葡萄糖标准曲线的

实训二、葡萄糖标准曲线的绘制

一、实训目的

1、了解DNS法测定还原糖的基本原理

2、通过DNS法测定还原糖的含量，建立吸光度与还原堂含量之间的线形关系，用于后续纤维素酶酶活性的测定

3、通过定量操作，让学生形成准确称量、测定的理念。

二、实训原理

具有还原性末端的寡糖和有还原基团的单糖在沸水浴条件下可以与DNS试剂发生显色反应。反应液颜色的强度（吸光度OD值）与还原糖量（此处即为葡萄糖量）成正比关系。

三实验仪器及药品

仪器：水浴锅，烧结玻璃过滤器

药品：3，5－二硝基水杨酸，氢氧化钠，四水酒石酸甲钠，苯酚，无水亚硫酸钠，分析纯的葡萄糖

四、实训方法

1、DNS溶液的配制

称取3，5－二硝基水杨酸3.15g(化学纯)，加水500ml，搅拌5s，水浴至45℃，然后逐步加入100ml氢氧化钠溶液（称取氢氧化钠20.0g，加水溶解，定容到100ml），同时不断搅拌，直到溶液清澈透明（注意：在加入过程中，溶液温度不要超过48℃）。再逐步加入四水酒石酸甲钠91g，苯酚2.50g和无水亚硫酸钠2.50g。继续45℃水浴加热，同时补加水300ml，不断搅拌，直到加入的物质全部溶解。停止加热，冷却到室温后，用水定容到1000ml，用烧结玻璃过滤器过滤。取滤液，储存在棕色瓶中，避光保存。室温下存放7d后可以使用，有效期为6个月。

（笔者注：在处理酸、碱和配制DNS试剂时，请尽可能戴上保护眼镜和乳胶手套，实验应在通风橱或通风良好的房间进行。一旦皮肤或者眼睛接触了上述物质，应及时用大量的清水冲洗）

2、0.1％葡萄糖标准液准确称取100mg分析纯的葡萄糖（预先在105℃干燥至恒重），用少量蒸馏水溶解后定容至100ml，保存于冰箱中备用。

3、葡萄糖标准曲线的绘制

取9支具塞刻度试管，分别按表1顺序加入各种试剂。

表 1 试剂加入顺序

将上述各试剂依次混匀后，在沸水浴中加热10min，然后立即用流动冷水冷却，每个试管加蒸馏水至25ml刻度线，充分混匀后，用空白管溶液调零点，在UV751GD紫外/可见

分光光度计（540nm）处测吸光度。以葡萄糖质量（mg）为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制葡萄糖标准曲线。四、结果记录与分析处理1、测定不同葡萄糖含量的OD值，建立以葡萄糖质量（mg）为横坐标，吸光度为纵坐标的关系式，要求用计算机作图，求出具体的线形关系式，同时相关系数R值不得低于0.9975 2、每根试管要求测定两次，两个数据之间的绝对差值不得超过算术平均值10%。变异系数不超过10%。3、学会分析数据，当所做线形关系不符合要求时，能作出自己的分析和判断

生物化学实验报告示范-3,5-二硝基水杨酸法测定葡萄糖标准曲线

实验二3,5-二硝基水杨酸比色定糖法定制葡萄糖标准曲线 马铃薯总糖含量测定 实验目的 1. 熟悉并掌握7200型分光光度仪的结构及工作原理和操作使用方法； 2. 掌握分光光度法测定物质含量的基本操作步骤及微机绘制标准曲线的操作方法； 3．掌握3,5-二硝基水杨酸比色定糖法测定还原糖（葡萄糖）的原理及方法； 4．掌握3,5-二硝基水杨酸比色定糖法测定马铃薯总糖含量测定的原理与方法。 实验原理 1. 3,5-二硝基水杨酸比色定糖法测定还原糖（葡萄糖）的及标准曲线定制原理 3,5-二硝基水杨酸在强碱溶液中与还原糖在沸水浴中加热反应后被还原成棕红色的氨基化合物，该有色物质在540nm 处有最大吸光度，且在一定浓度范围内（一般OD值在0.2～0.8范围内线性较好），还原糖的量与反应液的颜色强度（吸光度OD值）呈线性关系，利用分光光度仪，以分析纯葡萄糖为还原糖测定的标准品，在540nm处按梯度依次测定各葡萄糖浓度对应的反应液的吸光度（OD值）大小，通过微机处理数据，定制葡萄糖标准曲线，确定出3,5-二硝基水杨酸比色定糖法测定还原糖的线性回归方程； 2. 3,5-二硝基水杨酸比色定糖法测定马铃薯总糖含量测定的原理 先将马铃薯去皮，经机械粉碎，过滤和清水漂洗，烘干制成马铃薯淀粉；再精确称取干燥恒重后的马铃薯淀粉加酸水解为还原糖，经中和定容，配制成马铃薯总糖含量测定的待测液（即样品液）；再以标准曲线测定的加样操作方法，测定出样品待测液的吸光度大小，将测定的吸光度大小代入其回归方程，即可计算出样品待测液的显色浓度，根据稀释倍数关系，计算出以还原糖的量表示的马铃薯总糖的量，并测定出马铃薯总糖百分含量。该方法是半微量定糖法，操作简便，快速，杂质干扰较少。 实验操作 1. 3,5-二硝基水杨酸比色定糖法定制葡萄糖标准曲线 （1）葡萄糖标准溶液的配制：（2mg/mL）准确称取2000mg分析纯的葡萄糖（预先在105℃干燥至恒重），用少量蒸馏水溶解后定容至1000mL，冰箱保存备用 （2）葡萄糖标准曲线定制加样操作及测定结果纪录（详见表1） 按表1进行实验操作，在沸水浴中准确反应20min，取出后立即用冷水冷却，加蒸馏水定容至25mL，摇匀，用lcm的比色杯于540nm处测光密度值。并记录A540nm处测得的各浓度及样品对应的OD值。 （3）葡萄糖标准曲线定制微机数据处理和回归方程（详见表2）及标准曲线的绘制见图1 2. 马铃薯总糖含量测定操作 （1）马铃薯淀粉的制备（此处略，学生实验报告需补充完整） （2）马铃薯淀粉水解待测液配制（2mg/mL）准确称取干燥恒重后的自制淀粉250mg，加入100mL 蒸馏水和2mL20%硫酸，在沸水浴中加热水解，直到水解彻底后，用20%氢氧化钠溶液中和，至pH = 6.8～7.0后，将反应液转入250mL 容量瓶中，补加蒸馏水定容至250mL，配制成浓度为2mg/mL的淀粉水解后，即总糖测定的样品液，冰箱保存备用。 （3）马铃薯淀粉水解待测液还原糖测定（操作方法详见表1）

