ACMG_组成性细胞基因组微阵列分析ACMG标准和指南

组成性细胞基因组微阵列分析ACMG 标准和指南，

包括产前与产后应用：2013年版

Sarah T. South, PhD 1,2, Charles Lee, PhD 3, Allen N. Lamb, PhD 1,2, Anne W. Higgins, PhD 4Hutton M.

Kearney, PhD 5;

总则

细胞基因组微阵列的目的

组成性细胞基因组异常包括非整倍体（额外和缺失染色体）和结构畸变（染色体扩增和缺失，易位，倒位，插入和标记染色体）。本指南论述的细胞基因组微阵列（CNA ）平台适用于检测不平衡染色体畸变所伴随的D NA 拷贝数目扩增或缺失。杂合性缺失（AOH ）的区域也可由采用单核苷酸多态性（SNP ）检测探针的平台检出。AOH 也被称为杂合性缺失、纯合片段/区域、或纯合性长期连续拉伸。

某些AOH 可表示单亲源二体，或同源基因组区域。文献记述了此技术检测智障、自闭症和/或先天畸形患者染色体扩增和缺失的详情。研究人员建议将CMA 作为该适应征的一线检测。1,2

CMA 的优点

CMA 检测基因组DNA 扩增和缺失的优点有：

1. 几乎可用任何组织分析DNA ，包括保存或不能培养的组织。

2. 可用标准G 带染色体分析检出细胞遗传学隐秘的畸形。

3. 可定制平台，使探针仅关注感兴趣区域。

4. 更好地定义和描述标准染色体研究检出的畸形。

5. 以客观数据取代对谱带强度的主观观察。

6. 可用带SNP 的平台检测拷贝数平衡的AOH 。

7.

为基因组浏览器和数据库准备好数据接口。

1

美国犹他州盐湖城市ARUP 实验室；2美国犹他州盐湖城市犹他州大学病理学系；3美国马萨诸塞州波士顿市哈佛医学院布莱根妇女医院；4美国马萨诸塞州伍斯特市UMass 纪念医学中心与马萨诸塞州医科大学病理学系；5 美国北卡罗来纳州阿什维尔市健康计划，Fullerton 遗传学中心。通信地址：Sa rah T. South (Sarah.South@https://www.wendangku.net/doc/fa1748574.html,)

2013年7月17日交稿；2013年7月17日批准；2013年9月25日在线发表。doi ：10.1038/gim.2013.129

声明：此类美国医学遗传学与基因组学学会标准与指南主要用作临床实验室遗传研究人员教育资料，用于促进临床实验室基因研究工作质量。本标准与指南不具有强制性，与医疗结果是否成功无关。标准与指南既未囊括，也不排除其他能适当得出相同结果的方法。临床实验室遗传研究人员应根据患者或标本实际情况予以专业判断，确定程序或试验是否适当。我们鼓励临床实验室遗传研究人员，在患者病历中记录选用某种程序和试验的理由，无论其是否符合标准与指南。此外，我们还建议该人员注意标准出版日期，以考虑此后新出现的医学和科学信息。同时我们还应注意试验或其他程序是否受到知识产权的限制。

包括阵列比较基因组杂交技术和单核苷酸多态性检测阵列在内的微阵列法，已成为评估伴有智力障碍、自闭症和多发性先天畸形的基因组失衡的一线手段。这种方法已经被人们认可。本技术也适用于产前标本。为帮助临床实验室确认组成性研究的微阵列法，美国医学遗传学与基因组学学会编写了这份修订版专业标准与指南。

Genet Med 与2013年9月26日提前在线发表。

关键词：组成性；指南；微阵列；产后；产前；标准

CMA的局限性

CMA局限性包括：

1. 大多数平台无法检出不影响DNA序列相对拷贝数目

的情况，例如：分子平衡的染色体重排。

不过，CMA可显示出明显“平衡”染色体重排中拷贝

数目改变，例如染色体断裂点上或附近的染色体扩增或缺失。

2. CMA不能检出不平衡重排和非整倍体的低比率嵌合

型染色体。微阵列检出嵌合型染色体的灵敏度受到平台、标本类型、拷贝数目状态、DNA质量、数据质量和不

平衡程度影响。

3. 无法阐释遗传不平衡的染色体机理。

4. 无法或很难测出四倍体或其他多倍体水平。

5. 无法检出对此平台不典型的拷贝数变异（CNV）。

6. 目前CMA技术不适用于低于检出水平的基因拷贝和

缺失（由探针覆盖和性能决定）、基因点突变、基因表达、导致患者表型的甲基化异常。

7. 尚无可检出某种综合征全部相关突变的微阵列平台。因此我们必须知道，某个基因位点未检出拷贝数改变，并不能排除此位点异常的诊断。

微阵列平台设计与生产

目前，临床试验可用的CMA平台种类很多。该平台的

探针使用基于细菌人工染色体的DNA或基于寡核苷酸

的DNA。基于寡核苷酸的DNA仅适用于通过对比对照

标本，检测某个序列拷贝数改变，或者配合探针（SNP 检测探针）检测特定表型（或等位基因）。可通过区别标记患者和对照DNA的直接竞争杂交技术，或标记患

者DAN与计算机模拟参照组对比杂交技术，测定探针

的拷贝数目。将拷贝数目的数据绘制成探针强度log2比值图。预期标称值相当于“0”（一般为基因组序列拷

贝两次），强度增加（log2>0）表示相对DNA扩增，

反之（log2<0）表示相对DNA缺失。倘若SNP检测探

针能充分覆盖拷贝数变化，使用该探针平台测出拷贝数改变也与等位基因信息相关。例如，拷贝一次片断中的单独SNP等位基因只有一个。

微阵列平台设计中可用下列探针（i）针对特定基因组

片断，检出先天性畸形或神经认知障碍中已知存在的基因组不平衡，（ii）针对全基因组，并带有特定分布和

跨度，或（iii）针对特定片断和全基因组，而且探针分

布和跨度广阔，适用于特定基因组片断和全基因组。位点间探针距离，以及可靠检出CNV所需连续探针数决定了阵列的功能解析度。由于平台中探针密度不同，而且DNA片断中单独拷贝数扩增（2倍拷贝为3倍）比拷贝

数缺失（2倍拷贝为1倍）各异，因此各基因组片断功

能解析度也不一样。美国医学遗传学与基因组学学会曾颁发CMA平台设计

与生产专门建议。3文中建议，全基因组平台的设计至

少应能检测400kb或以上的基因扩增和缺失。除非基因

组结构特征需要用到最低解析度，例如阶段性多拷贝片断（segmental duplicationrich region）。建议还希望改进探针与先天性畸形或神经认知障碍的相关性。

检测实验室应从外面看到探头的描述/内容物和注释

（参见“注释/数据库”一章）。制造商应记录并提供

关于微阵列设计、综合验证、验证与评估阵列性能与再现性质量控制（QC）步骤的详细情况。

实验室确认前熟悉新技术

无论阵列目前法规批准状态如何，实验室如无使用微阵列的经验或经验不足，应在开始确认程序前熟悉新技术的各方面。熟悉过程须从了解该技术的过程、特征和能力着手。实验室应通过检测试验标本，获得器具、平台设计、软件、试剂、方法、技术限制、工作流程、DN

A质量参数等方面的经验。同样，实验室还应熟悉所处理各种标本的性质，因为不同类型标本所考虑微阵列的数据质量和临床适用性也不同。实验室必须熟悉各种临床适应症相关的基因不平衡与重排可能。

在熟悉过程中运用已经过其他方法检验，并标为“正常”和“异常”的标本非常有价值。它可以区分出真正生物学变异，还是探针/平台性能问题，从而获得识别CNV

的经验。我们建议各实验室运用已经过其他平台检验并获得明确结果的数据、其他实验室数据和/或在线数据

库中数据，来获取和增加自己的经验。数据共享应包括阵列结果谱和数据质量。

实验室必须可识别出无功能（或无反应）探针，技术导致假象，以及影响数据质量的其他问题。实验室应熟悉良性和/或常见CNV，以及有助于识别和解释CNA的资源。3–8

验证和确认

美国食品与药品管理局认可/批准平台的验证

截至本指南发表时，市场上还没有经美国食品与药品管理局（FDA）认可，或FDA批准用于此领域的微阵列。

然而，我们建议实验室应与快速发展的新技术并驾齐驱。如实验室声明利用FDA认可或FDA批准的微阵列开展FD A批准/认可的检验，则它必须遵照批准的研究方案和预定用途（可见使用说明书）。实验室必须验证，所开展检验的准确性、精确度和结果可报告范围与制造商制定的性能范围相符。

验证过程中应建立合格/不合格标准。如不符合预设合

格标准，而且重复检验或评估故障原因仍无法解决问题，

实验室应考虑阵列是否适用于临床检验。

准确性检验用来评估平台和软件检出已知畸形的性能。通过检测一系列已确定为异常的病例，评估平台的准确性（可能要通过与认可实验室共享标本完成）。建议至少检验15例。实验室应尽量使用阵列适用的，且具有代表性的异常标本。评估中应包括异常片断结果的对比，以及平台分析其余基因组结果的对比。实验室必须记录下预期结果与意外结果的一致性。

因为本技术可检出以前未识别的真正改变，因此我们应进一步研究处于可报告范围内（在“实验室新平台的确认”一节定义）的意料外结果，以判断该结果是否代表了生物变异。这可能要用其他技术或微阵列平台校正意外结果。

精确度检验应测定多次检测后，相同结果的再现性。确定平台精确度时，至少在单独试验中多次检测两份异常标本。

记录重复检验的一致性，并考虑所有变化情况（断裂点的多样性，判别，变异可能原因，例如：阶段性多拷贝片断等），因为它们关系到可报告范围，功能解析度，断裂点周围的可能变异。由于阶段性拷贝和个别探针性能，可导致断裂点周围出现一些变异。精确度检测可评估断裂点，以及对临床解释的潜在影响。

不会改变临床解释的断裂点变异不太受到关注。最好使用多异常标本，因为检出结果很多，适合于精确度研究。如未按照FDA 批准（未遵照说明书）使用本产品，适合于标签外使用，因此必须按照非FDA 批准平台确认微阵列。

