慢病毒、腺病毒、腺相关病毒(AAV)、逆转录病毒系统介绍

腺病毒常见问题与解答

腺病毒常见问题与解答 1、腺病毒载体对目的基因的长度是否有要求？ 有要求。对E1和E3双缺失的腺病毒载体，比如AdMax的Kit C、Kit D等，其总包装的 外源片断要求小于8 kb。而对于只有E1缺失或E3缺失的载体，比如Kit A、Kit B等，外源片断要求小于5 kb。注意，外源片断指包括启动子、外源基因和poly A等在内的整个插入片断。 2、我的试验需要多少总量的腺病毒载体？ 腺病毒介导外源基因的基因治疗研究一般分为体外培养细胞试验(体外试验)和动物试验(体内试验)两部分，不同的实验设计所需要的病毒量也不尽相同。根据经验，完成一个完 整的肿瘤治疗实验需要腺病毒的病毒量总量约为3×1012 VP左右. 3、如何提高腺病毒的活性？ 提高腺病毒的活性，关键应该是在病毒包装过程和扩增过程。纯化过程只是去掉有缺陷的病毒和细胞碎片等容易引起机体免疫反应的过程，如果扩增的病毒滴度高，那么纯化后就会更高的。 4、克隆到转移载体的基因中的5’和3’UTR（未翻译区）的额外的碱基会影响蛋白表达吗？ UTR尽可能短一些，特别是在5’要避免在mRNA里形成二级结构。在起始密码子ATG 前面可以加一小段（6-9bp）的碱基序列可以增强目的基因的表达，比如Kozak序列(GCCGCCACCATG)。 5、如何判断腺病毒载体是否能高效感染某种细胞？ 参照文献报道是很简单的办法，也可以用带报告基因的腺病毒先行预实验。 Ad5能高效感染绝大多数人类、小鼠等的体细胞（包括分裂和非分裂细胞），比如肝、肌肉、神经组织等。但对血液系统来源细胞和某些肿瘤细胞，比如乳腺癌、白血病细胞等，感染效率较低。 6、腺病毒载体在体外实验（in vitro）中应注意哪些问题？ 1）由于细胞表面受体的差异，腺病毒载体在不同的细胞中转导效率不同。可根据文献报道或用带报告基因的腺病毒载体判断病毒用量。 2）在细胞处于对数生长期时感染病毒效果较好。避免在消化细胞后立刻感染病毒，因为此时细胞膜上的病毒受体往往受到了暂时的破坏。培养过夜后再感染病毒，效果较好。 3）选择适当的转导MOI（病毒感染单位数/细胞数），可以在MOI为0.1~1000范围内进行试验( 10倍比稀释)。 4）感染病毒时细胞培养液的体积尽量小一些，以完全覆盖细胞为准。如24孔板可用200ul，6孔板1ml。 5）感染时间为90分钟，每15分钟轻轻晃动培养液一次，以混匀。 6）选择适当表达检测时间，一般感染病毒24h后就能检测到目的基因的表达，48小时表达达到较高水平。 7、用于体内试验的腺病毒，是否要求纯化？ 是的，病毒纯化是很必要的。因为细胞裂解液包含有缺损颗粒、大量的腺病毒fiber和penton蛋白（细胞毒素）、培养基、血清以及细胞碎片。这些杂质如果被注入动物体内，会

第二课堂常见问题解答

各位团支书你们好，针对本次第二课堂学分录入的常见问题我们在此 作一些解释，各自具体的问题还望各位在群里多多提问，素拓全体成 员将在课余时间竭力为大家解答，如有不全面周详之处还请大家谅解，希望我们一起顺利完成本次学分的录入，谢谢！ 1、要查分，密码不知道。 以前的密码仍能查询学分，但现在系统处于维修期间，不免要出现卡顿，掉线，刷新不了的现象。为方便大家对本班具体录入情况的了解，我们会在本次录入完成之后统一将所有学分情况导出，便于大家查阅。届时若有少量未录入的情况，仍可进行补录！ 2、参加了竞赛，但由于老师，组织方等问题参赛加分证明难以盖章或签字怎么办？ 这是录入学分一直以来存在的老问题，仅仅是参赛很难找到老师盖章签字，为了方便大家这里我们也同时允许对网页上的报名表进行截图并打印的方法。但是若不是以上三种方式，我们将很难给各位的加分进行录入，此不便之处恳请大家原谅！ 3、常见的某些是否可以加分，名单上又没有的项目。（比如院级团日活动） 已经举办过几届的活动，可以加分的都在条目中，未在条目上即不能通过审核。但我们也了解到这次有很多新的活动，对于新活动加分的同学，希望您先申报上来并附上证明，我们将会在咨询老师的基础上为大家审核！

4、转了专业的在哪里加？ 这个问题关系到档案和信息是否已经转移，为保险起见，我们建议您在两边学院同时申报，确保不会遗漏！ 这次解答难免会有不全面详尽之处，我们会根据大家的提问进一步增加问题的解答，希望大家继续关注常见问题解答，素拓全体全心为大家服务！ 素拓全体成员

初夏早上六点，清亮透明的月儿还躲藏在云朵里，不忍离去，校园内行人稀少，我骑着单车，晃晃悠悠的耷拉着星松的睡眼。校园内景色如常，照样是绿意盈盈，枝繁叶茂，鸟儿歌唱。经过西区公园，看那碧绿的草地，飞翔中的亭子，便想起十七那年，在这里寻找春天的日子。本想就此停车再感受一遍，可惜心中记挂北区的荷塘。回想起冬日清理完荷塘的枯枝败叶，一片萧条

