圈l植入术后3个月。各组脂肪移植物大体观察.A、B、C3组移植物质地软、有光泽,纤维包囊程度轻,体积较大.B组体积明显大于A、C2组.A、c2组问似乎无差异,D组移植物体积较其他组小。质地较硬、灰暗无光泽,可见明显纤维包裹现象A组:5×105个/ml的SVFs混悬液+0.3mI脂肪组织;B组:l×106个/mlSVFs混悬澈+0.3ml脂肪混合;C组:2×t06个/mlSVFs混悬液+O.3ml脂肪混合;D组:0.3mlDMEM完全培养基+0.3ml的脂肪组织(阴性对照组)
FiglFatgrafts3monksafterimplantation.comparedwithfatgraftsingroupD。thegraftsingroupA、BandCwerebiggerandsofterwiththinnerfibrouscyst,andthegraftsingroupBwerethebiggestincellvolume.Nosignificant
differencewasobservedbetweengraftsingroupAandCGroupA:5×10’/mlSVFs+0.3mlfattissue;GroupB:1×106/mlSVFs+0.3mlfattissue;GroupC:2x106/mlSVFs+0.3mlfattissue;GroupD:0.3mlcompletelymedium+0.3mlfattissue(controlgroup)
点计数分别为(68.3333±3.44480)个/10高倍镜视野、(77.8333±0.98319)个/10高倍镜视野、(71.1667±1.60268)个/10高倍镜视野,均显著高于D组(47.1667±10.66615)/10高倍镜视野,且B组脂肪存活率最高(P<0.05)。A、C2组比较差异无统计学意义(P>0.05,图4)。A、B、C、D4组纤维坏死组织点计数分别为(31.5000士3.27109)个/lO高倍镜视野、(22.0000±I.09545)个/10高倍镜视野、(28.6667±2.25093)个/10高倍镜视野、(52.8333±10.40032)个/10高倍镜视野,A、C2组比较差异无统计学意义(P>0.05),A、B、C组均显著低于D组(P<0.05)。
2.1.5血管密度测量:A、B、C、D组血管截面密度分别为(7.3333±I.03280)个/高倍镜视野、(13.1667士3.86868)个/高倍镜视野、(7.3333±2.16025)个/高倍镜视野、(4.5000±0.83666)个/高倍镜视野,A、c2组间差异无统计学意义(P>0.05),A、B、c组均显著高于D组,且B组最高(P<0.05,图5)。
3讨论
应用自脂肪组织新鲜分离的SVFs复合脂肪颗粒为制备软组织修复材料提供了一种新的方法,其
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组别
圈2术后3个月各组脂肪移植物湿重比较:A、B、C组移植
物湿重均数均显著高于对照组D,B组高于A、c组(‘P<
0.05),A、c组间比较差异无统计学意义(P>0.05)A
组:5×105个Iml的SVFs混悬液+0.3ml脂肪组织;B组:
lxt06个/mlSVFs混悬液+0.3ml脂肪混合;c组:2×
106个/mlSVFs混悬液+0.3ml脂肪组织混合;D组:0.3
mlDMEM完全培养基+0.3ml的脂肪组织(阴性对照组)
Fig2Fatgrafts3monthsafterimplantation.Thewetweightof
fatgraftsingroupA.BandCwaBsignificantlyhigherthanthat
incontrolgroupD,andfatgraftsingroupBwasthehighest
amongthem(‘P<0.05),butthedifference
betweengroupAandgroupCw∞notstatisticallysignificant(P>0.05)Group
A:5×105/mlSVFs+0.3mlfattissue;GroupB:l×106/ml
SVFs+0.3mlfattissue;GroupC:2×106/mlSVFs+0.3ml
