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OMEGA总RNA提取试剂盒说明书_BBH

OMEGA总RNA提取试剂盒说明书_BBH
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E.Z.N.A. Total RNA Kit I (R6834-01 50 preps) 步骤

A.真核细胞和组织

自备材料:

β-巯基乙醇、70%乙醇(DEPC水配置)、除RNase的枪头和EP管、disposable latex gloves。细胞的步骤

1.在microfuge tube中用TRK裂解缓冲液裂解细胞,使细胞团松散,轻弹EP管或者用枪头吹旋,再用漩涡振荡混匀。使用前每1ml TRK裂解缓冲液加入20ul的β-巯基乙醇。

如果是单层的组织培养细胞(成纤维细胞,内皮细胞等),可以直接在细胞培养器里裂解细胞。吸净培养基后直接加TRK裂解缓冲液至细胞中。加600ul的TRK到T35细颈瓶或10cm的培养皿中,更小的培养器则加350ul的TRK。Pipette buffer over entire surface of vessel 以使裂解完全。将液体布满整个器皿表面,确保细胞裂解完全。将裂解产物转移至干净的1.5mlEP管中,然后进行第2步。

如果细胞是悬液培养,收集细胞(≤1,500rpm or 400*g)*5min,弃上清,加入TRK)裂解液,漩涡振荡混匀(具体略,见说明书)。

2.匀浆化裂解产物

“裂解和匀浆化样品”-第四页有更详细的说明,如果细胞≤1*105,漩涡振荡1min。样品匀浆化不完全会显著的减少RNA的产量并容易造成柱子堵塞。

a)用匀浆器(rotor-stator )30 s,使样品匀浆化,而后进行第3步。

b)使裂解产物通过钝的针头的注射器(0.9mm直径20-gauge),使之匀浆化。注射器

要除RNase。进行第3步。

c)将裂解物转移入omega homogenizer spin column,10000g离心1分钟。将flow-though

移入新的tube中,进行第3步。

组织的步骤:

1.TRK裂解缓冲液在microfuge tube中裂解细胞,使用前每1ml TRK裂解缓冲液加入20ul 的β-巯基乙醇。

350ulTRK裂解液最多能有效裂解20mg组织(-3mm3)。对20mg以上组织用600ul的TRK裂解液。然而,不要超过30mg组织,这是推荐的最大量。

对组织样品,匀浆化参照第四页,选择一种方法使用,除非是使用液氮,在TRK液/beta 巯基乙醇中匀浆样品而后进行step2。

2.离心,>1,4000*g(maxi speed), 5min, 室温。将上清液移入一新的1.5ml管中,而后进行第3步。

总RNA分离:(pufify RNA by using HiBindTM RNA Column)

3.向裂解产物中加入等体积(350ul或600ul)的70%乙醇,mix thoughly by pipeting。4.Apply样品到Hibind RNA Mini column上。the spin cartridge的最大容量为750ul(更大体积也能加上)。A precipitate may form on addition of ethanol in step 3。加完乙醇后可能会形成沉淀。所以要充分振荡将所有的混合液加入到柱子上。With the spin column inside

a 2ml collection tube, 室温离心,10,000*g,0.5-1min。弃去流出液(透过柱子流出到离心

管里的液体)而后进行第五步。

5.将柱子放在一个新的2ml收集管中,加上300ul RNA wash buffer I。室温离心,10,000*g,

0.5-1min。同样弃掉流出液。在第6步中重新使用收集管。如果要on-membrane DNase I

消化,进行第6步,否则进行第7步。

6.DNase I 消化(选择性)(详见说明书)。

7.将柱子再放到同一个2ml收集管中,加入500ul RNA wash buffer I, 室温离心,10,000*g, 30-60s,弃流出液。

8.将柱子放到一个新的2ml收集管中,加入500ul RNA wash buffer II(乙醇稀释过的),室温离心,10,000*g, 30-60s,弃流出液。在第9步中重新使用这个收集管。(注意:使用前RNA wash buffer II 必须要用无水乙醇稀释,按照标签上的说明。)

