小鼠急性酒精性肝损伤模型的动态研究
中图分类号：R114
文献标识码：A
文章编号：1002－3127（2010）05－0378－03
·实验研究·
小鼠急性酒精性肝损伤模型的动态研究
赵敏，黄俊明，谭剑斌，周轶琳，杨杏芬，陈瑞仪，胡帅尔，黄建康（广东省疾病预防控制中心毒理所，广东广州510300）
【摘要】目的
建立小鼠急性酒精性肝损伤模型并筛选敏感检测指标。方法
实验分8个组，实验组小鼠采用一
次经口灌胃50%的乙醇（12ml /kg ）后禁食4、6、8、10、12、16、20和24h ，相应对照组灌胃给予纯净水并禁食同等时间。血液生化指标检测包括血中三酰甘油（TG ）、胆固醇（CHOL ）、丙氨酸转氨酶（ALT ）、天冬氨酸转氨酶（AST ）、碱性磷酸酶（AKP ）、胆红素（TBIL ）和Y-谷氨酰转酞酶（Y-GGT ）；16h 实验组和对照组血中高密度脂蛋白（HDL ）和低密度脂蛋白（LDL ）含量；并取动物肝脏，冰冻切片苏丹Ⅲ染色后，观察肝组织脂肪变性程度。结果经口一次灌胃给予小鼠50%的
乙醇后禁食16h ，实验组与对照组比较呈现明显的脂质代谢紊乱，包括血中TG 含量显著升高、HDL 值显著降低、病理肝
组织脂肪变性程度明显加重。结论
在该实验条件下，50%的乙醇经口灌胃一次后禁食16h ，可造成小鼠急性酒精性肝
损伤模型，可通过测定血中TG 、
HDL 含量及肝组织脂肪变性程度等指标进行模型评价。【关键词】酒精；急性；肝损伤
基金项目：保健食品功能评价方法及有关程序修订项目（2009）
作者简介：赵敏，博士，副主任医师，研究方向：食品毒理学与毒性病理学。并列第一作者：黄俊明，主任医师，研究方向：食品毒理学。
目前国内外尚未建立完善的急性酒精性肝损伤的
动物模型，因此探索酒精性肝损伤的机理，筛选对预防酒精性肝损伤有效的保健食品，
建立一个与人类酒精性肝损伤发展病变过程相似的动物模型极为重要。本文对小鼠急性酒精性肝损伤模型的研究，以期建立小鼠急性酒精性肝损伤模型并筛选敏感检测指标。1材料与方法
1.1
动物昆明种雄性小白鼠，10 12周龄、体重30
g 左右，广东省医学动物中心提供，合格证号SCXK （粤）2008-0002。颗粒饲料由广东省医学动物中心提供。动物实验室为SPF 级，实验动物使用许可证号：SYXK （粤）2008-0011，室温（22?2）?，湿度60%
80%。1.2
剂量和分组
用体积分数为50%的乙醇（分析
纯，以蒸馏水稀释）造成肝损伤模型，灌胃量12ml /kg
（乙醇密度0.8g /ml ，折合乙醇的剂量为4.80g /kg ）。实验分8个组，每组10只动物，分别为乙醇灌胃后禁
食4、
6、8、10、12、16、20和24h 处死动物；每组均设阴性对照，
阴性对照组按相同的量灌胃给予洁净水，并与相应实验组禁食同等时间。1.3
观察指标
1.3.1
血液生化学指标检测：各时间点实验结束，动
物均采用戊巴比妥钠麻醉，腹主动脉采血，进行血中三
酰甘油（TG ）、胆固醇（CHOL ）、丙氨酸转氨酶（ALT ）、天冬氨酸转氨酶（AST ）、碱性磷酸酶（AKP ）、胆红素（TBIL ）和Y-谷氨酰转酞酶（Y-GGT ）的检测。16h 实验组和对照组加做血中高密度脂蛋白（HDL ）和低密度脂蛋白（LDL ）的检测；上述指标用日立7600-010全自动生化仪检测，试剂由原仪器生产商供应。1.3.2
病理组织学检查：取新鲜小鼠肝脏左叶做冰冻切片，苏丹Ⅲ染色后镜检并评分。镜检主要观察脂滴在肝脏分布的范围和面积。0分表示肝细胞内脂滴散在，稀少；1分表示含脂滴的肝细胞不超过肝脏面积的1/4；2分表示含脂滴的肝细胞不超过肝脏面积的1/2；3分表示含脂滴的肝细胞不超过肝脏面积的3/4；4分表示肝组织几乎被脂滴代替［1］
。
1.4统计学方法数据用SPSS11.0软件包进行方差和秩和分析，检测水准α=0.05。2结果
2.1
血液生化指标
2.1.1对血中TG 和CHOL 含量的影响：由表1可
见，给予50%的乙醇后禁食4、6、8、10、12、16和20h 时酒精实验组TG 含量与对照组比较有上升趋势，其
中8、10、12、16和20h ，实验组与对照组比较，差异有
统计学意义（P <0.05）。给予50%的乙醇后禁食4 24h ，酒精实验组CHOL 与对照组比较，差异无统计学意义（P >0.05）。
表1给予50%的乙醇后禁食不同时间
小鼠血中三酰甘油的变化
禁食时间（h）对照组乙醇组
4 1.13?0.54 1.40?0.44
60.92?0.30 1.35?0.75
8 1.12?0.39 1.99?0.69*
100.84?0.12 1.58?0.45*
120.83?0.21 1.32?0.49*
160.60?0.26 1.73?0.98*
20 1.00?0.22 2.23?0.58*
240.74?0.280.78?0.19注：与对照组比较，P<0.05；n=10。
2.1.2对血中ALT和AST含量的影响：由表2可见，给予50%的乙醇后禁食4h，酒精实验组ALT和AST 与对照组比较上升，差异有统计学意义（P<0.05）；其余各实验组和对照组比较未见显著性差异。
表2给予50%的乙醇后禁食不同时间
小鼠血中ALT和AST的变化
禁食时间
（h）
ALT AST
对照组乙醇组对照组乙醇组
420.0?3.728.9?6.8*54.2?7.166.4?15.0*
630.0?3.725.9?5.167.3?21.369.5?10.4
817.0?4.518.0?1.550.6?4.647.9?7.2
1014.7?3.316.5?2.650.7?4.947.6?9.1
1216.4?2.120.1?7.065.1?10.064.0?12.6
1619.4?6.717.7?4.366.3?9.160.6?4.3
2016.9?4.514.9?3.754.6?8.356.2?13.9
2416.7?6.316.7?3.255.8?9.557.0?16.6
注：与对照组比较，*P<0.05；n=10。
2.1.3对血中AKP含量的影响：由表3可见，给予50%的乙醇后禁食4和6h，酒精实验组AKP与对照组比较上升，差异有统计学意义（P<0.05）；其余各实验组和对照组比较，未见显著性差异。
表3给予50%的乙醇后禁食不同时间
小鼠血中AKP的变化
禁食时间（h）对照组乙醇组
4129.1?45.0175.5?35.1*
6115.1?29.8163.2?49.4*
8107.7?33.095.1?35.0
1095.2?22.9119.6?41.6
12100.3?38.1107.7?20.9
16108.0?35.1136.6?32.1
20106.0?14.081.8?30.3
24107.2?17.488.4?35.0注：与对照组比较，*P<0.05；n=10。2.1.4对血中TBIL和Y-GGT含量的影响：给予50%的乙醇后禁食4 24h，酒精实验组TBIL和Y-GGT与对照组比较，差异无统计学意义。
2.1.5对血中高密度脂蛋白（HDL）和低密度脂蛋白（LDL）含量的影响：给予50%的乙醇后禁食16h，酒精实验组血中HDL值与对照组比较显著降低（P< 0.05）；血中LDL值实验组与对照组间未见显著差异。结果见表4。
