体外培养人卵巢癌细胞株SKOV__省略__DDP并探讨卵巢癌顺铂耐药机制_栗宝华

体外培养人卵巢癌细胞株S K O V-3、S K O V-3/D D P并探讨卵巢癌

　顺铂耐药机制

栗宝华　胡东晓　浙江大学医学院附属妇产科医院　310006

赵丽嫣(指导)　大连医科大学附属第一医院

中国图书分类号　R713.6 文献标识码　B 文章编号　1001-4411(2005)10-1195-03

【摘　要】　目的:通过对人卵巢癌细胞株S K O V-3、S K O V-3/D D P体外培养,探讨卵巢癌顺铂耐药机制。方法:用四甲基偶氮唑蓝(M T T)法、流式细胞仪测定S K O V-3、S K O V-3/D D P细胞顺铂耐药指数及细胞周期变化,并分析细胞内B c l-2蛋白及细胞膜上F a s、F a s-L表达情况。结果:相对于S K O V-3细胞;S K O V-3/D D P细胞顺铂耐药指数约为4倍,其细胞周期主要分布于G0/G1期、S期,细胞内B c l-2蛋白表达及细胞膜F a s、F a s-L水平明显升高。结论:细胞主要分布于潜伏期、细胞内凋亡抑制蛋白B c l-2水平升高及细胞膜F a s、F a s-L表达增加,可能是卵巢癌顺铂耐药细胞株S K O V-3/D D P顺铂耐药的部分机理。

【关键词】　卵巢癌　顺铂　细胞培养　耐药性

I n v e s t i g a t e t h e m o l e c u l a r m e c h a n i s m o f t h e c i s p l a t i n-r e s i s t a n t w i t h h u m a n e p i t h e l i-

a l o v a r i a n c a n c e r c e l l l i n e s k o v-3a n d s k o v-3/D D Pc u l t u r e di nv i t r o

L I B a o-h u a,H U D o n g-x i a o,Z H A OL i-y a n(d i r e c t i o n).T h e O b s t e t r i c s a n d G y n e c o l o g yo f A f f i l i a t e dH o s p i t a l, M e d i c a l C o l l e g e o f Z h e j i a n g U n i v e r s i t y,H a n g z h o u,310006Z h e j i a n g,C h i n a

〔A b s t r a c t〕　O b j e c t i v e:T o i n v e s t i g a t e t h e m o l e c u l a r m e c h a n i s mo f t h e c i s p l a t i n-r e s i s t a n t w i t h h u m a n e p i t h e l i a l o v a r i a n c a n c e r c e l l l i n e s k o v-3a n d s k o v-3/D D Pc u l t u r e d.Me t h o d s:T h e i n h i b i t i o n o f s k o v-3a n d s k o v-3/D D Pc e l l s g r o w t hw e r e m e a s u r e d b y m e t h y l t h i-a z o l y l t e t r a z o l i u m(M T T)r a p i d p h o t o c o l o r i m e t r i c a s s a y,r e s p e c t i v e l y.T h e r e s i s t a n c e i n d e x w a s c a l c u l a t e db y s k o v-3/D D P(A)/s k o v-3(A).C e l l c y c l e o f t w o c e l l l i n e s w a s a c c o u n t e db y f l o wc y t o m e t r y.I n a d d i t i o n,e x p r e s s i o n o f F a s、F a s-Li nc e l l m e m b r a n e a n d i n t r a-c e l l u l a r B c l-2p r o t e i n w e r e a n a l y z e d b y f l o wc y t o m e t r y.R e s u l t s:I n c o n t r a s t t o s k o v-3c e l l,t h e r e s i s t a n c e i n d e x o f s k o v-3/D D P c e l l w a s n e a r l y f o u r f o l d.C e l l c y c l e o f s k o v-3/D D Pc e l l l i n e m a i n l y d i s t r i b u t e dG0/G1a n dS p h a s e,b u t t h o s e o f s k o v-3c e l l l i n e p r i n c i p a l l y d i s-t r i b u t e dS p h a s e.e x p r e s s i o no f F a s、F a s-Li n c e l l m e m b r a n e a n di n t r a c e l l u l a r B c l-2p r o t e i n o f s k o v-3/D D Pc e l l l i n e o b v i o u s l y e n h a n c e d m o r e t h a nt h o s e o f s k o v-3c e l l l i n e.C o n c l u s i o n:D o r m i e n t p e r i o dc e l l i n c r e a s e da n de x p r e s s i o no f F a s、F a s-La n dB c l-2p r o t e i ne n-h a n c e d m a y b e t h e p a r t i a l m e c h a n i s m s o f t h e c i s p l a t i n-r e s i s t a n t o f s k o v-3/D D Pc e l l l i n e.

〔K e yw o r d s〕　O v a r i a n c a n c e r;C i s p l a t i n;C e l l c u l t u r e d;D r u gr e s i s t a n c e

以铂类为基础的一线化疗是治疗卵巢癌的主要手段,但由于铂类耐药的存在,极大地影响了卵巢癌患者对化疗的敏感程度,限制了其临床疗效。探讨铂类耐药机制并寻找高效、低毒的耐药逆转剂是当前研究的热点。卵巢癌顺铂耐药机制复杂,是多基因、多因素综合作用的结果〔1〕。本文旨在通过对人卵巢癌细胞株S K O V-3及其顺铂耐药株S K O V-3/D D P 体外培养,从细胞水平探讨顺铂耐药机制,以期为临床卵巢癌耐药患者治疗提供基础实验依据。

1　材料与方法

1.1　材料。人卵巢癌细胞株S K O V-3来源于卵巢癌患者腹水,为美国G.T r e m p e于1973年建立,购自北京医科大学妇

科教研室;顺铂耐药株S K O V-3/D D P采用顺铂中等浓度、间歇作用方法建株〔2〕。四甲基偶氮唑蓝(M T T)、顺铂(D D P)为美国S i g m a公司产品。碘化丙啶(P I)购自F l u k a公司,为D N A标准试剂盒。B c l-2、F a s、F a s-L单克隆抗体皆为流式细胞仪专用试剂,为P h a r m i g e n公司出品,购自北京晶美生物有限公司。1.2　方法。

1.2.1　细胞培养。卵巢癌细胞株S K O V-3、S K O V-3/D D P 在含10%小牛血清的R P M I1640培养液中,于37℃、含5%

C O

2

的培养箱中贴壁生长,待培养至对数生长期后,0.25%胰酶消化、过滤制成单细胞悬液。

1.2.2　顺铂对细胞抑制情况及耐药指数。按上述培养方法得到的单细胞悬液,以每孔2×104个细胞数加入96孔培养板

中,置于37℃、含5%C O

2

的培养箱中培养,第2天待大部分细胞贴壁后,换培养基。对照组加入空白培养液;实验组加入经倍比稀释的D D P,浓度范围在6.25～200μg/m l,每一浓度设4个平行孔,培养48h后,每孔加入20μl M T T溶液(浓度为5m g/m l),于培养箱中继续培养4h,吸弃上清液,每孔加二甲基亚砜200μl,用酶标光度仪在波长为595n m处测定每孔的吸光度(A)值。每个实验重复3次。耐药指数=耐药细胞(A)值/敏感细胞(A)值。

1.2.3　细胞周期测定。培养后的S K O V-3、S K O V-3/D D P 细胞,消化、收集制成含1×106个/m l的单细胞悬液1m l, P B S冲洗3次,300目尼龙网过滤,P I染色30m i n后置流式

·

1195

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栗宝华等　体外培养人卵巢癌细胞株S K O V-3、S K O V-3/D D P并探讨卵巢癌顺铂耐药机制　第10期

细胞仪(F C M,美国B e c t o n D i c k i n s o nF A C S C a l i b u r公司生产)分析,重复3次。

1.2.4　细胞内B c l-2蛋白及F a s、F a s-L测定。细胞周期测定获得的单细胞悬液,①B c l-2蛋白测定:单细胞悬液加破膜剂10μl,30℃水箱孵育10m i n后,P B S冲洗3次,加入B c l-2单克隆抗体20μl,孵育30m i n后,F C M待检。②F a s、F a s-L测定:悬液加F a s单克隆抗体20μl,孵育30m i n后, F C M待检;悬液加F a s-L单克隆抗体20μl,孵育20m i n后, P B S冲洗3次,加入生物素标记的异硫氰酸荧光素10μl孵育20m i n后,上机待检。每个实验重复3次。