JH-TS-03-F001-00 无水葡萄糖质量标准

一、目的：制定无水葡萄糖质量标准，确保产品质量。 二、适用范围：无水葡萄糖辅料。 三、标准依据：《中华人民共和国兽药典》二0一五年版一部。 四、正文： 物料名称：无水葡萄糖 汉语拼音： Wushui putaotang 英文名称: Anhydrous Glucose 本品为D-(＋)-吡喃葡萄糖。 【性状】本品为无色结晶或白色结晶性粉末；无臭、味甜。 本品在水中易溶，在乙醇中微溶。 比旋度取本品约10g ，精密称定，置50ml量瓶中，加水适量与氨试液2.0ml 溶解后，用水稀释至刻度，摇匀，放置60分钟，在25℃时依法测定，比旋度为+52.6°至+53.2°。 【鉴别】 (1)取本品0.2g，加水5ml溶解后，缓缓滴入温热的碱性酒石酸铜试液中，即生成氧化亚铜的红色沉淀。 (2)本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集702图）一致。 【检查】酸度取本品2.0g，加水20ml溶解后，加酚酞指示液3 滴与0.02mol／L氢氧化钠溶液0.2ml，应显粉红色。 溶液的澄清度与颜色取本品5g，加热水溶解后，放冷，用水稀释至10ml，溶液应澄清无色；如显浑浊，与1号浊度标准液比较，不得更浓；如显色，与对照液（取比色用氯化钴液3ml ，比色用重铬酸钾液3ml 与比色用硫酸铜液6ml 加水稀释成50ml）1.0ml 加水稀释至10ml比较，不得更深。 乙醇溶液的澄清度取本品1.0g，加乙醇20ml，置水浴上加热回流约40分钟，溶液应澄清。 氯化物取本品0.60g ，依法检查，与标准氯化钠溶液6.0ml 制成的对照液比较，不得

更浓(0.01％)。 硫酸盐取本品2.0g，依法检查，与标准硫酸钾溶液2.0ml 制成的对照液比较，不得更浓(0.01％)。 亚硫酸盐与可溶性淀粉取本品1.0g，加水10ml溶解后，加碘试液1 滴。应即显黄色。 干燥失重取本品，在105℃干燥至恒重，减失重量不得过1.0％。 炽灼残渣不得过0.1％。 蛋白质取本品1.0g，加水10ml溶解后，加磺基水杨酸溶液(1→5)3ml ，不得发生浑浊或沉淀。 钡盐取本品2.0g，加水20ml溶解后，溶液分成2 等份，1 份中加稀硫酸1ml ，另1份中加水1ml ，摇匀，放置15分钟，两液均应澄清。 钙盐取本品1.0g，加水10ml溶解后，加氨试液1ml与草酸铵试液5ml ，摇匀，放置1小时，如发生浑浊，与标准钙溶液[精密称取碳酸钙0.1250g ，置500ml 量瓶中，加水5ml 与盐酸0.5ml使溶解，加水至刻度，摇匀。每1ml相当于0.1mg的钙(Ca)]1.0ml制成的对照液比较，不得更浓(0.01％) 。 铁盐取本品2.0g，加水20ml溶解后，加硝酸3滴，缓缓煮沸5分钟，放冷，加水稀释使成45ml，加硫氰酸铵溶液(30 →100)3.0ml ，摇匀，如显色，与标准铁溶液2.0 ml，用同一方法制成的对照液比较，不得更深（0.001％）。 重金属取本品5.0g，加水23ml溶解后，加醋酸盐缓冲液(pH3.5)2ml，依法检查，含重金属不得过百万分之四。 砷盐取本品2.0g，加水5ml溶解后，加稀硫酸5ml与溴化钾溴试液0.5ml，置水浴上加热约20分钟，使保持稍过量的溴存在，必要时，再补加溴化钾溴试液适量，并随时补充蒸散水分，放冷，加盐酸5ml与水适量使成28ml，依法检查（见砷盐检查法第一法），应符合规定（0.0001%）。 微生物限度取本品10g，用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液制成1:10的供试液。 需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数取供试液1ml，依法检查，1g供试品中除需氧菌总数不得过1000cfu，霉菌和酵母菌总数不得过100cfu。 大肠埃希菌取1:10的供试液10ml，依法检查，1g供试品中不得检出。

实验一 还原糖和总糖含量的测定

实验一还原糖和总糖含量的测定 （3,5-二硝基水杨酸比色法） 一．目的 1.掌握还原糖定量测定的基本原理； 2.学习比色定糖法的基本操作； 3.熟悉分光光度计的使用方法。 二．原理 在碱性的条件下，还原糖与3,5-二硝基水杨酸共热，3,5-二硝基水杨酸被还原为3-氨基-5-硝基水杨酸（棕红色物质）,还原糖的量与棕红色物质颜色深浅的程度成一定的比例关系，在540nm波长下测定棕红色物质的消光值，查对标准曲线并计算，便可分别样品中还原糖和总糖的含量。 三．仪器.试剂和材料 1.仪器： （1）25ml刻度试管（2）玻璃漏斗（3）三角瓶（4）100ml容量瓶3个（5）刻度吸管（1ml,2ml,3ml）（6）恒温水浴（7）沸水浴（8）电子天平（9）分光光度计2.试剂； （1）1mg/ml葡萄糖标准液（2）3,5-二硝基水杨酸试剂（3）碘碘化钾溶液（4）酚酞指示剂（5）6ml/L HCI （6）6ml/L NaOH 3.材料：食用面粉 四．操作步骤 将各管摇匀，在沸水中加热5min，取出后立即放入盛有冷水的烧杯中冷却至室温，再以蒸馏水定容至25min，用试管塞塞住试管口，颠倒混匀。在540nm波长下，用0号试管调零，分别读取1~6号管的吸光度。以吸光度为纵坐标，葡萄样毫克数为横坐标，绘制标准曲线。