非FDA 批准平台的确认预定用于临床检测的所有平台必须经过FDA 批准/认可和验证，或者经过实验室确认。确认是指实验室通过测定平台的预定性能特征，评估其检验有效性的过程。该过程必须证明平台性能与预期相符，符合预定结果。开展实验室自行开发检测或改良FDA 试验时需进行确认。确认方法和范围必须记录在案。确认过程中应建立合格/不合格标准。如不符合预设合格标准，而且重复检验或评估故障原因仍无法解决问题，实验室应考虑阵列是否适用于临床检验。确认所需的工作范围一定程度上取决于，实验室是否正在确认新微阵列平台，正在确认以往平台的设计改良，或者在以往已确认平台中增加标本类型或预定用途。新平台是指实验室引入的新方法或阵列。一家微阵列经销商可生产多种类似平台，但必须接受单独确认。设计改良包括由阵列制造商，或通过电脑探针过滤器，对探

针覆盖的微小改动。实验室新微阵列平台确认

实验室必须通过确认程序，确定微阵列平台和相关软件的性能特征。必须确定的性能特征有结果准确性和精确度、分析敏感性与特异性、可报告范围。实验室应记录每个临床检验平台的确认情况，无论其以前是否有其他平台的使用经验。

结果可报告范围包括识别CNV 标准和报告CNV 的标准。实验室应在考虑制造商建议的情况下，确定该平台判断拷贝数判别结果表示真正CNV 所需的特定参数（连续探针数量，log2比例，SNP 等位基因比例，QC 量度等）。功能解析度是识别真正CNV 所需探针密度和探针数量的组合。因此，可报告范围应该大于等于平台的功能解析度。评估确认标本组前，应先确定可报告范围，应使用熟悉平台过程得到的数据。可报告范围中或许不包括典型的良性CNV 。

如实验室可报告范围改变，应使用新可报告范围重新评估确认数据。

但如果以前识别的确认标本中，无用来检验可报告范围的异常，应采用其他标本进行评估。

准确性评估至少需要检验30份以前已确定的异常对照标本。实验室应尽量使用阵列适用的，且具有代表性的异常对照标本。其中应包括常染色体和性染色体异常，因为不同性别中性染色体的拷贝和缺失行为各异。此外，对评估预期异常的人员设盲，更有利于确认设置，评估数据和可报告范围。确认所用标本应具有各种典型变异，

包括基因扩增和缺失，基因组不同片断，以及一些能挑

战可报告DNA 扩增和缺失技术极限的畸变。

与其他微阵列平台使用经验丰富的实验室交换标本，不失为获得确认标本的好方法。我们建议实验室间交换确认的数据集（例如，阵列文件），以提高数据分析经验。该评估首先应该对预期畸变设盲（按照临床流程），完全回顾数据，确认符合可报告范围的畸变，然后对预期畸变片断结果进行非设盲对比，以及用平台分析其余基因组。评估预期正常片断对检验探针在整个基因组中的性能也很重要。实验室必须记录下预期结果与意外结果的一致性。评估还应包含断裂点评估，包括基因组成和基因组结构。实验室还须在基因缺失或扩增片断内识别无反应的探针（可能是探针性能不佳，或基因组本身结构所致）。因为本技术可检出以前未识别的真正改变，因此我们应进一步研究处于实验室可报告范围内的意料外CNV ，以判断该结果是否代表了生物变异。这可能要用其他技术或微阵列平台校正意外结果。由于评估包括预期和非预期结果，因此仔细选择30份标本非常重要。

应考虑在30份标本中评估未预期结果的能力。

敏感性和特异性由符合报告标准的确认数据集中真阳性、真阴性、假阳性和假阴性结果决定。

但对于全基因组分析，全部真阳性和真阴性情况不明。因此，不能按照传统方法计算全基因组阵列平台的特异性和敏感性。

评估敏感性时需对比预期和观察到畸变，然后推广至剩余基因组。与其用传统方法计算特异性，还不如评估分析的预期值。测定阳性预示值时，需要确定实验室制定可报告范围内基因拷贝数目判别，以及计算出真实数目所占比例。如某个探针多次出现假阳性，则为提高平台特异性，接下来分析中应取下此类探针。假阳性探针的识别可能是由于技术或生物变异。考虑到并非所有基因组片断均能用该技术准确地评估位点。如实验室遮蔽探针含量，应记录该改变。如此改变足以影响平台性能，则需要用更换后探针评估确认数据。

精确度检验是测定重复检测结果的相似程度。确定平台精确度时，至少在单独试验中多次检测两份异常标本。记录重复检验的一致性，并考虑所有变化情况（断裂点的多样性，判别，变异可能原因，例如：阶段性多拷贝片断等），因为它们关系到可报告范围，功能解析度，断裂点周围的可能变异。

由于基因组结构和个别探针性能，可导致断裂点周围出现一些变异。

精确度检测可评估断裂点，以及对临床解释的潜在影响。不会改变临床解释的断裂点变异不太受到关注。

最好使用多异常标本，因为检出结果很多，适合于精确度研究。

以前认可平台的新型号确认新型号的定义仅限于以下几种状况：为提高平台性能取下、添加和/或更换最少数量的探针，和/或覆盖率提高，可覆盖有限数量的基因组片断。这种情况不应超过总探针覆盖的10%，取下探头不超过5%。我们应该意识到，对现有平台进行此类改造非常少见，大多数平台改造需要完全确认。

对于熟练运用微阵列技术的实验室，至少用5份异常标本确认同一厂家生产的新型号平台。利用新型号平台监测旧型号确定的异常标本，然后进行对比。确保新型号平台性能符合实验室标准，以及评估高解析度平台中添加探针性能。应评估升级型平台的新含量。可能时，使用新含量片断中已知畸变的标本测定其性能。评估的确认数据集中至少应包括5份标本，确定平台和软件检出预期畸变的能力。如检出的其他畸变符合实验

室报告范围，应确认该结构是否真实反映生物学变异。已确认平台检验其他类型标本的确认

我们希望，最初确认过程中能包含预定用途中常见的标本类型。例如预定用途为产后评估时，标本类型应为周围血液中提取的DNA 。由于来自于不同组织的DNA 质量不同，增加了微阵列分析的干扰因素。因此，使用来自于其他标本类型的DNA 时，需要评估干扰可能。9而如果是新类型标本，必须评估它对数据质量的影响。确认程序中须包括DNA 提取程序。如程序或分析变化不大，则确认新类型标本时可包含数据质量的等效性。如阵列或分析程序改变（例如，参考集改变），必须重新确认。此外，如新类型标本需不同的可报告范围，也需要重新确认。

SNP 检测平台鉴别等位基因能力的确认

检出AOH 本身虽不具诊断意义，但它可以提示我们开展其他检查，例如：基于序列的突变分析或单亲二倍体检测。但由于实验室会报告AOH ，因此确认过程中必须评估SNP 检测探针性能。

报告此类结果时需明确注明结果不具诊断意义。

如探针密度足够多，拷贝数目状态与SNP 等位基因状态应具有关联。

标本出含有CNV 外，还应含预期拷贝中性AOH 。标本至少5份。我们建议利用已知含单亲源二体或同源基因组片断的标本进行实验室间对比。此对比应阐明报告中包含数据类型，例如：AOH 近似片断和同源基因组近似百分比。根据SNP 探针密度，利用基于SNP 的阵列评

估AOH 检出和准确大小。如确认方法无法阐明AOH 判

别中断裂点准确性，报告中应标明该不确定性。AOH

片断大小估计不准，可导致对单亲源二倍体、常染色体杂合性缺失和/或同合性映射（autozygosity mapping ）的盲目随访检查。嵌合型染色体检测微阵列分析不能检出不平衡重排和非整倍体的低比率嵌合型染色体。而且，大小、基因组片断、拷贝数目状态、DNA 质量和数据质量都会影响嵌合型染色体检测水平。因此，不能总是检出基因组中特定水平的嵌合型染色体。我们应认识到它的局限性。

在未利用各种CNV 大小和基因组片断进行广泛确认，测定特定水平嵌合型染色体的情况下，我们不建议用该技术排除嵌合型染色体。不过，识别嵌合型染色体的经验有助于提高检出机会。

测定可检出水平嵌合型染色体的方法有，稀释检查和分

析其他定量方法已确定的标本。新鲜（未培养）标本的荧光原位杂交分析，是确定微阵列法可检出嵌合型染色体水平的可靠方法。

以往对分裂中期细胞的细胞遗传学分析虽能提供嵌合型染色体信息，但不能准确反映它的水平。实验室主管有权决定实验室选用的方法。我们建议选用多种方法。对于细胞悬浊液，对已知CNV 标本开展稀释研究，有助于测定嵌合型染色体可检出水平。

此方法还能有效确定阈值。不过，它属于人工方法，具有一定局限性。SNP 检测阵列不能采用稀释法研究，因为这会引入其他表型，使分析更加复杂。

嵌合型染色体测定可报告log2比值和SNP 等位基因模式得出的信息。

需要注意，微阵列分析得出的是标本中所有细胞拷贝数的相对水平，而不是逐个测定细胞拷贝数（例如：三倍体占细胞60%，四倍体占30%）。

确认产前标本时需考虑的特殊问题产后阵列分析的经验，以及对常见和罕见CNV 的经验，对于处理产前标本和解释分析结果非常重要。为进行确认，应区分出培养羊水细胞和绒毛膜绒毛取样细胞（C VS ），以及未培养（直接）羊水细胞和绒毛。所需确认取决于，该平台以前是否接受过用于产后检查的确认，或是否为实验室新平台，而且是否使用培养和未培养细胞。使用培养羊水细胞和CVS 细胞时，如实验室用新阵列平台进行产前阵列分析，应执行“实验室新平台的确认”一节讲述的情况与程序。至少应处理30份以前确定的病例。由于采集异常产前标本较为困难，因此所采集30份标本中可能含有以前认定为正常的病例。因此，应

