猪流行性腹泻病毒Vero细胞微载体培养条件的优化试验

猪流行性腹泻病毒Vero细胞微载体培养

条件的优化试验

王建超1,周 燕1,华 平1,邹 勇2,谭文松1,钱永清2

(1.华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室,上海 200237;

2.上海市农业科学院畜牧兽医研究所,上海 201106)

摘要:通过研究搅拌速度、pH值、血清浓度等环境条件对细胞贴壁的影响以及细胞接种密度、微载体浓度与细胞生长的关系,对应用微载体技术和生物反应器系统生产猪流行性腹泻病毒(PEDV)的可行性进行了探讨。结果表明,搅拌转速、pH值、血清浓度均对Vero(PEDV)细胞在CT 3微载体上的贴壁率和均匀分布有影响;当接种密度为15.0 104/mL时,即每1mg微载体接种5.0 104细胞时,可以获得较高的细胞密度;随着微载体浓度的提高,最高细胞密度也增加;在CelliGen反应器中,采用优化的培养条件,细胞密度可达到174.0 104/m L,是方瓶培养的3.5倍,每个细胞的PEDV含量与方瓶培养相当,制备的疫苗免疫原性好。

关键词:Vero细胞;猪流行性腹泻病毒;微载体;生物反应器

中图分类号:Q813.11 文献标识码:A 文章编号:1000 6419(2004)05 0050 05

猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea, PED)是由猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起的以腹泻、呕吐和脱水为主要特征的一种肠道传染病,该病给养猪业造成了巨大的经济损失。自从PEDV被成功地适应于Vero细胞以来[1~3],通过Vero细胞静止培养增殖PEDV制备细胞灭活疫苗已在生产中广泛应用,目前的生产工艺普遍采用克氏瓶或滚瓶培养,不仅劳动强度大,而且细胞培养过程中易染

收稿日期:2004 01 29

基金项目:上海市科技兴农重点攻关项目[农科攻字

(99)5 1和农科攻字(2001)3 8]

作者简介:王建超(1975),男,浙江省宁波市人,硕士

生。周燕为通讯作者。菌,疫苗质量不稳定。1967年Wezel[4]首先应用微载体系统培养贴壁依赖性细胞,此后这一技术得到迅速发展。生物反应器和微载体培养系统由于具有高比表面积、细胞产量高、培养环境便于检测和控制、生产规模易于放大等优点,已应用于狂犬病、脊髓灰质炎等疫苗的生产[5]。由于细胞培养环境和微载体培养系统的操作条件影响细胞生长代谢和生理状况,并影响病毒在细胞内增殖,笔者通过研究搅拌速度、pH值、血清浓度等环境条件对细胞贴壁的影响以及细胞接种密度、微载体浓度与细胞生长的关系,探讨了应用微载体技术和生物反应器系统生产PEDV病毒的可行性,为进一步大规模生产PEDV疫苗提供基础试验数据。

istant colonies w ere selected and plasmid DNA w as ex tracted from the ampicillin resistant colonies.It w as con firmed that the fragment of1423bp contains the full length of rabies virus N gene by restriction endonuclease i dentification,PCR and nucleotide sequence analysis.Homology analysis show ed that the N gene s nucleotide se quence of rabies virus Jiuquan strain shared92.3%,91.9%,93.0%and86.0%homology w ith those of the reference rabies virus strains such as CVS,Ear,HEP Flury and Japan strains published in Genbank,respective ly.The mentioned above results suggested that the RT PCR method can be used to detect rabies virus in labora tory sensitively and specificly.

Key words:rabies;molecular biolog y;diagnosis

1 材料与方法

1.1 细胞和培养基

Vero 细胞PEDV 适应株由上海市农业科学院畜牧兽医研究所提供;培养基为含100mL/L 新生牛血清(NBS,由本实验室自制)的DMEM (美国GIBCO 公司产品)。1.2 细胞培养

1.2.1 方瓶T Flask 培养 T 50方瓶以1!3~1!4传代,维持种子细胞。接种同一批细胞到30个T 30方瓶中,每日取样,计数细胞并绘制生长曲线,样品-20?保存,供代谢分析和免疫荧光观察。1.2.2 转瓶培养 CT 3微载体(本实验室自制),经无Ca 2+、M g 2+的PBS 缓冲液浸泡后,121?高压灭菌备用。加入适量微载体和细胞于150mL 转瓶中,工作体积50m L,采用间歇换液的培养方式,于37?、50mL/L CO 2培养箱中培养。对影响Vero (PEDV)细胞在微载体上快速均匀贴壁的搅拌速度、pH 值、血清浓度、初始培养基体积(V S )/终体积(V R )比例等条件进行优化比较。在3mg/m L 微载体浓度条件下,观测6.0 104/mL 、8.0 104/mL 、15.0 104

/mL 和22.5 104

/mL 的细胞接种密度对细胞生长的影响。在优化细胞接种密度的基础上,观测在15.0 104

/mL 细胞接种密度条件下,3、4、6mg/mL 微载体浓度对细胞生长的影响。1.2.3 生物反应器培养 将适量微载体和种子细胞加入1.5L CelliGen 生物反应器(美国NBS 公司生产),工作体积1.2L,控制溶氧为40%空气饱和度、温度37?。1.3 细胞计数

单层细胞用胰酶消化后,血球计数板计数;微载体上的细胞先用PBS 漂洗2次,经结晶紫溶液染色后,计数细胞核。

1.4 贴壁率和空球率的测定

在微载体培养系统中,分别测定接种的细胞数和接种12h 后微载体上的细胞数。

贴壁率=X 1/X 0 100%

X 0为接种时的细胞数,X 1为接种12h 后的贴壁细胞数。空球率的计算:取样置于载玻片上,显微镜观察并计算500个微载体中空球所占的比率。1.5 葡萄糖和乳酸含量的测定

利用YSI 2700生化分析仪(美国YSI 公司生

产)测定培养上清液中的葡萄糖和乳酸含量。

1.6 细胞中PEDV 的测定

细胞涂片后,丙酮固定,FITC 和伊文思蓝体积比6!1混合液染色,37?干燥30min 后,PBS 冲洗,封片。荧光显微镜观察、拍照,以#+~ ?表示每个细胞中的荧光强度,据此判断病毒繁殖情况。1.7 生物反应器与方瓶培养系统制备的疫苗免疫效果比较

将微载体培养的细胞液(经用PBS 3倍稀释)和方瓶培养的细胞液制备成疫苗,分别接种6头健康、未经任何疫苗免疫的猪,定期采血,采用ELISA 检测抗体水平。

2 结果

2.1 方瓶培养的生长代谢及病毒繁殖

以10.0 104

/mL 的细胞密度接种,细胞接种后有约24.0h 的停滞期,然后进入对数生长期,至96.0h 时最高细胞密度达49.4 104/mL,随后细胞脱落,进入衰亡期,对数生长期的细胞平均倍增时间为33.5h(见图1)。Vero(PEDV)细胞的代谢特性见图2,经计算,每日每109细胞消耗14.50mmol 葡萄糖,生成6.52mmol 乳酸,即消耗1.00mmol 葡萄糖生成0.45mmol 乳酸。

在方瓶培养系统中,细胞接种24.0h 后,每个细胞中病毒的荧光强度为# ?,培养至72.0~96.0h,荧光强度增加到# ?(见图1)。

图1 方瓶培养的细胞生长曲线和荧光强度荧光强度1、2、3、4分别为+、 、 、

2.2 细胞贴壁条件的优化

随着搅拌速度的增加,细胞贴壁率逐渐降低,镜检发现当转速为20r/min 时,细胞贴壁率达100%,但细胞在微载体上的分布很不均匀,微载体空球率

图2 方瓶培养过程中的细胞代谢情况

约为15%~20%,当转速提高到30r/min 时细胞贴壁率为97.2%,微载体空球率小于5%;血清浓度的

增加能促进细胞贴壁,提高贴壁率;初始培养基体积/终体积的比例对贴壁率影响不大(见表1)。经筛选优化,确定在细胞贴壁阶段的最佳条件为采用pH 7.0~7.2、血清浓度100mL/L 的培养基,搅拌速度30r/min 和最终培养体积。细胞接种12h 后进入生长阶段,培养至24h 时将搅拌速度提高至40~50r/min,可使整个微载体悬浮培养系统更均匀、细胞供氧更充分。

2.3 接种密度和微载体浓度对Vero(PEDV)细胞生长的影响

在转瓶细胞培养系统中,选择微载体浓度为3mg/mL,通过间歇换液培养消除营养物耗竭或代谢副产物积累对细胞生长的影响,试验结果见图3。转瓶中所能达到的最大细胞密度随着接种密度的提