表4给予50%的乙醇后禁食16h对小鼠
血中HDL和LDL的影响
组别剂量（g/kg）HDL（g）LDL（g）
对照组0.00 2.00?0.160.20?0.09
乙醇组 4.80 1.40?0.49*0.19?0.06
注：与对照组比较，*P<0.05；n=10。
2.2肝脏病理组织学变化实验组动物肝脏的病理改变以肝细胞脂肪变性为主（图1）。对照组肝细胞内也可见脂肪变性，伴随禁食时间不同，脂肪变性程度不同
。
冰冻切片，苏丹Ⅲ染色；ZEISS Axioskop40，?10
图1经口灌胃50%乙醇后禁食16h实验组
和对照组肝细胞脂肪变性比较
由图2可见，给予50%的乙醇后禁食4、6、10、12、16和20h，酒精实验组肝脏脂肪变性病理评分值与对照组比较升高，其中16和20h实验组与对照组比较，差异有统计学意义（P<0.05）。
3讨论
目前，酒精的消费量呈全球性猛增，同时酒精性肝病（alcoholic liver disease，ALD）的发病亦见显著增加。本文建立小鼠急性酒精性肝损伤模型目的是为了快速准确地筛选对酒精性肝损伤有辅助保护作用的保健食品。急性酒精性肝损伤的机制为机体大量摄入乙醇后，在乙醇脱氢酶的催化下大量脱氢氧化，使三羧循环障碍和脂肪酸氧化减弱而影响脂肪代谢，乙醇可致α-磷酸甘油增多而促进TG合成，致使脂肪在肝细胞内沉积［2-3］。因此脂质代谢异常为急性酒精性肝损伤的
图2给予50%的乙醇后禁食不同时间肝脏
脂肪变性病理评分值的变化
主要表现。
目前国内外关于急性酒精性肝损伤模型的造模方法有两种：一是用56度白酒灌胃，每次7ml/kg，每日2次，共1 10d；二是腹腔注射一定浓度的乙醇，每次20 ml/kg，每日2次，共1 10d。结果发现制作大鼠急性酒精性肝损伤模型，灌胃法优于腹腔注射，因为后者死亡率高，且不符合人类饮酒习惯［4-6］。在以往本课题组对急性酒精性肝损伤模型的研究中发现，禁食和一次大剂量的乙醇冲击，可形成小鼠急性酒精性肝损伤模型，其机制除与乙醇早期可影响肝脏脂质代谢外，可能与禁食也有关，因为禁食可引起肝脏的脂肪动员［7］。
本次研究是在以往研究的基础上，进行酒精的时间-反应关系研究。本文采用小鼠经口一次灌胃给予50%的乙醇并禁食4 24h，围绕脂质代谢相关指标，检测血中TG、CHOL、HDL和LDL含量及肝细胞脂肪变性程度，选择急性酒精性肝损伤最佳造模时间并筛选敏感指标。结果显示，给予乙醇后禁食4 20h，实验组动物血中TG含量均呈现增高的趋势，其中禁食8 20h，实验组与对照组比较差异有显著性意义（P< 0.05）；然而血中CHOL含量变化不明显，不同禁食时间乙醇实验组和对照组比较未见显著性差异。可见血中TG指标较CHOL敏感，一次大剂量的乙醇冲击可快速引起血中TG含量的显著升高。以此为基础，研究进行了大量重复实验，血中的TG值均获得较好的一致性。因此考虑将血中TG含量作为急性酒精性肝损伤模型的检测指标。
本研究结果亦显示，实验组动物在血脂增高的同时，伴随肝细胞脂肪变性程度的加重。实验组肝细胞脂肪变性程度总体较对照组有升高的趋势，其中16和20h实验组与对照组比较升高明显（P<0.05）。由此可见，肝细胞脂肪变性程度与血中TG含量变化基本保持一致。因此急性酒精性肝损伤模型中，肝组织脂肪变性程度应成为检测的指标之一。在此基础上，将与脂质代谢关系密切的指标血中HDL和LDL纳入检测范围，结果显示给予50%的乙醇后禁食16h，实验组血中HDL值与对照组比较显著降低；但LDL未见显著变化，可能还需增加样本量进行多次验证，以明确LDL指标的敏感性和稳定性。目前研究结果可见，急性酒精性肝损伤动物模型可采用一次经口灌胃给予小鼠50%的乙醇后禁食16h，通过测定血中TG、HDL含量及病理组织学检查肝组织脂肪变性程度等指标来反映模型是否成立。
本研究同时发现，小鼠给予一次大剂量的酒精冲击后，血中与肝脏代谢功能关系密切的酶如ALT、AST 和AKP会呈现一过性的升高，如ALT和AST含量在给予乙醇后4h、AKP在给予乙醇后4和6h均出现显著增高（P<0.05）；但随着时间的延长很快恢复正常。说明小鼠肝脏具有很强的自主修复和代偿能力。由此推测，急性酒精性肝损伤是否也可选择一次大剂量酒精冲击后禁食4h造模，选取血中ALT、AST和AKP等早期敏感肝细胞损伤指标作为观察对象，建立急性酒精性肝损伤模型。
目前《保健食品检验与评价技术规范》采用检测肝组织匀浆中的MDA和GSH的含量来反应乙醇代谢与肝细胞氧化还原之间的关系。因此，在本次研究的基础上，我们将考虑继续进行肝组织匀浆中MDA和GSH含量的检测，将规范做进一步的完善。
参考文献
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1343-1345.（收稿日期：2010－3－14）
急性肝损伤模型的研究进展
急性肝损伤模型的研究进展 作者：刘彦双朱淑霞王永利作者单位：050200 河北省石家庄市卫生学校（刘彦双）;河北武警总队医院（朱淑霞）;河北医科大学药理教研室（王永利） 【关键词】急性肝损伤 肝损伤实验动物模型的复制是进行防治肝损伤药物研究的前提。目前，肝损伤动物模型的复制主要有生物性、免疫性、化学性等方法，生物学方法要求实验条件高且费用昂贵，限制了应用。免疫方法是造成免疫肝损伤，主要用于通过免疫机制而抗肝损伤的药物研究。化学方法则是通过化学性肝毒物质，如四氯化碳、氨基半乳糖、硫代乙酰胺、黄曲霉素等致肝损伤。在我国卫生部颁布的《中药药理实验指导原则》中明确指定应用四氯化碳和氨基半乳糖肝损伤动物模型进行保肝降酶新药的药理实验，应用四氯化碳和氨基半乳糖复制肝损伤动物模型，条件要求低，技术易于掌握，可靠性强，重复性好，是其他任何肝损伤模型无法比拟的，故目前研究抗肝损伤新药常采用四氯化碳和氨基半乳糖复制动物模型。 1 化学性肝损伤动物模型 1.1 四氯化碳性肝损伤四氯化碳（CCl4 ）溶于精致植物油，配制0.1%浓度，按10ml.kg小鼠腹腔注射，12～24h后处死动物。测定血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、总胆红质（TB）、总蛋白（TP）、白蛋白（A）、，肝匀浆脂质过氧化物（LPD）或丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD），谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）或还原性谷胱甘肽（GSH）等反映肝功能及脂质过氧化的指标，并进行组织病理学检查。 关于CCl 4 肝毒的作用机制，存在多种假设，但都一致公认，自由基的形成及引发的链式过氧化反应是其主要机制。CCl 4在体内可经肝微粒体细胞色素P450 代谢激活，生成两个活性自由基（CCl 3 O 2 和Cl）及一系列氧活性物，可与肝细胞质膜或亚细胞结构的膜脂质发生过氧化反应，膜磷脂大量降解，从而破坏细胞膜结构完整性，引起膜通透性增加，最终导致肝细胞死亡［1］。