2.样品中还原糖和总糖含量的测定 （1）样品中还原糖的提取：准确称取3g使用面粉，放在100ml三角瓶中，先以少量蒸馏水调成糊状，然后加50ml蒸馏水，搅匀，置于50℃恒温水中保温20min，使还原糖浸出。过滤，用20ml蒸馏水定容至刻度，混匀，作为还原糖待测液。 （2）样品中总糖的水解和提取：准确称取1g使用面粉。放在100ml的三角瓶中，加入10ml 6mol/L HCI及15ml蒸馏水，置于水浴中加热水解30min。待三角瓶中水解液冷却后，加入1滴酚酞指示剂。以6mol/LNaOH中和至微红色，过滤，再用少量蒸馏水冲洗三角瓶及滤纸，将滤纸全部收集砸100ml的容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，混匀。精确吸取10ml 定容过的水解液，移入另一100ml的容量瓶中，以水稀释定容，混匀，作为总糖待测液。 六、结果处理 （1）由管○1、○2吸光度平均值在葡萄糖标准曲线查出相应的还原糖毫克数为：0.167mg

实验1 高吸光度示差分析法

实验二高吸光度示差分析法 一、目的： 通过标准曲线的绘制及试样溶液的测定，了解高吸光度示差分析法的基本原理，方法优点。掌握721型分光光度计的使用方法。 二、原理： 普通吸光光度法是基于测量试样溶液与试剂空白溶液（或溶剂）相比较的吸光度，从相同条件下所作的标准曲线来计算被测组份的含量，这种方法的准确度一般不会优于1～2%，因此，它不适合于高含量组份的测定。 为了提高吸光光度法测定的准确度，使其适合于高含量组分的测定，可采用高吸光度示差分析法。示差法与普通吸光光度法的不同之处，在于用一个待测组份的标准溶液代替试剂空白溶液作为参比溶液，测量待测量溶液的吸光度。它的测定步骤如下： (1)在仪器没有光线通过时（接受器上无光照射时）调节透光率为0，这与比色法或普通分光光度法相同。 (2)将一个比待测溶液（浓度为C＋△C）稍稀的参比溶液（浓度为C）放在仪器光路中，调节透光率为100%。 (3)将待测量溶液（或标准溶液）推入光路中，读取表现吸光度A f。 表观吸光度A f实际上是由△C引起的吸收大小，可表达为： A f=ab△c 上式说明，待测溶液（或标准溶液）与参比溶液的吸光度之差与这两次溶液的浓度差成正比。 无论普通吸光度或高吸光度示差法，只要符合比尔定律，而且测量误差仅仅是由于透光率（或吸光度）读数的不确定所引起的，则可以方便地计算出分析的

误差。 仪器刻度上透光率读数改变数（dT ）所引起的浓度误差dc 为绝对误差，它与透光率有关，其关系式容易由比耳定律推得： A f =ab △c=k △c lgT=-A f =-k △c 0.43lnT=-k △c KT dc 43 .0 ·dT 式中k 为标准曲线（A ～C ）的斜率。实验中三条曲线的三个k 很接近。根据k 值及上述关系可以计算出实验中各点的绝对误差（假设透光率读数误差为l%，即dT=0.01）。 对于化学工作者来说，更有意义的是浓度的相对误差(c dc )，或者相对百分误差(c dc ×100)。浓度相对百分误差与参比溶液的浓度关系密切。随着有色参比溶液浓度的增加（或A 的增加），相对百分误差也随之减小。当所用参比溶液的A=1.736时，最低的相对百分误差也可减小至0.25%。由此可见了，差示法中高吸光度法可达到容量分析和重量分析的准确度。 三、仪器与试剂 721型分光光度计（附2只1厘米比色皿） 0～10ml 微量滴定管1支（刻度准确至0.005ml ） 25ml 容量瓶×16 0.2500M Cr （NO 3）3 四、实验步骤

食物中葡萄糖的测定

食物中葡萄糖的测定 葡萄糖氧化酶法 1.原理 葡萄糖在葡萄糖氧化酶的作用下产生葡萄糖酸和过氧化氢，过氧化氢在过氧化物酶的作用下使邻联甲苯胺生成蓝色物质，此有色物质在625nm 波长下与葡萄糖浓度成正比。通过测定蓝色物质的吸光度可计算样品中葡萄糖的含量。 2.适用范围 适用于谷类、乳类、饮料、酒类等食物样品和血液样品。检出量为0.02 mg。 3.仪器 722分光光度计。 4.试剂： 除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。 （1）乙醇。 （2） 40% 三氯乙酸：称取40g 三氯乙酸，用水溶解并稀释至100ml。 （3） 2 mol/L NaOH 溶液：称取8g NaOH，用水溶解并稀释至100ml。 （4） 1 % 邻联甲苯胺溶液：称取0.1 g 邻联甲苯胺溶解于10 ml无水乙醇中，倒入棕色瓶中，4 ℃冰箱保存。 （5）乙酸缓冲液（pH 5.0）：称取14.28 g 乙酸钠（CH3COONa?3H2O）溶于水中，加入2.7 ml 冰乙酸，并调节pH 5.0，用水定容至1 L。 （6）葡萄糖氧化酶溶液：称取一定量的葡萄糖氧化酶（Sigma 公司）用水溶解，使酶含量为100 U/ml。4 ℃冰箱保存一周。 （7）过氧化物酶溶液： 0.010 g 辣根过氧化物酶溶于10 ml 水中，4 ℃冰箱保存一周。（8）酶溶液：取100 ml 乙酸缓冲液，分别加入邻联甲苯胺溶液、葡萄糖氧化酶溶液、过氧化物酶溶液各1 ml，混匀。4℃冰箱可保存七周。 （9）酶空白液：取100 ml 乙酸缓冲液，分别加入邻联甲苯胺溶液、过氧化物酶溶液各1 ml，混匀。4℃冰箱保存一周。（注意酶空白液中不含葡萄糖氧化酶） （10）葡萄糖标准液：将葡萄糖标准品（纯度大于99%）于80 ℃干燥至恒量。精确称取0.050 g，用水移入100 ml 容量瓶中，定容至刻度线。相当于浓度为0.5 mg/ml。 5.操作步骤： 5.1样品处理： （1）固体样品：称取0.5～5g已粉碎的样品于锥形瓶中，加入50ml水后沸水浴15min。冷