常见问题及解答

第一章 一题目：机器的特征是什么？ ： 机器的特征有： 1、它们是人为的实体组合； 2、组合体的运动实体之间具有确定的相对运动； 3、它们用来代替或减轻人类的体力和脑力劳动，去完成有用的机械功、转换机械能和传递能量、物料、提供或转换信息。 二题目：计算机辅助设计相对于传统的设计方法有什么优越性？分析与解答： 计算机辅助设计（C o m p u t e r A i d e d D e s i g n），简称C A D。它是借助计算机进行设计信息处理，利用计算机具有运算快速准确、存贮量大、逻辑判断功能强等特点，通过人和计算机的交互作用完成设计工作。它相对于传统的设计方法具有以下优越性： 1、显著提高设计效率，缩短设计周期，加快产品更新换代，增强市场竞争能力； 2、可以贮存大量的设计信息和设计经验，使一些缺乏设计经验及新从事设计工作的人员也能顺利完成设计任务； 3、能在较短时间内给出很多设计方案，并进行分析比较，以获得最佳设计方案； 4、把设计人员从繁琐的重复性工作中解脱出来，将更多的时间和精力集中到创造性的工作上； 5、可与计算机辅助制造（C A M）、计算机管理自动化结合起来

形成计算机集成制造系统（C I M S），从企业总效益最高出发，综合进行市场预测、产品设计、生产计划、制造和销售等一系列工作，以实现人力、物力和时间等各种资源的有效利用。 三题目：影响许用安全系数（或许用应力）数值大小的因素主要有哪些？ 分析与解答： 影响许用安全系数（或许用应力）数值大小的因素主要有： 1、与工作应力的计算有关的因素； 2、与材料的极限应力有关的因素； 3、与零件重要性有关的因素。 四题目：什么是名义载荷？设计计算时为什么用计算载荷？ 分析与解答： 根据额定功率用力学公式计算出作用在零件上的载荷称为名义 载荷。 由于名义载荷没有反映载荷随时间作用的不均匀性、载荷在零件上分布的不均匀性及其它影响零件受载等因素。因此，常用载荷系数K来考虑这些因素的综合影响。载荷系数K与名义载荷的乘积即称为计算载荷。 五题目：什么是金属热处理？有什么作用？ 分析与解答： 金属热处理是将金属工件放在一定的介质中加热到适宜的温度，

MicroRNA腺病毒表达系统使用手册0828

产品手册│ MirAd TM MicroRNA前体腺病毒表达系统 本产品仅限用于研究，严禁用于任何动物或人类疾病诊断。 本产品仅供购买方内部研究使用，未经ViGene生物科技有限公司书面许可，严禁转售。

目录│ 产品简介 4 产品组成 5 保存条件 5 使用安全注意事项 6 pMirAd 载体图谱 6 质粒扩增 6 病毒载体扩增 7 常见问题解答 8

产品有限责任担保 Vigene生物保证您收到的产品符合产品目录上的规格。本担保规定了Vigene 更换产品的责任。Vigene生物不提供其他任何形式的对于产品商业或健康用途的保证。Vigene生物不对任何由于使用或不正确使用本公司产品造成的直接、间接的、衍生的或偶然的损害所产生的后果负责。 产品订购和技术支持 山东维真生物科技有限公司暨美国ViGene Biosciences公司中国办事处 美国地址：12111 Parklawn Dr. Rockville, MD 20852 US 北京办事处：北京市海淀区北三环西路43号青云里满庭芳园D座1206室上海办事处：上海市徐汇区肇家浜路201弄11号602室 广州办事处：广州市天河区骏景花园骏景路棋乐街33号404室 山东办事处：济南市高新区开拓路2350号留学人员创业园717室 Email: service@https://www.wendangku.net/doc/ed16207408.html, Phone: 400-077-2566 https://www.wendangku.net/doc/ed16207408.html,(美国) https://www.wendangku.net/doc/ed16207408.html,（中国） 欢迎您致电或发邮件，咨询产品技术信息。

产品简介 MicroRNAs（miRNAs）是一类长度为18-24个核苷酸的非编码RNA分子。MiRNA通过与靶基因mRNA上的互补序列结合，降解mRNA或抑制mRNA的翻译。MiRNAs在细胞分化、增殖、凋亡和癌细胞发生中发挥重要的调控作用。MiRNAs来源于具有60-80个核苷酸茎环结构的microRNA前体（premir）和序列更长一些的microRNA初级转录产物（primir）。MiRNA在核内由RNA聚合酶II（polII）转录生成，最初产物primir具有帽子结构和多聚腺苷酸尾巴。 ViGene生物的mirAD-腺病毒microRNA前体表达系统包括三个相关产品：microRNA前体穿梭载体、microRNA前体腺病毒载体和预制microRNA前体腺病毒。 重组腺病毒是进行基因转移和表达的工具，功能强大且易于操作。腺病毒独特的生物学特征使它成为“载体的首选”，被科研工作者广泛应用。首先，它能够感染包括分裂、非分裂细胞和干细胞在内的多种细胞。第二，病毒滴度高。第三，高滴度的病毒可获得高感染效率和高表达量。第四，病毒进入细胞后，病毒基因组不整合到细胞染色体上，因此瞬时表达外源基因的重组腺病毒不会诱导宿主细胞中染色体的变化。ViGene生物选用的是应用最广泛的复制缺陷型的人类血清5型腺病毒，该腺病毒载体缺失E1和E3基因。E1基因在组装感染性病毒颗粒时必不可少，可在HEK293T细胞病毒包装过程中得到补充，而E3基因可有可无。由于E1和E3基因的缺失，腺病毒载体可插入高达7.5kb的外源基因。 pMir-microRNA precursor是基于microRNA前体表达系统的质粒。microRNA前体天然的茎环结构被克隆到质粒的SgfI和MluI双酶切位点。为了保持推测的发卡结构和诱导正确的内源性反应，miRNA茎环结构的两侧具有它的150-200bp的天然序列。MicroRNA前体在CMV启动子启动下表达，其上游有GFP荧光标记，并具有SV40 poly（A）加尾信号。穿梭载体含有SV40启动子启动的puromycin嘌呤霉素标记，可以用来进行稳转细胞株的筛选。穿梭载体还含有两个腺病毒ITR序列和两个与腺病毒Ad5同源的序列，可

