常规石蜡切片质量的控制

常规石蜡切片质量的控制

谢小英　石伶俐

(湖南省娄底市中心医院病理科　娄底　417000)

[关键词]　组织病理　石蜡切片　制片方法　质量控制

[中图分类号]　R361.2　[文献标识码]　B

[文章编号]　1008-6633(2008)05-624-02

病理制片工作是病理诊断中的重要一环,制片质量的好坏,直接影响病理诊断结果,而病理诊断水平的高低直接关系到该医院总体医疗质量和医疗水平。病理切片质量的好坏是临床病理质量控制的关键环节和基础,高质量的病理切片能提高病理诊断水平,减少病理诊断中的差错的发生[1]。因此,在病理诊断中注意和实施病理切片质量的控制是非常必要的。

1　材料与方法

1.1　材料　组织块、10%福尔马林、无水酒精、95%酒精、80%酒精、丙酮、二甲苯、石蜡、Ehrlich苏木素染液、沉淀酸化伊红乙醇液、切片机和一次性刀片等等。

1.2　方法

1.2.1　固定、脱水、透明、包埋。将当日临床送检的活体组织标本经过病理医生取材及时切成小块,一般为1.5c m×1.5c m×0.2c m大小为宜,用足够量的20%福尔马林进行预固定,下午16:00点以后再放于脱水机中用10%的福尔马林补充固定4小时以上,再进行脱水,脱水一般是从70%～80%酒精开始,再经过2次95%的酒精和2次无水酒精。并在无水酒精后,再加一丙酮,以弥补无水酒精脱水不彻底,但在丙酮中的时间不宜过长,一般放置20～30分钟即可。组织脱水后,在浸蜡前需经过一个媒剂使之透明,而这种媒剂既可与酒精混合,又能溶解石蜡,以便使石蜡浸入到组织中去,达到包埋支持的作用。而二甲苯是常用的一种透明剂,它能与酒精混合,又是石蜡的溶解剂。组织在二丙苯中放置的时间不宜过长,一般为20～30分钟。组织经二甲苯透明后,放入溶化的石蜡内浸渍,在浸蜡过程中,一般先浸入溶点低的软蜡,而后浸入溶点高的硬蜡中。一般组织浸蜡2～4小时,即可达到浸蜡的目的。浸蜡后的组织用石蜡或火棉胶埋藏起来,待石蜡或火棉胶冷却变硬,以便使组织获得一定的硬度和韧度,便于切成菲薄的切片[2]。

1.2.2　切片、附贴、烤片。石蜡切片与附贴是组织制片中的重要步骤,除要有完善的工具外,还要有熟练的技术操作,才能切出菲薄平整的切片。一般石蜡切片厚度要求在3～5μm之间,切片时要求切片刀锋利,用力要均匀一致,不能过猛,速度要适当。切有些组织时要注意方向,如皮肤组织、就应从真皮切向表皮;胃肠组织就要从粘膜切向浆膜,这样切可使组织切片较平整,防止组织破裂现象等。组织切成片后,可用毛笔轻轻拨开切片,将光亮的一面向下,置于40℃～45℃水中,待切片全部展开,如有皱折,可用弯镊子的开合弹动把切片皱折展开后,再用载玻片或盖玻片捞上,注意方向,放在玻片1/3的位置上。切片附贴完毕后,必须置于温箱中烤干,否则染色时会发生脱片,一般置60℃左右的温箱内烤30分钟或更长时间[3]。

1.2.3　苏木精一伊红染色。切片烤干以后,经二甲苯脱蜡,梯度酒精水化后进行染色,根据我科多年的经验,要制作一张高质量的HE切片,选择一种合适的苏木素,伊红染液非常重要,并且要根据苏木素染液的新旧和环境温度,掌握好苏木素染色的时间。冬天气温太低时,可将染液置恒温箱中染色。切片经苏木素染色后,不宜在水中停留较长时间,防止染色变蓝后不易分化。如分化不足,伊红着色不鲜明。从盐酸分化液中出来后应立即入自来水中洗涤或饱和碳酸锂溶液中至变蓝。分化返蓝后一定要在镜下观察苏木素染色情况。如果染色适中,应将切片入自来水中流水冲洗10分钟以上,充分将碱性溶液洗净,以利伊红染色,以免造成红蓝着色不均匀。染色完后,必须将切片中的水份脱净,经透明使之产生一定的折光率,便于镜下观察。然后将切片滴上树胶,盖上盖玻片,贴上标签,以保护切片的组织便于镜检和保存。

2　结果

一张切片的制出,需经过组织取材、固定、脱水、包埋、切片染色等许多步骤。组织经过这么长时间的处理,只要在某一步中出现问题,均能影响最后的制片质量。要观察一张切片质量的好坏,首先应从切片的外观来观察,然后再是镜下观察。

2.1　外观　切片的外观主要从切片附贴的位置是否恰当,是否整洁,封胶是否适当,标签及号码是否清晰,标本是否切全,特别象支窥镜检的标本,通过外观可以了解标本切片具体附贴在玻片的什么位置,有利于镜下观察。

2.2　镜下观察　当拿到一张切片通常用低倍镜进行扫描,以了解切片的全貌结构、框架、标本的块数、切片是否完整、有无污染、病变的不同形态、区域等。再进一步观察这张切片染色是否鲜艳,结构和对比是否清楚,厚薄是否均匀,有无人为改变等。3　讨论

3.1　加强学习　现代病理技术已不是单纯的大体标本和普通HE染色切片制作,而是多学科相互渗透,相互影响,综合性理论、技术性都很强的学科技术。就说常规HE制片技术中组织固定的内容,以前的专业书刊均只介绍为什么要固定,每种固定液的优缺点,以及各种固定液它能保存哪些待测的物质,但是某种待测物质的优秀固定液就可能是另一类待测物质检测失败的原因,如常规福尔马啉能保存脂肪等,但不能保存有尿酸、嗜铬细胞能用于特染的鉴别诊断等等。所以,这就要求技术人员除了要知道所用固定液的特性外,还需了解固定液的化学性质、组织生物学及分子生物学的有关知识。另外象脱水过程,一块组织在脱水液中的脱水时间,选择几道脱水液等知识。只有通过学习,了解了各种组织结构及病理改变,染色的特点,才能真正保证制片的质量。

3.2　认真总结　每一个病理技术工作者在工作中都会碰到各种问题,这些问题可能首先影响的是能否切出切片来,已制成蜡块根本不可能切成片时,技术人员均会各自想方设法将切片切出来。而当染色不好时,也会去寻找影响染色的原因及解决的办法,当切片中所有问题一一解决后,我们应通过观察,及时总结和纠正,久而久之这些在日常工作中所碰到的问题及解决方法就成了自己保证切片质量的经验。

3.3　病理切片质量的控制　病理切片质量的控制是一个多环节、多步骤的过程。组织离体后从固定、脱水、透明、浸蜡包埋,到切片染色全过程中,其中某个环节出现问题均会影响最后的切片质量。因此,每一位从事病理技术工作者在日常工作中必须做到:工作制度化,其中包括固定、取材、脱水、染色等制度;组织固定、脱水时间程序化,也就是说从手术切除的标本什么时候送病理科,什么时候固定,固定时间是多少,什么时候上脱水机,脱水机中每缸的时间程序化等;所用试剂配制标准化,固定液的配制比例要标准,或高或低都能影响制片质量。脱水液的配制要正确,一定要形成梯度,所用的所有试剂在采购时要固定厂家等;最后制片过程合理化。

参考文献

[1]　王伯沄,李玉松,黄高昇,等.病理学技术[M].北京:人民卫生出版

社,2000.75-76

[2]　龚志锦,詹溶洲.病理组织制片技术和染色技术[M].上海:上海科

学技术出版社,1994.80-81

[3]　芮菊生,杜懋琴,陈海明,等.组织切片技术[M].江苏:高等教育出

版社,2003.92-93

(2008-05-22　收稿)(周济桂　编辑)