1.3　统计学处理。采用S P S S10.0统计软件对计量资料进行单因素方差分析,用L S D法进行两两比较;实验数据用均数±标准差(x±s)表示。

2　结果

2.1　细胞抑制情况及S K O V-3/D D P细胞顺铂耐药水平。S K O V-3、S K O V-3/D D P细胞对顺铂的半数抑制率(I C50)分别为20.239μg/m l、80.47μg/m l;相对于S K O V-3细胞,其顺铂耐药株S K O V-3/D D P细胞耐药指数约为4倍。

2.2　细胞周期分布。S K O V-3细胞主要分布于S期(79.070±10.257)%;而S K O V-3/D D P细胞主要分布于G0/G1期(4

3.94±10.011)%和S期(47.497±2.295)%;两两比较,差异均有极显著性(P<0.01)。

2.3　细胞内B c l-2蛋白表达。S K O V-3、S K O V-3/D D P细胞内B c l-2蛋白表达分别为(2.323±0.667)%、(1

3.713±

4.303)%;两两比较,有极显著性差异(P<0.01)。

2.4　细胞膜F a s、F a s-L表达测定。S K O V-3/D D P细胞膜

F a s、F a s-L表达较S K O V-3细胞为高,两两比较,均有显著性差异(P<0.05),见附表。

附表　S K O V-3、S K O V-3/D D P细胞膜F a s、F a s-L表达组别F a s F a s-L S K O V-3细胞31.49±1.41442.64±2.045

S K O V-3/D D P细胞42.76±2.72853.50±0.717

3　讨论

3.1　细胞周期改变与顺铂耐药。细胞生长、分裂必须依次经过细胞周期的各个阶段完成,而增殖失控,细胞失控性生长,是肿瘤细胞的重要生物学特性之一。细胞周期能否启动受多种因素调节,特别是在G0/G1～S期间有一个调控点,称之为“限制点”(r e s t r i c t i o n p o i n t),细胞一旦通过此点,即使在缺乏生长因子持续刺激的条件下,也可依次完成整个细胞分裂周期。多种化疗药物通过调节细胞周期发挥抗癌作用,顺铂为卵巢上皮癌最常用的化疗药物,它的细胞毒作用主要是铂类与核蛋白连接,形成铂类药物与D N A链外或链内交联,以及D N A-蛋白质交叉联结,引起D N A损伤,使细胞阻滞于G0/G1期不能进入S期,导致细胞死亡。V a i s m a n等对敏感株及顺铂耐药株体外培养发现,接触低浓度顺铂时,细胞分裂轻度受影响并很快恢复正常,较高浓度时,则出现可逆的S 期占优势,伴有G1/S期细胞停滞,极限剂量时,出现S期阻滞,认为顺铂引起的细胞周期紊乱主要在S期,并与D N A损害程度一致〔3〕。本研究发现,相对于S K O V-3细胞,其顺铂耐药株S K O V-3/D D P细胞多数分布于G0/G1期和S期,细胞主要处于潜伏期,增殖缓慢,S期细胞数目减少,从而避开顺铂主要作用的细胞周期S期,可能是S K O V-3/D D P细胞顺铂耐药机理之一,提示促进细胞增殖药物有可能增加S K O V-3/D D P细胞对顺铂作用的敏感性。

3.2　细胞内B c l-2蛋白表达与顺铂耐药。凋亡受阻是肿瘤细胞的另一生物学特性。化疗药物杀伤肿瘤细胞主要是通过诱导细胞凋亡机制,其中包括D N A损伤、激活凋亡启动程序,最终导致肿瘤细胞死亡,多种药物耐药均与凋亡作用抑制有关〔4〕。B c l-2家族是线粒体通路调节细胞凋亡的主要因子,以B c l-2为代表,B c l-2为凋亡抑制蛋白,主要位于线粒体膜上,它可抑制线粒体膜通透性转运孔的开放和维持线粒体跨膜电位的稳定,进而阻止线粒体内凋亡诱导因子(a p-o p t o s i s-i n d u c i n g f a c t o r,A I F)和细胞色素C的释放,抑制细胞凋亡〔5〕,此外B c l-2还在P53通路的上游发挥作用,通过下调P53蛋白表达,抑制P53依赖的凋亡信号途径。本实验利用F C M测定细胞内B c l-2蛋白表达情况发现,S K O V-3/ D D P细胞内B c l-2蛋白表达较S K O V-3细胞为高,两两比较,差异有显著性,提示较高的B c l-2蛋白表达可增强肿瘤细胞对多种凋亡促进因子的抗性,抑制细胞凋亡,从而提高肿瘤细胞对多种化疗药物的耐药性,这也可能是S K O V-3/

D D P细胞顺铂耐药的又一机理。

3.3　细胞膜F a s、F a s-L表达与顺铂耐药。F a s又称A p o-1/

C D95,属Ⅰ型跨膜糖蛋白肿瘤坏死因子(T N F)受体家族成员,为一种细胞膜死亡受体(d e a t hr e c e p t o r,

D R),F a s可与其配基F a s-L结合诱导细胞凋亡。l i z u k a等用免疫组化方法检测F a s阳性表达的卵巢癌顺铂耐药细胞株,发现7/9个F a s 阳性细胞株可诱导出细胞凋亡,认为F a s在卵巢癌顺铂耐药中发挥重要作用〔6〕。本研究发现,S K O V-3/D D P细胞膜F a s 表达水平较S K O V-3细胞为高,提示高表达的F a s可能为S K O V-3/D D P细胞顺铂耐药的机理之一,抗F a s抗体可与F a s结合通过诱导细胞凋亡而克服S K O V-3/D D P细胞的顺铂耐药。F a s-L位于细胞膜上,是Ⅱ型膜糖蛋白,可自细胞表面自行分泌脱落成可溶性分子进入血循环。F a s-L主要存在于激活的T淋巴细胞表面,大多数肿瘤细胞表面也有F a s-L 表达。本实验利用F C M测定细胞膜上F a s-L表达发现,S K-O V-3/D D P细胞膜F a s-L表达水平较S K O V-3细胞为高,两两比较,差异有显著性。据报道人体的B淋巴细胞、T淋巴细胞及自然杀伤细胞都有F a s表达,特别是激活的T淋巴细胞,其F a s的表达水平更高,当这些表达F a s的免疫细胞与表达F a s-L的癌细胞结合后,可能会激活F a s、F a s-L信号传导途径,引起免疫细胞的凋亡,使得癌细胞逃避机体内免疫系统的杀伤机制〔7〕。本研究发现,顺铂耐药株较敏感株表达更高的F a s-L,这可能是耐药细胞在体内更易逃避机体防御机制,易复发的原因之一。

4　参考文献

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·中国妇幼保健2005年第20卷

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c a r c i n o m a.B r J C a n c e r,1999,81:469

7　M o u n t z J D,Z h o u T,S uXe t a l.T h e r o l e o f p r o g r a m m e d c e l l d e a t h a s a n

e m e r g i n g n e wc o n c e p t

f o r t h e p a t h o

g e n e s i s o f a u t o i m m u n e d i s e a s e s.C l i n

I m m u n o l I m m u n o p a t h o l,1996,80:2

(2004-09-06　收稿)

〔编校　邹庆红〕

环氧合酶-2抑制剂N S398对人卵巢癌细胞系C A O V3细胞增殖的影响

王纯雁　辽宁省肿瘤医院妇科　110042

梁　伟　辽宁省本溪市中心医院　

中国图书分类号　R711.75 文献标识码　A 文章编号　1001-4411(2005)10-1197-03

【摘　要】　目的:探讨环氧合酶-2抑制剂N S398对人卵巢癌细胞系C A O V3细胞增殖的影响。方法:采用M T T法观察

N S398对C A O V3的增殖抑制情况;流式细胞仪测定N S398对C A O V3细胞周期的影响;放射免疫方法检测N S398作用前后

P G E2量的变化。结果:N S398对C A O V3细胞的增殖具有抑制作用,并显示出明显的时间和剂量的依赖性;N S398使C A O V3细

胞发生细胞周期的G1期阻滞,并抑制C A O V3细胞分泌P G E2。结论:N S398抑制P G E2的分泌,抑制C A O V3细胞增殖,使细

胞增殖停留在G1期。

【关键词】　卵巢癌　环氧合酶-2抑制剂　肿瘤细胞　培养

T h e e f f e c t o f c y c l o o x y g e n a s e-2s e l e c t i v e i n h i b i t o r N S398o nt h e c e l l p r o l i f e r a t i o no f t h e h u m a n o v a r i a nc a r c i n o m a c e l l l i n e C A O V3