腺病毒的包装和感染PDF

腺病毒的包装，纯化和感染 技术背景：Adeasy系统利用了腺病毒具有的高感染能力，可高度浓缩等优点，并破坏了腺病毒基因组中的早期基因E1，使之成为较为安全、高效的病毒载体。利用带有E1基因的293细胞作为包装细胞，通过倍比扩增，富集病毒颗粒，并通过CsCl梯度离心，透析进行分离纯化。对绝大多数的细胞株可以达到近乎100％的感染效率。但需要指出的是Adeasy同样具有所有病毒载体或转染试剂都不可避免的细胞毒性问题。 所需试剂： ●293细胞； ●重组好的腺病毒质粒； ●Pac I限制性内切酶； ●质粒回收相关试剂； ●细胞培养、转染相关试剂； ●TBS：10mM Tris,0.9%NaCl,pH8.1; ●40%CsCl：28.45g CsCl溶于42.7ml的TBS中，4度保存； ●15%CsCl：9.085g CsCl溶于47.69ml的TBS中，4度保存； ●Beckman离心管：14*89mm，SW41转头； ●Polybrene(sigma)，10mg/ml； ●透析袋：Spectrum Co.（成卷供应，带少量甘油，硫化物与重金属）， MW=8000~14400； ●灭菌甘油。 操作流程： 1.293细胞（E1-transformed human embryonic kidney cells在转染前24小时接种 于1或2个60mm培养盘中，使之在转染时细胞汇合率为50-70%； 2.在转染前，用Pac I处理目的质粒（一般一个60mm细胞盘需要6μg DNA）。 处理后质粒用乙醇沉淀并重悬于20μl无菌水中； 3.用PEI或其他转染试剂将6μg Pac I处理过的质粒转染细胞；

2020青骄第二课堂答案

2020青骄第二课堂禁毒期末考试全部答案 五年级的答案: 一、毒品预防: 1.下列物品中不属于毒品的是?酒精 2.问题已经成为当今世界公害?毒品 3.下列物质中，属于毒品的是?罂粟壳 4.冰毒属于()?兴奋剂 5.长期吸食鸦片会使人丧失()?免疫力 二、如何拒绝毒品 1.有这么一句话“一日吸毒，十年戒毒，终生想毒”用以表明毒品的( )?心瘾 2.冰毒在()比较常见?歌舞厅 3.以下不属于毒品的基本特征的是()?安全性 4.吸毒成瘾一般具有的特征( )?以上三项均正确 5.毒品的危害有()?ABC选项都正确 三、期末考试 1.A， 2.A， 3.A， 4.A， 5.A， 6.C，7A，8.B9.A，10.C 六年级的答案: 一、毒品危害家庭 1.当陌生人主动给你饮料和水时，你应该怎么做()?礼貌的拒绝 2.“一人吸毒，全家遭殃”说明了毒品的什么危害( )?家庭危害 3.以下不属于吸毒违法行为的是()?服用安眠药

4.如何加强自我保护意识()?树立防毒意识 5.吸毒行为产生的环境因素有很多，而这里的环境指的是( ) ?以上都是 二、 1.当你的朋友或毒贩逼你吸毒时，你应该怎么办()?秘密打110 2.当自己的好朋友吸毒后，不正确的做法是什么()?自己也吸毒，然后陪好朋友一起戒毒 3.吸食方式中危害最大的是()?静脉注射 4.禁毒是全社会的()?共同责任 5.下列不是毒品的是()?跳舞草 三、期末考试 1.B，2C，3C，4D，5A，6A，7C，8A，9C,10.B 七年级的答案: 一、X任务1: 动画中猪爸爸车里藏的是哪一种毒品?A 设卡盘查时缉毒犬们依靠哪一种感官来查找毒品?C 猪爸爸为什么会撞上刺猬妈妈?C X探长是哪一种动物形象的拟人化?D 毒品的危害主要表现为()?ABCD 二、X任务2: 狱警是哪一种动物形象的拟人化?鸭子 毒枭大猩猩贩卖的是哪一种毒品?摇头丸 舞厅中梅花鹿小姐为何被毒贩强行喂入毒品?B

回火热处理优缺点及常见问题解决方法

回火热处理优缺点及常见问题解决方法 100℃热水回火之优点 低温回火常使用180℃至200℃左右来回火，使用油煮回火。其实若使用100℃的热水来进行回火，会有许多优点，包括：（1）100℃的回火可以减少磨裂的发生；（2）100℃回火可使工件硬度稍增，改善耐磨性；（3）100℃的热水回火可降低急速加热所產生裂痕的机会；（4）进行深冷处理时，降低工件发生深冷裂痕的机率，对残留沃斯田体有缓衝作用，增加材料强韧性；（5）工件表面不会產生油焦，表面硬度稍低，适合磨床研磨加工，亦不会產生油煮过热乾烧之现象。二次硬化之高温回火处理 对於工具钢而言，残留应力与残留沃斯田体均对钢材有著不良的影响，浴消除之就要进行高温回火处理或低温回火。高温回火处理会有二次硬化现象，以SKD11而言，530℃回火所得钢材硬度较200℃低温回火稍低，但耐热性佳，不会產生时效变形，且能改善钢材耐热性，更可防止放电加工之加工变形，益处甚多。 在300℃左右进行回火处理，為何会產生脆化现象？ 部分钢材在约270℃至300℃左右进行回火处理时，会因残留沃斯田体的分解，而在结晶粒边界上析出碳化物，导致回火脆性。二次硬化工具钢当加热至500℃~600℃之间时才会引起分解，在300℃并不会引起残留沃斯田体的分解，故无300℃脆化的现象產生。 回火產生之回火裂痕 以淬火之钢铁材料经回火处理时，因急冷、急热或组织变化之故而產生之裂痕，称之為回火裂痕。常见之高速钢、SKD11模具钢等回火硬化钢在高温回火后急冷也会產生。此类钢材在第一次淬火时產生第一次麻田散体变态，回火时因淬火產生第二次麻田散体变态（残留沃斯田体变态成麻田散体），而產生裂痕。因此要防止回火裂痕，最好是自回火温度作徐徐冷却，同时淬火再回火的作业中，亦应避免提