D-二聚体与同型半胱胺酸测定

对骨折并发下肢深静脉血栓患者的诊断意义

刘　硕　徐东强　周秀英

(山东省威海市文登中心医院临检中心　威海　264400)

[关键词]　深静脉血栓/下肢　D-二聚体　同型半胱胺酸　联合检测

[中图分类号]　R619.2　[文献标识码]　B

[文章编号]　1008-6633(2008)05-625-02

下肢深静脉血栓形成(DVT)是骨科患者的常见并发症,它的发生可导致致命性肺血栓栓塞症和下肢深静脉功能不全等严重后果。D-二聚体与同型半胱胺酸(HCY)联合检测,旨在探讨其对提高骨折患者DVT的早期诊断的意义。

1　资料与方法

1.1　一般资料　2005年1月～2007年11月,我院收治20例骨折并发DVT患者,其中男15例,女5例;年龄20～69岁。所有DVT患者均经下肢深静脉血管造影证实。同期骨折未发生DVT患者20例,年龄近似,性别匹配。对照组25例,均为健康体检者。

1.2　方法

1.2.1　标本采集。所有受检者均为清晨空腹采血4mL,其中2mL加入E DT A-K2抗凝管中,1小时内分离血浆,于-20℃冻存待测同型半胱胺酸(HCY);2mL加入枸橼酸钠抗凝管中,分离血浆,于-20℃冻存待测D-二聚体(DD)。

1.2.2　仪器与试剂。DD采用免疫比浊法定量分析,仪器为日本Sys mexCA-1500血凝仪,试剂为仪器配套专用试剂盒由德灵公司提供。HCY用循环酶法在O ly mpus AU640全自动生化分析仪上检测,试剂由北京九强公司提供。

1.3　统计学处理　计量资料以x±s表示,采用配对t检验分析。

2　结果

2.1　DD检测结果　两组测定结果见表1。从表1可见,DVT 组与骨折未发生DVT组及对照组比较,DD明显升高,差异均有显著性(P<0.001),DVT组与骨折未发生DVT组比较明显升高,差异均有显著性(P<0.001)。

2.2　HCY检测结果　结果亦可见表1。从表1可见,DVT组与对照组比较,HCY明显升高,差异有显著性(P<0.01),DVT组与骨折未发生DVT组比较,HCY明显升高,差异有显著性(P

<0.05)。骨折未发生DVT组与对照组比较差异则无显著性

(P>0.05)。

表1　3组DD、HCY检测结果比较(x±s)

组别例数DD(mg/L)HCY(mol/L)

发生骨折并DVT组20 2.56±1.0322.35±11.64△#

未发生骨折DVT组20 1.07±0.78313.67±6.82正常对照组250.19±0.0811.56±4.78

注:与对照组比较,3P<0.001;△P<0.01;与未发生骨折DVT 组比较,#P<0.001,3#P<0.05

3　讨论

D-二聚体是交联纤维蛋白的降解产物,其生成或增高可作为体内高凝状态和纤溶功能亢进的分子标志物[1]。骨折由于破坏了血管内皮细胞的天然屏障作用,激活内外源凝血途径,打破机体止血和纤溶系统之间的平衡[2],使患者处于高凝状态并激发纤溶亢进,从而导致骨折患者D-D水平较正常对照组明显升高。下肢深静脉血栓形成的主要原因为静脉血流滞缓,静脉壁损伤和血液高凝状态,骨折为其主要诱因。本文结果显示,并发骨折DVT组血浆D-D水平明显高于骨折未并发DVT组,提示D-D对DVT有早期诊断价值。

HCY是一种血管损伤性氨基酸,引起高HCY血症主要因素是遗传缺陷和营养障碍,遗传因素主要是由于编码HCY代谢所需的酶的基因发生突变,使酶活性异常,阻碍蛋氨酸的再生成,从而造成了HCY在体内的蓄积,引起对血管内皮的损伤或毒性作用,增强血小板聚集和黏附,增加纤维蛋白原生成,促进平滑肌细胞迁移、增殖,从而导致动脉硬化及血栓形成[3]。营养障碍主要指代谢中作为辅酶参与的V it B

6

、V it B

12

及叶酸缺乏或机体摄取障碍时,也可引起HCY增高[4]。本文结果显示,DVT患者HCY明显升高,推测血浆HCY增高是骨折患者并发DVT的主

要诱因。对骨折患者及时补充V it B

6

、V it B

12

及叶酸将有助于降低患者血浆HCY水平,而未发生骨折DVT组与对照组比较无显著性差异,提示HCY对DVT的诊断既有敏感性,又有特异性。

参考文献

[1]　郝振海,周东生,张进禄.严重四肢骨折血浆中D-二聚体的变化

及临床意义[J].骨关节损伤杂志,2004,19(9):608

石蜡切片制作标准程序

动物病理组织学 石蜡切片制作标准操作程序（SOP） 一、\器材和试剂准备 （一）载玻片和盖玻片的清洁 1.载玻片和盖玻片清洗方法 (1)锅内倒入适量清洗液（100 mL水+30 m L洗洁精+30 mL 84消毒液）； (2)将玻片逐片放入锅中, 加热至沸腾10 min, 停止加热, 自然冷却; (3)捞出玻片流水冲洗10min,彻底冲净泡沫（弹簧夹上后，单片过水）; (4)将玻片从水中取出, 用蒸馏水冲洗三遍（最好单片过水）; (5)将玻片放入 95%乙醇（分析纯）中浸泡； （6）取出玻片，码在切片盒，自然干燥（或无风适度高温干燥）备用； 注意：由于盖玻片很薄，不能同载玻片放在一起处理；盖玻片从95%乙醇溶液中取出后要放在吸水纸上摊开，干燥后，放在小盒子中备用。 2.粘片剂（蛋白甘油）的制作及载玻片的预处理 （1）蛋白甘油的制作取新鲜鸡蛋，先将其尖端用眼科剪或拨针挑破一小孔，再将蛋的另一端挑破一小孔并稍加扩大，大孔端朝下，使蛋白流入100~200毫升的烧杯中（不要蛋黄），以玻棒打拌蛋白完全变为雪花状泡沫，然后倒入垫有几层纱布的漏斗中过滤而得到透明、清凉的的蛋白液，再加入等量甘油，振摇使之充分混合，加入1%麝香草酚或樟脑防腐。一般将其盛入滴瓶或树胶瓶中备用，不用时盖好防尘。 或1个鸡蛋的蛋清+500mL双蒸馏水，混匀，加10mL浓氨水。 （2）将蛋白甘油倒在小烧杯中，载玻片用弹簧夹夹上后侵入蛋白甘油中，贴壁刮干，放在切片盒内晾干备用。 二、石蜡组织切片的制作 （一）取材 注意事项： 1.材料质量：材料必须新鲜，应争取在死后半小时内处理完毕。 2.取材体积：组织块力求小而薄（厚度不要超过5mm，以2mm最佳） 3.取材力度：取材器具锋利。勿使组织块受挤压，切割时不可来回挫动。夹取组织时，切勿猛压，以免挤压损伤组织。取材时，组织块可稍大一点，以便在固定后，将组织块的不平整部分修去。 4.固定形状：固定尽量保持组织的原有形态新鲜组织经固定后，或多或少会产生收缩现象，有时甚至完全变形。为此可将组织展平，以尽可能雅持原形。对神经、肌肉、皮肤组织等，则可将其两端用线扎在木片上或硬纸片上固定。 5.切向选择：选好组织块的切面应熟悉器官组织的结构并据此决定其切面的走向。纵切或横