总糖含量的测定

实验二总糖含量的测定 一、目的： 1.掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。 2.学习植物可溶性糖的一种提取方法。 二、原理： 糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮 (C 14H 10 O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色。该物质在620 nm处有最大吸 收，在150 μg/ml范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。 这一方法有很高的灵敏度，糖含量在30 μg左右就能进行测定，所以可做为微量测糖之用。一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。 三、仪器、试剂和材料 1.仪器：电热恒温水浴锅，分光光度计，电子天平，容量瓶，刻度吸管等 2.试剂： (1)葡萄糖标准液：l00 μg/ml (2)浓硫酸 (3)蒽酮试剂：0.2 g蒽酮溶于100 ml浓 H 2SO 4 中。当日配制使用。 3.材料：淀粉 四、操作步骤 1.葡萄糖标准曲线的制作 取7支试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液： 管号 1 2 3 4 5 6 7 葡萄糖标准液（ml）0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.6 0.8 蒸馏水（ml） 1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.4 0.2 葡萄糖含量（μg）0 10 20 30 40 60 80 在每支试管中立即加入蒽酮试剂4.0m1，迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加盖，以防蒸发。自水浴重新煮沸起，准确煮沸l0 min 取出，用冰浴冷却至室温，在620 nm波长下以第一管为空白，迅速测其余各管 吸光值。以标准葡萄糖含量（μg）为横坐标，以吸光值为纵坐标，作出标准曲线。

2.植物样品中总糖的提取： 精确称取0.5g，置于50 ml三角瓶中，加水15 m1，盐酸10ml，沸水浴20min，定容至100ml，得提取液。取10ml滤液定容至100ml 3.测定 吸取1 ml已稀释的提取液于试管中，加入4.O ml蒽酮试剂，平行三份；空 平均值在标白管以等量蒸馏水取代提取液。以下操作同标准曲线制作。根据A 620 准曲线上查出葡萄糖的含量（μg）。 五、结果处理 C ×V总× D 样品含糖量（%）= ─────────────×100 W ×V测×106 其中：C——在标准曲线上查出的糖含量（μg）， V总——提取液总体积（ml）， V测——测定时取用体积（ml）， D——稀释倍数， W——样品重量（g）， 106——样品重量单位由g换算成μg的倍数 六、注意事项： 该法的特点是几乎可测定所有的碳水化合物，不但可测定戊糖与已糖，且可测所有寡糖类和多糖类，包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下，用蒽酮法可以一次测出总量，省去许多麻烦，因此，有特殊的应用价值，但在测定水溶性碳水化合物时，则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中，否则会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差。此外，不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅，故测定糖的混合物时，常因不同糖类的比例不同造成误差，但测定单一糖类时则可避免此种误差。 七、思考题： 1.在从山芋粉中提取总糖时，加入盐酸的目的是什么？ 2.简述蒽酮比色法测定植物组织中总糖含量的原理。

口服葡萄糖内控质量标准

制药GMP管理文件 一、目的：本标准适用于葡萄糖的内控质量标准,规范公司口服葡萄糖的 采购与使用。 二、适用范围：适用于葡萄糖的采购与使用。 三、责任者：质检员。 四、正文： 葡萄糖 分子式：C6H12O6分子量：180.16 本品为D-（+）-吡喃葡萄糖一水合物。 【性状】本品为无色结晶或白色结晶性或颗粒性粉末，无臭，味甜。 本品在水中易溶，在乙醇中微溶。 比旋度取本品约10g，精密称定，置100ml量瓶中，加水适量与氨试液0．２ml，溶解后，用水稀释至刻度，摇匀，放置１０分钟，在25℃时，依法测定，比旋度为+52.5°至+53.0° 【鉴别】1、取本品约0.2g，加水5ml溶解后，缓缓滴入温热的碱性酒石酸铜试液中，即生成氧化亚铜的红色沉淀。 2、本品的红外光吸收图谱与对照的图谱一致。

【检查】酸度取本品2.0g，加水20ml溶解后，加酚酞指示液3滴与氢氧化钠滴定液(0.02mol/L)0.20ml，应显粉红色。 溶液的澄清度与颜色取本品5g，加热水溶解后，放冷，用水稀释至10ml,溶液应澄清无色；如显浑浊，与1号浊度标准液比较，不得更浓；如显色，与对照液（取比色用氯化钴液3ml、比色用重铬酸钾液3ml与比色用硫酸铜液6ml，用水稀释成50ml）1.0ml加水稀释至10ml比较，不得更深。 乙醇溶液的澄清度取本品1.0g，加90%乙醇30ml，置水浴上加热回流约10分钟，溶液应澄清。 氯化物取本品0.6g，依法检查，与标准氯化钠溶液6.0ml制成的对照液比较，不得更浓 （0.01%）。 硫酸盐取本品2.0g，依法检查，与标准硫酸钾溶液2.0ml制成的对照液比较，不得更浓（0.01%）。 亚硫酸盐与可溶性淀粉取本品1.0g，加水10ml溶解后，加碘试液1滴，应即显黄色。 干燥失重取本品，在105℃干燥至恒重，减失重量不得过9.5% 。 炽灼残渣不得过0.1% 。 蛋白质取本品1.0g，加水10ml溶解后，加磺基水杨酸溶液(1→5)3ml，不得发生沉淀。 铁盐取本品2.0g，加水20ml溶解后，加硝酸3滴，缓缓煮沸5分钟，放冷，用水稀释使成45ml，加硫氰酸铵溶液(30→100)3ml，摇匀，如显色，与标准