9.用500ul RNA wash buffer II洗涤一次柱子,同上一步骤一样。室温离心,10,000*g, 30-60s,弃流出液。然后使收集管空着,20,000*g, 2min, 室温离心,使的HiBind 基质完全干燥。10.洗脱RNA。转移柱子到一个新的1.5ml的Ep管中,(试剂盒中没有提供),加入30-50ul的DEPC水洗脱柱子(试剂盒中提供)。确保水直接加到了柱子的基质上。10,000*, 1min, 室温。如果RNA的总量大于30ug,可以进行二次洗脱。

注意:可以选择性地,可能会用更多的水洗脱RNA。如果进行二次洗脱,总RNA的量会增加,但是浓度会降低,因为80%以上的RNA会在第一次时被回收。离心前将水加热到70℃并室温孵育柱子5min会增加产量。

高纯度质粒小量快速提取试剂盒操作方法及步骤说明书

杭州昊鑫生物科技股份有限公司 htpp://https://www.wendangku.net/doc/fd6038368.html, HighPure Plasmid Mini Kit 高纯质粒小量快速提取试剂盒 目录号:PL03 试剂盒组成、储存、稳定性: 试剂盒组成保存 50次 (PL0301) 100次 (PL0302) 200次 (PL0303) 平衡液室温5ml 10ml 20ml RNaseA(10mg/ml)-20℃150μl 250μl 500μl 溶液P1 4℃15 ml 25 ml 50 ml 溶液P2 室温15 ml 25 ml 50 ml 溶液P3 室温20 ml 35 ml 70 ml 去蛋白液PE 室温16ml 31.5 ml 63 ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇 漂洗液WB 室温15 ml 25ml 50ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇 洗脱缓冲液EB 室温10ml 15ml 20ml 吸附柱AC 室温50个100个200个 收集管(2ml)室温50个100个200个 本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。 储存事项: 1.第一次使用时,将试剂盒所带的全部RNase A加入溶液P1后(终浓度100ug/ml) 置于2-8℃保存。如果溶液P1中RNase A失活,提取的质粒可能会有微量RNA 残留,在溶液P1中补加RNase A即可。 2.环境温度低时溶液P2中SDS可能会析出浑浊或者沉淀,可在37℃水浴加热几分 钟,即可恢复澄清,不要剧烈摇晃,以免形成过量的泡沫。 3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化,各溶液使用后应及时 盖紧盖子。 产品介绍:

本试剂盒采用改进SDS-碱裂解法裂解细胞,离心吸附柱内的硅基质膜在高盐、低pH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA,再通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除,最后低盐、高pH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。 产品特点: 1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜,柱与柱之间吸附 量差异极小,可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。 2.独有的去蛋白液配方,可以高效去除残留的核酸酶,即使是核酸酶含量丰富的菌 株如JM系列、HB101也可以轻松去除。有效防止了质粒被核酸酶降解。 3.快速、方便,不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂,也不需要乙醇沉淀。获得的 质粒产量高、纯度好,可以直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序等各种分子生物学实验。 注意事项 1. 所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机, 如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。 2. 提取质粒的量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。一般高拷贝质粒,建议 接种单菌落于1.5-4.5 ml加合适抗生素的LB培养基,过夜培养14-16个小时,可提取出多达20μg的纯净质粒。如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10kb的大质粒,应适当加大菌体使用量,使用5-10 ml过夜培养物,同时按比例增加P1、P2、P3的用量,其它步骤相同。 3. 得到的质粒DNA可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。OD260 值为1相当于大约50μg/ml DNA。电泳可能为单一条带,也可能为2条或者多条DNA条带,这主要是不同程度的超螺旋构象质粒泳动位置不一造成,与提取物培养时间长短、提取时操作剧烈程度等有关。本公司产品正常操作情况下基本超螺旋可以超过90%。 4. 质粒DNA确切分子大小,必须酶切线性化后,对比DNA分子量Marker才可以知 道。处于环状或者超螺旋状态的的质粒,泳动位置不确定,无法通过电泳知道其确切大小。 5. 洗脱液EB不含有螯合剂EDTA,不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗 脱,但应该确保pH大于7.5,pH过低影响洗脱效率。用水洗脱质粒应该保存在-