fattissue;GroupD?0.3mlcompletelymedium+0.3mlfat
tissue(controlgroup)
较脂肪来源问充质干细胞(Adiposederivedstemcells,ASCs)更具有成活率高、吸收率低、使用安全、制备简便和价格低廉的优点,且不需要长期体外培养,减少了污染,可直接应用于自体移植,因此为临床软组织缺损修复及整形美容开辟了广阔的应用前景。
脂肪组织中主要存在两大细胞群,成熟脂肪细胞及SVFs”1。SVFs是一组混杂的细胞群,其中含有血管内皮细胞、脂肪祖细胞、成纤维细胞、周细胞、基质细胞、ASCs以及来自血液的白细胞、红细胞、造血干细胞和内皮祖细胞¨o,也就是说,SVFs中既有成熟细胞也有未成熟细胞。研究表明,脂肪来源的SVFs能够向成骨、成软骨、成脂肪、成血管和神经等方向分化‘”,且其分化为一些重要内皮细胞的能力不受供者年龄的影响【81。在脂肪组织中,SVFs主要位于脂肪组织间质之中,部分SVFs靠近毛细血管,但很少附着于毛细血管,一些SVFs还能形成围绕
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成熟脂肪细胞的网状结构[9j。SVFs注射数周后还可协同作用于内皮细胞共同形成新的微血管与宿主血管相连通,形成网络系统¨…。其与内皮细胞通过这种协同作用形成具有功能的血管并重构血管网络,证实了SVFs不仅通过自分泌作用分泌多种促血管化的细胞因子、抗凋亡因子及其他黏附分子和细胞因子来起作用,还可直接参与血管系统的重建。这些对于移植后的脂肪颗粒成活是极为关键的。
Matsumoto等…1比较了相同个体、相同重量的吸出脂肪组织和切取的脂肪组织,自新鲜分离的SVFs中分离出来的ASCs数目后发现,两者的比值是0.484-1.30,并针对临床上脂肪颗粒移植过程中可能出现ASCs减少的状况,提出了脂肪干细胞协同脂肪颗粒移植(cellassistedlipotransfer,CAL)的概念,即将通过吸脂术获得的缺乏ASCs的颗粒脂肪细胞与SVFs协同移植于裸鼠皮下,颗粒脂肪组织一方面作为自体软组织填充材料,另一方面又是一活的自体生物支架,其结果显示,CAL可使脂肪细胞成活率较单纯脂肪颗粒移植高35%。在动物实验研究的基础上,Yoshimura等¨引应用CAL在临床上为40例患者进行了自体脂肪颗粒隆乳术、细胞协同脂肪移植的隆乳术,术后胸围增加4—8em,而常规脂肪移植的隆乳术胸围只增加2—3cm,有效证实了SVFs能显著提高脂肪移植的细胞存活率。这些均证实SVFs具有明显的促进移植脂肪的存活率,无疑为SVFs促进脂肪颗粒移植技术提供了理想的应用前景。
国外的研究者提出在SVFs辅助脂肪移植中通常采用的SVFs与脂肪颗粒的体积比是1:1,即可取得较为理想的脂肪移植效果,但按1:1体积比进行
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4000
2000
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组别
圈4术后各组移植物存活脂肪组织点计数的比较(个/
10HPF),A、B、C3组存活脂肪组织计数点均数均显著高于
对照组D,且B组高于A、C组(‘P<0.05).A、c2组存活脂
肪组织计数点均数与B组比较差异均无统计学意义(P>
0.05)A组:5×105个/ml的SVFs混悬液+0.3ml脂肪
组织;B组:lx106个/mlSVFs混悬液+0.3ml脂肪组织混
合;c组:2x106个/mlSVFs混悬液+0.3ml脂肪混合;D
组:0.3mlDMEM完全培养基+0.3m1的脂肪组织(阴性对
照组)
Fig4Countingoflivingadipocytes3monthsafterthefatgrafts
(1/10HPF)。thelivingadipocytesingroupA,BandCwere
significantlyhigherthanthoseinthecontrolgroupD,whereas
thelivingadipocyteswerethehigIIe8tingroupB(。P<0.05).
