乌梁素海氮磷浓度与叶绿素a时空分布关系研究_杨志岩

收稿日期:2008-09-25

基金项目:国家自然科学基金(50569002,50669004);内蒙古自然科学基金(200208020512)

作者简介:杨志岩(1983-),女,河北沧州人,在读硕士研究生,主要从事干旱区水质分析评价与水环境研究。

乌梁素海氮磷浓度与叶绿素a 时空分布关系研究

杨志岩,李畅游,张 生,孙 标,梁喜珍

(内蒙古农业大学水利与土木建筑工程学院,内蒙古呼和浩特 010018)

摘 要:为了解乌梁素海的富营养状况,采用2005)2007年乌梁素海监测数据,对叶绿素a 浓度与总氮、总磷浓度相关关系进行了研究,并对乌梁素海水体中叶绿素a 浓度的时空分布进行分析。结果表明,乌梁素海叶绿素a 浓度具有明显的时空分布特征,在时间上,5、10月份叶绿素a 浓度偏高;在空间上,北部区>南部区。关键词:乌梁素海;叶绿素a;总氮;总磷

中图分类号:X52 文献标识码:A 文章编号:1007-1504(2009)01-0016-04

The Distributing in Space -time and the Relationships between Chlorophyll -a content and TN and TP concentrations in Wuliang suha i Lake

YANG Zhi-yan,LI Chang-you,ZHANG Sheng,SUN Biao,LIANG Xi-zhen(Inner Mongolia Agricultural University,Hohhot Inner Mongolia 010018,China)

Abstract :Based on the conventional moni toring data from M ay to October in 2005)2007,this paper studied the relationship be -tween chlorophyll-a concentration and TN,TP.The space-ti me distributing of chlorophyll-a concentration in Wuliangsu Lake was analyzed.The results appeared that chlorophyll-a concentration of M ay and October hi gher than concentration of other months.Chlorophyll-a concentration of north region higher than concentration of south region.Key words :uliangsu lake;chlorophyll-a;TN;TP

湖泊富营养化是全球普遍关注的环境问题之一,在富营养化湖泊的恢复与治理研究中,氮、磷污染是研究的焦点。氮、磷是导致湖泊发生富营养化的重要营养元素,对湖泊藻类生长具有重要的影响。氮、磷与藻类生物量之间的关系是研究湖泊富营养化的重要内容之一

[1,2]

。由于叶绿

素a 含量是表征藻类现存量的重要指标之一[3]

,也是作为水体理化和生物指标的综合表现,本身也受环境因子的制约,因此,研究叶绿素a 含量的时空分布及其与总氮、总磷浓度的关系,对认识湖泊富营养化的机理具有重要意义。

本研究以乌梁素海为研究对象,采用自2005年以来对乌梁素海进行的长期观测数据为基础,分析乌梁素海的叶绿素a 含量的时空分布及其与氮、磷浓度之间的关系。1 研究区概况与研究方法1.1 研究区概况

乌梁素海属于蒙新高原湖区,位于内蒙古自治区巴彦淖尔市乌拉特前旗境内,其地理坐标介于北纬40b 36c ~41b 03c ,东经108b 43c ~108b 57c 之

第23卷 第1期

2009年03月

干旱环境监测

Arid Environmental Monitoring

Vol .23 No .1Mar ..2009

间,现有水域面积285138km 2

,其中芦苇区面积为118197km 2

,明水区面积为111113km 2

,明水区中8517km 2为沉水植物密集区,其余为沼泽区。乌梁素海是内蒙古河套灌区排灌水系的重要组成部分,处于黄河河套平原末端,属黄河内蒙段最大的湖泊,其补水来源90%经总排干沟汇入乌梁素海后,由西山咀河口排入黄河(见图1),是当地农田退水、工业废水和生活污水的唯一承泄渠道,每年汇入乌梁素海的各种营养盐加速了乌梁素海的沼泽化[4,5]

,使乌梁素海成为我

国中型湖泊中富营养化水平较为严重的湖泊之

一[6]

。

图1 巴彦淖尔市河套灌区灌排系统示意图

112 研究方法

将乌梁素海在空间上以2km @2km 的正方形网格剖分,利用网格的交点,以梅花形布置水样监测点(见图2)。

取样时间为2005)2007年的5~10月份,每月取样一次。由于乌梁素海的环境复杂,水草、芦苇各月份分布情况不同,所以本文取每个月都能取到的点,即:I12、J11、J13、K12、L11、L13、L15、M12、M14、N13、O10、P9、Q8、Q10、R7、S6、U4、V3共18个点的数据分析乌梁素海叶绿素a 、总氮、总磷浓度及其相关关系随时间的变化规律。

叶绿素a 的测定采用取300ml 水样用What -man GP P C 微孔玻璃纤维滤膜(0145L m)抽滤,滤膜低温干燥后,用90%丙酮低温萃取,离心后取上清液测定光密度,实验方法和计算按规范进

行[7]

,其他理化指标的监测均按规定的分析方

法

[8]

。

图2 乌梁素海水质监测点布设示意图

2 结果与讨论

2.1 乌梁素海水体中叶绿素a 的时空变化

乌梁素海水体中叶绿素a 的时间变化采用2005年8月)2007年10月中每个月的18个取样点均值进行分析。叶绿素a 随时间变化分析结果见图3、图4。由图3、图4可看出,2005年到2007年的叶绿素a 随时间变化基本一致,呈现出5、7、8、10月份偏高,6、9月份偏低的趋势。最高值出现在2005年10月,均值为01077mg P L,最低值出现在2007年6月,均值为01015mg P L;水体中叶绿素a 的空间变化:对每个取样点所有月份取均值,叶绿素a 随空间变化分析结果见图5。由图5可看出,叶绿素a 在乌梁素海形成了十分明显的空间分布。即前10个点的均值均大于01035mg P L,而后8个点的均值均小于01035mg P L 。图2中的横线为北区和南区的分界线,前10个点均分布在乌梁素海的北部地区,后8个点分布在南部区。由于排入乌梁素海的工业废

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17#第1期 杨志岩等 乌梁素海氮磷浓度与叶绿素a 时空分布关系研究

水、农业废水及生活污水90%是经过I12和J11之间的总排干排入,因此导致北部区域的氮、磷含量增高,从而影响藻类的繁殖、增长,使叶绿素a 含量增高。而南部区沿岸很少有污水排入,当北部区的水流入南部区时,大量的营养物质在途中被水生植物吸收和降解,氮、磷含量较低,导致北部区叶绿素a

含量降低。

图4 乌梁素海叶绿素a 均值随时间变化曲线

图5 各取样点叶绿素a 均值

2.2 叶绿素a 与总氮、总磷浓度关系分析

浮游植物是湖泊中的初级生产者,通过光合作用将水体中的无机物转化为有机物。在这种物质转化过程中,水体中无机营养盐类的丰欠是影响浮游植物光合生产的重要因素,而浮游植物