表1 细胞贴壁率与培养条件的关系

培养条件搅拌转速/(r %min -1)

pH 值血清浓度(mL %L -1)V S /V F 2)20301)40 50 6.77.01)7.27.520 50 100 1/31/2 11)

贴壁率/%

100

97.1

92.7

84.6

85.7

95.7

93.8

80.5

73.5

84.9

97.4

98.4

100

97

注:1)表示考察某个因素对细胞贴壁的影响时,其他3个因素的固定值;2)表示细胞接种时培养基体积(V S )与最终培养基体积(V F )

的比例。

图3 细胞接种密度对细胞生长的影响

高而提高,当细胞接种密度为15.0 104

/mL 和22.5 104

/mL 时,所达到的最高细胞密度分别为90.3 104/mL 和89.4 104/m L,比低密度接种条件培养提高80%左右。

不同微载体浓度对细胞生长影响的试验结果见图4。当微载体浓度为4和6mg/mL 时,最终细胞密度可达116.0 104

/m L 和127.0 104

/mL,分别比3mg/mL 微载体浓度培养条件的最高细胞密度

提高29%和41%。

图4 微载体浓度对细胞生长的影响

2.4 在生物反应器中的细胞生长、病毒繁殖情况及疫苗免疫效果

在微载体浓度6mg /mL,细胞接种密度12.3 104

/mL 条件下,将CelliGen 反应器操作参数设定为:溶氧40%饱和空气、pH 值7.0~7.2、温度37?、搅拌速度40~55r/m in 。培养57h 换去1/3培养液,79h 换去1/2培养液,96h 时收获细胞液。培养过程中每日取样,分别进行细胞计数、代谢分析和病毒测定。取同一批种子细胞接种T 30方瓶,分别于第48、72和96h 各取2个方瓶的细胞作为对

照。细胞生长情况见图5。96h时细胞密度达174.

0 104/mL,接近理论值(180.0 104/mL)。与方瓶系统相比,细胞密度提高了2.5倍,与转瓶系统相比,提高了37%。此时收获反应器中的细胞,测定荧光强度,结果与方瓶培养的细胞一样,均可判为强荧光# ?,胞内含有大量PEDV。

生物反应器微载体培养和方瓶培养系统制备疫苗的免疫效果比较见表2。2种系统生产的疫苗免疫原性基本一致。

3 讨论

3.1 对于Vero细胞PEDV适应株而言,病毒产量主要取决于培养系统中细胞的密度和单位细胞的病毒繁殖能力,而细胞贴附条件、细胞接种密度、微载体浓度、培养基换液频率、搅拌速度、pH值、溶氧水平等微载体培养系统操作参数和细胞培养环境对细胞的生理状况和最终的细胞密度均有直接影响,从

而影响病毒的产量。

图5 生物反应器中换液培养的细胞生长情况

箭头表示换液

表2 方瓶和反应器系统生产疫苗免疫动物的抗体消长情况比较(D495nm值)

细胞培养方式

免疫后不同时间的抗体水平

第0d第7d第14d第28d第60d第90d第120d 生物反应器培养0 1.21 1.34 1.40 1.45 1.50 1.55方瓶培养0 1.16 1.11 1.40 1.45 1.46 1.49

细胞在微载体表面的贴壁过程是细胞进一步扩展和生长的关键,细胞贴壁率的高低在一定程度上决定了微载体培养的成功与否[6,7]。细胞贴附于微载体表面的过程受培养环境混合强度、pH值、培养基组成、微载体表面特征和细胞生理状态等因素的影响[8.9]。如提高搅拌速度一方面可使细胞在微载体上分布得更均匀,而另一方面高速搅拌产生的剪切力和湍流涡旋,不仅影响细胞贴壁,还会造成细胞死亡;pH值对细胞贴壁的影响与微载体的表面特性有关,Forestell等[7]发现MRC 5细胞在Cytodex 1上的贴壁率随pH值的降低而升高,可见适合于细胞生长的pH值未必适于细胞贴壁。本研究结果表明,有利于Vero(PEDV)细胞在CT 3微载体上贴壁的条件为:pH7.0~7.2、含100mL/L NBS的培养基,搅拌转速30r/min。细胞贴壁阶段减少培养体积对细胞贴壁并无明显影响。

3.2 在微载体培养系统中,细胞接种密度包括2种含义:单位培养体积接种的细胞数和单位微载体接种的细胞数。本研究结果表明,当细胞接种密度为15.0 104/mL时(即每1mg微载体接种5.0 104细胞),最终可获得较高的细胞密度;继续增加细胞接种密度,其最终获得的细胞密度并没有进一步提高,这是因为贴壁依赖性细胞受到贴壁表面积的限制,虽然通过换液培养,消除了营养限制和代谢副产物积累对细胞生长的影响,但由于贴壁面积有限,细胞间的接触抑制阻止了细胞继续增殖。因此,要进一步提高细胞密度,必须扩大细胞贴壁面积。

提高微载体的浓度,可增加细胞贴壁面积,因而可在一定程度上提高最终细胞密度,但是根据3 mg/mL微载体浓度所支持的最大细胞密度推算,当微载体浓度增加到4或6mg/mL时,所支持的细胞密度分别120.0 104/mL和180.0 104/mL,由图4可见,6mg/mL微载体浓度培养的最高细胞密度没有达到理论值,究其原因,主要是由于在转瓶系统中培养环境(如pH和溶氧等)无法控制,从而影响细胞的正常生长。经进一步考察在CelliGen生物反应器中Vero(PEDV)细胞的生长和病毒的繁殖情况。以6mg/m L微载体浓度培养细胞,由于培养环境得到了较好的控制,所获得的细胞密度达174.0 104/m L,与理论值接近,与方瓶培养相比提

高了2.5倍,收获的细胞液经免疫荧光和动物试验检测,PEDV含量和免疫效果与方瓶培养相当。本研究结果表明,利用生物反应器和微载体系统培养Vero(PEDV)细胞生产PEDV疫苗具有极大的应用潜力。

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Optimizing experiment of culture conditions of porcine epidemic

diarrhea virus in Vero cells microcarrier

WANG Jian chao1,ZHOU Yan1,HUA Ping1,

ZOU Yong2,TAN Wen song1,Q IAN Yong qing2

(1.State K ey L aboratory o f Bior eactor Engineer ing,East China University o f Science and

Technology,Shanghai200237,China;2.I nstitute of Animal Science and Veterinary

M edicine,Shanghai A cademy of Agr icultural Sciences,Shanghai201106,China)

Abstract:Production of porcine epidem ic diarrhea virus(PEDV)in microcarrier and bioreactor system,and some factors influencing cells attachment and grow th on microcarriers w ere investigated in this experiment.It w as found that ag itation speed,pH and serum concentration affected ratio of cell attachment and distribution u niform ity on microcarriers.Serial experiments on the relation betw een cell seeding densities,microcarrier con centrations,and the g row th of Vero cells had show n that optimal cell g row th w as obtained w hen the cell seeding density was15.0 104cells/mL or5.0 104cells/mg microcarrier.The max imum cell density during cultivation in spinner flasks increased w ith m icrocarrier concentration increasing.Im portantly,the yield of PEDV per cell in a bioreactor system w ith microcarriers w as sim ilar to that in T flasks,but the cell density reached in the bioreactor w as found3.5 fold higher than that in T flasks.In addition,the controlled anim al tests shown that PEDV vaccine produced in the bioreactor system had com parable immunogenicity.In conclusion,the experi mental results from this w ork demonstrated that the bioreactor system with microcarriers is potential for indus trial production of the PEDV vaccine.