另外，CCl 4 的代谢产物能迅速与细胞成分如胞内脂质、蛋白、核脂质、核蛋白和DNA等多种大分子发生不可逆的共价结合而导致细胞死亡，特别是当自由基作用于DNA时，损伤核糖和碱基，使核酸直接破坏引起DNA链的断裂或DNA 链与蛋白间交联，影响其信息传递功能以及转录和复制特性。在CCl 4 代谢产物引起的脂质过氧化物和共价结合的双重作用下，导致膜脂质流动性降低、钙泵抑制、谷胱甘肽活性抑制、肝微粒和线粒体功能丧失、肝细胞内钙稳态失调及代谢紊乱，引起肝细胞损伤加剧［2］。 1.2 D-氨基半乳糖性肝损伤用生理盐水配制成100g.L的D-氨基半乳糖 （D-galactosanine，D-GalN）溶液，大鼠或小鼠腹腔注射600～900mg.kg，造成急性肝损伤模型，染毒24-48h后处死动物，检查肝功能、病理及脂质过氧化指标［3，4］。Keppler 首先于1968年应用D-GaLN制备大鼠肝损伤模型。D-GaLN在肝细胞内代谢，首先与尿苷酸（UDP）结合成尿苷二磷酸半乳糖（LIDP-GalN），并在肝细胞内聚集，由于这种结合的速度大大超过尿苷酸的生物合成速度，致使尿苷酸耗竭，进而导致依赖其进行生物合成的核酸、糖蛋白和糖脂等物质减少，限制了细胞器的再生及酶的生成和补充，使细胞器受损，肝细胞的结构和功能均出现异常，甚至死亡。另外D-GaLN还可以引起肝细胞内Ca 2+ 增多，
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注射用青霉素钠80万单位：哈药集团制药总厂产品批号：A06086310 葡萄糖氯化钠：成都军区总医院产品批号：07020708 1.5%戊巴比妥钠：自行配制 1.3 主要试剂的配制 1.3.1 75% 酒精： 1.3.2 阿司匹林溶液：选取14片阿司匹林片剂，碾磨 1.3.3 青霉素溶液 8U/ml：用针筒量取10ml生理盐水，溶解80万单位1.3.4 1.5%戊巴比妥钠溶液的配制： 2. 实验方法 2.1 实验大鼠的选取及麻醉标准 该动物模型制备实验对大鼠有严格的限定，选取Spargue-Drawly 大鼠，年龄为77±1d，体重为260 ± g。麻醉标准为雄性65mg/kg, 雌性40mg/kg。 2.2 实验大鼠手术 2.2.1 大鼠抓取、麻醉及固定：抓取手术大鼠，腹腔注射麻药。大约三分钟左右，大鼠出现站立不稳，醉酒样步态。四肢固定与手术台上，松紧适中，手术过程中注意观察四肢是否出现瘀血，注意按摩。此时，可用大头针刺激大鼠尾巴，如果大鼠的反应不强烈，预示着可以开始手术。 2.2.2 大鼠打击区域的选定及手术：首先剪除大鼠胸椎区域毛，而后均匀喷洒碘伏溶液两倍备皮区域。在大鼠背部脊柱有一个明显的凸起，经过大量的解剖实验证明该凸起为T11，从该凸起区域剖开皮肤2－3cm，逐步暴露筋膜、肌肉直到椎骨。由该凸起出发向前数两个节段即T9，用手术刀小心刮去T9椎骨上的肌肉。随后进行椎板切除术，移植暴露到硬脊膜。 2.2.3 打击装置的安装固定、调整及记录电极的挟持：该打击装置利用物体自由落体运动，打击金属杆从6.25mm,12.5mm,25mm,50mm四个不同的高度，以初速度为0，自由下落打击暴露的脊髓，压迫脊髓。根据具体打击高度安装非接触式位移传感器，位于打击杆的圆盘上，距离小于30mm，并限定金属杆恰恰接触（未压缩）时为零高度。电位变化记录夹，红色夹子挟持于T11棘突，黑色夹子挟持于T9同一水平面的肌肉和皮肤，在T13与T12椎骨之间的缝隙处，插入银针約1cm，白色夹子挟持银针顶端。 非接触式位移传感器信号输出线导入BZF-Ⅲ型电涡流式前置变换器并由此导入BL-420E+第二号通道。电位变化记录夹采集信号导入BL－420E+第一号通道。在BL-420实验系统软件选择实验通道输入信号，一号通道选择神经放电，二号通道选择 2.2.4 脊髓打击、金属杆和脊髓电位变化记录：从注射麻药60±1min后，释放选定高度的金属杆对脊髓进行打击。电涡流传感器将会在空间上20微米，时间上20微秒采集金属杆在空间上物理位移所有点，并且输出一系列的电压信号，经过信号转换器输入电脑，程序将会自动生成一条能反应整个金属杆的速度－位移曲线。电位记录将会从三个不同的地点采集脊髓受到打击时所释放的不规则的电位变化。 2.2.5 大鼠术后处理：打击完毕后，立即用消毒的手术缝合针线分别对肌肉、筋膜和皮肤进行缝合，每缝合完一层时用酒精对其消毒，缝合完皮肤
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大鼠早期酒精性肝损伤诱导模型的建立及观察[摘要目的探讨大鼠早期酒精性肝损伤模型的建立方法，为研究早期酒精性 肝损伤的发病分子机制提供理想动物模型。方法24只雄性SD大鼠随机分为模型组（16只）和对照组（8只）。对照组饮用自来水；模型组饮用7%～56%梯度递增的白酒12周。取材前24 h和12 h，分别以56%白酒急性灌胃后处死大鼠。每天记录大鼠食用饲料量及饮用量；每周称量大鼠体重。采用全自动生化分析仪测定大鼠血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、三酰甘油（TG）、总胆固醇（TC）含量。观察大鼠肝脏病理学和形态学改变。结果12周后，模型组大鼠体重增长率为（61.67±1.98）% ，明显低于对照组的（160.09±3.12）% （P＜0.05），肝脏指数模型组（3.74±0.54）高于对照组（2.85±1.26）（P 32%～65%；F3：>65%～75%；F4>75%。 1.3.6.2酒精性肝炎依据炎症程度分为4级（G0～G4）：G0无炎症；G1腺泡3带呈现少数气球样肝细胞，腺泡内散在个别点灶状坏死和中央静脈周围炎；G2腺泡3带明显气球样肝细胞，腺泡内点灶状坏死增多，出现Mallory小体，门管区轻至中度炎症；G3腺泡3带广泛的气球样肝细胞，腺泡内点灶状坏死明显，出现Mallory小体和凋亡小体，门管区中度炎症伴和（或）门管区周围炎症；G4融合性坏死和（或）桥接坏死。 1.3.6.3酒精性肝纤维化依据纤维化的范围和形态分为4期（S0～S4）：S0无纤维化；S1腺泡3带局灶性或广泛的窦周/细胞周纤维化和中央静脉周围纤维化；S2纤维化扩展到门管区，中央静脉周围硬化性玻璃样坏死，局灶性或广泛的门管区星芒状纤维化；S3腺泡内广泛纤维化，局灶性或广泛的桥接纤维化；S4肝硬化。 1.4统计学方法 采用SPSS 14.0统计学软件进行数据分析，计量资料用均数±标准差（x±s）表示，两组间比较采用t检验；等级资料比较采用秩和检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。 2结果 2.1一般情况 各组大鼠均无死亡。对照组大鼠活泼，毛发光泽，食量正常。模型组食欲减退，毛色发黄，光泽度差，部分大鼠精神状态较差。模型组饮用液体量和食量均比对照组少。 2.2两组大鼠体重增长率及肝脏指数的比较 模型组与对照组体重均有上升，与对照组比较，模型组体重增长较慢，后期
暴露式与非暴露式气管滴注方法建立小鼠急性肺损伤模型及其效果比较