W A N GC h u n-Y a n.D e p a t m e n t o f G y n e c o l o g i c a l O n c o l o g y,L i a o n i n gT u m o r H o s p i t a l,S h e n y a n g,110042L i a o n i n g,

C h i n a

L I A N GW e i.T h e C e n t r a l H o s p i t a l o f B e n x i,L i a o n i n g

〔A b s t r a c t〕　O b j e c t i v e:T o i n v e s t i g a t e t h e e f f e c t o f c y c l o o x y g e n a s e-2(c o x-2)s e l e c t i v e i n h i b i t o r N S398(o n eo f n o n-s t e r o i d a l a n t i-i n f l a m m a t o r y d r u g s)o n t h e c e l l p r o l i f e r a t i o n o f t h e h u m a n o v a r i a n c a r c i n o m a c e l l l i n e C A O V3.Me t h o d s:O b s e r v e t h e i n h i b i t i v e e f f e c t o f N S398o nC A O V3b yM T Ta s s a y;M e a s u r e t h e e f f e c t o f N S398o n t h e c e l l c y c l e o f C A O V3c e l l l i n e b y F l o wC y t o m e t r y(F C M);D e t e c t t h e c h a n g e o f t h e q u a n t i t y o f P G E2b e f o r e a n d a f t e r u s i n g N S398b y r a d i o i m m u n i t y a s s a y.R e s u l t s:C A O V3c e l l l i n e p r o l i f e r a t i o n w a s c o n c e n-t r a t i o n-a n d t i m e-d e p e n d e n t l y w h i c h m a y b e i n h i b i t e d b y N S398;N S398c a u s e d G1a r r e s t o f C A O V3c e l l l i n e a s s o c i a t e d w i t h i n c r e a s i n g o f t h e D N Ac o n t e n t i nG1s t a g ea n dd e c r e a s i n go f t h eD N A c o n t e n t i nSa n dG2/M s t a g e.N S398r e d u c e dP G E2s e c r e t e db yC A O V3c e l l l i n e.C o n c l u s i o n:N S398i n h i b i t e dt h e q u a n t i t y o f P G E2s e c r e t e db y C A O V3c e l l l i n e a n d c a u s e d i t s p r o l i f e r a t i o n t o a r r e s t i n G1s t a g e.

〔K e yw o r d s〕　O v a r i a n c a r c i n o m a;C y c l o o x y g e n a s e-2i n h i b i t o r;T u m o r c e l l s c u l t u r e

卵巢癌早期诊断困难,晚期治疗效果差,其5年生存率始终徘徊在25%～30%〔1〕。有必要探讨新的、有效的卵巢癌防治措施。

近年来的研究显示,环氧合酶-2(c y l o x y g e n a s e-2, C O X-2)在多种人类癌组织及人癌细胞系中表达增高,C O X -2选择性抑制剂—氮-2,环己氧-4,硝基苯—甲基磺胺(N S398)具有抗人胃癌、胰腺癌、结肠、直肠癌等的癌细胞增殖活性,诱导癌细胞凋亡的作用〔2〕。我们的研究也证明,人卵巢癌细胞系C A O V3有C O X-2蛋白表〔3〕,本研究旨在探讨C O X-2抑制剂N S398对人卵巢癌细胞系C A O V3的增殖抑制情况,为N S398防治卵巢癌提供实验依据。

1　材料与方法

1.1　材料来源。人卵巢上皮浆液性癌细胞系C A O V3由中国医科大学卫生部重点细胞生物实验室提供,N S398为美国C a y m a n公司产品,R P M l l640为美国L i f e T e c h公司产品,胰蛋白酶为D I F C O产品,四甲基偶氮唑蓝(M T T)和碘化丙啶(p r o p i d i u mi o d i d e,P I)为美国S i g m a公司产品,125I-P G E

2

放射免疫药盒购自苏州医学院血栓病研究所。

1.2　方法

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王纯雁等　环氧合酶-2抑制剂N S398对人卵巢癌细胞系C A O V3细胞增殖的影响　第10期

卵巢癌肿瘤干细胞标记物研究的新进展_肖远

★ 基金项目：国家自然科学基金项目资助（81201730）；中国博士后科学基金面上资助（2012MS21565）；湖南省科学技术厅科技计划项目（2010FJ3078）；湖南省卫生厅科研基金项目（132011-088）。 作者简介：肖远，男，副主任药师，研究方向：肿瘤药学，E-mail ：csxy531@https://www.wendangku.net/doc/fe4129591.html,。 * 通讯作者：曾勇，男，博士，副主任药师，研究方向：肿瘤药理学、生物医学，E-mal ：valzeng@https://www.wendangku.net/doc/fe4129591.html,。 ●综 述● 卵巢癌肿瘤干细胞标记物研究的新进展★ 肖　远，伍　奕，任华益，曾　勇* （中南大学湘雅医学院附属肿瘤医院 药学部，湖南　长沙，410013） 摘要：卵巢癌是女性生殖系统一种常见的恶性肿瘤，一般在治疗的初始阶段患者能够获得较好的疗效，但在治疗后期，部分患者会复发，这与卵巢癌干细胞之间有着密切的联系。肿瘤干细胞在肿瘤组织中数量稀少，对常规化疗耐药，能够形成新的肿瘤细胞，是导致肿瘤复发的根源之一。近年来，人们针对卵巢癌干细胞的鉴定与分离开展了大量的研究，分析了该类细胞特征性的标志物。目前已被证实的卵巢癌干细胞标志物主要有CD133、乙醛脱氢酶、CD44、CD117、CD24等。本文旨在对这些卵巢癌干细胞的标志物的相关研究及其在卵巢癌的诊断与治疗中的作用进行综述。 关键词：肿瘤干细胞；卵巢癌；标志物； 中图分类号：R737.31　文献标识码：A　文章编号：2095-1264（2013）03-0172-04 d oi ：10.3969/j.issn.2095-1264.2013.041 Advances of Biomarkers of Ovarian Cancer Stem Cells ★ Xiao Yuan, Wu Yi, Ren Huayi, Zeng Yong * (Pharmacy Department of the Tumor Hospital Affiliated to Xiangya School of Medicine, Central South University, Changsha, Hunan, 410013, China) Abstract: Ovarian cancer is a common malignant tumor in the reproductive system of women, for which at the time of initial treatment we can obtain complete clinical remission. However, some will relapse in the later stage of the disease. This phenomenon may be correlated to the cancer stem cell. The cancer stem cell possesses several properties, which includes rare cells, resistance to chemotherapy, ability to arise the daughter cells. It is one of the roots of neoplasm recurrence. In recent years, a huge amount of study has been carried out on the method of isolation and identification of the cancer stem cells, as well as on the markers of such kind of cells. This review will focus on the biomarkers of the ovarian cancer stem cell and their application in the diagnosis and therapy of the disease. Key words: Cancer stem cells; Ovarian cancer; Biomarker 前言 肿瘤干细胞占肿瘤细胞总数的0.01～0.1%，具有无限增殖的潜能，能够通过对称分裂与不对称分裂两种形式进行增殖，形成新的肿瘤干细胞、肿瘤初始细胞、肿瘤初始样干细胞、肿瘤前体细胞等［6-8］。目前的研究认为，肿瘤干细胞可能起源于正常干细胞的基因突变。因此，在肿瘤原发病灶中寻找表达干细胞标志物的肿瘤细胞成为研究肿瘤干细胞的一种途径。卵巢癌与其他肿瘤一样，具有明显的异质性。在肿瘤组织中，存在各种表达不同 标志物的肿瘤细胞，且这些细胞具有不同的增殖、转移能力及对化疗和放疗的敏感性［1-5］。传统观念认为卵巢癌的发生是因为月经导致上皮组织的周期性破坏，并导致肿瘤的发生。近期病理学研究发现，许多卵巢癌发生于输卵管的末梢，甚至可能发生于子宫内膜的损伤处［9-10］。但是，由于卵巢癌的确切起源目前还不足够明确，上述方法具有一定的争议。大部分的卵巢癌肿瘤干细胞表现为对化学治疗以及放射治疗的耐受性，且被认为是卵巢癌复发的根源，但卵巢癌肿瘤干细胞的特异性标志目前

