电泳主要影响因素

电泳主要影响因素

1、电压

电压由树脂本身的结构决定，不同产品都有一个不同的操作范围，在此范围内，如果电压过低，漆膜会变薄，泳透率会降低，工件内腔及夹缝处漆膜会很薄，甚至上不了漆，严重影响漆膜的性能，比如耐盐雾性能降低。电压过高，沉积速度快，过高的电压会产生漆膜缺陷，会产生漆膜粗糙，桔皮，严重时还会出现漆膜被击穿。所以，应根据不同的产品调整不同的电压。

2、时间

在同一电压下电泳时间和漆膜厚度成正比，电泳时间越长，漆膜越厚，相对漆膜走位会更好，电泳时间越短，漆膜越薄，走位也会变差，同样，不同工件电泳的时间也应进行调整。

3、槽液固体份

槽液固体份是指电泳槽液中的成膜物质(树脂和颜料)的含量，现场生产一般通过糖度计来测量，不过糖度计测出来的含量跟实际的含量比，会有一定的偏差，例如，糖度计测出来槽液固体份12个点，实际槽液固体份约在10%。实验室测试槽液固体份用烘干法测量，就是在槽液里取样约2克，放在规定的测量杯里，置于烤箱里120度，烘烤120分钟后，槽液剩余物质除以取样量乘以百分之百即为槽液固体份。

槽液固体份对槽液的稳定性，泳透率以及漆膜厚度，漆膜性能都有一定的影响。

4、温度

电泳槽液温度对漆膜厚度，槽液稳定性都有很大的影响，当温度过高时，电极反应和电泳沉积速度会加快，会让膜厚增加，泳透率和附着力变差，外观容易出现起皱，针孔，粗糙等现象，同时温度过高会让溶剂蒸发太快，加速槽液老化，使槽液产生结块和沉淀；温度过低，电泳沉积速度减慢，粘度增加漆膜变薄，外观会产生厚薄不匀和针孔问题，同时槽液循环减慢，颜料沉积加快，槽液稳定性会下降。

5、PH值

电泳槽液的PH值是电泳漆槽液的一个重要参数，影响到电泳漆的导电性，从而影响树脂在槽液中的泳动，适当的PH值能确保树脂的水溶性和稳定性。PH过高时，槽液稳定性变差，会产生漆膜发粗、发光、结块、针孔，槽液中出现大量不溶性颗粒、槽液分层、导电性能下降。当PH过低时，会增加漆膜返溶，严重时可能上不了漆。当电泳槽液里杂质过多时，会影响槽液PH值，所以，工件进入电泳槽前，必须做到干净无油污以及酸碱残留，并且电泳槽液

要经常超滤。

6、电导率

电导率可以衡量电泳漆中涂料粒子的移动和通电能力，槽液的电导率高低取决于固体份高低和槽液中的杂质粒子含量。电导率过高，槽液分散性变差，泳透率降低，漆膜出现粗糙多孔，附着力变差，失光等问题，当杂志粒子带入槽液过多会污染槽液使电导率和PH超标过多，严重时会造成整槽电泳液报废，电导率过低时则需要补加电泳涂料，加速槽液更新。

7、溶剂含量

电泳涂料中含有起助溶作用的有机溶剂，其含量较低，可是它对漆膜外观和涂料稳定性有重要影响，一般涂料的溶剂含量控制在一定的范围，溶剂含量过低，膜厚降低，外观变粗糙，流平变差，槽液容易老化。

溶剂含量过高时，漆膜变厚，容易有水印，湿膜过于粘手。溶剂含量的多少可用一个简单的方法来确定：用湿过水的食指和拇指轻捏湿膜，如果漆膜过硬无指印，则表示溶剂过少;当湿膜过软，手指离开时能把漆膜带走捏变形，甚至有时会拉出丝，则溶剂过多，当溶剂含量过多时，超滤解决;当湿膜柔软且能留淡淡的指印时溶剂含量适中。

注：内容来源于志邦公司网站

琼脂糖凝胶电泳常见问题分析

琼脂糖凝胶电泳常见问题分析

DNA凝胶电泳简介 一、实验原理 DNA电泳是基因工程中最基本的技术，DNA制备及浓度测定、目的DNA片段的分离，重组子的酶切鉴定等均需要电泳完成。根据分离的DNA大小及类型的不同，DNA电泳主要分两类：

1、聚丙烯酰胺凝胶电泳适合分离1kb以下的片段，最高分辨率可达1bp，也用于分离寡核苷酸，在引物的纯化中也常用此中凝胶进行纯化，也称PAGE纯化。 2、琼脂糖凝胶电泳可分离的DNA片段大小因胶浓度的不同而异，胶浓度为0.5～0.6%的凝胶可以分离的DNA片段范围为20bp～50kb。电泳结果用溴化乙锭（EB）染色后可直接在紫外下观察，并且可观察的DNA条带浓度为纳克级，而且整个过程一般1小时即可完成。由于该方法操作的简便和快速，在基因工程中较常用。 二、琼脂糖凝胶 琼脂糖是从琼脂中分离得到，由1，3连接的吡喃型b-D-半乳糖和1，4连接的3，6脱水吡喃型阿a-L-半乳糖组成，形成相对分子量为104～105的长链。琼脂糖加热溶解后分子呈随机线团状分布，当温度降低时链间糖分子上的羟基通过氢键作用相连接，形成孔径结构，而随着琼脂糖浓度不同形成不同大小的孔径。表1给出了不同浓度凝胶对DNA片段的线性分离范围。 表1不同类型琼脂糖分离DNA片段大小的范围 由于琼脂糖凝胶是通过氢键的作用，因此过酸或过碱等破坏氢键形成的方法常用于凝胶的再溶化，象NaClO4能用于凝胶的裂解，一般的凝胶回收试剂盒利用的也是这一原理。 随着实验技术的发展，也针对不同用途开发了各种类型的琼脂糖凝胶：（1）低熔点琼脂糖凝胶，用于DNA片段的回收，且由于该种凝胶中无抑制酶，可在胶中进行酶切、连接等；（2）高熔点凝胶，可分离小于1kb的DNA片段，专用于PCR产物的分析；（3）快速凝胶，电泳速度比普通凝胶中快一倍，可节省实验时间；（4）适用于DNA大片段的分离。（5）其它类型。各生产商还开发很多类型的凝胶，可根据实验要求选择不同类型的，选择原则是考虑合适的机械强度和熔点。

