2007年,让Sigma-Aldrich帮助您实现您的RNAi设想
让Sigma-Aldrich帮助您
实现您的RNAi设想！
高品质siRNA: 定制siRNA—极低价体验， 3120RMB/3对
预制siRNA
新型siRNA转染试剂：N-TER
即用型shRNA: 甘油菌
质粒
慢病毒
参考文献与网络讲座
产品虽多,零负担
寻找中国的RNAi合作伙伴！
The RNAi Consortium (TRC)
-- 致力于研究与推广RNAi技术平台的国际性组织
? Academic Institutions
– road Institute, MIT/Harvard
B
– assachusetts General Hospital, Harvard
M
– ana Farber Cancer Institute, Harvard
D
– hitehead Institute, MIT
W
– ashington University
W
– Columbia University
? In anizations
ternational Life Science Org
–S i g m a-A l d r i c h
– ovartis
N
– li Lilly
E
– ristol-Myers Squibb
B
– Academia Sinica, Taiwan
Mission siRNA oligos
siRNA 设计与合成：
您只需提设想，让Sigma根据您的具体要求来设计--RNAi开头不再难！
siRNA的设计是决定RNAi实验成败关键性的第一步。Sigma采用著名的Rosetta siRNA Design Algorithm , 最大程度的避免脱靶效应和非特异性, 提高成功率。并且所有客户都可以享受‘度身定制’的服务。不必再为免费软件下拉式菜单中有限的选项烦恼，我们有专职的siRNA 设计专家，可以针对您的要求与设想，提供更专业的设计、更人性化的服务。
Sigma是四大拥有MIT专利授权合成siRNA的公司之一，拥有强大的生产技术平台。生产基地经ISO 9000认证，产品质量有保障。
需要您提供的信息包括：
Gene accession number 或者 Gene ID
基因名或基因的简介
其它特殊要求(可选)：具体位置的偏好？种属的特异性？… …
特点：
? 即用型双链siRNA
? 毫克至数克的规格
? 多种纯化方式可选
? 多种修饰可选，Fluorescein/Biotin/ Phosphate等
? 随产品提供完整的质控和数据资料
? 100%满意度保障
针对一个靶基因, 常规设计并合成最少3条siRNA, 我们确保其中至少2条siRNA达到
75%以上的抑制率（mRNA水平）
New
预制siRNA文库
依托准确的Rosetta siRNA Design Algorithm和sigma强大的生产技术平台，最新推出针对人与大鼠药靶基因组、小鼠激酶基因的siRNA文库。
MISSION siRNA Human Druggable Genome
MISSION siRNA Rat Druggable Genome
MISSION siRNA Mouse Kinase Library
特点：
? 高效沉默所有基因，而不仅仅是高表达的基因
? 高特异性，Rosetta Algorithm应用海量的数据库与专利技术最大程度的避免脱靶效应? 可选择整个文库，或特定基因家族的系列，或单个基因的系列
? 针对每个基因设计并合成了3对siRNA
? siRNA文库为96孔板的包装，每个板上有80对1nmol 的siRNA(包括对照siRNA), 适合高通量研究
新型siRNA 转染试剂
N-TER? Nanoparticle siRNA Transfection System
简介：
N-TER? 是以多肽为基础的，专门用于转染siRNA 到真核细胞的新产品。N-TER? 与siRNA 非共价结合，形成纳米微粒。此纳米微粒与细胞膜上的脂类相互作用，直接透过细胞膜扩散到胞质中。与脂类转染试剂不同，这一新型的转染试剂规避了内涵体通路，因而大大降低了siRNA 在转染过程中被降解的可能性。
N-TER?已被成功的应用于多种细胞株，其中包括原代细胞（如astrocytes, BSMC, HUVEC, NHEK ），神经细胞（如astrocytes, LA-N-2, U-87 MG ），分化细胞（NIH/3T3-L1 adipocytes, C2C12 myocytes ）和非分裂细胞。
细胞转染有困难？
试试我们的新产品
—新一代的肽类转染试剂！
更少的siRNA! 更高的转染效率！
更低的细胞毒性！
经试验验证的细胞株明细表：
Cell Type Source Tissue 3T3-L1, differentiated adipocyte
mouse embryonic fibroblast cell line A2780
human ovarian carcinoma cell line A549
human lung carcinoma cell line ASPC-1
human pancreatic carcinoma cell line Astrocyte human neuronal primary cell Astrocytoma human neuronal astrocytoma cell line BSMC
human bronchial smooth muscle primary cell C2C12, differentiated myocyte mouse myoblastoma line
HeLa human cervical adenocarcinoma cell line HepG2 human hepatocarcinoma cell line HT-29 human colorectal adenocarcinoma cell line HUVEC human umbilical vein epithelial primary cell MCF7 human breast adenocarcinoma cell line MDA-MB-231 human breast adenocarcinoma cell line NHEK-AD human adult keratinacyte primary cell Raw264.7 mouse macrophage cell line
SW620 human colorectal adenocarcinoma cell line U-87 MG
human brain glioblastoma cell line
除了普通的使用说明书，我们还提供专为某些细胞优化的详尽的protocol:
? HeLa
? Normal Human Astrocytes
?
NHEK Keratinocyte-Adult Cells
麻省理工与哈佛开发的RNAi技术平台――值得您关注！
制药巨擘辉瑞公司所信赖的RNAi技术平台――就在Sigma-Aldrich！
MISSION? shRNA Libraries
MISSION? shRNA Libraries由麻省理工和哈佛等11个著名研究所及制药公司组成的RNAi 协会（The RNAi Consortium, TRC）所研发，共包括靶向人和小鼠各15, 000个基因的150, 000个预制的shRNA克隆，可用于瞬时和/或稳定的转录沉默实验，是研究基因功能以及探索开发新药的强大技术平台。Sigma-Aldrich于2005年3月成为RNAi协会的一员，参与这一技术平台的研发与生产，并负责推广与销售。
产品特点：
全面，针对每个基因有3-5个不同位点的克隆
经济，质粒可复制
灵活，可用于瞬时或稳定的RNAi试验
慢病毒颗粒，让转染率低不再是问题
质量保证，每个克隆都经过测序验证
Gene Family Sets靶向某个基因家族的系列
Target Sets & Individual Clones靶向某个基因的系列 & 单个克隆
您可以输入基因的RefSeq No, Gene Symbol等信息查找该靶基因相关的系列。每个系列包括３－５个克隆，最大可能地覆盖了基因序列，以便于结果分析。某些系列还包括针对基因 3’-UTR的shRNA克隆, 可用于phenomic rescue 实验，使您的实验更严谨。
搜索单个靶基因系列
也支持同时搜索多个靶基因系列
Mission? shRNA Bacterial Glycerol
Stock:
含有shRNA质粒的冻存菌株
GC5基因型的E.coli 菌株（endA, recA,
T1/T5 phage resistant）
100ul的菌液
Mission? shRNA Plasmid DNA
可直接用于转染的质粒
1ug，20ul的规格
可用于瞬时或稳定的shRNA转染――载体
含有puromycin筛选标记
与相应的包装质粒共转染包装细胞（HEK
293T）包装出病毒颗粒
Mission? shRNA Lentiviral
Transduction Particles
可直接感染宿主细胞的病毒颗粒
共200ul, 滴度为1×106
慢病毒颗粒可以有效感染分化和非分裂细
胞，如神经细胞和树突状细胞，并整合入
细胞染色体
MISSION? Lentiviral
Packaging Mix
转染级别的纯度
优化的包装质粒配比
与mission shRNA plasmid 共转
染得到高滴度的慢病毒颗粒
重组慢病毒颗粒的包装过程
Mission TRC shRNA慢病毒靶向性感染细胞,
阻断目标基因表达
用于对照实验的产品：
为了使实验更严谨, 我们提供并强烈推荐一系列的对照产品，包括：
? pLKO.1-puro对照是不包含shRNA序列的空载体质粒/慢病毒颗粒，可用作转染、转化、筛选的对照实验；
? No-target shRNA对照是包含了无靶向的shRNA序列的质粒/慢病毒颗粒，不会干扰任何人或小鼠的基因，可以作为阴性对照；
? TurboGFP和eGFP的表达质粒和shRNA干扰质粒，通过绿色荧光蛋白优化转染、包装条件，可用作阳性对照；单独的TurboGFP/eGFP shRNA干扰质粒/慢病毒颗粒，不会干扰任何人或小鼠的基因，也可以作为阴性对照。
表达TurboGFP的慢病毒颗粒感染细胞48小时后
技术资料与讲座:
?