重组腺病毒常见问题解答(FAQs)解析

重组腺病毒常见问题解答(FAQs) ?Q1. 使用重组腺病毒需要的生物安全级别？ ?Q2. 怎么确定我所用的细胞模型可以感染腺病毒？ ?Q3. 感染细胞时腺病毒的最佳浓度？ ?Q4. 感染腺病毒时所需要的培养基的量？ ?Q5. VP，PFU，IFU的区别？哪一个能更好地反映所使用的有活性的病毒的量？ ?Q6. 病毒的滴度是如何测定的？ ?Q7. 对于体外实验（细胞实验）CsCl纯化或层析柱纯化有必要么？ ?Q8. 重组腺病毒的推荐存储条件是什么？ ?Q9. 腺病毒表达系统承载外源基因的容量？ ?Q10. 腺病毒有多种血清型，哪一种是基因传递中最普遍使用的？ ?Q11. 什么是RCAs？ ?Q12. 目前存在的许多病毒载体系统，包括：腺病毒、逆转录病毒和慢病毒，针对我的实验应该使用哪个系统？ Q1.使用重组腺病毒需要的生物安全级别？ 答：我们所提供的重组腺病毒是E1/E3区缺失的复制缺陷型病毒。根据NIH官方的参考信息，重组腺病毒的生物安全等级被确定为II级，您只需要BL-II级实验设施，值得注意的是，大多数实验室都具备BL-II级的实验设施。野生型腺病毒可复制，能引起感冒和很强的免疫反应，通常不会引起很严重的疾病。要想获得更多生物安全信息，请参考网站https://www.wendangku.net/doc/ed16207408.html, 返回Q2.怎么确定我所用的细胞模型可以感染腺病毒？ 答：腺病毒有很广泛的宿主范围。它可以感染人类或者其他哺乳动物细胞系或原代细胞，包括可分裂的和不可分裂的细胞。只有少数细胞系不被感染。一些淋巴细胞系对腺病毒有更强的抵抗性，因此需要大量的病毒来感染细胞。为了客户的

方便，我们提供含有报告基因的病毒，如Ad-CMV-B-gal 和Ad-CMV-GFP从而方便的进行您的预实验。 返回 Q3.感染细胞时腺病毒的最佳浓度？ 答：要得到最佳的实验结果，确定腺病毒的最佳用量是非常重要的。如果用量不足，那么不能达到100%的感染效率，如果用量太高，会对细胞有毒害作用或者其他不可预测的效应。我们应该尽量用最小浓度的病毒来达到100%的基因传递效率。这个最佳的浓度因不同的细胞类型而有显著差异。为了确定你的细胞系的最适病毒用量，可以用带报告基因的腺病毒做预实验，如AdCMV-B-gal 或者AdCMV-GFP。用不同稀释倍数的报告基因病毒感染细胞，在感染1-2天后检测感染效率。可以通过B-gal染色或者通过在荧光显微镜下观察细胞的GFP的表达情况来确定可达到100%感染效率但又不会引起细胞表型变化病毒浓度范围。 我们已经针对多种细胞系做了预实验，加入已混合病毒的培养基，6-8小时或者过夜。对于大多数细胞系来说病毒浓度在2 x 105 - 1 x 106 IFU/PFU (infectious unit)/ml培养基都能得到10%的感染效率而且不会有副作用。我们推荐在您实验系统中用报告基因病毒重新摸索一下最适培养基用量。 返回 Q4.感染腺病毒时所需要的培养基的量？ 答：作为参考，我们推荐您按照如下的量加培养基（已混入病毒）： 10cm培养皿：8-10ml/孔6孔板：1ml/孔12孔板：0.5ml/孔24孔板：0.2ml/孔 返回 Q5. VP，PFU，IFU的区别？哪一个能更好地反映所使用的有活性的病毒的量？ 答：VP(Viral particles) 反映病毒颗粒的总数（包括活病毒和死病毒），由于在病毒制备过程中，每次活/死病毒比率都不同，VP并不能反映有活性的病毒的数量。 PFU（plaque formation unit）代表可感染的或者活病毒的数量。能反映实验中所需要的病毒的量。 IFU（infectious unit）相当于PFU 大多数情况下所制备的病毒，VP/PFU比值在20:1到50:1范围。 应用VP（viral particles）做单位会与实际应用的活病毒的数量有很大出入。用IFU或者PFU做单位会得到比较一致的结果。 返回

人腺病毒分子生物学常用检测技术

Advances in Microbiology 微生物前沿, 2017, 6(2), 11-16 Published Online June 2017 in Hans. https://www.wendangku.net/doc/ed16207408.html,/journal/amb https://https://www.wendangku.net/doc/ed16207408.html,/10.12677/amb.2017.62002 The Molecular Biological Techniques for Human Adenovirus Detection Ye Li1,2, Tuo Dong1,2, Vladimir I. Zlobin3, Oleg Reva4, Zhangyi Qu1,2* 1Department of Microbiology, School of Public Health, Harbin Medical University, Harbin Heilongjiang 2Department of Natural-Foci Diseases, Institute of Environment-Associated Diseases, Sino-Russia Joint Medical Research Centre, Harbin Heilongjiang 3Research Institute for Biomedical Technologies, Irkutsk State Medical University, Irkutsk, Russia 4Department of Biochemistry, Bioinformatics and Computational Biology Unit, University of Pretoria, Pretoria, South Africa Received: May 12th, 2017; accepted: May 30th, 2017; published: Jun. 2nd, 2017 Abstract Adenovirus is one of the major viruses causing human respiratory diseases. The effective and rapid method in adenovirus detection is helpful to strengthen the surveillance of adenovirus in-fection, to investigate the epidemic trends timely, and to control the virus infection. The current molecular biological methods for adenovirus detection both used in laboratory and clinical are reviewed in this paper. The principle, characteristics and application of these techniques are commented. Keywords Adenovirus, PCR, Molecular Biological Detection 人腺病毒分子生物学常用检测技术 李烨1,2，董妥1,2，Vladimir I. Zlobin3，Oleg Reva4，曲章义1,2* 1哈尔滨医科大学，公共卫生学院，卫生微生物学教研室，黑龙江哈尔滨 2中俄医学研究中心，环境相关疾病研究所，自然疫源性疾病研究室，黑龙江哈尔滨 3俄罗斯伊尔库茨克国立医科大学，生物医学技术研究所，伊尔库茨克，俄罗斯 4南非比勒陀利亚大学，生物信息学与计算生物学部，生物化学系，比勒陀利亚，南非 收稿日期：2017年5月12日；录用日期：2017年5月30日；发布日期：2017年6月2日 *通讯作者。 文章引用: 李烨, 董妥, Vladimir I. Zlobin, Oleg Reva, 曲章义. 人腺病毒分子生物学常用检测技术[J]. 微生物前沿,2017,