心理健康的影响因素

心理健康的影响因素 正如健康是生理健康、心理健康、社会适应三方面相互作用的结果一样，心理健康的影响因素也是多方面的。影响个体心理健康的主要因素有生理因素、家庭因素、学校因素、社会因素和个体因素等。 一．生理因素。 影响个体心理健康的生理因素包括遗传和疾病。 （一）遗传。遗传能在多大程度上影响个体的心理健康水平呢？这个问题还没有定论，但有一点可以肯定，生理是心理的基础，如果没有充分的生理条件，人的心理活动就要受到影响。心理学家们曾用家谱分析的方法研究遗传因素对个体心理健康的影响，结果发现，在有心理健康问题的学生中，家族中有癔病、活动过度、注意力不集中病史的中学生所占的比例明显大些。 （二）疾病。除了遗传因素之外，病菌、病毒干扰、大脑外伤、化学中毒、严重躯体疾病等都可能会导致心理障碍甚至精神失常。例如，脑梅毒、流行性脑炎等中枢神经系统传染病，会导致器质性心理障碍；脑震荡、脑挫伤等可能引起意识障碍、遗忘症、言语障碍和人格改变等；甲状腺机能亢进可出现敏感、易怒、暴躁、情绪不稳和自制力减弱等心理异常表现，甲状腺机能不足可引起整个心理活动的迟钝。 二．家庭因素。 （一）家庭结构。家庭结构是指家庭中的人员组成。由于家庭规模和组成家庭的成员不尽相同，家庭又可分为不同的类型，多数研究发现，家庭结构完整且气氛和谐的家庭，有利于儿童心理健康地成长，而破裂家庭或父母不和谐，经常争吵，以及单亲家庭，对儿童身心健康成长明显有不利的影响，容易使儿童产生躯体疾病，同时心理障碍的发生率也较高。 （二）父母教养方式。父母的教养方式对个体的心理发育、人格的形成、归因方式及心理防御能力等都有着极其重要的影响。已有研究表明，父母不良的教养方式对青少年心理健康水平有显著的消极影响。父母的教养方式是影响儿童心理健康发展的重要因素，有关调查表明，父母在教育中表现出态度不一致、压力过大、歧视、打骂或者冷漠等特点时，儿童常常会表现出更多的心理健康问题。 （三）家庭环境。家庭环境是指家庭的物质生活条件、社会地位、家庭成员之间的关系，以及家庭成员的语言、行为和感情的总和，包括实物环境、语言环境、心理环境和人际环境。实物环境是指家庭中实物的摆设；语言环境是指家庭中人与人的语言是否文明礼貌，是否体现民主平等；人际环境是指尊老爱幼、各尽其责等；心理环境是指父母与子女之间的态度及情感交流的状态。 三、学校因素。

RNA凝胶电泳步骤及注意事项

RNA凝胶电泳步骤及注意事项 1%的RNA琼脂糖凝胶电泳可以用来检测RNA的完整性，本实验的主要目的是熟悉植物总RNA非变性胶电泳 操作原理和操作方法与步骤。 一、实验目的 掌握植物总RNA非变性胶电泳的原理和方法。 二、实验原理 RNA电泳可以在变性及非变性两种条件下进行。非变性电泳使用1.0%--1.4%的凝胶，不同的RNA条带也 能分开，但无法判断其分子量。只有在完全变性的条件下，RNA的泳动率才与分子量的对数呈线性关系。因 此要测定RNA分子量时，一定要用变性凝胶。在需快速检测所提总RNA样品完整性时，配制普通的1%琼脂 糖凝胶即可。 三、实验材料、器具及药品 蘑菇的总RNA溶液。电泳仪，电泳槽，电子天平，移液器，枪头，微波炉，紫外透射检测仪等。琼脂糖， 1XTAE电泳缓冲液，0.5μg/ml溴化乙锭(EB)10X载样缓冲液。 四、实验步骤 (1)用1×TAE电泳缓冲液制作琼脂糖凝胶，加1×TAE电泳缓冲液至液面覆盖凝胶。 (2)在超净工作台上，用移液器吸取总RNA样品4μl于封口膜上。在实验台上再加入5μl 1×TAE电泳缓冲液及1μl 的10X载样缓冲液，混匀后，小心加入点样孔。 (3)打开电源开关，调节电压至100V，使RNA由负极向正极电泳，约30min后将凝胶放入EB染液中染色 5min,用清水稍微漂洗。在紫外透射检测仪上观察RNA电泳结果。 试剂： (1)MOPS缓冲液(10*):0.4mol/L 吗啉代丙烷磺酸(MOPS) (Ph7.0)，0.1mol/L NaAc, 10mol/L EDTA。 (2)上样染料：50%甘油，1mmol/L EDTA ,0.4%溴酚蓝，0.4%二甲苯蓝。 (3)甲醛。 (4)去离子甲酰胺。v电泳槽清洗：去污剂洗干净(一般浸泡过夜)——水冲洗——乙醇干燥——3%H2O2灌满——室温放置10分钟——0.1%DEPC水冲洗。 操作： (1) 将制胶用具用70%乙醇冲冼一遍，晾干备用。 (2) 配制琼脂糖凝胶。 ①称取0.5g琼脂糖，置干净的100ml 锥形瓶中，加入40ml蒸馏水，微波炉内加热使琼脂糖彻底溶化均匀。 ②待胶凉至60--70 ℃，依次向其中加入9ml 甲醛、5ml 10X MOPS缓冲液和0.5ul 溴化乙锭，混合均匀。 ③灌制琼脂糖凝胶。 (3) 样品准备： ①取 DEPC处理过的500ul小离心管，依次加入如下试剂： 10x MOPS缓冲液2ul，甲醛3.5ul,甲酰胺(去离子)10ul，RNA 样品 4.5ul,混匀。 ②将离心管置于60℃水浴中保10分钟，再置冰上2分钟。 ③向管中加入3ul 上样染料，混匀。 (4)上样。 (5)电泳：电泳槽内加入1XMOPS缓冲液，于7.5V/ml 的电压下电泳。 (6)电泳结束后，在紫外灯下检查结果。 小结：RNA琼脂糖凝胶电泳中务必去除RNASE酶的污染，所有的试剂需用DEPC水配制，所用的器材也要 的DEPC处理并灭菌，防止RNA被降解