［文章编号］ １６７１－５８７Ⅹ（２０１２）０３－０４１４－ ０５［收稿日期］ ２０１２－０１－ ０４［基金项目］ 国家自然科学基金资助课题（８１１０００３０ ）［作者简介］ 苗雨丹（１９７７－） ，女，吉林省白城市人，讲师，医学硕士，主要从事临床解剖学方面的研究。［通信作者］ 李 波（Ｔｅｌ：０４３１－８５６１９４６６，Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｂｏ＠ｊ ｌｕ．ｅｄｕ．ｃｎ）；董春玲（Ｔｅｌ：０４３１－８８７９６８２０，Ｅ－ｍａｉｌ：ｄｏｎｇｃｈｕｎｌｉｎｇ ＠ｇｍａｉｌ．ｃｏｍ）网络出版时间： ２０１２－０４－１７ ０９：１３网络出版地址： ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／２２．１３４２．ｒ．２０１１１１０１．０９１１．００４．ｈｔｍｌ暴露式与非暴露式气管滴注方法建立小鼠急性 肺损伤模型及其效果比较 苗雨丹１，董春玲２，刘 玲１，夏长丽１，苏 略１，李 波１ （１．吉林大学白求恩医学院人体解剖学系，吉林长春１３００２１； ２．吉林大学第二医院呼吸内科，吉林长春１３００４１ ）［摘 要］ 目的：比较暴露式与非暴露式气管滴注方法建立的小鼠急性肺损伤（ ＡＬＩ）模型的各种指标，确立更有效的气管滴注方法。方法：４５只健康雄性Ｃ５７／ＢＬ６小鼠随机分为对照组、非暴露组和暴露组，每组１５只。以 脂多糖（ＬＰＳ）作为刺激物，非暴露组和暴露组小鼠分别采用非暴露式和暴露式气管滴注方法建立ＡＬＩ模型，造 模后２４ｈ进行支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）生化指标检测、ＢＡＬＦ细胞分类计数、肺湿／干重（Ｗ／Ｄ） 比值测定以及肺组织病理形态学观察。结果：暴露组小鼠造模的成功率（１００％）高于非暴露组（８６．７％） 。与对照组比较，非暴露组和暴露组小鼠ＢＡＬＦ中总蛋白浓度、碱性磷酸酶（ＡＬＰ）和乳酸脱氢酶（ＬＤＨ） 活性、中性粒细胞数量以及肺Ｗ／Ｄ比值显著升高（Ｐ＜０．０５）；暴露组小鼠ＢＡＬＦ总蛋白浓度、ＡＬＰ和ＬＤＨ活性、中性粒细胞数量以及肺Ｗ／Ｄ比值明显高于非暴露组（Ｐ＜０．０５ ）。非暴露组小鼠主要表现为肺间质水肿；暴露组小鼠主要表现为渗出性肺水肿。结论：暴露式气管滴注方法对于建立小鼠ＡＬＩ模型更有效。 ［关键词］ 气管滴注；急性肺损伤；脂多糖；小鼠 ［中图分类号］ Ｒ５６３ ［文献标志码］ Ａ Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ ｏｆ ｍｏｕｓｅ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ａｃｕｔｅ ｌｕｎｇ ｉｎｊｕｒｙ ｗｉｔｈｅｘｐｏｓｅｄ ａｎｄ ｎｏｎ－ｅｘｐ ｏｓｅｄ ｉｎｔｒａｔｒａｃｈｅａｌ ｉｎｓｔｉｌｌａｔｉｏｎｓａｎｄ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓ ｃｏｍｐ ａｒｉｓｏｎＭＩＡＯ Ｙｕ－ｄａｎ１，ＤＯＮＧ Ｃｈｕｎ－ｌｉｎｇ２，ＬＩＵ ｌｉｎｇ１，ＸＩＡ Ｃｈａｎｇ －ｌｉ １，ＳＵ Ｌｕｅ１，ＬＩ Ｂｏ１（１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ａｎａｔｏｍｙ，Ｎｏｒｍａｎ Ｂｅｔｈｕｎｅ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｊｉｌｉｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇ ｃｈｕｎ１３００２１，Ｃｈｉｎａ；２．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｓｅｃｏｎｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｊｉｌｉｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇ ｃｈｕｎ １３００４１，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｃｏｍｐａｒｅ ｔｈｅ ｖａｒｉｏｕｓ ｉｎｄｅｘｅｓ ｏｆ ｍｏｕｓｅ ｍｏｄｅｌｓ ｏｆ ａｃｕｔｅ ｌｕｎｇ ｉｎｊｕｒｙ（ＡＬＩ）ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ｂｙｅｘｐ ｏｓｅｄ ａｎｄ ｎｏｎ－ｅｘｐｏｓｅｄ ｉｎｔｒａｔｒａｃｈｅａｌ ｉｎｓｔｉｌｌａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｃｏｎｆｉｒｍ ｗｈｉｃｈ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｍｏｒｅ ｓｕｉｔａｂｌｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｆｏｒｔｙ－ｆｉｖｅ ｍａｌｅ ｍｉｃｅ ｗｅｒｅ ｒａｎｄｏｍｌｙ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ，ｎｏｎ－ｅｘｐｏｓｅｄ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ｅｘｐｏｓｅｄ ｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ ｆｉｆｔｅｅｎ ｍｉｃｅ ｉｎ ｅａｃｈ ｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅ ｍｉｃｅ ｉｎ ｂｏｔｈ ｎｏｎ－ｅｘｐｏｓｅｄ ａｎｄ ｅｘｐ ｏｓｅｄ ｇｒｏｕｐｓ ｗｅｒｅ ｉｎｓｔｉｌｌｅｄ ｗｉｔｈｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃａｒｉｄｅ（ＬＰＳ）ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ＡＬＩ ｍｏｄｅｌｓ ｂｙ ｎ ｏｎ－ｅｘｐｏｓｅｄ ａｎｄ ｅｘｐｏｓｅｄ ｉｎｔｒａｔｒａｃｈｅａｌ ｉｎｓｔｉｌｌａｔｉｏｎｓ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｉｎｄｅｘｅｓ ｉｎ ｂｒｏｎｃｈｏａｌｖｅｏｌａｒ ｌａｖａｇｅ ｆｌｕｉｄ（ＢＡＬＦ），ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｃｅｌｌ ｃｏｕｎｔｉｎｇ ４１４第３８卷 第３期２０１２年５月吉 林 大 学 学 报 （医 学 版）Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｊｉｌｉｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｅｄｉｔｉｏｎ）Ｖｏｌ．３８Ｎｏ．３ Ｍａｙ ２０１２
小鼠脊髓损伤半切模型的建立及评价