Key words:Vero cells;porcine epidemic diarrhea virus;microcarrier;bioreactor

猪病毒性腹泻的治疗

秋冬季节猪病毒性腹泻病的控制引起猪只腹泻的病毒种类较多，有腺病毒、呼肠孤病毒、杯状病毒、星状病毒、小圆病毒、轮状病毒和冠状病毒等十几种。但危害严重的主要有猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）、猪流行性腹泻病毒（PEDV）和猪轮状病毒(RV)三种，在寒冷季节易暴发，各年龄猪只均可感染。对仔猪危害最严重，有较高的发病率和死亡率，而其他猪只由于腹泻会引起生长迟缓、饲料报酬率降低。1秋冬季节猪群病毒性腹泻的流行特点所有猪只均易感，传播速度很快，2～3天内蔓延到全群；发病集中在每年11月至次年4月，中大猪和母猪发病轻，哺乳仔猪发病急，死亡率高，仔猪呈水样腹泻，喷射状，伴有呕吐。部分猪场会呈反复发作流行。2秋冬季节猪群病毒性腹泻的危害2月龄以内仔猪死亡率可达100％，并造成猪只免疫力降低，易引起继发感染，腹泻猪只迅速丧失体重，长势缓慢，耐过猪形成僵猪。整齐度差，出栏延迟至少l周。泌乳母猪感染后表现高度体弱、泌乳停止、食欲不振等。架子猪，肥猪和成年猪发生一至数日的食欲不振或缺乏，体重迅速减轻。病猪和带毒猪是主要传染源。其他动物如猫、犬、燕、八哥等也能传播。主要经消化道、呼吸道传染给易感猪。'TGE在我国从每年的11月份至次年的4月份发病最多，夏季发病少。流行形式以新疫区的暴发性和老疫区的地方流行性或间歇性发生。暴发后，50％的康复猪带毒，排毒可达2~8周，最长可达104天之久。在老疫区，由于病毒和病猪持续存在，仔猪断奶后切断了补充抗体的来源，重新成为了易感猪，把本病延续下去。PEDV可在猪群中持续存在，各年龄的猪都易感，哺乳仔猪、架子猪和育肥猪的发病率可达100％，母猪的发病率在15％~90％。PED主要在冬季多发，夏季也可发生。我国从每年的12月份至次年的2月份为PED 的高发期。分娩和断奶仔猪数量大的猪场，PEDV通过感染断奶时丧失母源抗体保护的仔猪而存活，因而呈现地方性流行，PEDV可能是导致这类种猪场5~8周龄猪只持续发生断奶性腹泻的一个原因。PED可单一发生或与TGEV混合感染，最近有PEDV与PCV混感的报道。RV感染相当普遍，成年猪血清抗体检出率为40％～100％，具有明显的季节性，高峰在晚秋及冬季，少数地区季节性不明显而呈终年流行。7~41日龄仔猪易感，l～3周龄仔猪的感染率高于4~6周龄仔猪。初产母猪的仔猪比经产母猪的仔猪更易感。3临床表现及病理变化病毒性腹泻病的潜伏期很短，从几个小时到数日内蔓延全群。TGEV感染仔猪的典型临床表现是突然发生呕吐，接着出现急剧的水样腹泻，粪水呈黄色、淡绿白色或白色，内含未消化的凝乳块，气味腥臭，呈碱性。病猪极度口渴，迅速脱水，体重下降，精神萎靡，被毛杂乱无光。吃奶减少或停止吃奶，战栗，口渴，消瘦。架子猪、育肥猪和成年公、母猪主要表现食欲减退或消失，有时可见呕吐，随后水样腹泻，粪水呈现黄绿色、淡灰色或褐色，含有气泡。哺乳母猪泌乳减少或停止。3～7天病情好转，病猪体温多数正常，少数升高，但在主要症状出现后即降至正常或低于正常。病猪尸体消瘦，脱水明显。胃中充满凝乳块，胃底黏膜轻度充血或出血。小肠肠壁变薄，弹性降低，半透明状，肠内充满黄绿色或白色液体。肠系膜充血、淋巴结肿胀，切面多汁而呈红色。肾脏含有白色尿酸盐类。空肠绒毛的长度与隐窝深度比例，正常为7∶1，而TGE病猪则为1∶1。PED最主要的临床症状为水样腹泻，偶伴有呕吐，其临床症状与TGE十分相似，但程度较轻，在同窝猪群中传播的速度也比TGE慢得多。猪只年龄越小，症状越严重。在1周龄内仔猪在持续3～4天腹泻后因脱水而死亡，平均死亡率为50％。日龄较大的猪感染后1周左右康复，部分发育受阻而成为僵猪，年龄较大的猪表现食欲不振、呕吐、腹泻，而部分成年猪表现精神沉郁、厌食和呕吐，一般4～5天好转。育肥猪有1％～3％的死亡率。剖检仅见小肠扩张、肠内充满黄色液体，小肠黏膜、肠系膜充血，其他实质性器官无肉眼病变。组织学检查可见小肠绒毛长度与隐窝之比从正常的7∶1缩小到3∶1。RV自然感染常发生于7～14日龄的哺乳仔猪或断奶后7天内的仔猪。病初表现精神沉郁、食欲不振和不愿活动，偶有呕吐。随后发生严重腹泻并持续3～4天，粪便呈黄白、黄绿色或暗黑色。可见有水泻，半固体状(糊样)和发酵状，或者在类似乳清的液体上漂浮着絮状物。腹泻3~4天后，部分病猪出现严重脱水而死亡。排泄的外观程度取决于所吃的食物，吃奶的产生黄色腹泻，吃固体食物的一般是黑色或灰色腹泻。哺乳仔猪自然感染RV往往只出现轻微的临诊症状，可能与母源抗体有关。断奶仔猪腹泻综合征危害严重，死亡率可达10％~50％。断奶仔猪发生和轮状病毒相关的严重腹泻时，很多都有与TGE或溶血性大肠杆菌并发的现象(Bohl等，1978)。人工感染试验发现，单独接种轮状病毒或溶血性大肠杆菌时，只引起短暂的轻度腹泻甚至呈亚临床表现；而先后接种RV和溶血性大肠杆菌的猪只则可发生类似

保育猪腹泻病的治疗措施及预防办法

保育猪腹泻病的治疗措施及预防办法 各种年龄的猪都可发生腹泻，但是发生腹泻的猪主要发生在这三个年龄群：出生后1?3日龄仔猪，7?14日龄仔猪和断奶后年龄的仔猪。新生仔猪腹泻的发病率可能在日益增加，尤其是集中产仔管理的猪场。菌毛抗原疫苗的出现和普遍使用 已使新生仔猪腹泻大为减少。个别猪场使用口服同源奶制疫苗，但一般需要两次免 疫才能获得满意的预防效果。然而，菌毛疫苗对新生仔猪腹泻不一定有效，控制这种年龄的腹泻病常常是比较困难的。 虽然仔猪腹泻的病原是比较多的，而且是比较复杂的，但是最容易感染的病原 就是针对某种病原的母源抗体消退时又同时感染的这种病原。当有大量的病原感染 超过初乳或乳中抗体免疫控制力时腹泻就会发生。产仔室的温度、湿度、通风和卫 生状况等这些环境因素对仔猪腹泻的严重程度和成活率及预防有重大影响。 仔猪腹泻最常见的传染性病原是大肠杆菌、轮状病毒、传染性胃肠炎(TGE)和 猪等孢球虫(ISoSPora SUiS) 。线虫(如Sarongyloides ranSomi) 在美国东南部也 常常引起猪腹泻。据报告，美国中东部的许多州也有增加的趋势。据设在GaIebUrg 的伊利诺州诊断室的调查统计，在哺乳猪流行的病原有：球虫占32%大肠杆菌21% TGE病毒20%轮状病毒10%产气荚膜梭菌11%未诊断6%从同一个猪分离鉴定出的病原常常不止一个。最近几年的观察，发现球虫和产气荚膜梭菌的流行有增加的趋势。 大肠杆菌病：大肠杆菌作为原发性病原在仔猪要比幼年仔猪少见。伊利诺州诊断室对144头发生腹泻的猪作了调查分析，从6日龄到断奶时分离到病原性大肠杆 菌比例较少(14%),而1?5日龄仔猪比例较高(53%)。新生仔猪腹泻分离到的大肠杆菌，常常可能是继发性病原。这些大肠杆菌可能不一定溶血，也不是肠毒性的。 Moxley报道了大肠杆菌K88株感染哺乳猪和断奶猪出现内毒血症休克。他认为看到小肠

猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻与猪轮状病毒三联活疫苗使用说明书

猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻与猪轮状病毒三联活疫苗使用说明书 [兽用名称] 猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻与猪轮状病毒三联活疫苗 商品名：无 英文名：Swine Transmissble Gastroenteritis,Porcine Epidemic Diarrhea and Porcine Rotavirus V accine，live 汉语拼音：Zhu Chuanranxing Weichangyan、Zhu Liuxingxing Fuxie yu Zhu Lunzhuangbingdu Sanlian Huoyimiao 【主要成分与含量】疫苗含猪传染性胃肠炎病毒弱毒化毒株和猪流行性腹泻病毒弱毒CV777株病毒和猪轮状病毒NX株，每头份疫苗病毒含量≥105.0TCID50。【性状】为黄白色或微粉色海绵状疏松团块，易与瓶壁脱离，加稀释液后迅速溶解，无异物。 【作用与用途】用于预防猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻与猪轮状病毒感染。主动免疫接种后7日产生免疫力，免疫期为6个月。仔猪被动免疫的免疫期至断奶后7日。 【用法与用量】每瓶疫苗稀释至5ml或10ml（根据头份数），妊娠母猪与产仔前40日后海穴位（即尾根与肛门中间凹陷的小窝部位）接种，20日后二免，每次1头份（1ml）；其所生仔猪与断奶后7-10日内接种疫苗1头份。未免疫母猪所产3日龄以内仔猪接种1头份；进针深度：3日龄仔猪为1.5cm，随猪龄增大而加深，成猪为4cm。 【不良反应】无。 【注意事项】 1. 产品仅用于控制这三种病毒引起的腹泻，对于细菌、寄生虫和其他因素引起的腹泻无效。 2. 疫苗运输过程中应防止高温和阳光照射。 3. 妊娠母猪接种疫苗时要适当保定，以免引起机械性流产。 4. 疫苗稀释后，限1小时内用完。 5. 进行抗体检测，在抗体水平较低（TGE、PED中和抗体效价≤1:8，PRV中和抗体效价≤1:16）的情况下使用。 6. 后海穴位接种时，针头保持与脊柱平行或者稍偏上，以免将疫苗注入直肠内。 7. 本产品请在兽医指导下应用。 【贮藏与有效期】在-20℃以下，有效期为24个月。 【规格】5头份/瓶，10头份/瓶。 【批准文号】

产房仔猪易发病毒性腹泻的防控措施

产房仔猪易发病毒性腹泻的防控措施 自2010年12 月开始，我国多数省份相继出现以哺乳仔猪呕吐、腹泻和高死亡率为特征的猪病，给我国的养猪业造成了很大的经济损失。笔者于2011年6 月接触了第1 例产房哺乳仔猪病毒性腹泻病，至今近5年时间里陆续遇到类似病例，尤其是每年的11月到次年3 月的冬春季节，病毒性腹泻发生面很广，几乎所有规模猪场在2～3 年内都要经历1 次以上，有的猪场更是1 个冬春感染2 次。每次感染，持续时间有长有短，康复快的猪场持续2周，康复慢的猪场持续6周以上，感染期间所产哺乳仔猪多数在分娩后1～3 d 突然出现呕吐而后腹泻，数小时内整窝腹泻，24～36 h 几乎同栋产房所有哺乳仔猪都开始呕吐、腹泻。病猪呈喷射状水样腹泻，迅速脱水消瘦，12～36 h 病猪脊椎骨凸显。病猪在腹泻后48 ～96 h出现脱水死亡高峰，7 日龄以下乳猪感染病毒性腹泻死亡率80%以上，7 ～10日龄以上乳猪感染病毒性腹泻死亡率在40%左右，10 日龄以上乳猪感染病毒性腹泻只要产房内温度达到22℃以上，几乎没有死亡发生。更为严重的是在发生病毒性腹泻的产房往往伴随着母猪泌乳性能迅速下降，甚至完全没奶，导致腹泻耐过猪在康复期间饥饿，因而死亡率进一步增加。2013年冬天开始有的猪场妊娠母猪在发生病毒性腹泻的时候会并发流产，流产主要出现在重胎妊娠母猪，流产母猪占猪场重胎母猪比例5%～10%。 期间笔者多次采取腹泻哺乳仔猪病料送科研院所做腹泻病原检测，结果表明造成这几年产房哺乳仔猪严重腹泻的病原主要是流行性腹泻病毒。还有几次送检腹泻哺乳仔猪的同时挤该窝哺乳母猪奶水2mL 送检腹泻病原，发现多数所产哺乳猪发生腹泻的母猪奶水里面含有与腹泻乳猪一致的腹泻病原，说明导致乳猪腹泻的病原很可能是通过母猪奶水感染。 几年来笔者努力寻求各种控制产房7日龄以内哺乳仔猪腹泻的有效方法，然而似乎任何控制其他腹泻病有效的方法对于这个腹泻病都无明显效果。有的方法对某一个猪场效果很好，但是对于其他猪场却治疗效果不明显，这可能与治疗措施执行不到位、猪场条件不同或者病毒毒力强弱不同等因素导致相同的治疗措施在不同猪场出现较大差异的治疗效果。 纵观这几年规模猪场产房腹泻病情况，我们可以从中发现以下特点：1) 发病日龄越大病情越轻，只要发病超过10日龄一般就没有大的损失。2) 病情传播迅速，往往一栋产房只要1 ～2 d 时间就可以感染绝大多数哺乳仔猪。3)所带哺乳仔猪发生腹泻的母猪泌乳性能迅速下降。因此要控制产房哺乳仔猪腹泻必须采用综合措施，延缓病情传播速度，让还未感染腹泻的哺乳仔猪尽量不感染或者日龄大一点再感染。发生了腹泻的哺乳仔猪重点是增加其耐受力，使其减轻症状尽可能帮助耐过。在病猪康复期间，保证母猪泌乳性能，增加病猪康复率。为此我们可以采取以下措施，尽量降低发病期间哺乳仔猪死亡率。 1 疫苗接种 在每年的10月下旬和11 月下旬，每头母猪包括后备母猪后海穴接种4 mL 传染性胃肠炎- 流行性腹泻（T-P）二联灭活苗，作为基础免疫，1 月初开始给产前2 ～4 周的母猪跟胎加强接种T-P 二联灭活苗。3 月初母猪群再次全群接种T-P 二联灭活苗，4月初给产前 2 ～4 周的母猪跟胎加强接种T-P 二联灭活苗，预产期在5 月中旬以后的母猪可以不跟胎加强接种了。接种疫苗的时候针头要水平或略向上斜插入母猪后海穴，针头不能向下斜，以免疫苗注入母猪直肠影响接种效果。在此笔者要强调的是，接种疫苗并不能完全控制产房哺乳仔猪病毒性腹泻的发生，但是可以明显减轻腹泻的症状并使得治疗措施有效，同时也可以降低病毒性腹泻的传播速度。产前未接种T-P二联苗的母猪所产哺乳仔猪在7 日龄以下感染病毒性腹泻，其死亡率将近100%，并且几乎所有治疗措施都没有明显效果，病猪死亡时间多在腹泻开始的48～96 h。产前未接种T-P 二联苗的母猪所产仔猪感染病毒性腹泻，传遍整个产房只需24～36 h，而产前接种2 ～ 3 次T-P 二联苗的母猪所产仔猪感染病毒性

返饲方法控制仔猪病毒性腹泻_齐海涛

入奶妈房中；四是刚转入奶妈房1~2天的仔猪需要调教喝奶；五是注意保持奶妈房内的干燥清洁，奶妈房中奶杯、水杯与仔猪的睡觉区没有严格的分区，环境潮湿，通常要撒天然净以杀菌和保持干燥；六是注意保持奶妈房内的温度，合理调节保温灯的功率；七是按常规程序进行教槽；八是可分阶段奶以提高奶妈房利用率和仔猪活动空间；九是每日清理奶桶和输奶管道，进猪前和每周用含氯消毒液对设备进行彻底清洗消毒，清洗消毒时空气压缩机压强为70磅/平方英寸，程序为：冷水— 50℃~60℃热水—消毒水—冷水，每个步骤循环时 间不得短于8分钟。 4结论 在当前肉品需求的背景下，仔猪育成率提升 10%，相当于少养繁育母猪10%，可以大大提升养 猪效率，降低养殖成本，为养殖户及社会创造财富。而要提高断奶前后仔猪的育成率，在正确的怀孕母猪、哺乳母猪及产房管理的前提下，还需要增强怀孕后期母猪料的营养及饲养技术，改善、增加初乳的质量和总量，采用代母奶进行恰当的人工哺育，同时辅以合理成功的教槽，才能促进乳猪的健康、快速生长，减少疾病，提高乳仔猪断奶体重和育成率，最终提升断奶育成率。 !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 今日畜牧兽医2013·09 19规模养猪 哺乳仔猪腹泻病的发病特征有：（1）发病范围广，全国所有养猪省份几乎都有发生；（2）主要危害7日龄以内哺乳仔猪，症状主要表现为水样腹泻、脱水、部分仔猪呕吐，死亡率高；（3）发病持续时间长且主要集中在每年12月份至第二年3月份；夏季高温时节也时有发生；（4）病情反复发作，间隔2~3周新的哺乳仔猪开始发病；（5）疫苗免疫效果不好，抗生素治疗效果不明显；（6）一些小规模猪场尽管实施了返饲，但仍有腹泻暴发。 目前尚无特异性治疗病毒性腹泻的方法，疫苗紧急免疫效果不佳。关于哺乳仔猪腹泻的病因众说纷纭，使广大猪场管理人员感到迷惑和恐慌。猪场频繁发生病毒性腹泻可能和猪群不断感染新的毒株以及腹泻病毒毒株的不断变异有关；另外疫苗抗原含量和疫苗本身的抗原性还有待提高。目前国内外专家学者公认的控制病毒性腹泻的方法就是返饲，但是很多小规模猪场返饲效果并不 理想，只有一些技术力量比较强的现代化猪场返饲成功率较高。笔者结合临床实践经验和大家交流利用返饲方法控制病毒性腹泻病的关键点。 1发病状况 2013年1月中旬，江苏地区某公司两个规模 化猪场（猪场A 与猪场B ）先后发生大规模的腹泻，发病急、传播速度快，10天内各生产阶段的猪均出现腹泻。两个猪场不同年龄阶段猪的发病顺序也基本一致，均是育肥猪和保育猪先后出现水样腹泻，而后传播到妊娠母猪，最后是产房母猪和哺乳仔猪发病。两个猪场在母猪妊娠后期均使用过韩国某公司进口流行性腹泻—传染性胃肠炎—轮状病毒三联灭活疫苗。仔猪主要表现症状：出生后3~10日龄，先呕吐，而后水样腹泻，3~5天内死亡率高达50%~85%，10日龄以上仔猪容易耐过。发病时补液及时的仔猪，耐过后容易成为僵猪。对于脱水的仔猪，使用抗生素治疗无效。 返饲方法控制仔猪病毒性腹泻 齐海涛，于俊娜，张悦，范安泽，朱春明，马振强（北京大北农种猪科技有限公司，北京100000）