网络讲座: Viral-based shRNA: a RNAi delivery solution https://www.wendangku.net/doc/ef15795327.html,/RNAwebcast/ ?
Mission shRNA 应用文献
Title
Author / Journal
PML Contributes to a Cellular Mechanism of Repression of Herpes Simplex Virus Type 1 Infection that is Inactivated by ICPO. Everett, R. et al. J. Virology. 2006. 80 (16): 7995-8005. Identification of Yin-Yang Regulators and a Phosphorylation
Consensus for Male Germ Cell Associated Kinase (MAK)-Related
Kinase.
Fu, Z., et al. Mol. Cell. Biol. 2006.
26(22): 8639-8654.
Heparin Sulfate Ndst1 Gene Function Variably Regulates Multiple Signaling Pathways During Mouse Development. Pallerla, S. et al. Dev. Dynamics
2007. 236: 556-563. Glucocorticoids Regulate Tristetraprolin Synthesis and
Posttranscriptionally Regulate Tumor Necrosis Factor Alpha Inflammatory Signaling.
Smoak, K. and Cidlowski, J.A. Mol. Cell. Biol. 2006. 26(23): 9126-9135.
HMGA1 is a Determinant of Cellular Invasiveness and In Vivo Metastic Potential in Pancreatic Adenocarcinoma.
Liau, S. et al. Cancer Res. 2006. 66(24): 11613-11622.
Proteolysis of MLL Family Proteins is Essential for Taspase-1 Orchestrated Cell Cycle Progression.
Takeda, S. et al. Genes Dev. 2006. 20: 2397-2409.
? 索取最新文献, 欢迎联系Sigma-Aldrich 市场部 过健英
shRNAs Targeting Tumor Suppressor Genes. GEN vol 27, Num 2, Jan 15, 2007
A lentiviral RNAi Library for Human and Mouse Genes Applied to an Arrayed Viral High-Content Screen. Cell 124, Mar 2006
? RNAi 文献一网打尽!
https://www.wendangku.net/doc/ef15795327.html,/Area_of_Interest/Life_Science/Functional_Genomics_and_RN Ai/Key_resources/RNAi_Bibliographies.html
Basic Mechanism 基本机制
High-Throughput Screening 高通量筛选 In vivo Applications 体内应用
In vivo Disease Treatment 体内治疗 MISSION? shRNA
Specific Applications 特殊应用 Assay Design 分析设计 Reviews 综述
150,000个shRNA 克隆, 725,000 对siRNAs ,
1,000 多个生物活性小分子 4,000多种抗体与蛋白
您只需输入关注基因的常用名，基因代号、别号、同源物、accession numbers, RefSeq 或是gene ID number ，YFG 为您瞬精彩呈间现
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Sigma-Aldrich RNAi Parternship Program
寻找中国的RNAi合作伙伴！
购买Mission shRNA 文库gene family sets 或target sets的客户，如果愿意公开使用这类产品的实验数据，用以交流和推广这一技术平台，就可以加入这个合作项目。
合作伙伴的权利：
特价购买Sigma-Aldrich所有用于功能基因组学研究的产品，包括siRNA合成，定量PCR探针与试剂，蛋白定量试剂等；
第一时间了解Sigma-Aldrich 与Oxford BioMedica, Benitec和TRC开发的新技术；
享有主要RNAi和慢病毒的专利使用权；
… …
合作伙伴的义务：
允许Sigma-Aldrich 使用相关实验数据，协助推广这一技术平台；
如果可以的话，告知相关的投出的文章、海报和讲座；
受邀与Sigma-Aldrich合作研究功能基因组学。
已加入Sigma-Aldrich RNAi合作项目的大学、研究所包括：
? Princeton University ? Tufts University
? Mayo Clinic ? The Wistar Institute
? Cleveland Clinic ? University of Illinois
? Moore's Cancer Center-UCSD ? UMDNJ
? Burnham Institute ? Vanderbilt University
? Rutgers University? Washington University-St. Louis
引物设计原则(必看)
mi引物设计原则 1. 引物的长度一般为15-30 bp，常用的是18-27 bp，但不应大于38，因为过长会导致其延伸温度大于74℃，不适于Taq DNA聚合酶进行反应。 2. 引物序列在模板内应当没有相似性较高，尤其是3’端相似性较高的序列，否则容易导致错配。引物3’端出现3个以上的连续碱基，如GGG或CCC，也会使错误引发机率增加。 3. 引物3’端的末位碱基对Taq酶的DNA合成效率有较大的影响。不同的末位碱基在错配位置导致不同的扩增效率，末位碱基为A的错配效率明显高于其他3个碱基，因此应当避免在引物的3’端使用碱基A。另外，引物二聚体或发夹结构也可能导致PCR反应失败。5’端序列对PCR影响不太大，因此常用来引进修饰位点或标记物。 4. 引物序列的GC含量一般为40-60%，过高或过低都不利于引发反应。上下游引物的GC含量不能相差太大。 5. 引物所对应模板位置序列的Tm值在72℃左右可使复性条件最佳。Tm值的计算有多种方法，如按公式Tm＝4(G+C)＋2(A+T)，在Oligo软件中使用的是最邻近法(the nearest neighbor method)。 6. ΔG值是指DNA双链形成所需的自由能，该值反映了双链结构内部碱基对的相对稳定性。应当选用3’端ΔG值较低（绝对值不超过9），而5’端和中间ΔG 值相对较高的引物。引物的3’端的ΔG值过高，容易在错配位点形成双链结构并引发DNA聚合反应。 7. 引物二聚体及发夹结构的能值过高（超过4.5kcal/mol）易导致产生引物二聚体带，并且降低引物有效浓度而使PCR反应不能正常进行。 8. 对引物的修饰一般是在5’端增加酶切位点，应根据下一步实验中要插入PCR 产物的载体的相应序列而确定。 引物序列应该都是写成5-3方向的， Tm之间的差异最好控制在1度之内， 另外我觉得扩增长度大一些比较好，500bp左右。 要设计引物首先要找到DNA序列的保守区。同时应预测将要扩增的片段单链是否形成二级结构。如这个区域单链能形成二级结构，就要避开它。如这一段不能