0922粪便核酸提取试剂盒说明书

磁珠法粪便核酸提取试剂盒(常规版) Faeces DNA Extraction Kit (Regular Version) 【目录号】FDE-5005、FDE-5030 【运输条件】2~25℃; 【保存条件】磁珠分散液、裂解液②2~8℃,其它组分室温; 【试剂盒组成】 【注意事项】 1. 在使用本试剂盒钱,请用户自备80%乙醇; 2. 使用前请检查裂解液①、②是否出现结晶或者沉淀,如有结晶或者沉淀,请将裂解液置 于378℃水浴重新溶解; 3. 本操作指南经本公司反复验证,使用前请仔细阅读,并且按照操作指南的建议操作。

磁珠法·自动化:为生命科学提供自动化磁纳米捕获方案 【产品简介】 本试剂盒采用具有独特分离作用的磁珠和独特的缓冲液系统,从各种固态或液态粪便样品中分离纯化高质量基因组DNA。特殊技术包埋的磁珠在特定条件下对核酸具有极强的 亲和力,而当条件改变时,磁珠会释放吸附的核酸,从而达到快速分离纯化核酸的目的。 提取的基因组DNA片段打,纯度高,质量稳定可靠,尤其适合高通量工作站的自动化提取,特别是本公司各型号的自动化核酸提取仪。 本试剂盒纯化的DNA可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、荧光定量PCR、文库构建、Sputhem杂交、芯片检测和高通量测序等实验。 【试剂盒说明】 1. 磁珠分散液严禁反复冻融和离心,磁珠使用前务必充分混匀,可涡旋振荡10秒左右; 2. 实验中使用我先混合仪的目的是为使磁珠能够充分吸附核酸、将磁珠表面的杂质充分去 除或核酸从磁珠表面充分洗脱; 3. 使用前检查裂解液①、②是否出现结晶或者沉淀,如有结晶或者沉淀,请将裂解①、② 于37℃水浴重新溶解。 【自备仪器、耗材和试剂】 仪器自动版 涡旋混合仪、高速离心机、水浴锅或金属浴、96孔方孔圆底板、无水乙醇、异丙醇、英芮诚ETP-300核酸提取仪。 手动版 涡旋混合仪、高速离心机、金属浴或水浴锅;EP管、EP管用磁力架、无水乙醇、异丙醇。 【仪器自动版操作步骤】 以英芮诚ETP-300型全自动核酸提取仪为例,可同步完成32个样本的提取工作。 1.上样准备 参照下表用量向96孔板中分别加入相应试剂。

microRNA快速提取试剂盒

◆RNAmisi microRNA快速提取试剂盒◆目录号1105 ◆使用手册 ◆实验室使用,仅用于体外

RNAmisi microRNA快速提取试剂盒 目录号:1105 目录编号包装单位 110501 50次 适用范围: 适用于快速提取各种细胞组织miRNA和其它各种小RNA 试剂盒组成、储存、稳定性: 试剂盒组成保存50次 Lysis/Binding buffer 4°C避光50 ml 70%乙醇室温9ml RNase-free H2O 第一次使用前按说明加指定量乙醇 Wash Solution 1 室温12 ml 第一次使用前加入28ml无水乙醇 Wash Solution 2/3 室温10 ml 第一次使用前加入42ml无水乙醇 RNase-free H2O 室温10 ml 吸附柱RA和收集管室温50套 microRNA吸附柱MA 和收集管 室温50套本试剂盒按照指示储存6个月不影响使用效果。

储存事项 1.Wash Solution 1和Wash Solution 2/3加入无水乙醇后,可以在常温保存一个月, 如果要更长时间保存,请存放在4°C,但是使用前,应该先回复到室温。 2.Wash Solution 2/3可能加入乙醇使用几天后出现沉淀晶体,并不影响使用,直接 不吸晶体,吸上清使用就可以。 3.运输在常温下进行,不影响使用效果。 4.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化,各溶液使用后应及 时盖紧盖子。 产品介绍: 近年来对RNA干扰和调节性小RNA的广泛研究迫切需要一种能有效提取15-30核苷酸左右大小RNA(包括siRNA和miRNA)的试剂盒。但是传统的RNA提取方法如硅胶膜不能有效吸附回收,酚/胍抽提和乙醇沉淀并不能有效沉淀回收微小分子RNA。本试剂盒采用独特的裂解液/β-巯基乙醇迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶,强烈有机抽提去除蛋白和DNA,RNA包括微小分子RNA吸附于离心柱内特殊硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,漂洗液将细胞代谢物,蛋白等杂质进一步去除,最后低盐的洗脱液将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。