标准葡萄糖DNS比色法测定.doc

标准准葡萄糖DNS比色法测定的方法 采用3，5-二硝基水杨酸比色法测定水解液中还原糖含量，用752型分光光度计进行比色测定。 1葡萄糖DNS比色法的测定原理 3,5－二硝基水杨酸与还原糖共热后被的还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖的含量。 2测试药品 （1）1mg/mL葡萄糖标准液 准确称取80℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100mL容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。 （2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂 3测试方法 （1）葡萄糖标准曲线制作 ①按下表制备9个试管。 ②向9支试管中分别加入DNS试剂0.5ml，充分混合。 ③将9支试管放入沸水浴中加热煮沸5min。 ④将试管放入盛有冷水的烧杯中冷却。 ⑤向各管中分别加入4mL蒸馏水，充分混合。 ⑥以空白（1＃）管做对照，用分光光度计于540nm波长下分别测定各管溶液的OD值。 ⑦以每管在540nm下的吸光值为纵坐标，每管所含的葡萄糖浓度为横坐标作图，即可得到一条通过零点的直线。如果直线不通过零点则需重做。 标准葡萄糖曲线浓度的量取 Tab.2.2 Preparation on standard curve of glucose 试管编号标准葡萄糖溶液(mL) 蒸馏水(mL) 最终浓度(mg/mL) 1 0 0.5 0 2 0.05 0.45 0.1 3 0.1 0. 4 0.2 4 0.1 5 0.35 0.3 5 0.2 0.3 0.4 6 0.25 0.25 0.5 7 0.3 0.2 0.6

紫外可见分光光度计的曲线绘制(特选参考)

一、测定溶液中物质的含量 可见或紫外分光光度法都可用于测定溶液中物质的含量。测定标准溶液（浓度已知的溶液）和未知液（浓度待测定的溶液）的吸光度，进行比较，由于所用吸收池的厚度是一样的。也可以先测出不同浓度的标准液的吸光度，绘制标准曲线，在选定的浓度范围内标准曲线应该是一条直线，然后测定出未知液的吸光度，即可从标准曲线上查到其相对应的浓度。 含量测定时所用波长通常要选择被测物质的最大吸收波长，这样做有两个好处： ⑴灵敏度大，物质在含量上的稍许变化将引起较大的吸光度差异； ⑵可以避免其它物质的干扰。 二、用紫外光谱鉴定化合物 使用分光光度计可以绘制吸收光谱曲线。方法是用各种波长不同的单色光分别通过某一浓度的溶液，测定此溶液对每一种单色光的吸光度，然后以波长为横座标，以吸光度为纵座标绘制吸光度──波长曲线，此曲线即吸收光谱曲线。各种物质有它自己一定的吸收光谱曲线，因此用吸收光谱曲线图可以进行物质种类的鉴定。当一种未知物质的吸收光谱曲线和某一已知物质的吸收光谱曲线开关一样时，则很可能它们是同一物质。一定物质在不同浓度时，其吸收光谱曲线中，峰值的大小不同，但形状相似，即吸收高峰和低峰的波长是一定不变的。紫外线吸收是由不饱和的结构造成的，含有双键的化合物表现出吸收峰。紫外吸收光谱比较简单，同一种物质的紫外吸收光谱应完全一致，但具有相同吸收光谱的化合物其结构不一定相同。除了特殊情况外，单独依靠紫外吸收光谱决定一个未知物结构，必须与其它方法配合。紫外吸收光谱分析主要用于已知物质的定量分析和纯度分析。 选几个体积梯度，然后稀释成相同的体积，得到了不同浓度C的几个标准溶液样组，用紫外分光光度计分别测得相应的吸光度A1、A2、A3……，然后要以浓度为横坐标，吸光度A为纵坐标，绘制曲线。当然有时候根据实际需要，也会有小小的变动。 配制标准溶液，用紫外可见分光光度计测量，得到浓度与吸光度的曲线，并且利用线性拟合得到回归方程，直接利用Origin的线性拟合功能得到的方程往往截距不等于零，即方程的形式为y=A+Bx。那是否需要强制令A=0，再来进行拟合呢？如果y=A+Bx这样的形式可以，那么A需要多小才是可以接受的？ 答：如果用样品空白溶液做参比，一般可以设置强制过零点；如果用蒸馏水做参比，一般不能强制过零点。 做曲线时一是要带双空白并减去空白A0, 二是应加0回归。减去A0是希望消除试验方法固定偏倚对校准曲线的影响，当用校准曲线来估计未知样的浓度时，要考虑到试样的测量吸光度也会受到固定偏倚的影响，如果校准曲线和试样测定过程中出现的偏倚一样，偏倚是无需校正的，可有时两者的操作往往不是同时同批进行的，如由于时间或批次不同，固定偏倚有所变化，那么两者的吸光度就要做不同的校正。即在每批分析时带空白，并对相应的信号进行校正。试验证明加零回归的校准曲线与不加零回归校准曲线比较，两者的r和b值均无差异，但加零回归校准曲线截距a的绝对值明显变小，因此在作校准曲线的回归计算时必须加零回归，使回归线接近原点。

葡萄糖酸钠的质量标准分析方法及其评价

材料保护 MATERIALS PROTECTION 1999年 第32卷 第2期 No.2 vol.32 1999 葡萄糖酸钠的质量标准分析方法及其评价 赵　帆　张　刚　陈先明　刘艳萍 摘　要　给出了综合评价葡萄糖酸钠质量的标准及对标准的解释、不同分析方法及其优劣对比，并着重讨论了pH值作为质量标准的原因及意义。 关键词　葡萄糖酸钠　质量标准　分析方法　 随着葡萄糖酸钠(GlNa)在金属防腐蚀、水质阻垢、金属表面处理等领域应用的不断扩展，系统的质量标准与分析方法益显重要。本文参考有关文献并结合我所对GlNa十几年的研究、生产经验，提出评价GlNa质量的九项指标：外观、色泽、干燥失重、重金属、Cl-、SO2-4、水溶液pH值、残糖含量、GlNa含量，并给出了相应工业级和食品级产品的建议标准和部分指标的测量方法。 1　外观、色泽、干燥失重 建议标准　工业级：白色或浅黄色均匀的粉末或细颗粒，干燥失重小于1.0%(wt);食品级：白色均匀的粉末，干燥失重小于0.5%(wt)。 纯的GlNa为白色均匀的粉末或结晶颗粒，其水溶液为无色透明溶液。工业生产时如因工艺原因引起糖的异构造成焦糖类物质出现，产品呈黄、黄棕或灰色，这种产品GlNa含量偏低，1%水溶液pH值较高，杂质较多，使用时应加以注意。 干燥失重也称含水量，从工业生产角度来看只要严格控制烘干条件和加强质量监控，干燥失重均应能达到标准要求。但也有些产品因各种原因而超标或严重超标。 2　Cl-、SO2-4、重金属 建议标准　工业级：Cl-≤0.1%(wt，下同),SO2-4<0.2%,重金属0.02%；食品级：Cl-<0.07%,SO2-4<0.05%,重金属(以Pb计)<0.002%。 GlNa生产工艺中一般不会引入Cl-、SO2-4,正常产品Cl-、SO2-4均能达标，但用氯气氧化法工艺生产的厂家其GlNa产品可能会出现超标。一般文献未对工业级GlNa中Cl-、SO2-4含量作出要求，但对Cl-、SO2-4,敏感的用户应予以注意。检测Cl-还可避免GlNa中Cl-的恶意引入。