的生长状况又是影响水体中营养盐类含量变化的主要条件,作为浮游植物体内主要色素的叶绿素a,其与营养盐的关系较为复杂[9]

。氮、磷是藻类生长的必需营养物质,对藻类生长繁殖起着十分重要的作用。本文采用2005年8~10月、2006年5~10月、2007年5~7月共12个月的数据对乌梁素海的叶绿素a 浓度与总氮、总磷浓度相关关系进行分析,分析结果见表1。由表1可见,2005年8月、2006年5月及2006年8月叶绿素a 浓度与总氮、总磷浓度的相关性良好;2005年9月、2005年10月、2006年7月、2006年10月和2007年7月的叶绿素a 与总氮、总磷浓度的相关性较差,其中2005年10月磷与叶绿素a 的相关性明显,而与氮元素没有明显的相关性,说明该月磷元素为水体中植物生长的限制因素;2006年6月、2006年9月、2007年5月和2007年6月的叶绿素a 浓度与总氮、总磷浓度没有明显的相关性。

6月份叶绿素a 浓度与总磷相关系数出现负值,主要是因为这一时期乌梁素海磷元素基本没有外源排入,而6月份正是藻类生长非常迅速的时期,吸收了大量的磷,从而导致这种现象的发生。

表1 叶绿素a 与氮、磷浓度相关系数

时间

叶绿素a 与

总氮相关系数

叶绿素a 与

总磷相关系数2005-08018459 019504

2005-090134020138282005-100125760171222006-050181270185522006-06011637-010*******-07

0140920117802006-080166330170892006-090101990104382006-100145670145502007-050110530127782007-06012628-010*******-07

013777

013418

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18# 干旱环境监测 第23卷

3结语

1)乌梁素海叶绿素a分布具有一定的时空特征。很多学者通过对湖泊(水库)叶绿素a的时间分布研究表明,春、夏季含量较高,秋、冬季含量较低[10-13]。但是本文通过对乌梁素海叶绿素a的分析表明,乌梁素海叶绿素a在时间分布上具有一定的特殊性,5月>7、8月>10月>9月>6月,其变化规律基本与氮、磷随时间变化规律一致。在营养水平条件满足的情况下,水体中叶绿素a含量随水温增高而增加[10]。而乌梁素海叶绿素a的含量出现5月及10月较高的现象,主要是因为乌梁素海的来水以河套灌区的农田退水为主,有研究表明,随着外源营养物质输入的增加,植物光合色素含量显著增加[14,15],5月及10月正值春灌秋浇期,大量的农田退水携带充足的氮、磷元素进入乌梁素海,使藻类在温度适合的条件下迅速增长繁殖。在空间上,北部区>南部区。出现这种状况主要是因为大量的污水从北部的总排干进入乌梁素海,从南部的西山咀排出,在水自北向南的运移过程中,通过以水草和芦苇为主的生物降解和吸收作用,氮、磷元素浓度降低,导致叶绿素a含量比北部区降低。

2)通过对叶绿素a与总氮、总磷浓度关系分析表明,叶绿素a与总氮、总磷浓度的相关关系不存在明显的规律。6月乌梁素海的温度适合藻类迅速生长,吸收了大量的磷,而这一时期磷元素基本没有外源排入,使这一时期叶绿素a浓度与总磷相关系数出现负值。

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第1期杨志岩等乌梁素海氮磷浓度与叶绿素a时空分布关系研究

草型湖泊叶绿素a浓度时空分布特征及其与氮磷浓度关系

草型湖泊叶绿素a 浓度时空分布特征 及其与氮磷浓度关系 * 冯伟莹 1，2 张生 1 王圣瑞 2 焦立新 2 王利明 1 崔凤丽 1 付绪金 1 杨芳 1 （1．内蒙古农业大学水利与土木建筑工程学院，呼和浩特010018；2．环境基准与风险评估国家重点实验室/ 中国环境科学研究院湖泊生态环境创新基地/国家环境保护湖泊污染控制重点实验室，北京100012） 摘要：采用2006—2010年5—10月份乌梁素海监测数据，对叶绿素a 浓度的时空分布特征及其与总氮、总磷浓度相关关系进行了分析。结果表明：乌梁素海叶绿素a 浓度具有明显的时空分布差异性：在时间上，呈现出明显的季节性变化，5、6、9、10月份叶绿素a 浓度较高，7、8月份叶绿素a 浓度偏低，秋季≈春季＞夏季，最高值出现在2007年9月，均 值为9.01mg /m 3， 最低值出现在2010年7月，均值为1.80mg /m 3；在空间上，南北部叶绿素a 浓度以7.78mg /m 3为界， 呈现北部区＞南部区的趋势。通过叶绿素a 与总氮、总磷浓度相关性分析得出，2006年5月叶绿素a 与总氮、总磷（r =0.7450、0.7596）、2008年5月叶绿素a 与总磷（r =0.5421）、2010年5月叶绿素a 与总氮（r =0.5089）存在较好的相关性。 关键词：线性回归方程；相关性；时空差异 DOI ：10.7617/j.issn.1000－8942.2013.04.032 SPACE-TIME DISTRIBUTION OF CHLOROPHYLL-a AND ITS RELATIONSHIP WITH TN AND TP CONCENTRATIONS IN PLANT TYPE LAKE Feng Weiying 1， 2 Zhang Sheng 1Wang Shengrui 2Jiao Lixin 2Wang Liming 1Cui Fengli 1Fu Xujin 1Yang Fang 1 （1．College of Water Conservancy and Civil Engineering ，Inner Mongolia Agricultural University ，Hohhot 010018，China ；2．State Key Laboratory of Environmental Criteria and Risk Assessment ，Research Center of Lake Eco-Environment ，Chinese Research Academy of Environmental Sciences ，State Environmental Protection Key Laboratory for Lake Pollution Control ， Beijing 100012，China ） Abstract ：Based on the monitoring data from May to October in 2006—2010，the spatial-temporal distribution of chlorophyll-a concentrations and its relationship with and TN and TP concentrations were analyzed．The results showed that chlorophyll-a concentrations significantly change with both time and space ，being timely higher in May ，June ，September and October ，lower in July and August ，concentrations in spring and autumn were higher than those in summer ，the maximum value occurred in september ，2007with an average of 9.01mg /m 3，and the minimum value in July ，2010with an average of 1.80mg /m 3；and spatially they were decreasing from the north to the south ，with the border of 7.78mg /m 3．The correlation between chlorophyll-a with TN ，TP demonstrated evidently in May of 2006（r =0.7450，0.7596），the correlation between chlorophyll-a with TP demonstrated evidently in May of 2008（r =0.5421），the correlation between chlorophyll-a with TN demonstrated evidently in May of 2010（r =0.5089）． Keywords ：linear regression equation ；correlation ；spatial-temporal change *国家自然科学基金项目（51269016，51269017，U1202235，41103070）；内蒙古自治区重大科技项目（20091408）。 0引言 湖泊富营养化是由于过量的营养物输入湖泊，导 致藻类等浮游植物大量繁殖，水质变坏，进而引起湖泊生态系统的一系列变化［1］ 。叶绿素a 最能表现水体富 营养化状态进程，也是浮游植物现存量的重要指标之 一 ［2］ 。近两年，虞英杰［3］ 等提出了一种基于微粒群