中国组织化学与细胞化学杂志 CHINESE JOURNAL OF HISTOCHEMISTRY AND CYTOCHEMISTRY 第27卷第5期2018年10月 V ol .27.No .5October .2018 〔收稿日期〕2018-04-11 〔修回日期〕2018-10-08 〔基金项目〕国家自然科学基金（青年）资助项目 （81100919）；山东省自然科学基金（面上项目）（ZR2015HM030）；山东省医药卫生科技发展计划项目（2015WS0439） 〔作者简介〕张向红，女(1970年)，汉族，实验员 *通讯作者(To whom correspondence should be addressed)：haq6888@https://www.wendangku.net/doc/f52504924.html, 小鼠脊髓损伤半切模型的建立及评价 张向红1，王立言1，郭雨霁1，韩爱卿2* （1山东大学医学院组织胚胎学教研室，济南 250014；2济南市妇幼保健院妇产科，济南 250001） 〔摘要〕目的 建立一种稳定可靠、重复性强的脊髓损伤半切动物模型，模拟人类脊髓半切伤，为后期脊髓损伤的治疗研究提供可靠的动物模型。方法 60只健康昆明小鼠随机分为手术组和假手术组。实验小鼠麻醉后俯卧位固定，以T10胸椎棘突为中心，暴露T9~11棘突和椎板；在体式显微镜下，咬除T10棘突及椎板，暴露该阶段脊髓；用虹膜剪尖端将脊髓半切至脊髓后正中静脉右缘。于造模后1d 、3d 、5d 、1w 、2w 、3w ，采用双盲BMS 评分法，评价各组小鼠后肢运动功能。并取损伤局部脊髓组织进行结晶紫染色、Caspase3免疫组织化学染色及超微结构检测，以观察脊髓损伤后的组织学变化。结果 手术组实验动物均表现出损伤侧后肢瘫痪，BMS 评分低于7分；脊髓损伤局部形态学观察显示该方法能很好地实现脊髓半横切。结论 小鼠T10脊髓损伤半切模型建立成功，死亡率低，可重复性强。 〔关键词〕脊髓损伤；模型；半切伤；小鼠 〔中图分类号〕R651.2 〔文献标识码〕A DOI ：10.16705/ j. cnki. 1004-1850. 2018. 05. 010 Establishment and evaluation of mouse spinal cord hemi-section injury model Zhang Xianghong 1, Wang Liyan 1, Guo Yuji 1, Han Aiqing 2* (1Department of Histology and Embryology, School of Medicine, Shandong University, Jinan 250014; 2 Department of gynecology and obstetrics, Maternal and children health hospital of Jinan city, Jinan 250001, China) 〔Abstract 〕Objective To establish a stable, reliable and well repeatable animal model of spinal cord hemi-section injury in mice which can mimic human spinal cord hemi-section injury and provide a reliable animal model for study on therapy of spinal cord injury in the later stage. Methods 60 healthy Kunming mice were randomly divided into operation group and sham-operation group.The experimental mice were fixed in the prone position after anesthesia, then the T9-11 spinous processes and lamina were exposed as centered on the T10 thoracic spinous processes. Under the stereo microscope, the T10 spinous processes and lamina were removed thus the spinal cord was exposed. Then a hemi-section of the right hemi-cord at T10 to the right margin of the median vein behind the spinal cord was performed with the tip of iris scissors. The Basso Mouse Scale (BMS) scoring method for locomotion was used to assess the degree of the hind limbs’ motor dysfunction at 1d , 3d, 5d, 1w, 2w, 3w after establishment of spinal cord hemi-section injury model. And then the injured spinal cord was taken out for crystal violet staining, Caspase 3 immunohistochemical staining and ultrastructural analysis to observe the morphological changes after spinal cord injury. Results In the experimental group, the hind limbs of all injured mice were under paralysis along with the injured side of the spine cord. BMS score was less than 7 points. The local morphological observation showed that this method met the criteria of spinal cord hemi-section. Conclusion The T10 spinal cord hemi-section injury model in mice was successfully established, which had low mortality and high repeatability. 〔Keywords 〕Spinal cord injury; model; hemi-section; mice 随着世界各国经济水平的发展，脊髓损伤（spi-nal cord injury, SCI ）发生率呈现逐年增高的趋势。在发达国家，SCI 的发生率大约为13.3~ 45.9人/百万人/年。SCI 的患者有极高的致残率和死亡率，严重影响患者生活质量，一直是临床急救医学关注的课题[1,2]。为便于临床研究与诊治，建立脊髓损伤模型并对其研究已势在必行。目前，由脊髓外伤和脊髓内部病变等原因引起的脊髓半切综合征（Brown-Séquard Syndrome ）病例日渐增多[3-6]，现多数学者着眼于脊髓打击伤或挤压伤模型的构建[7, 8]，但这些模型与临床上脊髓半切伤的受力及损伤机理明显不