总RNA提取试剂盒使用说明

总RNA提取试剂盒使用说明 货号:R1200 规格:50T/100T 产品内容: 试剂盒组成R1200-50R1200-100保存有效期 裂解液50ml100ml2-8℃一年 漂洗液15ml15ml×2RT一年 洗柱液50ml50ml×2RT一年RNase free ddH2O15ml15ml×2RT一年RNase free吸附柱50个100个RT一年RNase free收集管(2ml)50个100个RT一年 操作步骤: 1.样品处理: a.植物组织:取新鲜或-70℃冻存100mg组织在液氮中研磨,把粉末加入到1ml裂解液中混匀。 b.动物组织:取新鲜或-70℃冻存100mg组织加1ml裂解液,用组织研磨杵或匀浆器匀浆处理。 c.贴壁细胞:直接在培养板中加入裂解液裂解细胞,每106细胞加1ml裂解液。用取样器吹打混匀。 d.细胞悬液:离心收集细胞。每106动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加1ml裂解液混匀。

e.血液处理:取0.2-1ml新鲜血液加3倍体积红细胞裂解液,混匀后室温放置10分钟,10000rpm离心1分钟。弃上清,若沉淀含有红细胞,可加入2倍体积红细胞裂解液重复裂解步骤。离心后沉淀加入1ml裂解液混匀。 2.将处理后的样品在室温放置5分钟,使得核酸蛋白复合物完全分离。 3.向匀浆样品中加0.2ml氯仿,盖好管盖,剧烈振荡15秒,室温放置3-5分钟。 4.2-8℃12000rpm离心10分钟。RNA主要在上层无色的水相中,把水相转移到新管中,不要吸到沉淀。 5.吸附柱前处理:在吸附柱中加入500ul洗柱液,室温放置2分钟,2-8℃12,000rpm 离心2min,弃废液。 6.第4步收集的上清中加入200ul无水乙醇混匀,加入吸附柱静置2分钟,2-8℃12000rpm 离心2min,弃废液。 7.向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),2-8℃12,000rpm 离心2min,弃废液。 8.向吸附柱中加入600ul漂洗液,2-8℃12,000rpm离心2min,弃废液。 9.12000rpm离心2min,弃掉收集管,将吸附柱置于室温放置数分钟将吸附柱中残余的漂洗液去除。 10.将吸附柱放入新管中,向膜中央滴加50-100ul RNase free ddH2O,室温放置5min,12000rpm室温离心2min即得 到RNA。 注意事项: 1,所有相关器皿耗材都应为RNase-free产品,操作过程要小心,带口罩、手套避免环境中RNA酶污染样品。

人elisa试剂盒,人8羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)ELISA试剂盒使用说明书

人elisa试剂盒,人8羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)ELISA 试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用标本:血清或血浆 樊克生物专业供应: 使用目的:本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本8羟基脱氧鸟苷 (8-OHdG)含量。 试验原理: 8-OHdG试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知8-OHdG浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板 内进行检测。先将8-OHdG和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合 的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中8-OHdG的浓度呈比例关系。 试剂盒内容及其配制 试剂盒成份(2-8℃保存)96孔配置48孔配置配制 96/48人份酶标板1块板(96T)半块板(48T)即用型 塑料膜板盖1块半块即用型 标准品:80ng/ml 1瓶(0.6ml)1瓶(0.3ml)按说明书进行稀 稀 空白对照1瓶(1.0ml)1瓶(0.5ml)即用型 标准品稀释缓冲液1瓶(5ml)1瓶(2.5ml)即用型 生物素标记的抗8-OHdG抗体1瓶(6ml)1瓶(3.0ml)即用型 亲和链酶素-HRP 1瓶(10ml)1瓶(5.0ml)即用型 洗涤缓冲液1瓶(20ml)1瓶(10ml)按说明书进行稀 释 底物A 1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型 底物B 1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型 终止液1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型 标本稀释液1瓶(12ml)1瓶(6.0ml)即用型 自备材料 1.蒸馏水。 2.加样器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。 3.振荡器及磁力搅拌器等。 安全性