该具备各种组织类型异常结果的经验，而且还会出现数据交换的情况，以确保内部和电脑模拟评估大量各种异常。对于以前曾确认可用于产后检验的平台，需要了解产前标本可能存在的情况。这些标本可体现出数据质量。确认程序中须包括DNA 提取程序。如实验室打算分析培养羊水细胞和CVS ，则确认中需体现出这两种类型标本。产前标本（包括妊娠产物）。来自于羊水细胞、绒毛和胎儿组织，且产生足够数量和质量DNA 的健康培养，本质上与确认相同。但实验室必须注意到可影响DNA 生成的因素，包括培养时间、生长率、融合性和运输条件等。

由于未培养细胞可产生不同数量和质量DNA ，故此需要进一步确认，以熟悉了解它与培养细胞的可能差异。

未培养羊水细胞需考虑的参数有DNA

提取方法，容量，孕龄。这些参数都可能影响DNA 数量与质量。

例如，未培养羊水细胞产生DNA 少于培养细胞；但前者DNA 的质量较高。

绒毛是比较复杂的组织，它具有不同细胞类型/分层（合胞体滋养层、细胞滋养层和间质核心）。因此，可从不同类型细胞中提取DNA ，或者实验室决定从单独细胞层提取DNA 。11

产前标本的特殊质量保证要求。应对所有阵列分析的产前标本进行备份培养，其目的为（i ）防止阵列检查失败，（ii ）利用独立培养评估嵌合型染色体可能，（iii ）需要分裂中期染色体或荧光原位杂交分析来研究CNV 。除已排除污染外，所有产前标本均需接受母体细胞污染（MCC ）分析。导致MCC 的原因有，标本直接来自于血性混合物中羊水细胞、未彻底清洗母体蜕膜的CVS 标本（妊娠产物最常见问题），以及细胞经过多次传代培养，导致母体细胞增多。

如未发现MCC ，可导致拷贝数变化漏诊或误解。实验

室应知道，MCC 可由阵列软件（例如，基于SNP 的平台）

测出。如为男胎，可通过性染色体图改变测出（模拟嵌

合型染色体）。实验室还应了解MCC 影响CNV 检出的程度，包括不同类型（扩增和缺失）和不同大小（小规模比大规模扩增和缺失）。产前标本中可以检出嵌合型染色体，它表示培养的人为影响（假嵌合型染色体）、真实胎儿嵌合型染色体。如为CVS ，则表示限定胎盘局限性嵌合型染色体。如要确定胎儿表型，需要仔细研究。传统染色体分析已开发出限定胎盘局限性嵌合型染色体和假嵌合型染色体的算法。我们需针对微阵列分析进一步开发这些算法，而且它取决于分析未培养或培养细胞，以及独立培养是否可确认嵌合型染色体。建立DNA 参照集根据所用平台不同，DNA 参照集可来自于单人或多人。他们可以性别匹配或不匹配，可用于电脑模拟，或直接竞争性杂交。实验室应了解每种情况下有优劣。实验室还应考虑DNA 参照集来源和构成对数据质量的影响。例如，从参照集采集数据的条件接近试验条件时，数据质量可能会提高。DNA 参照集改变后，需通过与旧DN A 参照集对比，验证新参照集结果质量和准确性。特别是参照改变导致结果变化时，尤其是在多形态区。对于电脑模拟控制使用的阵列，应记录器版本情况。软件的考虑实验室应了解软件的局限性，以及通过手工和目视检查

数据发现畸变和嵌合型染色体的必要性。因为软件无法完全标出异常，而目视检查数据则可发现。

为验证检测方法能检出特定嵌合型染色体水平的已知畸变，必须用各类畸变样本检验该系统。在熟悉了解阶段，应不断探索与优化检出畸变的设置。在随后的确认过程中，运用这些已确定参数。

不同类型标本的算法设置有所差异。

如更改确认时所用软件设置，则必须用新设置重新分析至少一个亚组确认数据，确定微阵列平台性能特征是否发生变化。

此类更变可包括但不限于，新注释库、电脑模拟参照集更变，或修改畸变检出算法。

实验室应了解，大多数正常算法均假定主要为二倍体状态，从而掩盖了多倍体的检出。一些情况下，等位基因图谱有助于三倍体检出，但无法确定四倍体。产后组成性群体中这两种情况可能罕见，但可以出现在嵌合染色体和产前情况中。

实验室应记录下软件、参数、微阵列分析中使用规则、分析程序的全部局限性。质量控制

确认

每次阵列分析时，均应验证芯片识别号、标本性别、对照性别、标本跟踪控制（如有）。如存在差异，应在分析处理前澄清。

DNA 要求

实验室应制定检验对DNA 的最低要求。每个实验室应制定测定标本质量和数量的参数，以及合格标准。如标本不符合最低要求，可认为其不合格。我们建议拒绝使用该标本，并重新采集。

设备校准、维护和质控

确认过程所用设备、器具和方法，以及微阵列平台使用均应该校准，QC 监控和按需定期维护。检验中可能情况下应制定质量标准。实验室应确保软件制造商提供文件记录和安全保护措施。而且，每次临床分析中以相同方式处理和概述数据。大多数软件均带有可自定义的用户权限。实验室主管和监督者可利用权限避免其他人员修改分析设置，使全部标本分析一致。对数据处理的所有变更均需记录和验证。

基本QC 量度

每个微阵列平台均有指定的质量量度值。例如：充分染色结合和/

或放大，荧光强度，信号与本底噪音比，标

注差和标准误等。应为此类量度设定标准临界值和可接受范围，以确保所生成结果准确可靠，能够用于临床评估。可通过DNA 标记，杂交效率，数据生成和分析，以及其他平台特定参数监控QC 量度。QC 量度应结合到实验室质量保证和质量改进项目中，以此监控分析的变化。

数据质量

数据质量会影响到基因组畸变检出能力。因此，实验室必须完全理解分析软件提供的阵列内量度，以及该量度所体现的数据质量。测量数据中信噪比（例如，与基因组定位无关的人为随机变量）的量度很多。例如：连续探针对数比值与排除离群值后导数对数比值间差异。实验室应为每个QC 量度指定可接受范围，体现出该实验室的数据质量。

该范围常由制造商提供。但实验室可根据阵列确认过程获得的经验修改这些范围。

实验室应建立进一步标准，应对数据超出建立范围的情况。

注释/数据库

数据分析的组成部分，在分析过程中使用私人和公开注释/数据库。由于该数值对结果解释非常关键，因此必须仔细创建该工具，并由实验室或软件制造商应用。所有关键注释应接受完全审查，并验证其来源。对于所有可报告畸变，应利用独立数据库来源验证基因组含量。制造商应提供更新该注释的方法。我们建议解释结果时访问资源和数据库记录。

新批次微阵列/试剂验证

验证可确保新批次微阵列芯片和/或试剂性能与旧批次相同。制造商应提供批次QC 对比文件（例如：寡核苷酸合成验证，SNP 判别准确性或其他特定控制参数）。应记录新批次试剂的等同性（例如，新标签试剂盒，消耗品等）。同时还应提供QC 量度符合新批次试剂设定参数的文件。

特性CNV 的确定

如技术性能和分析确认适当，检测实验室无需在确认阶段后，用实验室确定参数进一步确定CNV 判别。每个实验室应设定可报告异常的阈值（探针数量和/或基因组大小，以及其他QC 量度）。评估拷贝数目改变时应记住的特征有，数据间对数比值差异应适当、判别内和附近探针行为一致，断裂点界限上拷贝数状态明显转换，支持性SNP 等位基因状态（适当时），以及评估处理后log2比值数据（例如，加权比未加权）。

应该考虑到软件提供的所有判别相关质量评分。

如要最大程度检测临床重点基因畸变，以及嵌合染色体畸变（此时不会形成可靠的拷贝数判别），实验室可自行决定评估不符合实验室确认参数的判别（call ），这是可以接受且合乎情理的。实验室可标记此类判别，用于回顾和与患者临床指征相关联。但如要报告，应采用独立方法予以确认。

用其他技术判断发病机理

我们可以考虑逐例判断导致CNV 的发病机理，因为这样可更好地判断复发风险。一些机理可以通过CNV 与识别变异物质基因定位，或与识别畸变周围基因组结构相结合而确定。例如，末端和插入易位，环形或标记染色体等。其他技术是否适当取决于识别出CNV 的大小、类型和未知，以及可能形成机制。因此，此类技术应用作单独检测，而且应该由经过适当培训人员执行和解释。解释与报告

有关解释和报告指南，请您参见美国医学遗传学与基因组学学会最近出版的产后组成性拷贝数变异解释和报告指南13，以及基因组检测偶然发现可疑血缘报告指南。14

方法和免责声明

报告应简要描述所用方法，包括平台和报告标准。适当和必要情况下应包括免责声明。示例：检测局限性

本微阵列分析技术只能检出基因组片断扩增和缺失。因此，微阵列结果正常不能排除以下可能：受检基因突变可能（核苷酸碱基对改变），扩增和缺失未达到平台解析度水平，平衡的基因重排，或表观事件。如微阵列分析结果正常，可使用其他方法确定此类综合征或情况。

其他示例微阵列平台无法检出下列情况：真正平衡染色体重排，点突变，或微阵列无法发现的片断不平衡，也不能检出嵌合型染色体。未能检出基因位点变异，不能排除该位点存在异常。示例：非FDA 批准微阵列平台的免责声明根据1988年颁布的《临床实验室改进法案（CLIA ）》，本检测由（您实验室名称）开发，并测定其性能。该特殊用途未获得美国食品与药品管理局（FDA ）批准。依照1988年CLIA 要求，本实验室制定并验证检测准确

性与精确度。

能力验证

实验室可通过适当机构（例如，美国病理学家学会）参与外部举办的能力验证项目。实验室也可自行设立正常与异常标本检测的能力验证，并将其作为纳入内部质量保证项目和质量改进项目。将微阵列与其他阵列评估结果相关联，或者对比分析微阵列结果与传统细胞遗传学和/或荧光原位杂交分析结果，足以证明目前的检验能力。能力验证应依照1988 CLIA 指南执行。

