【CN110004070A】一株产木聚糖酶黑曲霉基因工程菌及其构建方法与应用【专利】

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利申请

(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910284360.1

(22)申请日 2019.04.10

(71)申请人 南京工业大学

地址 210000 江苏省南京市浦口区浦珠南

路30号南京工业大学

(72)发明人 应汉杰　孙文俊　陈勇　余斌　

刘丽　任培芳　刘娜　奚迅　

欧阳平凯　

(74)专利代理机构 南京苏高专利商标事务所

(普通合伙) 32204

代理人 丁静静　肖明芳

(51)Int.Cl.

C12N 1/15(2006.01)

C12N 9/24(2006.01)

C12R 1/685(2006.01)

(54)发明名称

一株产木聚糖酶黑曲霉基因工程菌及其构

建方法与应用

(57)摘要

本发明公开了一株产木聚糖的黑曲霉基因

工程菌，该菌株中Msb2基因失活；所述Msb2基因

的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述Msb2基

因失活后的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本

发明还公开了上述基因工程菌的构建方法。本发

明进一步地公开了基因工程菌在发酵生产木聚

糖酶中的应用。本发明通过构建Msb2基因的黑曲

霉基因工程菌，使黑曲霉在发酵产木聚糖酶过程

中生物膜产量减少，并且黏附性变弱，提高了木

聚糖酶的产量，

缩短了发酵周期。权利要求书1页 说明书6页序列表10页 附图5页CN 110004070 A 2019.07.12

C N 110004070

A

权　利　要　求　书1/1页CN 110004070 A

1.一株产木聚糖的黑曲霉菌，其分类命名为黑曲霉菌(Aspergillus niger)，菌株号为SJ1，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏时间为2019年02月28日，保藏编号为CCTCC NO:M201911。

2.权利要求1所述产木聚糖的黑曲霉菌在制备木聚糖中的应用。

3.一株产木聚糖的黑曲霉基因工程菌，其特征在于，该菌株中Msb2基因失活。

4.根据权利要求2所述的产木聚糖的黑曲霉基因工程菌，其特征在于，所述Msb2基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述Msb2基因失活后的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

5.根据权利要求1所述的产木聚糖的黑曲霉基因工程菌，其特征在于，所述黑曲霉为黑曲霉SJ1，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO:M201911。

6.权利要求3～5任一所述产木聚糖的黑曲霉基因工程菌的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)提取黑曲霉SJ1基因组；

(2)构建基因敲除片段△Msb2，所述基因敲除片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；

(3)制备黑曲霉原生质体；

(4)将基因敲除片段导入原生质体中进行同源重组，得到Msb2基因失活黑曲霉基因工程菌。

7.权利要求3～5任一所述产木聚糖的黑曲霉基因工程菌在制备木聚糖酶中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，包括如下步骤：以产木聚糖的黑曲霉基因工程菌为发酵菌剂，多孔纤维材料为固定化载体，发酵制备木聚糖酶，所述的固定化载体为聚氨酯。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述的固定化载体通过如下方法进行预处理：

将固定化载体用0.5～2M的NaOH浸泡30min～2h，用水冲洗至pH为中性，在0.5～2M HCl 中浸泡30min～2h，用水冲洗至pH为中性，烘干，得到经过预处理的固定化载体。

10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述的发酵，其发酵条件如下：

发酵培养基:木聚糖10～70g/L、NaNO3 2～6g/L、KH2PO4 0.3～2g/L、MgSO4·7H2O 0.1～0.8g/L、吐温-80 0.1～0.8g/L，以麸皮浸出液配制；

所述的麸皮浸出液按照如下方法制备：称取15～60g/L的麸皮，加入800mL水，煮沸30min～2h后，过滤得滤液，用水再定容至1L；

发酵条件如下：28～32℃、150～300r/min培养3～6d。

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