HPTLC应用报告
C.03 柴胡属药材皂苷类成分的HPTLC指纹图谱鉴别
柴胡属部分药用植物入药部位外形图（从上到下，从左到右）1～4.柴胡（B. chinense）；5.狭叶柴胡（B. scorzonerifolium）；6.三岛柴胡（B. falcatum）；
7.大叶柴胡（B. longiradiatum）；8.锥叶柴胡（B.bicaule）；9.西藏柴胡（B.marginatum var. stenophyllum）
目的：
展示了采用HPTLC技术对中药柴胡属（Bupleurum spp.）药材及其有毒和混淆品
种进行色谱指纹图谱定性鉴别的具体方法。
供试液制备：
取柴胡药材粉末0.5 g，加0.2%吡啶甲醇40 mL，冷浸15 min，80℃回流提取30
min，滤过，滤液于80℃蒸干，残渣用少量水溶解后通过C18小柱，先后用水，30%
甲醇和甲醇各15 mL洗脱，收集甲醇部分洗脱液，80℃蒸干，残渣用甲醇溶解，
做成1 mL溶液作为供试品溶液。
标准品（可选）：
取1 mg柴胡皂苷a、柴胡皂苷d、柴胡皂苷c、柴胡皂苷f、柴胡皂苷b2分别溶解于
1 mL甲醇中。
色谱条件：
固定相HPTLC 硅胶60 高效预制薄层板(Merck), 10x10 cm 或20x10 cm大小。
展开剂氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水（20：40：20：10）10℃下分层的下层溶液。
点 样供试品溶液3 μL；对照品1 μL，条带状点样，8 mm条带宽度，最小2 mm条带
间距，点样原点距底边8 mm。
展 开点样后放置于P2O5干燥器中真空干燥2h，展开8cm，取出，挥干溶剂。
检 测喷以2%对二甲氨基苯甲醛（DMAB）的含20%硫酸和20%磷酸乙醇溶液，105℃
加热至斑点显色清晰，置白光和紫外光灯(366 nm)下检视。
结果：
T:18℃, RH:50%
1 2 3 4 S1-4 S1-456789101112 13 14 15 S1-4
图1 柴胡药材皂苷类成分HPTLC指纹图谱（上图：白光；下图：366 nm）
1～4,15.北柴胡；S1-4.柴胡皂苷f＋b2＋a＋d；5～8.大叶柴胡；9～12.锥叶柴胡；13.西藏柴胡，14.南柴胡
将显色后获得的荧光薄层色谱图导入CHROMAP指纹图谱分析软件1.51版（珠海科曼中药研究有限公司，https://www.wendangku.net/doc/f34017363.html,），生成灰度扫描图并积分。将26批北柴胡样品的图谱进行计算筛选，共得到24个特征峰构成的北柴胡HPTLC指纹图谱共有模式，见图2。不同品种柴胡的代表性样本的指纹图谱见图3。
图2 北柴胡HPTLC指纹图谱共有模式
各类样本与北柴胡HPTLC指纹图谱共有模式相比，南柴胡各特征峰的比例较接近北柴胡，但绝对含量偏低。有毒的大叶柴胡缺少部分峰群，此区域构成了大叶柴胡指纹图谱的显著特征。锥叶柴胡与指纹图谱共有模式相比，第20号峰较突出，而且小极性成分明显较多。西藏柴胡中11号之前的色谱峰及19号峰明显比其他的品种高。三岛柴胡则与北柴胡指纹图谱共有模式很相似。小叶柴胡和竹叶柴胡样本为全草，只能检测到少数痕量色谱峰。综上分析，不同品种的柴胡在各特征色谱峰的含量及比例上均具有不同程度的差异，构成了各自不同的平面色谱指纹特征。
00.250.50.751
Rf 00.250.50.751
Rf
+ Smoothed
3
00.250.50.751
Rf
+ Smoothed
00.250.50.751
Rf
三岛柴胡西藏柴胡
00.250.50.75 Rf 00.250.50.751
Rf
+ Smoothed
00.250.50.751
Rf
+ Smoothed
00.250.50.751
Rf
小柴胡(地上部分) 竹叶柴胡(地上部分)
图3 不同品种柴胡的薄层色谱指纹图谱
备注：
1、文献报道柴胡所含的皂苷类成分较多且结构较相似，很难达到较好的分离。本试验采取了
以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水（20：40：20：10）10℃下分层的下层溶液为展开剂的展开系
统，不同品种的柴胡所含各皂苷类成分均在薄层色谱图上得到较好的分离。但柴胡皂苷c
和f两个成分斑点仍重叠在一起。
2、文献[1]报道柴胡皂苷d易受热或遇酸分解为次生产物柴胡皂苷b2，因此本试验采取了用
0.2%吡啶甲醇溶液在80℃下回流与蒸干，减少了原生柴胡皂苷的分解。
致谢：
药材图片拍摄：颜玉贞。药材样品和对照品提供：王忠东、董诚明、王德群、杨云等教授。试验人：刘和平。
参考文献：
[1] Run-tao Tian, Pei-shan Xie, He-ping Liu. Evaluation of traditional Chinese herbal medicine: Chaihu (Bupleuri
Radix) by both high-performance liquid chromatographic and high-performance thin-layer chromatographic
fingerprint and chemometric analysis. Journal of Chromatography A, 1216 (2009) 2150–2155
[2] Ariyoshi Shimaoka et al. Saponins Isolated from Bupleurum falcatum L.; Components of Saikosaponin b [J].
J.Chem.Society, Perkin Trans.，1975，1：2043-2048