肝损伤动物模型的建立和应用
万方数据
万方数据
肝损伤动物模型的建立和应用 作者：王福根， 孙静霞 作者单位：浙江杭州市第六人民医院,杭州市,310014 刊名： 中国药房 英文刊名：CHINA PHARMACY 年，卷(期)：2006,17(9) 被引用次数：12次 参考文献(10条) 1.Xu JQ;Lee G;Wang HM Limited role for CXC chemokines in the pathogenesis of a-naphthylisothiocyanate-induced liver injury[外文期刊] 2004(03) 2.黄正明;杨新波;曹文斌化学性及免疫性肝损伤模型的方法学研究[期刊论文]-解放军药学学报 2005(01) 3.Ayoub SS;Botting RM;Goorha S Acetaminophen-induced hypothermia in mice is mediated by a prostaglandin endoperoxide synthase 1 gene-derived protein[外文期刊] 2004(30) 4.Yasuda M;Okabe T;Itoh J Differentiation of necrotic cell death with or without lysosomal activation:application of acute liver injury models induced by carbon tetrachloride(CCl4) and dimethylnitrosamine(DMN)[外文期刊] 2000(10) 5.Horn TL;Bhattacharjee A;Schook LB Altered hepatis mrna expression of apoptotic genes during dimethylnitrosamine exposure[外文期刊] 2000(02) 6.Wang T;Shankar K;Ronis M Potentiation of thioacetamide liver injury in diabetic rat is due to induced CYP2E1[外文期刊] 2000(02) 7.Kin WH;Hong F;Radaeva S Statl plays an essential role in LPS/ D-galactosanine-induced liver apoptosis and injury 2003(06) 8.Kaneko Y;Harada M;Kawano T Angmentation of Va14NKT cell-mediated cytotexicity by interleukin4 in an autocrine mechanism resulting in the development of concanavalina-indued hepatitis[外文期刊] 2000(01) 9.赵冬梅;刘耕陶双环醇对刀豆蛋白A所致小鼠肝细胞核DNA损伤保护作用[期刊论文]-中华医学杂志 2001(14) 10.邱英锋;缪晓辉;蔡雄卡介苗加脂多糖建立的大鼠急性免疫性肝损伤模型的研究[期刊论文]-西北国防医学杂志2004(05) 本文读者也读过(4条) 1.王志彬药物性肝损害的特点分析-附70例报告[期刊论文]-医学信息（下旬刊）2010,23(9) 2.吴玉强.邓家刚.钟正贤.杨兴.WU Yu-qiang.DENG Jia-gang.ZHONG Zheng-xian.YANG Xing铁包金提取物抗肝损伤作用的研究[期刊论文]-时珍国医国药2009,20(4) 3.禄保平.白娟.江若霞.Lu Baoping.Bai Juan.Jiang Ruoxia以常用中西药物建立药物性肝损伤动物模型的分析与探讨[期刊论文]-河南中医学院学报2008,23(4) 4.马丽娜.华碧春药物性肝损伤动物模型研究进展[期刊论文]-亚太传统医药2011,07(2) 引证文献(12条) 1.徐伟.宋倩倩.苗双.刘宁宁.马健.王振勇青蒿素对CCl4致犬急性肝损伤模型抗氧化指标的时效影响[期刊论文]-兽药与饲料添加剂 2009(4)
脊髓损伤动物模型的制备与评价
脊髓损伤动物模型的制备与评价【摘要】脊髓损伤(SCI)的修复是医学界面临的一大难题，虽然现在还没有理想的治疗方法，但是世界各地的许多学者已对脊髓损伤的病理机制和再生修复进行了深入的研究。脊髓损伤动物模型的制备和评价方法对脊髓损伤相关研究具有很重要的意义,本文将回顾目前常用的脊髓损伤模型制备和评价的方法。 【关键词】脊髓损伤；动物模型；评价 【Abstract】Objective restore the neural function after spinal cord injury is a hard work.Though there are no promising therapies,the scientists all over the world have made great effort in studying the pathological meschasim ofspinal cord injury and spinal cord regenerate.The establishment of animal model and evaluating methods are playing an important role in these researches.This article will review applications about how to make and evluate animal models of spinal cord injury. Key words:spinal cord injury,animal model,evaluation 1 脊髓损伤动物模型的制备
SD大鼠脊髓损伤模型的制备及功能的评定