TherewasnostatisticallysignificantdifferencebetweengroupA
andC(P>0.05)GroupA:5x105/mlSVFs+0.3mlfat
tissue;GroupB!lx106/mlSVFs+0.3mlhttissue;Group
C:2X106/mlSVFs+0.3mlfattissue;GroupD:0.3ml
completely
medium+0.3mlfattissue(controlgroup)
移植并不客观准确,且胶原消化过程过于繁琐,因此如何客观准确的评估移植比例,对于脂肪移植是至关重要的。有文献报道在250ml抽脂来源的脂肪中提取SVFs,其中含有IX107一IX105的ASCs…。另有研究称每克皮下脂肪大约可获取0.5X106—2.0×106个有活力的SVFs。13-143。在我们的研究中已证实1m1人脂肪组织中可提取出0.9×106—3.0×106个SVFs,故单位体积的待移植脂肪可混合更多数量的SVFs。有报道‘1纠基质血管成分的含量与术后脂肪组织移植的体积的增长成正相关。我们认为SVFs的浓度是影响移植效果的重要原因之一,利用浓度比进行移植更为精确和客观,而今关于SVFs辅助脂肪移植的有效浓度尚缺乏准确性的报道,如果加入血管基质成分过多,会使得术后脂肪组织的体积无法预测;反之如果加入血管基质成分太少,移植脂肪组织的体积达不到预期效果。故本
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士
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A
组别
围s术后3个月各组脂肪移植物HE染色切片血管密度均
数比较(个/10HPF),A、B、C3组血管密度均数是对照组的
近2倍。差异有统计学意义,且B组高于A、c组(。P<
0.05),A、c2组血管密度均散与B组比较差异均无统计学
意义(P>O.05)A组:5×105个/ml的SVFs混悬液+0.3
ml脂肪组织;B组:l×106个/mlSVFs混惫液+0.3ml脂肪
组织混合;C组:2×106个/mlSVFs混悬液+0.3mI脂肪混
合:D组:0.3mlDMEM完全培养基+0.3ml的脂肪组织
(阴性对照组)
Fig5Bloodvesseldensity3monthsafterthefatgraftswithHE
staining(1/lOHPF).ThebloodvesseldensityingroupA,B
andCisneadytwotimesascomparedwiththoseinthecontrol
groupD,whereasbloodvesseldensitywasthehighestingroup
B(‘P<0.05).Therewasnostatisticallysignificantdifference
between
group
AandC(P>0.05)GroupA:5×10’/mlSVFs+0.3mlfattissue:GroupB:I×10。/mlSVFs+0.3mlfaI
tissue:GroupC:2×106/mlSVFs+0.3
mlfattissue;GroupD:0.3mlcompletelymedium+0.3mlfattissue(control
group)
实验重在研究促进脂肪移植的最佳SVFs浓度,以探讨获得最佳移植效果的方法。
我们制备自人抽脂脂肪来源的3种不同浓度SVFs与自体脂肪颗粒复合移植结果表明,SVFs能够明显改善移植脂肪组织成活的微环境。移植术后3个月观察,实验A、B、C组在湿重、移植脂肪成活率、血管化效应较对照D组高,且B组1×106个/ml的SVFs浓度在湿重、脂肪存活率及血管化效应明显高于其他3组,纤维坏死率明显低于其他组。实验证实了I×106个/ml的SVFs浓度更能促进移植脂肪组织存活率及新生血管生成。我们认为D组脂肪移植物中脂肪细胞大部分坏死、纤维组织增生明显,其重要的原因可能在于ASCs的含量相对较少有关。抽吸出的脂肪中如ASCs的数量不足,会影响其替换进程,术后可出现移植脂肪萎缩。实
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验结果还表明C组2x106个/ml的SVFs浓度未能达到预期效果,这可能与SVFs中存在的免疫细胞(以巨噬细胞为主)有关,浓度较高的SVFs中含有较多的巨噬细胞,有研究表明在体外环境下巨噬细胞的分泌物可有效地抑制ASCs的成脂分化,过多的巨噬细胞在体内移植物中可能也会产生类似的效果¨“,但其具体机制尚有待于进一步研究。
我们认为SVFs在细胞协同脂肪移植中,主要通过3种机制来实现促进脂肪移植存活率:①部分分化机制:部分外源性ASCs可能分化成血管内皮细胞以使受区形成新生血管Ⅲ4“,增加了移植脂肪颗粒的血供,为其生长提供了更加适宜的微环境,因而也降低了移植脂肪颗粒中心区域的液化、坏死程度。与人类MSCs相比。SVFs促血管化效果更为明显¨91。②旁分泌机制:SVFs在移植的早期处于缺氧状态下,可通过旁分泌机制有效地分泌促血管因子及抗凋亡因子,包括血管内皮生长因子(VEGF)、肝细胞生长因子(HGF)等㈣3,从而加速新生血管从移植物的周围受区以“出芽”方式形成。这一作用可能解释了为什么复合一定数量的ASCs的移植脂肪颗粒的外层大体标本及组织学切片上出现了新生血管,因而也降低了移植脂肪颗粒中心区域的液化、坏死程度的原因。③脂肪存活机制:ASCs分布于成熟的脂肪细胞之间。其中的ASCs可能会作为前脂肪细胞参与以后的脂肪细胞分化;移植过程中的创伤愈合过程,包括炎性反应,可能触发ASCs的多向分化,如分化成脂肪细胞、血管内皮细胞及周围细胞等。总之,SVFs在体内能够分化为血管内皮细胞并促进了游离移植脂肪组织的再血管化,提高了脂肪组织的存活率并减轻了纤维化。证明了SVFs辅助移植是一种有效的细胞疗法。
虽然SVFs辅助脂肪移植的长期效果及临床安全性有待进一步观察和探索,但由于SVFs储量丰富,易于获取,并可反复采取,已被证明拥有促血管化、多种分化潜能及免疫调节功能的特性,因此,我们相信,SVFs复合自体脂肪颗粒移植必将成为于细胞疗法最令人瞩目的焦点,成为整形美容外科一项经济实用的、有价值的临床治疗技术。
参考文献
[1】TabitcJ,SlackGC,FanK,eta1.Fatgraftingvemn8adipose-derivedstemcelltherapy:distinguishingindications,techniques,
andoutcomes.AestheticPlastSurg。2012,36(3):704-713.[2]YoshimuraK,SugaH,EtoH.Adipose-derivedstem/progenitoreells:rolesinadiposetissuemmadeliugandpotentialuscforsoft
tissueaugmentationRegenMed,2009,4(2):265-273.