叶绿素理化性质及含量

实验报告 课程名称： 植物生理学（乙）指导老师： 廖敏 成绩： 实验名称： 叶绿素理化性质和含量 实验类型： 定量探究型 同组学生姓名： 方昊 一、实验目的和要求（必填） 三、主要仪器设备（必填） 五、实验数据记录和处理 七、讨论、心得 二、实验内容和原理（必填） 四、操作方法和实验步骤 六、实验结果与分析（必填） 一、实验目的和要求 掌握植物中叶绿体色素的分离和性质鉴定、定量分析的原理和方法； 二、实验内容和原理 以青菜为材料，提取和分离叶绿体色素并进行理化性质测定和叶绿素含量 分析。原理如下： 1. 叶绿素和类胡萝卜素均不溶于水而溶于有机溶剂，常用95%的乙醇或80%的丙酮提取； 2. 叶绿素是二羧酸酯，与强碱反应，形成绿色的可溶性叶绿素盐，就可与有机溶剂中的类胡萝卜素 分开； 3. 在酸性或加温条件下，叶绿素卟啉环中的Mg++可依次被H+和Cu++取代形成褐色的去镁叶绿素和绿色的铜代叶绿素； 4. 叶绿素受光激发，可发出红色荧光，反射光下可见红色荧光； 5. 叶绿素吸收红光和蓝紫光，红光区可用于定量分析，其中645和663用于定量叶绿素a 、b 及总量，而652可直接用于总量分析。 专业：农业资源与环境 姓名： 吴主光 学号： 3110100403 日期： 2013.10.17 地点： 生物实验中心 装 订 线

三、主要仪器设备 1. 天平（万分之一）、可扫描分光光度计、离心机、研具、各种容（量）器、洒精灯等 四、操作方法、实验步骤以及实验现象 定性分析： 鲜叶5g+95%30ml（逐步加入）,磨成匀浆 过滤入三角瓶中，观察荧光现象：透射光绿色，反射光红色。 皂化反应（3ml）：加KOH数片剧烈摇均，加石油醚5ml和H2O1ml分层后观察：上层呈黄色，为类胡萝卜素，吸收蓝紫光；下层呈绿色，为叶绿素，吸收红光和蓝紫光。 取代反应（1）：加醋酸约2ml，变褐（去镁叶绿素）；取1/2加醋酸铜粉加热，变鲜绿色，为铜代叶绿素。 取代反应（2）：鲜叶2-3cm2，加Ac-AcCu 20ml加热，观察： 3 min变为褐绿色的去镁叶绿素， 5 min后，变为深绿色的铜代叶绿素。 叶绿素和类胡萝卜素的吸收光谱测定： 皂化反应的上层黄色石油醚溶液（稀释470nm OD 0.5-1） 反复用石油醚粹取，直到无类胡萝卜素，离心得叶绿素(盐)（稀释663nm OD 0.5-1) 在400-700nm处扫描光谱，分别测定类胡萝卜素和叶绿素的吸收峰. 叶绿素定量分析：鲜叶0.1g，加1.9mlH2O，磨成匀浆，取0.2ml加80%丙酮4.8ml,摇匀，4000转离心3min,上清液在645，652，663测定OD，计算Chla,Chlb 和Chl总量的值。 五、实验数据记录和处理

062.湖泊氮磷赋存形态和分布研究进展

湖泊氮磷赋存形态和分布研究进展 许萌萌1，2张毅敏2高月香2彭福全2汪龙眠2吴晗2，3 (1.河海大学环境学院，南京210098，2.环境保护部南京环境科学研究所，南京210042，3. 常州大学环境与安全工程学院213164） 摘要：湖泊水体和沉积物中氮磷等营养盐的生物地球化学循环直接影响着湖泊的富营养化。所以全面了解氮磷等营养盐的含量分布特征及其来源，为湖泊富营养化的成因及氮磷迁移转化提供了科学的依据。目前，很多研究学者采用了野外采样、实验室分析和收集文献资料相结合的方法，研究了氮磷营养盐的形态含量及分布差异。 关键词：湖泊氮磷赋存形态分布特征 Advances in chemical speciation and distribution of nitrogen and phosphorus in lakes Xumeng Meng1,2Zhang Yimin2,Gao Yue Xiang2,Peng Fu Quan2,Wang Long Mian2,Wu Han2,3 Environment Department of Hohai University,Nanjing210098,2.Nanjing Institute of Environmental Sciences of,Ministry of Environmental Protection,Nanjing210042,3.Environmental and Safety Engineering Department of Changzhou University213164) Abstract:The biogeochemical cycles of nitrogen and phosphorus in the lake water and sediment directly affect the eutrophication of the lake.Therefore,a comprehensive understanding of the content distribution and source of nitrogen and phosphorus can provide a scientific basis for the cause of eutrophication and the migration and transformation of nitrogen and phosphorus.Currently,many researchers using a field sampling, laboratory analysis and the collection method of combining literature studied the content and distribution differences of morphology of nitrogen and phosphorus. Keywords:Lakes Nitrogen and phosphorus Chemical speciation Distribution characteristics 随着社会和经济发展，人为活动导致的湖泊污染已经成为当今世界面临的一个严重的环境问题，尤其是浅水湖泊的富营养化日益成为各国的主要环境问题。工农业废水大量排放，湖泊流域的水体及沉积物的污染问题日益突出，养殖水体尤为严重。水体氮磷营养盐含量过高易引发自身及外部水域的富营养化，严重时导致赤潮或水华频发。 沉积物承载着湖泊营养物质循环的中心环节，一方面对上覆水体起到净化水质的作用，另一方面又不断向上覆水释放营养盐发挥着营养源作用。沉积物氮磷主要来源于水体中颗粒有机物的沉降积累。水体中的氮磷进入沉积物都是要经过“沉降-降解-堆积”的3个阶段，自上而下呈现逐渐变小的趋势。但是由于各个地方物质来源组成、水动力环境、生物化学条件及生物种群等不同，使其含量在垂直分布变化上产生波动，从而反映出不同区环境的不同变化。上覆水的氮磷进入到沉积物中后，会发生明显的形态转化和再迁移作用，其“活性”取决于氮磷在沉积物中的形态[1]。当外源负荷受到控制后，沉积物作为内源污染源，其氮磷还可通过间隙水和上覆水进行物理、生物化学交换[2]。因此了解沉积物中的氮磷赋存和分布对防治富营养化，控制内负荷具有重要意义。养殖水域氮磷的赋存形态分布比较复杂，相关的研究很少。由于过量的污染物的排放，在低水位时期会超过洞庭湖湖自身净化的能力而对栖息于湖内的生物造成严重影响并危害到其生存[3]。 根据国内外调查研究的相关文献资料，湖泊流域的氮磷形态研究不仅仅局限在湖泊中，湖泊