质粒提取试剂盒-说明书-翻译

精品文档 。 1欢迎下载 E.Z.N.A.? 质粒小提试剂盒操作规程(英文版译文) (适用于No. D6942, D6943 & D6944) 1. 自新鲜划痕选择培养板中分离单菌落,接种含适当选择性抗生素的1-5ml 的LB 培 养基进行培养。37℃强力摇动(~300rpm )孵育12-16h 。使用10-20ml 培养管或容量至少4倍于培养容积的培养瓶。强烈推荐使用endA 阴性大肠杆菌菌株进行常规质粒分离。此类菌株包括DH5α和JM109。 2. 将1.5-5.0ml 细菌室温10,000 x g 离心1min 。轻轻倒出或吸走培养基并丢弃。 3. 加入250μl 的溶液I/Rnase A 重悬沉淀,涡旋或用移液器反复吹打。充分重悬沉 淀对于获得高质量的DNA 非常重要。 4. 加入250μl 溶液II ,倒置、转动试管数次使之轻轻混匀,得到透明的裂解产物。 可能需要孵育2min 。不要用力混合,以免使染色体DNA 断裂,减低质粒的纯度。该步反应不要超过5min 。溶液II 不用时要拧紧瓶盖,以免试剂被空气中的CO2酸化。 5. 加入350μl 溶液III ,立即倒置试管数次混匀,直至白色絮状沉淀物形成。为避免 形成局部沉淀,加入溶液III 后应立即、充分混匀溶液。 6. 室温≥10,000 x g 离心10分钟。白色沉淀物形成,立即进行下一步操作。 7. 小心翼翼.... 的吸取上清液,加入装配在2ml 收集管中的小量纯化柱I 中。确保离心沉淀未受扰动,确保没有细胞碎片加入到柱子中。室温下10,000 x g 离心1分钟,使裂解液完全通过柱子。 8. 丢弃滤过液,重新使用2ml 收集管;加入500μl HB 缓冲液清洗柱子,室温10,000 x g 离心1分钟,使溶液完成通过柱子。该步操作需确保残余的蛋白质污染被去除,以保证获得高品质的DNA 以适合于下游的应用。 9. 丢弃滤过液,重新使用2ml 收集管;加入700μl 用无水乙醇稀释的DNA 清洗液清 洗柱子,室温10,000 x g 离心1分钟,使溶液完全通过柱子,丢弃滤过液。 注意:DNA 清洗液的浓缩液使用前必须用无水乙醇稀释(5倍稀释),如果DNA 清洗液稀 释液经过冷藏,则使用之前必须置于室温。 10. 可选步骤:重复清洗,加入另外的700μl 用无水乙醇稀释的DNA 清洗液。 11. 将空柱子≥13,000 x g 离心2min ,使柱子的基质干燥。此步骤为关键操作,不可 遗漏。 12. 将柱子放入干净的1.5ml 微量离心管中。将30-50μl (取决于终产物的期望浓度) 洗脱液或无菌去离子水直接加入柱子基质上,使之于室温下静置1-2min 。≥13,000 x g 离心1min 洗脱DNA 。可以进行二次洗脱,以收集残存的DNA 。 13. DNA 的产量和质量:分别在波长260nm 和280nm 处测定样品适当稀释液的吸光度。DNA 的浓度计算如下: DNA 浓度=A 260×50×(稀释倍数)μg/ml A 260/A 280的比率可以反映核酸的纯度。比值大于1.8表明核算的纯度在90%以上。或者,DNA 的产量(及质量)有时可以通过琼脂糖胶/溴乙锭电泳与已知浓度的DNA 样品相比较更好的予以确定。通常情况下洗脱的大部分DNA 是超螺旋单体形式,但也可能存在串联体形式。 张小强 翻译

