王玉龙综述

基因修饰骨髓干细胞治疗下肢缺血的研究进展

王玉龙张金池＊

【摘要】随着基因技术的发展，基因修饰干细胞用于下肢缺血疾病的治疗逐渐成为可能。基因修饰能使的干细胞更好应用于下肢缺血的治疗。在细胞移植前，进行细胞基因修饰，提高了细胞的存活，尤其是干细胞，且可增强细胞治疗效果，但该治疗方法目前仅限于实验阶段。本文就基因修饰骨髓间充质干细胞目前在下肢缺血疾病治疗应用方面做一综述。

【关键词】基因治疗；干细胞；下肢缺血

Genetic modification of bone marrow stem cells in treatment of hind limb ischemia W ANG Yu-Long, ZHANG Jin-Chi

Department of Vascular Surgery, First Affiliated Hospial of Fujian Medical University, Fuzhou 350005, China

【Abstract】With the development of gene technology,it is gradually possible and much better for genetic modification of bone marrow stem cells in treatment of hindlimb ischemia.Gene modification of cells prior to their transplantation, especially stem cells, enhances their survival and increases their function in cell therapy.But this treatment is only used for the experimental stage.Here, we review the current uses of gene-modified bone marrow stem cells in vascular disease.

【Key words】gene therapy，stem cells ，hindlimb ischemia

随着我国人口老龄化，重症肢体缺血日渐增多。目前，传统的搭桥手术或经皮血管腔内成形术和各种药物治疗等对此类疾病的治疗常无能为力，截肢术仍常被用以解除患者的缺血性静息痛等症状，但多数病人难以接受。因此，寻求一种新的有效的治疗方法成为亟待解决的医学。近年来，随着基因转染，分子克隆技术的不断发展，使基因修饰干细胞治疗下肢缺血的研究成为可能，但该方法目前仅限于实验阶段。现就将其在下肢缺血的研究进展做一综述。

1 基因修饰骨髓间充质干细胞治疗下肢缺血的方法

自20世纪90年代以来，血管基因治疗的发展为下肢缺血性疾病带来了新的希望。这种通过应用血管生长因子或转基因治疗促使内皮细胞增生迁移，从而促进缺血组织血管新生及侧支血管形成，改善肢体血供的治疗方法，称为血管新生疗法(therapeutic angiogenesis)[1] 。实施治疗的方法分为直接法和间接法两种。直接法又称体内法(invivo)，系将重组的外源DNA本身或经适当加工(如用脂质体包裹或与特异蛋白结合)后，直接注入体内特定靶细胞或器官或借助定向组分，经循环进入并使之在局部表达而达到治疗目的。间接法又称体外法(exvivo)，是先将目的基因在体外导人中介细胞，再将其回输人体内，目的基因在体内的表达产物可直接纠正或补偿病变基因的影响，也可经循环或旁分泌途径作用于靶细胞而发挥作用[2]。目前的基因导入生物个体途径有血管内水凝胶球囊法、肌肉直接注射法和基因缝线法等。用球囊导管将含有外源性基因的载体直接送入血管，转染血管内皮细胞并获得表达，是一种快捷的方法。关于基因修饰骨髓间充质干细胞治疗下肢缺血，从治疗的角度看，就是将新的遗传物质通过载体系统转移至骨髓间充质干细胞，使干细胞获得新的特性，而后把基因修饰后的干细胞通过以上手段导入缺血的下肢，以达到缓解和治疗下肢缺血的目的。

2 基因的载体

在基因修饰干细胞的过程中，关键在于基因的转移。目前对哺乳动物细胞的基因转染的方法，可分为病毒转导法和非病毒转导法两大类，前者如逆转录病毒和腺病毒载体，后者如阳离子脂质体载体、DNA直接注射法[3]。用于血管病的载体基因转移，主要有逆转录和腺病毒载体、脂质体和(或)仙台病毒复合物载体，

DOI：10.3760/cma.j.issn.1673-4203.2009.08.000

基金项目：福建省科技厅基金资助省属高校项目（NO.2008F5022）

作者单位：350005福州，福建医科大学附属第一临床医学院血管外科，福建医科大学血管与腔内血管外科研究室

通讯作者：张金池，Email: fjfyzjc@https://www.wendangku.net/doc/e713579867.html,

以及显微注射法。常用的非病毒载体有脂质体、配体-多聚赖氨酸-DNA复合物、三聚体、重组乳糜微粒残余体等。其中阳离子脂质体在培养细胞的基因转染中具有较好的效果，但总的来说其基因转染的效率还不如病毒载体。对于病毒载体大致分为DNA病毒、RNA病毒，前者如逆转录病毒，后者如腺病毒。但是对于腺病毒载体虽然具有基因转染率高等优点，可是其在活体存活时间相对较短，这就不利于血管疾病的长期治疗。逆转录病毒则克服了这一缺点，但在基因转染时，使得病理性血管新生如粥样斑块生长、实体肿瘤血管增生和血管瘤的危险几率增加。近年来研制出的慢病毒载体(一种新型的逆转录病毒载体)，来源于人类免疫缺陷病毒，具有同时感染非分化细胞和分化细胞的能力，能够把目的基因高效率的整合到宿主细胞基因上，而且其安全性比以往更有保证，已逐渐成为新一代的基因转染工具[4]。