影响人的发展的主要因素

影响人的发展的主要因素 影响个体身心发展的因素非常多，但最主要的是遗传、环境、教育和个体的主观能动性等方面，这几个因素是相互联系、相互影响的。 1.遗传 遗传素质在个体身心发展中具有重要的意义。遗传素质是指个体从上代继承下来的一些天赋特点，包括一些与生俱来的解剖生理特征，如机体的特点、感官和神经系统的特征等。首先，遗传素质为人的身心发展提供了可能性，它是人的身心发展的生理前提。如果没有这些生理条件，人的身心发展就无从实现。其次，遗传素质的生理成熟程度影响着人的身心发展的年龄特征。心理学家格塞尔的同卵双生子的爬梯试验证明，遗传素质的成熟程度制约着人的身心发展水平及阶段。再次，人的遗传素质是有差异的，遗传素质的差异性对人的身心发展有一定的影响作用。这种差异主要表现在人的体态、感官和神经活动的类型上。最后，遗传素质又具有可塑性。人的遗传素质会随着外界环境、教育和实践活动的介入而发生变化。 2.环境 环境是直接或间接地影响个体身心发展的全部外在因素的总和，所有不以培养人为目标的外界对个体发展的影响，例如社会经济生活、文化生活、亲戚、朋友的交往都可以看做是环境的影响。个体身心的发展离不开外界环境的影响。首先，外部社会环境是个体身心发展、成熟的客观条件，对人一生的发展都具有一定的制约作用。如果说遗传素质为人的发展提供了可能性，那么社会环境的影响则能把这种可能性转化为现实。我国古代的荀子就很重视环境对人的潜移默化的影响，他提出：“蓬生麻中，不扶自直；白沙在涅，与之俱黑。”其次，环境对人的作用离不开社会实践，社会实践对于人的发展具有决定性的作用。 3.教育 学校是专门培养人的场所，教育对人的身心发展具有非常重要的意义。首先，教育是人的发展的最重要的外因，教育决定了人的发展方向和发展水平。教育是一种有目的地培养人的活动，能够排除一些外在不良因素的影响，使年轻一代朝着健康、正面的方向发展。学校教育在人的身心发展中具有主导作用，其目的性、系统性、专门性和基础性对青少年的发展具有举足轻重的作用。尤其是学校教育的选择性，对于培养目标的选择、教育内容的选择、教育方式、方法和手段的选择都为青少年、儿童的发展创造了优越的条件和更多的发展可能性。但是，我们也应该看到学校教育对于个体身心发展的主导作用不是无限的，必须要以遗传素质为基础，以外界环境为条件。因此，我们不能夸大教育的作用，而是应该实事求是地看待学校教育在个体身心发展中的作用。

浅谈健康及其影响因素

摘要：“珍爱生命、保护健康”是人类生存的永恒主题，从人类产生到现在，各种各样的疾病严重危害着人类的健康，甚至许多疾病会导致人的死亡，特别是近几年来爆发的非典、禽流感、疯牛病、猪流感等人畜共患疾病，又给人类敲响了警钟。健康不仅仅是没有疾病或虚弱，而且是身体、心理和社会适应的完好状态。载于世界卫生组织（WHO）宪章的这个定义，提示人们健康不仅仅是无疾病、不虚弱，它还涉及身体、心理和社会适应三个方面。身体健康表现为体格健壮，人体各器官功能良好。心理健康指能正确评价自己，应对处理生活中的压力，能正常工作，对社会做出自己的贡献。社会适应的完好状态，是指通过自我调节保持个人与环境、社会及在人际交往中的均衡与协调。 关键词：二元论；亚健康；健康指标；影响因素

前言 大自然是万物赖以生存的基础，人的生命活动一时一刻也离不开它。人类不仅从自然界摄取营养、水分、空气和阳光，以满足机体新陈代谢的需要，而且，也在自然界的影响下，生活、学习和工作。“日出而作，日入而息”就是人们在大自然变化影响下，形成的自然生活规律。寒来暑往，昼夜阴晴，地理环境等等，也都直接或间接地影响着人体，而机体则相应地有所反应。如：春和景明，风和日丽时节，人的心情愉快，生命力旺盛；寒冬腊月，阴晦天气，则使人情绪低沉，精神不振，甚至使一些有风湿病的患者，感到不适等等。因此，人要健康长寿，就得了解自然界变化规龟并且与其相适应。祖国医学非常重视自然环境、季节、气候对人体的影响，认为人生活在自然界中，天（按：泛指大自然）有所变化，人即有所反应。因而提出了“天人相应”的理论，用以说明人与自然息息相关的关系。在中医的经典著作《黄帝内经》中曾明确指出了“人与天地相参也。与日月相应也。”并提出了一整套人与自然关系的理论和保健措施，形成了中医学独特的养生理论体系，在保障中华民族的繁衍昌盛方面，发挥了重要作用。所以，认识和了解这一理论和保健措施，对于人类养生保健是极为有益的。 一、健康的概念 实现“人人享有卫生保健”是全球的共同理想和目标。我国宪法明文规定，维护全体公民的健康和提高各族人民的健康水平，是我国社会主义建设的重要目标和任务之一。自古至今，健康成为各朝各代人们谈论的永久话题，并视之为人生的第一需要。然而什么是健康?如何正确理解和把握健康的确切内涵?这是一个关键问题。由于人们所处时代、环境和条件不同，对健康的认识也不相同。 1.1 神灵主义医学模式 在人类社会发展的早期，生产力极其落后，人人为了获得食品而奔波，难以维持生命，一旦失去了健康便无法生存，此时的健康意义与生命等同。在这个发展阶段中，由于医学处于神灵医学模式时代，医巫混杂，健康被认为是神灵的恩赐，人们对生命现象和疾病充满了神秘感。在尔后的一个很长历史时期，随着生产力水平的提高和物质资料的丰富，人们才开始考虑减轻痛苦和伤害，改善生活，以求更长的生存期。在这个漫长的历史阶段，人们总是把是否患有疾病及疾病的

环境污染物对健康损害的影响因素

环境污染物对健康损害的影响因素 环境污染物对机体健康能否造成危害以及危害的程度，受到许多条件的影响，其中最主要的影响因素为污染物的理化特性、剂量、作用时间、环境条件、健康状况和易感性特征等。 （一）污染物的理化性质 1．化学结构；2．物理特性 （二）剂量或强度 1．有害元素和非必需元素这些元素因环境污染而进入人体的剂量超过一定程度时可引起异常反应，甚至进一步发展成疾病，对于这类元素主要是研究制订其最高容许量的问题，如环境中的最高容许浓度。 2．必需元素这种元素的剂量-反应关系较为更杂，一方面环境中这种必需元素的含量过少，不能满足人体的生理需要时，会使人体的某些功能发生障碍形成一系列病理变化；另一方面，如果环境中这种元素的含量过多，也会引起程度不同的中毒性病变。 因此，对于这类元素不仅要研究和制订环境中最高容许浓度，而且要研究和制订最低供应量的问题。（三）作用时间 毒物在体内的蓄积量受摄入量、生物半减期和作用时间三个因素的影响。 （四）健康效应谱与敏感人群 在环境有害因素作用下产生的人群健康效应，由人体负荷增加到患病、死亡这样一个金字塔的人群健康效应谱所组成，如下图。 图：人群对环境异常变化的反应金字塔形分布 从人群健康效应谱上可以看到人群对环境有害因素作用的反应是存在差异的。尽管多数人在环境有害因素作用下呈现出轻度的生理负荷增加和代偿功能状态，但仍有少数人处于病理性变化，即疾病状态甚至出现死亡。通常把这类易受环境损伤的人群称为敏感人群（易感人群）。 机体对环境有害因素的反应与人的健康状况、生理功能状态、遗传因素等有关，有些还与性别、年龄有关。在多起急性环境污染事件中，老、幼、病人出现病理性改变，症状加重，甚至死亡的人数比普通人群多，如1952年伦敦烟雾事件期间，年龄在45岁以上的居民死亡人数为平时的3倍，1岁以下婴儿死亡数比平时也增加了1倍，在4000名死亡者中，80%名以上患有心脏或呼吸系统病患。