病理科常规切片HE切片质量PDCA管理循环案例示范剖析

病理科常规切片（HE切片）质量PDCA管理循环案例示范病理切片质量的好坏关系到病理诊断质量和水平的高低，正确的病理诊断往往取决于准确的显微镜下观察，因此病理切片质量的好坏将直接影响诊断结果的准确性，甚至会带来错误的结果。一张好的病理切片与标本的固定、取材、脱水、包埋、切片、染色等环节有密切的关系。过去，我科一直严抓病理切片质量，每月都随机抽查30例常规切片进行质量评价，总体来说切片质量较高，基本达到诊断的要求。但是每月的切片质量检查或多或少总发现存在一些缺陷，如切片刀痕、裂隙、气泡、胶液外溢等。 目的：通过检查常规切片质量，发现存在影响切片质量的问题，查找原因，提高切片质量。 数据收集：参照《临床技术操作规范病理学分册》中的常规石蜡包埋-HE染色切片质量的基本标准（见表1），对今年1-7月常规病理切 片进行质量分级评定（每月随机抽查30例常规切片，见表2），总的优级率87.1%，优良率97.6%，总体达标。 表1 常规石蜡包埋-HE染色切片质量的基本标准 质量缺陷减分满分（分）优质标准 分；不完整：310 1～组织切面完整，内镜咬组织稍不完整：减510分；未达到规定面数：减4 检、

穿刺标本切面数减～分切片薄(3～5μm)，厚薄均10 切片厚(细胞重叠)，影响诊断：减6～分5～3分；厚薄不均匀：减10 匀． 切片无刀痕、裂隙、颤痕10 有刀痕、裂隙、颤痕，尚不影响诊断：减2分；有刀痕、裂隙、颤痕，影响诊断：减5分 切片平坦，无皱褶、折叠10 有皱褶或折叠，尚不影响诊断：各减2分；有皱褶折或折叠，影响诊断：各减5分 切片无污染10 有污染：减10分 有气泡：减3无气泡（切片与载玻片间分；胶液外溢：减10 3分 ，载玻片间）/盖片与切片、盖片周围无胶液外溢10 透明度好透明度差：减1～3分；组织结构模糊：减5～7分 细胞核与细胞浆染色对10 细胞核着色灰淡或过蓝：减5分红(细胞浆)与蓝(比清晰细胞核)对比不清晰：减5分 切片无松散，裱贴位置适10 切片松散：减5分；切片裱贴位置不当：减5分当10 切片不整洁：减切片整洁，标签端正粘3分；标签粘贴不牢：减3牢，编号清晰分；编号不清晰：减4分 计100 合 注：切片质量分级标准：①甲级片：≥90分（优）；②乙级片：75～89分（良）；③丙分（不合格）59≤；④丁级片：分（基本合格）74～60级片：

石蜡切片的基本操作流程

石蜡切片的基本操作流程 一、取材选取目的组织块，修剪到合适的大小； 二、固定 将组织块放入福尔马林固定液（10%甲醛溶液），固定时间由组织块大小而定，一般不少于24h；体积1cm3的组织块，一般为3-7天； 三、冲水自来水洗几下，泡1小时； 四、系列酒精脱水 50%酒精，1h； 70%酒精，1h； 80%酒精，1h； 90%酒精，1h； 100%酒精（I），1h； 100%酒精（II），1h； 五、透明 酒精：二甲苯=1：1溶液，过夜； 二甲苯，1h； 六、包埋 二甲苯：石蜡=1：1，65-70 ℃，2h； 新鲜石蜡（I），65-70 ℃，1h； 新鲜石蜡（II），65-70 ℃，4h； 新鲜石蜡包埋； 七、切片切片厚度为5-7um； 八、展片温水（40-42 ℃）展片； 九、捞片将展好的片子贴于载玻片上； 十、烘片42 ℃将片子上的水烘干； 十一、烤片60 ℃烤片12-24h； 十二、脱腊 二甲苯（I）：2min； 酒精：二甲苯=1：1溶液：2min； 十三、水化 100%酒精（I）：1min； 100%酒精（II）：1min； 95%酒精：1.5min； 80%酒精：1.5min； 70%酒精：1.5min； 50%酒精：1.5min； 自来水洗：2min 十四、H&E染色 Hematoxylin染色3-5min(2.5min时取出观察染色效果)，自来水洗3次，盐酸分化（2/3杯玻璃缸+3滴1N盐酸），10s；自来水洗蓝化，镜下观察染色效果；（伊红）Eosin染色30-50s，直接脱水（90%酒精-----100%酒精I，100%酒精II各1分------酒精：二甲苯=1：1溶液：1-1.5min）；十五、脱水 90%酒精-100%酒精-100%酒精，各1min； 十六、透明 二甲苯：酒精：1-1.5min；二甲苯：2min；

石蜡切片的制作

说明 石蜡切片法包括取材、固定、洗涤和脱水、透明、浸蜡、包埋、切片与粘片、脱蜡、染色、脱水、透明、封片等步骤。一般的组织从取材固定到封片制成玻片标本需要数日，但标本可以长期保存使用，为永久性显微玻片标本。文档来自于网络搜索 取材 应根据要求选取材料来源及部位。例如植物细胞有丝分裂多选取洋葱根尖，细胞分裂快又便于切取；猪的肝小叶边界清晰明确；耳蜗以豚鼠的内耳易于定位和剥离。材料必须新鲜，搁置时间过久则产生蛋白质分解变性，导致细胞自溶及细菌的滋生，而不能反映组织活体时的形态结构。文档来自于网络搜索 固定 用适当的化学药液——固定液浸渍切成小块的新鲜材料，迅速凝固或沉淀细胞和组织中的物质成分、终止细胞的一切代谢过程、防止细胞自溶或组织变化，尽可能保持其活体时的结构。固定能使组织硬化，有利于切片的进行，而且也有媒浸作用，有利于组织着色。固定液的种类很多，其对组织的硬化收缩程度以及组织内蛋白质、脂肪、糖类等物质的作用各不相同。例如纯酒精可固定肝糖而能溶解脂肪，甲醛能固定一般组织，但溶解肝糖和色素。固定液可分为单一固定液及混合固定液。前者有甲醛（蚁醛、福尔马林）、酒精、醋酸或冰醋酸、升汞、锇酸（四氧化锇）、重铬酸钾及苦味酸等，单一固定液不能固定细胞中的所有成分；混合固定液可以互补不足，常用的混合固定液有Bouin氏液、Zenker氏液、FAA液、Carnoy氏液、SuSa 液（配方见有关技术书籍）。因此，应根据所要显示的内容来选择适宜的固定液。10％福尔马林（4％甲醛）或10％磷酸缓冲福尔马林是病理切片常规使用的固定液，不仅适用于常规HE（苏木精-伊红）染色，还可以用于组织学有关的其他技术的切片染色。固定液的用量通常为材料块的20倍左右，固定时间则根据材料块的大小及松密程度以及固定液的穿透速度而定，可以从1小时至数天，通常为数小时至24小时。文档来自于网络搜索 洗涤与脱水 固定后的组织材料需除去留在组织内的固定液及其结晶沉淀，否则会影响以后的染色效果。多数用流水冲洗；使用含有苦味酸的固定液固定的则需用酒精多次浸洗；如果组织经酒精或酒精混合液固定，则不必洗涤，可直接进行脱水。固定后或洗涤后的组织内充满水分，如不除去水分就无法进行以后的透明、浸蜡与包埋，因为透明剂多数是苯类，苯类和石蜡均不能与水相