卵巢癌化疗方案有哪些

一、卵巢癌化疗 目前，国内常用的一线化疗方案为 铂类药物+环磷酰胺（PC方案）； （此方案的副作用是消化道副作用及血液系统的副作用） 铂类药物+环磷酰胺+阿霉素（PAC方案）。 （此方案的副作用是骨髓抑制，恶心呕吐，末梢神经毒性、肾功能损害、脱发等） 国外常用的一线化疗方案为：泰素+顺铂（TP方案）;泰素+卡铂。 （此方案的副作用是消化道副作用及血液系统的副作用） 二、肺癌化疗方案列举如下： CAP方案： 环磷酰胺400-1000mg/m2，静注，第1天；阿霉素40-50mg/m2,静注，第1天；顺铂40-80mg/m2（水化），静滴，第1天。 每3-4周为一个周期，每2-3个周期为1疗程。本肺癌化疗方案有效率为6-39%。 此方案主要的毒副作用是造血功能抑制、恶心、呕吐、脱发。 EP方案： VP-16每次100mg,静滴，第1-5天；顺铂60-80mg/m2（水化），静滴，第1天。 每4周为一个周期，每2-3个周期为1疗程。本肺癌化疗方案有效率为17-39%。 此方案最主要的毒副作用是骨髓抑制和恶心呕吐。 CE方案： 卡铂每次300mg静滴，第1天； VP-16每次100mg,静滴，第1-5天； 每3-4周为一个周期，每2个周期为1疗程。本肺癌化疗方案有效率为40% 此方案的常见副作用是胃肠道反应和骨髓抑制。 MVP方案： 丝裂霉素6-8mg/m2，静注，第1天； 长春地辛3mg/m2,静注，第1、8天； 顺铂40-80mg/m2（水化），静滴，第1天。 每3-4周为一个周期，每2-3个周期为1疗程。本肺癌化疗方案有效率为35-53%。 此方案常见的副作用是骨髓抑制，消化道反应及神经系统等。 VP方案： 鬼臼噻吩甙100mg,静滴，第1-3天；顺铂40mg，静滴，第1-3天。 每3周为一个周期，每3个周期为1疗程。本肺癌化疗方案有效率为31% 此方案常见的副作用是骨髓抑制和消化道反应。 MIC方案： 丝裂霉6mg/m2静注，第1天； 异环磷酰胺1.5g/m2，静滴，第1-5天（同时用美斯钠a40mg,静注，在滴注异环磷酰胺时给1次，以后每4小时给1次，全天共给3次，连用5天）； 顺铂20mg，静滴，第1-5天。 每3-4周为一个周期，每2-3个周期为1疗程。

卵巢癌病理学分类

卵巢癌病理组织学分类在临床上主要有以下几种： 1、生发上皮肿瘤 生发上皮肿瘤约占卵巢肿瘤的2/3，一般来自卵巢表面的生发上皮。生发上皮是覆盖在卵巢表面的粘膜，它有多功能分化的潜能，故可形成浆液性肿瘤、粘液性肿瘤和宫内膜样肿瘤。 2、性索-间质肿瘤 性索-间质肿瘤占卵巢肿瘤的6%。大多为功能性，向卵巢型细胞分化的有颗粒细胞、卵泡膜细胞；向睾丸型细胞分化的有支持细胞、间质细胞。该类肿瘤较为复杂，各种细胞可单独组成相应的肿瘤，卵巢型或睾丸型的两种细胞可出现在同一肿瘤内，可见四种细胞类型同时在肿瘤上。 3、类固醇细胞肿瘤 类固醇细胞肿瘤也称脂质细胞瘤由类似于黄体细胞、间质细胞、肾上腺上皮质细胞的圆形或多边形细胞组成的肿瘤。由于约占40%肿瘤细胞内不含丰富的脂质，故又称类固醇细胞肿瘤。 4、生殖细胞肿瘤 生殖细胞肿瘤比较常见。一般生发上皮肿瘤多见，恶性者高达15%左右。生殖细胞肿瘤可见于任何年龄，但年轻妇女较多常见见，大约60%的卵巢肿瘤为生殖细胞来源，其中1/3为恶性。 5、纤维瘤是最常见的间叶来源的肿瘤，其次是平滑肌瘤、血管瘤，比较少见的是神经源性肿瘤、脂肪瘤、淋巴管瘤、软骨瘤、骨瘤等等。 6、转移性肿瘤 卵巢是恶性肿瘤常见的转移部位，大约有10%的卵巢肿瘤是转移性的，最常见的是乳腺和生殖道或来自消化器官中的胃肠道的转移癌。较为常见的是来自消化器官（胃、肠）的癌，直接浸润、种植或经淋巴道转移到腹膜后及腰部淋巴结，再经淋巴管道转移到卵巢；其次是由子宫颈、宫体或输卵管等处的癌扩散而来，有鳞癌、腺癌或绒毛膜上皮癌等；乳腺癌也可通过血行转移到卵巢。转移癌多为实性，且多属双侧性，结构特点多与其原发癌一样。

卵巢癌铂类药物抵抗解决方案

卵巢癌铂类药物抵抗解决方案 *导读：卵巢癌的病死率居妇科恶性肿瘤首位，由于起病隐匿，70%以上的患者就诊时已属晚期。手术和化疗的综合应用是目前治疗中、晚期卵巢癌，尤其是上皮性卵巢癌的首选疗法。铂类药物抵抗则是卵巢癌治疗失败的主要原因。 卵巢癌的病死率居妇科恶性肿瘤首位，由于起病隐匿，70%以上的患者就诊时已属晚期。手术和化疗的综合应用是目前治疗中、晚期卵巢癌，尤其是上皮性卵巢癌的首选疗法。铂类药物抵抗则是卵巢癌治疗失败的主要原因。为了解决这一问题，临床肿瘤学家提出了多种解决方案，现选择2003年以后公开的文献介绍如下： 美国克里夫兰大学医院基于卵巢癌细胞实验证明，吉西他汀和顺铂有协同作用，就吉西他汀和顺铂联合对铂类药物难控制和多药物难控制的卵巢癌和腹膜癌病人的治疗效果进行了评价。方法:21天一个疗程，在第1-8天静脉注射顺铂(30mg/m2)后，注射吉西他汀(750mg/m2)，30分钟内注射完毕。若第8天嗜中性细胞计书数1000/mm3或血小板计书数75,000/mm3，第8天的注射取消。若出现嗜中性白血球减少性败血症和严重的血小板减少

症，则逐步减少吉西他汀的剂量(600、400、300mg/m2)。结果：对参与研究36位铂类药物和紫杉醇耐药患者中的35位进行了治疗效果的评价，15位患者有反应(42.9%)，11位有部分临床反应，4位完全有反应。对治疗有反应的患者，中位响应持续时间为11个月，所有患者无疾病进展的中位时间间隔6个月(1-14个月)，中位生存时间12个月。结果表明，吉西他汀和顺铂治疗方法对顺铂耐药患者有积极的作用。 加州希望之城国家医学中心检测了复发的卵巢癌患者接受26小时连续环孢菌素A(CSA)和固定剂量的卡铂(CBDCA)治疗的 反应及CSA对CBDCA代谢的影响。试验设计：在体外利用耐铂的A2780细胞，通过克隆形成分析，检测持续的CAS处理对CBDCA 耐药的逆转作用;在临床II期研究，对患者每3周进行一次CBDCA(AUC4)和CSA治疗，检测患者的CSA和CBDCA的代谢动力学。结果：CSA预培养铂耐药的A2780细胞逆转CBDCA的耐药性与剂量及时间相关。23位患者接受58个疗程的CBDCA/CSA治疗，对治疗有部分反应的有1例，病情稳定有8例。毒性与I期临床试验结果相似，有骨髓抑制，恶心，呕吐和头痛。CSA中位灌注量为1253+/-400g/ml。药物代谢动力学研究表明CSA不增加CBDCA的AUC(药时曲线下面积)。