琼脂糖凝胶电泳操作标准流程

琼脂糖凝胶电泳操作标准流程 一、实验目的 琼脂糖凝胶电泳是常用的检测核酸的方法，具有操作方便、经济快速等优点。本铜人阵学习DNA琼脂糖凝胶电泳的使用技术，此关为能力考核，通关成功后，代表具备操作琼脂糖电泳的能力。 二、实验原理 琼脂糖凝胶电泳是常用的用于分离、鉴定DNA、RNA分子混合物的方法，这种电泳方法以琼脂凝胶作为支持物，利用DNA分子在泳动时的电荷效应和分子筛效应，达到分离混合物的目的。DNA分子在高于其等电点的溶液中带负电，在电场中向阳极移动。在一定的电场强度下，DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应，即分子本身的大小和构型是主要的影响因素。DNA分子的迁移速度与其相对分子量成反比。不同构型的DNA分子的迁移速度不同。如环形DNA分子样品，其中有三种构型的分子：共价闭合环状的超螺旋分子（cccDNA）、开环分子(ocDNA)、和线形DNA分子(IDNA)。这三种不同构型分子进行电泳时的迁移速度大小顺序为:cccDNA＞IDNA＞ocDNA 影响核酸分子泳动率的因素主要还是：1、DNA分子大小；2、琼脂糖浓度；3、DNA构想； 4、所用的电压； 5、琼脂糖种类； 6、电泳缓冲液 核酸电泳中常用的染色剂是溴化乙锭（ethidium bromide EB）。溴化乙锭是一种扁平分子，可以嵌入核酸双链的配对碱基之间。在紫外线照射BE-DNA复合物时，出现不同的效应。254nm的紫外线照射时，灵敏度最高，但对DNA损伤严重；360nm紫外线照射时，虽然灵敏度较低，但对DNA损伤小，所以适合对DNA样品的观察和回收等操作。300nm紫外线照射的灵敏度较高，且对DNA损伤不是很大，所以也比较适用。

DNA电泳常见问题分析

DNA电泳常见问题 凝胶电泳操作注意事项 1、琼脂糖：不同厂家、不同批号的琼脂糖，其杂质含量不同，影响DNA的迁移及荧光背景的强度，应有选择地使用。 2、?凝胶的制备：凝胶中所加缓冲液应与电泳槽中的相一致，溶化的凝胶应及时倒入板中，避免倒入前凝固结块。倒入板中的凝胶应避免出现气泡，以免影响电泳结果。 3、?电泳缓冲液：为保持电泳所需的离子强度和pH，应经常更新电泳缓冲液。 4、?样品加入量：一般情况下，宽的梳子可加μg的DNA量,加样量的多少依据加样孔的大小及DNA中片段的数量和大小而定.当加样孔大时,样品上样量应相应加大,否则会造成条带浅甚至辨认不清;反之则应适当减少加样量，但是上样量过多会造成加样孔超载，从而导致拖尾或弥散，对于较大的DNA此现象更明显。 5、?DNA样品中盐浓度会影响DNA的迁移率，平行对照样品应使用同样的缓冲条件以消除这种影响。 6、?DNA迁移率取决于琼脂糖凝胶的浓度，迁移分子的形状及大小。采用不同浓度的凝胶有可能分辩范围广泛的DNA分子，制备琼脂糖凝胶可根据DNA分子的范围来决定凝胶的浓度。小片段DNA的检测应采用聚丙烯酰胺凝胶电泳，以提高分辨率。 7.选择的实验材料要新鲜，处理时间不易过长。 8.在加入细胞裂解缓冲液前，细胞必须均匀分散，以减少DNA团块形成。 9. 提取的DNA不易溶解：不纯，含杂质较多；加溶解液太少使浓度过大。沉淀物太干燥，也将使溶解变得很困难。 10. 电泳检测时DNA成涂布状：操作不慎；污染核酸酶等。

11.分光光度分析DNA的A280/A260小于；不纯，含有蛋白质等杂质。在这种情况下，应加入SDS至终浓度为%，并重复步骤2～8。 12.酚/氯仿/异戊醇抽提后，其上清液太黏不易吸取：含高浓度的DNA，可加大抽提前缓冲液的量或减少所取组织的量 DNA电泳常见问题分析之一 1? 请问配制聚丙烯酰胺凝胶电泳胶时，促凝的是TEMED还是过硫酸铵胶聚时间很长如何解决 过硫酸铵提供驱动丙烯酰胺和双丙烯酰胺聚合所需的自由基，而TEMED通过催化过硫酸铵形成自由基而加速它俩的聚合。胶聚合时间长可能是TEMED失效了，过硫酸铵固体时间过久也会失效的。 一个让PAGE胶很快聚合的方法： 不要先配AP（过硫酸铵）溶液，因为AP很容易变质。在保证TEMED和AP质量的情况下，每次配胶时，直接称一定量的AP粉剂溶入液体状态的PAGE中，这样可以保证AP的催化能力，而且可以多加一点。配25ml的PAGE胶，加克AP粉剂，最后加入25ulTEMED，20分钟左右就可以凝固（当然这个时候拔梳子，会有少量未凝固的PAGE在孔里形成丝状干扰，使加的样品看起来不太漂亮，但一般不影响跑胶效果和条带的形状和位置）。?? 2? DNA电泳的MARKER怎么是扭曲的？ 1、配制胶时的缓冲液需要和电泳缓冲液不是同时配制的.最好是同时配制.电泳时缓冲液高过液面1－2mm即可。 2、电泳时电压过高,可以在电泳前15分钟用较低电压(3V/cm),等条带出孔后比较漂亮了.然后再调电压。 3、上样时尽量慢慢加样,等样品自然沉降后再加电压。