实验室须保留参与内部和外部能力验证项目的资料和结果，并且在需要时提供跟审核机构人员。

实验室鉴定和人员资质

实验室人员必须具有教育、学位和相关检测等级证书，以及相关法规机构要求的培训、能力审评和继续教育证明。这些法规机构可为美国病理学家学会，CLIA ，医疗保险和医疗补助服务中心等。实验室必须持有CLIA 证书和执行临床检验所需的国家强制认证。强烈建议实验室获得美国病理学家学会认证。

文件和档案保留

实验室制度中应明确规定须保留文件种类和时间，而且数据保留制度必须符合当地、所在州和联邦要求。CLIA 规定（第493.1105节）要求分析系统记录至少应保留2年。关于微阵列技术，我们建议实验室至少保留文件两年。特别是分析渠道改进后可重新生成主要结果，或重新分析的文件类型。此外，我们还建议实验室尽量长期保留分析中检出的畸变，以及能解释该畸变的最终临床检测报告，以备今后需要重新解释该变异的意义。

结论

人们希望能将该领域中每项新技术都用来提高医学治疗水平。然而，将实验室新技术转化为临床诊断性检验，都需要进行大量确认，以确保医疗人员能能根据结果能准确可靠地制定治疗方案。

微阵列技术能十分清晰地显示整个基因组。医学实验室

人员必须做好识别、解释和报告结果及其临床意义的准备，同时还应该考虑到报告基因信息时，需面临的社会、伦理和法律责任。将微阵列分析结果转化为具有临床意义的信息相当困难和复杂，它是一个医学实践过程。CNV 解释算法离不开培训和基因组专业知识。我们建议

基因组微阵列分析应该在经过专业培训人员监督下执行

（美国医学遗传学会认证的临床细胞遗传学家或临床分子遗传学家，或美国医学遗传学会/美国病理学会认证的分子遗传学家），而且临床基因组微阵列检测结果的解释和报告工作也应该由他们完成。

致谢

本研究与2013年7月10日由美国医学遗传学与基因组学学会董事会批准。

声明

本工作小组所有成员均为采用基因组微阵列技术实验室的主观人员（临床实验室地点参见附录）。S.T.S.接受基因组微阵列平台制造商Affymetrix公司的讲座酬金。而且，S.T.S.为基因组微阵列检测服务提供商Lineagen 公司顾问。其他作者无利益冲突。

无菌检测操作规程

无菌操作规程 1.目的 建立无菌检查标准操作规程，确保检查结果准确、可靠。 2.适用范围 本公司无菌产品的无菌检查 3.职责 质量部QC 4.依据 2015版《中国药典》通则1101 5.内容 5.1无菌检查环境保障 5.1.1无菌检查的所有操作均需在严格控制微生物污染的环境下进行，即无菌检查应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内或隔离系统中进行。 5.1.2操作环境的无菌保障程度将直接影响无菌检查结果，为了保证无菌检查用洁净室（区）环境的稳定性，确保检查结果的可靠性，对洁净室（区）的环境定期检测并采取合理的措施保证洁净环境符合要求。 5.1.3无菌检查全过程必须严格遵守无菌操作，防止微生物污染。 5.1.4洁净区的温度、湿度等参数必须符合相应洁净级别的要求 5.1.5无菌检查操作还需要对环境进行监控， 5.2培养基、稀硫酸、缓冲液 5.2.1硫乙醇酸盐流体培养基，市售培养基干粉。除另有规定，接种后应置30-35℃培养。 5.2.2胰酪大豆胨液体培养基，市售培养基干粉。接种后应置20-35℃培养。 5.2.3中和或灭活用培养基，按上述硫乙醇酸盐流体培养基或胰酪大豆胨液体培养基的处方及制法，在培养基灭菌或使用前加入适宜的中和剂、灭活剂或表面活性剂，其用量同方法实用性试验。 5.2.4胰酪大豆胨琼脂培养基，市售培养基干粉。 5.2.5沙氏葡萄糖液体培养基，市售培养基干粉。 5.2.6沙氏葡萄糖琼脂培养基，市售培养基干粉。 5.2.7PH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液，市售培养基干粉。 5.2.80.9%无菌氯化钠溶液。 5.2.9培养基使用性检查 无菌检查用的硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆胨液体培养基等应符合培养基的无菌性检查及灵敏度检查的要求。本检查可在供试品的无菌检查或与供试品的无菌检查同时进行5.2.9.1无菌性检查：每批培养基随机取5支（瓶），按各培养基规定的温度下培养14天，用无菌生长。 5.2.9.2灵敏度检查 5.2.9.2.1菌种：培养基灵敏度检查所用的菌株传代数不得超过5代（从菌钟存中心获得的干菌种第0代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以证试验菌株的生物学特性。 金黄色葡萄球菌【CMCC(B)26 003】 铜绿假单胞菌[CMCC(B)10 104] 枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63 501] 生孢梭菌[CMCC(F)64 941] 白色念球菌[CMCC(F)98 001] 黑曲霉[CMCC(F)98 003]

ACT.5 diff AL血液细胞分析仪操作规程

ACT.5 diff AL血液细胞分析仪操作规程1 目的 此程序用于ACT 5DIFF AL全自动血液分析仪的操作与维护。 2 适用范围 适用于ACT 5DIFF全自动血液分析仪。 3 检测项目 ACT-5DIFF AL各检测参数的方法见表1。 表1. Coulter ACT-5DIFF AL各检测参数的方法

4 检测原理 ACT 5DIFF AL可以提供完整的WBC五项分类，这是由A C V（吸光率细胞化学和体积）技术和WBC/BASO方法同时决定的。 A C V技术使用吸光率、细胞化学和聚焦流阻抗原理。WBC/BASO方法则使用了差别溶解、阻抗技术及差别阈值的原理。 5 运行条件 1．工作环境温度：+15℃～+30℃ 2. 工作环境相对湿度：≤85% 3. 仪器工作场所：水平放置在清洁、干燥、无尘、无腐蚀性气体、无阳光直射、无强磁场的工作台上。 6 开关机程序 （一）开启电源并登录/关闭电源并退出 开机之前请检查电源线是否连接，试剂是否足够，废液桶是否需要倾倒，打印纸是否足够。 1、打开电源并登录 ①打开工作站电脑以及显示器，等待完全电脑启动； ②打开分析仪电源，将电源开关置于“ON”的位置（a），并检查红色的LED是否点亮（b）。

③登录系统：选择登录名称（Login Name），输入密码， 点击。 ④如果启用“自动启动”，那么“启动”会自动运行；如果禁用了“自动启动”，将会闪烁，点击它运行“启动”。 ⑤启动完成，出现如下主菜单（Main Menu）。根据相关设定，可能会打印启动的本底报告。 ⑥如果本底结果合格――“Pass”，表明“启动”成功；如果结果失败――“Failed”，点 击，再点击查看本底报告。重新点击，再次进行“start up启动”操作。如果本底仍然失败，请联系Beckman－Coulter代表。 说明：启动（Start Up）过程大约耗费3分钟时间。 本底限值: WBC≤0.3 ×109/L RBC≤0.03 ×1012/L Hgb≤0.3 ×g/dL

标准菌种确认标准操作规程完整

一目的 建立标准菌种确认标准操作规程，以减少菌种污染和生长特性的改变，保证实验结果的可靠性和准确性。 二围 本规程适用于质量控制实验室所用标准储备菌株。 三容 1.1 试验菌株 大肠埃希菌（Escherichia coli）[CMCC(B)44102] 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）[CMCC(B)26003] 枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）[CMCC(B)63501] 白色念珠菌（Candida albicans）[CMCC(F)64941] 黑曲霉（Aspergillus niger）[CMCC(F)98003] 铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）[CMCC(B)10104] 生孢梭菌（Clostridium sporogenes）[CMCC(F)98001] 1.1.1 标准菌株 1.1.1.1 标准菌株应来自认可的国或国外菌种收藏机构。 1.1.1.2 标准菌株经过复活并在适宜的培养基中生长后，即为标准储备菌株。 1.1.1.3 标准储备菌株应进行纯度和特性确认。 1.1.2 工作菌株 1.1. 2.1 标准储备菌株可用于制备每两个月或定期转种的工作菌株。 1.1. 2.2 工作菌株的传代次数应严格控制，不得超过 5 代（从菌种收藏机构获得的标准菌株为第0代），以防止过度的传代增加表型变化的风险。因此必要时，应对工作菌株的纯度和特性进行确认。 1.2 菌种确认试验的主要容

1.2.1 菌种的纯度确认 1.2.1.1 纯度检测：是指通过适当的方法检测菌种是否为纯培养物。 1.2.1.2 试验容 ①菌落形态：在特定的培养基上，将待检测培养物稀释涂布或平板划线，适宜培养后，同一平板上的单菌落的大小、形状、颜色、质地、光泽等是否相似；对于两种或以上形态的出发菌株，应再分别挑取单菌落划线或稀释涂布培养，检测是否重复出现相同特征。 ②镜检特征：对数生长期的培养物革兰氏染色反应应呈现一致性；细胞形状、大小、荚膜、芽孢等特征应相似。 1.2.2 菌种的特性确认 1.2.2.1 生化试验：各种微生物具有各自的独特的酶系统，因而在代过程中所参与的物质分解和合成代的产物也不同，这些代产物又具有不同的生化特征。根据此特征，利用生物化学方法来鉴定不同的微生物的试验即为微生物的生化试验。 1.3 菌种的确定方法 用无菌接种环粘取培养物，在相应的培养基平板上划线分离单个菌落，并在适宜条件下培养。培养后观察是否具有典型的菌落形态，然后挑取单一纯菌落，进行革兰氏染色、镜检，观察其染色特性及菌形。再做生化试验或使用菌种鉴定系统进一步鉴定菌种。 1.3.1 大肠埃希菌的确认 1.3.1.1 菌落形态 1.3.1.1.1 取大肠埃希菌新鲜培养物至营养肉汤培养基中，经35℃培养18～24h后，形成菌膜，管底有粘液状沉淀，培养物有粪臭味。 1.3.1.1.2 取上述培养物接种于曙红亚甲蓝琼脂(EMB)琼脂平板和麦康凯琼脂平板上，35℃培养18～24h后，观察结果。 ①曙红亚甲蓝琼脂(EMB)平板上菌落形态呈紫黑色、浅紫色、蓝紫色或粉红色,菌落中心呈深紫色或无明显暗色中心，圆形，稍凸起，边缘整齐，表面光滑、湿润，常有金属光泽。 ②麦康凯琼脂平板上菌落形态呈鲜桃红色或微红色，菌落中心呈深桃红色，圆形，扁平，边缘整齐，表面光滑，湿润。 1.3.1.2 革兰染色、镜检 1.3.1. 2.1 革兰染色