植物叶绿素测定方法

叶绿素含量的测定 一、原理 根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。根据朗伯—比尔定律，某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比，即A＝αCL式中：α比例常数。当溶液浓度以百分浓度为单位，液层厚度为1cm时，α为该物质的吸光系数。各种有色物质溶液在不同波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和。这就是吸光度的加和性。今欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a、b和类胡萝卜素的含量，只需测定该提取液在三个特定波长下的吸光度A，并根据叶绿素a、b 及类胡萝卜素在该波长下的吸光系数即可求出其浓度。在测定叶绿素a、b时为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。 二、材料、仪器设备及试剂 （一）材料：新鲜（或烘干）的植物叶片。 （二）仪器设备：1）分光光度计；2）电子顶载天平（感量0.01g）；3）研钵；4）棕色容量瓶； 5）小漏斗；6）定量滤纸；7）吸水纸； 8）擦境纸；9）滴管。 （三）试剂：1）95%乙醇（或80%丙酮）（v丙酮：v乙醇=2：1的95%水溶液）；2）石英砂；3）碳酸钙粉。暗中2h，0.5g，25ml 三、实验步骤 1）取新鲜植物叶片（或其它绿色组织）或干材料，擦净组织表面污物，剪碎（去掉中脉），混匀。 2）称取剪碎的新鲜样品 0.2g ，共3份，分别放入研钵中，加少量石英砂和碳酸钙粉及2～3ml 95%乙醇，研成均浆，再加乙醇10ml，继续研磨至组织变白。静置3～5m 3）取滤纸1张，置漏斗中，用乙醇湿润，沿玻棒把提取液倒入漏斗中，过滤到25ml棕色容量瓶中，用少量乙醇冲洗研钵、研棒及残渣数次，最后连同残渣一起倒入漏斗中。 4）用滴管吸取乙醇，将滤纸上的叶绿体色素全部洗入容量瓶中。直至滤纸和残渣中无绿色为止。最后用乙醇定容至25ml，摇匀。 5）把叶绿体色素提取液倒入光径1cm的比色杯内，以95%乙醇为空白，在波长663nm 和645nm下测定吸光度。在波长663nm、645nm下或652nm测定吸光度。 四、实验结果计算 叶绿素a的含量 = 12.7 ? OD 663 – 2.69 ? OD 645 叶绿素a的含量 = 22.9 ? OD 645 – 4.86 ? OD 663 叶绿素a、b的总含量 = 8.02 ? OD 663 + 20.20 ? OD 645

常见农家肥的氮磷钾含量比例

常见农家肥的氮磷钾含量比例 良好的有机肥料。由于畜禽食物来源不同，其粪肥有“冷热”之分，生产中要区别对待、合理施用。 1、猪粪：猪粪养分含量丰富，钾含量最高，氮磷含量仅次于羊粪。猪粪质地较细密，氨化细菌较多，易分解，肥效快，利于形成腐殖质，改土作用好。猪粪肥性柔和，后劲足，属温性肥料。适于各种农作物和土壤、腐熟后的猪粪可用于稻田，也可用于旱土，可作基肥使用，也可作追肥使用。 2、牛粪：牛粪质地细密，含水量高，通气性差，腐熟缓慢，肥效迟缓，发酵温度低，属冷性肥料。为加速分解，可将鲜牛粪稍加晒干，再加马粪或羊粪混合堆沤，可得疏松优质的肥料。如混入钙镁磷肥或磷矿粉，肥料质量更高。牛粪中碳素含量高、氮素含量低，碳氮比大，施用时要注意配合使用速效氮肥，以防肥料分解时微生物与作物争氮。牛粪一般只作基 肥使用。 3、马粪：马粪中纤维含量高，粪质粗，疏松多孔，水分易蒸发，含水量少，腐熟快，在堆积过程中发热量大、温度高，属热性肥料。可用于温床育苗，发热效果比猪粪好。在制作堆肥时，加入适量马粪，可促进堆肥腐熟。由于马粪质地粗，特别适用于粘性土壤，可作为粘性土壤的改良剂。 4、羊粪：粪肥中含氮、钙、镁较高。羊粪发热性居于马粪与牛粪之间。羊粪适用于各类土壤和各类作物，增产效果均好，腐熟后可作基肥、追肥和种肥施用。

5、兔粪：兔粪中氮、磷含量比较高，钾的含量比较低。兔粪碳氮比值小，易腐熟， 施入土中分解比较快，属热性肥料。在缺磷土壤上施用效果更好。 6、禽粪：禽粪中养分含量比畜粪还高。家禽粪中又以鸡粪的养分含量最高。禽粪分解过程中易产生高温，属热性肥料。禽粪很容易招致地下害虫，且尿酸态氮不能被作物直接吸收利用，须经充分腐熟后才能施用。禽粪最好作追肥施用。 （此文档部分内容来源于网络，如有侵权请告知删除，文档可自行编辑修改内容， 供参考，感谢您的配合和支持）

(完整word版)叶绿素含量的测定

叶绿素含量的测定 一、原理 根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。 根据朗伯—比尔定律，某有色溶液的吸光度A 与其中溶质浓度C 和液层厚度L 成正比，即A ＝αCL 式中：α比例常数。当溶液浓度以百分浓度为单位，液层厚度为1cm 时，α为该物质的吸光系数。各种有色物质溶液在不同波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。 如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和。这就是吸光度的加和性。今欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a 、b 和类胡萝卜素的含量，只需测定该提取液在三个特定波长下的吸光度A ，并根据叶绿素a 、b 及类胡萝卜素在该波长下的吸光系数即可求出其浓度。在测定叶绿素a 、b 时为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。 已知叶绿素a 、叶绿素b 的80%丙酮溶液在红外区的最大吸收峰分别位于663、645nm 处。已知在波长663nm 下叶绿素a 、叶绿素b 在该溶液中的吸光系数的分别为82.04和9.27；在波长645nm 处的吸光系数分别为16.75和45.60。根据加和性原则列出以下关系式： A663=82.04Ca+9.27Cb （1） A645=16.76Ca+45.60Cb （2） 式（1） （2）A 663nm 和A645nm 为叶绿素溶液在663nm 和645nm 处的吸光度，C a C b 分别为叶绿素a 、叶绿素b 的浓度，以mg/L 为单位。 解方程（1） （2）组得 C a =12.72 A 663—2.59 A 645 (3) C b =22.88 A 645—4.67 A 663 (4) 将C a +C b 相加即得叶绿素总量C T C T ＝ C a 十C b ＝20.29A 645—8.05 A 663 (5) 从公式（3）、（4）、（5）可以看出，，就可计算出提取液中的叶绿素a 、b 浓度另外，由于叶绿素a 叶绿素b 在652nm 的吸收峰相交，两者有相同的吸光系数（均为30.5），也可以在此波长下测定一次吸光度（A 652）而求出叶绿素a 、叶绿素 b 总量 所测定材料的单位面积或单位重量的叶绿素含量可按下式进行计算： C T ＝ 5 .341000 652 A (6) 有叶绿素存在的条件下，用分光光度法可同时测出溶液中类胡萝卜素的含量。Licht-enthaler 等对Arnon 进行了修正，提出了 80%丙酮提取液中3种色素含量的计算公式： C a ＝12.21A 663—2.59 A 646 (7)