地被植物的特点和种类
地被植物的特点和种类 地被植物是指用于覆盖地面、防止水土流失，能吸附尘土、净化空气、减弱噪音、消除污染并具有一定观赏和经济价值的植物。随着我国园林绿化事业的不断发展，地被植物已被广泛应用于环境的绿化美化，尤其是在园林配置中，其艳丽的花果能起到画龙点睛的作用。一般来讲，地被植物应具备如下主要特性： 1．多年生植物，常绿或绿色期较长，以延长观赏和利用的时间。 2．具有美丽的花朵或果实，而且花期越长，观赏价值越高。 3．具有独特的株型、叶型、叶色和叶色的季节性变化，从而给人以绚丽多彩的感觉。 4．具有匍匐性或良好的可塑性，这样可以充分利用特殊的环境造型。 5．植株相对较为低矮。在园林配置中，植株的高矮取决于环境的需要，可以通过修剪人为地控制株高，也可以进行人工造型。 6．具有较为广泛的适应性和较强的抗逆性，耐粗放管理，能够适应较为恶劣的自然环境。 7．具有发达的根系，有利于保持水土以及提高根系对土壤中水分和养分的吸收能力，或者具有多种变态地下器官，如球茎、地下根茎等，以利于贮藏养分，保存营养繁殖体，从而具有更强的自然更新能力。 8．具有较强或特殊净化空气的功能，如有些植物吸收二氧化硫和净化空气能力较强，有些则具有良好的隔音和降低噪音效果。 9．具有一定的经济价值，如可用作药用、食用或为香料原料，可提取芳香油等，以利于在必要或可能的情况下，将建植地被植物的生态效益与经济效益结合起来。 10．具有一定的科学价值，主要包括两个方面，一是有利于植物学及其相关知识的普及和推广，二是与珍稀植物和特殊种质资源的人工保护相结合。 上述特性并非每一种地被植物都要全部具备，而是只要具备其中的某些特性即可。同时，在园林配置中，要善于观察和选择，充分利用这些特性，并结合实际需要进行有机组合，从而达到理想的效果。地被植物的种类很多，可以从不同的角度加以分类，一般多按其生物学、生态学特性，并结合应用价值进行分类，将其分为：灌木类地被植物，如杜鹃花、栀子花、枸杞等；草本地被植物，如三叶草、马蹄金、麦冬等；矮生竹类地被植物，如凤尾竹、鹅毛竹等；藤本及攀援地被植物，如常春藤、爬山虎、金银花等；蕨类地被植物，如凤尾蕨、水龙骨等；其他一些适应特殊环境的地被植物，如适宜在水边湿地种植的慈姑、菖蒲等，以及耐盐碱能力很强的蔓荆、珊瑚菜和牛蒡等。 我国具有丰富的地被植物种质资源，但到目前为止，对于地被植物生物学、生态学特性，尤其是保护和净化环境的功能以及经济用途等方面的研究还很不够，通过今后更深入的研究，将会逐步从现有地被植物和地被植物资源中选育出更多更好、能够应用于不同地区、不同环境条件和不同需要，具有良好环境效益和一定经济价值、科学价值的新地被植物。
引物设计原则(含Realtime引物)
1.引物最好在模板cDNA的保守区内设计。 DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。在NCBI上搜索不同物种的同一基因，通过序列分析软件（比如DNAman）比对（Alignment），各基因相同的序列就是该基因的保守区。 2.引物长度一般在15~30碱基之间。 引物长度（primer length）常用的是18-27 bp，但不应大于38，因为过长会导致其延伸温度大于74℃，不适于Taq DNA 聚合酶进行反应。 3.引物GC含量在40%~60%之间，Tm值最好接近72℃。 GC含量（composition）过高或过低都不利于引发反应。上下游引物的GC含量不能相差太大。另外，上下游引物的Tm值（melting temperature）是寡核苷酸的解链温度，即在一定盐浓度条件下，50%寡核苷酸双链解链的温度。有效启动温度，一般高于Tm值5~10℃。若按公式Tm= 4（G+C）+2（A+T）估计引物的Tm值，则有效引物的Tm为55~80℃，其Tm 值最好接近72℃以使复性条件最佳。 4.引物3′端要避开密码子的第3位。 如扩增编码区域，引物3′端不要终止于密码子的第3位，因密码子的第3位易发生简并，会影响扩增的特异性与效率。 5.引物3′端不能选择A，最好选择T。 引物3′端错配时，不同碱基引发效率存在着很大的差异，当末位的碱基为A时，即使在错配的情况下，也能有引发链的合成，而当末位链为T时，错配的引发效率大大降低，G、C 错配的引发效率介于A、T之间，所以3′端最好选择T。 6. 碱基要随机分布。 引物序列在模板内应当没有相似性较高，尤其是3’端相似性较高的序列，否则容易导致错误引发（False priming）。降低引物与模板相似性的一种方法是，引物中四种碱基的分布最好是随机的，不要有聚嘌呤或聚嘧啶的存在。尤其3′端不应超过3个连续的G或C，因这样会使引物在GC富集序列区错误引发。 7. 引物自身及引物之间不应存在互补序列。 引物自身不应存在互补序列，否则引物自身会折叠成发夹结构（Hairpin）使引物本身复性。这种二级结构会因空间位阻而影响引物与模板的复性结合。引物自身不能有连续4个碱基的互补。 两引物之间也不应具有互补性，尤其应避免3′ 端的互补重叠以防止引物二聚体（Dimer与Cross dimer）的形成。引物之间不能有连续4个碱基的互补。 引物二聚体及发夹结构如果不可避免的话，应尽量使其△G值不要过高（应小于4.5kcal/mol）。否则易导致产生引物二聚体带，并且降低引物有效浓度而使PCR 反应不能正常进行。 8. 引物5′ 端和中间△G值应该相对较高，而3′ 端△G值较低。 △G值是指DNA 双链形成所需的自由能，它反映了双链结构内部碱基对的相对稳定性，△G 值越大，则双链越稳定。应当选用5′ 端和中间△G值相对较高，而3′ 端△G值较低（绝对值不超过9）的引物。引物3′ 端的△G 值过高，容易在错配位点形成双链结构并引发DNA 聚合反应。（不同位置的△G值可以用Oligo 6软件进行分析） 9.引物的5′端可以修饰，而3′端不可修饰。 引物的5′ 端决定着PCR产物的长度，它对扩增特异性影响不大。因此，可以被修饰而不影响扩增的特异性。引物5′ 端修饰包括：加酶切位点；标记生物素、荧光、地高辛、Eu3+等；引入蛋白质结合DNA序列；引入点突变、插入突变、缺失突变序列；引入启动子序列等。引物的延伸是从3′ 端开始的，不能进行任何修饰。3′ 端也不能有形成任何二级结构可能。 10. 扩增产物的单链不能形成二级结构。
荧光定量PCR引物设计原则.