葡萄糖标准曲线

1DNS DNS即二硝基水杨酸法是利用碱性条件下，二硝基水杨酸（DNS）与还原糖发生氧化还原反应，生成3-氨基-5-硝基水杨酸，该产物在煮沸条件下显棕红色，且在一定浓度范围内颜色深浅与还原糖含量成比例关系的原理，用比色法测定还原糖含量的。因其显色的深浅只与糖类游离出还原基团的数量有关，而对还原糖的种类没有选择性，故DNS方法适合用在多糖（如纤维素、半纤维素和淀粉等）水解产生的多种还原糖体系中。 2试剂制备 将6.3克DNS和262ml 2mol/L氢氧化钠，加到500ml含有182克酒石酸钾钠的热水溶液中，再加上5克重苯酚和5克亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加水定容到1000ml，即制成3,5-二硝基水杨酸试剂，贮于棕色瓶中备用。 3标准曲线 分别取葡萄糖标准液（1mg/ml）0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml于15 ml试管中，用蒸馏水补足至1.0ml, 分别准确加入DNS试剂2ml，沸水浴加热2min，流水冷却，用水补足到15ml刻度。在540nm波长下测定吸光度。 4样品测定 样品液适当稀释，使糖浓度为0.1-1.0mg/ml，取稀释后的糖液1.0ml于15ml刻度试管中，加DNS试剂2.0ml，沸水煮沸2min，冷却后用水补足到15ml刻度，在540nm波长下测定吸光度。从标准曲线查出葡萄糖mg/ml数。求出样品中糖含量。

pH 0.1M柠檬酸/ml 0.1M柠檬酸钠/ml pH 0.1M柠檬酸/ml 0.1M柠檬酸钠/ml 3.0 18.6 1.4 5.0 8.2 11.8 3.2 17.2 2.8 5.2 7.3 12.7 3.4 16.0 4.0 5.4 6.4 13.6 3.6 1 4.9 5.1 5.6 5.5 14.5 3.8 1 4.0 6.0 5.8 4.7 15.3 4.0 13.1 6.9 6.0 3.8 16.2 4.2 12.3 7.7 6.2 2.8 17.2 4.4 11.4 8.6 6.4 2.0 18.0 4.6 10.3 9.7 6.6 1.4 18.6 4.8 9.2 10.8 C6H8O7·H2O分子量＝210.14 0.1M溶液含21.01g/L Na3C6H5O7·2H2O分子量＝294.12 0.1M溶液含29.41g/L

无水葡萄糖内控质量标准

无水葡萄糖 质量标准 制定人: 日期: 审核人: 日期: 批准人: 批准日期: 生效日期: 河北新世纪药业有限公司 新世纪药业共 3 页第 1 页 无水葡萄糖

Wushui Putaotang Anhydrous Glucose C 6H 12 O 6 180.16 本品为D-（+）-吡喃葡萄糖。 [性状]本品为无色结晶或白色结晶性粉末；无臭，味甜。 本品在水中易溶，在乙醇中微溶。 比旋度取本品约10g，精密称定，置50ml量瓶中，加水适量与氨试液2.0ml 溶解后，加水稀释至刻度，摇匀，放置60分钟，在25℃时，依法测定（附录47页），比旋度为+52.6。至+53.2。。 [鉴别]（1）取本品0.2g，加水5ml溶解后，缓缓滴入微温的碱性酒石酸铜试液中，即生成氧化亚铜的红色沉淀。 （2）本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱一致。 [检查] 酸度取本品2.0g，加水20ml溶解后，加酚酞指示液3滴与氢氧化钠滴定液（0.02mol/L）0.2ml，应显粉红色。 溶液的澄清度与颜色取本品5.0g，加热水溶解后，放冷，用水稀释至10ml，溶液应澄清无色；如显浑浊，与1号浊度标准液（附录83页）比较，不得更浓；如显色，与对照液（取比色用氯化钴液3ml，比色用重铬酸钾液3ml与比色用硫酸铜液6ml加水稀释成加水稀释成50ml）1.0ml加水稀释至10ml比较，不得更深。 乙醇溶液的澄清度取本品1.0g，加乙醇20ml，置水浴上加热回流约40分钟，溶液应澄清。 氯化物取本品0.60g，依法检查（附录63页），与标准氯化钠溶液6.0ml 制成的对照液比较，不得更浓（0.01%）。 硫酸盐取本品2.0g，依法检查（附录63页），与标准硫酸钾溶液2.0ml 制成的对照液比较，不得更浓（0.01%）。 亚硫酸盐与可溶性淀粉取本品1.0g，加水10ml溶解后，加碘试液1滴，应即显黄色。

分光光度计法测定糖

实验二总糖和还原糖的测定（二） ──3,5－二硝基水杨酸法 目的要求： 掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用比色法测定还原糖的方法。 实验原理: 在NaOH和丙三醇存在下，3,5－二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在540nm波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。 试剂和器材 一、试剂 3,5－二硝基水杨酸（DNS）试剂：称取6.5g DNS溶于少量热蒸馏水中，溶解后移入1000ml容量瓶中，加入2mol/L氢氧化钠溶液325ml，再加入45g丙三醇，摇匀，冷却后定容至1000ml。 葡萄糖标准溶液：准确称取干燥恒重的葡萄糖200mg，加少量蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至100ml，即含葡萄糖为2.0mg/ml。 6mol/L HCl：取250ml浓HCl（35%～38%）用蒸馏水稀释到500ml。 碘－碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中。 6N NaOH：称取120g NaOH溶于500ml蒸馏水中。 0.1% 酚酞指示剂。 二、材料 藕粉，玉米淀粉。