BIOG核酸提取试剂盒操作步骤说明

BIOG 游离DNA 提取试剂盒操作步骤 说明 运输条件:常温运输 货 号:51019:50次反应 51020:100次反应 储存条件:室温(15-25℃),消化液、DNA Carrier 请于-20℃存放 产品特点 试剂盒组成 组分 50次 100次 吸附柱和收集管 各50个 各100个 裂解液 18mL 36 mL 洗涤液A 21mL 42 mL 洗涤液B 9 mL 18 mL 洗脱液 3mL 6 mL 消化液 1.2 mL 2.4 mL DNA Carrier 0.24 mL 0.48 mL 说明书 1份 1份 产品介绍 BIOG cfDNA Easy Kit 是常州百代生物科技股份有限公司研制的专门用于提取血清、血浆等游离DNA 的试剂盒。BIOG cfDNA Easy Kit 采用了最新的优质进口离子膜,裂解液和洗脱液经过多次优化,能高效地分离DNA 。提取得到的DNA 较其它品牌的同类试剂盒产量更大,纯度更高,最大限度地去除了蛋白、色素、脂类等杂质污染,可以直接应用于PCR 、荧光定量PCR 和各种酶切试验等。 操作步骤 1. 请自行准备:无水乙醇、1.5mL 离心管。 2. 取出洗涤液,按以下操作: a) 洗涤液A :21mL 加入9mL 无水乙醇;42mL 加入18mL 无水乙醇。 b) 洗涤液B :9mL 加入21mL 无水乙醇;18mL 加入42mL 无水乙醇。 c) 配制好的洗涤液如出现沉淀,可在37℃溶解,摇匀后使用。 3. 取1.5mL 离心管,加入200μL 样本,4μL DNA Carrier 混合均匀,加入300μL 裂解液及20μL 消化液,振荡混匀,56℃水浴10 分钟。 4. 加入1000μL 无水乙醇,轻轻颠倒混匀,如有半透明悬浮物,不影响DNA 的提取与后续实验。 5. 将吸附柱放入收集管内,将760μL 上述溶液转入吸附柱内,静置2 分钟,12,000 rpm 4℃离心1 分钟,弃收集管内废液; 6. 将吸附柱放回收集管内,将剩余760μL 溶液转移至吸附柱内,重复步骤5。 7. 将吸附柱放回收集管内,加500μL 洗涤液A 至吸附柱内,12,000 rpm 4℃离心1 分钟,弃收集管内废液。 8. 将吸附柱放回收集管内,加500μL 洗涤液B 至吸附柱内,12,000 rpm 4℃离心1 分钟,弃收集管内废液。 9. 将吸附柱放回收集管内,12,000 rpm 4℃离心2 分钟,离去残留的洗涤液。 10. 取出吸附柱,放入新的1.5 mL 离心管内,加入30-50 μL 洗脱液,静置3 分钟,12,000 rpm 4℃ 离心2 分钟,收集DNA 溶液。提取的 DNA 即可用于下一步实验或-20℃保存。 注意事项: 裂解液、洗涤液含有刺激性化学物质,操作过程请做好防护措施,避免直接接触皮肤,防止吸入口鼻。如不慎沾染皮肤或眼睛, 请立即用清水或生理盐水冲洗,必要时请就医。 储存、运输和有效期 本试剂盒可常温运输,室温(15-25℃)保存,有效期为12个月,消化液、DNA Carrier 请于-20℃存放,避免反复冻融。 质量控制 本产品经严格的质量检验证明,无生物污染 注意 :本产品仅用于科研 BIOG 游离RNA 提取试剂盒操作步骤说明 运输条件:常温运输 ◎操作简便快速,可在半小时内获得理想的DNA ; ◎提取DNA 纯度高,无抑制剂,A260/A280为1.7-1.9; ◎产量更高,较国内同类产品高出20%; ◎可用于血清、血浆等游离样本中DNA 的提取; ◎不含苯酚和氯仿等有毒溶剂,安全无毒。