叶绿素含量的测定

叶绿素含量的测定 绿素含量的绿定叶 一、绿绿目的 1.了解分光光度绿的工作原理～ 2.掌握不同型分光光度绿的操作方绿～号 3.通绿本绿绿的绿掌握绿素含量绿定的一绿常绿的方法学叶------分光光度法。 二、绿绿原理 叶叶体体体叶绿素是脂溶性色素～主要存在于以绿绿首的色素中。在活中～绿绿 素脂蛋白绿合受到绿原系绿的保绿～绿和光是绿定的。与并氧 叶绿素的80%丙绿提取液在波绿663nm～645nm有吸收峰～绿素叶a和绿素叶b 的绿度符合以下公式, C=0.0127A-0.00259A a663645 C=0.0229A-0.00467A绿度绿位是,g/Lb645663 C=12.7A-2.59Aa663645 C=22.9A-4.67A绿度绿位是,mg/Lb645663 叶绿素绿绿度绿, C=C+CTab 若以绿液中色素含量表示～绿来 三、绿器、绿绿和材料 1.绿器 紫外-可绿分光光度绿、、研体25ml容量、璃漏斗、璃棒、皮绿滴管瓶玻玻2. 绿绿

丙绿;分析绿,、85%丙绿、80%丙绿 2.材料 绿绿、石英砂、酸绿碳 四、操作步绿 1. 在遮光件下取出等绿绿品～剪碎～混～取绿绿条匀称0.1-0.5g～ 2. 绿品置于绿～加入少量酸绿和石英砂～加入一定绿的丙绿磨绿绿～再加研内碳体研匀 85%丙绿适量绿绿磨至绿绿白色～研 3. 绿绿有绿绿的漏斗绿液绿入将匀25ml的容量中～用瓶并80%的丙绿分次洗绿和绿绿清研～ 最后用80%的丙绿定容。 4. 以80%的丙绿绿比液～在参663和645nm波绿绿绿定吸光绿;A绿在0.2-0.8范绿～内 绿度绿大绿用80%丙绿适稀绿,。当 五、绿果绿理 按照公式绿算出绿素叶a和绿素叶b的绿度～再绿算出绿素的含量。叶六、 注意事绿 1. 在活～绿合绿绿素是绿定的～绿绿一绿破～绿素易被光解。因此～抽提和绿体内叶坏叶 定工作绿可能避光快速完成。尽 2. 绿含有大量酸性液泡的绿品～绿首先加入微性的绿液～仔绿磨后加入丙绿绿行碱冲研抽提。 3. 分光光度绿的精度绿绿定的绿果有至绿重要的影～使用前绿绿器绿行校正。响七、思考绿

主要作物所需氮磷钾比例

主要作物所需氮磷钾比例(2013-05-15 12:38:00)转载▼ 一、葡萄1、营养特性 据研究，一般成年葡萄园每生产1000千克果实需吸收氮6.0千克、磷3.0千克、钾7.2千克，其吸收比例为1：0.5：1.2，钾>氮>磷。葡萄对氮的需要量前、中期较大，而磷、钾吸收高峰偏中、后期，尤其是开花、授粉、坐果以及果实膨大对磷、钾的需要量很大。另外，葡萄对微量元素硼的需要量也较多。一般亩施高浓度复合肥90-100千克/亩（以产量1000千克/亩计）。 2、施肥建议 基肥:以有机肥为主，配施化肥。幼龄树每株施有机肥20-30千克，成龄果树50－100千克，每100千克有机肥混入总养分≥45%（15－15－15）复合肥1－2千克。基肥以葡萄收获后施入为宜，而且越早越好。 追肥：一般2－3次。新梢萌芽至开花前进行第一次追肥，一般每株施总养分≥40%（16－16－8）复合肥1-1.5千克，开小沟施入。第二次追肥在浆果生长前，每株施总养分≥40%（16-8-16或14-6-20）或总养分≥45%（15-10-20）复合肥1千克左右；第三次在进入浆果生长期，此时果实膨大增重和新的花芽分化，均要消耗大量养分，需肥量大，且以氮、钾养分为主，可施用总养分≥40%（16-8-16）复合肥,每株2千克左右。 二、番茄 1、营养特性 番茄，又名西红柿，其采收期比较长，需要时边采收，边供给养分，才能满足不断开花结果的需要．具体施肥量应根据土壤供肥能力，养分利用率，蔬菜吸收养分量等参数来确定。据研究，番茄每生产1000千克鲜果，需吸收氮3.18千克、磷0.74千克、钾4.83千克、钙3.35千克、镁0.62千克。以中等肥力的土壤为例，若目标产量为亩产6000千克，则需N17千克，P2O59千克，K2O11千克。一般亩施高浓度复合肥90-110千克/亩。番茄对钙、镁的需要量也比较大，缺乏易产生脐腐病。这是番茄的生育与营养特点，也是茄果类蔬菜生育与营养的共性。 2、施肥建议 基肥：番茄产量高，需肥量大，施肥应以基肥为主，亩施优质有机肥3000－5000千克，配施总养分≥40%（18-8-14）40-45千克/亩或(16-8-16)45－50千克。 追肥：在定植后5～6天追施一次“催苗肥”,每亩施尿素5千克左右；第一穗果开始膨大时，追施“催果肥”每亩施总养分≥40%（18-8-14）复合肥10千克左右；进入盛果期，当第一穗果发白，第二、三穗果迅速膨大时，应继续追肥2－3次（在每次采果后追施)，每次每亩施用总养分≥40%（18-8-14）或(16-8-16)复合肥15－20千克；进入盛果期后，根系吸肥能力下降可采用喷施尿素、硝酸钙、硼砂等水溶液，有利于延缓衰老，延长采收期以及改善果实品质。 （三）辣椒 1、营养特性 辣椒耐肥能力强，据研究，每生产1000千克辣椒，需吸收氮3.5－5.5千克、磷0.7－1.4千克、钾5.5－7.2千克、钙2.0－5.0千克、镁0.7－3.2千克。一般亩施高浓度复合肥90-120千克/亩。辣椒在不同生育阶段对养分吸收不同，其中氮素随生育进展稳步提高，果实产量增加，吸收量增多；磷德吸收量在不同阶段变幅较小；钾的吸收量在生育初期较少，从果实采收初期开始明显增加，一直持续到结束；钙的吸收量也随生长期而增加，在果实发育期供钙不足，易出现脐腐病；镁的吸收高峰在采果盛期。 2、施肥建议 基肥：每亩施优质有机肥3000－5000千克，总养分≥40%（16-8-16）或（14-6-20）复