石蜡切片步骤

石蜡切片制作 大致步骤：取材、固定、洗涤和脱水、透明、浸蜡、包埋、切片和粘片、脱蜡、染色、脱水、透明、封片等步骤。 1、取材 植物材料选择时必须尽可能不损伤植物体或所需要的部分。 取材必须新鲜，尽可能割取所需要的组织块，并随即投入固定液。 取材时刀要锐利，避免因挤压细胞使其受到损伤。 切取的材料应该小而薄，便于固定剂迅速渗入内部。一般厚度不超过2mm，大小不超过5*5mm2。 2、固定 用适当的化学药液—固定液浸渍切成小块的新鲜材料，迅速凝固或沉淀细胞和组织中的物质成分、终止细胞的一切代谢过程、防止细胞自溶或组织变化，尽可能保持其活体时的结构。 固定液的选用：FAA固定液 FAA固定液配制：福尔马林（38%甲醛）5 ml 冰醋酸 5 ml 70%酒精 90 ml 5 ml甘油（丙三醇） 固定时间根据材料块的大小及松密程度而定。 3、洗涤与脱水 固定后的组织材料需要除去留在组织内的固定液及其结晶沉淀，否则会影响以后的染色效果。多数用流水冲洗：使用含有苦味酸的固定液固定的则需要用酒精多次浸洗；如果组织经酒精或酒精混合液固定，则不必洗涤，可直接进行脱水。 酒精为常用的脱水剂，为了减少组织材料的急剧收缩，应使用从低浓度到高浓度递增的顺序进行，通常从30%或50%酒精开始，经70%、85%、95%直至纯酒精（无水乙醇），每次时间为1-数小时，如不能及时进行脱水，材料可以放在70%酒精中保存，因高浓度酒精易使组织收缩硬化。 4、透明 选用二甲苯为酒精和石蜡的浸媒液，替换出组织内的酒精。通常组织先经过纯酒精和透明剂各半的混合液浸渍1-2小时，再转入纯透明剂中浸渍。时间根据材料块大小而定。 5、浸蜡与包埋 用石蜡取代透明剂，使石蜡浸入组织而起支持作用。通常把组织材料块放在熔化的石蜡和二甲苯的等量混合液浸渍1-2小时，再先后移入2个熔化的石蜡液中浸渍3小时左右，浸蜡应在高于石蜡熔点3℃左右的温箱中进行，以利于石蜡浸入组织内。浸蜡后的组织材料块放在装有蜡液的容器中（摆好在蜡中的位置），待蜡液表层凝固即迅速放入冷水中冷却，即做成含有组织块的蜡块。容器可用光亮且厚的纸折叠成纸盒或金属包埋框盒。如果包埋的组织块数量多，应进行编号，以免差错。石蜡熔化后应在蜡箱内过滤后使用，以免因含有杂质而影响切片质量，且可能损伤切片刀。 6、切片 包埋好的蜡块用刀片修成规整的四棱台，以少许热蜡液将其底部迅速贴附于小木块上，夹在轮转式切片机的蜡块钳内，使蜡块切面与切片刀刃平行，旋紧。切片刀的锐利与否、蜡块硬度适当都直接影响切片质量，可用热水或冷水等方法适当改变蜡块硬度。通常切片厚度为 4-7微米，切出一片接一片的蜡带，用毛笔轻托轻放在纸上。 7、贴片与烤片

石蜡切片详细步骤

石蜡切片 1.仪器 石蜡切片机、烘箱、显微镜、染色缸、小培养皿、镊子、毛笔、吸水纸、纱布、载玻片、盖玻片等。 2. 试剂 FAA固定液(70%酒精90ml、冰醋酸5ml、福尔马林5ml)、10%番红水溶液、0.5%固绿（用95%的酒精配制）、酒精（100%、95%、80%、70%、50%）、二甲苯、蒸馏水、甘油、中性树胶等。 3.取材 幼嫩的油菜植株叶片和茎 4.方法与步骤(参照) 1．固定： FAA固定液固定48小时以上。 2．脱水： 50%酒精→70%酒精→83%酒精→95%酒精→100%酒精→100%酒精。每级2h。100%酒精中1.5h。其中70%酒精处可长期保存。 3．透明： 1/2二甲苯+1/2无水乙醇 (2h) →纯二甲苯(1.5h) →纯二甲苯(1.5h) 4．浸蜡： 将处理的材料置于1/2石蜡(固体粉末状)+1/2二甲苯中，40℃烘箱敞口过夜。 5．包埋： 先提升恒温箱的温度至60℃，换纯蜡3次，每次1-2h，用硬的电光纸、牛皮纸叠纸盒，置于45-60℃的烫板上，倒入材料，摆放好材料，把标签（正面向外置于底部），补足石蜡，倒好后轻轻的置于冷水盆中，注意底面要接触盆中凉水，待石蜡全部凝固后可取出晾干，也可在凉水盆中放置过夜。 6．切片 对包埋的材料进行修块、粘块、整修后，保证材料四周都有石蜡包围。但不可太多。切面的上、下边平行。用加热的解剖刀蘸取少许石蜡碎屑，并迅速将石蜡块四周的碎屑烫平，使石蜡块牢固地粘在台木上。检查切片机，安装切片刀、调整好刀的角度，调整石蜡块与刀口之间的角度与位置后开始切片。

7．粘片 将粘贴剂置簿玻片上，再取切片浮置粘片剂上，然后置烘片台上，使切片展开烫平，材料不现皱纹为度。最后将切片依次排好，用滤纸吸去多余水分，同时以记号笔在玻片上编号，放入温箱中烘干，温度30～40℃中过夜。 8．脱蜡 脱蜡用二甲苯，把烤好的载玻片放于盛二甲苯的染缸中：纯二甲苯(10-20min)→纯二甲苯(5-10min) 9．染色 将纯二甲苯脱蜡完全的材料，1/2 二甲苯十1/2纯酒精→100%酒精→95％酒精→85％酒精→70％酒精→50％酒精→1%番红染色(4h以上) →50％酒精→70％酒精→85％酒精→95％酒精→0.5%固绿(1min)→95％酒精→100%酒精→100％酒精(未注明时间各级均为3min) 10．胶封 滴加加拿大树胶封藏。 11.镜检，拍照

病理科切片质量控制评分表

组织切片制备的质量控制评分标准 1．组织制片过程中，应确保切片号与蜡块号一致。 2．制片工作一般应在取材后2个工作日内完成（不含脱钙、脱脂等特殊 自理的标本）。 3．制片完成后，技术人员应检查制片质量，并加帖标有本病理 科病理号的标签。常规石蜡包埋—HE染色片的优良率（甲、乙级 切片所占的比例）≥90%，优级率（甲级切片所占的比例）≥35%。 不合格切片应立即重做。切片质量的基本标准参见下表。 常规石蜡包埋—HE染色切片质量的基本标准 评分 序号优质标准 满 分 质量缺陷减分 ①组织切面完整，内镜咬检、 穿刺标本切面数10 组织稍不完整：减1~3分；不完整，： 减4~10分；未达到规定面数：减5 分 ② 切片薄（3~5μm），厚薄 均匀10 切片厚（细胞重叠），影响诊断：减6~10 分；厚薄不均匀：减3~5分 ③切片无刀痕、裂隙、颤痕 10 有刀痕、裂隙、颤痕，尚不影响诊断： 减2分；有刀痕、裂痕、颤痕，影响 诊断：减5分 ④切片平坦，无皱褶、折叠 10 有皱褶或折叠，沿不影响诊断：各减2 分；有皱褶或折叠，影响诊断：各减 5分 ⑤切片无污染物10 有污染物：减10分 ⑥无气泡（切片与载玻片间/10 有气泡：减3分；胶液外溢：减3分

盖玻片与切片、载玻片间），盖玻片周围无胶液 外溢 ⑦透明度好 10 透明度差：减1~3分；组织结构模糊： 减5~7分 ⑧细胞核与细胞质染色对比 清晰10 细胞核着色灰淡或过蓝：减5分；红（细 胞质）与蓝（细胞核）对比不清晰： 减5分 ⑨ 切片无松散，裱贴位置适 当10 切片松散：减5分；切片裱贴位置不当： 减5分 ⑩ 切片整洁，标签端正粘牢， 编号清晰10 切片不整洁：减3分；标签粘贴不牢：减3分；编号不清晰：减4分 合计100 注：切片质量分级标准：①甲级片：≥90分（优）；②乙级片：75~89分（良）③丙级片：60~74分（基本合 格）； ④丁级片：≤59分（不合格） 4．制片过程发生意外情况时，有关技术人员和技术室负责人人 应及时向病理科主任报告，并积极设法予以补救。 5．制片完成后，技术人员应将所制片与基相应的活检申请单/ 活检记录单、取材工作单等一并移交给病理医师。双方经核 对无误后，办理移交签字手续。 年 编号：

石蜡切片的制作过程(精)