1.引物应用核酸系列保守区内设计并具有特异性。最好位于编码区5’端的300-400bp区域 内，可以用DNAman,Alignment 软件看看结果。 2. 产物不能形成二级结构（自由能小于58.61KJ/mol）。 3.引物长度一般在17-25碱基之间,上下游引物不能相差太大。 4.G+C含量在40%~60%之间，45-55％最佳。 5.碱基要随机分布，尽量均匀。 6.引物自身不能有连续4个碱基的互补。 7.引物之间不能有连续4个碱基的互补。 8.引物5′端可以修饰。 9.3′端不可修饰，而且要避开AT,GC rich的区域，避开T/C,A/G连续结构（2-3个）。 10. 引物3′端要避开密码子的第3位。 11.引物整体设计自由能分布5‘端大于3’端，且3‘端自由能最好小于9KJ/mol。 可用oligo 6 软件进行比对看结果的情况。 12.做荧光定量产物长度80-150bp最好，最长是300bp. 13.引物设计避免DNA污染，最好跨外显子接头区。 14.引物与非特异性扩增序列的同源性最好小于70％或者有8个互补碱基同源。 15.查看有无假基因的存在。假基因就是无功能的DNA序列，与需要扩增的目的片段长 度相似。 16.TM值在58-62度之间。 17.引物设计的软件Primer 5.0 有专门针对荧光的。 设计的目的是在两个目标间取得平衡：扩增特异性和扩增效率。引物分析软件将试图通过使用每一引物设计变化的预定值在这两个目标间取得平衡。设计引用有一些需要注意的基本原理： ①引物长度 一般引物长度为18~30碱基。总的说来，决定引物退火温度（Tm值）最重要的因素就是引物的长度。有以下公式可以用于粗略计算引物的退火温度。 在引物长度小于20bp时：[4(G+C)+2(A+T)]-5℃ 在引物长度大于20bp时：62.3℃+0.41℃(%G-C)-500/length-5℃ 另外有许多软件也可以对退火温度进行计算，其计算原理会各有不同，因此有时计算出的数值可能会有少量差距。为了优化PCR反应，使用确保退火温度不低于54℃的最短的引物可获得最好的效率和特异性。
简并引物设计原则
The central role of UDPGDH played in capsule and other polysaccharides synthesis. KPS, capsule polysaccharide; LPS,lipopolysaccharide 简并引物设计方法 （1）利用NCBI搜索不同物种中同一目的基因的蛋白质或cDNA编码的氨基酸序列因为密码子的关系，不同的核苷酸序列可能表达的氨基酸序列是相同的，所以氨基酸序列才是真正保守的。首先利用NCBI的Entrez检索系统，查找到一条相关序列即可。随后利用这一序列使用BLASTP（通过蛋白查蛋白），在整个NR数据库中查找与之相似的氨基酸序列。 （2）对所有的序列进行多序列比对将搜索到的同一基因的不同氨基酸序列进行多序列比对，可选工具有Clustal W/X，也可在线分析。所有序列的共有部分将会显示出来。“*”表示保守，“：”表示次保守。 （3）确定合适的保守区域设计简并引物至少需要上下游各有一个保守区域，且两个保守区域相距50~400个氨基酸残基为宜，使得PCR产物在150~1200bp 之间，最重要的是每一个保守区域至少有6个氨基酸的保守区，因为每条引物至少18bp左右。 若比对结果保守性不是很强很可能找不到6个氨基酸序列的保守区，这时可以根据物种的亲缘关系，选择亲缘关系近的物种进行二次比对，若保守性仍达不到要求，则需进行三次比对，总之，究竟要选多少序列来比对，要根据前一次的结果反复调整。最终目的就是有两个6个氨基酸且两者间距离合适的保守区域。 （4）利用软件设计引物当得到保守区域后，就可以利用专业的软件来设计引物了，其中Primer 5.0 支持简并引物的设计，将参与多序列比对的序列中的任一条导入Primer 5.0 中，将其翻译成核苷酸序列，该序列群可用一条有简并性的核苷酸链来表示（其中R=A/G，Y=C/T，M=A/C，K=G/T，S=C/G，W=A/C/T，B=C/G/T，V=A/C/G，D=A/G/T，N=A/C/G/T，该具有简并性的核苷酸链必然包含上一步中找到的氨基酸保守区域的对应部分，在Primer 5.0 中修改参数，令其在两个距离合适的保守的nt区域内寻找引物对，总之要保证上下游引物都落在该简并链的保守区域内，结果会有数对，分数越高越好。 （5）对引物的修饰若得到的引物为： 5-NAGSGNGCDTTANCABK-3 则简并度=4×2×4×3×4×3×2=2304，很明显该条引物的简并度很高不利于PCR，可以通过次黄嘌呤代替N（因为次黄嘌呤可以很好的和4种碱基配对）和根据物种密码子偏好这两种方法来降低简并度。 这样设计出来的简并引物对，适用于比对的氨基酸序列所属物种及与这些物种分类地位相同的其他物种。 简并引物设计原则
地被植物种类
地被植物种类 按观赏特点分类： 1.观花地被。以一、二年生花卉，宿根及球根花卉为主。常选择花期长、开花繁茂、扩展力强、繁殖快、栽培简单、管理粗放的种类。如二月兰、黑心菊、金鸡菊、紫花地丁、花菱草、石蒜、郁金香、硫华菊等地被植物。 2.观叶地被。有特殊的叶色与叶姿，可供人欣赏，常选用叶色丰富、观叶期较长的植物。如蜂斗菜、八角金盘、菲白竹、赤胫散、蕨类植物、玉带草、金边阔叶山麦冬、紫叶酢浆草、大吴风草、荚果蕨等植物。 3.常绿地被。四季常青的地被植物，称为常绿地被植物。这类植物无明届的休眠期，一般在春季交替换叶。北方寒冷地区常采用常绿针叶类地被植物及少量抗寒性较强的常绿阔叶植物，如铺地柏、麦冬类、富贵草、常春藤等。南方大部分地区可采用的常绿地被非常丰富，如洒金珊瑚、沿阶草、花叶蔓常春花络石、蔓长春花等。 4.落叶地被。指秋冬季地上部分枯萎落叶，来年可发芽生长的地被植物。如萱草、玉簪、落新妇、鸢尾等，适合建植大面积景观。北方大部分地区常采用此类植物，其种类丰富，既有观叶、观花，也有观果的植物。 按配植环境分类： 1.喜光地被植物。此类植物适合栽植在光照充足、场地开阔的地块。在全光下生长良好，光照不足则茎细弱、节伸长、开花少。如金鸡菊、一枝黄花、常夏石竹、黑心菊等。 2.耐半荫地被植物。此类植物适合栽植在林缘、树坛下、稀疏树丛处，既能承受一定的光照强度，也有不同程度的耐荫能力。如石蒜、二月兰、连钱草、常春藤、凤仙等。 3.林下地被植物。此类植物适合栽植在郁闭度很高的乔灌木下层，在全光照下生长不良。如玉簪、虎耳草、白芨、蛇莓等。 4.耐被植物。此类植物适合栽植在排水良好、比较干燥的环境或坡地上。多为根系发达、抗逆性强、喜光线充足的植物种类。如景天类、野菊花、小冠花、白三叶宿根福禄考等。 5.耐湿地被植物。此类植物适合栽植在湿润的环境中，如溪边、沼泽、湿地处。如溪荪、黄菖蒲、鱼腥草、射干等。 6.耐盐碱地被植物。此类植物在贫瘠或轻度盐碱地能正常生长的植物。如鸢尾、多花筋骨草、金叶过路黄等。
PCR引物设计原则