无菌技术操作规程

无菌技术操作规程 一、无菌技术操作原则 1、环境要清洁。进行无菌技术操作前半小时，必须停止清扫地面等工作，避免不必要的人群流动，防止尘埃飞扬。治疗是每日用紫外线照射消毒一次。 2、进行无菌操作时，衣帽穿戴要整洁。帽子要把全部头发遮盖，口罩须遮住口鼻，并修剪指甲，洗手。 3、无菌物品与非无菌物品应分别放置，无菌物品不可暴露在空气中，必须存放于无菌包或无菌容器内，无菌包应注明无菌名称，消毒灭菌日期，并按日期先后顺序排放，以便取用，放在固定的地方。无菌包在未被污染的情况下，可保存7 天，过期应重新灭菌。 4、工作人员面向无菌区域，用无菌取无菌物品，手臂须保持在腰部水平以上，不可触及无菌物或跨越无菌区，从无菌容器中取出的物品，虽未使用，也不可放回无菌容器内。 5 进行无菌操作时不可面对无菌区讲话、打喷嚏。怀疑无菌物品被污染，不可使用。 6 进行无菌操作时如器械、用物疑有污染或已被污染，即不可使用可，应更换或重新灭菌。 7、一套无菌物品，只能供一个病人用，以免发生交叉感染

二、准备质量标准 1、工作人员着装整洁，洗手、戴口罩、修剪指甲。 2、备齐用物。 3、治疗盘、无菌持物钳或镊，浸泡于消毒液溶液内，无菌溶液、无菌包布、无菌容器及物品、无菌手套、弯盘、75％酒精、无菌棉签。 4、查对无菌物品、灭菌日期及手套好。 5 用物排放有序，符合无菌操作要求。 三、操作流程质量标准 1、选择清洁、干燥、宽阔的场所进行操作。 2 无菌持物钳使用法： 无菌持物钳须置于无菌容器内，有效期限 4 小时；取、放无菌持物钳时，应将盖打开，钳端闭合，不可在盖孔中取、放；如需取远处物品时，应连同容器一起搬移，就地取出无菌物品。 3、无菌包使用法： 1）、查看无菌包的名称、灭菌日期，查看化学指示胶带粘贴。 2）、将无菌包放在清洁、干燥处，撕开粘贴。 3）、用拇指和食指先揭开左右两角，最后揭开内角，注意手不可触及包布的内

全基因组关联分析的原理和方法

全基因组关联分析(Genome-wide association study;GWAS)是应用基因组中 数以百万计的单核苷酸多态性(single nucleotide ploymorphism ，SNP)为分子 遗传标记，进行全基因组水平上的对照分析或相关性分析，通过比较发现影响复杂性状的基因变异的一种新策略。 随着基因组学研究以及基因芯片技术的发展，人们已通过GWAS方法发现并鉴定了大量与复杂性状相关联的遗传变异。近年来，这种方法在农业动物重要经济性状主效基因的筛查和鉴定中得到了应用。 全基因组关联方法首先在人类医学领域的研究中得到了极大的重视和应用，尤其是其在复杂疾病研究领域中的应用，使许多重要的复杂疾病的研究取得了突破性进展，因而，全基因组关联分析研究方法的设计原理得到重视。 人类的疾病分为单基因疾病和复杂性疾病。单基因疾病是指由于单个基因的突变导致的疾病，通过家系连锁分析的定位克隆方法，人们已发现了囊性纤维化、亨廷顿病等大量单基因疾病的致病基因，这些单基因的突变改变了相应的编码蛋白氨基酸序列或者产量，从而产生了符合孟德尔遗传方式的疾病表型。复杂性疾病是指由于遗传和环境因素的共同作用引起的疾病。目前已经鉴定出的与人类复杂性疾病相关联的SNP位点有439 个。全基因组关联分析技术的重大革新及其应用，极大地推动了基因组医学的发展。(2005年, Science 杂志首次报道了年龄相关性视网膜黄斑变性GWAS结果,在医学界和遗传学界引起了极大的轰动, 此后一系列GWAS陆续展开。2006 年, 波士顿大学医学院联合哈佛大学等多个研究机构报道了基于佛明翰心脏研究样本关于肥胖的GWAS结果(Herbert 等. 2006);2007 年, Saxena 等多个研究组联合报道了与2 型糖尿病( T2D ) 关联的多个位点, Samani 等则发表了冠心病GWAS结果( Samani 等. 2007); 2008 年, Barrett 等通过GWAS发现了30 个与克罗恩病( Crohns ' disrease) 相关的易感位点; 2009 年, W e is s 等通过GWAS发现了与具有高度遗传性的神经发育疾病——自闭症关联的染色体区域。我国学者则通过对12 000 多名汉族系统性红斑狼疮患者以及健康对照者的GWAS发现了5 个红斑狼疮易感基因, 并确定了4 个新的易感位点( Han 等. 2009) 。截至2009 年10 月, 已经陆续报道了关于人类身高、体重、 血压等主要性状, 以及视网膜黄斑、乳腺癌、前列腺癌、白血病、冠心病、肥胖症、糖尿病、精神分 裂症、风湿性关节炎等几十种威胁人类健康的常见疾病的GWAS结果, 累计发表了近万篇 论文, 确定了一系列疾病发病的致病基因、相关基因、易感区域和SNP变异。) 标记基因的选择： 1)Hap Map是展示人类常见遗传变异的一个图谱, 第1 阶段完成后提供了 4 个人类种族[ Yoruban ,Northern and Western European , and Asian ( Chinese and Japanese) ] 共269 个个体基因组, 超过100 万个SNP( 约1

细胞传代培养标准操作规程

创作编号： GB8878185555334563BT9125XW 创作者：凤呜大王* 细胞传代培养（消化法）标准操作规程 一、原理 细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，就必须进行传代（再培养）。 传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以，而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。 二、材料和试剂 1. 无菌磷酸生理缓冲液(PBS) 2. 胰酶-EDTA溶液(0.05%胰酶-0.53mM EDTA-4Na): 以10ml分装于15 ml 无菌离心管中，保存于–20℃，使用前放在37℃水槽回温。 3. 新鲜培养基 4. 无菌吸管/离心管/培养瓶 三、操作步骤 1. 传代前准备 （1）预热培养用液：把已经配制好的装有培养液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴锅内预热。 （2）用75％酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手。 （3）正确摆放使用的器械：保证足够的操作空间，不仅便于操作而且可减少污染。 （4）点燃酒精灯：注意火焰不能太小。 （5）准备好将要使用的消毒后的空培养瓶。

（6）取出预热好的培养用液，用酒精棉球擦拭好后方能放入超净台内。（7）从培养箱内取出细胞：注意取出细胞时要旋紧瓶盖，用酒精棉球擦拭显微镜的台面，再在镜下观察细胞。 （8）打开瓶口：将各瓶口一一打开，同时要在酒精灯上烧口消毒。 2. 胰蛋白酶消化 （1）加入消化液：小心吸出旧培养液，用PBS清洗（冲洗），加入适量消化液（胰蛋白酶液），注意消化液的量以盖住细胞最好，最佳消化温度是37℃。 （2）显微镜下观察细胞：倒置显微镜下观察消化细胞，若胞质回缩，细胞之间不再连接成片，表明此时细胞消化适度。 （3）吸弃消化液加入培养液：弃去胰蛋白酶液，注意更换吸管，加入新鲜的培养液。 3. 吹打分散细胞 （1）吹打制悬：用滴管将已经消化细胞吹打成细胞悬液。 （2）吸细胞悬液入离心管：将细胞悬液吸入10ml离心管中。 （3）平衡离心：平衡后将离心管放入台式离心机中，以1000转/分钟离心6-8分钟。 （4）弃上清液，加入新培养液：弃去上清液，加入2ml培养液，用滴管轻轻吹打细胞制成细胞悬液。 4. 分装稀释细胞 （1）显微镜下观察细胞：倒置显微镜下观察细胞量，必要是计数。注意密度过小会影响传代细胞的生长，传代细胞的密度应该不低于5×105/ml。最后要做好标记。 （2）分装：将细胞悬液吸出分装至2～3个培养瓶中，加入适量培养基旋紧瓶盖。 （3）继续培养：用酒精棉球擦拭培养瓶，适当旋松瓶盖，放入CO2培养箱中继续培养。传代细胞2小时后开始贴附在瓶壁上。 5. 悬浮型细胞的传代 （1）吸出细胞培养液，放入离心管中，离心1000 rpm 5 分钟。

无菌检查用培养基的适用性检查标准操作规程

无菌检查用培养基的适用性检查标准操作规程 目的：建立无菌检查用培养基适用性检查标准操作规程。 范围：适用于无菌检查使用培养基的适用性检查。 依据：中国药典》2015年版 《药品生产质量管理规范》2010年修订 《中国药品检验标准操作规程》2010年版 责任：QC化验员对实施本规程负责。 内容: 1、概要：无菌检查用的硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆胨液体培养基等应符合培养基的无菌检查及灵敏度检查要求。本检查可在供试品的检查前或与供试品的检查同时进行。 2、材料及设备 2.1 生化培养箱 2.2 生物安全柜 2.3 中国浊度标准管（由中国药品生物制品检定所提供） 2.4 灭菌试管、灭菌注射器 2.5 0.9%无菌氯化钠溶液 2.6 0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液：取聚山梨酯80 0.05ml，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%氯化钠至100ml，混匀，灭菌即可。3、无菌检查培养基的适用性检查 3.1无菌性检查 取新鲜配制灭菌的培养基各5瓶，硫乙醇酸盐流体培养基置30～35℃，胰酪大豆胨液体培养基置20～25℃，培养14天，应无菌生长。 3.2灵敏度检查 3.2.1菌种 培养基灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的干燥菌种为第0代），