猪常见腹泻病的诊断与治

猪常见腹泻病的鉴别与防治 在各种类型的腹泻中，以传染性疾病的发病率最高，危害最严重。它们可以是原发性的，也可以继发感染，而寄生虫和经管不当、营养缺乏等引起的普通内科病则往往是腹泻性疾病的诱发因素。 １仔猪白痢 流行特点：通常发生于１０日龄－３０日龄的仔猪，以１０日龄－２０日龄最多见，一年四季均可发生，发病率较高，但病死率较低。饲养经管不良，卫生条件差是该病发生的外因。 特征症状及病变：排出灰白色、浆糊样稀粪，有腥臭味。肠内有不等量的食糜和气体，肠粘膜充血、出血，肠壁变薄。 实验室检验：由小肠分离出大肠杆菌，用血清学方法鉴定。 防治：基本同仔猪黄痢，但影响本病发生的因素更多，应进行临诊调查分析，找出诱因，并克服之，在此基础上开展治疗，方能奏效。 ２仔猪黄痢 流行特点：主要发生于１周内特别是３日龄左右的仔猪，发病率和病死率均很高，７日龄以上的仔猪发病较少，母猪携带致病性大肠杆菌是本病发生的重要因素。 特征症状及病变：突然发病，排出黄色粘液状的稀粪或水样粪，混有凝乳状小片和气泡。肠内有多量黄色液状内容物和气体，肠粘膜呈急性卡他性炎症，以十二脂肠最严重，空肠和回肠次之，结肠较轻。

实验室检验：采取小肠前段的内容物，进行细菌分离培养和鉴定，有条件的猪场可作肠毒素的测定。 防治：采用以改善饲养经管，加强卫生防疫为主的综合性措施。通过药敏实验选用敏感药物进行防治，或使用微生态制剂。也可用大肠杆菌基因工程苗于产前分两次免疫母猪进行预防。 ３仔猪红痢 流行特点：主要侵害１日龄－３日龄的初生仔猪，病程短，死亡率高，１周龄以上的仔猪很少发病。 特征症状及病变：突然排血痢或红褐色稀便，偶有呕吐，体质虚弱，很快死亡。特征性病变主要在空肠，外表呈暗红色，肠腔内充满含血的液体，肠系膜淋巴结呈鲜红色，有时病变可扩展到回肠，但十二指肠一般没有病变。 实验室检验：仅分离出病原意义不大，因外界环境普遍存在本菌，关键是作血清中和实验，确定病猪肠道内存在Ｃ型魏氏棱菌的毒素。 防治：本病发生急，死亡快，往往来不及治疗或治疗效果不佳，主要依靠平时选用敏感药物进行预防。 ４传染性胃肠炎 流行特点：多流行于冬春寒冷季节，各种年龄的猪均有易感性，１０日龄以内仔猪的发病率和病死率均很高，５周龄以上的病猪则很少死亡，较大的或成年猪几乎没有死亡。

猪流行性腹泻的防治

猪流行性腹泻的防治 刘宜存董联合 （河南省谊发牧业有限责任公司，河南鹤壁456285） 猪流行性腹泻是由猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起的猪的一种高度接触性肠道传染病,以水样腹泻、呕吐、脱水和食欲下降为主要特征。近几年来，规模化猪场不断兴建，有些猪场硬件投资少，设备设施保暖性差，加之管理及生物安全防控上存在漏洞，造成猪的流行性腹泻病频繁发生，甚至呈地区性流行。不同年龄和不同品种的猪对本病都易感,该病主要影响猪的消化道，如果防控措施不力，容易继发感染呼吸道疾病、链球菌、副猪嗜血杆菌、猪流感、蓝耳病等。造成死淘率上升、料肉比降低、出栏时间延迟，给养猪业造成严重的经济损失。本文结合猪流行性腹泻的病毒特性及临床流行特点、临床症状和病理变化、鉴别诊断、防控措施等方面进行综述,为猪流行性腹泻病的防控提供参考。 1 病毒特性及流行特点 猪流行性腹泻病可单一发生或与猪传染性胃肠炎混合感染。猪传染性胃肠炎为冠状病毒；猪流行性腹泻为类冠状病毒。两病毒在65℃条件下10分钟左右都可杀死；在阳光下6～8小时可灭活；在阴暗环境中7～10天具有感染力。用0.5%石炭酸，在37℃下处理30分钟可杀死。康复猪排毒可长达2月，甚至可长达109天。 本病多发于冬季，一般在12月至来年3月份，特别是春节前后，人员过节消毒意识淡薄，有些猪场保暖工作跟不上去，车间温度较低，饲养密度较大，员工进出频繁，温度低冬季消毒池结冰等因素的影响，从而发生腹泻。猪流行性腹泻病毒可在猪群中持续存在，各种年龄的猪都易感。本病基本上从后备母猪或从生长育肥猪开始发生，病毒多经发病猪的粪便排出，运输车辆、饲养员的鞋子或其他带病毒的动物，都可作为传播媒介。传播速度快，呈流行性，很快传播到所有猪群。 2 临床症状及病理变化 经口人工感染的潜伏期，新生仔猪为15～30h，肥育猪为2天，自然感染可能稍长些。该病的主要临诊症状为水样腹泻，或者伴随呕吐。猪流行性腹泻病常以暴发性腹泻的形式发生在非免疫断奶仔猪(I型)或各种年龄的猪(Ⅱ型)。病猪表现出呕吐、腹泻和脱水，与猪传染性胃肠炎相似，但程度较轻、传播稍慢。粪稀如水，呈灰黄色或灰色。呕吐多发生于吃食或吮乳后。少数病猪出现体温升高1～2℃，精神沉郁，食欲减退或不食，尤其是繁殖种猪。症状的轻重随年龄的大小而有差异，年龄越小，症状越重，1周内新生仔猪常于腹泻后2～4

猪流行性腹泻病毒

猪流行性腹泻病毒（Porcine Epidemic Diarrhea Virus, PEDV）简介 猪流行性腹泻病毒( porcine epidemic diarrheavirus，PEDV) 属于Ⅰ类冠状病毒，引起猪流行性腹泻病，仔猪感染此病毒后具有很高的死亡率． PEDV是一个正向包膜病毒，其基因组是正义单链RNA 5'端有帽结构( cap) ，3'端有Poly( A)尾，基因组全长为28 033bp，基因组结构如图所示．5'端的2 /3部分编码2 个大的复制酶多聚蛋白ppla和pplab，其余1 /3基因组序列包括5个ORF，编码4个结构蛋白:纤突蛋白( S)、小包膜糖蛋白( E)、膜糖蛋白(M)和核衣壳蛋白(N) 以及ORF3编码的1个非结构蛋白．