3 目的基因

关于目的基因，目前使用最多者为血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)，它是血管内皮特异的生长因子，具有显著促进新生血管形成的功能。由于RNA的剪切拼接不同可产生数种异构体，目前比较肯定的有四种：VEGF121、VEGF165、VEGF189、VEGF206 。一般情况下VEGF165为最主要的异构体，是其生物学作用的主要形式，因而目前用VEGF基因治疗多选用VEGF165基因[5]。其次是肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor，HGF) 和血管调理素(angiotropin)，前者有促进血管生成的功能，如使血管内皮细胞增殖、增加局部血液循环、减轻肌肉萎缩等。后者不能刺激血管内皮细胞有丝分裂，但能刺激毛细血管内皮细胞迁移，并形成管样或索状结构。此外尚有成纤维细胞生长因子(FGF) ，可分为酸性FGF(aFGF)和碱性FGF(bFGF)，后者能强烈刺激血管形成，bFGF也有多种异构体，但FGF-2是其生物学作用的主要形式[6]。血小板衍化的内皮细胞生长因子(platelet derived endothelialcell growth factor．PD ECGF)有促血管生长活性，20ug/ml即可使人和牛的血管内皮细胞有丝分裂，还能促使鸡胚绒毛尿囊膜的血管生长。表皮生长因子(eplidermal growth factor，EGF)和转化生长因子(transforming growth factor，TGF)均可促使体内血管再生。关于血管生成素(angiongenin，Ang)，Jiang Shujia等的研究表明，Ang-1具有促进血管再生，修复梗死心室的能力[7]。但就目前，应用较多的为VEGF165与bFGF两种基因。

4 基因治疗在动物实验性应用

关于应用基因的治疗方面，分为经体外(ex vivo)和经体内(in vivo)两种方法。经体外，指由活体上取出特定的细胞，将正常基因转入该细胞，筛选扩增后移入活体内，以达到治疗的目的；经体内，指将治疗用的基因经遗传工程处理后，直接植入活体内，如将含有VEGF165基因的质粒或病毒载体与生物材料混合后植入活体内，细胞在迁移入生物材料后能自动摄取材料中的治疗基因，以达到体内完成基因转染的效果。

4.1 经体外(ex vivo)基因治疗

在国内，华平、陈炬等以腺病毒为载体，把bFGF基因转染入大鼠间充质干细胞观察碱性成纤维细胞因子的表达。结果显示，采用腺病毒介导的基因转染技术，可以将碱性成纤维细胞生长因子转染至骨髓间充质干细胞中并有外源性基因和蛋白的表达[10]。这间接证明了经体外bFGF基因也具有促进血管新生的可能。

4.2 经体内(in vivo) 基因治疗

对于VEGF165基因的应用，在国内，陈丰等以腺相关病毒为载体用VEGF-165基因治疗家兔的缺血损伤的下肢。结果显示家兔下肢缺血改善，有新生血管生成，出血率下降，血液循环改善[8]。对于bFGF基因，国外的Fujihara等应用bFGF对雄性SD大鼠的缺血皮瓣进行治疗，治疗7 d后，显示大鼠的血运明显改善，皮瓣成活率提高[9]。Lee JS等联合VEGF 和bFGF两个基因，对小鼠缺血后肢进行基因治疗，使小鼠后肢坏死率下降为0%，而单一应用时，小鼠后肢坏死率为7%～29%[11]。

5 基因治疗在临床实验性应用

在临床应用上，鉴于细胞经基因修饰后移植的安全性，目前应用较多的为经体内的方法。如Baumgartner 等用phVEGF165基因表达质粒局部肌肉注射治疗9例患有缺血性溃疡和静息痛的患者，治疗后踝肱指数(ABI)明显增加，溃疡愈合率为57％。该疗法曾在100多例患者取得良好的效果[12]。Cooke等对1例85岁患慢性严重下肢缺血的妇女连续6周每周静脉滴注1次重组bFGF，治疗前后行血管造影，并通过监测ABI （水银表体积描记法），反复监测下肢血流改变。治疗4周时患者下肢有较好的临床效果，表现为行走距离增加，缺血疼痛缓解，ABI证实末梢血流量增加[13]。

6 基因治疗中存在的一些问题和展望

目前虽然在临床已有基因治疗有效的报道，但是这些初步的结果与人们的期望，还相距较大。第一、基因修饰干细胞进行移植可能还存在着很大的安全隐患，因为导入外源性促血管生成因子的基因，有导致病理性血管新生如粥样斑块生长、实体肿瘤血管增生和血管瘤的危险;第二、血管生成需要多种因子协同作用，几种生长因子联合治疗是否更有效，有待证明。此外，基因转染的效率、安全的剂量、目的基因的靶向性、对基因表达的严密调控、新生血管是否稳定等问题尚待进一步研究。另一方面就是，集中在基因治疗载体系统的改建、基因导入体内新途径的建立、基因治疗范围或适应证的扩大、基因治疗策略的优化和治疗作用机制的阐明等方面，这些都是目前基因治疗所亟待解决的问题。尽管基因治疗还存在多方面问题，但是一些无法治愈的疾病，一直威胁着我们的健康和生命，新的疾病也不断向我们发出挑战，科学工作者和临床医生都在积极寻找解决这一问题的新方法，基因修饰干细胞成为我们研究的焦点。而且伴随着基因干扰技术的发展,如siRNA技术,其具有基因抑制效果确切、抑制具有严格的序列特异性、作用迅速等特点，故与基因替代、反义寡核苷酸治疗、细胞因子基因治疗等传统的肿瘤基因治疗方法相比，RNAi技术有着无可比拟的优势[14]。siRNA技术使得基因表达具有可控性[3]，这就使基因治疗在不久即成为可能，将为人类的健康带来新的希望。随着这些研究的进展，基因治疗与干细胞移植有望发展成为治疗下肢缺血性疾病的新途径，那样将会有更多的患者免于截肢。

参考文献

[1] Bobek V，Taltynov O，Pinterova D，et a1．Gene therapy of the ischemic lower limb Therapeutic angiogenesis[J].V ascul Pharmacol，2006，44(6)：395-405.

[2] Ribas A. Genetic Modified Dendritic for cancer immunotherapy[J].Curr Gene Ther，Curr Gene Ther. 2005，5(6)：619-628.

[3] Phillips MI，Tang YL. Genetic modification of stem cells for transplantation[J]. Adv Drug Deliv Rev，2008，60(2)：160-172.

[4] Kalpana GV．Retroviral vectors for liver directed gene therapy[J]. Semin Liver Dis，1999，9(1)：27.

[5] Lin HH，Chen YH，Chang PF，et al. Heme oxygenase-1 promotes neovascularization in ischemic heart by coinduction of VEGF and SDF-1[J]. J Mol Cell Cardiol，2008，45(1)：44-55.