卵巢癌细胞系来源外来体的获得及形态特征观察

卵巢癌细胞系来源外来体的获得及形态特征 观察 作者：李奇灵，辛晓燕，卜宁，李亚玲，于月成，方静 【关键词】卵巢癌 摘要：目的从8910、TC1、SKOV3、CAOV和3AO卵巢癌细胞系培养上清液中获得外来体。方法分别培养8910、TC1、SKOV3、CAOV和3AO卵巢癌细胞系，收集上清液，通过多步离心和超滤等方法分离出外来体。电镜下进行形态学观察。结果 8910和3AO细胞系培养上清液中分离出外来体，置于透射电子显微镜下观察，可见具有明显异质性的圆形或椭圆形小囊泡，直径约30-90nm，有完整的包膜。TC1、SKOV3和CAOV细胞系培养上清液中未分离出外来体。结论 8910和3AO卵巢癌细胞系可分泌外来体，两种细胞系来源的外来体在形态和大小上无明显差别，有可能作为卵巢癌免疫治疗的潜在抗原。 关键词：卵巢癌；免疫治疗；外来体；细胞系 Obtainment and morphologic characteristics of exosomes acquired from ovarian cancer lines ABSTRACT: Objective To obtain exosomes from the cell culture supernatants of 8910, TC1, SKOV3, CAOV and 3AO ovarian cancer cell lines. Methods 8910, TC1, SKOV3, CAOV and 3AO ovarian cancer cell lines were cultured separately and the cell culture supernatants were collected to seperate exosomes with multiple centrifugation and ultrafiltration. Morphology of exosomes were

卵巢癌研究进展

卵巢癌相关细胞信号通路研究进展 首都医科大学附属朝阳医院妇产科程玉珊张震宇刘崇东 【摘要】随着对肿瘤细胞信号转导通路研究的不断深入，人们对卵巢癌细胞内外复杂的信号转导机制及其对卵巢癌的发生、发展、转移和复发等的作用及影响有了更进一步的了解，必将促进卵巢癌诊断与治疗的革新。 【关键词】卵巢癌；信号转导通路 Expression of the signal pathway in ovarian cancer Yu shan cheng,zhenyu zhang，chongdong liu ( Beijing chaoyang Hospital,The capital medical university,Beijing,China) Abstract:The regulation of cell growth and survival can be subverted by a variety of genetic defects that alter transcriptional programs normally responsible for controlling cell number.As the study of the signal pathway in varian cancer becomes more and moer deeper,people know much about signal pathways, occurrence, development,metastasis and recurrence role of ovarian cancer, it will promote the innovation of diagnosis and treatment in ovarian cancer . Key words: ovarian neoplasms signal pathway 细胞外各种刺激通过细胞因子等介质与相应受体结合后诱发细胞内外环境改变，进而导致细胞生物学行为发生改变，由此构成了细胞信号传导系统。信号通路异常可刺激细胞快速增殖、无限生长或凋亡抑制而导致肿瘤发生。现在比较公认的癌变发生模式是多基因突变、多因素、多途径、多步骤的过程，这一复杂的过程涉及到多条细胞信号传导通路的异常。 因此，研究和阐明肿瘤侵袭转移的分子机制和信号传导通路具有重要的意义。本文就现阶段与卵巢癌发生发展相关的一些信号转导通路，如Wnt、MAPK、Hedgehog(Hh)、Notch等信号转导通路方面的研究进展进行简要的综述。 1.Wnt信号通路Wnt信号通路主要参与细胞的增殖、分化、凋亡与抗凋亡等。目前, 大量研究表明Wnt信号通路与肿瘤发生、发展等密切相关[1]。当Wnt信号调控异常时，正常细胞将发生恶性转化导致肿瘤发生。此途径的改变在大肠癌中的作用已较明确，在其他恶性肿瘤如乳腺癌、食管癌、结直肠癌、恶性黑色素瘤、白血病、前列腺癌、子宫内膜癌、原发性肝癌、甲状腺癌、胰腺癌等中的改变也

卵巢癌细胞对顺铂耐药机制的研究

卵巢癌细胞对顺铂耐 药机制的研究 癌症 1999年第6期第19卷基础研究 作者：陈葳，李旭，杨玉琮，程小丽，牛映斗 单位：西安医科大学第一附属医院临床分子生物学中心(西安，710061) 关键词：卵巢癌细胞株；顺铂；药物耐受性 【摘要】目的：探明卵巢癌对顺铂产生耐药的机理。方法：采用顺铂体外诱导法建立卵巢癌耐药细胞株HO-8910/2。MTT法测定其耐药倍数和交叉耐药性，原子吸收法测定细胞内Pt浓度，分光光度法测定GSH、GST，流式细胞仪分析细胞周期，检测bcl-2和P-GP的表达。结果：HO-8910/2耐顺铂是亲代细胞HO-8910的6.6倍，与5-FU，ADR有交叉耐药性。对照亲代细胞，耐药细胞中GSH含量与GST活性明显增高，细胞G2/M比例增加，细胞内铂(Pt)摄入和蓄积减少，bcl-2表达阳性细胞增多，P-GP无变化。结论：细胞内药物浓度下降、bcl-2的表达增加、GSH与GST 对铂化合物解毒作用的增强可能是HO-8910/2耐药机制形成的主要原因。 中图分类号：R737.31 文献标识码：A文章编号：1000

－467X(1999)06－0674－03 Experimental study on the mechanism of cisplatin resistance in human ovarian carcinoma cells CHEN Wei，LI Xu，YANG Yu-cong，et al. Center for Clinical Molecular Biology，the First Affiliated Hospital of X i’an Medical University. Xi’an 710061，P.R.China 【Abstrct】 Objective： To explore the mechanism of cisplatin resistance in human ovarian cancer.Methods：A cisplatin resistant human ovarian cancer cell line，HO-8910/2，was developed in vitro after prolonged drug exposure of the cisplatin-sensitive parental HO-8910 cell line. Drug cytotoxicities were determined using the micro tetrazolium assay. The concentrations of cellular Pt were determined by atomic absorption and the levels of cellular GSH and GST by were detected spectrophotometry. Cells cycle and expression of bcl-2 and P-gp were analysed by flow cytometry.Results：HO-8910/2 cell line exhibited a degree of resistance of approximately 6.6times compared with the parental cell line following 48h exposure to the drugs and was cross-resisance to 5-FU and VCR. A 44.1％ reduction was

个人感悟-关于卵巢癌

个人感悟-关于卵巢癌 张明军整理（2015.1.3） 1、卵巢是女性腹腔内最小的器官，却是病理类型最多的肿瘤（见附件1：卵巢癌病理分类） 2、病理类型以上皮、浆液、粘液为主，预后较好 3、卵巢癌腹水不是晚期标准，Ⅰ期病人也可能有腹水（见附件2：FIGO 2013卵巢癌） 4、对于有腹水，CA125显著升高的老年女性，首选考虑卵巢癌 5、直接获得卵巢癌病理诊断的少，大部分为临床诊断，病理确诊主要靠术后病理 6、腹水消退后仍可以手术，如减灭术 7、化疗效果好 8、肿瘤多局限在腹盆腔，少有转移至腹盆腔外面，患者多死于肠梗阻 9、不主张放疗，但是部分晚期病人姑息性放疗是一种选择 10、贝伐单抗治疗腹水有效、 11、生化复发的争议（见附件3：卵巢癌的生化复发） 12、铂类耐药：铂类耐药定义为对一线铂类化疗存在反应并且至铂类再治的间隔( platinum-freeinterval，PFI)＜ 6 个月，而 PFI ＞ 6 个月则认为是铂类敏感的。（化疗后6个月之内出现复发即为铂类耐药） 13、最有效的辅检方法是超声 14、术后盆腔的囊肿感染与复发易混淆 以上根据陈振东主任查房整理，以下为整理者提供的资料： 附件1 ：卵巢癌的病理分类 卵巢肿瘤组织形态的复杂性超过任何器官，因为卵巢的组织结构具有潜在的多能性；还有卵巢在胚胎发生时期和泌尿系统非常接近，部分中肾组织可迷路进入卵巢；此外，卵巢来自胚胎生殖嵴，男女同源，以后才逐渐分化出来。 以组织发生为依据卵巢肿瘤分类如下：