复制周期 首先S糖蛋白与受体结合,然后S糖蛋白被组织蛋白酶L剪切后活化一种融合肽,通过融合肽与细胞内成分的融合作用介导病毒侵入宿主细胞。病毒粒子通过膜融合侵入宿主细胞内,然后释放其具有感染性的基因组RNA。融合后紧密结合的病毒RNA与核衣壳蛋白N被释放进细胞质中,随后在胞质中脱衣壳,与核衣壳蛋白N紧密结合的病毒RNA基因组被释放入胞质中。 首先,ORFlab翻译成一个多聚前体蛋白,然后此前体蛋白被两种蛋白酶,木瓜样蛋白酶(PLP)和主要蛋白酶(Mpro),剪切成为对病毒复制必须的单一蛋白,经共转译处理后产生RNA依赖的RNA聚合酶(RdRp)和其它合成病毒RNA所必需的蛋白。RdRp以进入胞质中的基因组RNA为模板,转录产生负链RNA,然后以负链RNA为模板,合成不同长度的亚基因组mRNA(sgmRNA)和基因组RNA,复制酶、结构蛋白和辅助蛋白也在这一时期产生。N蛋白与新合成的病毒基因组RNA在细胞质中形成螺旋的核衣壳,核衣壳与固定在内质网和高尔基体之间空隙的M蛋白结合后再与E 蛋白结合,E蛋白和M蛋白相互作用促使病毒粒子出芽,形成包裹的核衣壳。最后,包裹的核衣壳与在高尔基体内经糖基化等修饰的三聚体S蛋白结合,形成成熟的病毒粒子,通过胞吐作用释放到细胞外。 一．蛋白组成 1.纤突蛋白（Spike protein，S） 2.小包膜蛋白（Envelope protein，E） 3.膜糖蛋白（Membrane protein，M） 4.核衣壳蛋白（Nucleocapsid protein，N） 5.ORF3编码的多肽 6.非结构蛋白（nonstructural protein） ◆Nsp1 ◆Nsp2 ◆Nsp3 ◆Nsp4 ◆Nsp5 ◆Nsp6 ◆Nsp7 ◆Nsp8 ◆Nsp9 ◆Nsp10 ◆Nsp11 ◆Nsp12 ◆Nsp13 ◆Nsp14 ◆Nsp15 7.依赖于RNA的非结构蛋白pol基因编码（复制酶多聚蛋白lab，pplab）

鸡新城疫疫苗治疗猪病毒性腹泻的事例与原理探讨

鸡新城疫疫苗治疗猪病毒性腹泻的事例与原理探讨 x 最近看了海浪头的《“鸡新城疫”疫苗悄悄走进猪的市场》一文很有感触。鸡新城疫和猪腹泻，这两种看似八竿子打不着的事情怎么就有了交点？这个方子如此之“偏”为何流传甚久并屡有成功的案例，纯属歪打正着还是确有神效？我没有高学历也没有治疗经验，只是希望能以此文帮助大家找到一些想要的答案。以下内容仅供参考。 一、鸡新城疫疫苗治疗猪病的探索 1、第一个“吃螃蟹”的人：我国伟大的基层兽医！ 以鸡新城疫疫苗治疗猪病，有史可查的首个案例发生在1987-1988年。当时浙江省绍兴市受猪传染性胃肠炎病毒所害，经济损失严重，又苦于没有疫苗可用，绍兴市兽医站的沈福钦、宋森泉等人便以新城疫I系疫苗作为内源性干扰素生剂进行了防治猪传染性腹泻病的试验。 具体方法是用生理盐水1：100稀释新城疫I系苗，按仔猪3~5ml，架子猪5~10ml、肥育猪及公母猪10~20ml的剂量, 行皮下或肌肉注射，每天1次，做好临床观察。以腹泻停止和食欲基本恢复判定为治愈。连续2次怡疗未愈, 判定为无效。 他们的结果表明，1987年11月-1988年3月，用新城疫I系苗共试治未用其他任何药物治疗过的传染性腹泻病猪164头，其中经第1次注射治愈95头、第2次注射治愈62头，有效治愈率为157/164=95.7%。另外对有病毒性腹泻流行猪场的28头猪进行了预防实验，结果有效。 他们分析这种方法符合现代免疫学理论，以新城疫中强毒活疫苗作为内源性干扰素诱导剂，可诱导猪产生干扰素并增强免疫系统的活性，因此可以防治猪的病毒性腹泻。但由于当时的实验条件有限，无法分析所用剂量和不同阶段猪体诱导产生干扰素的敏感度。 2、各地兽医试用“特殊疗法”，效果得到印证。 在浙江兽医的带领下，其他地区的兽医工作者们也对这种奇妙的方法进行了一些尝试与验证。 1990-1993年，云南兽医以同样1:100的比例稀释新城疫I系苗，仔猪5ml，10ml、肥育猪及公母猪20ml的剂量注射。治愈率90/93=96.7%。验证了应用鸡新城疫I系苗作为干扰素诱生物，防治猪流行性腹泻病确有较好疗效,，但因初次应用对剂量和治疗效力的持续时间等还须进一步试验。 本人查到的所有以文献或论文形式进行过报道的案例汇总如下： （之后就鲜有确切的治疗事例报道了，大多是以治疗方法推荐的形式见诸报端） 另外还有鸡新城疫疫苗治愈仔猪白痢的案例，来自江苏省泰兴市的兽医应用鸡新城疫I 系冻干苗治疗仔猪白痢在临床上取得了满意疗效，认为这从免疫学、传染病学和微生物学的观点和常理是无法解释的。但作者本着“百家争鸣”的原则，经慎重研究后，决定发表该文章，旨以供同行参考和运用，望能通过进一步的实践来加以验证与总结。湖北省兽医也利用相似的方法防治当地的猪黄白痢，取得了十分显著的临床效果。 二、鸡新城疫VS猪腹泻病毒，以毒攻毒的杀.手锏是【干扰素】 既然有上述诸多新城疫防治猪腹泻的事例，那么就有发生这种现象的原因。在相关的文献中我们经常可以看到同样的字眼—— 关键词：干扰素、干扰素诱导剂、鸡新城疫I系疫苗

2021年保育猪腹泻病的治疗措施及预防办法

保育猪腹泻病的治疗措施及预 防办法 欧阳光明（2021.03.07） 各种年龄的猪都可发生腹泻，但是发生腹泻的猪主要发生在这三个年龄群：出生后1～3日龄仔猪，7～14日龄仔猪和断奶后年龄的仔猪。新生仔猪腹泻的发病率可能在日益增加，尤其是集中产仔管理的猪场。菌毛抗原疫苗的出现和普遍使用已使新生仔猪腹泻大为减少。个别猪场使用口服同源奶制疫苗，但一般需要两次免疫才能获得满意的预防效果。然而，菌毛疫苗对新生仔猪腹泻不一定有效，控制这种年龄的腹泻病常常是比较困难的。 虽然仔猪腹泻的病原是比较多的，而且是比较复杂的，但是最容易感染的病原就是针对某种病原的母源抗体消退时又同时感染的这种病原。当有大量的病原感染超过初乳或乳中抗体免疫控制力时腹泻就会发

生。产仔室的温度、湿度、通风和卫生状况等这些环境因素对仔猪腹泻的严重程度和成活率及预防有重大影响。 仔猪腹泻最常见的传染性病原是大肠杆菌、轮状病毒、传染性胃肠炎(TGE)和猪等孢球虫(Isospora suis)。线虫(如Sarongyloides ransomi)在美国东南部也常常引起猪腹泻。据报告，美国中东部的许多州也有增加的趋势。据设在Galeburg的伊利诺州诊断室的调查统计，在哺乳猪流行的病原有：球虫占32%，大肠杆菌21%，TGE病毒20%，轮状病毒10%，产气荚膜梭菌11%，未诊断6%。从同一个猪分离鉴定出的病原常常不止一个。最近几年的观察，发现球虫和产气荚膜梭菌的流行有增加的趋势。 大肠杆菌病：大肠杆菌作为原发性病原在仔猪要比幼年仔猪少见。伊利诺州诊断室对144头发生腹泻的猪作了调查分析，从6日龄到断奶时分离到病原性大肠杆菌比例较少(14%)，而1～5日龄仔猪比例较高(53%)。新生仔猪腹泻分离到的大肠杆菌，常常可能是继发性病原。这些大肠杆菌可能不一定溶血，也不是

猪流行性腹泻的发病原因与治疗措施

级高牧医042 学号200401015227 毕业论文（设计） 题目猪流行性腹泻的发病原因与治疗措施姓名盛吉吉 系部畜牧系 专业畜牧兽医 指导教师王冬梅职称实验师 日期2009.5.20