RNA凝胶电泳步骤及注意事项

R N A凝胶电泳步骤及注 意事项 Hessen was revised in January 2021

RNA凝胶电泳步骤及注意事项 1%的RNA琼脂糖凝胶电泳可以用来检测RNA的完整性，本实验的主要目的是熟悉植物总RNA非变性胶电泳 操作原理和操作方法与步骤。 一、实验目的 掌握植物总RNA非变性胶电泳的原理和方法。 二、实验原理 RNA电泳可以在变性及非变性两种条件下进行。非变性电泳使用%%的凝胶，不同的RNA条带也能分开，但无 法判断其分子量。只有在完全变性的条件下，RNA的泳动率才与分子量的对数呈线性关系。因此要测定RNA分子量时，一定要用变性凝胶。在需快速检测所提总RNA样品完整性时，配制普通的1%琼脂糖凝胶即可。 三、实验材料、器具及药品 蘑菇的总RNA溶液。电泳仪，电泳槽，电子天平，移液器，枪头，微波炉，紫外透射检测仪等。琼脂糖， 1XTAE电泳缓冲液，μg/ml溴化乙锭(EB)10X载样缓冲液。 四、实验步骤 (1)用1×TAE电泳缓冲液制作琼脂糖凝胶，加1×TAE电泳缓冲液至液面覆盖凝胶。 (2)在超净工作台上，用移液器吸取总RNA样品4μl于封口膜上。在实验台上再加入5μl 1×TAE电泳缓冲液及1μl 的10X载样缓冲液，混匀后，小心加入点样孔。 (3)打开电源开关，调节电压至100V，使RNA由负极向正极电泳，约30min后将凝胶放入EB染液中染色5min,用清水稍微漂洗。在紫外透射检测仪上观察RNA电泳结果。 试剂： (1)MOPS缓冲液(10*):L 吗啉代丙烷磺酸(MOPS) ，L NaAc, 10mol/L EDTA。 (2)上样染料：50%甘油，1mmol/L EDTA ,%溴酚蓝，%二甲苯蓝。 (3)甲醛。 (4)去离子甲酰胺。v电泳槽清洗：去污剂洗干净(一般浸泡过夜)——水冲洗——乙醇干燥——3%H2O2灌满——室温放置10分钟——%DEPC水冲洗。 操作： (1) 将制胶用具用70%乙醇冲冼一遍，晾干备用。 (2) 配制琼脂糖凝胶。 ①称取琼脂糖，置干净的100ml 锥形瓶中，加入40ml蒸馏水，微波炉内加热使琼脂糖彻底溶化均匀。 ②待胶凉至60--70 ℃，依次向其中加入9ml 甲醛、5ml 10X MOPS缓冲液和溴化乙锭，混合均匀。 ③灌制琼脂糖凝胶。 (3) 样品准备： ① 取 DEPC处理过的500ul小离心管，依次加入如下试剂： 10x MOPS缓冲液2ul，甲醛,甲酰胺(去离 子)10ul，RNA 样品 ,混匀。 ② 将离心管置于60℃水浴中保10分钟，再置冰上2分钟。 ③ 向管中加入3ul 上样染料，混匀。 (4)上样。 (5)电泳：电泳槽内加入1XMOPS缓冲液，于ml 的电压下电泳。 (6)电泳结束后，在紫外灯下检查结果。 小结：RNA琼脂糖凝胶电泳中务必去除RNASE酶的污染，所有的试剂需用DEPC水配制，所用的器材也要的DEPC处理并灭菌，防止RNA被降解

影响关键词排名的五个因素

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影响关键词排名的五个因素 SEO从业人员其实每天都是相当忙碌的，不断地更新着网站内容，寻求着更好的外链，想着怎么截流，怎么争取更好的排名。但是很多站长都遇到过这个问题，自己辛辛苦苦做了好几个月，排名就是上不去，一直在几十名开外甚至上百名开外徘徊，不知道下一步应该怎么走了。 其实，当局者迷，旁观者清，从工作中跳出来，我们就会发现很多问题，那么导致关键词没有排名的原因到底有哪些呢？ 一、外链的量 1、质量是不是低了 很多朋友每天需要抽出大把的时间来放到外链的建设上面，不管其网站和论坛怎么样，先发了链接再说，久而久之你的外链是很脆弱的，很多轻易接受外链的网站或论坛根本没有被搜索引擎收录的资本，甚至很多的网站和论坛都无人更新无人管理，你在上面发布再多外链也是无济于事，所以外链质量很重要，好的外链不仅可以给你的网站带来好的排名更可以带来流量，所以各位朋友在外链的建设方面要更多的关注质量是否够高，有没有价值。 2、数量是不是多了或者少了 一些SEO从业人员在给新站做排名的时候本着“内容为王，外链为皇”的江湖秘籍，一股脑的在X宝或者一些链接交易网站给自己的网站买几百几千个外链，这样做是毫无意义甚至很危险的，搜索引擎看到你是一个新站并且一夜之间冒出来成百上千的外链，就会判断你为作弊，有被K的风险。 当然外链太少跟不上节奏也没有效果，也有些朋友的外链建设就是三天打渔两天晒网，没有一个规律也不成方圆。建议各位朋友坚持每天给自己站做三到五条质量高的外链，长久下来你网站的外链数量和质量也是很可观的，排名当然也会上去了。 二、内链是否合理 内链是优化网站体验很好的方式，目的就是满足用户的次级需求，就像超市的电梯扶手旁为什么要放一堆零食，目的就是刺激消费。 内链建设一定要有理有据，不可太多也不能太少，要充分的从用户体验的角度出发，哪些关键词可以做，哪个位置最适合做内链，是不是图文形式比单纯的文字更有吸引力。都需要各位SEO从业者认真的从用户角度出发来建设自己网站的内链。分析内链是否合格就可以从跳出率入手，如果你的内链跳出率很高，那么就该想想内链是否有问题了。 三、关键词有无堆砌 很多站长为了让自己网站能快速的有排名，就在网站里到处散布网站关键词，这样也是导致关键词没有排名的重要杀手。关键词的堆砌第一是对网站的内容来说会有一定的影响，第二就是搜索引擎同样会认为你是在作弊，有时候不仅不给你排名，更会用K站来警示你！