第二课堂知识竞赛题目

贵州大学经济学院第五届第二课堂知识竞赛 笔试题 一、选择题。 1、贵州大学创建于（）C A.1900B1901C1902D1903 2、1951 年11 月，亲笔题写校名()A A.毛泽东 B 邓小平 C 周恩来 D 胡锦涛 3、素质拓展分修满（）分才可申请《大学生素质拓展证书》。A A、60 B、85 C、 90 D、 100 4、小明参加义务献血活动、造血干细胞活动各一次可加（）素拓分。 D A、1 B、2 C、3 D、4 5、男生某宿舍获得经济学院“十佳寝室”称号，那么该寝室每位同 学都可以修得（）分。 C A、0.2 B、 0.5 C、1 D、 2 6、假如贾景在校团委经济学院学生会办公室工作了一年，遵守章程，积极参与活动，则获得（）个素拓分。 B A、1 B、2 C、3 D、4 7、学术科技与创新创业类得分最高为（）分。B A、15 B、20 C、25 D、30 8、小华任某学院艺术团团长两年，可加素拓分（）C

A. 4 B. 6 C. 8 D.10 9.个人获得校党委表彰应加素拓分（）分。D A、0.5 B、 1 C、2 D、3 10、参加学校组织的“三下乡”活动修得（）个素拓分。B A、2 B、3 C、4 D、6 11，今年我校将迎来周年校庆（）C A.90B100C110D120 12，某大学生的学术论文发表在我省的省级核心刊上则应加 ()分。D A.3 B.5 C.8 D.10 13，现阶段贵州省的基本省情是()。D A.天无三日晴，地无三里平，人无三分银。 B.少数民族人口多。 C.喀斯特地貌地貌典型发育。 D.欠发达，欠开发。14，某同学参加学院迎新杯篮球比赛可加()分。 B A.0.5 B.1 C.2 D.4 15，贵州大学与原贵州工业大学合并的年份是（）C A.1958 B.1997 C.2004 D.2005 16，某同学在大二时获得英语四级证书可加（）分。 C A.1 B.2 C.3 D.4 17，贵州大学是（）年成为“ 211”工程。 C A.2003 B.2004 C.2005 D.2006 18，大学生素质拓展内容不包括下列哪一项（）D

机加工产品常见的不良原因调查

机加工产品常见的不良原因调查 2010-10-27 17:15|发布者: 小编D|查看: 1379|评论: 19|原作者: 夏日星空|来自: https://www.wendangku.net/doc/ed16207408.html, 摘要: 1、加工基准考虑到毛坯不均的问题吗？在加工黑皮处，明确了管理值了吗？2、加工基准与检测基准是否相同？ (一)、工艺设计 1、加工基准考虑到毛坯不均的问题吗？在加工黑皮处，明确了管理值了吗？ 2、加工基准与检测基准是否相同？ 3、测定基准考虑到零件用户的测定方法？ 4、车削后的质量项目(内、外刀纹、钻孔的壁厚变化)是否考虑到热处理变形？ 5、热处理后进行磨削的零件，还能保证热处理的质量吗？ 6、工艺设计中考虑到过去所遇到的问题吗？ 7、零件的装夹结构考虑到避免切屑、灰尘等粘上吗？ 8、基准统一吗？ 9、设计是否只可加工唯一规格件吗？ 10、更换夹具时，能快速找准中心、定位吗？ 11、购买设备时，对其数量、质量、价格作了评价吗？ 12、工件的搬运机械是否考虑到防止零件碰划伤的装置吗? 13、设计时考虑到深孔、盲孔处排屑问题吗？ 14、设计时不应将螺纹处定为加工基准。 (二)、表格 1、应记入机械、装置的操作重点。 2、对在工艺中所用的夹具，检具作了记录吗？对测量重点是否做了规定(项目、方法、频次）？ 3、为了维持产品精度，应列出机械设备的特性、特点。以及列出测定重点(项目、方法、频度等)。 4、列出工艺中所用夹具、工具的更换重点(更换方法、确认内容等)。 5、在试生产时，列出加工机床的要点(更换方法、确认内容)。 6、定出在工艺中所用到的设备、夹具、工具、检具等发生问题时的处理规则。 7、定出发生质量问题时的处理规则。 8、作业是否按作业标准进行的？ 9、定出并记下加工条件。 10、定出用油石修形时的条件。 11、定下有标准、公差的检具。 12、只用作业标准书中所定下的管理项目，能否保证其特性？ (三)、班前检查 1、规定了机械、设备等的定期检查项目没有？是否按所定的实施？ 2、规定了机械、装置等定期检查项目的检查方法没有？ 3、规定了班前检查项目的检查内容没有？ 4、定期检查项目是否合格的判定基准与数值管理或其它方法判断是否有矛盾？

细胞培养常见问题(二)