石蜡切片的制作 目的要求:了解生物制片的基本原理和方法;了解石蜡切片制作的基本过程;学会制作石蜡切片。 一、生物制片的基本原理 (一生物制片的目的与发展概况 生物制片是研究生物有机体微观结构的基础方法,其目的是提供在显微镜下以适度的样品,有效地对其进行形态和功能观察研究。 (二生物制片的方法 当我们研究生物体的组织或细胞时,除了某些生物体可用相差显微镜或偏光显微镜等方法达到观察目的外,其余大部分生物体,因为组织较厚,光线不易透过内部等关系而达不到观察的要求,为了达到此目的,就必须将生物体的组织切成薄切片或不切片,经过一系列处理,使光线易于透过,即可进行观察。因此,根据标本的制作方法分为切片法和非切片法两种。这些方法,各有优缺点,应该适当的配合使用,才能获得比较理想的结果。 1.切片法 (1切片法的种类 切片法就是利用锐利的刀具,将器官组织或幼小个体分割成许多极薄的薄片,而制成切片标本的一种方法。切片法在切成薄片以前必须设法使组织内渗透某种支持物质。使组织保持一定的硬度,然后利用切片机进行切片。根据所用支持物质的不同切片法又可分为石蜡切片法、火棉胶切片法、冰冻切片法、炭蜡切片法等类型。现分述如下: ⅰ.石蜡切片法

石蜡切片法即用石蜡作为支持剂进行切片的方法。石蜡切片法是一般组织学、病理学等常规制片方法,因此用得最多,它有很多优点:比较省时间,容易操作,可切成极薄的切片(4um 以下,能制作连续切片,组织块可包埋在石蜡中永久保存。缺点是只能用于较小的组织块,较大的组织块不易切好,容易破碎,组织在脱水透明过程中产生收缩并易变脆。制片时间太长。 ⅱ.火棉胶切片法 火棉胶切片法是以火棉胶为支持剂进行切片的方法。此法的优点是包埋过程中不用二甲苯及石蜡,不经高温,可避免组织收缩及变脆,适于精细材料(如脑的切片,也引火棉胶有韧性切片不知有折卷或破裂,适宜于大块组织及多空洞的组织(脑、眼球,硬度较高的组织(骨、肌腱。缺点:手续麻烦、费时间,切片不能切薄,起码在10um以上,不能作连续切片,因此,在生物制片技术上已经不经常采用。 ⅲ.冰冻切片法 冰冻切片法是利用液体二氧化碳或其它药剂(如氯乙烷在变成气体时吸收大量的热使组织迅速结成冰块而后再进行切片的方法。目前国内外用半导体致冷调节器来代替二氧化碳的冰冻,冷冻速度更快更为方便。 冰冻切片法的优点是较前两种方法简便,组织不经脱水、透明、包埋等手续即可切片,因而可节省很多时间,十分钟左右即能制成切片。常用于临床病理手术诊断,银材料不经溶媒处理就可直接进行切片,材料不受试剂的激烈刺激及温度影响,所以组织没有显著的收缩,细胞形态不致有大的改变,也引冰冻切片不需有机溶剂处理,所以能保存脂肪、类脂等成分,所以冰冻切片法常用于组织化学,尤其是神经组织,临床病理学等方面的研究。 新鲜的组织或已经固定的组织,经短时间处理后即可进行切片。用任何固定及处理的材料均适合冰冻切片,但一般的经验用福尔马林固定的材料最适合冰冻切片,而用酒精、甘油保存的材料必须充分水洗后才易于冰冻,否则不易切成完整的切片

石蜡切片的制作

石蜡切片的制作 石蜡切片法即用石蜡作为支持剂进行切片的方法。石蜡切片法是一般组织学、病理学等常规制片方法，它有很多优点，例如，比较省时间，容易操作，可切成极薄的切片，能制作连续切片，组织块可包埋在石蜡中永久保存等。缺点是只能用于较小的组织块，较大的组织块不易切好容易破碎，组织在脱水透明过程中产生收缩并易变脆，制片时间太长。 一、石蜡切片的制作过程 石蜡切片的制作过程主要是：取材→水洗→固定→水洗→脱水→透明→浸蜡→包埋→切片→贴片→染色。 （一）取材及水洗 根据实验要求选取材料来源及部位，取要求部位的小块组织成为组织块，组织块的大小以不超过0.5立方厘米为宜。切去组织块时动作要轻，切忌用力牵引或挟持，以免组织内部发生变化。由动物身上切取的组织必须是新鲜的，材料越新鲜越好，一般不应超过死后24小时，因此一般情况下，将动物处死后立即取需要的材料。 组织块取下后，先用相应的生理盐水漂洗以洗去血液、污渍以及粘液等。如果是管状组织则必须把管腔中污物洗净，可用注射器自一端向管腔中注射生理盐水数次，使其管腔冲洗干净，切忌不可用刀或其他器具刮之。 （二）固定 材料由动物体取下后应当迅速固定，固定的目的是尽快使固定液渗入组织内

液的用量与组织块体积之比一般在20:1，不应使组织块贴于容器壁上。材料固定完毕后，保存于严密紧塞或加盖的容器里，同时在容器外上标签，应记录固定液的名称，材料的种类，动物品种及开始固定的时间。固定的时间长短依据材料大小而定。 固定液有许多种，在固定的过程中应该根据需要选取合适的固定液，一般固定液都以新配为好，配好后应贮存在阴凉处，不宜放在日光下，以免引起化学变化而失去固定作用。有些混合固定液的成份之间会发生氧化还原作用，一定要在使用前才混合，如果混合太早固定时就没有作用了。 （三）水洗 固定液的颜色以便后续的染色。水洗时，一般将其置于水龙头下以自来水流水冲洗，这样可以使组织中的固定液随时溢出，洗得更干净彻底，有些还需要进行特殊的洗涤。 （四）脱水 固定之后的组织要进行脱水。由于组织内的水不能和支持剂混合，所以必须把组织中的水分彻底脱除。脱水有利于组织的透明和浸蜡，有利于组织的永久保存。乙醇既可做固定剂也可做为脱水剂，再用酒精脱水的过程中，首先用50%的酒精进行脱水，然后再依次增加酒精浓度，直到最后用100%的酒精进行脱水。如50%→60%→70%→80%→90%→95%→100%，使用100%的酒精可以脱水两次到三次。脱水的时间应该视组织块的大小而定。脱水必须彻底，否则不易透明，甚至使透明剂内出现白色混浊现象。 （五）透明

21常规石蜡切片制片规范

常规石蜡切片制片规范 1．制片过程中的每一个环节，应确保切片号和蜡块号一致，自始至终不能将号码弄错，一旦发生应重新取材，以防事故发生。 2．制片完成后，应在HE切片上及时粘贴写好本病理科病理号的标签，并认真仔细地核对。 3．认真检查制片质量。切片优良率（甲、乙级片所占的比例）≥90％，优级率（甲级片所占的比例）≥35%。不合格切片应立即重做。4．制片完成后，技术人员应将所制作的切片连同相应的申请单/记录单、取材工作单等一并移交给病理医师，双方经核对无误后，办理移交签字手续。 5．制片工作一般应在取材后2个工作内完成（需要脱钙、脱脂等特殊处理的除外）。 6．制片过程中如发生意外情况，有关技术人员和技术室负责人应及时向病理科主任汇报，并积极设法予以补救。 7．具体HE切片制作技术参见《病理组织学常规制片技术》。 附： 1．取材组织取材的方法是制作切片的一个重要程序，根据教学、科研及外检的具体要求取自人体（外科手术切除标本、活检标本、尸检标本）或动物，并确定取材的部位和方法。取材者需要掌握解剖学、组织学、病理学的基本理论知识，还要掌握实际操作技术，每个组织器官的取材都有一定的部位和方法，不能任意切取组织作为制片材料，不然，无法达到教学、科研和临床诊断的目的，具体要求如下： (1)材料新鲜：取材组织愈新鲜愈好，人体组织一般在离体后，应迅速固定，以保证原有的形态学结构。