1 卵巢上皮性癌 最为常见，占卵巢恶性肿瘤的85%-90%，多见于中老年妇女，高峰年龄在50 -60 岁，来自卵巢表面及从表面上皮内陷到卵巢内的腺管和囊肿的上皮。 (1) 浆液性癌：包括浆液性乳头状囊腺癌及乳头状癌。50%为双侧卵巢同时发生，易腹盆腔播散，可伴大量腹水，是最常见的上皮性卵巢癌。肿瘤切面为囊实性，囊内液为浆液性，囊内壁常有多个质脆的乳头和实性结节，半数以上可见外生乳头。此类肿瘤镜下可根据癌细胞的分化为高分化、中分化和低分化癌。高分化癌乳头分支稠密,可见核分裂，细胞呈重度间变，有明显间质浸润，砂粒体较多见。中、低度分化者有较多实质区，乳头较少或消失，砂粒体不易见到。 (2) 黏液性癌：较浆液性癌少见，双侧卵巢同时发生率10%-20%。大部分肿瘤为多房，实性或部分囊性，囊内含胶状黏液，很少外生性乳头，实质区组织乳白或淡红色，结构致密质脆。镜下亦分为三级，分化好和中度分化者可见明显腺样结构，上皮乳头分支细密，有腺体共壁，细胞核异型性较明显，间质有浸润。分化差者腺样结构不明显，不典型核分裂增多，细胞产生的黏液很少。病人常死于腹腔内转移灶引起的肠梗阻。 (3) 子宫内膜样癌：我国较少见，肿瘤多为实性，切面灰白色，极脆，囊性者内有大片乳头状物，约1/5的病例合并子宫内膜癌。双侧卵巢发生率30%左右。镜下组织学与子宫内膜腺癌相似。但其乳头短宽，间质成分较多，少或缺乏腺体。 (4) 恶性勃勒纳(Brenner) 瘤和移行细胞癌：均属纤维上皮癌。由良性Brenner瘤转化为癌者称恶性Brenner瘤。两种病例均较少，多见于中老年妇女。为囊实性或实性肿瘤。由于病例数少，其预后尚待探讨。 (5) 透明细胞癌：较少见，肿瘤多为实性，呈分叶状，切面鱼肉状，可有大小不等的囊腔。多为单侧性。镜下见有：透明细胞、鞋钉样细胞和嗜酸性细胞。瘤细胞呈巢状、乳头状和腺管状排列。可见钙盐沉淀。常合并子宫内膜异位症，预后差。 3. 卵巢性素间质肿瘤 包括由性索间质来源的颗粒细胞、泡膜细胞、纤维母细胞、支持间质细胞发生的肿瘤。许多性索间质肿瘤能分泌类固醇，因而产生内分泌症状。以颗粒细胞瘤和泡膜细胞癌多见，此两种肿瘤常混合存在，可分泌雌激素。肿瘤为实性，多

卵巢癌常用的化疗方案

目前常用卵巢癌的化疗方案有如下几种。 1．pac方案顺铂50 75mg/m2(有肾功能受损时，可用卡铂代替顺铂，顺铂loomg的效价等于卡铂400mg)，阿霉素40 50mg／mz，环磷酰胺500 750mg/m2，一次给药，间隔3 周。常用此方案治疗卵巢上皮细胞瘤、颗粒细胞瘤等。凡是顺铂在内的化疗方案，为保护肾脏均需先进行水化，包括给药前夜晚8点当日早8点静注5%葡萄糖盐水2 000ml+ 维生素c 2g，15%氯化钾loml，20%甘露醇125ml，30分钟内滴完。5%葡萄糖盐水50ml，速尿20mg静推；然后给顺铂。以后再静滴5%葡萄糖1 000ml，维生素c 2g，15%氯化钾loml。 2．pc方案与pac方案相同，只是不用阿霉素，避免其所致心脏毒性。 3．pt方案顺铂75mg/m2，泰素135 175mg/m2。先静点泰素，一般用24小时，也有报道在3小时内输入；间隔1小时以上再给顺铂，也可用卡铂代顺铂。卡铂较顺铂副作用轻。泰素多用生理盐水溶解。24小时滴注可能毒副作用较轻，常见副作用有骨髓抑制，过敏反应，其他如心脏毒性、胃肠道反应、肌无力、脱发、外周神经炎等偶也可见。 4．pv方案常作为挽救性方案，可静脉也可腹腔注射。顺铂loomg/ m2，依托泊苷loomg/ m2，后者可用生理盐水溶解。终浓度应低于0. 25mg/ml。一般每疗程间隔3周。 5．vac方案(1)美国m．d．anderson肿瘤中心方案：长春新碱 l.5mg/m2(第1天），放线菌素do．5mg/d（第天），环磷酰胺 7mg/(kg'd)（第天），间隔周。(2)协和医院方案：长春新碱2mg（第1天），放线菌素do．3mg/d（第天），环磷酰胺5 7mg/( kg．d)（第天），间隔4周。用此方案治疗颗粒细胞瘤、无性细胞瘤、卵黄囊瘤、未成熟畸胎瘤。

常见细胞株

104C1 转化的豚鼠胎体细胞 143TK 人胸腺激酶缺陷性细胞系 1590 人乳腺癌细胞系 16HBE 人支气管上皮细胞 208F 大鼠成纤维细胞 22RV1 人前列腺癌细胞 293 人胚肾细胞 293A 人胚肾细胞系 293AV 人胚肾细胞-用于腺病毒包装 A2780细胞[人卵巢癌细胞] ATCC细胞293EE 转化人胚肾293细胞 293ET ET转化人胚肾293细胞 293FT 人胚肾细胞-用于慢病毒包装 A2780细胞[人卵巢癌细胞] 293KB KB转化人胚肾293细胞 293T SV40转化的人胚肾上皮细胞 293TN 人胚肾细胞--用于慢病毒包装 A2780细胞[人卵巢癌细胞] ATCC细胞2B4 人前列腺癌细胞 2BS 人胚肺成纤维样细胞 2V6.11 人胚肾细胞 311 果蝇胚胎细胞 A2780细胞[人卵巢癌细胞] ATCC细胞35.1 杂交瘤细胞抗CD2 3AO 人卵巢癌细胞 A2780细胞[人卵巢癌细胞] ATCC细胞3T3 小鼠胚胎瘤成纤维细胞 3T3-E1 鼠胚成骨细胞 3T3-L1 小鼠脂肪细胞 3T3-Swiss albino 小鼠胚胎成纤维细胞 3T6-Swiss albino 小鼠胚胎成纤维细胞 A2780细胞[人卵巢癌细胞] ATCC细胞4179 长尾绿猴胚胎细胞 4647 长尾绿猴肾细胞 4T1 小鼠乳腺癌细胞 A2780细胞[人卵巢癌细胞] ATCC细胞5637 人膀胱癌细胞 6T-CEM 人T细胞白血病细胞 769-P 人肾癌细胞系 786-O 人肾透明细胞腺癌细胞 A2780细胞[人卵巢癌细胞] ATCC细胞7WCY1.0 人APP-PS1双基因转染细胞株(CHO) 7WD10 人APP基因转染细胞株(CHO)) 7WML6.0 人APP-PS1(M146L)双基因转染细胞株(CHO) 7WPS1 人APP-PS1双基因转染细胞株(CHO) 801-D 人巨细胞性肺癌细胞 810-D 人巨细胞性肺癌细胞 95-C 人低转移肺癌细胞 A2780细胞[人卵巢癌细胞] ATCC细胞95-D 人高转移肺癌细胞 973 人肺腺癌细胞 9L 小鼠胶质瘤细胞