SD大鼠脊髓损伤模型的制备及功能的评定作者：程方圆沈程肖贵虎杨明英杨金梅罗川南 指导老师：荣成 （四川省成都市成都医学院，610500） 摘要目的：通过对SD大鼠脊髓顿挫损伤（Spinal cord injury，SCI）模型进行功能评价，观察SD大鼠脊髓恢复情况。方法：将SD大鼠随机分成实验组、对照组两组，将实验组用 Allens法进行T9脊髓顿挫损伤，制成大鼠脊髓损伤模型。对所有大鼠的后肢运动功能进行BBB评分和脊髓组织学观察。结果：实验组大鼠BBB评分一周后最高达到14分，最低达到3分。BBB功能评分显示实验组大鼠运动功能明显低于对照组，并逐渐恢复或增强。结论：脊髓顿挫导致大鼠后肢功能障碍，通过BBB评分显示，大鼠后肢功能逐渐增强。 【关键词】脊髓顿挫损伤；后肢运动功能；BBB评分 Objective: observe the recovery situation of the SD rats through the abortive on spinal cord injury in SD rats (spinal cord injury, SCI) function evaluation model .methods: SD rats were divided into two groups randomly, including normal group and experimental group. SD rat model of acute spinal cord injury were established by using Allens method at 9th spinal cord, evaluate the hind limb motor of all rats and observe the histology of spinal. Result: the experimental rats’ BBB score up to 14 points after one week, the lowest reach 3 points. The BBB score of experimental rat s showed that the rats’ motor function was significantly lower than the normal rats, and gradually restored or enhanced. Conclusion: aborting spinal cord leads to hind limb dysfunction, the BBB score showed that the hind limb function of rats is enhancing gradually。Key words: spinal cord injury; hind limb motor function; BBB score 前言：脊髓损伤是由于各种原因引起的脊髓结构和功能的损害，是脊柱损伤最严重的并发 症，往往导致损伤节段以下肢体严重的功能障碍，是中枢神经系统严重的致残性疾病。随着世界各国经济水平的发展，脊髓损伤发生率呈现逐年增高的趋势。脊髓损伤不仅会给患者本人带来身体和心理的严重伤害，还会对整个社会造成巨大的经济负担。针对脊髓损伤的预防、治疗和康复已成为当今医学界的一大课题。有研究表明脊髓损伤后有一定修复能力，为此我们设计了此实验。通过对照实验将SD大鼠随机分为脊髓损伤与否两组大鼠，对脊髓损伤的大鼠模型进行功能评价，从而找到更好的治疗脊髓损伤的办法。经过实验，我们发现SD大鼠在脊髓损伤后功能逐步恢复。 1 材料与方法 1.1主要仪器 鼠台、橡胶圈、玻璃分针、烧杯、10g金属棒、粗剪刀、手术器械、婴儿磅秤、缝合针、棉线、棉签、注射器、脊髓打击装置。 1.2 主要试剂 3.6%水合氯醛、青霉素、葡萄糖、1.5%戊巴比妥溶液。 1.3 实验动物 健康成年雌性大鼠10只，体重200±50g。饲养两周后进行实验。
小鼠急性酒精性肝损伤动物模型造模方法优化
小鼠急性酒精性肝损伤动物模型造模方法优化 【摘要】目的：探索急性酒精性肝损伤小鼠动物模型的造模方法。方法：通过三个实验比较不同剂量、不同灌酒方法、不同灌酒时间动物醉酒率、死亡率和血清转氨酶的不同情况。结果：一次灌酒0.28ml/10g体重小鼠可达中度醉酒，醉酒率70%，死亡率40%；采用小间隔分次灌服法后小鼠醉酒率60%，死亡率降为20%；连续灌酒时，较高剂量组第三天开始出现死亡现象并逐渐加重；血清转氨酶上升的高峰在第5天，此后逐渐下降。结论：白酒灌胃法造急性酒精性肝损伤模型时，采用中等剂量、分次灌胃法可降低死亡率，实验时间以5~7天比较适宜。 【关键词】急性酒精性肝损伤；小鼠；动物模型 随着人们对酒精性肝脏损害重视的提高以及相应实验研究的广泛开展，相关动物模型尤其是急性酒精性肝损伤动物模型在实际实验应用中的问题日益突出。我们在参考文献介绍的方法[1]制造急性酒精性肝损伤动物模型的实验中，对造模实际操作时的一些具体问题和检测指标的时间选择等有所比较和认识，现报告如下，以供同仁参考，在造模上少走弯路，节省经费。 1 实验材料 1.1 实验动物昆明种小鼠84只，体重24g~27g，合格证号分别为豫医动字第410115号，均由河南省实验动物中心提供。 1.2 实验试剂ALT试剂盒，迈克公司生产，批号100122；AST试剂盒，迈克公司生产，批号100103。 1.3 实验仪器雷勃微量移液器，芬兰雷勃集团中国区总部；DZKW型电子恒温水浴锅，余姚市亚星仪器仪表有限公司；752 N型分光光度计，上海第三分析仪器厂。 2实验方法 2.1 实验1普通级昆明种小鼠50只，21g~24g，雌雄各半。将50只小鼠按随机排列表分为5组，每组10只，雌雄各半。其中4组分四个剂量级 3.2灌酒时间与醉酒率、死亡率 实验1中，随着灌酒天数的增加，各组动物醉酒率变化不很大，但M3、M4两组的死亡情况日益严重，尤其是M4组，动物死亡数目过多。 3.3 灌酒方式与醉酒率、死亡率 实验2采用分次灌服的方式，仍观察醉酒情况，计算醉酒率和死亡率。结果
LPS诱导小鼠急性肺损伤TLR4及TNF―α表达
LPS诱导小鼠急性肺损伤TLR4及TNF―α表 达 【摘要】目的：研究脂多糖（LPS）诱导的小鼠急性肺损伤机制。方法：实验分为正常对照组、模型组及抗体组；正常对照组小鼠腹腔腔内注射等量0.9%NaCl。模型组腹腔内注射LPS（4 mg/kg）。抗体组在造模前8～10 h，应用小鼠Toll样受体4/髓样分化蛋白2（TLR4/MD2）复合物抗体腹腔内注射50 μg。各组均在造模5 h后留取血和肺组织，采用细菌内毒动态浊度法检测血浆LPS的含量，HE染色判定小鼠肺组织病理变化，RT-PCR测定小鼠肺组织TLR4基因表达，Western-blot测定TLR4蛋白表达；ELISA检测小鼠血清中TNF-α的水平。结果：和正常对照组比较，模型组及抗体组小鼠血浆内毒素含量显著升高（P<0.05），模型组小鼠肺组织HE染色呈ALI表现；和模型组比较，抗体组TLR4 mRNA、蛋白及TNF-α的表达明显下调（P<0.05）。结论：急性肺损伤机制可能与LPS和TLR4受体结合介导TNF-α信号途径相关。 【关键词】脂多糖；急性肺损伤； Toll样受体4；肿瘤坏死因子-α Expression of Toll Like Receptor 4 and TNF-α on Acute Lung Injury Induced by Lipopolysaccharide in
