是线性表位结合的，100度煮10min 后13000,离心5分钟,取上清电泳,因为沉淀会导致拖尾.也可以取上清到另一管,4度可以放一周备再次电泳）。 (3)电泳

i.清洗玻璃板：一只手扣紧玻璃板，另一只手蘸点洗衣粉轻轻擦洗。 两面都擦洗过后用自来水冲，再用蒸馏水冲洗干净后立在筐里晾 干。 ii.灌胶与上样 （1）玻璃板对齐后放入夹中卡紧。然后垂直卡在架子上准备灌胶。 （操作时要使两玻璃对齐，以免漏胶。） （2）配10%分离胶，加入TEMED后立即摇匀即可灌胶。灌胶时，可用10 ml枪吸取5 ml胶沿玻璃放出，待胶面升到绿带中间线高度时即可。然后胶上加一层水，液封后的胶凝的更快。（灌胶时开始可快一些，胶面快到所需高度时要放慢速度。操作时胶一定要沿玻璃板流下，这样胶中才不会有气泡。加水液封时要很慢，否则胶会被冲变型。） （3）当水和胶之间有一条折射线时，说明胶已凝了。再等3 min使胶充分凝固就可倒去胶上层水并用吸水纸将水吸干。 （4）配4%的浓缩胶,加入TEMED（TEMED,中文名为四甲基乙二胺，是一种无色透明的液体，有微腥臭味，可以用于配制SDS-PAGE胶。TEMED可以催化APS产生自由基，从而加速聚丙烯酰胺凝胶的聚合,可作为一种促凝剂使用）后立即摇匀即可灌胶。将剩余空间灌满浓缩胶然后将梳子插入浓缩胶中。灌胶时也要使胶沿玻璃板流下以免胶中有气泡产生。插梳子时要使梳子保持水平。由于胶凝固时体积会收缩减小，从而使加样孔的上样体积减小，所以在浓缩胶凝固的过程中要经常在两边补胶。待到浓缩胶凝固后，两手分别捏住梳子的两边竖直向上轻轻将其拔出。

医学免疫学各章节名词解释

医学免疫学各章节名词解释 1．免疫：是指机体识别“自己”与“非己”抗原，对自身抗原形成天然免疫耐受，对非己抗原发生排斥作用的一种生理功能。正常情况下，对机体有利；免疫功能失调时，会产生对机体有害的反应。 2．固有免疫应答：也称非特异性或获得性免疫应答，是生物体在长期种系发育和进化过程中逐渐形成的一系列防御机制。此免疫在个体出生时就具备，可对外来病原体迅速应答，产生非特异性抗感染免疫作用，同时在特异性免疫应答过程中也起作用。 3．适应性免疫应答：也称特异性免疫应答，是在非特异性免疫基础上建立的，该种免疫是个体在生命过程中接受抗原性异物刺激后，主动产生或接受免疫球蛋白分子后被动获得的。4．免疫防御：是机体排斥外来抗原性异物的一种免疫保护功能。该功能正常时，机体可抵御病原微生物及其毒性产物的感染和损害，即抗感染免疫；异常情况下，反应过高会引起超敏反应，反应过低或缺失可发生免疫缺陷。 5．免疫自稳：是机体免疫系统维持内环境稳定的一种生理功能。该功能正常时，机体可及时清除体内损伤、衰老、变性的细胞和免疫复合物等异物，而对自身成分保持免疫耐受；该功能失调时，可发生生理功能紊乱或自身免疫性疾病。 6．免疫监视：是机体免疫系统及时识别、清除体内突变、畸变细胞和病毒感染细胞的一种生理功能。该功能失调时，有可能导致肿瘤发生，或因病毒不能清除而出现持续感染。 1．抗原：是指能与TCR/BCR或抗体结合，具有启动免疫应答潜能的物质 2．半抗原：又称不完全抗原，是指仅具有与抗体结合的能力，而单独不能诱导抗体产生的物质。当半抗原与蛋白质载体结合后即可成为完全抗原。 3．抗原决定基：指抗原分子中决定抗原特异性的特殊化学基团。 4．表位：是与TCR、BCR或抗体特异性结合的基本单位，也称抗原决定基。 5．胸腺依赖性抗原（TD-Ag）：是一类必须依赖Th细胞辅助才能诱导机体产生抗体的抗原。该抗原由T表位和B表位组成，绝大多数蛋白质类抗原为TD-Ag，可刺激机体产生体液免疫应答和细胞免疫应答。 7．异种抗原：即来自不同物种之间的抗原性物质。该抗原在不同生物之间具有很强的免疫原性。 9．异嗜性抗原：是指一类与种属无关的，存在于人、动物、植物和微生物之间的共同抗原。该抗原与某些疾病的发生及诊断有关。 10．超抗原（SAg）：是指在极低浓度下即可非特异性激活大量T细胞克隆增殖，产生极强的免疫应答，但又不同于丝裂原作用的抗原物质。该抗原能刺激T细胞库总数的1/20 ~ 1/5，且不受MHC限制，故称为超抗原。 1．抗体(Antibody) ：是B 细胞特异性识别Ag后，增殖分化成为浆细胞，所合成分泌的一类能与相应抗原特异性结合的、具有免疫功能的球蛋白。 4. 免疫球蛋白Ig)：是指具有抗体活性或化学结构与抗体相似的球蛋白。可分为分泌型和膜型两类。 7．单克隆抗体：是由识别一个抗原决定簇的B淋巴细胞杂交瘤分裂而成的单一克隆细胞所产生的高度均一、高度专一性的抗体。 8．ADCC：即抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用。是指表达Fc受体细胞通过识别抗体的Fc段直接杀伤被抗体包被的靶细胞。NK细胞是介导ADCC的主要细胞。 9．调理作用：是指IgG抗体（特别是IgG1和IgG3）的Fc段与中性粒细胞、巨噬细胞上的IgG Fc受体结合，从而增强吞噬细胞的吞噬作用。