[6] Ulbrich C，Westphal K，Baatout S，et al. Effects of Basic Fibroblast Growth Factor on Endothelial Cells Under Conditions of Simulated Microgravity[J]. J Cell Biochem，2008，104(4)：1324–1341.

[7] Shujia J，Haider HK，Idris NM，et al. Stable therapeutic effects of mesenchymal stem cell-based multiple gene delivery for cardiac repair[J]. Cardiovasc Res，2008，77(3)：1-9.

[8] Feng C，Zui T，Chang YD，et al.Adeno-associated virus vectors simultaneously encoding VEGF and angiopoietin-1 enhances neovascularization in ischemic rabbit hindlimbs[J]. Acta Pharmacol Sin. 2007，28 (4)：493–502.

[9] Fjhara Y，Koyama H，Nishiyama N，et al.Gene transfer of bFGF to recioient bed improves survival of ischemic skin flap[J].Brit J Plast surg，2005，58(4)：511-517.

[10] 华平，陈炬，张惠忠，等. 碱性成纤维细胞生长因子基因转染大鼠骨髓间充质干细胞后

目的基因的表达[J]. 中国临床康复，2006，10(45)：4 -7.

[11] Lee JS，Kim JM，Kim KL，et al. Combined administration of naked DNA vectors encoding VEGF and bFGF enhances tissue perfusion and arteriogenesis in ischemic hindlimb[J]. Biochem Biophys Res Commun，2007，360(4)：752–758.

[12] Baumgatrner I，Pieczek A，Manor O，et a1．Constitutive expression of phVEGF165 after intramuscular gene transfer promotes collateral vessel development in patients with critical limb ischemia[J]. Circulation，1998，97(12)：11l4-1123.

[13] Cooke JP，Bhatnagar R，Szuba A，et a1．Fibroblast growth factor as therapy for critical limb ischemia：a case report[J]. V asc Med，1999，4(2)：89-91.

[14] 王春毅，傅仲学. RNA干扰技术在肿瘤基因治疗方面的研究进展[J]. 国际外科学杂志，2006，33（1）：

67-70.

(收稿日期：2009-06-04)

英语原文及其翻译

Exploring Filipino School Counselors’ Beliefs about Learning Allan B. I. Bernardo [Abstract] School reform efforts that focus on student learning require school counselors to take on important new roles as advocates of student learning and achievement.But how do school counselors understand the process of learning? In this study, we explore the learning beliefs of 115 Filipino school counselors who indicated their degree of agreementwith 42 statements about the process of learning and the factors thatinfluence this process.A principal components analysis of the responses to the 42 statements suggested three factors:(F1)social-cognitive constructivist beliefs, (F2) teacher-curriculum-centered behaviorist beliefs,and (F3) individual difference factors.The preliminary results are briefly discussed in terms of issues related to how Filipino school counselors’ conceptions of learning may guide their strategies for promoting student learning and achievement. [Key words]beliefs about learning, conceptions of learning, school counselors, student learning, Philippines School reform efforts in different parts of the world have focusedon students’learning. In particular,most school improvement programsnow aim to ensure that students acquire the high-level knowledge and skills that help them to thrive in today’s highly competitive globaleconomy (e.g., Lee & Williams, 2006). I n this regard, school reform programs draw from various contemporary theories and research on learning (e.g.,Bransford,Brown, & Cocking, 1999; Lambert & McCombs, 1998).The basic idea is that all school improvement efforts should be directed at ensuring students achieve high levels of learning or attainment of well-defined curricular objectives and standards.For example, textbooks (Chien & Young, 2007), computers and educational technology (Gravoso, 2002; Haertnel & Means, 2003;Technology in Schools Task Force, 2003), and educational assessment systems (Black & Wiliam2004; Cheung & Ng, 2007; Clark, 2001; Stiggins, 2005) are being reconsidered as regards how they can effectively provide scaffolds and resources for advancing student learning. Likewise,the allocation and management of a school’s financial resources are assessed in terms ofwhether these are effectively mobilized and utilized towards improving student learning (Bolam, 2006; Chung & Hung, 2006; Retna, 2007). In this regard, some advocates have also called for an examination of the role of school counselors in these reform efforts (Herr, 2002). Inthe United States, House and Hayes (2002) challenged school counselors to take proactive leadership roles in advocating for the success of all

[总结范本]护士个人综述总结范文3篇

护士个人综述总结范文3篇 综述是指就某一时间内，作者针对某一专题，对大量原始研究论文中的数据、资料和主要观点进行归纳整理、分析提炼而写成的论文。为本次工作做一个总结，护士个人的综述总结范文 护士个人综述总结范文篇一： 时光荏苒，xx年已经过去了，回首过去的一年，内心不禁感慨万千，这一年里，我做为一名责任护士，在护士长的正确领导下，在科室同事们的关心帮助下，切实坚持以病人为中心，以质量为核心的护理服务理念，适应社会发展的新形势，以服务人民奉献社会为宗旨，以病人满意为标准，全心全意为人民服务。回顾一年来的总体工作，有心酸、有委屈、也有成就： 一、深入学习、提升素质，扎实练好基本功 加强自身职业观道德观的培育。在工作中我时时刻刻告诉自己要坚持高度负责、热情服务的方针，切实做到病人在与不在一个样，领导在与不在一个样，本着为病人高度负责的心态，加强四自修养，即自重、自省、自警、自励，发挥做为一名责任护士的主动精神，在自己内心深处用职业道德标准反省、告诫和激励自己，培养自己的道德品质。 注重护士职业形象，加强自身业务水平。工作中注意文明礼貌服务，坚持文明用语，工作时仪表端庄、着装整洁、发不过肩、不浓妆艳抹、不穿高跟鞋、礼貌待患、态度和蔼、语言规范。业务知识方面，平时坚持学习、注重学习业务基础知识和本科室相关专业知识，如《护士三基三严》、《护理基础知识》等，贯彻以病人为中心，以质量为核心的服务理念，提高了自身素质及应急能力。一年来，在护士长耐心细致的指导和支持帮助下，本人在很多方面都有了长足的进步和提高，为明年护师的专业技术资格考试打下了良好的基础。 第1 页共8 页