细胞培养常见问题（二） 1.何谓无血清培养基SFM（Serum Free Medium）？ 无血清培养基是设计用来在无血清条件下促使特殊类型的细胞生长或进行专门应用的培养基。无血清培养基中需要添加生长因子和/或细胞因子，含有个别蛋白或大量蛋白组分：如：胰岛素，转铁蛋白等。 2.何谓无蛋白培养基 PFM （Protein Free Medium）？ 无蛋白培养基中没有添加蛋白，但仍然可能包含一些动物或植物来源的成分（如低分子量肽的各种水解物）。 3.何谓化学限定培养基 CDM （Chemical Define Medium）？ 化学限定培养基中不包含有蛋白、水解产物或未知结构的组分，所有的成分均有已知的化学结构，又称无血清、无蛋白、无肽纯化学合成培养基。 4.无血清培养基有什么优点？ 无血清培养可降低生产成本，简化分离纯化步骤，避免病毒污染造成的危害。无血清培养基的优点在于避免了血清的批次、质量、成份等对细胞培养造成的污染、毒性作用和不利于产品纯化等不良影响。目前，国际法规严格要求“生物制品的生产要向无动物源原料添加发展”，因此，在生产疫苗、单抗和各种生物活性蛋白等生物制品的应用领域中，无血清培养基可使不同的细胞在最有利于细胞生长和表达目的产物的环境中维持高密度培养。 5.无血清培养基可应用于哪些领域？ 目前，无血清培养基已应用的领域有： （1）研究细胞的分化条件； （2）用于激素、生长因子和药物等与细胞相互作用的研究； （3）用于从多种细胞混杂的培养基中选择目的细胞； （4）肿瘤病理学和病因学的研究； （5）用于生产疫苗、单克隆抗体和生物活性蛋白等生物制品。 6.如何对哺乳动物细胞进行无血清条件的驯化？ 建议通过渐进脱离的方法使哺乳动物细胞从有血清培养的条件适应到无血清培养条件。在驯化过程中，细胞生长速度通常比添加血清的培养基缓慢。而且，细胞培养4-5天时，由于细胞内蛋白质的丢失，可能会出现细胞大量死亡的情况。所以，应注意观察细胞生长时的状态，频繁更换培养液，培养基一旦变黄即更换。为了使细胞进入正常生长周期，传代时细胞密度不得低于1x105cells/ml。可应用下列方法进行无血清培养： （1）在通常的培养基中(含5-10%FBS)，细胞进行培养并传代两次。 （2）可直接使用100%无血清培养基进行培养。 （3）或者将血清加入到无血清培养基中，使血清浓度递减，直到完全应用无血清培养基培

腺病毒和腺相关病毒有哪些区别

腺病毒和腺相关病毒有哪些区别？ 腺病毒和腺相关病毒（AAV）是用于基因传递的两种不同类型的病毒载体。这两个重组病毒系统都具有感染广泛宿主的能力，包括分裂和非分裂细胞，而无需与宿主基因组整合。它们两之间有几个主要区别：包装能力、水平，基因表达的起效和持续时间以及免疫应答。 腺病毒简介 腺病毒有约8.5千碱基的容量，具有高水平的蛋白质表达和瞬时基因表达。表达的发作时间可早于感染后16-24小时。腺病毒系统的局限性主要在于靶细胞的高免疫应答。尽管如此，由于它们对大多数组织有高效转导作用，仍被广泛用于研究中。 腺病毒不能整合至宿主基因组，仅能瞬时表达。它可以对分裂期及非分裂期细胞进行感染。其包装片段至多8 kb，浓缩滴度至多为1011-1012TU/mL，片段越大，滴度越低，表达水平还是比较高的。 腺病毒优势 宿主范围广：能够感染分裂期细胞与静止期细胞；对上皮细胞有高度嗜性，尤其适用于感染原代细胞、悬浮细胞等难转染细胞类型 感染效率高：优于其他病毒载体和转染系统的高感染能力，能达到近100%的效率 包装容量大：最高可插入7.5 kb的外源片段 表达水平高：1-2d即开始高水平表达 安全系数高：去除病毒蛋白编码序列，降低细胞毒性和免疫反应；双质粒转染系统，生物安全性高 无整合风险：无插入致突变性 腺相关病毒简介 AAV的包装容量约为4.5千碱基，蛋白质表达水平相对较低，有长效基因表达的潜力。 AAV的趋向性也可以通过不同的血清型增强。 AAV的主要缺点是其对目的基因的包装容量较小，并且表达起效较晚（体外2-7天，体内3-21天），然而，该传递系统所产生的免疫应答水平却非常低。 腺相关病毒可以稳定整合至宿主基因组，并且可以在特定基因产物存在的条件下整合至人类19号染色体中的特定位点。它能对分裂期及非分裂期细胞进行感染。其包装片段至多8 kb，浓缩滴度至多为1011-1013TU/mL，片段越大，滴度越低。腺相关病毒可以应用Tet-on等诱导表达系统，表达水平也是比较高的。 腺相关病毒优势