并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。 金黄色葡萄球菌[Staphylococcus aureus CMCC(B) 26003] 铜绿假单胞菌[Pseudomonas aeruginosa CMCC(B) 10104] 枯草芽孢杆菌[Bacillus subtilis CMCC(B) 63501] 生孢梭菌[Clostridium sporogenes CMCC(B) 64941] 白色念珠菌[Candida albicans CMCC(F) 98001] 黑曲霉[Aspergillus niger CMCC(F) 98003] 3.2.2菌液制备 3.2.2.1 金黄色葡萄球菌菌悬液制备 3.2.2.1.1 取金黄色葡萄球菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体或胰酪大豆胨琼脂培养基上，30～35℃培养18～24小时，取新鲜传代菌种一支待用。取一支灭菌中试管，加入3ml 0.9%无菌氯化钠溶液，把新鲜传代菌种培养物用接种环轻轻刮取，在加入pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液的试管壁上研磨，使之成为均匀悬液。 3.2.2.1.2 取菌悬液1ml于比浊管中，用0.9%无菌氯化钠溶液逐步稀释至与标准管的浊度一致。记录下所加入的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液的量，余下的2ml菌液盖上试管塞以备用。 3.2.2.1.3 打开试管塞，取1ml菌液于中试管中，加入比浊时所需的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液的量一致的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液，此时试管中的细菌浓度与标准比浊管相一致。根据细菌浊度标准菌数表的菌数，将菌悬液用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9％无菌氯化钠溶液系列稀释至不大于100cfu/ml。 3.2.2.1.4 铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的菌悬液制备方法同金黄色葡萄球菌。 3.2.2.2 生孢梭菌菌悬液的制备 3.2.2.2.1取生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基上，30～35℃培养18～24小时，取一支灭菌中试管，用灭菌注射器吸取硫乙醇酸盐流体培养基中底部三分之二处的新鲜菌液1ml，加入

迈瑞-5380血球仪操作规程

1 仪器设备检验项目 适用于血液白细胞计数及分类，红细胞计数，血红蛋白，血小板计数，红细胞压积，红细胞体积分布宽度，平均红细胞血红蛋白含量，平均红细胞血红蛋白浓度，平均红细胞体积，血小板体积分布宽度、平均血小板体积和血小板压积等检验。 2 仪器设备试剂 BC-5380血液细胞分析仪专用试剂：M-53D稀释液；M-53LEO(I) 溶血剂；M-53LEO(II) 溶血剂；M-53LH 溶血剂；M-53 清洁液；M-53P 探头清洁液。所有试剂应参照试剂的使用说明进行保存。变质、超过效期的所有试剂不能使用。 3 仪器设备标本 原始样品采集、制备、处理、检验和存放见检验科相关规范。 4 仪器设备性能参数 BC-5380血液细胞分析仪一般资料见附件1；BC-5380血液细胞分析仪性能指标见附件2。 5 仪器设备环境要求，使用安全措施 5.1 仪器设备环境要求 5.1.1 空间安装要求 仪器应安装在稳固工作台上。在仪器两侧各保留至少1米的空间，以方便维护和保养。后部至少要有0.50米的空间，以防止阻碍热气的排放并保证主机后的液路管道不受挤压。将BC-5380血液细胞分析仪安放在通风良好、灰尘少的地方。避免在过热或过冷以及日光直射的环境中使用BC-5380血液细胞分析仪。保证操作台面以及主机下方有足够的空间放置稀释液、废液桶。 5.1.2 运行条件 环境温度要求：10℃～40℃。 环境相对湿度要求：10%～90%。 电源电压要求：100～240VAC，50/60Hz。 仪器设备周围应尽可能无尘、无机械振动、无污染、无大噪音源和电源干扰；仪器附近无强电磁干扰源以及电刷型电机、闪烁荧光灯和经常开关的电接触性设备；不应放在通风条件差、阳光直射的环境中，或热源及风源前。 5.2 仪器安全 在仪器设备上面和周围不要使用可燃性危险品，避免引起火灾和爆炸。 在电源打开状态下，禁止打开仪器前上面、侧面及背面面板，以免损害线路板；禁止触摸BC-5380血液细胞分析仪外壳里面的电子元件，尤其避免湿手触摸，以免造成电击。

细胞冻存和复苏标准操作规程(SOP)

细胞冻存和复苏标准操作规程(SOP) 背景知识： 细胞培养的传代及日常维持过程中，在培养器具、培养液及各种准备工作方面都需大量的耗费，而且细胞一旦离开活体开始原代培养，它的各种生物特*都将逐渐发生变化并随着传代次数的增加和体外环境条件的变化而不断有新的变化。因此及时进行细胞冻存十分必要。细胞冷冻储存在-70℃冰箱中可以保存一年之久；细胞储存在液氮中，温度达-196℃，理论上储存时间是无限的。 原理： 细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻快融，实验证明这样可以最大限度的保存细胞活力。目前细胞冻存多采用甘油或二甲基亚砜作保护剂，这两种物质能提高细胞膜对水的通透*，加上缓慢冷冻可使细胞内的水分渗出细胞外，减少细胞内冰晶的形成，从而减少由于冰晶形成造成的细胞损伤。复苏细胞应采用快速融化的方法，这样可以保证细胞外结晶在很短的时间内即融化，避免由于缓慢融化使水分渗入细胞内形成胞内再结晶对细胞造成损伤。 主体内容（操作步骤）： 一、材料 （一）仪器 1. 净化工作台 2. 离心机 3. 恒温水浴箱 4. 冰箱（4℃、-20℃、-70℃） 5. 倒置相差显微镜 6. 培养箱 7. 液氮冰箱 （二）玻璃器皿 1. 吸管（弯头、直头） 2. 培养瓶 3. 玻璃瓶（250ml、100ml） 4. 废液缸 （三）塑料器皿 1. 吸头 2. 枪头 3. 胶塞 4. 移液管（10ml） 5. 15ml离心管 6. 冻存管（1～2ml） （四）其他物品 1. 微量加样枪 2. 红血球计数板 3. 记号笔 4. 医用橡皮膏 5. 移液枪 （五）试剂 1. D-Hanks液

2. 小牛血清 3. 培养液 4. 双抗（青霉素、链霉素） 5. 胰蛋白酶（0.08%） 6. 1NHCl 7. 7.4%NaHCO3 8. DMSO（分析纯）或无色新鲜甘油 四、操作步骤 （一）细胞冻存 1. 配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的冻存培养液； 2. 取对数生长期的细胞，用胰蛋白酶把单层生长的细胞消化下来，悬浮生长的细胞则直接将细胞移至15ml离心管中、； 3. 离心1000rpm，5min； 4. 去除胰蛋白酶及旧的培养液，加入适量配制好的冻存培养液，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，计数，调节冻存液中细胞的最终密度为5×106/ml～1×107/ml； 5. 将细胞分装入冻存管中，每管1～1.5 ml； 6. 在冻存管上标明细胞的名称，冻存时间及操作者； 7. 冻存：标准的冻存程序为降温速率-1～-2℃/ min；当温度达-25℃以下时，可增至-5℃～-10℃/ min；到-100℃时，则可迅速浸入液氮中。也可将装有细胞的冻存管放入-20℃冰箱2h ，然后放入-70℃冰箱中过夜，取出冻存管，移入液氮容器内。（二）细胞复苏 1. 从液氮容器中取出冻存管，直接浸入37℃温水中，并不时摇动令其尽快融化。 2. 从37℃水浴中取出冻存管，打开盖子，用吸管吸出细胞悬液，加到离心管并滴加10倍以上培养液，混匀； 3. 离心，1000rpm，5min； 4. 弃去上清液，加入含10%小牛血清培养液重悬细胞，计数，调整细胞密度，接种培养瓶，37℃培养箱静置培养； 5. 次日更换一次培养液，继续培养。 五、注意事项 1．从增殖期到形成致密的单层细胞以前的培养细胞都可以用于冻存，但最好为对数生长期细胞。在冻存前一天最好换一次培养液； 2．将冻存管放入液氮容器或从中取出时，要做好防护工作，以免冻伤； 3．冻存和复苏最好用新配制的培养液。

无菌检查法标准操作规程

无菌检查法标准操作规程 目的： 建立无菌检查的基本操作，为无菌检查人员提供正确的操作规程。 2.依据： 《中华人民共和国药典》2000年版二部。 3.范围： 本标准适用于QC无菌检查的操作。 4. 职责： QC无菌检查人员对本标准的实施负责。 5.程序： 5.1. 定义： 无菌检查法：系指检查药品、无菌器具及适用于药典要求无菌检查的其它品种是否无菌的一种方法。 5.2. 无菌操作室应具有空气除菌过滤的层流装置，局部洁净度100级或放置同等级别的超净工作台，室内温控（18~26）℃及除湿装置，操作室或工作台应保持空气正压。 5.2.1. 无菌室的清洁与消毒应符合QC洁净室清洁、消毒规程（SOP ZL0014）。 5.2.1.无菌室无菌程度的检查应符合规定：见沉降菌监测规程（SOP ZL0006）、悬浮粒 子监测规程（SOP ZL0005）。 实验设备及用具： 5.3.1.电热干燥箱、电热手提式压力蒸汽灭菌器、电热恒温培养箱、试管、注射器、针头、试管架、刻度吸管、手术剪、手术镊、砂轮、注射器盒、搪瓷托盘、双碟、75%酒精棉球、无菌工作服（衣、裤、帽、口罩等）。 5.3.2.微孔滤膜：直径50mm、孔径0.45μm，应符合规定。 5.3.3.除菌滤器： 除菌滤器采用的是HTY-2000型全封闭式薄膜过滤器。 5.3.4. 所有进入无菌室的物品必须经过消毒或灭菌，应严格按照进入QC无菌室物品清洁、消毒、灭菌规程（SOP ZL0015）进行操作。

