细胞生物学实验

《细胞生物学实验》是高等教育出版社于2011年出版的一本书。作者是王崇英和高庆祥。该教科书首先介绍了对常见实验动物的理解，解剖仪器的使用，细胞生物学实验的绘制方法和要求以及特殊显微镜的原理和应用。在此基础上，学生将学习动物细胞的基本形态学观察和显微测量，细胞显微摄影以及细胞核和线粒体的分类和分离。

然后开始研究细胞化学：核酸细胞化学，酶细胞化学，a啶橙荧光染色，免疫细胞化学；重新研究细胞的生理活性：细胞生理活性的实验观察和细胞分裂的形态学观察；最后是综合能力和创新能力的培养：细胞的原代培养，细胞的亚培养，培养细胞的生长特性和形态分类，培养细胞的形态观察和计数，细胞生长曲线的测定，细胞分裂指数，细胞融合，早熟染色体凝集（PCC）的诱导，观察和分析，正常细胞和肿瘤细胞的常规核型的检测和分析。

1.什么是细胞培养？

它是指从活体动物中取出组织，将它们分散到单个细胞中（机械或酶消化），在体外模拟生理环境，并使其在人工培养条件下生长，分裂和繁殖，抑制细胞接触并老化。。

通常有两种细胞，一种是原代细胞，另一种是继代培养细胞。原代细胞是指这样的过程，其中动物组织被诸如胰酶或胶原酶的酶消化并分散以获得单个细胞，然后这些单个细胞在培养容器中生长。大多数组

织可以制备原代细胞，但制备方法略有不同，制备细胞的生长速度和难度也不同。不同的原代细胞具有不同的形态。通常，十代之内的细胞称为原代细胞。

传代细胞通常指无限期繁殖的细胞系。从理论上讲，这些细胞可以无限期传代。实验中经常使用这种细胞，例如Hela，293，Vero等。

2.细胞生长周期

空闲期：从细胞接种到新培养容器中到附着之前的时间。此时间的长短取决于细胞类型，范围从几分钟到几小时不等。

粘附期：细胞从自由状态变化到粘附在培养皿表面并显示出一定细胞形态的时期。

潜伏期：细胞附着在壁上后，不会立即增殖，但会储存必要的物质和能量进行增殖。这个时间称为等待时间。

对数生长期：完成材料和能量存储后，细胞开始大量增殖的时期。在此期间，细胞充满活力且稳定，我们的大部分实验都在此期间进行。

停药期：随着细胞的生长，细胞密度在增加。由于营养的消耗和细胞间接触的抑制，细胞的生长缓慢甚至停止。这时，我们将使细胞通过，

以便细胞可以继续增殖并保持旺盛的生命力。

3.细胞生长的营养条件

细胞培养所需的营养通常来自基本培养基（例如DMEM培养基）和血清。

基本培养基：主要提供氨基酸（蛋白质的基本单位），维生素（细胞代谢中的辅酶成分），无机离子（K +，Na +等），碳水化合物（碳源和能源）等营养物质激素。

血清：主要提供基本培养基无法提供的某些生长因子和低分子营养素，此外还可以促进细胞黏附并中和有害的重金属离子。

如果仅提供不含血清的基本培养基，则大多数细胞将无法生长。血清对我们实验的重要性是不言而喻的，那么合格的血清是哪种血清？

合格的血清需要通过各种测试，包括无细菌，无真菌，无支原体和无病毒污染。血清通常为淡黄色透明液体，由于含有大量蛋白质和其他成分，因此略带粘性。以全金公司的Transserum EQ胎牛血清（FS 201-02）为例，它已通过了牛腹泻病毒，牛副流感病毒，牛呼肠孤病毒，狂犬病病毒，牛腺病毒的检测