二、耐心细致、热情服务，做到以患者为中心 我本着把工作做的更好这样一个目标，以热心、细心、耐心为工作准则，开拓创新意识，积极圆满的完成了xx年的本职工作。 认真做好实习护生的带教工作，教育他们工作中需要认真负责，态度端正、头脑清晰以及科室相关的专业知识。我做到放手不放眼，亲自示范操作，直到同学弄懂弄通为止，获得同学们的好评。 工作态度端正，医者父母心，本人以千方百计解除病人的疾苦为己任。工作中希望所有的患者都能尽快的康复，于是每次当我进入病房时，我都利用有限的时间不遗余力的鼓励他们，耐心的帮他们了解疾病、建立战胜疾病的信心，默默地祈祷他们早日康复。对自己所负责的患者真正做到热心、细心、耐心。在工作中能够正确认真的对待每一项工作，工作投入，热心为患者服务，认真遵守劳动纪律，保证按时出勤，出勤率高，有效利用工作时间，坚守岗位，需要加班完成工作按时加班加点，保证工作能按时完成。 回顾xx年，取得了一些成绩，同时也存在不足，比如作风有些急燥等。在新的一年，我将会以崭新的姿态，再接再励地完成自己的本职工作以及科室领导和护士长所交付的其它工作，认真学习，严格要求，使自己成为一名优秀的护士而不懈努力。 护士个人综述总结范文篇二： 作为一名医院护士长，我学践科学发展观，用发展观指导工作，坚持高标准，严格要求，努力在管理与服务上下功夫、加强安全护理，加强护理安全管理，完善护理风险防范措施，有效地回避护理风险，为病儿提供优质、安全有序的护理服务。以病人为中心，提倡人性化服务，加强护患沟通，提高病人满意度，避免护理纠纷。定期与不定期护理质量检查，保持护理质量持续改进。医学教。育网搜集整理一年来工作得到病人的肯定与好评，现将20**年护士长工作总结如下： 一、加强护理安全管理，完善护理风险防范措施，有效地回避护理风

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年终总结概括 年终总结概括 范文一：年终总结概括 20xx年已经接近尾声了。对一年来的工作学习进行回顾和分析，只能说是忙碌而充实。一年来在领导的指导、关心下，在同事们的帮助和亲切配合下，我的工作取得了一定进步，为了总结经验，吸取教训，更好地前行，现将我这一年的工作总结如下： 一、端正态度，热爱本职工作 态度决定一切，不能用正确的态度对待工作，就不能在工作中尽职尽责。既然改变不了环境，那就改变自己，尽到自己本份，尽力完成应该做的事情。 只有热爱自己的本职工作，才能把工作做好，最重要的是保持一种积极的态度，本着对工作积极、认真、负责的态度，踏实的干好本职工作。 二、培养团队意识，端正合作态度 在工作中，每个人都有自己的长处和优点。培养自己的团队意识和合作态度，互相协作，互补不足。工作才能更顺利的进行。仅靠个人的力量是不够得，我们所处的环境就需要大家心往一处想，劲往一处使，不计较个人得失，这样才能把工作圆满完成。 三、存在不足

工作有成绩，也存在不足。主要是加强业务知识学习和克服自身的缺点，今后要认真总结经验，克服不足，把工作干好。 1、强化自制力。 工作中无论你做什么事，都要对自己的工作负责，要加强自我克制和容忍，加强团队意识，理智的处理问题，不给大家和谈对造成麻烦，培养大局意识 2、加强沟通。 同事之间要坦诚、宽容、沟通和信任。我能做到坦诚、宽容和信任，就欠缺沟通，有效沟通可以消除误会，增进了解融洽关系，保证工作质量，提高工作效率，工作中有些问题往往就是因为没有及时沟通引起的，以后工作中要与领导与同事加强沟通。 3、加强自身学习，提高自身素质。 积累工作经验，改进工作方法，向周围同志学习，注重别人优点，学习他们处理问题的方法，查找不足，提高自己。 最后还是感谢，感谢领导和同事的支持和帮助，我深知自己还存在很多缺点和不足，工作方式不够成熟，业务知识不够全面等等，在今后的工作中，我要积累经验教训，努力克服缺点，在工作中磨练自己，尽职尽责的做好各项工作! 范文二：年终总结概括 从2021来到XX公司，到现在已经有3年时间了。在这三年的工作中，经历了很多事情，获得了很多经验教训。在这里，我要感谢领导，给了我一个成长的空间、勇气和信心。在这几年的