SDS-PAGE电泳注意事项

SDS是阴离子去污剂，作为变性剂和助溶试剂，它能断裂分子内和分子间的氢键，使分子去折叠，破坏蛋白分子的二、三级结构。 强还原剂如巯基乙醇，二硫苏糖醇能使半胱氨酸残基间的二硫键断裂。 在样品和凝胶中加入还原剂和SDS后，分子被解聚成多肽链，解聚后的氨基酸侧链和SDS 结合成蛋白- SDS胶束，所带的负电荷大大超过了蛋白原有的电荷量，这样就消除了不同分子间的电荷差异和结构差异。 浓缩胶的作用是有堆积作用，凝胶浓度较小，孔径较大，把较稀的样品加在浓缩胶上，经过大孔径凝胶的迁移作用而被浓缩至一个狭窄的区带。 聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，催化聚合的常用方法有两种：化学聚合法和光聚合法。化学聚合以过硫酸铵（AP）为催化剂，以四甲基乙二胺（TEMED）为加速剂。 不连续体系由电极缓冲液、浓缩胶及分离胶所组成。浓缩胶是由AP催化聚合而成的大孔胶，凝胶缓冲液为pH6.7的Tris-HCl。分离胶是由AP催化聚合而成的小孔胶，凝胶缓冲液为pH8.9 Tris-HCl。电极缓冲液是pH8.3 Tris-甘氨酸缓冲液。2种孔径的凝胶、2种缓冲体系、3种pH值使不连续体系形成了凝胶孔径、pH值、缓冲液离子成分的不连续性，这是样品浓缩的主要因素。 SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳经常应用于提纯过程中纯度的检测，纯化的蛋白质通常在SDS 电泳上应只有一条带，但如果蛋白质是由不同的亚基组成的，它在电泳中可能会形成分别对应于各个亚基的几条带。 注意问题 1.样品处理 上样缓冲液的作用：形成SDS-蛋白复合物，使其带负电；SDS和巯基乙醇使蛋白质解离，综上两点为了在电泳中，只根据分子量来分离。 SDS作用：去蛋白质电荷、解离蛋白质之间的氢键、取消蛋白分子内的疏水作用、去多肽折叠，还有助溶剂的作用。 2. SDS-PAGE电泳凝胶中各主要成分的作用 （1）浓缩与分离胶凝固的好坏直接关系到电泳成功与否，与促凝剂及环境密切相关。 3. 提高SDS-PAGE电泳分辨率的途径 待凝胶在室温凝固后，可在室温下放置一段时间使用。忌即配即用或4度冰箱放置，前者易导致凝固不充分，后者可导致SDS结晶。一般凝胶可在室温下保存4天，SDS可水解聚丙烯酰胺。 4. .“微笑”（两边翘起中间凹下）形带原因 主要是由于凝胶的中间部分凝固不均匀所致，多出现于较厚的凝胶中。 处理办法：待其充分凝固再作后续实验。 5. “皱眉”（两边向下中间鼓起）形带原因 主要出现在蛋白质垂直电泳槽中，一般是两板之间的底部间隙气泡未排除干净。 处理办法：可在两板间加入适量缓冲液，以排除气泡。 6. 带出现拖尾现象 主要是样品融解效果不佳或分离胶浓度过大引起的。 处理办法：加样前离心；选择适当的样品缓冲液，加适量样品促溶剂；电泳缓冲液时间过长，重新配制；降低凝胶浓度。 7. 带出现纹理现象 主要是样品不溶性颗粒引起的。

我国就业的主要影响因素分析

我国就业的主要影响因素分析 影响我国就业形势的因素纷繁复杂，既有来自国内经济增长速度和产业结构的变化、人口年龄结构和生育政策的变化等，也有来自国际经济环境变化等因素。这些因素当中既有积极有利的方面，也有消极不利的方面，因此需要在仔细分析这些因素影响的基础上预测未来我国的就业趋势变化。 （一）国际政治经济形势将愈发复杂多变 国际政治经济环境的变化会通过各种渠道传导到国内，从而对国内的经济和就业产生影响。在经济方面，美国经济的逐渐复苏和欧洲债务危机的逐渐化解都将增强世界经济发展的动力，有利于我国扩大对外贸易和出口，从而带来就业的增长；而印度、巴西、俄罗斯和南非等金砖国家和新兴经济体的增长乏力又会减弱对我国出口产品的需求，从而直接或间接影响到我国的经济增长和就业。在地缘政治方面，乌克兰危机对俄罗斯乃至全球经济增长带来较大挑战；与日本、菲律宾等国在领土上的争端和政治上的分歧会使我国双边经贸关系受到一定影响，从而波及我国相关出口企业的就业状况。 （二）我国经济下行压力进一步加大 与就业增长最为密切相关的因素就是经济增长率。我国改革开放30多年来经济长期保持了高速增长的水平，1978-2013年经济增长的平均增速达到了9.8%。然而，我国宏观经济面临三期叠加，潜在增长率将明显下降，2012和2013年的经济增长率均在7.7%左右，预计2014年我国经济增速将回落至7.3%左右。我国经济增速回落属于向新常态的过渡，将逐步由高速回调至中高速增长平台，这种增速的放缓必然会给就业增长带来一定的压力。 （三）人口老龄化的趋势将更加明显 上世纪80年代以来的较长时间内，我国实行了独生子女政策，当时是为了应对人口的高生育率和高增长率而采取的强制措施。这一措施在一段时间内确实起到了有效控制人口增长、提高人口素质的作用。然而，进入新世纪以来我国进入了快速老龄化社会，2002年我国65岁及以上的人口占总人口的比例为7.3%，到2013年这一数值已上升至9.7%。与此同时，我国适龄劳动人口的比重也从2011年开始逐渐下降。为了适应未来人口老龄化的严峻局面，国家人口政策开始调整，从严格的独生子女政策转变为放开“双独”家庭二胎限制再到允许“单独”家庭生养第二个子女。人口生育政策的这种调整将会减少近期育龄妇女的劳动参与率，但将有利于远期劳动力的供给。

影响健康的因素

影响健康的因素 影响健康的因素是多方面的，主要有环境因素、生物因素、生活方式因素和保健服务因素。 （1）环境因素环境对人类健康影响极大，无论是自然环境还是社会环境，人类一方面要享受它的成果，一方面要接受它带来的危害。自然界养育了人类，同时也随时产生、存在和传播着危害人类健康的各种有害物质。气候、气流、气压的突变，不仅会影响人类健康，甚至会给人类带来灾害。在社会环境中，政治制度的变革，社会经济的发展，文化教育的进步与人类的健康紧密相连。因此，人类要健康，就必须坚持不懈地做好改善环境、美化环境、净化环境和优化环境的工作。 （2）生物因素在生物因素中，影响人类健康最重要是遗传因素和心理因素。现代医学发现，遗传病不仅有二三千种之多，而且发病率高达20％。因此，重视遗传对健康的影响具有特殊意义。心理因素对疾病的产生、防治有密切关系，消极心理因素能引起许多疾病，积极的心理状态是保持和增进健康的必要条件。医学临床实践和科学研究证明，消极情绪如焦虑、怨恨、悲伤、恐惧、愤怒等可以使人体各系统机能失调，可以导致失眠、心动过速、血压升高、食欲减退等疾病。积极的、乐观的、向上的情绪，能经得起胜利和失败的考验。总之，心理状态是社会环境与生活环境的反映，是影响健康的重要因素。 （3）生活方式因素生活方式是指人们长期受一定文化、民