(2)组织块的大小：所取组织块较理想的体积为 2.0cm×2.0cm×0.3cm，以使固定液能迅速而均匀地渗入组织内部，但根据制片材料和目的不同，组织块的较理想体积也不同，如制作病理外检、科研切片，其组织块可以薄取0.1～0.2cm即可，这样可以缩短固定脱水透明的时间，若制作教学切片厚取0.3 ～0.5cm，这样可以同一蜡块制作出较多的教学切片。 (3)勿挤压组织块: 切取组织块用的刀剪要锋利，切割时不可来回锉动。夹取组织时切勿过紧，以免因挤压而使组织、细胞变形。 (4)规范取材部位: 要准确地按解剖部位取材，病理标本取材按照各病变部位、性质的不同，根据要求规范化取材。 (5)选好组织块的切面:根据各器官的组织结构，决定其切面的走向。纵切或横切往往是显示组织形态结构的关键，如长管状器官以横切为好。 (6)保持材料的清洁:组织块上如有血液、污物、粘液、食物、粪便等，可用水冲洗干净后再放入固定液中。 (7)保持组织的原有形态:新鲜组织固定后，或多或少会产生收缩现象，有时甚至完全变形。为此可将组织展平，以尽可能维持原形。 2．固定 (1)小块组织固定法：这是最常用的方法，从人体取下的小块组织，须立即置入液态固定剂中进行固定，通常，标本与固定液的比例为1:4～20，但组织块不宜过大过厚，否则固定液不能迅速渗透。故取组织块的大小一般为2.0cm×2.0cm×0.3cm。 (2)注射、灌注固定法：某些组织块由于体积过大或固定液极难渗入内部，或需要对整个脏器或整个动物体进行固定。这时宜采用注射固定或灌注固定法。将固定液注入血管，经血管分支到达整个组织和全身，从而得到充分的固定。 最常用的固定液有10%甲醛固定液和95%乙醇固定液。

病理科全面质量管理与持续改进方案与控制流程(参考模板)

病理科全面质量管理与持续改进方案与控制流程检查标准1：病理部门布局、设施、设备、工作流程和人员结构合理，管理规范，满足临床工作需要。 考核方法与措施措施：①依法执业，设备人员准入，各类证书完备。加强梯队建设，促进人员结构合理化；②进一步完善病理科布局及用房，设施、设备及技术项目符合要求，满足临床诊断、科研及教学工作需要；③健全各项规章制度、工作职责、工作流程，并落实执行情况，对发现的问题进行分析、总结，及时改进，从制度建设上不断补充、完善；④加强科室新业务新技术、法律、法规的学习，有培训计划和记录，建立员工培训档案。 检查标准2：建立并执行病理质量管理制度，定期开展质量评价和改进工作，严格执行标本核对制度。 考核方法与改进措施：①严格执行标本核对制度，两人同时对标本与送检内容是否相符；病史、实验室检查、手术所见等是否填写详实进行核对，病房手术室标本由手术室护理人员送病理科，然后验收同时签字；②严格执行标本、切片核对交接制度，交接环节由诊断医师和病理技师同时核对；③严格执行标本保存及销毁制度，制定工作流程；④加强病理报告发送制度的落实，认真做好签收工作；⑤加强病理结果登记制度的落实，做好各项信息核对和准确编写病理号的工作；⑥严格执行冰冻快速预约和报告制度。临床医师要提前一天预约，详细填写；病理医师与病人或家属沟通，共同签署检查同意书；检查结果由病人家属签收送手术室；⑦科室质控人员定期对各项制度的执行情况进行自查并记录。每季度召开质量安全管理和持续改进工作会议，对存在的问题及时分析、总结、讲评、改进并备案。 检查标准3：病理报告及时、准确、规范，严格审核制度。 考核方法：定期抽查常规制片、冷冻切片制作、术中冰冻病历送检结果出具、一般病理检查报告时间。查看高级诊断医师审核诊断、会诊的记录。 改进措施：①严格工作流程，明确职责任务，司职到位，确保常规及疑难诊断报告质量。对疑难病例做好特殊检查记录、会诊记录等；②严格执行病理上级医师复片制、科内疑难病理读片制和会诊制。加强与上级医院病理专业的技术交流，经常性的开展疑难病理上级医院会诊业务，提高医院病理诊断能力；③加强青年技师“三基”训练，开展岗位练兵，每月安排一次业务培训并考试，不断提高工作人员的诊断技术水平；④科室质控人员检查标本、切片核对交接纪录和报告审核执行情况；每

石蜡切片的制作

石蜡切片的制作 试验药品和仪器 试验药品：酒精、二甲苯、石蜡、番红、固绿、冰醋酸、甲醛、明胶、甘油、石碳酸、中性树胶。 试验仪器：石蜡切片机、组织包埋机、水浴锅、染缸、烘箱。 试验方法 1 叶片组织结构的观察 对叶片组织结构的观察采用石蜡切片法。具体操作步骤如下： 1. 取材。选取生长良好的叶片，用水清洗干净，擦干，沿主脉切取2mm x 5mm 的小段。 2. 固定。将切取的植物材料立即放入FAA 固定液中（材料与固定液比例1:20），用真空泵抽气（使固定液尽快渗入材料中，并排除材料内气泡的干扰），固定时间 48h以上。FAA固定液配方：50%酒精、冰乙酸、甲醛（37%-40%）按18:1:1的比例配置。 3. 冲洗。材料从固定液中取出后，用70%的酒精冲洗3次，每次间隔2h,并在70%酒精中过夜。 4. 脱水。酒精为常用脱水剂，它既能与水相混合，又能与透明剂相混，为 了减少组织材料的急剧收缩，应使用从低浓度到高浓度递增的顺序进行：70%酒精一80%酒精一95%酒精一无水酒精一无水酒精，每级酒精中放2h，无水酒精分2次，一次2h。 5. 透明。纯酒精不能与石蜡相溶，还需用能与酒精和石蜡相溶的媒浸液，替换出组织内的酒精。材料块在这类媒浸液中浸渍，出现透明状态，此液即称透明剂，透明剂浸渍过程称透明。通常组织先经纯酒精和透明剂各半的混合液浸渍 1?2小时，再转入纯透明剂中浸渍。具体为：1/3二甲苯+2/3无水酒精（加番红染色，以便透明后找到材料）一1/2二甲苯+1/2无水酒精一2/3二甲苯+1/3无水酒精一二甲苯一二甲苯，每级二甲苯中放2h，纯二甲苯分2次，每次放1h。材料进入无水的透明剂

石蜡切片制作过程

（一）材料与用具 1．材料： 鱼皮肤、性腺、肠、肝胰脏等。 2．用具： 溶蜡箱、蜡杯、不同熔点的石蜡、酒精灯等。 （二）实验内容与步骤 1．取材及固定 取动物体上的小块组织成为组织块。组织块的大小以不超过 0.5立方厘米为宜。切去组织块时动作要轻，切忌用力牵引或挟持，以免组织内部发生变化。 组织块取下后，先用 0.85％的生理盐水漂洗以洗去血液与污渍，如果是管状组织则必须把管腔中污物洗净，可用注射器自一端向管腔中注射生理盐水数次，使其管腔冲洗干净，切忌不可用刀或其他器具刮之。 由动物身上切取的组织必须是新鲜的，材料越新鲜越好，一般不应超过死后24小时。 如果是管状器官或是其中有分泌之消化液，则死后应迅速采取，以免组织自溶或上皮剥落。 材料由动物体取下后应当迅速固定，固定的目的是尽快使固定液渗入组织内部，将组织固定，以保持其原有的结构。不同的组织应选用适当的固定液。固定液的用量与组织块体积之比一般在20：1。不应使组织块贴于容器壁上，应记录固定液的名称，材料的种类，动物品种及开始固定的时间。 2．冲洗