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分子生物学 转座子 相关

第十五章转座子 基因组是通过获得新序列以及原有序列重排发展而来的。 新序列的意外引入改变基因组间承载信息的能力。染色体外元件(Extrachromosomal element)通过调节基因的长度(通常是很短的)来转移信息。在细菌中，质粒是通过接合作用(见12章)，而噬菌体则是通过感染来转移信息(见第11章)。噬菌体和质粒都会在其复制子(Replicon)中偶尔携带一些宿主基因。有些细菌中有通过转化作用直接转移DNA的现象。真核生物中，一些病毒(尤其是逆转录病毒)能够在感染周期内转移遗传物质。 重排(Rearrangement)是由基因组内部程序发起的，例如非互惠(Nonreciprocal)重组是由同源重组时错配导致的。非互惠重组导致座位的复制或重排(见第4章)。基因组的序列复制是产生新序列的主要来源。复制可能继承原来的功能或可能产生新功能，而且，在分子水平上发现独立基因组间差异明显，是由于重组导致了这些多态性(Polymorphism)。在第4章已经讨论过，微卫星间重组可调整其长度以便使每个基因组都是独特的。 多态性的另一个主要原因是由转移元件转座(Transposon)产生的：它们是基因组中可移动的不连续序列，可在基因组内从一个座位转到另一个座位。转座子特征是它们并不利用独立元件(如噬菌体或质粒DNA)，而只是从基因组的一个位点直接移动到另一个位点，与大多数基因组重构的其它程序不同，转座子不依赖序列供体和接体位点间的任何联系。转座子非常严格地自我转座到同一基因组的新位点，有时增加一些序列，因此它们可作为基因组间序列转移的内部载体，是基因组内突变的主要来源。 转座子可分两种类型。本章讨论的转座子与编码蛋白质的DNA序列共存并操纵这些DNA以便使其在基因组内复制自我。下章讨论的转座子与逆转录病毒相似。它们通过将RNA转录成DNA拷贝的能力而迁移；DNA拷贝同时被整合进基因组的新位点。 通过DNA移动的转座子在真核和原核生物中都已发现。每种细菌的转座子都携带编码其自身转座所需酶的基因，但也需要它所驻留基因组的辅助功能(如DNA聚合酶或DNA促旋酶)。类似的系统也存在于真核生物中，但其有关酶的功能还很清楚。一个基因组可同时包含功能元件和非功能元件。通常真核基因组中的主要元件是有缺陷的，它们失去了独立转座的能力，但它们仍可被功能性转座子产生的酶识别而被动专座。 转座元件可直接或间接启动基因组的重排。 ?转座元件本身可导致序列的缺失、插入或将宿主序列转到一个新的位点。 ?转座子作为细胞重组系统的底物是通过“同源便携区(Portable region of homology)”的功能实现的。在不同座位(或不同染色体)上同一转座子的两个拷贝可能为相应的重组提供位点。这种交换会产生缺失、插入、倒置或转座。 转座子的间歇活动似乎为自然选择提供了一个模糊的目标。这支持了以下观点：转座元件既对表型有积极的作用也有消极作用。它构成所谓“自私(Selfish)DNA”，只顾自身繁殖。实际上，转座可作为一个事件考虑，转座子是驻留在基因组内的独立实体，这是与其它细胞重组系统的区别所在。

文献翻译英文原文

https://www.wendangku.net/doc/e713579867.html,/finance/company/consumer.html Consumer finance company The consumer finance division of the SG group of France has become highly active within India. They plan to offer finance for vehicles and two-wheelers to consumers, aiming to provide close to Rs. 400 billion in India in the next few years of its operations. The SG group is also dealing in stock broking, asset management, investment banking, private banking, information technology and business processing. SG group has ventured into the rapidly growing consumer credit market in India, and have plans to construct a headquarters at Kolkata. The AIG Group has been approved by the RBI to set up a non-banking finance company (NBFC). AIG seeks to introduce its consumer finance and asset management businesses in India. AIG Capital India plans to emphasize credit cards, mortgage financing, consumer durable financing and personal loans. Leading Indian and international concerns like the HSBC, Deutsche Bank, Goldman Sachs, Barclays and HDFC Bank are also waiting to be approved by the Reserve Bank of India to initiate similar operations. AIG is presently involved in insurance and financial services in more than one hundred countries. The affiliates of the AIG Group also provide retirement and asset management services all over the world. Many international companies have been looking at NBFC business because of the growing consumer finance market. Unlike foreign banks, there are no strictures on branch openings for the NBFCs. GE Consumer Finance is a section of General Electric. It is responsible for looking after the retail finance operations. GE Consumer Finance also governs the GE Capital Asia. Outside the United States, GE Consumer Finance performs its operations under the GE Money brand. GE Consumer Finance currently offers financial services in more than fifty countries. The company deals in credit cards, personal finance, mortgages and automobile solutions. It has a client base of more than 118 million customers throughout the world