三、器材 WFJ UV－2000型分光光度计，水浴锅，电炉，15mm×180mm试管。 操作方法 一、葡萄糖标准曲线制作 取5支15mm×180mm试管，按下表加入2.0mg/ml葡萄糖标准液和蒸馏水。 管号葡萄糖标准液蒸馏水葡萄糖含量OD540 /ml /ml /mg 0 1 0 0.2 1 0.8 0.4 2 0.4 0.6 0.8 3 0.6 0. 4 1.2 4 0.8 0.2 1.6 5 1 0 2 在上述试管中分别加入DNS试剂2.0ml，于沸水浴中加热2min进行显色，取出后用流动水迅速冷却，各加入蒸馏水9.0ml，摇匀，在540nm波长处测定光吸收值。以1.0ml蒸馏水代替葡萄糖标准液按同样显色操作为空白调零点。以葡萄糖含量（mg）为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线。 二、样品中还原糖的提取 准确称取0.5g藕粉，放在100ml烧杯中，先以少量蒸馏水(约2 ml)调成糊状，然后加入40ml蒸馏水，混匀，于50℃恒温水浴中保温20min，不时搅拌，使还原糖浸出混。过滤，将滤液全部收集在50ml的容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，即为还原糖提取液。 三、样品总糖的水解及提取 准确称取0.5g玉米淀粉，放在锥形瓶中，加入6mol/L HCl 10ml，蒸馏水15ml，在沸水浴中加热0.5h，取出1～2滴置于白瓷板上，加1滴I-KI溶液检查水解是否完全。如已水解完全，则不呈现蓝色。水解毕，冷却至室温后加入1滴酚酞指示剂，以6N NaOH溶液中和至溶液呈微红色，并定容到100ml，过滤取滤液10ml于100ml容量瓶中，定容至刻度，混匀，即为稀释1000倍的总糖水解液，用于总糖测定。 四、样品中含糖量的测定 取7支15mm×180mm试管，分别按下表加入试剂：

总糖实验报告范本

Record the situation and lessons learned, find out the existing problems and form future countermeasures. 姓名：___________________ 单位：___________________ 时间：___________________ 总糖实验报告

编号：FS-DY-20502 总糖实验报告 糖在我们日常生活中随处可见，我们吃的米饭、水果、零食中或多或少都含有一些糖类。同时，糖也是我们维持机体运动所必不可少的物质，没有了它，就没有了能量的来源。我们这次便走进实验室探索糖类的奥秘。本次实验我们将用3,5—二硝基水杨酸法测定总糖和还原糖中的含糖量。本次实验中，我们除了要掌握还原糖和总糖的测定基本原理还要学习比色法测定还原糖的操作方法以及分光度法测定的原理和方法。 首先，让我们一起来了解一下它们的测定方法吧。还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法

使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。 一、实验目的 1、掌握还原糖和总糖的测定的基本原理 2、学习比色法测定还原糖的操作方法 3、学习分光光度法测定的原理和方法 二、实验原理 还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。还原糖是指含有自由醛基或酮基 的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。利用

无水葡萄糖内控质量标准

制药GMP管理文件 一、目的：根据无水葡萄糖原料的法定标准，确立无水葡萄糖原料的质检依据。 二、适用范围：适用于无水葡萄糖原料的质检测定。 三、责任者：质检部人员。 四、正文： 无水葡萄糖 本品为D-（+）-吡喃葡萄糖。 【性状】本品为无色结晶或白色结晶性粉末，无臭，味甜。 本品在水中易溶，在乙醇中微溶。 比旋度取本品约10g，精密称定，置50ml量瓶中，加水适量与氨试液2.0ml，溶解后，用水稀释至刻度，摇匀，放置60分钟，在25℃时，依法测定，比旋度为+52.6°至+53.2°。 【鉴别】1取本品约0.2g，加水5ml溶解后，缓缓滴入温热的碱性酒石酸铜试液中，即生 成氧化亚铜的红色沉淀。 2本品的红外光吸收图谱与对照的图谱一致。

【检查】酸度取本品2.0g，加水20ml溶解后，加酚酞指示液3滴与氢氧化钠滴定液 (0.02mol/L)0.20ml，应显粉红色。 溶液的澄清度与颜色取本品5g，加热水溶解后，放冷，用水稀释至10ml,溶液应澄清无色；如显浑浊，与1号浊度标准液比较，不得更浓；如显色，与对照液（取比色用氯化钴液3ml、比色用重铬酸钾液3ml与比色用硫酸铜液6ml，用水稀释成50ml）1.0ml加水稀释至10ml比较，不得更深。 乙醇溶液的澄清度取本品1.0g，加乙醇20ml，置水浴上加热回流约40分钟，溶液应澄清。 氯化物取本品0.6g，依法检查，与标准氯化钠溶液6.0ml制成的对照液比较，不得更浓（0.01%）。 硫酸盐取本品2.0g，依法检查，与标准硫酸钾溶液2.0ml制成的对照液比较，不得更浓 （0.01%）。 亚硫酸盐与可溶性淀粉取本品1.0g加水10ml溶解后，加碘试液1滴，应即显黄色。 干燥失重取本品，在105℃干燥至恒重，减失重量不得过1.0% 。 炽灼残渣不得过0.1% 。 蛋白质取本品1.0g，加水10ml溶解后，加磺基水杨酸溶液(1→5)3ml，不得发生沉淀。 钡盐取本品2.0g，加水20ml溶解，溶液分成2等份，1份加稀硫酸1ml，另 1份中加水1ml，摇匀，放置15分钟，两液均应澄清。

还原糖和总糖的测定汇总

实验一还原糖和总糖的测定 姓名：李凯学号：5603115053 一、实验目的 1、掌握还原糖和总糖测定的基本原理 2、学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用 二、实验原理 还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量(还原糖以葡萄糖含量计)。 还原糖在碱性条件下加热可被氧化成糖酸及其它产物，而氧化剂3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，