卵巢癌顺铂耐药机制的研究进展

卵巢癌顺铂耐药机制的研究进展 李海燕综述王常玉审校 ?２９７? 【关键词】顺铂；卵巢癌；耐药机制 【中图分类号］Ｒ７３７．３１【文献标识ｔｉｂｉＡ【文章编号】１１３０４－５５１１（２００９）０５－０２９７４）５ 卵巢癌是严重威胁妇女健康的恶性肿瘤之一，近几年卵巢癌的发病率有增高的趋势，据报道，美国２００７年有２２４３０例卵巢癌新发病例…。由于卵巢癌发病隐匿和缺乏完善的早期诊断方法，约７０％患者确诊时已为晚期（ＦＩＧＯ分期，Ⅲ期和Ⅳ期），其死亡率居妇科恶性肿瘤的首位。在细胞减灭术的基础上施以以顺铂为主的联合化疗方案已成为卵巢癌的常规治疗方案。但由于卵巢癌患者对顺铂的原发性（ｐｒｉｍａｒｙｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ）和（或）获得性（ａｃｑｕｉｒｅｄｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ）多药耐药（ｍｕｌｔｉｐｌｅｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ，ＭＤＲ）的存在，导致晚期患者的５年生存率仅为２０％一３０％。ＤＤＰ－ＤＮＡ加合物的形成而阻断ＤＮＡ的转录和复制是顺铂杀伤肿瘤细胞的主要机理。虽然大多数卵巢癌患者最初对顺铂的反应性很高，但在治疗中产生的ＭＤＲ已成为临床治疗的主要障碍。Ｙａｋｉｒｅｖｉｃｈ等口。的研究发现约７５％～８０％的卵巢上皮癌开始对化疗有反应，其余则表现为原发耐药，最终所有化疗患者至少８０％出现耐药。导致卵巢癌对顺铂产生耐药的具体分子机理并不十分清楚，因此研究卵巢癌对顺铂耐药的机制对于防止或逆转耐药产生，改善化疗效果，提高病人生存率有着很重要的意义。 １ＢＲＣＡ２的二次突变 ＢＲＣＡ２基因结构较为复杂，编码３４１８个氨基酸残基，定位于人类染色体１３ｑ１２—１３，由２７个外显子组成。其编码的氨基酸序列与已知的蛋白质无明显的同源性。ＢＲＣＡ２基因的第３个外显子和转录因子ｃ－ｊｕｎ具有微弱的相似性，ＢＲＣＡ２基因产物与Ｒａｄ５１共同作用，参与ＤＮＡ双链断裂的修复过程ｐＪ，发挥抑癌作用。Ｐｅｌｌｅｇｒｉｎｉ【４１与Ｒｕｄｋｉｎ＂ｏ的研究显示：家族性乳腺癌和卵巢癌通常有ＢＲＣＡ２基因突变，其蛋白产物与ＤＮＡ的重组及修复和转录调控有关。突变肿瘤对顺铂产生耐药，携带肿瘤抑制因子ＢＲＣＡ２突变的卵巢癌对铂类尤其敏感。然 作者单位：４３００３０湖北武汉，华中科技大学同济医学院附属同济医院而，这类肿瘤最终都出现铂类耐药现象。这一耐药的具体机制仍不很明确。Ｗａｔａｒｕ等旧。通过对两株细胞的研究发现，对顺铂耐药的ＢＲＣＡ２突变乳腺癌细胞株ＨＣＣｌ４２８中，出现修复ＢＲＣＡ２功能的ＢＲＣＡ２二次基因改变；同时其在另外一株ＢＲＣＡ２突变的胰腺癌细胞株Ｃａｐａｎｌ中发现有五处修复野生型ＢＲＣＡ２阅读框的二次突变。所有出现二次突变的克隆均对顺铂和ＡＤＰ核糖多聚酶抑制因子（ＡＧｌ４３６１）耐药。Ｗａｔａｒｕ旧。通过对那些原发ＢＲＣＡ２突变的卵巢癌，经过顺铂治疗后又复发的估评，结果显示出现顺铂耐药的复发性肿瘤均经历ＢＲＣＡ２突变的隔代遗传，其提出ＢＲＣＡ２的基因内修复野生ＢＲＣＡ２阅读框的二次突变可能是以铂类为基础的化疗耐药的一个主要临床因素。有研究报道ＢＲＣＡ２的缺失与耐药有关川。可见ＢＲＣＡ２的突变状态是卵巢癌发生耐药的的标志物之一，其缺失可能导致耐药的产生，尤其是它的二次突变与顺铂的耐药有着密切的联系。寻找导致ＢＲＣＡ２二次突变状态的具体分子机制可能会助于防止卵巢癌对顺铂的耐药。其具体机制值得进一步探讨。 ２细胞微环境的改变 研究资料表明，肿瘤细胞可能通过直接改变所在的微环境来增加其在化疗药物中的存活¨ｊ。肿瘤生存的微环境富含细胞外基质（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｍａ－ｔｒｉｘ，ＥＣＭ）及其受体整合素，他们对肿瘤生存，抗细胞凋亡及耐药起着相当大的作用。ＥＣＭ基本结构骨架是蛋白质，由不同的氨基酸残基组成的特殊多肽序列形成不同的成分，主要分为胶原、蛋白聚糖和糖蛋白三大类。卵巢癌常有胶原蛋白Ⅵ的过表达，有Ⅵ型胶原过表达的细胞也往表现出对顺铂耐药性的提高。顺铂敏感细胞在有胶原Ⅵ存在情况下培养可增加细胞对顺铂的耐药性。随后证实卵巢肿瘤中的确存在胶原Ⅵ，而且胶原Ⅵ与肿瘤分级有关，这表明肿瘤附近的细胞外基质进行了重组。Ｓｈｅｒｍａｎ等【９ｏ发现在顺铂耐药的卵巢癌细胞中多种细胞外基质的基因功能上调，表明卵巢癌细胞可通

肿瘤干细胞与肿瘤微环境相互作用的研究进展

DOI ：10.7507/1002-0179.20150511 基金项目：国家自然科学基金（81201786）作者简介：喻杨（1988－），女，四川资阳人，在读硕士，Email ：183932834@https://www.wendangku.net/doc/fe4129591.html, 通讯作者：蒋明，Email ：307048372@https://www.wendangku.net/doc/fe4129591.html, 网络出版时间：2015-09-12 11:48网络出版地址：https://www.wendangku.net/doc/fe4129591.html,/kcms/detail/51.1356.R.20150912.1148.094.html 肿瘤干细胞与肿瘤微环境相互作用的研究进展 喻杨，王喻义，王乙钦，蒋明 四川大学华西医院肿瘤中心肿瘤一病房（成都 610041） 【摘要】 肿瘤干细胞作为肿瘤发生、发展、复发、耐药的根源，在近些年受到广泛关注。随着研究的不断深入，人们慢慢发现，肿瘤干细胞与肿瘤微环境在肿瘤发展过程中进行着复杂的对话，肿瘤干细胞不仅可以适应肿瘤微环境的变化，还可以改变、影响肿瘤微环境；而肿瘤微环境不仅可以影响干细胞的自我更新能力，还可以诱导正常小细胞和非肿瘤干细胞向肿瘤干细胞转变。 【关键词】 肿瘤干细胞；微环境；血管形成；细胞外基质；低氧 肿瘤是一种世界范围内常见的致死性疾病，肿瘤细胞具有持续增殖信号、生长抑制缺失、抗细胞凋亡、无限自我复制、促新生血管形成、侵袭转移以及通过肿瘤微环境招募、诱变众多非肿瘤细胞成为促进肿瘤生长的因素的能力[1]。这些能力涉及许多机制或理论，其中肿瘤干细胞理论逐渐受到重视。随着对干细胞研究的不断深入，人们慢慢发现在肿瘤发展过程中，肿瘤干细胞与肿瘤微环境相互作用，彼此依赖，共同促进肿瘤发展。现就肿瘤干细胞与肿瘤微环境相互作用研究进展作一文献综述。 1　肿瘤干细胞理论 肿瘤干细胞理论认为，肿瘤组织中存在一类或几类具有干细胞特性的细胞亚群，即肿瘤干细胞。肿瘤组织存在着分级，而肿瘤干细胞在肿瘤分级中位于最高级，并在肿瘤的发生、发展、复发、耐药中起着关键作用。肿瘤干细胞具有自我更新和多向分化潜能。其可以根据肿瘤微环境的不同分裂产生新的肿瘤干细胞，也可以分化成具有不同生物学特点、不同分化程度的肿瘤细胞，甚至可以分化成为肿瘤组织中的其他非肿瘤细胞。肿瘤干细胞最早是在急性髓源性白血病中被发现[2]， 随后在多种实体瘤有发现存在肿瘤干细胞亚群，如：脑癌、胃癌、结肠癌、肝癌、胰腺癌、乳腺癌、前列腺癌。近年有文献显示肿瘤干细胞可以转化为非肿瘤细胞[3]， 而非肿瘤干细胞也可以转化为肿瘤干细胞，这让许多学者逐渐意 识到肿瘤干细胞是一种动态变化的“状态”，而不是固定不变的，而肿瘤干细胞与非干细胞之间的动态变化，受肿瘤微环境的调节[4]。 2　肿瘤微环境 肿瘤微环境是指肿瘤细胞与邻近正常组织之间的部分，主要包括间质干细胞、细胞外基质、肿瘤相关成纤维细胞、脂肪细胞、内皮细胞、免疫细胞[5]。在肿瘤微环境中肿瘤细胞与微环境中的细胞通过相互接触或分泌细胞因子的方式相互作用，二者之间发生了极其精细而复杂的对话[6]。并且，肿瘤微环境中的细胞在维持肿瘤干细胞的干性、肿瘤生长、转 移等过程中起着重要的作用[1， 7-8] 。肿瘤干细胞的生存需要称为干细胞龛的特定的肿瘤微环境。肿瘤干细胞与肿瘤微环境关系紧密，肿瘤不仅可以适应肿瘤微环境的变化，还可以改变、影响肿瘤微环境；而肿瘤微环境不仅可以影响肿瘤干细胞的自我更新能力，还可以诱导正常小细胞和非肿瘤干细胞向肿瘤干细胞转变[4]。近年来关于肿瘤干细胞与肿瘤微环境的相互作用已成为研究热点。 3　肿瘤微环境中的主要细胞与肿瘤干细胞的相互作用 3.1　间质干细胞与肿瘤干细胞的相互作用 从理论上说，间质干细胞可抑制肿瘤生长，但在肿瘤微环境中的间质干细胞的抗肿瘤生长能力却存在争议[9]。作为肿瘤微环境的重要组成部分，间质干细胞在肿瘤发展的过程中起着重要作用[10]。在肿瘤生长过程中，间质干细胞被招募到肿瘤微环境中，它可以改变肿瘤微环境原来的平衡，建立新的平衡，并促进肿瘤生长；通过分化为血管内皮细胞和周细胞和（或）分泌促血管生长因子如：血管内皮生长因 ?综述?