转座子在转基因动物中的应用

转座子（ｔｒａｎｓｐｏｓｏｎ）又称跳跃因子，其实质是基因组上不必借助于同源序列就可移动的ＤＮＡ片段，它们可以直接从基因组内的一个位点移到另一个位点。自１９５１年美国Ｍｃ－Ｃｌｉｎｔｏｃｋ在玉米中首先发现了ＤＮＡ转座子（ＤＮＡｔｒａｎｓｐｏｓｏｎ）以来，转座子已成为各种生物的基因分析的有效工具之一。不仅利用转座子诱变已找到原核生物的单性生殖基因［３］；而且在真核生物中，Ｐ－转座子的发现和运用极大地促进了果蝇遗传学的发展。近来，一些其他的转座子元件，如ｈｅｒｍｅｓ，ｈｏｂｏ，ｍａｒｉｎｅｒ，ｍｉｎｏｓ和ｐｉｇｇｙＢａｃ已成功在Ｃｅｒａｔｉｔｉｓ、Ａｅｄｅｓａｅｇｙｐｔｉ、Ａｎａｓｔｒｅｐｈａｓｕｓｐｅｎｓｅ、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａｖｉｒｉｌｉｓ、家蚕（Ｂｏｍｂｙｘｍｏｒｉ）以及包括鱼类、禽类在内的多种生物转基因中获得应用，２００５年７月复旦大学的丁昇在《ｃｅｌｌ》杂志上发表关于运用ｐｉｇ－ｇｙＢａｃ转座子作载体成功制作转基因脊椎动物—— —小鼠，更加显示了转座子作为转基因载体的优势与潜力。 １转座子的类型和基本结构 １．１ＤＮＡ转座子ＤＮＡ转座子是以ＤＮＡ－ＤＮＡ方式转座的转座子，可通过ＤＮＡ复制或直接切出两种方式获得可移动片段，重新插入基因组ＤＮＡ中，导致基因的突变或重排。但一般不改变基因组的大小。根据转座的自主性，ＤＮＡ转座子又分为自主转座子（ａｕｔｏｎｏｍｏｕｓｅｌｅｍｅｎｔ）和非自主转座子（ｎｏｎａｕｔｏｎｏｍｏｕｓｅｌｅｍｅｎｔ），前者本身能够编码转座酶而进行转座，后者则要在自主转座子存在时才能够实现转座。玉米的Ａｃ／Ｄｓ体系就是典型的一例。活化子Ａｃ（Ａｃｔｉｖａｔｏｒ）属于自主转座子，解离子Ｄｓ（Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）属于非自主转座子，只有在Ａｃ存在时，Ｄｓ才能转座。 １．２反转录转座子反转录转座子不同于转座子，是以ＤＮＡ－ＲＮＡ－ＤＮＡ的途径来实现转座的，在整合酶的作用下新生成的以ＤＮＡ状态存在的反转录转座子整合到宿主基因组中。这样，反转录转座子在宿主基因组中的拷贝数得到不断积累，从而使基因组增大。由于反转录转座子带有增强子、启动子等调控元件，所以会影响宿主基因的表达，在生物进化过程中反转录转座子起着不可忽视的作用［４］。 根据是否具有编码反转录酶的能力，反转录转座子可以分为两个家族：自主性反转录转座子和非自主性反转录转座子O按照序列结构中有无长末端重复序列（ｌｏｎｇｔｅｒｍｉｎａｌｒｅ－ｐｅａｔｓｅｑｕｅｎｃｅ，ＬＴＲ）又可分为有ＬＴＲ反转录转座子和无ＬＴＲ反转录转座子。自主性反转录转座子包括内源性反转录病毒（ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ，ＥＲＶ）、ＬＴＲ反转录转座子及长散在元件（ｌｏｎｇｉｎｔｅｒｓｐｅｒｓｅｄｎｕｃｌｅａｒｅｌｅｍｅｎｔｓ，ＬＩＮＥｓ）O非自主性反转录转座子包括短散在元件（ｓｈｏｒｔｉｎｔｅｒｓｐｅｒｓｅｄｎｕｃｌｅａｒｅｌｅｍｅｎｔｓ，ＳＩＮＥｓ）及修饰性反转录假基因（ｐｒｏｃｅｓｓｅｄｒｅｔｒｏｐｓｅｕ－ｄｏｇｅｎｅ）。 ２转座子的转座机制 转座子都具有编码与转座作用有关的酶—— —转座酶的基因，而末端大多数都是反向重复序列。转座酶既识别转座子的两末端，也能与靶位点序列结合。转座作用的机制是转座子插到新的位点上产生交错切口，所形成的突出单链末端与转座子两端的反向重复序列相连，然后由ＤＮＡ聚合酶填补缺口，ＤＮＡ连接酶封闭切口，交错末端的产生与填补说明了靶ＤＮＡ在插入位点存在正向重复，两条链上切口之间的交错取决于正向重复的长度，因此，每个转座子所特有的靶重复序列，反映了切割靶ＤＮＡ的酶的几何形状。 ３主要运用于动物的几种转座子 ３．１Ｐ－转座子Ｐ－转座子最初于果蝇中发现，并研究了其结构与功能，建立了Ｐ－转座子和转座酶辅助系统。该转座子能只在果蝇中作用。但该系统为以后的转基因动物提供了理论和实验基础。Ｐ－转座子长度为２．９ｋｂ，具有３１ｂｐ的末端反向重复序列（ＩＲＴ）。中间有编码转座酶的可转录单位，以此产生转座子的精确切出和准确插入另一染色体位点（切出—粘贴反应）。Ｐ—转座子的功能还受其他核因子的影响，这些因子可能是不同昆虫中转座子发挥功能与否的条件。３．２Ｍｉｎｏｓ转座子Ｍｉｎｏｓ转座子是从海德尔果蝇Ｄ．ｈｙｄｅｉ中分离得到的，并首先应用与果蝇以外的昆虫转基因。Ｍｉｎｏｓ转座子长度位１．４ｂｐ，具有较长的１００ｂｐ的末端反向重复序列（ＩＲＴ）。可转录单位为１个内含子。以地中海果蝇白眼基因为报告基因的研究表明，Ｍｉｎｏｓ转座子的转座效率在ＧＯ带１～３％，并能在双翅目核鳞翅目昆虫细胞及按蚊Ａｎｃｐｈｅｌｅｓｓｔｅｐｈｅｎｓｉｉ和大果蝇Ｄ。Ｖｉｒｉｌｉｓ昆虫个体中实现转座。３．３Ｍｏｓｌ（ｍａｒｉｎｅｒ）转座子Ｍｏｓｌ（ｍａｒｉｎｅｒ）转座子是从马里塔尼亚果蝇Ｄ。Ｍａｕｒｉｔｉａｎａ中发现的。长度２８ｂｐ的末端反向重复序列（ＩＲＴ）和特意性的ＴＡ目标结合位点。Ｍｉｎｏｓ转座子是至尽为止研究最深入的转座子之一。 ３．４ｈｏｂｏ转座子因为Ｐ转座子只能在果蝇中实现转座，因此寻找其他转座子系统十分必要。Ｈｏｂｏ转座子就是其中 转座子在转基因动物中的应用 刘冬 （山西农业大学研究生学院，太谷０３０８０１） 摘要：转座子是发现新基因和基因功能分析的有效工具之一，作为插入突变原和分子标签已被广泛用于基因的分离和克隆，一些转座子已作为转化载体用于制备转基因动植物。转座子对多种生物尤其是对脊椎动物的成功转化让人们看到了他们作为转基因载体的巨大潜能。 关键词：转座子；转基因动物；昆虫；鱼类；哺乳动物 专论与综述 畜牧兽医科技信息２００７．０７ １８

工作年终总结工作概述

工作年终总结工作概述 到年底了，好好做;一次总结，是对过去的不足的弥补，对未来的计划，时间匆匆转走，现在的工作已经渐渐变得顺其自然了，这或许应该是一种庆幸，是让人值得留恋的一段经历。下面给大家整理了关于年终总结工作概述，方便大家学习。 年终总结工作概述1 光阴似箭，日月如梭。作为一名光荣的白衣天使，我特别注重自己的廉洁自律性，吃苦在前、享受在后，带病坚持工作;努力提高自己的思想认识，积极参与护理支部建设，发展更多的年轻党员梯队，其中以年轻的骨干为主，使护理支部呈现一派积极向上的朝气和活力。 20__年很快过去了，在过去的一年里，在院领导、护士长及科主任的正确领导下，我认真学习马列主义、毛泽东思想、邓小平理论医学`教育网搜集整理和“三个代表”的重要思想。坚持“以病人为中心”的临床服务理念，发扬救死扶伤的革命人道主义精神，立足本职岗位，善于总结工作中的经验教训，踏踏实实做好医疗护理工作。在获得病员广泛好评的同时，也得到各级领导、护士长的认可。较好的完成了20__年度的工作任务。具体情况总结如下：