[3]付冰川,高建华。鲁峰,等.新鲜分离的脂肪SVF细胞促进脂肪移植存活的实验研究.中华整形外科杂志,2010,26(4):
289-294.?
[4]GundersenH.BendtsenT.KorboL.etaLSomenew,simpleandefficientstereelogicalmethodsandthekueeinpathological
researchanddiagnosis.APMIS,1988.96(5):379-394.
[5]GimbleJM。BunnellBA,ChinES,etat.Concisereview.-Adipose.derivedstromalvascularfractioncellsandstemceils:
let’snotgetlostintranslation.StemCeils。201I,29(5):749?
754.
[6]ZukPA,ZhuM,AshjianP,ela1.Humanadiposetissueisasourceofmultipotentstemceils.MolBidCeil,2002,13(12)t
4279-4295.
[7]BunnellBA,FinalM,GagIiardiC,eta1.Adipose-derivedstemcells:isolation,expansion
anddifferentiation.Methods,2008.45(2):lt5-120.
[8]ZhangP,MoudgillN,HagerE,eta1.Endothelialdifferentiationofadipose-derivedstemcellsfromelderlypatientswith
eurdiovaseulardisease.StemCellsDev,2011,20(6):977-988.[9】MaumusM,PeyrafitteJA,D7AngeloR,eta1.Nativehumanadiposestromalcells:localization,morphologyandphenotype.
IntJ0be8(Lend),2011。35(9):114I一1153.
[10]TraktuevDO,PraterDN,Merfeld-Clau∞S,eta1.Robustfunctionalv∞cularnetworkformationinvivabycooperationof
adiposeprogenitorandendothelialcells.CircRex,2009,104
(12):1410—1420.
[11]MatsumotoD,SateK,GondaK,ets1.Cellassistedlipotrausfor:supportiveuse
ofhumanadiposestromalcellsforsofttissueaugmentationwithlipoinjection.TissueEng,2006,12(12):3375—
3382.
[12]YoshimuraK.ShigeuraT,MatsomotoD.eta1.Characterizationoffreshly
isolatedandculturedeellsderivedfromthe
fatty
andfluidportionsofliposuetionaspirates.CellPhysiol,2006,208(1):64—
76.
[13】MasudaT,FumeM,MatsudaT.Novelstrategyforsofttissueaugmentation
basedontransplantationoffragmentedomentumandpreadipocyles.TissueEng,2004,10(11-12):1672?1683.
[14]DeUgartaDA,MorizonoK,ElbarbaryA,eta1.Comparisonofmulti-lineage
sellsfromhuman
adiposetissueandbonemarrow.CeliaTissuesOrgans。2003.174(3):101—109.
[15]YoahimuraK.SateK.AoiN,eta1.Cell—assistedlipotransferforcosmeticbreastaugmentation:supportiveuseofadipose?derived
stem/stromalcells.AesthPlustSurg,2008,32(1):48-57.
[16】LacmqaD,TalebS,KeophiphathM,elal,Maerophage-secretedfactorsimpairhumanadipogcncsis:involvementof
pminflammatorystateinpreadipocytes.Endocrinology,2007,
148(2):868-877.
[17】Pie.nat.BenardV,SilvestreJS,CousinB,eta1.plasticityofhumanadiposelineageceilstowardendothelialcells:physiologiealand
therapeuticperspectives.Circulation。2004.109(5):656-663.[18]MiranvilleA,Hee^chenC.Sengunesc,ets1.Improvementofpostnatalneovascularizationbyhumanadiposetissuederivedstem
cells.Circutation.2006,110(3):34%355.
[19]KimY,KimH,ChoH,eta1.Directcomparisonofhumnmesenchyrealstemcellsderivedfromadiposetissuesandbone
mallowinmediatingneovascularizationinresponsetovascular
isehemia.Cell
PhysiolBioehem,2007,20(6):867-876.