PCR引物设计原则 引物(Primer)是人工合成的两段寡核苷酸序列。 1、引物的长度一般为15-30bp，常用的是18-27bp，但不应大于38，因为过长会导致其延伸温度大于74℃，不适于Taq DNA聚合酶进行反应。 2、G十C含量：应在40%-60%之间，PCR扩增中的复性温度一般是较低Tm 值引物的Tm值减去5-10度。引物长度小于20时，其Tm恒等于4(G十C)十2(A十T)。 3、碱基分布的随机性：应避免连续出现4个以上的单一碱基。尤其是不应在其3’端出现超过3个的连续G或C，否则会使引物在G十C富集序列区错误引发. 4、引物自身：不能含有自身互补序列，否则会形成发夹样二级结构. 5、引物之间：两个引物之间不应有多于4个的互补或同源碱基，不然会形成引物二聚体，尤应避免3’端的互补重叠。引物3’端最好选T，错配的几率与A 相比大大的降低了。G、C之间错配的概率小于A、T. 6、引物的5’端可以修饰，而3’端不能进行修饰。5’端的修饰包括：加酶切位点，标记生物素，荧光，地高辛、Eu3+等，引入蛋白质结合的DNA序列，引入点突变，插入突变、缺失突变序列、引入启动子序列。因为引物的延伸是从3’端开始的，因而3’端不能进行任何修饰，另外3’端也不能有形成任何二
级结构的可能。 如何设计引物 不同的核苷酸序列表达的氨基酸氨基酸序列是相同的，所以氨基酸序列才是真正保守的。 引物最好在模板cDNA的保守区域内设计（DNA的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的，在NCBI上搜索不同物种的同一基因，通过序列分析软件比对（Alignment）,各基因相同的序列就是该基因的保守区）。 PCR引物设计 PCR反应中有两条引物，即5′端引物和3′引物。设计引物时以一条DNA单链为基准（常以信息链为基准），5′端引物与位于待扩增片段5′端上的一小段DNA序列相同；3′端引物与位于待扩增片段3′端的一小段DNA序列互补。 引物设计软件 Primer Premier5.0 （自动搜索）* vOligo6 （引物评价） vVector NTI Suit vDNAsis vOmiga vDNAstar vPrimer3 （在线服务）
浅谈郊野公园地被植物的选择与作用
浅谈郊野公园地被植物的选择与作用 发表时间：2016-07-27T09:19:12.317Z 来源：《基层建设》2016年9期作者：卢成 [导读] 对北京地区郊野公园地被植物应用的种类进行了实地调查，分析和总结了北京郊野公园中常见的地被植物的应用特点和配置方式。大千生态景观股份有限公司北京分公司北京 100089 摘要：对北京地区郊野公园地被植物应用的种类进行了实地调查，分析和总结了北京郊野公园中常见的地被植物的应用特点和配置方式，并对地被植物在郊野公园中的作用进行分析归纳。 本文通过对北京地区郊野公园几种常用地被植物的生长习性及后期养护管理过程的综合了解，阐述了郊野公园及地被植物的概念，以及郊野公园在地被植物选择中的一些要求，并结合所用品种在郊野公园实际应用中的表现，总结归纳出郊野公园在地被植物选择与应用中的一些注意事项。 关键词：郊野公园；地被植物；选择应用；注意事项 引言：随着城市化进程的发展，现代城市园林作为一个完整的生态绿地系统，不仅有城区的市政绿化、城市公园的游憩空间、住宅小区的局部景观、街心花园的绿地点缀以及绿化宽带的间隔与连接．还应包括城区外的郊野公园。郊野公园是介于城市公园和自然风景游览区中间状态的园林绿地，是位于城市外围近、中郊区绿化圈层。与城市的绿点、绿块．绿线、绿片、绿带遥相呼应，有机组合构成完整的城市生态环境绿化体系。 本文通过对近年来北京地区郊野公园常用地被植物的统计，结合实际工作中郊野公园建设所用地被植物在栽植及后期管理中表现，总结出北京地区郊野公园地被植物选择与应用中的几点注意事项，以供业内交流分享。 一、郊野公园概念其在北京地区的发展 1、郊野公园概念 郊野公园这一概念源于英国，是英国政府在1970年代根据《Countryside Act 1968》定位出的绿地属性，大部分由地方部门负责管理。但我国内地关于郊野公园的概念目前尚无权威定义，较为全面的理解是：“城市建设用地以外，位于城市郊区，以自然景观为主体，或经一定时间的生态保护、恢复后，具有良好自然生态环境，经科学保育和适度开发，为人们提供郊外休闲、休憩、自然科普教育的公众开放性公园效益[1]。 2、郊野公园在北京地区的发展 郊野公园在我国是一种新型的公园模式，近年来，在市政府的大力推动下，北京地区郊野公园建设得到了良好的发展，从已建成的众多郊野公园的表现来看，它在保护生态环境，丰富城市景观，提高居民生活环境等方面均发挥了十分明显的作用。 二、地被植物概念及其在郊野公园中的作用 1、地被植物的概念 传统意义上，凡能覆盖地面的植物均称为地被植物，除草本外，木本植物中矮小的灌丛木，偃伏性或半蔓性的灌木以及藤本均可能作为园林地被植物[2]。 本文所述地被为可自播繁殖草本植物及个别观赏草类，不包含矮小的灌丛木，偃伏性或半蔓性的灌木以及藤本。 2、地被植物在郊野公园中的作用 地被植物种类丰富，是园林造景的重要植物材料，在实际应用中具有以下作用： （1）美化环境，丰富空间层次：他们在乔木、灌木和草坪组成的植物景观中亦起到承上启下的作用，既弥补了乔木生长缓慢、草坪不易于管理的不足，又丰富了竖向种植层次，极大限度的利用了环境空间，增加景观效果。 （2）改良土壤：有些地被植物根系浅而庞大，能疏松表层土壤、调节地温、增加土壤腐殖质含量，对上层植物生长有促进作用； （3）保持水土、护坡固堤：有些地被植物根系发达有很强的缚土保水能力和护坡固堤能力； （4）化空气，降温增湿：地被植物的叶面积系数较大，在减少尘埃与细菌传播，净化空气，降温增湿等方面都有重要作用 （5）分割空间、形成屏障：地被植物抵抗能力强，生长速度快，还可以起到减少和抑制杂草生长以及分隔空间、形成屏障等作用 三、郊野公园对地被植物选择中的要求 北京地区郊野公园具有投资低、面积大、有一定绿化基础、管理粗放、见效快、自然野趣的特点，因此在地被植物选择上俞洋[3]认为地被植物应具有以下特点： （1）植物低矮，告诉不超过100cm；（2）全部生育期在陆地栽培； （3）覆盖能力强，生长迅速；（4）观赏价值较高。 （5）再生长环境中具有一定的稳定性；（6）对人畜无害； （7）能够管理。即不会泛滥成灾。 四、几种常用地被植物特点及其应用表现 1、波斯菊（Cosmos bipinnatus Cav.） 菊科、秋英属一年生或多年生草本，波斯菊用种子繁殖，一般早春播种，5～6月开花，秋凉后又继续开花直到霜降。波斯菊的种子有自播能力，一经栽种，以后就会生出大量自播苗。花期较长且外形美观、颜色丰富，能极好的体现郊野公园的野趣。 波斯菊性强健，喜阳光，耐干旱，对土壤要求不严，但不能积水。波斯菊植株高大，在迎风处栽植易倒伏及折损。可在小苗高20～30cm时去顶，以后对新生顶芽再连续数次摘除，植株即可矮化，同时也可增多了花数。 2、二月兰（Orychophragmus violaceus L.） 十字花科一、二年草本，花期3—5月，株高20~50cm，花色先紫后红，耐荫、耐寒、极耐旱，是北京地区极具野趣而又早春开花的本土地被植物，在郊野公园应用中，可单独播种，也可与白三叶、紫花地丁波斯菊等草花混播应用，且在林下、坡地、湖边均长势良好，是