所以在计算多糖含量时应乘以系数0.9。 三、实验材料和试剂 1、实验材料面粉 2、实验试剂 ①1mg/ml葡萄糖标准液 ②3,5-二硝基水杨酸(DNS)试剂 ③碘-碘化钾溶液： ④酚酞指示剂： ⑤6M HCl和6M NaOH 四、实验器材 具塞玻璃刻度试管，50ml离心管，100ml烧杯，100ml 三角瓶，100ml容量瓶，移液管：1ml；2ml；10ml，恒温水浴锅，离心机，天平，分光光度计。 五、操作步骤 1、制作葡萄糖标准曲线 取7支具塞刻度试管编号，按表1分别加入浓度为1mg/ml的葡萄糖标准液、蒸馏水和DNS试剂，配

总糖实验报告范本

总糖实验报告范本 总糖实验样本报告 2021 糖在我们的日常生活中随处可见。我们吃的米饭、水果和小吃或多或少都含有一些糖。同时，糖也是我们维持身体运动的必需物质。没有它，就没有能源。这次我们去实验室探索糖的奥秘。在本实验中，我们将使用3，5-二硝基水杨酸法测定总糖和还原糖中的糖含量。在本实验中，不仅要掌握还原糖和总糖测定的基本原理，还要学习比色法的操作方法和分光光度法测定的原理和方法。 首先我们来看看他们的判定方法。还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。还原糖是指含有游离醛基或酮基的糖，单糖是还原糖，二糖和多糖不一定是还原糖，乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。植物样品中的单糖、二糖和多糖可以利用糖的不同溶解度进行提取。无还原性的单糖和多糖可以通过酸水解降解为可还原的单糖，然后分别计算样品中还原糖和总糖的含量(还原糖以葡萄糖含量为基础)。还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸等产物，而3，5-二硝基水杨酸被还原成棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质的颜色成正比。样品中还原糖和总糖的含量可通过分光光度计测量540纳米波长的光密度，检查标准曲线并计算得到。多糖水解成单糖时，需要加入一分子水才能破坏每个糖苷键，所以多糖含量要乘以0.9。 一、实验目的 1、掌握还原糖和总糖测定的基本原理 2.学习比色测定还原糖的操作方法3。学习分光光度法测定的原理和方法 二、实验原理 还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。还原糖是指游离醛基或酮基

所有的糖和单糖都是还原糖，二糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。植物样品中的单糖、二糖和多糖可以利用糖的不同溶解度进行提取。无还原性的单糖和多糖可以通过酸水解降解为可还原的单糖，然后分别计算样品中还原糖和总糖的含量(还原糖以葡萄糖含量为基础)。 还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸等产物，而3，5-二硝基水杨酸被还原成棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质的颜色成正比。样品中还原糖和总糖的含量可通过分光光度计测量540纳米波长的光密度，检查标准曲线并计算得到。多糖水解成单糖时，需要加入一分子水才能破坏每个糖苷键，所以多糖含量要乘以0.9。 第三，材料和仪器的准备。 实验材料：面粉。实验试剂 (1)1毫克/毫升葡萄糖标准溶液 准确称取100毫克80烘焙至恒重的分析纯葡萄糖，放入小烧杯中，加入少量蒸馏水溶解，转移至100毫升容量瓶中，用蒸馏水定容至100毫升，混合均匀，置于 4冰箱中备用。 (2) 3，5-二硝基水杨酸试剂 在含185克酒石酸钾钠的500毫升热水溶液中加入6.3克DNS和262毫升2M NaOH溶液，加入5克结晶苯酚和5克亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加入蒸馏水 至1000毫升，保存在棕色瓶中备用。 (3)碘-碘化钾溶液：称取碘5克、碘化钾10克，溶于100毫升蒸馏水中。(4)酚酞指示剂：称取0.1g酚酞和d 分光光度计的基本原理是溶液中的物质在光的照射下具有吸收光的作用，物质对光的吸收是选择性的。不同的物质有各自的吸收光谱，所以当某种单色光通过溶液时，

实训二、葡萄糖标准曲线的绘(完)制

实训二、葡萄糖标准曲线的绘制 一、实训目的 1、了解DNS法测定还原糖的基本原理 2、通过DNS法测定还原糖的含量，建立吸光度与还原堂含量之间的线形关系，用于后续纤维素酶酶活性的测定 3、通过定量操作，让学生形成准确称量、测定的理念。 二、实训原理 具有还原性末端的寡糖和有还原基团的单糖在沸水浴条件下可以与DNS试剂发生显色反应。反应液颜色的强度（吸光度OD值）与还原糖量（此处即为葡萄糖量）成正比关系。 三、实训方法 1、DNS溶液的配制 称取3，5－二硝基水杨酸3.15g(化学纯)，加水500ml，搅拌5s，水浴至45℃，然后逐步加入100ml氢氧化钠溶液（称取氢氧化钠20.0g，加水溶解，定容到100ml），同时不断搅拌，直到溶液清澈透明（注意：在加入过程中，溶液温度不要超过48℃）。再逐步加入四水酒石酸甲钠91g，苯酚 2.50g和无水亚硫酸钠2.50g。继续45℃水浴加热，同时补加水300ml，不断搅拌，直到加入的物质全部溶解。停止加热，冷却到室温后，用水定容到1000ml，用烧结玻璃过滤器过滤。取滤液，储存在棕色瓶中，避光保存。室温下存放7d后可以使用，有效期为6个月。 （笔者注：在处理酸、碱和配制DNS试剂时，请尽可能戴上保护眼镜和乳胶手套，实验应在通风橱或通风良好的房间进行。一旦皮肤或者眼睛接触了上述物质，应及时用大量的清水冲洗） 2、 0.1％葡萄糖标准液 准确称取100mg分析纯的葡萄糖（预先在105℃干燥至恒重），用少量蒸馏水溶解后定容至100ml，保存于冰箱中备用。 3、葡萄糖标准曲线的绘制 取9支具塞刻度试管，分别按表1顺序加入各种试剂。 表 1 试剂加入顺序