[20]RehmanJ。TraktuevD,LiJ。eta1.Secretionofangiogenicandsntiapoptotic
factorsbyhumanadiposestromalcells.Circulation,2004,L09(10):1292.1298.
(收稿日期:2011-01-13)
促进脂肪移植的最佳SVFs浓度的实验研究
作者:朱茗, 鲁峰, 高建华, 廖云君, ZHU Ming, LU Feng, GAO Jian-hua, LIAO Yun-jun 作者单位:朱茗,ZHU Ming(武警广东省总队医院), 鲁峰,高建华,廖云君,LU Feng,GAO Jian-hua,LIAO Yun-jun(南方医科大学南方医院整形外科,广州,510515)
刊名:
中华整形外科杂志
英文刊名:Chinese Journal of Plastic Surgery
年,卷(期):2012,28(4)
被引用次数:1次
参考文献(20条)
1.Tabit CJ.Slack GC.Fan K Fat grafting versus adiposederived stem cell therapy:distinguishing indications,techniques,and outcomes[外文期刊] 2012(03)
2.Yoshimura K.Suga H.Eto H Adipose-derived stem/progenitor cells:roles in adipose tissue remodeling and potential use for soft tissue augmentation 2009(02)
3.付冰川.高建华.鲁峰新鲜分离的脂肪SVF细胞促进脂肪移植存活的实验研究[期刊论文]-中华整形外科杂志
2010(04)
4.Gundersen H.Bendtsen T.Korbo L Some new,simple and efficient stereological methods and their use
in pathological research and diagnosis 1988(05)
5.Gimble JM.Bunnell BA.Chiu ES Concise review:Adipose-derived stromal vascular fraction cells and stem cells:let' s not get lost in translation 2011(05)
6.Zuk PA.Zhu M.Ashjian P Human adipose tissue is a source of multipotent stem cells[外文期刊]
2002(12)
7.Bunnell BA.Flaat M.Gagliardi C Adipose-derived stem cells:isolation,expansion and differentiation 2008(02)
8.Zhang P.Moudgill N.Hager E Endothelial differentiation of adipose-derived stem cells from elderly patients with cardiovascular disease[外文期刊] 2011(06)
9.Maumus M.Peyrafitte JA.D'Angelo R Native human adipose stromal cells:localization,morphology and phenotype[外文期刊] 2011(09)
10.Traktuev DO.Prater DN.Merfeld-Clauss S Robust functional vascular network formation in vivo by cooperation of adipose progenitor and endothelial cells[外文期刊] 2009(12)
11.Matsumoto D.Sato K.Gonda K Cell assisted lipotransfer:supportive use of human adipose stromal cells for soft tissue augmentation with lipoinjection[外文期刊] 2006(12)
12.Yoshimura K.Shigeura T.Matsumoto D Characterization of freshly isolated and cultured cells derived from the fatty and fluid portions of liposuction aspirates 2006(01)
13.Masuda T.Furue M.Matsuda T Novel strategy for soft tissue augmentation based on transplantation
of fragmented omentum and preadipocytes[外文期刊] 2004(11-12)
14.De Ugarte DA.Morizono K.Elbarbary A Comparison of multi-lineage cells from human adipose tissue and bone marrow 2003(03)
15.Yoshimura K.Sato K.Aoi N Ceil-assisted lipotransfer for cosmetic breast augmentation:supportive use of adipose-derived stem/stromal cells[外文期刊] 2008(01)
https://www.wendangku.net/doc/ef13303127.html,casa D.Taleb S.Keophiphath M Macrophage-secreted factors impair human adipogenesis:involvement of proinflammatory state in preadipocytes 2007(02)
17.Planat-Benard V.Silvestre JS.Cousin B Plasticity of human adipose lineage cells toward endothelial cells:physiological and therapeutic perspectives[外文期刊] 2004(05)
18.Miranville A.Heeschen C.Sengenes C Improvement of postnatal neovascularization by human adipose tissue derived stem cells[外文期刊] 2004(03)
19.Kim Y.Kim H.Cho H Direct comparison of human mesenchymal stem cells derived from adipose tissues and bone marrow in mediating ueovascularization in response to vascular ischemia[外文期刊] 2007(06) 20.Rehman J.Traktuev D.Li J Secretion of angiogenic and antiapoptotic factors by human adipose stromal cells[外文期刊] 2004(10)
引证文献(1条)
1.路曼君.郭丹凤.唐瑛细胞辅助的自体脂肪移植术治疗先天性乳房发育不良[期刊论文]-中国美容医学 2013(1)本文链接:https://www.wendangku.net/doc/ef13303127.html,/Periodical_zhzxsswk201204013.aspx