引物设计原则必看
mi引物设计原则 1、引物的长度一般为15-30 bp,常用的就是18-27 bp,但不应大于38,因为过长会导致其延伸温度大于74℃,不适于Taq DNA聚合酶进行反应。 2、引物序列在模板内应当没有相似性较高,尤其就是3’端相似性较高的序列,否则容易导致错配。引物3’端出现3个以上的连续碱基,如GGG或CCC,也会使错误引发机率增加。 3、引物3’端的末位碱基对Taq酶的DNA合成效率有较大的影响。不同的末位碱基在错配位置导致不同的扩增效率,末位碱基为A的错配效率明显高于其她3个碱基,因此应当避免在引物的3’端使用碱基A。另外,引物二聚体或发夹结构也可能导致PCR反应失败。5’端序列对PCR影响不太大,因此常用来引进修饰位点或标记物。 4、引物序列的GC含量一般为40-60%,过高或过低都不利于引发反应。上下游引物的GC含量不能相差太大。 5、引物所对应模板位置序列的Tm值在72℃左右可使复性条件最佳。Tm值的计算有多种方法,如按公式Tm＝4(G+C)＋2(A+T),在Oligo软件中使用的就是最邻近法(the nearest neighbor method)。 6、ΔG值就是指DNA双链形成所需的自由能,该值反映了双链结构内部碱基对的相对稳定性。应当选用3’端ΔG值较低(绝对值不超过9),而5’端与中间ΔG值相对较高的引物。引物的3’端的ΔG值过高,容易在错配位点形成双链结构并引发DNA聚合反应。 7、引物二聚体及发夹结构的能值过高(超过4、5kcal/mol)易导致产生引物二聚体带,并且降低引物有效浓度而使PCR反应不能正常进行。 8、对引物的修饰一般就是在5’端增加酶切位点,应根据下一步实验中要插入PCR产物的载体的相应序列而确定。 引物序列应该都就是写成5-3方向的, Tm之间的差异最好控制在1度之内, 另外我觉得扩增长度大一些比较好,500bp左右。 要设计引物首先要找到DNA序列的保守区。同时应预测将要扩增的片段单链就是否形成二级结构。如这个区域单链能形成二级结构,就要避开它。如这一段不
园林地被植物的设计与应用
园林地被植物的设计与应用 摘要：地被植物是指高度不超过1m的植物，在园林绿化中承担着非常重要的作用。本文介绍了地被植物的优点和应用原则，并举例说明如何设计和应用，最后提出一些问题，望得到业内人士共鸣。 关键词：地被植物；设计：应用 地被植物是指生长高度较矮、覆盖在地表层的植物，草本植物（多年生）、匍匐灌木和藤本植物都是地被植物的范畴。随着经济的发展和人们对生活环境要求的提高，园林绿化也在不断创新发展，地被植物因美化地面、扩大绿化率、创造层次感、维护成本低等优点成为园林绿化工作者的重点研究对象。 1地被植物在园林绿化中的优点 地被植物一般具有极强的抗性，对土壤、环境、水分等外界因子不敏感；生长速度快，高矮错落有致，容易营造出层次感，短时间内就会出效果；地被植物大多为多年生植物，后期维护简单，养护成本低；种类繁多，外型、颜色、果实多样，组合造型多变。地被植物弥补了乔木或大型树木的缺陷，充分覆盖地面，增加园林绿量，减少水土流失，节约水资源，是一种环保型植物。
2设计与应用原则 2.1因地制宜，合理种植地被植物虽然适应性广，也要因地制宜，利于植物生长。例如，德国鸢尾喜欢温暖、阳光充足的生长环境，忌积水，所以要种在地势高、无积水的地方；蜀葵抗盐碱性强，可以把它种植在盐碱地中，但含盐量不可超过0.6%；荷兰菊耐贫瘠能力强，可以在有机质含量不高、缺乏营养元素的土块种植。 2.2根据地被植物的色彩、花期、果期等进行设计地被植物范围广，叶型、形态、花期、果期、花色、果色等千差万别，在园林设计时合理利用这些地被植物的特性，可以达到季季有景看、季季常绿的效果。比如主色调是红色的花，不想太过鲜艳和热烈，可以配以粉色花地被植物，中和耀眼的红色，整体感觉温馨而协调。 2.3与目标功能相吻合在进行园林设计时，先要弄清楚绿地的主要功能是什么，是小区绿化、广场绿化、博览园绿化、节日造景，还是其他用途。小区绿化的目的是美化环境、提高绿量，可选择一些易打理、生命力强、色彩柔和的地被植物；如果是广场绿化，可选择耐贫瘠、丛生植物；如是节日绿化，如十一国庆节，要选择主色调为红色、黄色的开花植物，烘托喜庆的气氛。 2.4尽量选用乡土植物或周边区域的植物乡土地被植物多年生长，已经适应了本土的土壤条件和环境条件，在病虫
常见草坪及地被植物
《草坪地被与花卉》结课论文 ----《中国常用草坪地被植物》
常见草坪及地被植物简介 第一节主要草坪植物种类介绍 一、匍茎剪股颖(Agrostis stolonifera L.) [形态特征]属于禾本科剪股颖属多年生草本植物，分布我国河北、河南、浙江、江西、四川等省。常于河边、草地及路边等湿地。此草茎杆偃卧地面，茎高15～40厘米，有3～6节的匍匐枝，节着地生根，须根多而弱。叶鞘无毛，稍带紫色，略短于节间，叶舌膜质，叶片扁平，线形，先端尖细，长5．5～8．5厘米，宽3～4毫米。花果期夏秋季，圆锥花序，卵状长圆形，长ll～20厘米，宽2～5厘米，小穗两性，花1朵，小花脱落而颖宿存。北京地区春季返青期在3月16日至4月24日，枯黄期在10月下旬，绿色期180天至210天左右，在华东地区绿草期可延长至260天左右。 [生态习性]耐寒，抗热，喜冷凉，耐瘠薄，在肥沃潮湿排水良好处生长良好，对土壤要求不严。由于此草节节生根。再生力稍强，故尚能耐践踏。 [繁殖栽培] 此草繁殖甚易，除了用种子播种繁殖外，一般用它的匍匐茎埋人土中即能生根扩散。在栽培管理上应加强轧剪，才能保持其整齐美观。 [园林用途]除作为一般草坪栽培外，并适应于地下水位比较高的潮湿地区种植。此草又宜于混入结缕草、假俭草及狗芽根等草坪种中作混合草坪栽培，在国外此草的混合草坪多用于高尔夫球场。 二、草地早熟禾(Poa Pratensis L.) 草地早熟禾是禾本科早熟禾属 多年生草坪植物，属于冷地型草种， 为园林重要草坪植物，又名草原莓 系，光茎兰草，原产欧洲及亚洲北 部，我国东北、华北、西北各地均 有野生品种，目前在世界各地已先 后培养出优良栽培种多达几十个品 种，我国近年来已向外引入试种， 部分品种已经上海花木公草坪植生 带工厂，采用工厂化制成无纺布植 生带往各地栽培应用，取得一定的 效果。 [形态特征]具匍匐根茎，根须状，茎秆丛生，直立，野生种高30～50厘米，栽培驯化后株高50～70厘米，茎具2～3节，叶狭线形，叶舌膜质，长约l～3毫米，圆锥花序，开展，长7～30厘米，小穗卵圆形，3～6朵花，种子细小，纺锤形，干粒重0．2～O．37克，每斤种子多达135万粒。 [主要性状及优缺点]草地早熟禾色泽浓绿，质地细致，生长稠密，部分品种色泽蓝绿色(如本特早熟禾)。已在天津、北京、洛阳、西安推广栽植。主要性能喜温暖湿润气候，抗寒力极强，一般在一9℃低温下仍不枯萎，因此，草地早熟禾多数品种瓦巴斯(wa—bash)FylkingEntoper等品种在华东及上海栽培基本常绿，早熟禾因系冷凉型草种，因此，在夏季高温地区栽种，发现抗热性能较强，经人们试种后，可以采用夏季多浇水增加草地土壤湿度，则能帮助它度过炎热。 [园林用途及繁殖方法]均采用种子播种繁殖。欧美及日本多用黑麦草、小糠草、海边卷曲草等等草种混合种植，作庭园草坪栽培。广泛用于工厂、医院、学校作环境防护草坪。据新疆乌鲁木齐市介绍，此草尚耐干旱，耐踏性比一般一、二年生早熟禾好，再生力较强。因