一、思想道德、政治品质方面：能够认真贯彻党的基本路线方针政策，通过报纸、杂志、书籍积极学习政治理论;遵纪守法，认真学习法律知识;爱岗敬业，具有强烈的责任感和事业心，积极主动认真的学习护士专业知识，工作态度端正，认真负责。在医疗实践过程中，严格遵守医德规范，规范操作。 二、专业知识、工作能力方面：我本着“把工作做的更好”这样一个目标，开拓创新意识，积极圆满的完成了以下本职工作：协助护士长做好病房的管理工作及医疗文书的整理工作。认真接待每一位病人，把每一位病人都当成自己的朋友，亲人，经常换位思考别人的苦处。认真做好医疗文书的书写工作，医疗文书的书写需要认真负责，态度端正、头脑清晰。我认真学习科室文件书写规范，认真书写一般护理记录，危重护理记录及抢救记录。遵守医|学教育网搜集整理规章制度，牢记三基(基础理论、基本知识和基本技能)三严(严肃的态度、严格的要求、严密的方法)。 护理部为了提高每位护士的理论和操作水平，每月进行理论及操作考试，对于自己的工作要高要求严标准。工作态度要端正，“医者父母心”，本人以千方百计解除病人的疾苦为己任。我希望所有的患者都能尽快的康复，于是每次当我进入病房时，我都利用有限的时间不遗余力的鼓励他们，耐心的帮他们了解疾病、建立战胜疾病的信心，当看到病人康复时，觉得是非常幸福的事情。

英文翻译(原文)

GRA VITY RETAINING?WALL 1. INTRODUCTION Retaining walls are structures used to provide stability for earth or other material where conditions disallow the mass to assume its natural slope, and are commonly used to hold back or support soilbanks,coal or ore piles, and water. Retaining walls are classified, based on the method of achieving stability, into six principal types (Fig.1). The gravity-wall depends upon its weight, as the name implies, for stability. The cantilever wall is a reinforced-concrete wall that utilizes cantilever action to retain the mass behind the wall from assuming a natural slope. Stability of this wall is partially achieved from the weight of soil on the heel portion of the base slab. A counterfort retaining wall is similar to a cantilever retaining wall, except that it is used where the cantilever is long or for very high pressures behind wall and has counterforts, which tie the wall and base together, built at intervals along the wall to reduce the bending moments and sheers. As indicated in Fig.1c, the counterfort is behind the wall and subjected to tensile forces. A buttressed retaining wall is similar to a counterfort wall, except that the bracing is in front of the wall and is in compression instead of tension. Two other types of walls not considered further are crib walls, which are built-up members of pieces of precast concrete, metal, or timber and are supported by anchor pieces embedded in the soil for stability, and semigravity walls, which are walls intermediate between a true gravity and a cantilever wall. (a)(b)(e)

转座子标签法克隆分离植物基因的研究进展

转座子标签法克隆分离植物基因的研究进展 胡英考 (首都师范大学生物系,北京100037) 摘　要:　转座子标签法是克隆与分离植物基因的一项十分有效的方法。概述了转座子标签技术克隆与分离植物基因的基本原理与方法,介绍了可用于转座子标签技术的转座子,对于转座子标签系统以及在克隆与分离异源植物基因方面的主要成就进行了综述,并对将来的研究方向进行了讨论。 关键词:　转座子　转座子标签　基因克隆 Progress of Plant G enes Cloning and Isolation by T ransposon T agging Hu Y ingkao (Biology Depart ment of Capital Normal U niversity,Beiji ng100037) Abstract:　Transposon tagging is an effective method for plant gene cloning and isolation.The principle and proce2 dure of transposon tagging are summarized and the trans poson used for plant gene cloning and isolation are introduced in this paper.The progress of transposon tagging system and alloplant gene cloning and isolation were reviewed.The per2 spective of trans poson tagging was also discussed. K ey words:　Transposon　Transposon tagging　G ene cloning 分子生物学的迅速发展,为人们提供了许多分离植物基因的有效方法。传统上,可根据已知基因的产物推测其相应的核苷酸序列,再据此序列合成寡核苷酸探针,从cDNA文库或基因组文库中钓取目的基因,此即所谓的功能克隆(functional cloning)。近年来,表型克隆(phenotypical cloning)发展十分迅速,它是根据材料间表型的差异,来克隆引起这种差异的基因的方法。但是,在大多数情况下,我们既不知道基因的表达产物,又没有适宜的相对表型用于表型克隆,此时最常用的基因克隆技术是图位克隆(map2based cloning or positional cloning)[1]和转座子标签(transposon tagging)技术[2]。以下仅对转座子标签技术在植物基因克隆中的研究进展作一综述。 1　转座子标签法克隆植物基因的原理与方法 转座子(transposon)又称转座因子或移动因子,最早在1951年由美国遗传学家McClintock在研究玉米籽粒色斑不稳定现象而提出来的,但该概念直到1967年在大肠杆菌中发现插入序列这类转座因子后才被普遍承认和接受,现在我们知道,转座子在生物界是普遍存在的。 转座子是染色体上一段可以移动的DNA序列,它可以从一个基因座位转移到另一个基因座位,当转座子插入到某个功能基因内部或邻近位点时,就会使插入位置的基因失活并诱导产生突变型,通过遗传分析可以确定某基因的突变是否由转座子引起,由转座子引起的突变可用转座子DNA为探针,从突变株的基因组文库中钓取含该转座子的DNA 片段,获得含有部分突变株DNA序列的克隆,然后以该DNA序列为探针,筛选野生型植株的基因组文库,最终得到完整的目的基因[3]。在转座子作为外源基因通过农杆菌介导等方法导入植物时,由于T2DNA整合到基因组所引起的插入突变,也可用上述原理来克隆基因,这样就大大提高了分离基因的效率。 利用转座子标签法分离植物基因的主要步骤如下:(1)构建含转座子的质粒载体;(2)将含转座子的质粒载体通过农杆菌介导或其他适当的转化方法导 生物技术通报 ?综述与专论? B IO TECHNOL O G Y　BULL ETIN 2003年第2期