族、经济、社会、风俗、家庭影响而形成的一系列生活习惯、生活制度和生活意识。人类在漫长的发展过程中，虽然很早就认识到生活方式与健康有关，但由于危害人类生命的各种传染病一直是人类死亡的主原因，就忽视了生活方式因素对健康的影响。直到19世纪60年代以后，人们才逐步发现生后方式因素在全部死因中的比重越来越大。养成良好的生活习惯对于健康是非常重要。 （4）保健服务因素决定健康的因素十分复杂，保健服务是极为重要的因素。世界卫生组织把卫生保健服务分为初级、二级和三级，实现初级卫生保健是当代世界各国的共同目标。其基本内容是： ①健康教育； ②供给符合营养要求的食品； ③供给安全用水和基本环境卫生设施； ④妇幼保健和计划生育； ⑤开展预防接种； ⑥采取适用的治疗方法； ⑦提供基本药物。 这些无疑对人类健康提供了根本性的保障。 吉化六小

凝胶电泳实验分析报告模板

凝胶电泳实验报告模板

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重庆大学研究生专业实验教学 实验报告书 重庆大学研究生院制 实验课程名称： 凝胶电泳实验 实验指导教师： 学 院： 专业及类别： 生物学 学 号： 姓 名： 实验日期： 成 绩：

一、实验目的 1.理解凝胶电泳的分类及琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳实验的基本原理。 2.熟练琼脂糖凝胶电泳实验的基本操作。 3.通过实验了解凝胶电泳实验的注意事项并在以后的实验中尽量避免。 4.利用琼脂糖凝胶电泳检测DNA纯度、浓度和分子量以及分离大小不同的DNA 片段。 5.了解聚丙烯酰胺凝胶电泳测定DNA和蛋白分子量大小的方法。 二、实验材料、用具及试剂 1.材料：菌落PCR产物（待检测DNA片段）； 2.用具：①琼脂糖凝胶电泳：电泳仪，水平板型电泳槽，电子天平，微量移液器 （10μl），枪头，三角瓶，点样板，梳子，微波炉， 凝胶成像仪； ②聚丙烯酰胺凝胶电泳：垂直板电泳槽，稳压稳流电泳仪，梳 子； 3.试剂：琼脂糖，1×TAE缓冲液，载样缓冲液（Loading buffer），goldviwe染料， DL5,000 DNA Marker (Takara)。 三、实验原理 核酸凝胶电泳是分子克隆核心技术之一，用于分离、鉴定和纯化DNA或RNA 片段，具有以下优点：便于分离、便于检测和便于回收。其工作原理相对而言比较简单、主要用到了物理学的电荷理论。 当一种分子被放置在电场当中时，它们就会以一定的速度移向适当的电极，这种电泳分子在电场作用下的迁移速度，叫做电泳的迁移率。它同电场的强度和电泳分子本身所携带的净电荷数成正比。也就是说，电场强度越大、电泳分子所携带的净电荷数量越多，其迁移的速度也就越快，反之则较慢。由于在电泳中使用了一种无反应活性的稳定的支持介质，如琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺胶等，从而

琼脂糖凝胶电泳

琼脂糖凝胶电泳 1.原理 琼脂糖凝胶电泳是用琼脂糖作支持介质的一种电泳方法。其分析原理与其他支持物电泳最主要区别是：它兼有“分子筛”和“电泳”的双重作用。 琼脂糖凝胶具有网络结构，物质分子通过时会受到阻力，大分子物质在涌动时受到的阻力大，因此在凝胶电泳中，带电颗粒的分离不仅取决于净电荷的性质和数量，而且还取决于分子大小，这就大大提高了分辨能力。但由于其孔径相当大，对大多数蛋白质来说其分子筛效应微不足道，现广泛应用于核酸的研究中。 蛋白质和核酸会根据pH不同带有不同电荷，在电场中受力大小不同，因此跑的速度不同，根据这个原理可将其分开。电泳缓冲液的pH在6~9之间，离子强度0.02~0.05为最适。常用1%的琼脂糖作为电泳支持物。琼脂糖凝胶约可区分相差100bp的DNA片段，其分辨率虽比聚丙烯酰胺凝胶低，但它制备容易，分离范围广。普通琼脂糖凝胶分离DNA的范围为0.2-20kb，利用脉冲电泳，可分离高达10^7bp的DNA片段。 DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应。DNA分子在高于等电点的pH溶液中带负电荷，在电场中向正极移动。由于糖-磷酸骨架在结构上的重复性质，相同数量的双链DNA几乎具有等量的净电荷，因此它们能以同样的速率向正极方向移动。 2操作流程 准备干净的配胶板和电泳槽 琼脂糖凝胶电泳：水平电泳 注意DNA酶污染的仪器可能会降解DNA，造成条带信号弱、模糊甚至缺失的现象。 (1)电泳方法

一般的核酸检测只需要琼脂糖凝胶电泳就可以；如果需要分辨率高的电泳，特别是只有几个bp的差别应该选择聚丙烯酰胺凝胶电泳；用普通电泳不合适的巨大DNA链应该使用脉冲凝胶电泳。注意巨大的DNA链用普通电泳可能跑不出胶孔导致缺带。 (2)凝胶浓度 对于琼脂糖凝胶电泳，浓度通常在0.5～2%之间，低浓度的用来进行大片段核酸的电泳，高浓度的用来进行小片段分析。低浓度胶易碎，小心操作和使用质量好的琼脂糖是解决办法。注意高浓度的胶可能使分子大小相近的DNA带不易分辨，造成条带缺失现象。 (3)缓冲液 常用的缓冲液有TAE和TBE，而TBE比TAE有着更好的缓冲能力。电泳时使用新制的缓冲液可以明显提高电泳效果。注意电泳缓冲液多次使用后，离子强度降低，pH值上升，缓冲性能下降，可能使DNA电泳产生条带模糊和不规则的DNA带迁移的现象。 三羟甲基氨基甲烷（Tris(hydroxymethyl)aminomethane，一般简称为Tris）是一种有机化合物，其分子式为(HOCH2)3CNH2。Tris被广泛应用于生物化学和分子生物学实验中的缓冲液的制备。例如，在生物化学实验中常用的TAE和TBE 缓冲液（用于核酸的溶解）都需要用到Tris。 (4)电压和温度 电泳时电压不应该超过20V/cm，电泳温度应该低于30℃，对于巨大的DNA 电泳，温度应该低于15℃。注意如果电泳时电压和温度过高，可能导致出现条带模糊和不规则的DNA带迁移的现象。特别是电压太大可能导致小片段跑出胶而出现缺带现象 (5)DNA样品的纯度和状态 注意样品中含盐量太高和含杂质蛋白均可以产生条带模糊和条带缺失的现象。乙醇沉淀可以去除多余的盐，用酚可以去除蛋白。注意变性的DNA样品可能导致条带模糊和缺失，也可能出现不规则的DNA条带迁移。在上样前不要对DNA样品加热，用20mM NaCl缓冲液稀释可以防止DNA变性。 (6)DNA的上样