含奈达铂与含顺铂联合化疗方案治疗晚期卵巢癌的临床对比研究

含奈达铂与含顺铂联合化疗方案治疗晚期卵巢癌的临床对比研究 目的：探讨含奈达铂与含顺铂联合化疗方案治疗晚期卵巢癌的临床对比功效。方法：选取我院2013年1月至2015年1月间收治并确诊为晚期卵巢癌患者40例，随机抽取，将其分为两组，观察组20例，采用奈达铂联合环磷酰胺进行治疗，对照组20例，采用顺铂联合环磷酰胺治疗，对两组临床治疗效果进行对比。结果：观察组治疗总有效率为60.00%，完全缓解率为30.00%，对照组总有效率为40.00%，完全缓解率为15.00%，采用统计学方法分析，对比两组结果差异显著，具有统计学意义（P＜0.05）。结论：奈达铂+环磷酰胺在联合化疗方面治疗晚期卵巢癌的临床效果更为显著，值得进一步临床推广应用。 标签：奈达铂；顺铂；卵巢癌 在我国，卵巢癌的发病率较高，而且近年来明显呈上升趋势，是女性生殖系统疾病中的第三大杀手。目前的治疗原则是进行肿瘤减灭术（在最大限度上），并进行辅助性的术后化疗。从结果分析，还会出现50%以上上皮癌近期与远期复发[1]。我院在2013年1月至2015年1月间收治并进行肿瘤减灭术的患者40例，对其进行奈达铂联合化疗方案治疗取得了良好的效果。现将具体情况报道如下。 1 资料与方法 1.1 一般资料 选取我院2013年1月至2015年1月间收治并确诊为晚期卵巢癌患者40例，随机抽取，将其分为两组。其中，观察组20例患者平均年龄为（52.3±7.3）岁，对照组平均年龄为（52.3±7.9）岁。诊断结果经病理证实或细胞学确认为Ⅲ～Ⅳ期卵巢癌。从临床分期来看：观察组：属于Ⅲ期的15例，IV期的5例；对照组：属于Ⅲ期的14例，Ⅳ期6例。按病理类型划分：观察组：浆液性13例、黏液性5例，子宫内膜样2例；对照组：浆液性14例，黏液性4例，子宫内膜样2例。通过对观察组与对照组患者的年龄、临床分期及病理类型进行数据比较，无显著性差异（P＜0.05），具备可比性。 1.2 治疗方法 本次研究采用的方案，需进行化疗前的止吐（5—HT3受体拮抗剂）。对照组采用顺铂（DDP）+环磷酰胺（CTX）；观察组采用奈达铂（NDP）+环磷酰胺（CTX）。 1.3 统计学方法 采用SPSS 19.0软件进行统计，两组患者治疗总有效率和不良反应发生率之间比较采用χ2检验，以P＜0.05表示差异，有统计学意义。 2 结果

卵巢癌常用的化疗方案

目前常用卵巢癌的化疗方案有如下几种。 pac方案顺铂50 75mg/m2(有肾功能受损时，可用卡铂代替顺铂，顺铂loomg的效价等于卡铂400mg)，阿霉素40 50mg／mz，环磷酰胺500 750mg/m2，一次给药，间隔3 周。常用此方案治疗卵巢上皮细胞瘤、颗粒细胞瘤等。凡是顺铂在内的化疗方案，为保护肾脏均需先进行水化，包括给药前夜晚8点当日早8点静注5%葡萄糖盐水2 000ml+ 维生素c 2g，15%氯化钾loml，20%甘露醇125ml，30分钟内滴完。5%葡萄糖盐水50ml，速尿20mg静推；然后给顺铂。以后再静滴5%葡萄糖1 000ml，维生素c 2g，15%氯化钾loml。 pc方案与pac方案相同，只是不用阿霉素，避免其所致心脏毒性。 pt方案顺铂75mg/m2，泰素135 175mg/m2。先静点泰素，一般用24小时，也有报道在3小时内输入；间隔1小时以上再给顺铂，也可用卡铂代顺铂。卡铂较顺铂副作用轻。泰素多用生理盐水溶解。24小时滴注可能毒副作用较轻，常见副作用有骨髓抑制，过敏反应，其他如心脏毒性、胃肠道反应、肌无力、脱发、外周神经炎等偶也可见。 pv方案常作为挽救性方案，可静脉也可腹腔注射。顺铂loomg/ m2，依托泊苷loomg/ m2，后者可用生理盐水溶解。终浓度应低于0. 25mg/ml。一般每疗程间隔3周。 vac方案(1)美国m．d．anderson肿瘤中心方案：长春新碱l.5mg/m2(第1天），放线菌素do．5mg/d（第天），环磷酰胺7mg/(kg'd)（第天），间隔周。(2)协和医院方案：长春新碱2mg（第1天），放线菌素do．3mg/d（第天），环磷酰胺5 7mg/( kg．d)（第天），间隔4周。用此方案治疗颗粒细胞瘤、无性细胞瘤、卵黄囊瘤、未成熟畸胎瘤。 6．pvb方案 (1）美国m. d．anderson癌瘤中心方案(cershenson, 1992)：长春新碱0.15mg／lkg'd)，（第天），博莱霉素15mg/d（第天），顺铂loomg/m2（第1天）。 协和医院方案：长春新碱2mg/d（第天），平阳霉素16mg, 24小时静滴（第天），顺铂30mg/d （第天）。gershenson (1994)曾总结15位作者以pvb治疗卵巢恶性生殖细胞瘤(ogct) 共200余例的应用效果，其治愈率在i期及ⅱ期病例为95 010或更高。ⅲ期、ⅳ期及复发病例则分别为80%. 60%和40%。故pvb治疗效果，显然优于vac。 bep方案博莱霉素15mg/d（缓慢持续静滴）（第天），依托泊苷loomg/d（第天），顺铂30mg ／d（第天）。其效果与pvb类似，而毒性较pvb低(williams，1987)。美国妇科癌瘤协作组(cog)曾进行以bep治疗ogct的临床研究，他们对93例i、ⅱ、ⅲ期病例在肿瘤切净后，仅用bep 3个疗程，其持续缓解率可达96% (williams. 1994)。因而，目前bep方案已成为治疗ogct的较为普遍且最有效的方案。 ★百度搜索邱顾问，了解详细的肿瘤癌症治疗方面的问题！ 人参皂苷Rh2治疗卵巢癌 卵巢癌是女性生殖器官常见的肿瘤之一。因卵巢癌致死者占各类妇科肿瘤的首位，对妇女生命造成严重威胁，其五年生存率仅25％～30％。据流行病学资料统计，卵巢癌好发于卵巢功能不全的妇女，如月经初潮推迟、绝经期提前、痛经、独身、不育、人工流产频繁和有家族史的人群。由于卵巢位于盆腔深部，发病的早期可无或有较轻的症状，表现在子宫附件的肿块，伴有不明原因的胃肠道症状，如食欲不振、腹胀、消瘦；随着病情的发展，可相应出现不同的症状，主要在下腹胀感、腹部胀大和腹内肿物、疼痛或不规则子宫出血等。 因卵巢癌临床早期无症状，鉴别其组织类型及良恶性相当困难，卵巢癌行剖腹探查术中发现肿瘤局限于卵巢的仅占30％，大多数已扩散到子宫双侧附件，大网膜及盆腔各器官，