工作总结概述怎么写_工作总结范文5篇

工作总结概述怎么写_工作总结范文5篇 a;通过总结，人们可以把零散的、肤浅的感性认识上升为系统、深刻的理性认识，从而得出科学的结论，以便改正缺点，吸取经验教训，使今后的工作少走弯路，多出成果。下面给大家整理了关于工作总结概述怎么写，方便大家学习。 工作总结概述怎么写1 一年来，党支部在院党委的领导下，在全所党员职工的共同努力下，紧紧围绕中心、搞好配合、服务群众、促进和谐。充分发挥党支部的战斗堡垒作用和党员的先锋模范作用，不断提高职工的政治素质和思想水平，扎实有效的开展党建和思想政治工作，为广大职工干事创业营造良好的工作氛围： 党建工作 1、开展了争创“五好”支部活动：认真贯彻十七届四中全会精神，学习推广“4+2”工作法，继续落实院关于争创“五好”支部活动的意见，坚持各项制度，认真填写党支部工作手册，真实反映党员活动的情景。针对“学习实践科学发展观”和“讲、树、促教育活动”中党员提出的意见和提议，党支部从自身分析原因，十分认真的查找不足和差距，争取经过实实在在地努力搞好支部工作。 2、坚持了中心组学习制度：支部成员能带头参加院、所组织的职工政治学习，同时还参加院组织的中心组学习。所中心组学习6次，资料包括：科学发展观、创新文化建设、党务知识培训和到兰考焦裕

禄纪念园、桐柏红色廉政文化展馆理解革命教育和廉政教育等。 3、坚持了支委会制度：凡涉及党建、人事、财务及全所发展的重大问题等都要召开支委会进行团体研究，共召开支委会6次，召开班子民主生活会2次。 4、加强了党员队伍建设：继续坚持党员目标管理制度和民主测评制度，增强党员树立自我约束意识，在去年底全所职工对在职党员测评的基础上，今年我们先后组织了“学习实践科学发展观促进本职工作”、“焦裕禄在我身边”、“讲党性修养、做合格党员”等三项活动。经过活动的开展，全所党员的思想觉悟明显提高，先锋模范作用明显增强。加强党员队伍的教育，不断提高党员的素质，主要以学习实践科学发展观为主线，加深对“科学发展观”重要思想的理解，继续巩固讲、树、促教育活动取得的成果，大力宣扬表彰“五好”党员，激发全体党员为实现党的宗旨而努力工作的进取性。今年我所常高正同志被评为省直机关优秀共产党员。 5、认真抓好党员发展工作：把入党进取分子的培养工作落到实处，始终做到支部有安排，小组有分工。对确定为入党进取分子的同志，所支部指定支委成员作为培养联络人与其经常联系，及时帮忙。把好发展关，做到成熟一个，发展一个。共有一位预备党员转正，一名科研骨干入党，一名同志向组织递交了入党申请书。 6、加强党务工作的管理：按照省直工委和院党委对建立基层党组织的要求，对党支部的任务及职责、党支部工作有关制度、发展党员、党员管理、党费交纳等方面进行了详细的规定，一方面让党员进

环境友好型缓蚀剂的研究现状及展望

环境友好型缓蚀剂的研究现状及展望 摘要:综述了国内外高效环境友好型缓蚀剂的研究进展, 展望了新型高效环境友好型缓蚀剂的发展趋势。从对环境友好型缓性剂制备方法的改进和开发该类缓蚀, 存在的问题等方面进行综合评价, 指出运用绿色化学的思想研究和制备环况友好型缓饮是未来缓性剂的发展方向。 关键词:腐蚀环境友好缓蚀剂 Environmental Friendly Corrosion Inhibitors Research Present Situation And Prospect Abstract :At Home And Abroad Were Summarized Efficient Environment Friendly Corrosion Inhibitors Research Progress,The Prospect Of New And High Efficient Environmental Friendly Corrosion Inhibitors Trend Of Development.Corrosion Inhibition From The Improvement And Development Of Environment-Friendly Sexual Relief Agent Preparation Method Such, The Existing Problems Of The Comprehensive Evaluation, Pointed Out That The Idea Of Using Green Chemical Research And Preparation Ring In Friendly Slow Drink Is The Future Of Slow The Development Direction Of The Agent. Key Words: Corrsosion Environment Friendly Corrosion Inhibitors

英语翻译专业必翻经典文章英文原文参考译文

文档简介 一，英语翻译经典文章之英文原稿二，中文翻译：这篇英语文章的最好翻译版本！不是俺说的，是俺老师说哒！！ 英文原稿Brian It seems my only request (“please, let me sleep”) is not clear enough, so I made this simple table that can help you when you’re in doubt. Especially during the night

中文翻译小子： 我只想好好地睡觉，你不明白吗？！所以，我做了这个简表。当你不知道怎么办时，特 别是在晚上的时候，你可以看看它。 具体情况行动指南 1，我正在睡觉禁止进入 2，你不确定我是否睡觉，你想搞清楚管你“鸟”事；禁止进入 3，你嗑了药，想奔向我的床你他妈的滚远点 4，你在youtube上看了一个超赞的视频，禁止进入；在脸书上把链接发给我想让我看看 5，就算第三次世界大战开始了管我屁事，他妈的别进来 6，你和你的基友们想和我“玩玩”抱歉，直男一枚。不要碰我的任何东西，门都别碰 7，你想整理我的房间我谢谢你了！我自己会打扫 8，普京宣布同性婚姻合法化终于等到“它”！还好你没放弃！还是不要来我房里！ 9，我不在家进我房间，想都别想 10，白天，我在家。你敲了门，我说“请进” 你可以进来了 福利放送！！

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