固定后的组织块在进行脱水前必须用流水洗去固定液。组织块应用纱布包好，注名，放金属水洗网中用流水冲洗，甲醛固定液固定的组织一般水洗24小时，Bouins固定液固定的组织水洗24小时。AFA固定液则不需要水洗。 3．脱水和硬化 经过固定后的组织在水洗后要进行脱水，脱水的目的将组织内的水分用酒精或其他溶剂置换出来，使组织逐渐变硬，便于油类或其他透明及浸入，为熔化的石蜡浸渗到组织中创造条件。 常用的脱水剂是不同浓度的酒精，因为酒精与水有很大的亲和力，酒精浓度可以逐渐升高，置换出组织中的水。脱水必须充分，脱水不充分会影响透明和浸蜡。脱水过程要逐级上升，不能操之过急，跳级脱水会引起组织块强烈的收缩变形。 脱水所用的酒精浓度及过程如下： 30％—→50％—→70％—→80％—→90％—→95％—→100％(Ⅰ)—→100％(Ⅱ)组织块在各级较低浓酒精（小于70％）中脱水的时间应视组织块的大小而定，大小不超过 0.5立方厘米的组织块脱水时间为6～12小时，在高浓度酒精中（大于70％）脱水时间为3小时左右。组织块在无水酒精中需经过两次处理，以保证脱净水分。由于无水酒精有使组织变脆的缺点，故在无水酒精中脱水的时间不宜过长，一般应在15～30分钟左右。 在脱水瓶中酒精的量与组织块之比约为50：1。 简化步骤如下： 70%（一夜）——80%（1小时）——90%（30分）——95%（30分）——100%（15分）——酒精+二甲苯（15分）——二甲苯（3分）——石蜡+二甲苯（30分）——石蜡（80分） 4．透明

石蜡切片的制作

石蜡切片的制作 一：试验目的 掌握石蜡切片的制作 二：器材和试剂 实验动物、手术刀、手术剪、镊子、托盘、标本缸、石蜡切片机、恒温箱、水浴锅、温度计、烧杯、电磁炉、石蜡、包埋纸盒、毛笔、载玻片、盖玻片、中性树胶、染色架、鸡蛋清、甘油、甲醛、各级浓度的酒精(50%、70%、80%、85% 、90%、95%、100%)、二甲苯、苏木精、伊红、盐酸、蒸馏水、30%三氯化铁液。 三：试剂配制 苏木精染液：甲液：苏木精1g、无水酒精100ml;乙液：30%三氯化铁液4ml、蒸馏水 100ml、盐酸1ml。使用时将甲液、乙液等量混合。 伊红染液：伊红1g、95%酒精100ml、冰醋酸1-2滴。 1%盐酸酒精：盐酸1ml、70%酒精99ml。 福尔马林：甲醛10ml、蒸馏水90ml。 蛋白甘油1:1配制 四：实验步骤 1.取材和固定 处死实验动物，迅速取出所需的组织，清洗干净放入福尔马林中固定，12h后换福尔马林。 注意事项： （1）取材动作要迅速，不宜作太久的拖延以免组织细胞的成分、结构等发生变化。 （2）切片材料应根据需要观察的部位进行选择，尽可能不要损伤所需要的部分。 （3）材料固定完毕后，保存于严密紧塞或加盖的标本缸里，同时在容器外上标签。标签上注明固定液、材料来源、日期等。 ⑷如需清洗的材料可用生理盐水轻轻擦洗。 2.清洗 材料固定后，用清水清洗4小时 2.脱水： 50%酒精12h,在依次经70%、85%、95%、100%各级酒精溶液脱水1-2h。 注意事项： (1)脱水必须在有盖的玻璃品中进行，防止吸收空气中的水分和酒精挥发。 (2)在低浓度酒精中，每级停留不宜太长，否则易使组织变软，助长材料的解体。

病理科常规切片(HE切片)质量PDCA管理循环案例示范教学资料

病理科常规切片(H E 切片)质量P D C A管理循环案例示范

病理科常规切片（HE切片）质量PDCA管理循环案例示 范 病理切片质量的好坏关系到病理诊断质量和水平的高低，正确的病理诊断往往取决于准确的显微镜下观察，因此病理切片质量的好坏将直接影响诊断结果的准确性，甚至会带来错误的结果。一张好的病理切片与标本的固定、取材、脱水、包埋、切片、染色等环节有密切的关系。过去，我科一直严抓病理切片质量，每月都随机抽查30例常规切片进行质量评价，总体来说切片质量较高，基本达到诊断的要求。但是每月的切片质量检查或多或少总发现存在一些缺陷，如切片刀痕、裂隙、气泡、胶液外溢等。 目的：通过检查常规切片质量，发现存在影响切片质量的问题，查找原因，提高切片质量。 数据收集：参照《临床技术操作规范病理学分册》中的常规石蜡包埋-HE染色切片质量的基本标准（见表1），对今年1-7月常规病理切片进行质量分级评定（每月随机抽查30例常规切片，见表2），总的优级率87.1%，优良率97.6%，总体达标。 表1 常规石蜡包埋-HE染色切片质量的基本标准 优质标准满分 （分） 质量缺陷减分 组织切面完整，内镜咬检、穿刺标本切面数10 组织稍不完整：减1～3分；不完 整：减4～10分；未达到规定面数： 减5分 仅供学习与交流，如有侵权请联系网站删除谢谢2

切片薄(3～5μm)，厚薄均匀10 切片厚(细胞重叠)，影响诊断：减 6～10分；厚薄不均匀：减3～5分 切片无刀痕、裂隙、颤痕10 有刀痕、裂隙、颤痕，尚不影响诊 断：减2分；有刀痕、裂隙、颤痕， 影响诊断：减5分 切片平坦，无皱褶、折叠10 有皱褶或折叠，尚不影响诊断：各减 2分；有皱褶折或折叠，影响诊断： 各减5分 切片无污染10 有污染：减10分 无气泡（切片与载玻片 间/盖片与切片、载玻片 间），盖片周围无胶液 外溢 10 有气泡：减3分；胶液外溢：减3分 透明度好10 透明度差：减1～3分；组织结构模 糊：减5～7分 细胞核与细胞浆染色对比清晰10 细胞核着色灰淡或过蓝：减5分红(细 胞浆)与蓝(细胞核)对比不清晰：减5 分 切片无松散，裱贴位置适当10 切片松散：减5分；切片裱贴位置不 当：减5分 切片整洁，标签端正粘牢，编号清晰10 切片不整洁：减3分；标签粘贴不 牢：减3分；编号不清晰：减4分 仅供学习与交流，如有侵权请联系网站删除谢谢3

石蜡切片步骤

石蜡切片基本步骤 （一）取材和固定 根据实验目的选择材料。将整个虫体或虫体的内部器官（如肠道、马氏管、唾液腺等）取出后，立即投入固定液。 取材大小：0.5cm×0.5 cm×0.2或者1.0 cm×1.0 cm×0.2，厚度不宜超过3mm。 固定液：2.5%的戊二醛固定液，Bouin氏液，10%甲醛等。 固定时间：4oC固定24小时。 注意事项： 取材：1．勿使组织块受挤压切取组织块所用刀、剪要锋利，切割时不可来回切割。夹取组织时，镊子要轻，切勿挤压，以免损伤组织。取材时，组织块可稍大一点，以便在固定后，将组织块的不平整部分修去。 2.选好组织块的切面应熟悉器官组织的组成，并根据观察目的来确定纵切或横切。 3．保持材料的清洁组织块上如有血液、污物、粘液、食物等，先用生理盐水冲洗干净，再入固定液。 4．切除（清除）不需要的部分特别是组织周围的脂肪等，应尽可能清除掉，以免影响以后的程序和观察。 固定：1．材料新鲜取出组织后须立即固定。否则时间相隔过久，体积就要收缩变形或发生自溶现象。 2．抽气生物组织常有气体的存在，使材料不能沉入固定液中，抽气使得固定液有效渗入。真空泵抽气或者用空针管抽气。昆虫整体固定，固定前用解剖针刺数个小孔，以利用固定液渗透。 3．固定剂用量一般为组织体积的10~20倍。勿使组织贴于瓶底或瓶壁，以免影响固定剂的渗入。 4．避免阳光尽可能避免接触阳光以免失去固定作用。 5．加速固定轻轻摇动盛器使组织移动有利于固定液渗入，对长期固定的标本可经常更换固定液。