信息技术课堂教学中常见问题解答

信息技术课堂教学中常见问题?? 1．信息技术的广泛运用，使课堂教学手段发生了很大的变化，板书逐渐为大屏幕投影所替代，尤其是在信息技术课堂上通常是黑板空空如也，请你谈一谈对这种现象的看法。 对这种现象的看法： 1）多媒体教学比传统的教学手段确实具有某些不可替代的优势，受到了广大师生的喜爱： ①声画并茂、形象直观、丰富多彩，提高了学生的学习兴趣。 ②用语言、板书难以表达清楚的重难点内容用更为形象的方式展示给学 生，解决教学内容中的重点和难点。 ③能节约教学时间 ④事先备课，便于修改 2）多媒体教学不可完全取代传统的教学手段，板书是教学的重要组成部分。 ①教学是一种动态的、即时的活动过程，随时都有新情况、新问题、新 的闪光点出现，这就需要教师即时、准确地在课堂活动中反映出来。 而板书正是最好的手段。 ②多媒体教学手段往往是教师课前备课的一个环节，无论教师多么精心 地准备，它也只是对课堂教学活动的预判，无法完全准确地把握整堂 的全部，因此，板书是必要的补充。 ③板书也具有多媒体无法取代的优势。如，停留时间长，便于学生记忆、 便于做笔记；更简要、更概括，能突出重点；能根据教学需要即时、 合理地改变等等。 2．信息技术教学中，采用哪几种教学评价策略？谈谈其实施过程及其注意问题。教学评价策略主要是指对课堂教学活动过程与结果作出的一系列的价值判断行为。 评价策略： （1）课前的诊断性的评价 （2）教学过程中采取表现性的评价，开展学生间的自评、互评，提倡参与性的评价。 （3）课后的教师或学生的总结性评价（如作品展示、研究性课题成果的评价） （4）长期性的评价（如利用信息技术手段长期开展电子档案袋的方式）。实施过程： 1）尽可能收集定量与定性两方面的信息，制订评价方案。 2）科学制订评价指标。评价指标控制在10－15个，而且必须是具体的、明确的，被评价者能根据自己的体会能作出判断。 3）细化、精化评价指标，其产生尽可能校本化，要广泛听取本校教师和学生的意见。 4）合理确定评价指标的权重

常见热处理问题

热处理培训资料 常见热处理问题与解答 （1）淬火常见问题与解决技巧 ※Ms点随C%的增加而降低 淬火时，过冷沃斯田体开始变态为麻田散体的温度称之为Ms点，变态完成之温度称之为Mf点。%C含量愈高，Ms点温度愈降低。0.4%C碳钢的Ms温度约为350℃左右，而0.8%C碳钢就降低至约200℃左右。 ※淬火液可添加适当的添加剂 （1）水中加入食盐可使冷却速率加倍：盐水淬火之冷却速率快，且不会有淬裂及淬火不均匀之现象，可称是最理想之淬硬用冷却剂。食盐的添加比例以重量百分比10%为宜。 （2）水中有杂质比纯水更适合当淬火液：水中加入固体微粒，有助于工件表面之洗净作用，破坏蒸气膜作用，使得冷却速度增加，可防止淬火斑点的发生。因此淬火处理，不用纯水而用混合水之淬火技术是很重要的观念。 （3）聚合物可与水调配成水溶性淬火液：聚合物淬火液可依加水程度调配出由水到油之冷却速率之淬火液，甚为方便，且又无火灾、污染及其它公害之虞，颇具前瞻性。 （4）干冰加乙醇可用于深冷处理容液：将干冰加入乙醇中可产生-76℃之均匀温度，是很实用的低温冷却液。 ※硬度与淬火速度之关联性 只要改变钢材淬火冷却速率，就会获得不同的硬度值，主要原因是钢材内部生成的组织不同。当冷却速度较慢时而经过钢材的Ps曲线，此时沃斯田体变态温度较高，沃斯田体会生成波来体，变态开始点为Ps点，变态终结点为Pf点，波来体的硬度较小。若冷却速度加快，冷却曲线不会切过Ps曲线时，则沃斯田体会变态成硬度较高的麻田散体。麻田散体的硬度与固溶的碳含量有关，因此麻田散体的硬度会随着%C含量之增加而变大，但超过0.77%C后，麻田散体内的碳固溶量已无明显增加，其硬度变化亦趋于缓和。 ※淬火与回火冷却方法之区别 淬火常见的冷却方式有三种，分别是：（1）连续冷却；（2）恒温冷却及（3）阶段冷却。为求淬火过程降低淬裂的发生，临界区域温度以上，可使用高于临界冷却速率的急速冷却为宜；进入危险区域时，使用缓慢冷却是极为重要的关键技术。因此，此类冷却方式施行时，使用阶段冷却或恒温冷却（麻回火）是最适宜的。

腺病毒中文操作手册

腺病毒载体操作手册中文版腺病毒重组系统 AdEasyTM操作手册 目录 第一章简介 1 第二章应用重组腺病毒的优点 2 第三章AdEasyTM 技术 3 3.1 技术概况3 3.2 AdEasyTM系统中产生重组腺病毒的时程3 第四章主要流程 4 4.1 将基因克隆入AdEasyTM转移载体4 4.1.1 克隆的一般原则4 4.1.2 构建重组AdEasyTM转移载体5 4.2 细菌内AdEasyTM重组子的产生5 4.2.1 共转化的一般原则5 4.2.2 共转化方法5 4.2.3 预期结果5 4.3 AdEasyTM重组质粒的筛选和扩增6 4.4 AdEasyTM重组子转染QBI-293A细胞6 4.4.1 细胞铺板6 4.4.2 磷酸钙转化技术7 第五章常用技术8 5.1 QBI-293A细胞培养8 5.1.1 QBI-293A细胞的初始培养8 5.1.2 QBI-293A细胞的维持培养和增殖8 5.1.3 QBI-293A细胞的冻存8 5.2 QBI-293A细胞的转染和病毒空斑的产生9 5.2.1 感染QBI-293A细胞9 5.2.2 病毒空斑形成9 5.2.3 琼脂糖覆盖被感染细胞9 5.3 MOI测定10 5.4 腺病毒感染力测定10 5.4.1 X-Gal染色11 5.5 重组腺病毒的筛选和纯化11 5.5.1 挑选最佳重组腺病毒：表达和基因输送11 5.5.2 病毒空斑挑选和小量扩增12 5.5.3 Western杂交13 5.5.4 Southern杂交和点杂交13 5.5.5 病毒裂解产物PCR 14 5.5.6 免疫测定14 5.5.7 功能测定14 5.6 病毒颗粒在QBI-293A细胞中的大量扩增15 5.7 两次氯化铯密度梯度离心纯化重组腺病毒16 5.7.1 不连续密度梯度离心17 5.7.2 连续密度梯度离心17 5.7.3 病毒溶液去盐和浓集17 5.8 病毒滴度测定18 5.8.1 O.D.260 nm (VP/ml) 19 5.8.2 空斑测定法20 5.8.3 50%组织培养感染剂量法20 第六章疑难解答22 6.1 QBI-293A细胞培养22 6.2 感染力测定22 6.3 转移载体克隆23 6.4 在BJ5183细胞中共转化和重组24 6.5 转染QBI-293A细胞25 6.6 筛选和测定25 6.7 在QBI-293A细胞中表达26 6.8 重组腺病毒的扩增26 6.9 纯化26 6.10 病毒滴度测定27 缩写英文全称中文全称 Ad Adenovirus 腺病毒 Ad5 Adenovirus serotype 5 血清5型腺病毒AdV Adenoviral Vector 腺病毒载体 Amp Ampicillin 氨苄青霉素 β-Gal β-Galactosidase β-半乳糖苷酶 bp Base Pair 碱基对BSA Bovine Serum Albumin 小牛血清白蛋白 cDNA Complementary DNA 互补DNA cccDNA Closed Circular Coiled DNA 闭环螺旋DNA CPE Cytopathic Effect 细胞病理效应 CsCl Cesium Chloride 氯化铯 DMEM Dulbecco’s Modified Eagle Medium DMEM培养基