叶绿体色素的提取分离理化性质和叶绿素含量的测定

实验报告 植物生理学及实验（甲）实验类型：课程 名称：实验名称：叶绿体色素的提取、分离、理化性质和叶 绿素含量的测定姓名：专业：学 号：指导老师：同组学生姓名： 实验日期：实验地点： 二、实验内容和原理一、实验目的和要求装 四、操作方法与实验步骤三、主要仪器设备订 六、实验结果与分析五、实验数据记录和处理 七、讨论、心得一、实验目的和要求、掌握植物中叶绿体色素的分离和 性质鉴定、定量分析的原理和方法。1 和b的方法及其计算。a2、熟悉在 未经分离的叶绿体色素溶液中测定叶绿素二、实验内容和原理以青菜为 材料，提取和分离叶绿体色素并进行理化性质测定和叶绿素含量分析。 原理如下：80%的乙醇或95%叶绿素和类胡萝卜素均不溶于水而溶于有机溶剂，1、常用的丙酮提取。、皂化反应。叶绿素是二羧酸酯，与强碱反应， 形成绿色的可溶性叶绿素2． 盐，就可与有机溶剂中的类胡萝卜素分开。- COOCHCOO3 Mg + 2KOH C32H30ON4Mg + 2KOH +CH3OH

HONC43230+C20H39OH 、3H+可依次被在酸性或加温条件下，叶-COOCOOCH39 20 绿素卟啉环中的Mg++取代反应。Mg2+, Cu2+ 取代Cu++取代形成褐色的去镁叶绿素和绿色的铜代叶绿素。(H+和H+ ) 取代(Zn2+) 绿色褐色 、叶绿素受光激发，可发出红色荧光，反射光下可见红色荧光。4645其中叶绿素吸收红光和兰紫光，红光区可用于定量分析，5、定量分析。 652可直接用于总量分析。663用于定量叶绿素a,b及总量，而和C最大吸收光谱不同的两个组分的混合液，它们的浓度根据朗伯-比尔定律， *k+C*kOD=Ca*k与吸光值之间有如下的关系： OD=Ca*k+C b2 1g/L和b的80查阅文献得，2b1 b1a1a2b时，比吸收系％丙酮溶液，当浓度为 叶绿素a 值如下。数k k 比吸收系数波长/nm b 叶绿素a 叶绿素 9.27 82.04 663 45.60 645 16.75

氮磷钾分析

有机肥料氮、磷、钾的化学分析方法 摘要: 介绍了用化学分析方法测定有机肥料氮、磷、钾的含量, 即样品经硫酸—过氧化氢消化后, 制备待测溶液, 分取待测溶液用NC - 2 型快速定氮仪测定氮, 用磷钼酸喹啉重量法测定磷, 用四苯硼酸钾重量法测定钾,不须使用分光光度计和火焰光度计, 适宜一般复混肥料厂采用, 对含氮、磷、钾分别达011 %以上的样品均可用本法测定, 方法的准确度和精密度能满足生产的要求。 关键词: 有机肥料; 氮、磷、钾; 化学分析方法 有机肥料中氮、磷、钾含量的测定, 按国家行业标准NY525 —2002 的要求, 氮采用全量蒸馏滴定法、磷采用磷钒钼黄光度法、钾采用火焰光度法测定。对普通复混肥料厂来说, 一是测氮的时间过长; 二是因为这些厂一般都没有购置分光光度计和火焰光度计, 不便于磷、钾的测定。为了解决厂家都能分析测定有机肥料中氮、磷、钾的问题, 笔者在生产实践中总结出适宜厂家使用的有机肥料中氮、磷、钾快速测定的化学分析方法。方法的要点是用硫酸—过氧化氢消化样品制取待测液, 分别测定氮、磷、钾。测氮用NC - 2 型快速定氮仪, 在10 min 内可完成氮的蒸馏、吸收、滴定全过程, 具有快速、准确的特点; 测磷用磷钼酸喹啉重量法;测钾用四苯硼酸钾重量法。在温度120 ℃的条件下, 将磷、钾的沉淀物一起烘干115 h , 可以同时测定磷、钾, 大大缩短了操作的时间。此方法用于生产实践, 与国家行业标准的分析方法结果基本一致。普通的复混肥料厂不须增添分析仪器, 便可应用本法测定有机肥料氮、磷、钾的含量, 达到指导 生产的要求。 1 方法原理 有机肥料在硫酸溶液中加热, 滴加过氧化氢溶液, 使有机质迅速消化, 制备氮、磷、钾的待测液,然后用NC - 2 型快速定氮装置测定氮、磷钼酸喹啉重量法测定磷、四苯硼酸钾重量法测定钾。

主要作物所需氮磷钾

主要作物所需氮磷钾 一、葡萄 1、营养特性 据研究，一般成年葡萄园每生产1000千克果实需吸收氮6.0千克、磷3.0千克、钾7.2千克，其吸收比例为1：0.5：1.2，钾>氮>磷。葡萄对氮的需要量前、中期较大，而磷、钾吸收高峰偏中、后期，尤其是开花、授粉、坐果以及果实膨大对磷、钾的需要量很大。另外，葡萄对微量元素硼的需要量也较多。一般亩施高浓度复合肥90-100千克/亩（以产量1000千克/亩计）。 2、施肥建议 基肥:以有机肥为主，配施化肥。幼龄树每株施有机肥20-30千克，成龄果树50－100千克，每100千克有机肥混入总养分≥45%（15－15－15）复合肥1－2千克。基肥以葡萄收获后施入为宜，而且越早越好。 追肥：一般2－3次。新梢萌芽至开花前进行第一次追肥，一般每株施总养分≥40%（16－16－8）复合肥1-1.5千克，开小沟施入。第二次追肥在浆果生长前，每株施总养分≥40%（16-8-16或14-6-20）或总养分≥45%（15-10-20）复合肥1千克左右；第三次在进入浆果生长期，此时果实膨大增重和新的花芽分化，均要消耗大量养分，需肥量大，且以氮、钾养分为主，可施用总养分≥40%（16-8-16）复合肥,每株2千克左右。