猪流行性腹泻的发病原因与治疗措施 盛吉吉 【摘要】本病是由类冠状病毒引起的急性流行性腹泻。季节性很强，以11月至第二年2月底发生较多，各类年龄都可感染。病猪及带毒猪是本病的传染源，主要传染途径是消化道。但其发病率和死亡率随猪龄的增长而下降，1-5日龄内哺乳仔猪感染率最高，死亡率也高，几乎100％，断奶，育肥、种猪症状较轻微，病死率很低或无病死。此病传播迅速，仅数日危及全群。 【关键词】流行性腹泻；冠状病毒；猪；肠道性传染病 1.发生与分布 猪流行性腹泻是一种与传染性胃肠炎（TGE）相似的疾病，在我国长期被误认为是TGE，1976—1977年，在比利时一些主场发生各种年龄的猪急性腹泻。1977年，伍德氏在英国报道类似疾病，称为“流行性腹泻Ⅱ型”，潘萨尔特氏在比利时，查西氏在英国发现此病，其后，在欧洲的捷克，西德等许多国家发生流行。我国在1964年前后开始发生冬季拉稀病，每年冬季11月份起发生流行，春节前后达到高峰，流行面广，数省数县连续发生，不论猪大小，性别，品种，均可发生，但病因不明。国内从70年代起开始研究病原，分离出几株病毒，如上海的“华株”，辽宁省的“辽株”，吉林省的“吉株”，福建省的“龙株”等，均认为是猪传染性胃肠炎，但抗原似乎有差异。在80年代，长春是高德荣氏等通过TGE的Miller株与4个地方毒株的免疫荧光交叉反应，兽医大学朱维正氏等通过吉株，华株与通化株的免疫荧光实验，均证实与猪流行性胃肠炎不同，直到1983年上海市畜牧兽医研究所从比利时引进CVLA株免疫血清，证实华株为CVLA，才正式肯定猪流行性腹泻病毒。 2.病原

保育猪腹泻病的治疗措施及预防办法

保育猪腹泻病得治疗措施及预防办法 各种年龄得猪都可发生腹泻,但就是发生腹泻得猪主要发生在这三个年龄群:出生后1~３日龄仔猪，７～１4日龄仔猪与断奶后年龄得仔猪。新生仔猪腹泻得发病率可能在日益增加,尤其就是集中产仔管理得猪场。菌毛抗原疫苗得出现与普遍使用已使新生仔猪腹泻大为减少。个别猪场使用口服同源奶制疫苗,但一般需要两次免疫才能获得满意得预防效果.然而,菌毛疫苗对新生仔猪腹泻不一定有效,控制这种年龄得腹泻病常常就是比较困难得。 虽然仔猪腹泻得病原就是比较多得，而且就是比较复杂得，但就是最容易感染得病原就就是针对某种病原得母源抗体消退时又同时感染得这种病原。当有大量得病原感染超过初乳或乳中抗体免疫控制力时腹泻就会发生。产仔室得温度、湿度、通风与卫生状况等这些环境因素对仔猪腹泻得严重程度与成活率及预防有重大影响. 仔猪腹泻最常见得传染性病原就是大肠杆菌、轮状病毒、传染性胃肠炎(TＧE)与猪等孢球虫（Ｉsospｏra sｕis)。线虫（如Sａrongyｌoｉdes ransomi）在美国东南部也常常引起猪腹泻。据报告,美国中东部得许多州也有增加得趋势。据设在Galeburg得伊利诺州诊断室得调查统计，在哺乳猪流行得病原有:球虫占32％，大肠杆菌２1%,TGE病毒２0%，轮状病毒10％，产气荚膜梭菌１1％，未诊断６%.从同一个猪分离鉴定出得病原常常不止一个。最近几年得观察，发现球虫与产气荚膜梭菌得流行有增加得趋势.?大肠杆菌病：大肠杆菌作为原发性病原在仔猪要比幼年仔猪少见。伊利诺州诊断室对144头发生腹泻得猪作了调查分析，从６日龄到断奶时分离到病原性大肠杆菌比例较少（14％)，而1～5日龄仔猪比例较高(53％）。新生仔猪腹泻分离到得大肠杆菌,常常可能就是继发性病原.这些大肠杆菌可能不一定溶血,也不就是肠毒性得。Moxley报道了大肠杆菌K88株感染哺乳猪与断奶猪出现内毒血症休克。她认为瞧到小肠充血就说明肠道感染了β溶血性大

猪流行性腹泻的有效防控措施

猪流行性腹泻的有效防控措施 迅达康兽药畜药技术部宁旭杰 伴随着东北寒冷的冬季，猪场杀手也悄然进入猪场，呼吸道、肠道疾病开始蔓延，传染性胸膜肺炎、副猪嗜血杆菌、流行性腹泻等疾病开始大面积出现在猪场，今天就猪流行性腹泻跟大家做个简单的分享。 猪流行性腹泻跟传染性胃肠炎很是相似，但流行性腹泻主要以呕吐、水样腹泻、食欲下降为主。 在宝利一家养殖户家里就发现了类似情况，一开始育肥猪出现拉稀，只有个别的出现，但两天后猪群开始大面积出现水样腹泻，呈灰绿色，有的猪开始呕吐，呈黄色水样，伴有油浮，聚堆，有的猪体温升高39.5℃-40.5℃；母猪体温正常，奶水质量下降，采食量降低，精神沉郁，灰绿色水样腹泻；哺乳仔猪也呕吐、腹泻，严重脱水死亡。猪只整体消瘦，踩压腹部可出现出门喷出黄色水样粪便，剖检可见，肠道膨胀扩张，充满泡沫状黄色液体，肠壁变薄、透明，肠系膜充血，肠系膜淋巴结肿胀。 下面是我给养殖户的一些建议： 一、做好饲养管理和预防工作： 1、加强保温工作，特别注意昼夜温差； 2、平时保持猪舍干爽，垫草要保持干燥； 3、保持饲料的营养充足； 4、定期做好消毒工作； 5、在此病高发季节可提前用1kg季季安+800g优舒克拌1吨

料预防； 6、母猪围产期可用能过奶的1kg季季安加800g优舒克拌1 吨料，通过奶水预防仔猪腹泻及母猪产后三联症； 二、针对流行性腹泻的治疗： 1、饲料加药：季季安（2kg）+优舒克（800g）拌料1吨 2、卡维舒+免疫肽饮水 3、每天对猪舍进行消毒 4、中午气温高时可进行猪舍通风 5、在病猪恢复期可用常源舒（2kg）+免疫肽（1kg）每吨饲料，拌 料一个月，然后减半长期使用； 在使用此治疗方案后猪的腹泻三天得到了很大的改善，5天基本痊愈，病猪采食量开始上升并趋于正常采食量。 下面是个人一点小方案：针对哺乳仔猪在病发期应该葡萄糖+庆大霉素+Vc进行灌服防止仔猪脱水死亡；空怀母猪在严重时可静脉注射人用诺氟沙星6瓶（250ml\瓶），两天基本痊愈，怀孕母猪禁用。

猪流行性腹泻

猪流行性腹泻 1 病原学 2 流行病学 3 发病机理 4 临床症状 5 病理变化 6 流行现状 7 诊断 8 综合防治 9 综合防治重点难点解析 参考文献 最近几年，因病毒性腹泻疫情流行，给我国养猪产业乃至整个国民经济带来沉重打击。2011年4月，因该年春节前后的猪病毒性腹泻流行，猪价一改之前一年多逐波下行的萎势，出人意料地快速飚升，使始于2010年初，经过近一年的财政紧缩，已于当年12月见顶回落的CPI再度扭头向上，紧缩的财政政策被逼再度紧缩。2011年7月，CPI上升6.5%，猪肉价格上涨56.7%，推动CPI上升1.46个百分点。 对于近几年猪病毒性腹泻的主要病因，虽然学者们至今仍意见不一，有人认为猪传染性胃肠炎和猪流行性腹泻仍然是主要致病病原，有人指出是猪流行性腹泻病毒发生了变异，还有研究指出是新的病毒博卡病毒或CUBO病毒[1]。但据珠海市赛比奥（原安富来）生物科技有限公司（以下简称赛比奥）猪病诊断实验室对广东省内外几十个病毒性腹泻发病猪场的临床调查和病原学检测：2011年和2012年春节前后的猪病毒性腹泻疫情，70%以上的猪场是因猪流行性腹泻发病所引起；在母猪免疫过来源正当的猪病毒性腹泻三联弱毒苗（含猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻和轮状病毒三种抗原，以下简称腹泻三联弱毒苗）的猪场，100%是因猪流行性腹泻发病所引起。 在现有技术条件下，来源正当的腹泻三联弱毒苗或某些实验室制作的腹泻二联弱毒苗（仅含有猪传染性胃肠炎和猪流行性腹泻两种抗原）对猪流行性腹泻的免疫效果均不够理想，或根本无效，但采取一些非常规的免疫手段对该病作免疫预防，可使该病得到有效控制。 1 病原学 猪流行性腹泻病毒（Porcine Epidemic Diarrhea Virus, PEDV），与猪传染性胃肠炎病毒、猫冠状病毒、犬胃肠炎病毒和人冠状病毒，同属于冠状病毒科（Coronaviridae）