（二）洗涤 2.5%戊二醛固定液固定的组织：0.2M, pH7.2磷酸缓冲液漂洗三次，每次10min Bouin氏固定液固定的组织：直接入70%酒精更换数次即可脱水，注意苦味酸。 甲醛固定的组织：直接投入50%或70%酒精脱水，不经水洗。但如果在甲醛中时间过长，则仍应当用流水冲洗。 陈旧性标本和混合性固定液应及时洗涤，有利于脱水、切片和染色。否则会影响以后的染色效果。 （三）脱水与透明 漂洗后即入酒精脱水，经50%，70%，80%，90%，95%，100%酒精脱水，其中95%，100%酒精需重复两次。每级10min。 脱水后，入1/3二甲苯+2/3乙醇混合液→1/2二甲苯+1/2乙醇混合液→2/3二甲苯+1/3乙醇混合液→二甲苯→二甲苯，每次约10min，至组织透明为止。 注意： 1. 一般经水洗的材料脱水可从35%开始，柔弱的材料从15%开始，若用酒精洗涤，则可直接移入50%或70%酒精中继续脱水。 2. 每级脱水时间，依照材料的大小、性质以及留在固定液中的时间长短和固定液的溶解性而定。动物组织每级10~30min。 3. 脱水应彻底，否则与二甲苯混合后混浊，必须倒回重脱水且效果不好；如需过夜，则停留在70%酒精中。 （四）透蜡 透明后，先把组织材料块放在熔化的石蜡和二甲苯的等量混合液浸渍3小时，再先后移入2个熔化的石蜡液中浸渍6小时左右，直至用石蜡完全置换了组织块中的二甲苯，浸蜡应在高于石蜡熔点3℃左右（60°C）的温箱中进行，以利石蜡浸入组织内。便于今后的包理与切片。

小鼠部分组织的石蜡切片制作

小鼠部分组织的石蜡切片制作 一、实验原理：利用脱水剂除去组织中的水分，再用透明剂二甲苯可以去除脱水剂酒精，而二甲苯可以溶解石蜡并将其导入到已脱水的组织细胞中，然后用熔化的石蜡对组织进行包 埋，冷却后即可将柔软的组织包埋在石蜡中，使其具有一定硬度，且不改变其大小和形状。用旋转切片机可将其切为极薄的薄片，经染色、脱水、装片后在显微镜下可以清晰地观察其 组织结构。 二、材料与用具 1 ?材料：小鼠肝脏、脾脏等。 2 ?用具：溶蜡箱、蜡杯、不同熔点的石蜡、酒精灯等。 三、实验内容与步骤 1 .取材及固定 取小鼠，采用拉颈处死或麻醉处死法将其杀死，取其脾脏和肝脏，切为边长约为0.5cm的组 织块。用先用0.85%的生理盐水漂洗以洗去血液与污渍，如果是管状组织则必须把管腔中污 物洗净，可用注射器自一端向管腔中注射生理盐水数次，使其管腔冲洗干净，切忌不可用刀 或其他器具刮之。 由动物身上切取的组织必须是新鲜的，材料越新鲜越好，一般不应超过死后24 hr。如果是 管状器官或是其中有分泌之消化液，则死后应迅速采取，以免组织自溶或上皮剥落。 取下的材料马上进行固定，采用FAA固定液，固定液的用量与组织块体积之比一般在20:1 , 固定时间2 hr以上，超过24hr时可继续浸泡或转入70%酒精中保存。不应使组织块贴于容器壁上，应记录固定液的名称，材料的种类，动物品种及开始固定的时间。 2 .冲洗 固定后的组织块在进行脱水前用70%酒精洗去固定液。 3 .脱水和硬化 经过固定后的组织在水洗后要进行脱水，脱水的目的将组织内的水分用酒精或其他溶剂置换 出来，使组织逐渐变硬，便于油类或其他透明及浸入，为熔化的石蜡浸渗到组织中创造条件。 常用的脱水剂是不同浓度的酒精，因为酒精与水有很大的亲和力，酒精浓度可以逐渐升高，置换出组织中的水。脱水必须充分，脱水不充分会影响透明和浸蜡。脱水过程要逐级上升，不能操之过急，跳级脱水会引起组织块强烈的收缩变形。 脱水所用的酒精浓度及过程如下： 30%> 5C%> 7%> 80%> 9%> 95%> 10（% （I ）> 10（% （n ） 组织块在各级较低浓酒精（小于70% ）中脱水的时间应视组织块的大小而定，大小不超过 0.5立方厘米的组织块脱水时间为6?12 hr，在高浓度酒精中（大于70%）脱水时间为3 hr 左右。组织块在无水酒精中需经过两次处理，以保证脱净水分。由于无水酒精有使组织变脆 的缺点，故在无水酒精中脱水的时间不宜过长，一般应在15?30 min左右。在脱水瓶中酒 精的量与组织块之比约为50:1。 简化步骤如下： 70% （一夜）——80% （1 hr）——90% （30 分）——95% （30 分）——100% （15 分）——酒精+二甲苯（15分）——二甲苯（3分）——石蜡+二甲苯（30分）——石蜡（80分） 4 .透明 透明是石蜡切片法切片前必经的一步。其目的在于用矿物油或植物油等透明剂置换出无水酒 精，以便于熔化的石蜡浸渗到组织间隙中，故透明剂必须是能分别与石蜡和酒精相溶的。经

病理科质量持续改进体系

病理科质量持续改进体系 1、送检标本的签收质量控制管理途径 （1）首先由接收标本人员逐一对申请单和标本进行核查，同时对住院病人标本及申请单履行查验签收制度。 （2）取材时取材人员要对申请单和标本再次进行核对，发现问题及时反馈给临床医师核对纠正。 （3）切片人员完成切片制作后，再次核对申请单项目和切片。 （4）阅片人员阅片时仍然要认真核对申请单项目和切片的符合情况。 （5）发放报告单人员最后把关，严防差错。 2、组织取材工作质量控制管理途径 （1）取材人员必须为有资质的医师。有两人参加，严格按卫生部及省卫生厅下发的取材操作规范工作。 （2）组织处理及切片制作人员要监督取材大小厚薄是否规范，及时向取材人员反馈情况以便改进。 （3）所有阅片人员阅片过程中都要检查取材质量问题，及时提出问题，引起注意，必要时重新取材，确实保证取材质量。 3、组织切片质量控制管理途径 （1）活检组织脱水、固定，切片的染色等程序必须严格按技术操作规范进行。 （2）组织切片制备完成后，制作人员应在显微镜下检查切片质量，如影响医师阅片应采取措施或重做。 （3）各级阅片医师阅片过程中，应随时注意切片质量，及时向制片人提出意见，并帮助分析原因，必要时要求重新制片。 （4）每月月底质控小组随机抽查当月10天的切片，按照技术操作规范规定的《常规石蜡包埋—HE染色切片质量的基本标准》评定切片质量，同时找出问题、分析原因，限期纠正。 4、病理诊断报告质量控制管理途径 （1）病理诊断的签发要严格实行复审制度， （2）疑难及重点病例要实行科内会诊讨论制度， （3）疑难病例必要时要辅以其它的病理技术检查措施。如：深切片，再观察大体标本和补充取材等。 （4）要经常进行临床—病理会诊与临床医师及患者沟通，紧密联系临床情况以帮助诊断。 （5）必要时建议外院会诊，及时回访会诊结果并做必要的科内讨论。 （6）对误诊病例进行重新阅片与讨论，吸取经验及教训。 以上各项工作每月下旬由科质量控制小组按照各有关规章制度严格检查，抽查，发现问题，找出原因及责任人，责其限期改进。并记入质量管理记录本。