二、番茄 1、营养特性 番茄，又名西红柿，其采收期比较长，需要时边采收，边供给养分，才能满足不断开花结果的需要．具体施肥量应根据土壤供肥能力，养分利用率，蔬菜吸收养分量等参数来确定。据研究，番茄每生产1000千克鲜果，需吸收氮3.18千克、磷0.74千克、钾4.83千克、钙3.35千克、镁0.62千克。以中等肥力的土壤为例，若目标产量为亩产6000千克，则需N17千克，P2O59千克，K2O11千克。一般亩施高浓度复合肥90-110千克/亩。番茄对钙、镁的需要量也比较大，缺乏易产生脐腐病。这是番茄的生育与营养特点，也是茄果类蔬菜生育与营养的共性。 2、施肥建议 基肥：番茄产量高，需肥量大，施肥应以基肥为主，亩施优质有机肥3000－5000千克，配施总养分≥40%（18-8-14）40-45千克/亩或(16-8-16)45－50千克。 追肥：在定植后5～6天追施一次“催苗肥”,每亩施尿素5千克左右；第一穗果开始膨大时，追施“催果肥”每亩施总养分≥40%（18-8-14）复合肥10千克左右；进入盛果期，当第一穗果发白，第二、三穗果迅速膨大时，应继续追肥2－3次（在每次采果后追施)，每次每亩施用总养分≥40%（18-8-14）或(16-8-16)复合肥15－20千克；进入盛果期后，根系吸肥能力下降可采用喷施尿素、硝酸钙、硼砂等水溶液，有利于延缓衰老，延长采收期以及改善果实品质。

叶绿素含量的测定

叶绿素含量的测定 一.实验原理 根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。 根据朗伯—比尔定律，某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比，即A＝αCL.式中：α比例常数。当溶液浓度以百分浓度为单位，液层厚度为1cm时，α为该物质的吸光系数。各种有色物质溶液在不同波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。 如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和。就是吸光度的加和性。如欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a、b和类胡萝卜素的含量，只需测定该提取液在三特定波长下的吸光度A，并根据叶绿素a、b 及类胡萝卜素在该波长下的吸光系数即可求出其浓度。在测定叶绿素a、b时为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。 植物叶绿素含量测定----丙酮提取法 高等植物光合作用过程中利用的光能是通过叶绿体色素(光合色素)吸收的。叶绿体色素由叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素组成。叶绿体色素的提取、分离和测定是研究它们的特性以及在光合中作用的第一步。叶片叶绿素含量与光合作用密切相关，是反眏叶片生理状态的重要指标。在植物光合生理、发育生理和抗性生理研究中经常需要测定叶绿素含量。叶绿素含量也是指导作物栽培生产和选育作物品种的重要指标。 ● 叶绿素不溶于水，溶于有机溶剂，可用多种有机溶剂，如丙酮、乙醇或二甲基亚砜等研磨提取或浸泡提取。叶绿色素在特定提取溶液中对特定波长的光有最大吸收，用分光光度计测定在该波长下叶绿素溶液的吸光度(也称为光密度)，再根据叶绿素在该波长下的吸收系数即可计算叶绿素含量。 ●利用分光光计测定叶绿素含量的依据是Lambert-Beer定律，即当一束单色光通过溶液时，溶液的吸光度与溶液的浓度和液层厚度的乘积成正比。其数学表达式为： ●A=Kbc 式中：A为吸光度；K为吸光系数；b为溶液的厚度；c为溶液浓度。 ●叶绿素a、b的丙酮溶液在可见光范围内的最大吸收峰分别位于663、645nm处。叶绿素a 和b在663nm处的吸光系数（当溶液厚度为1cm，叶绿素浓度为g·L-1时的吸光度）分别为82.04和9.27；在645nm处的吸光系数分别为16.75和45.60。根据Lambert-Beer定律,叶绿素溶液在663nm和645nm处的吸光度（A663和A645）与溶液中叶绿素a、b和总浓度（a+b）（Ca、Cb 、Ca十b，单位为g·L-1），的关系可分别用下列方程式表示： ●A663=82.04C a+9.27C b （1） ●A645=16.76C a+45.60C b（2） ●C a=12.7 A663—2.59 A645(3) ●C b=22.9 A645—4.67 A663 (4) ●C a十b＝20.3 A645—8.04 A663 (5) ●

氮磷钾

农作物必需的营养元素 作物生长要从土壤中吸收几十种化学元素作为养料。主要有：碳（c）、氢（H）、氧（0）、氮（N）、磷（P）、钾（K）、钙（Ca ）、镁（Mg)、硫（s）、铁（Fe ）、铜（Cu ）、锌（zn ）、硼（B）、铬（M0）、锰（Mn）、氯（cl ）等。前十种，花木需要 量较多，约占于物重的百分之几至千分之几，通常称为大量元素；而后六种，花木需要量 很少，约占于物重的万分之几，乃至百万分之几，称微量元素。尽管花木对各种营养元素 需要量差别很大，但它们对花木的生长、发育却起着不同的作用，既不可缺少，也不可相 互代替。碳、氢、氧是组成花木的主要元素，占干物重的90~以上，它们能从空气中和土 壤中获得。但对氮、磷、钾，花木的需要量要比土壤的供应量大得多，故必须经常施肥来 加以补充。通常把氮、磷、钾称为肥料的“三要素”。在一般条件下，钙、镁、硫、铁和其 他微量元素都从土壤中得到但我国南方地区，因雨水多，钙、镁容易流失，需要适当补充。铁在石灰性土壤中，有效性降低，会引起植株黄化，也需要补充。 二、各种营养元素的主理作用 氮：是构成植物体的最小单位—细胞的重要组成部分之一。蛋白质是细胞的主要组成 部分，而氮在蛋白质中约含：6~18~。氮也是时绿素的重要组成部分，植物进行光合作用，需要叶绿素。此外，植物体内所含的维生素、激素、生物碱等有机物中也含有氮素。氮一 般积集在幼嫩的部位和种子里。当氮素供应充足时，植物的茎叶繁茂、时色深绿、延迟落叶；反之，氮素不足，植株就矮小，下部叶片首先缺绿变黄，逐步向上扩展，叶片簿而黄。当然，如果缺氮，肥施得过多，尤其在磷、钾供应不足时，会造成徒长、贪青、迟熟、易 倒伏、感染病虫害，特别是一次用量过多会引起烧苗，所以一定要注意合理的施肥。 磷：磷是组成植物细胞的重要元素，也是很多酶的组成部分，它能促进细胞分裂，对 根系的发育有很大的促进作用。磷参与植物体内的一系列新新陈代谢的过程，如光合作用、碳水化合物的合成、分解、运转等。磷能促进体内可溶性糖类的贮存，因而能增强植物的 抗旱抗寒能力。在苗期能促进根系发育，使根系早生快发，促进开花，对球根花卉能提高 质量和产量。反之，磷素供应不足时，植物生长受到抑制，首先下部时片叶色发暗呈紫红色，开花迟，花亦小。 钾：它不直接组成有机化合物，而参与部分代谢过程和起调节作用。主要以离子态存在，在休内移动性大，通常分布在生长最旺盛的部位，如芽、幼叶、根尖等处。钾供应充 足时，能促进光合作用，促进植物对氮、磷的吸收，有利于蛋白质的形成，使圭叶茁壮， 枝杆木质化、粗壮，不易倒伏，增强抗病和耐寒能力。缺钾时，休内代谢易失调，光合作 用显著下降，茎杆细瘦，根系生长受抑制，首先者叶的尖端和边缘变黄直至桔死，严重时 会使大部分叶片枯黄。 钙：钙是细胞壁中胶层的组成成分，以果胶钙的形态存在。钙易被固定下来，不能转 移和再度利用。植物缺钙时，细胞壁不能形成，并会影响细胞分裂，妨碍新细胞的形成致使根系发育不良，植株矮叭严重时会使植物幼叶卷曲、叶尖有粘化现象，叶缘发黄，逐渐 枯死，根尖细胞腐烂、死亡。