健康的概念及主要影响因素

世界卫生组织(WHO)给健康所下的正式定义： 精力充沛，能从容不迫地应付日常生活和工作； 处事乐观，态度积极，乐于承担任务，不挑剔； 善于休息，睡眠良好； 应变能力强，能适应各种环境变化； 对一般感冒禾郢染病有一定的抵抗力和免疫力； 体重适当，体态均匀，身体各部位比例协调； 眼睛明亮，反应敏锐，眼睑不发炎； 牙齿洁白，无缺损，无疼疼感，牙龈正常，无蛀牙； 头发光洁，无头屑； 肌肤有光泽，有弹性，走路轻松，有活力。 健康是指不仅仅是指没有疾病或病疼，且是一种躯体上、精神上和社会上的完全良好状态。也就是说健康的人要有强壮的体魄和乐观向上的精神状态，并能与其所处的社会及自然环境保持协调的关系。 定义health 人体的一种状态，在这种状态下人体查不出任何疾病，其各种生物参数都稳定地处在正常变异范围以内，对外部环境（自然的和社会的）日常范围内的变化有良好的适应能力。 关于健康有许多定义，都有其依据也都有其不完善之处。在众多的定义中比有些权威性的一个，是世界卫生组织章程序言中提出的：健康是体格上、精神上、社会上的完全安逸状态，而不只是没有疾病、身体不舒适或不衰弱。有人指责它为可望而不可及的“乌托邦式“的定义，或认为这不是健康的定义，而是社会的奋斗目标，或称它是从社会学角度来理解健康。实际上不论从哪个角度来看，健康均个模糊概念。没有病疼当然是健康的基本条件，但病疼的概念并不比健康更清晰，一个具有过敏体质的人，只要不接触过敏原，无论从什么角度来看他均健康的，但一接触过敏原，轻则出现皮疹或哮喘，重则休克甚至死亡。用与环境的适应程度来定义健康，把人同环境联系起来理解健康，是一个进步。但这一定义偏重于人体的功能，也有它的难题。如一个健康的教授不一定能适应码头工人的体力劳动，而这两种工作均社会上日常进行的。用生物学参数来定义健康，似乎是最精确和最方便的，因为只要翻开医学的教科书，就可以不可以找到人体各方面的正常值。但身高超过常人的运动员按照这个标准，就应划为不健康的范围。实际上这些正常值均从正常人中调查后用统计学方法计算出来的，但其正常范围并未包括全部正常人,只取了中间的95％,也即超过上限的2.5％和低于下限的2.5％，正常人并未包括在内。所以不少临床学家都认为在这里“正常值”的名称是不太相符合合实际情况的，应该改为“标准值”或“变异范围”，以免引起误解。世界卫生组织章程序言中提出的健康定义已为世界上大多数国家承认，但“体格上、精神上、社会上的完全安逸状态”是一个不易掌握的标准。 中医对健康的描述

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳实验报告.

分子生物学实验报告 实验名称：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 班级：生工xxx 姓名：xxx 同组人：xxx 学号：xxxx 日期：xxxx SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 1 引言 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）是目前分离蛋白质亚基并测定其分子量的常用方法，为检测电泳后凝胶中的蛋白质，一般使用考马斯亮蓝（CBB）染色[1]。本次实验的目的在于学习聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理，并掌握聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳分离蛋白质的操作技术。 2 材料和方法 .1 实验原理 2.1.1 聚丙烯酰胺凝胶的性能及制备原理 2.1.1.1 性能 聚丙烯酰胺凝胶的机械性能好，有弹性，透明，相对地化学稳定，对pH和温度变化比较稳定，在很多溶剂中不溶，是非离子型的，没有

吸附和电渗作用。通过改变浓度和交联度，可以控制孔径在广泛的范围内变动，并且制备凝胶的重复性好。由于纯度高和不溶性，因此还适于少量样品的制备，不致污染样品。 2.1.1.2 制备原理 聚丙烯酰胺凝胶是用丙烯酰胺（Acr）和交联剂甲叉双丙烯酰胺（Bis）在催化剂的作用下聚合而成。聚丙烯酰胺凝胶聚合的催化系统有化学聚合和光聚合两种。本实验是用化学聚合。化学聚合的催化剂通常多采用过硫酸铵（AP）或过硫酸钾，此外还需要一种脂肪族叔胺作加速剂，最有效的加速剂是N,N,N’,N’-四甲基乙二胺（TEMED）。在叔胺的催化下，由过硫酸铵形成氧的自由基，后者又使单体形成自由基，从而引发聚合反应。叔胺要处于自由碱基状态下才有效，所以在低pH 时，常会延长聚合时间；分子氧阻止链的延长，妨碍聚合作用；一些金属也能抑制聚合；冷却可以使聚合速度变慢。通常控制这些因素使聚合在1小时内完成，以便使凝胶的性质稳定。 聚丙烯酰胺凝胶电泳和SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳有两种系统，即只有分离胶的连续系统和有浓缩胶与分离胶的不连续系统，不连续系统中最典型、国内外均广泛使用的是著名的Ornstein-Davis高pH碱性不连续系统，其浓缩胶丙烯酰胺浓度为4％，pH = 6.8，分离胶的丙烯酰胺浓度为12.5％，pH = 8.8。电极缓冲液的pH = 8.3，用Tris、SDS和甘氨酸配制。配胶的缓冲液用Tris、SDS和HCl配制。 样品在电泳过程中首先通过浓缩胶，在进入分离胶前由于等速电泳现象而被浓缩。这是由于在电泳缓冲液中主要存在三种阴离子，Cl－、甘氨酸阴离子以及蛋白质－SDS复合物，在浓缩胶的pH值下，甘氨酸只有少量的电离，所以其电泳迁移率最小，而Cl－的电泳迁移率最大。在电场的作用下，Cl－最初的迁移速度最快，这样在Cl－后面形成低离子浓度区域，即低电导区，而低电导区会产生较高的电场强度，因此Cl－后面的离子在较高的电场强度作用下会加速移动。达到稳定状态后，Cl －和甘氨酸之间形成稳定移动的界面。而蛋白质－SDS复合物由于相对量较少，聚集在甘氨酸和Cl－的界面附近而被浓缩成很窄的区带（可以被浓缩三百倍），所以在浓缩胶中Cl－是快离子（前导离子），甘氨酸是慢离子（尾随离子）。 当甘氨酸到达分离胶后，由于分离胶的pH值（通常pH = 8.8）较大，甘氨酸离解度加大，电泳迁移速度变大超过蛋白质－SDS复合物，甘氨酸和Cl－的界面很快超过蛋白质－SDS复合物。这时蛋白质－SDS