酪蛋白课程报告

生物技术学院 课程论文 课程名称：高级生物化学成绩： 教师签名：

酪蛋白研究进展综述 提纲：酪蛋白简介－酪蛋白亚基结构－酪蛋白酶特性－酪蛋白活性肽研究进展 摘要：酪蛋白是一种含磷钙的结合蛋白，常见于哺乳动物及其乳汁中，如母牛、羊 以及人奶。酪蛋白对酸敏感，pH较低时会沉淀，因此本科生实验室常用其进行蛋 白质的沉淀反应。哺乳动物的主要蛋白是α-酪蛋白，然而人类乳汁中没有α-酪蛋 白，人乳中的酪蛋白主要是β-酪蛋白形式。对于人类幼儿而言，酪蛋白是氨基酸 的来源，但同时，它也是钙和磷的主要来源，同时，因为胃的酸性环境，酪蛋白还 能在胃中形成凝乳以便消化。本文综合中外文献，对酪蛋白进行了研究进展综述。 关键词：酪蛋白；蛋白亚基；活性肽 酪蛋白简介 在20℃，pH值为4.6时，牛乳中能沉淀下来一种呈酸性的蛋白质，我们将其称为酪蛋白。酪蛋白又名干酪素、乳酪素、酪朊，在牛奶中含量非常丰富。它是一种含磷的蛋白质，具有极高的营养价值，其中含有多种生物活性肽，因此它具有抗菌、降血压、抗氧化和促进双歧杆菌增殖等功能。 酪蛋白在母体蛋白质序列内是无活性的，通过体内或体外酶水解的方式释放出来后，它们即可作为具有类似激素活性的调节物质。这些产物可用作肽类药物、肽类试剂，主要用于科学试验和生化检测;也可用于活性肽功能性食品中，具有增强机体防御功能、调节生理节律、预防疾病和促进康复等功能。 酪蛋白的亚基结构 酪蛋白的分子质量约为20－25ku，由4类遗传变种组成，分别为αs1-酪蛋白、αs2-酪蛋白、β-酪蛋白和K-酪蛋白。其中，αs2-酪蛋白是牛乳中的主要酪蛋白，占总含量的38%；β-酪蛋白含量仅次于αs-酪蛋白，占总含量的35%，