DNA Ladder及提取
DNA Ladder是一种即用型(ready for use)DNA分子量标准(DNA Molecular Weight Marker)。包含了1Kb DNA Ladder和100bp DNA ladder，可以满足各种常规DNA电泳分析的分子量参照需要。
本DNA ladder相当于Invitrogen等公司的1Kb plus DNA ladder，但比Invitrogen公司的1Kb plus DNA ladder的条带分布更加均匀细致，便于对照DNA分子量。
DNA ladder中500bp、1000bp和3000bp条带用黑体标记(参见右图)，亮度较高，使辨别条带更加容易。具体每条带的DNA的含量可以参考右图进行计算。
本DNA ladder中已添加了含有溴酚蓝的DNA上样缓冲液，可以直接使用。
每孔上样5微升，即可观察到非常清楚的DNA条带(参见右图)。
DNA ladder法检测细胞凋亡
发生细胞凋亡时，内源性核酸酶被激活，染色体DNA链在核小体之间被切割，形成180～200个碱基或其整数倍的DNA片段，将这些DNA片段抽提出来进行电泳，可得到DNA梯状条带（DNA ladder）。
【材料与试剂】
凋亡细胞；
蛋白酶K（500μg/ml）
8mol/L 醋酸钾
白细胞裂解液：pH8.0，10mmol/L Tris-HCl，10mmol/L NaCl，10mmol/L EDTA，1% SDS。
氯仿
无水乙醇，70%乙醇；
2%琼脂糖凝胶。
【操作步骤】
（1）收集凋亡细胞：取1～2×106个细胞，离心后，立即用70％酒精（-20℃）固定2h；
（2）洗涤：取出酒精固定的细胞，1000r/min离心5min ，去掉上清液，PBS洗二次；
（3）裂解细胞：加400μl细胞裂解液，充分混匀再加蛋白酶K100μl，置65℃水浴消化2小时或过夜；（4）蛋白处理：加75μl 8mol/L的醋酸钾，4℃15min，再加750μl氯仿，充分混匀后，10000r/min离心10分钟后，将上清移至一新的Eppendorf管中；
（5）沉淀DNA: 加入750μl无水乙醇，上下轻柔颠倒混合，即可见乳白色沉淀，若不明显时可置-20℃过夜，12000r/min离心10分钟，去上清；
（6）洗涤DNA：加1ml70%乙醇，混匀，10000r/min 离心5min，去上清；
（7）溶解DNA：根据DAN 沉淀的大小，加一定量的蒸馏水或TE，37℃溶解；
（8）测定DNA浓度；
（9）2%琼脂糖凝胶电泳80V 2小时；【结果判断】
出现梯状电泳条带，最小的条带为180～200 bp，其他的条带为其整倍数大小。坏死细胞则出现弥散的电泳条带，无清晰可见的条带。正常细胞DNA基因条带因分子量大，迁移距离短，故停留在加样孔附近。
细胞凋亡DNA Ladder 检测试剂盒
细胞凋亡DNA Ladder 检测试剂盒
一、原理
细胞核染色质DNA 断裂是细胞凋亡的标志特征。在细胞发生凋亡时，核酸内切酶被激活，选择性降解染色质DNA，形成50-300 kb 的大片段，并进而在核小体连接处断裂，形成180-200 bp 或其整倍数的DNA
片段，这些DNA 片段可从细胞中提取出来，通过琼脂糖凝胶电泳，溴化乙啶染色呈现为梯状条带（DNA Ladder），并据此判断细胞凋亡产生。细胞凋亡DNA Ladder 检测试剂盒提供了一种简便、快速地提取染
色质DNA 的方法，并增加对小片段DNA 的回收，从而增强了检测的敏感性。
二、试剂盒组份
组份 KGA111（20 assays） KGA112（50 assays） KGA113（100 assays）
Lysis Buffer 6 mL 15 mL 25 mL
Solution A 400μL 1.0 mL 2.0 mL
Enzyme A 400μL 1.0 mL 2.0 mL
Enzyme B 400μL 1.0 mL 2.0 mL
Precipitant 3.0 mL 6.5 mL 13.0 mL
Loading Buffer 80μL 0.2 mL 0.4 mL
三、操作步骤
1．离心收集105~106 细胞（1500×g，5min）于1.5mL 微量离心管中；
2．用PBS 洗涤细胞二次（离心1500×g，5min），弃上清；
3．沉淀的细胞中加入100μL Lysis Buffer，涡旋振荡器上剧烈混合10 秒，离心1000×g，5min）移上清于另一1.5mL 微量离心管中；
4．沉淀再加入100μL Lysis Buffer 重复上步，合并两次的上清液；
5．在上述合并的上清液中加入20μL Solution A，再加入20μL Enzyme A， 55℃反应1 小时；6．加入20μL Enzyme B,37℃，1 小时；
7．加入130μL Precipitant 和950μL 冷乙醇, 混匀，置—20℃,1 小时以上或过夜；
8． 4℃，12，000-14，000 rpm 离心15-30min，小心地弃去上清，收集沉淀的DNA；
9．加入0.5mL 70%的冷乙醇，洗DNA 沉淀，再12，000-14，000 rpm 离心20min；
10．弃上清，DNA 沉淀于室温干燥10 min 后，加入10-15μL TE Buffer，充分搅拌溶解DNA；11．取上述10-15μL 样品加入2-3μL Loading Buffer， 1.5%琼脂糖凝胶电泳（凝胶和电泳缓冲
液TBE 均加入0.5μg/mL 的溴化乙啶）;
12．5V/cm 电泳1 小时，紫外灯下观察并拍照。
四、用户自备
PBS、乙醇、TE Buffer，琼脂糖，TBE、溴化乙啶、DNA Ladder Marker。
五、备注
DNA Ladder 出现在细胞凋亡晚期，观察细胞形态已发生皱缩出芽，染色质完全凝聚，细胞核已固缩断
裂的凋亡晚期形态，建议该种形态的凋亡细胞比例在30%以上时进行DNA Ladder 检测或先进行Tunel 检测，
DNA Ladder 出现在一个较短的时间段，在凋亡早期取样，则无DNA 降解的条带，而在凋亡末期取样则产
生与细胞坏死相似的DNA 弥散条芾。因此取样时间需根椐不同种类的细胞和诱导剂而摸索确定。
贴壁细胞最好不用胰酶消化而用细胞刮收集。
此外也有某些细胞不产生这种核小体间的DNA 断裂，而是产生50-300kb 的大片段断裂