5.4. 稀释剂：灭菌注射用水。 5.5. 培养基： 5.5.1.需气菌、厌气菌培养基（流体硫乙醇酸盐培养基）；真菌培养基。 5.5.2. 培养基的使用，配制、管理及灵敏度检查应按照培养基管理规程（SMP ZL0036）、培养基灵敏度检查规程（SOP ZL0019）、培养基配制规程（SOP ZL0016）进行操作。 5.6. 对照用菌液： 5.6.1. 金黄色葡萄球菌（Staphyoccus sureus）菌液：取金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26 003]的营养琼脂斜面新鲜培养物1白金耳，接种至营养肉汤培养基内，在30~35℃培养16~18小时后，用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至每1ml中含10~100个菌。 5.6.2. 生孢梭菌（Clostridum sporgenes）菌液：取生孢梭菌[CMCC（B）64 941]的需气菌、厌气菌培养基新鲜培养物1白金耳，接种至相同培养基内，在30~35℃培养18~24小时后，用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至1ml中含10~100个菌。 5.6.3. 白色念珠菌（Candida albicans）菌液：取白色念珠菌[CMCC（F）98 001]的 真菌琼脂培养基斜面新鲜培养物1白金耳，接种至真菌培养基内，在20~25℃培养24小时后，用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至每1ml中含10~100个菌。 5.7. 操作法： 5.7.1. 供试品、培养基在移入缓冲间之前应先编号，并用75%酒精棉球擦拭瓶（管）外壁，然后连同其它用具（包括无菌衣、帽、口罩等）移入缓冲间，打开无菌间紫外光 灯和空气过滤装置开关，并使其工作在30分钟以上。 5.7.2. 将所需物品移入无菌室，每次试验中所用物品，必须计划好，并有备用物。操作人员进入无菌室应严格遵守QC洁净室进出规程（SOP ZL0013）。 5.7.3. 供试品外部消毒： 5.7.3.1. 橡皮塞、铝盖、压封小瓶：先用75%酒精棉球擦拭外壁及瓶塞，待干，用消毒镊子剔去铝盖上的铝质小圆片，用酒精棉球擦拭瓶盖及橡皮塞，并将酒精棉球盖于橡皮塞上待取样。 5.7.3.2. 安瓶：先用酒精棉球将安瓶外部擦拭消毒待干，用砂轮轻轻割安瓶颈部，便于折开安瓶。 5.7.4. 供试品溶液的制备：取供试品加入该药品项下规定的稀释剂用量，制成该药品项下规定浓度的供试品溶液。 5.7.5. 根据供试品的抑真菌和抑细菌试验，判定该供试品有无抑菌性，而决定采用直接

T细胞培养标准操作规程

百利药业生物药研发部 标准操作规程 题目：293T细胞传代培养操作规程 编号：SOP-M-e-003- 制定者：（签名）日期：年月日批准者：（签名）日期：年月日生效日期：年月日

题目：293T细胞培养操作规程 1 目的 293T细胞是常用于包装和扩增病毒载体的工具细胞，因此做好293T细胞的培养，为保证相关实验的正常进行提供必要条件。 2 适用范围本部门293T细胞培养 3 操作方法 将移液器和移液枪、15ml离心管、离心管架、75cm2新的细胞培养瓶放于生物安全柜中，按照生物安全柜的标准操作规程，将生物安全柜的紫外开启半小时。 将含10%胎牛血清和100U/ml双抗的DMEM及PBS放于37℃水浴锅中预热。 培养箱中取出，先用75% 3.2.1将已长到80%-90%的293T细胞培养瓶从37℃，5%的CO 2 的酒精喷洒于瓶表面，将细胞培养瓶旋转放于生物安全柜中，用无菌的移液管吸净其中的培养基，加5ml的预热的PBS洗涤一次，吸净PBS。 3.2.2将含%tyption用PBS稀释两陪到五倍，向该75cm2的细胞瓶中加入3ml稀释好的%tyption，让其充分平铺于细胞表面。盖好瓶盖，将细胞瓶放在显微镜下观察，直到细胞变圆，加含10%胎牛血清的DMEM终止反应，用移液管轻轻将瓶上的细胞吹下，将细胞液移到15ml无菌的离心管中，1000rpm离心3分钟。 3.2.3将离心上清吸弃掉，用手指轻轻拍打离心管底将底部细胞分散开，再加3mlDMEM 培养基将分散的细胞重悬稀释开，取一定量的细胞液进行n倍稀释后计数，按照细胞计数标准操作规程进行。 3.2.4计数好之后细胞传代密度按照2~5×104个细胞/cm2进行传代培养，每个75cm2的 培养箱中培养。 培养瓶中加10mlDMEM培养基，放于37℃，5%的CO 2 3.2.5 24小时后观察细胞状态，待细胞长到80%-90%时进行下一次传代培养。

1注射剂检验标准操作规程

一、目的：建立注射剂检验标准操作规程，防止错检、漏检的发生。 二、范围：适用于注射剂的检验操作方法。 三、责任：质量部、化验室相关操作人员。 四、内容： 注射剂 注射剂（《中国药典》2010年版二部附录IB）系指药物与适宜的溶剂或分散介质制成的供注入体内的溶液、乳状液或混悬液，以及供临用前配制或稀释成溶液或混悬液的粉末或浓溶液的无菌制剂。 注射剂可分注射液（其中供静脉滴注用的大体积注射液也称静脉输液）、注射用无菌粉末与注射用浓溶液。 注射剂除应按药典品种项下规定的检验项目外，还应检查“装量”或“装量差异”、“可见异物”和“无菌”。静脉用注射剂应加查“热原”或“细菌内毒素”；溶液型静脉用注射液、溶液型静脉注射用粉末及注射用浓溶液应加查“不溶性微粒”；静脉输液及插管注射用注射液应加查“渗透压摩尔浓度”。 混悬型注射液，除另有规定外，药物粒度应控制在l5um以下，含15～20um(间有个别20～50um)者，不应超过10%，若有可见沉淀，振摇时应容易分散均匀；乳状液型注射液不得有相分离现象；静脉用乳状液型注射液分散相球粒的粒度90%应在lum以下，并不得有大于5um的乳滴。 “装量”检查法 1 简述 1.1本法适用于50ml及50ml以下的单剂量注射液的装量检查，其目的在于保证单剂量注射液的注射用量不少于标示量，以达到临床用药剂量要求。 1.2标示装量为50ml以上的注射液和注射用浓溶液，按最低装量检查法标准操作规范检查，应符合规定。

1.3 凡规定检查含量均匀度的注射液（如塞替派注射液）．可不进行“装量”检查。 2 仪器与用具 2.1注射器及注射针头。 2.2量筒（量入型）规格l、2、5、1O、20及50ml的量筒，均应预经标化。 3 操作方法 3.1 按下表规定取用量抽取供试品。 标示装量供试品取用量（支） 2ml或2ml以下 5 2ml以上至50ml 3 3.2取供试品，擦净瓶外壁，轻弹瓶颈部使液体全部下落，小心开启，将每支内容物分别用相应体积的干燥注射器（包括注射器针头）抽尽，注入预经标化的量筒内，在室温下检视，读出每支装量。 3.3如供试品为油溶液或混悬液时，检查前应先微温摇匀，立即按3.2项下方法操作，并冷至室温后检视。 4 注意事项 4.1所用注射器及量筒必须洁净、干燥并经定期校正；其最大容量应与供试品的标示装量相一致，量筒的体积应使待测体积至少占其额定体积的40%。 4.2 注射器应配上适宜号数的注射针头，其大小与临床使用情况相近为宜。 5 记录与计算主要记录室温，抽取供试品支数，供试品的标示装量，每支供试品的实测装量。 6 结果与判定 每支注射液的装量均不得少于其标示装量；如有少于其标示装量者，即判为不符合规定。 “装量差异”检查法 l 简述 1.1本法适用于注射用无菌粉末的装量差异检查。 1.2本项检查的目的在于控制各瓶间装量的一致性，以保证使用剂量的准确。 1.3凡规定检查含量均匀度的注射用无菌粉末，可不进行“装量差异”检查。 2 仪器与用具 分析天平感量0. 1mg（适用于平均装量为0.15g及其以下的粉针剂）或感量1mg

血细胞分析仪操作规程

DIRUI迪瑞 BF-6700 全自动无分类血细胞分析仪操作规程 一、开机程序 1.1开机前的检查、准备 （1）试剂：检查稀释液、溶血剂是否充足，有无过期；试剂管路是否弯折，连接是否可靠。（2）废液桶：废液桶是否有足够的空间盛装废液，如废液桶满，应及时倒掉并清理。（3）打印机：检查打印机是否正确安装，打印纸是否充足。 （4）供电电源：检查电源线是否正确连接。 （5）连接：检查分析仪与计算机主机之间通讯电缆是否正确连接；外置条码扫描仪的电缆线是否与计算机连接就绪。 1.2开机 （1）打开分析仪右侧的电源开关，电源指示灯亮。 （2）打开电脑电源后启动分析仪软件。输入用户名和密码，登录软件。（初始用户名为Admin，初始密码为1。） （3）自检过程结束后，系统进入操作界面。 二、校准 分析仪提供三种校准方式：人工校准、校准物校准和新鲜血校准。 2.1人工校准 在“人工校准”界面直接更改校准系数，点击“保存”键。 2.2校准物校准与新鲜血校准 在校准物校准和新鲜血校准中，所有与校准相关的数学计算都由分析仪自动完成，同一次校准物校准测试需用同一批号的校准物，测试3—5次，建议5次。新鲜血校准测试需3—5各样本，每个样本测5次。校准后得到的校准系数自动保存在“人工校准”界面。 校准物校准步骤： 在校准物校准界面点击【开始计数】键后，封闭进样器仓门自动打开，将校准物放置在封闭进样器3号位上，关闭进样仓门，按分析仪前面板右侧的计数键进行测试，测试结构自动保存，测试5次后点击【保存】键，校准系数自动存入“人工校准”界面的“校准系数”中。