叶绿素含量测定方法(精)

叶绿素含量测定方法---丙酮法 由于微藻的生长周期比较复杂，包括无性繁殖阶段和有性繁殖阶段，其在不同阶段的生理形态不同，有时藻细胞会聚集在一起，以片状或团状形式存在，在显微镜下难以确定其所包含的细胞数量。 藻细胞中叶绿素的含量（特别是叶绿素a的含量）通常随与细胞的生长呈较好的线性关系，因此可通过测定藻细胞中叶绿素含量变化来反映微藻的生长情况。叶绿素测定采用丙酮研磨提取法。 取适量藻液于10 mL离心管中在4000 rpm转速下离心10 min，弃去上清液，藻泥中加入适量的100 %的丙酮。采用丙酮提取法时在试管研磨器中冰浴研磨5 min，4000 rpm离心后，上清液转入10 mL容量瓶中。按上述方法对藻体沉淀进行萃取，直至藻体沉淀呈白色为止。定容后，采用722S型可见分光光度计分别测定645 nm和663 nm下萃取液的吸光值，叶绿素含量用以下公式进行计算（Amon,1949）： 叶绿素a含量用以下公式进行计算： Chlorophyll a (mg/L) = (12.7×A663 nm－2.69×A645 nm)×稀释倍数 叶绿素b含量用以下公式进行计算： Chlorophyll b (mg/L) = (22.9×A645 nm－4.64×A663 nm)×稀释倍数 叶绿素总含量用以下公式进行计算： Chlorophyll a＋b (mg/L) = (20.2×A645 nm＋8.02×A663 nm)×稀释倍数 由于丙酮的沸点较低，较高温度下挥发很快。此外，叶绿素稳定性较差，见光易分解，因此，本实验中叶绿素的提取和测定均在低温黑暗条件下进行，以减少提取过程中的损失。 叶绿素提取方法 提取液：本试验用DMSO/80%丙酮(l/2，v/v)提取的叶绿素，谭桂英周百成底栖绿藻叶绿素的二甲基亚砜提取和测定法* 海洋与湖沼 1987 18（3）295--300. 一、直接浸提法： 1、准确量取10ml藻液,加到15ml离心管中，放在台式离心机离心，3500r/min （根据不同的藻选择不同那个的离心转速）离心5min倒上清；留藻泥。随后在盛有藻泥的离心管中加入蒸馏水，与藻泥混匀后再次离心，目的是除去藻细胞表面的盐份，此清洗过程重复三次。 2、往藻泥中加二甲基亚砜3.33ml，65℃水浴9h，20h； 3、然后离心，将上清转移到10ml棕色瓶中， 4、添加6.67ml80%丙酮到离心管中，混匀，离心，再将上清转移到10ml棕色瓶中。 5、定容，待测。

叶绿素含量的测定

植物生理学实验报告实验题目：叶绿素含量的测定 姓名 班级 学号

一、实验原理和目的 根据朗伯—比尔定律，某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比。叶绿素(丙酮)在652nm(混合）、663nm、645nm有最大吸收峰。 叶绿素(95%乙醇)在665nm、649nm，类胡萝卜素在470nm有最大吸收峰，根据在分光光度计下测定的吸光度，求得叶绿素的含量 二、实验器具和步骤 植物材料：女贞 实验器具：分光光度计；电子天平；研钵；试管；小漏斗；滤纸；吸水纸；移液管；量筒；剪刀 试剂：95％乙醇（或80％丙酮）；石英砂；碳酸钙粉 步骤：1.称取剪碎的新鲜样品0.1g 左右，放入研钵中，加少量石英砂和碳酸钙粉及3～5ml 95％乙醇，研成均浆，继续研磨至组织变白。静置3～5min 2. 取滤纸1张，置漏斗中，用乙醇湿润，沿玻棒把提取液倒入漏斗中，过滤到10ml试管中，用少量乙醇冲洗研钵、研棒及残渣数次，最后连同残渣一起倒入漏斗中。 3.用滴管吸取乙醇，将滤纸上的叶绿体色素全部洗入漏斗中。直至滤纸和残渣中无绿色为止。最后用乙醇定容至10 ml ，摇匀 4. 把叶绿体色素提取液倒入光径1cm的比色杯内。以95％乙醇为空白，在波长665nm、649nm、470nm下测定吸光度 5. 计算公式： 叶绿素的含量（mg/g）= (浓度×提取液体积×稀释倍数）/样品鲜重。 Ca=13.95A665－6.88A649； Cb=24.96A649－7.32A665 C类=(1000A470-2.05Ca-114.8Cb)/245 单位：mg/L 三、实验数据和作业

2、计算叶绿素含量 计算公式： 叶绿素的含量（mg/g）= (浓度×提取液体积×稀释倍数）/样品鲜重。 Ca=13.95A665－6.88A649； Cb=24.96A649－7.32A665 C类=(1000A470-2.05Ca-114.8Cb)/245 单位：mg/L 由上面的公式进行代入计算，有： Ca=13.95*1.820-6.88*0.953=18.83236 Cb=24.96*0.953-7.32*1.820=10.46448 C类=（1000*1.948-2.05*18.83236-114.8*10.46448）/245=2.8901 则：叶绿素含量=（29.29684*10*0.001*1）/0.1=2.9297 四、数据分析 实验中可能清洗研钵和滤纸不是特别干净可能造成误差 五、思考题 为什么提取叶绿素时干材料一定要用80％的丙酮，而新鲜的材料可以用无水丙酮提取？答：因为叶绿素存在于叶绿体内囊体上与其上的蛋白质组成色素蛋白复合体，要 分离叶绿素和蛋白质必须有水，叶绿素的头部为极性的，有亲水性