Mice/GU Zhi-long，JIANG Hua-mao，HU Zhan-sheng.//Medical Innovation of China，2015，12（24）：016-019 【Abstract】 Objective：To study mechanism of acute lung injury induced by lipopolysaccharide in mice.Method：The mice were randomly divided into normal control group， model group and antibody group.Control group was given 0.9%NaCl. Model group of acute lung injury was induced by LPS at a dose of 4 mg/kg. Aitibody group mice were given anti-TLR4/MD antibody（50 μg）before 8-10 h of building model group. Blood and lung tissue were taken after modeling in 4 hours. A mount of endotoxin in plasma was measured by kinetic turbidimetric assay.Degree of lung damage was grated by HE staining. Expressions of TLR4 at both mRNA and protein levels were measured by RT-PCR and Western Blot.Content of TNF-α in mice serum was detected by ELISA.Result：Compared with the control group，endotoxin in serum，in model group and ayibody group significantly increased（P<0.05），with obvious ALI lung damages in model https://www.wendangku.net/doc/f52504924.html,pared with the model group，antibody group presented that expression of TLR4 mRNA
小鼠脊髓半横切
一、实验目的： 观察小白鼠脊髓半横切之后的表现，加深对脊髓功能的认识。 二、实验原理： 脊髓是高位中枢与外周的感觉、运动功能联系的传导道。在正 常情况下痛觉、温度觉、部分触-压的传导路径先交叉再上行。 肌肉本体感觉和部分触-压觉传导路径先上行再交叉。脊髓损 伤时，外周血管平滑肌紧张性下降，血管扩张。 三、实验器材： 小白鼠、乙醚、蛙板、青霉素空瓶、药棉、手术缝针、丝线、 解剖刀、剪刀、眼科手术刀、镊子。 四、实验步骤： 1.用乙醚麻醉小白鼠； 2.把小白鼠俯卧和固定在改装了的蛙板上，剪去胸腰部背面的 毛，在正中处用解剖刀纵切皮肤，画一个1.5cm长的切口； 3.紧贴第1——3节腰椎的棘突，用解剖刀切断椎上的肌腱，并 用药棉分离肌肉，暴露椎骨； 4.用镊子夹住第二腰椎，另一手拿剪刀剪去棘突和椎弓，暴露白 色的脊髓； 5.在脊髓背面正中有一条纵向的血管，以此为标志，用眼科手术
刀将一半脊髓从中央向外侧完全切断，然后缝合皮肤； 6.松绑四肢，待其苏醒后进行下列观察小白鼠在实验桌上运动状 况，用镊子夹捏脊髓损伤一侧的后肢，然后用镊子夹捏脊髓未 损伤一侧的后肢。 五、实验结果： 当上述手术成功时，可观察到如下结果： （1）小白鼠在运动时，与脊髓损伤同侧的后肢不能运动。 （2）用镊子夹捏不会运动的后肢时，小白鼠发出吱吱的叫声。（3）镊子夹捏脊髓未被损伤一侧的后肢，小白鼠却没有叫声。 以上结果说明： （1）由大脑发出的运动指令到达脊髓后，通过脊髓白质的神经纤维继续向下传送，脊髓两侧的运动神经纤维大都在本侧里行走（即不交叉到对侧）。在脊髓被损伤的一侧，运动指令无法传到横切以下的部位，该侧后肢得不到运动指令，因而不能随意运动；脊髓未遭横切的一侧，大脑发出的运动指令，可以通过脊髓白质的神经纤维传到后肢肌肉，所以这一侧后肢运动如常。 （2）脊髓损伤一侧的后肢虽瘫痪，但皮肤的痛觉仍存在，这是由于脊髓内接受皮肤感觉信息的神经纤维是交叉到对侧（脊髓未被损伤一侧），然后问上传导到大脑，产生痛觉引起小白鼠鸣叫；同理，会运动一侧后肢的皮肤痛觉反应不存在，是由于传导痛觉信息的神经纤维交叉到脊髓被横切一侧，传导纤维被切断，痛觉信息无法上传到大脑，因而不产生痛觉反应。
酒精性肝损伤实验动物模型研究进展
龙源期刊网 https://www.wendangku.net/doc/f52504924.html, 酒精性肝损伤实验动物模型研究进展 作者：陶伦 来源：《中国医学创新》2011年第05期 【关键词】酒精性肝损伤；动物模型 酒精性肝损伤即酒精性肝病（Alcoholic Liver Disease，ALD），是一种进行性发展严重危害身体健康的疾病。在世界范围内ALD发病率呈逐年上升趋势，为了深入研究其发病机制，筛选有效的防治药物，寻找理想的实验动物模型是十分必要的。本文就建立ALD动物模型研究进展作一简要综述。 1 急性酒精性肝损伤动物模型 赵静波等［1］按0.7 ml/（100 g?d）56度白酒灌胃大鼠，2次/d，酒精腹腔注射组按2 ml/（100 g?d）注射18%的乙醇溶液2次，持续10 d。结果表明白酒灌胃优于酒精腹腔注射。赵敏等［2］采用12 ml/kg 1次灌胃50%乙醇后禁食4、6、8、10、12、16、20和24 h，结果表明禁食16 h后模型组血中TG含量显著升高，HDL值显著降低，病理肝组织脂肪变性程度明显 加重。 2 慢性酒精性肝损伤动物模型 2.1 Liber-Decarli模型 Lieber-Decarli等［3］提出全营养素的酒精液体食料，研究发现酒精性脂肪肝的严重程度与食料中脂肪含量有关。此模型简便易行，形成率高及稳定性好，但动物须单独饲养，成本较高，不能保证较恒定的酒精摄入量。 2.2 Tsukamato-French模型 Tsukamato等［4］给大鼠手术置入胃管，持续注入含乙醇的液体食料。研究发现液体食料中脂肪量及种类与ALD形成有密切关系。该模型病变符合进行性ALD演变规律，造模效果好，实验重复率高，但酒精不符合正常摄入过程，技术要求高、维 护复杂、成本高，且至今尚未形成酒精性肝硬化模型［5］。朱强等［6］改进Tsukamoto-French的方法，将胃管直接经背部引出。该模型可根据实验对肝脏损伤的不同要求随时调整剂量和造模时间，造模成功率高、模型稳定、成本低。 2.3 直接饮用酒精王晓红等［7］给SD大鼠自由饮用酒精饮料，酒精浓度从5%开始逐渐递增至40%，每个浓度均持续1周，40%持续4周，造模时间共12周。此造模方式与酒精性 脂肪肝患者发病过程相似，简单易行，但不易控制酒精摄入量，难以保持血醇浓度，造模时间较长，成功率不高。