新鲜血校准的操作步骤与上述相同。 三、质控程序 每天开机后要先进行质控测试。 3.1质控设置 在“质控”的设置界面下，设置质控品信息。 3.2质控测试 在“质控计数”界面进行质控测试。点击【开始计数】键后，封闭进样器仓门自动打开，将质控品放置在1号位上，关闭进样仓门，按分析仪前面板右侧计数键进行质控测试。可在“质控图”及“质控列表”中查询质控结果。 四、常规操作程序 4.1试剂注册 4.1.1自动扫描 在分析仪软件上点击【服务】，在“维护”栏中点击【试剂注册】，用手持条码阅读器扫描试剂条形码，软件提示“注册成功”。 4.1.2手动输入 如果条形码由于脏污、脱落等原因不能被扫描时，可手工输入条形码信息：在输入框中录入正确的条码信息，点击【确定】键，试剂条码注册成功。 注：更换整瓶/整桶试剂时，注册成功后，在“服务”→“维护”→“更换/灌注”界面下点击【更换】键，软件提示“正在更换……”，当软件提示“操作完成”时，点击【确定】键，即完成试剂的更换。 4.2样本登记 （1）在分析仪软件上点击【样本登记】，然后点击【设置】，可以设置患者信息的输入项目。设置完成后可按此设置内容作为默认项目类型进行样本信息输入。 （2）点击【新增】，在界面左侧编辑区可直接输入样本编号、条码号、病历号、患者姓名、年龄、床号；采样/送检时间可在其右侧的下拉框中直接选择时间；参考值、性别、科室、送检医生均可在其右侧的下拉框中选择，或直接输入预先在“设置”中设置的代码。编辑后点击【保存】键或者按键盘回车键即可进行下一样本的编辑。 注：也可先进行样本测试，测试后在“数据浏览”界面编辑样本信息。

全基因组关联分析(GWAS)解决方案

全基因组关联分析(GWAS)解决方案 ※ 概述 全基因组关联研究（Genome-wide association study，GWAS）是用来检测全基因组范围的遗传变异与 可观测的性状之间的遗传关联的一种策略。2005年，Science杂志报道了第一篇GWAS研究——年龄相关性黄 斑变性，之后陆续出现了有关冠心病、肥胖、2型糖尿病、甘油三酯、精神分裂症等的研究报道。截至2010年 底，单是在人类上就有1212篇GWAS文章被发表，涉及210个性状。GWAS主要基于共变法的思想，该方法是 人类进行科学思维和实践的最重要工具之一；统计学研究也表明，GWAS很长时期内都将处于蓬勃发展期（如 下图所示）。 基因型数据和表型数据的获得，随着诸多新技术的发展变得日益海量、廉价、快捷、准确和全面：如 Affymetrix和Illumina公司的SNP基因分型芯片已经可以达到2M的标记密度；便携式电子器械将产生海量的表型 数据；新一代测序技术的迅猛发展，将催生更高通量、更多类别的基因型，以及不同类别的高通量表型。基于 此，我们推出GWAS的完整解决方案，协助您一起探索生物奥秘。 ※ 实验技术流程 ※ 基于芯片的GWAS Affymetrix公司针对人类全基因组SNP检测推出多个版本检测芯片，2007年5月份，Affymetrix公司发布了 人全基因组SNP 6.0芯片，包含90多万个用于单核苷酸多态性（SNP）检测探针和更多数量的用于拷贝数变化（CNV）检测的非多态性探针。因此这种芯片可检测超过180万个位点基因组序列变异，即可用于全基因组 SNP分析，又可用于CNV分析，真正实现了一种芯片两种用途，方便研究者挖掘基因组序列变异信息。 Illumina激光共聚焦微珠芯片平台为全世界的科研用户提供了最为先进的SNP（单核苷酸多态性）研究平 台。Illumina的SNP芯片有两类，一类是基于infinium技术的全基因组SNP检测芯片（Infinium? Whole Genome Genotyping），适用于全基因组SNP分型研究及基因拷贝数变化研究，一张芯片检测几十万标签SNP位点，提 供大规模疾病基因扫描(Hap660,1M)。另一类是基于GoldenGate?特定SNP位点检测芯片，根据研究需要挑选SNP位点制作成芯片(48-1536位点)，是复杂疾病基因定位的最佳工具。 罗氏NimbleGen根据人类基因组序列信息设计的2.1M超高密度CGH芯片，可以在1.1Kb分辨率下完成全基 因组检测，可有效检测人基因组中低至约5kb大小的拷贝数变异。

细胞传代标准操作规程版

细胞传代培养SOP（消化法） 具体步骤如下： 1. 传代前准备： 1.1预热培养用液：把已经配制好的装有培养液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37C水浴锅内预热。 1.2 用75％酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手。 1.3 正确摆放使用的器械：保证足够的操作空间，不仅便于操作而且可减少污染。 1.4 点燃酒精灯：注意火焰不能太小。 1.5 准备好将要使用的消毒后的空培养瓶，放入微波炉内高火，8 分钟再次消毒。 1.6 取出预热好的培养用液：取出已经预热好的培养用液，用酒精棉球擦拭好后方能放入超净台内。 1.7 从培养箱内取出细胞：注意取出细胞时要旋紧瓶盖，用酒精棉球擦拭显微镜的台面，再在镜下观察细胞。 1.8 打开瓶口：将各瓶口一一打开，同时要在酒精灯上烧口消毒。 2. 胰蛋白酶-EDTA消化： 2.1加入消化液：小心吸出旧培养液，用PBS清洗（冲洗），加入适量消化液（胰蛋白酶-EDTA液）,注意消化液的量以盖住细胞最好，最佳消化温度是37T < 2.2 显微镜下观察细胞：倒置显微镜下观察消化细胞，若胞质回缩，细胞之间不再连接成片，表明此时细胞消化适度。 2.3 吸弃消化液加入培养液：弃去胰蛋白酶液，注意更换吸管，加入新鲜的培养液。 3. 吹打分散细胞： 3.1 吹打制悬：用滴管将已经消化细胞吹打成细胞悬液。 3.2吸细胞悬液入离心管：将细胞悬液吸入10ml离心管中。 3.3 平衡离心：平衡后将离心管放入台式离心机中，以1000转/分钟离心6-8 分钟。 3.4弃上清液，加入新培养液：弃去上清液，加入2ml培养液，用滴管轻轻吹打细胞制成细胞悬液。 4. 分装稀释细胞： 4.1 分装：将细胞悬液吸出分装至2-3 个培养瓶中，加入适量培养基旋紧瓶盖。 4.1 显微镜下观察细胞：倒置显微镜下观察细胞量，必要是计数。注意密度过小会影响传代细胞的生长，传代细胞的密度应该不低于5X 105/ml。最后要做好标记。 5. 继续培养： 用酒精棉球擦拭培养瓶，适当旋松瓶盖，放入CO培养箱中继续培养。传代细胞 2 小时后开始贴附在瓶壁上。当生长细胞铺展面积占培养瓶底面积25％时

无菌检验操作规程

医疗器械产品无菌检验操作规程 1目的 通过无菌检验,确保灭菌后产品能够达到无菌的要求。 2适用围 适用于灭菌后医疗器械产品的无菌检验。 3检验依据 《中国药典》 (2005年版 GB14233.2-2005医用输液、输血、注射器具检验方法第二部分:生物试验方法GB15980-1995一次性使用医疗用品卫生标准 4仪器、设备 超净工作台、电热干燥箱、电热恒温培养箱、霉菌培养箱、压力蒸汽灭菌器、集菌仪(器、电子天平、 PH 计、冰箱、恒温水浴锅、酒精灯、三角烧瓶,接种环、无菌棉签、镊子,试管架,大试管若干等。 5无菌检验室的环境要求 5.1无菌检验应在环境洁净度 10000级下的局部百级的单向流空气区域进行。 5.2缓冲区与外界环境、无菌检验室与缓冲区之间空气应保持正压,阳性对照室与缓冲区之间空气应保持负压。无菌检验室与室外大气之间静压差应大于 10Pa 。无菌检验室的室温应保持 18~26℃,相对湿度:45~65%。 5.3无菌检验室的单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室(区悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的监测。每年至少检测一次。

5.4无菌检验过程中应同时检查超净工作台单向流空气中的菌落数:每次操作时在层流空气所及台面的左中右置 3个营养琼脂平板,暴露 30min ,于 30~35℃培养 48小时,菌落数平均应不超过 1CFU/平板。 6无菌检验前的准备 6.1器具灭菌、消毒 6.1.1灭菌:试验过程中与供试品接触的所有器具必须采用可靠方法灭菌。可经电热干燥箱 160℃以上干烤 2小时,或置压力蒸汽灭菌器 121℃蒸汽灭菌 30分钟后使用(根据灭菌效果验证决定灭菌参数。所有的灭菌物品不应超过 2周即用毕, 否则应重新灭菌。 6.1.2消毒:凡检验中使用的器材无法灭菌处理的,使用前必须经消毒处理。如无菌检验室的试管架、电子天平、工作台面、工作人员的手、橡胶吸头等。可采用消毒剂浸泡或擦拭。消毒剂应每月更换,以防止产生耐药菌株。 6.1.3标识:器具的灭菌、消毒后必须做好标识,标明灭菌、消毒时间和使用有效期。 6.2人员、物料进入无菌检验室 6.2.1开启紫外线灯或臭氧发生器进行空间灭菌处理,消毒时间不得少于 30min 。 6.2.2物料进入无菌检验室流程 6.2.2.1脱包:进入无菌检验室的物品若有双重包装的,需将外包装在传递窗 /缓冲间拆除后,传入试验室。 6.2.2.2消毒:进入无菌操作室的所有培养基、供试品等的外表都应采用适用的方法进行消毒处理,以避免将外包装污染的微生物带入无菌检验室。 6.2.2.3传递:查看所有进入无菌检验室的器具上的灭菌、消毒标识, 是否在有效期。符合要求的经传递窗传入无菌检验室。