PCR引物设计原理及原则
PCR引物设计原理及原则 PCR引物设计原理 PCR引物设计的目的是为了找到一对合适的核苷酸片段，使其能有效地扩增模板DNA序列。因此，引物的优劣直接关系到PCR的特异性与成功与否。 要设计引物首先要找到DNA序列的保守区。同时应预测将要扩增的片段单链是否形成二级结构。如这个区域单链能形成二级结构，就要避开它。如这一段不能形成二级结构，那就可以在这一区域设计引物。 现在可以在这一保守区域里设计一对引物。一般引物长度为15~30碱基，扩增片段长度为100~600碱基对。 让我们先看看P1引物。一般引物序列中G+C含量一般为40%~60%。而且四种碱基的分布最好随机。不要有聚嘌呤或聚嘧啶存在。否则P1引物设计的就不合理。应重新寻找区域设计引物。 同时引物之间也不能有互补性，一般一对引物间不应多于4个连续碱基的互补。 引物确定以后，可以对引物进行必要的修饰，例如可以在引物的5′端加酶切位点序列；标记生物素、荧光素、地高辛等，这对扩增的特异性影响不大。但3′端绝对不能进行任何修饰，因为引物的延伸是从3′端开始的。这里还需提醒的是3′端不要终止于密码子的第3位，因为密码子第3位易发生简并，会影响扩增的特异性与效率。 PCR引物的设计原则： ①引物应用核酸系列保守区内设计并具有特异性。 ②产物不能形成二级结构。 ③引物长度一般在15~30碱基之间。 ④G+C含量在40%~60%之间。 ⑤碱基要随机分布。 ⑥引物自身不能有连续4个碱基的互补。 ⑦引物之间不能有连续4个碱基的互补。 ⑧引物5′端可以修饰。 ⑨引物3′端不可修饰。 ⑩引物3′端要避开密码子的第3位。 PCR引物设计的目的是找到一对合适的核苷酸片段，使其能有效地扩增模板DNA序列。如前述，引物的优劣直接关系到PCR的特异性与成功与否。对引物的设计不可能有一种包罗万象的规则确保PCR的成功，但遵循某些原则，则有助于引物的设计。 1.引物的特异性 引物与非特异扩增序列的同源性不要超过70%或有连续8个互补碱基同源。 2.避开产物的二级结构区 某些引物无效的主要原因是引物重复区DNA二级结构的影响，选择扩增片段时最好避开二级结构区域。用有关计算机软件可以预测估计mRNA的稳定二级结构，有助于选择模板。实验表明，待扩区域自由能（△G°）小于58.6lkJ/mol时，扩增往往不能成功。若不能避开这一区域时，用7-deaza-2′-脱氧GTP取代dGTP对扩增的成功是有帮助的。 3.长度 寡核苷酸引物长度为15~30bp，一般为20~27mer。引物的有效长度：Ln=2（G+C）+（A+T+，Ln值不能大于38，因为>38时，最适延伸温度会超过Taq DNA聚合酶的最适温度（74℃),不能保证产物的特异性。 4.G+C含量
园林植物及其应用
浙江农林大学硕士研究生入学考试 《园林植物及其应用》考试大纲 一、考试性质 浙江农林大学硕士研究生入学《园林植物及其应用》考试是为招收风景园林专业的硕士研究生而设置的具有选拔功能的水平考试。它的主要目的是测试考生对园林植物及其应用内容的掌握程度和应用相关知识解决问题的能力。 二、考试基本要求 要求考生应全面掌握园林植物及其应用的基本概念与基本原理；掌握园林植物的分类和形态特征，能够准确识别常用园林植物种类，掌握其原产地、生态习性、观赏特性及园林用途；掌握植物群落知识；考生应具备完整的园林植物相关的理论知识和培育、繁殖、栽培园林植物等操作技能；能够正确应用园林植物进行种植设计并绘图表达；具备利用园林植物的知识解决环境建设中实际问题的能力。 三、考试方法、内容考试时间 本试卷采用闭卷笔试形式，试卷满分为150分，考试时间为180分钟。园林树木学60%、花卉学30%、园林树木栽培学10%。 四、考试内容和考试要求 园林树木学 （一）园林树木概念及其分类 考试内容 1.园林树木学的涵义； 2.园林树木的种质资源状况； 3.园林树木的植物学分类和人工分类法；植物的命名。 考试要求 1、掌握园林树木的定义及其园林树木学的研究内容； 2、掌握园林树木的种质资源状况；
3、了解园林树木的植物学分类方法、植物分类等级及裸子植物的郑万钧分类系 统、被子植物的恩格勒系统、赫钦松系统和克朗奎斯特系统的特点； 4、了解园林树木的性状、观赏特性、园林应用分类法； 5、掌握植物的双名法、植物检索表的编制与使用。 6、了解园林树木的地理分布规律。 （二）园林树木的形态及其造景特点 考试内容 园林树木的性状、根、茎、叶、花、果、种子等的基本结构、形态变化、观赏特点。 考试要求 1、熟悉园林树木的性状、根、茎、叶、花、果、种子等的概念、类型及其变化； 2、了解园林树木的性状、根、茎、叶、花、果、种子等观赏特性； 3、掌握根据园林树木的形态术语进行园林树木形态描述方法。 （三）园林树木在园林建设中的作用 考试内容 园林树木对环境的防护功能、美化功能、生产功能。 考试要求 1、园林树木对环境的防护功能、美化功能、生产功能； 2、园林树木的防护、美化、生产功能等之间的关系。 （四）城市园林绿化树种的调查与规划 考试内容 园林树种调查与规划的意义、方法、步骤、内容、要求。 考试要求 1、掌握野生园林树种及城市园林绿化树种的调查方法及步骤。 2、了解园林树种规划的原理及成功实例； （五）园林树木群落 考试内容 植物群落概念、组成、特征等。 考试要求：
PCR引物的设计原则
PCR引物的设计原则： ①引物应用核酸系列保守区内设计并具有特异性。 ②产物不能形成二级结构。 ③引物长度一般在15~30碱基之间。 ④G+C含量在40%~60%之间。 ⑤碱基要随机分布。 ⑥引物自身不能有连续4个碱基的互补。 ⑦引物之间不能有连续4个碱基的互补。 ⑧引物5′端可以修饰。 ⑨引物3′端不可修饰。 ⑩引物3′端要避开密码子的第3位。 1.引物的特异性 引物与非特异扩增序列的同源性不要超过70%或有连续8个互补碱基同源。 2.避开产物的二级结构区 某些引物无效的主要原因是引物重复区DNA二级结构的影响，选择扩增片段时最好避开二级结构区域。用有关计算机软件可以预测估计mRNA 的稳定二级结构，有助于选择模板。实验表明，待扩区域自由能（△G°）小于58.6lkJ/mol时，扩增往往不能成功。若不能避开这一区域时，用7-deaza-2′-脱氧GTP取代dGTP对扩增的成功是有帮助的。 3.长度