青骄第二课堂答案

青骄第二课堂——禁毒学习教程及考试答案 五年级答案： 一、毒品预防： 1.下列物品中不属于毒品的是？酒精 2.问题已经成为当今世界公害？毒品 3.下列物质中，属于毒品的是？罂粟壳 4.冰毒属于（）？兴奋剂 5.长期吸食鸦片会使人丧失（）？免疫力 二、如何拒绝毒品 1.有这么一句话“一日吸毒，十年戒毒，终生想毒”用以表明毒品的( )？心瘾 2.冰毒在（）比较常见？歌舞厅 3.以下不属于毒品的基本特征的是（）？安全性 4．吸毒成瘾一般具有的特征( )？以上三项均正确 5.毒品的危害有（）？ABC选项都正确 三、期末考试 1.A， 2.A， 3.A， 4.A， 5.A， 6.C，7A，8.B9.A，10.C 六年级答案： 一、毒品危害家庭 1.当陌生人主动给你饮料和水时，你应该怎么做（）？礼貌的拒绝 2.“一人吸毒，全家遭殃”说明了毒品的什么危害（）？家庭危害 3.以下不属于吸毒违法行为的是（）？服用安眠药 4.如何加强自我保护意识（）？树立防毒意识

5.吸毒行为产生的环境因素有很多，而这里的环境指的是( ) ？以上都是 二、 1.当你的朋友或毒贩逼你吸毒时，你应该怎么办（）？秘密打110 2.当自己的好朋友吸毒后，不正确的做法是什么（）？自己也吸毒，然后陪好朋友一起戒毒 3.吸食方式中危害最大的是（）？静脉注射 4.禁毒是全社会的（）？共同责任 5.下列不是毒品的是（）？跳舞草 三、期末考试 1.B，2C，3C，4D，5A，6A，7C，8A，9C,10.B 七年级答案 一、X任务１： 动画中猪爸爸车里藏的是哪一种毒品？A 设卡盘查时缉毒犬们依靠哪一种感官来查找毒品？C 猪爸爸为什么会撞上刺猬妈妈？C X探长是哪一种动物形象的拟人化？D 毒品的危害主要表现为（）？ABCD 二、X任务２： 狱警是哪一种动物形象的拟人化？鸭子 毒枭大猩猩贩卖的是哪一种毒品？摇头丸 舞厅中梅花鹿小姐为何被毒贩强行喂入毒品？B X探长选择成为一名缉毒警察的主要原因是什么？B X探长的母亲注射的可能是哪一种毒品？冰毒、海洛因 三、毒品的危害：远离、拒绝毒品

热处理常见问题与解答

热处理常见问题与解答 1. 淬火常见问题与解决技巧 Ms点随 C %的增加而降低。淬火时，过冷奥氏体开始变态为马氏体的温度称之为Ms 点，变态完成之温度称之为Mf 点。%C含量愈高，Ms点温度愈降低。0.4%C碳钢的Ms 温度约为350℃左右，而0.8%C 碳钢就降低至约200℃左右。 2. 淬火液可添加适当的添加剂（1）水中加入食盐可使冷却速率加倍：盐水淬火之冷却速率快，且不会有淬裂及淬火不均匀之现象，可称是最理想之淬硬用冷却剂。食盐的添加比例以重量百分比10%为宜。（2）水中有杂质比纯水更适合当淬火液：水中加入固体微粒，有助于工件表面之洗净作用，破坏蒸气膜作用，使得冷却速度增加，可防止淬火斑点的发生。因此淬火处理，不用纯水而用混合水之淬火技术是很重要的观念。（3）聚合物可与水调配成水溶性淬火液：聚合物淬火液可依加水程度调配出由水到油之冷却速率之淬火液，甚为方便，且又无火灾、污染及其它公害之虞，颇具前瞻性。（4）干冰加乙醇可用于深冷处理容液：将干冰加入乙醇中可产生-76℃之均匀温度，是很实用的低温冷却液。 .硬度与淬火速度之关联性。 .只要改变钢材淬火冷却速率，就会获得不同的硬度值，主要原因是钢材内部生成的组织不同。当冷却速度较慢时而经过钢材的Ps曲线，此时奥氏体变态温度较高，奥氏体会生成波来体，变态开始点为Ps 点，变态终结点为Pf 点，波来体的硬度较小。若冷却速度加快，冷却曲线不会切过Ps 曲线时，则奥氏体会变态成硬度较高的马氏体。马氏体的硬度与固溶的碳含量有关，因此马氏体的硬度会随着%C含量之增加而变大，但超过0.77%C 后，马氏体内的碳固溶量已无明显增加，其硬度变化亦趋于缓和。 3. 淬火与回火冷却方法之区别 淬火常见的冷却方式有三种，分别是：（1）连续冷却；（2）恒温冷却及（3）阶段冷却。为求淬火过程降低淬裂的发生，临界区域温度以上，可使用高于临界冷却速率的