常见猪病治疗方案

常见猪病治疗方案 一，附红细胞体病： 打针：附弓链净（一般情况） 强米先+速可生（严重情况） 拌料：瑞玛安（附贝安）+瑞玛普欣（激免肽） 二、副猪嗜血杆菌病： 打针：速可生+奇迹或速可生+阿莫西林脂质体 拌料：瑞玛福乐+替米先锋 三：猪圆环病毒病： 打针：超免肽+阿莫西林脂质体或复方哈青注射液+瑞玛恩康 拌料：激免肽（温热康）+黄芪甲苷+阿莫仙（瑞玛福乐） 四、猪瘟病： 先用猪瘟疫苗紧急接种20-50头份，然后 打针：超免肽+强米先或复方哈青注射液+奇迹 拌料：温热康+黄芪甲苷+阿莫仙（瑞玛福乐） 五、蓝耳病： 没有发病的猪，先用芪肽一号配合蓝耳疫苗打一次，三天再用芪肽一号配合猪瘟疫苗20头份注射一次 得病猪，高免血清（复方哈青注射液）+奇迹或超免肽+强米先只用两天，再用超免肽+复方哈青注射液巩固三天 拌料或饮水：黄芪甲苷（紫锥菊多糖）+泰乐威同时葡萄糖+21金维他饮水。

六、仔猪红黄白痢 打针：仔猪止痢神（止痢金方）同时止痢一喷灵喷口 对顽固性拉稀，仔猪止痢神+头孢曲松钠或单用奇迹 拌料：一拉克，对顽固性的用一拉克+肠毒清 七、病毒性腹泻 打针：复方哈青注射液（超免肽）+斩痢绝 拌料或饮水：紫锥菊多糖+10%氟苯尼考或黄芪甲苷+肠毒清饮水八、母猪高热不食 打针：高免血清（混感双效）+头孢120或瑞雪+阿莫西林脂质体饮水：黄芪甲苷+阿莫仙+紫锥菊多糖 九、口蹄疫 打针：激免肽+复方哈青注射液 混感双效（五疫康）+复方哈清 拌料：紫锥菊多糖（猪疫康）+阿莫仙（瑞玛福乐） 十、链球菌 打针：速可生+瑞玛恩康（阿莫西林脂质体） 拌料：瑞玛安+瑞玛福乐 十一、支原体，胸膜肺炎 打针：咳喘风暴+泰奇粉针早期 咳喘风暴+奇迹中期 咳喘风暴+强米先晚期 拌料：喘康+瑞玛福乐（泰乐威）

猪流行性腹泻治疗方法

猪流行性腹泻治疗方法 猪流行性腹泻是由冠状病毒引起的仔猪和育肥猪的一种急性肠道传染病，本病具有一定的季节性，寒冷冬季多发，我国多在12月到来年2月发生。各种年龄的猪都能感染发病，其发病率和死亡率均较高，常在4-5周内传遍整个猪场，严重影响猪的生长发育。 该病潜伏期一般为12小时～18小时。临床表现与典型的猪传染性胃肠炎十分相似。哺乳仔猪发病症状明显，体温正常或稍偏高，表现呕吐、腹泻、脱水、运动僵硬等症状。呕吐多发生于哺乳和吃食之后。同时患猪伴有精神沉郁、厌食、消瘦及衰竭。症状的轻重与年龄大小有关。年龄越小，症状越重，l周以内的哺乳仔猪常于腹泻后2～4天内因脱水死亡，病死率约50%。断奶猪、育成猪发病率很高，几乎达100%，但症状较轻，表现精神沉郁，有时食欲不佳、腹泻，可持续4～7天，逐渐恢复正常。剖解尸体消瘦脱水，皮下干燥，胃肠弛缓、胃底粘膜潮红充血，胃内有多量黄白色的乳凝块。小肠病变具有特征性，通常肠管膨满扩张、充满黄色液体。肠壁变薄透明，肠系膜充血及弥散性出血，肠系膜淋巴结水肿。显微镜下或放大镜下或肉眼观察可见小肠绒毛缩短，显著萎缩。本病的流行病学、临床症状、病理变化基本上与猪传染性胃肠炎相似，但病死率比猪传染性胃肠炎稍低，传播速度也缓慢一些。 本病无特效药治疗。通常应用对症疗法，可以减少仔猪死亡率，促进康复。发病后可减少喂料，及时补水和补盐，口服补液盐的配方为1000毫升水中加20克葡萄糖、3.5克氯化钠、2.5克碳酸氢钠、1.5克氯化钾，预防机体脱水及酸中毒。注射肠毒一针灵，发病后要在饲料中添加营养性抗应激的多维和广谱抗生素防止继发感染。同时应立即封锁，做好全面消毒工作，场区周边可遍撒生石灰，切断传染源。本病病原对乙醚、氯仿等敏感，对外界环境和消毒药抵抗力不强。一般消毒剂可将其灭活。因此严格消毒猪舍、用具、及通道等对阻止本病的传播有较好效果。 冬季预防本病的关键是加强保温工作，一般用保温灯比烧煤效果理想，也可在饲料中添加适量的痢菌净全群预防。同时做好猪场的消毒和清洁卫生工作，保持猪舍干燥。 疫苗防疫每年冬天10月份-次年2月份母猪、种公猪全群接种肠毒特效一针灵，每头1头份，经产母猪产前一个月接种1头份/头，后备母猪产前40天和20天分别接种1头份/头。仔猪断奶后10天-15天接种一次。疫苗注射用后海穴注射效果比颈部肌肉注射好。

猪流行性腹泻病毒S基因的研究进展

猪流行性腹泻病毒S基因的研究进展 摘要：猪流行性腹泻是由猪流行性腹泻病毒引起的猪的一种急性肠道传染病，是导致仔猪早期死亡的重要疫病之一。近年来，猪流行性腹泻的流行区域有扩大的趋势，已成为中国甚至全世界最常见的猪腹泻传染病之一。通过对猪流行性腹泻病毒的基因组概述，S基因及其编码蛋白的功能特性、基于猪流行腹泻病毒S基因的诊断技术及其疫苗研究进展等方面的进行综述。 关键词：猪流行性腹泻病毒；S 基因；S 蛋白；诊断技术；疫苗进展 Abstract:Swine epidemic diarrhea is an acute intestinal infection caused by porcine epidemic diarrhea virus, which is one of the important diseases that lead to the early death of piglets. In recent years, epidemic areas of swine epidemic diarrhea have been expanding and have become one of the most common porcine diarrhea-related diseases in China and even in the world. This review summarizes the genome of Swine Epidemic Diarrhea virus and the functional properties of S gene and its encoded protein based on the diagnostic technique of S gene of swine epidemic diarrhea virus and the research progress of its vaccine. Keywords:Porcine epidemic diarrhea virus; S gene; S protein; diagnostic technique; vaccine progression 引言 20世纪70年代初，猪流行性腹泻（PED）在欧洲等国如英国、荷兰、比利时和捷克就被发现，被认定为一种急性肠道传染病，其主要特点为腹泻、脱水以及呕吐。1977年，成功的分离到这种冠状病毒并命名为流行性腹泻病毒（PEDV）。与欧洲等国同时期，我国也出现了新生仔猪的严重腹泻并死亡的事件，采用各种抗生素均无效果，当时被认为是胃肠炎的传染病。到了20世纪80年代初，采用酶标法证明了这种流行病为猪流行性腹泻病毒[1]~[3]。 PED目前在全球范围内流行广泛，特别是在亚洲国家如中国、日本和韩国，这已经给养猪业带来了严重的冲击。现已表明猪流行性腹泻主要是由于猪流行性腹泻病毒导致的一种急性的肠道传染病。PEVD可以导致不同年龄以及不同品种的猪染病引起严重的腹泻，例如成年母猪20%～85%发病，架子猪、哺乳仔猪以及育肥猪100%的发病。主要病症为：症状轻的为日龄大，症状重的为日龄小。具体表现为：成年猪表现为厌食与呕吐，育肥猪和断奶猪的腹泻仅持续7 d左右，