寡核苷酸引物长度为15~30bp，一般为18~27mer。引物的有效长度：Ln=2（G+C）+（A+T），Ln值不能大于38，因为>38时，最适延伸温度会超过Taq DNA聚合酶的最适温度（74℃),不能保证产物的特异性。 4.G+C含量 G+C含量一般为40%~60%。其Tm值是寡核苷酸的解链温度，即在一定盐浓度条件下，50%寡核苷酸双链解链的温度，有效启动温度，一般高于Tm值5~10℃。若按公式Tm=4（G+C）+2（A+T）估计引物的Tm 值，则有效引物的Tm为55~80℃，其Tm值最好接近72℃以使复性条件最佳。上下游引物的GC含量不能相差太大。 5.碱基随机分布 引物中四种碱基的分布最好是随机的，不要有聚嘌呤或聚嘧啶的存在。尤其3′端不应超过3个连续的G或C，因这样会使引物在G+C富集序列区错误引发。 6.引物自身 引物自身不应存在互补序列，否则引物自身会折叠成发夹状结构引物本身复性。这种二级结构会因空间位阻而影响引物与模板的复性结合。若用人工判断，引物自身连续互补碱基不能大于3bp。 7.引物之间 两引物之间不应具有互补性，尤应避免3′端的互补重叠以防引物二聚体的形成。一对引物间不应多于4个连续碱基的同源性或互补性。
引物设计的原理与方法
引物设计的原理与方法 The latest revision on November 22, 2020
PCR引物设计的原理及方法 阎振鑫S111666(四川大学生命科学学院细胞生物学成都 610014) 摘要：自20世纪后期发展了PCR技术以来，PCR已经改变了整个生物学研究的进程。而PCR反应的第一步就是设计引物，引物设计的好坏直接关系到PCR的成败。PCR引物设计有许多的原则必须要遵循：引物与引物之间避免形成稳定的二聚体或发夹结构，引物与模板的序列要紧密互补。引物不能在模板的非目的位点引发DNA聚合反应等。另外，引物的设计方法也越来越多，出现了许多专门的设计软件和网站，如：PrimerPremier5.0等。 关键词：PCR 引物原理方法 NCBI PrimerPremier5.0 PCR primer design principle and method YanZhenxin (sichuan Univercity, Life science college cell biology chengdu 610014 ) Abstract: When PCR technology was find, PCR has changed all of the program in research of biology. The design of primer is the frist step of PCR. It is relation to the fate of PCR. There are some principals must be obey: dipolymer and hairpin structure must be avoid between different primers. The DNA polymerization reaction should not be triggered at the wrong site. Therefore, there are more and more methods of design primer, include the professional softwares and professional web site. Key word: PCR primer principle NCBI PrimerPremier5.0 聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction。PCR)是20世纪后期发展起来的 一种体外扩增特异DNA片断的技术。具有快速、简便及高度敏感等优点，能极大地缩短目的基因扩增时间[1]。因此，其一直是生物学者们致力于构建cDNA文库、基因克隆以及表达调控研究的必要前提和基础[2]。PCR的第一步就是引物设计。引物设计的好坏，直接影响了PCR的结果，因此这一步很关键。成功的PCR反应既要高效，又要特异性扩增产物，因此对引物设计提出了较高的要求。引物设计需要注意的地方很多，在大多数情况下，我们都是在知道已知模板序列时进行PCR扩增的。在某些情况比如构建文库的时候也会在不知道模板序列的情况下进行设计。这个时候随机核苷酸序列
园林植物应用与技术试题及答案
《园林植物应用与技术》课程考试题 姓名计分。 一、名词解释（30%） 1、园林植物多样性 园林植物多样性包括物种多样性、遗传多样性、生态环境多样性。园林植物种类多样性是园林中植物有机体与环境长期的相互作用下，通过遗传和变异，适应和自然选择而形成的。生态环境多样性指园林中，植物和动物、微生物与环境相结合，构成一个自我维持、自我更新、综合协调的生物系统。遗传多样性指园林植物生长发育中基因表达在时间上和空间上调节控制的复杂性，是植物遗传多样性成多层次的表现，即表现在植物体的外部形态上，生理代谢和染色体的DNA分子水平上。2、生态园林 生态园林是继承和发展传统园林的经验，遵循生态学的原理，建设多层次、多结构、多功能、科学的植物群落，建立人类、动物、植物相联系的新秩序，达到生态美、科学美、文化美和艺术美。应用系统工程发展园林，使生态、社会和经济效益同步发展，实现良性循环，为人类创造清洁、优美、文明的生态环境。 3、草坪植物 用以构成园林草坪的植物材料。主要属禾本科和莎草科。禾本科植物常用于运动场草坪，观赏草坪和绿地草坪。 4、植物配置 按植物生态习性和园林布局要求，合理配置园林中各种植物（乔木、灌木、花卉、草皮和地被植物等），以发挥它们的园林功能和观赏特性。 5、植物造景 应用乔木、灌木、藤本及草本植物来创造景观，充分发挥植物本身形体、线条、色彩等自然美，配植成一幅幅美丽动人的画面，供人们观赏。 6、垂直绿化 是指充分利用不同的立地条件，选择攀援植物及其它植物栽植并依附或者铺贴于各种构筑物及其它空间结构上的绿化方式，包括立交桥、建筑墙面、坡面、河道堤岸、屋顶、门庭、花架、棚架、阳台、廊、柱、栅栏、枯树及各种假山与建筑设施上的绿化。 7、绿地率 是居住区用地范围内各类绿地的总和与居住区用地的比率（% ）。 8、花丛花坛 又名盛花花坛，主要由观花草本植物组成，表现盛花时群体的色彩美或绚丽的图案景观。可由同一种花卉的不同品种或不同花色的多种花卉组成。 9、植物生态习性 植物与环境长期相互作用下所形成的固有适应属性。 10、观赏价值 植物通过被观赏而体现出来的价值叫做观赏价值。 二、简答题（50%） 1、简述植物植物在景观构成中的作用。 景观设计的四大要素就是土地、植物、水体和建筑。植物是环境的构成，又是主题的烘托甚至是表现者。有美化环境、调节气温、增加湿度、制造氧气、滞尘减噪、杀菌抗污、蓄水保土等作用。 2、简述园林植物综合生态效益评价指标。 通过建立园林植物综合生态效益评价指标，可以对现有园林植物的结构与功能进行定量分析，