RNA试剂盒提取步骤

常规植物样品总RNA小量抽提 1. 植物样品的研磨。 ?收集植物样品并尽快浸泡到液氮中以防止RNA 的降解。使用研钵、研磨棒和液氮将植物样品研磨成尽量细小的粉末。RNA 的产量取决于样品类型和研磨效果。 注:研磨后的植物粉末可直接保持于-70°C。 ?快速称取50-100mg 的研磨好的植物样品至1.5ml 预冷的离心管中。 注:在加入裂解液之前,不要让样品解冻。初次使用时,推荐先使用50mg,待取得理想结果后, 再酌情提高用量。 2. 立即加入500μlBuffer RL/β-ME混合液至样品中。立即于最高速度涡旋30-60 秒 充分打散样品,室温静置3-5 分钟让样品充分裂解。 注:使用前分装适量的Buffer RL,每1ml Buffer RL 加入20μl β-疏基乙醇(β-ME)或2M DTT。 若植物用量增加超过100mg,按比例增加Buffer RL/2-ME 的用量。 3. 室温下,14,000 x g 离心5 分钟。 4. 把gDNA 过滤柱装在2ml 收集管中。把第三步的上清液转移至gDNA过滤柱中。14,000 x g 离心1 分钟。 5. 弃去gDNA 过滤柱。加入0.5倍体积无水乙醇(~250μl)至滤液中。用移液枪吸打3-5次混匀。 6. 把HiPure RNA Mini Column 装在2ml 收集管中。转移第5 步的混合液至RNA柱子中。10,000 x g 离心30-60 秒。 7. (可选)这一步可插入DNase 进行膜上消化。(请另外订购DNase On Column Kit 进化 膜上DNase 消化)。 8. 倒弃滤液,把柱子装在收集管中。加入500μl Buffer RW1 至柱子中。10,000 x g 离心30-60 秒。9. 倒弃滤液,把柱子装回收集管中。加入600μl Buffer RW2 (已用乙醇稀释)至柱子中。10,000 ×g 离心30-60 秒。 注:在使用Buffer RW2 之前,必须按瓶子标签指示用无水乙醇进行稀释。 10. 倒弃滤液,把柱子重新装回收集管中。加入600μl Buffer RW2(已用乙醇稀释)至柱 子中。10,000×g 离心30-60 秒。 11. 倒弃滤液,把柱子套回空的收集管。10,000 ×g 离心空柱2 分钟甩干柱子。 12. 将柱子转移至新的1.5ml 离心管。加入30-50μl DEPC 水至柱子的膜中央。静置2 分钟。10,000 ×g 离心1 分钟。 13. (可选)再加入30-50μl DEPC 水至柱子的膜中央。静置2 分钟。10,000 ×g 离心1 分钟。 注:HiPure RNA Column 最小的洗脱体积是30μl,小于30μl 会导致RNA 的洗脱效率下降。如果RNA 产量超过30μg,推荐按第13 步进行第二次洗脱。 14. 弃去柱子,把RNA 保存于-80oC。

TPPA试剂盒说明书

T P P A试剂盒说明书-CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1

梅毒TPPA试书剂盒说明书 1、试验原理: 梅毒抗体检测是采用抗原抗体凝集反应中的抗原抗体凝集反应。其原理如下:将梅毒 (Nichols 株)的精制菌体成分包被在人载体明胶粒子上。这种致敏粒子和样品中的梅毒螺旋体(TP)抗体进行反应发生凝集,产生粒子凝集反应(TP)抗体,并且可用来测定抗体效价。 2、样本收集和贮存: 血清或血浆1ml,标本应无溶血,无脂血,无微生物污染。不满足上述要求的标本拒收,标本的采集应使用清洁,无菌的一次性的干燥管。 标本用量最少50ul,七天内检测的标本应在2-8℃保存,贮存在-20℃可保存4W,同时避免反复冻融血清。 3、安全防范: 3.1此试剂盒内含人血成分。尽管所有的对照及定点对照都已经过试验验证并且发现对于乙型肝炎表面抗原,丙型肝炎抗体,HIV抗体均为阴性;但仍认为它们具有潜在的感染性。 3.2移液过程禁止用口。 3.3 在处理试剂和标本的地方禁止吸烟,饮食。 3.4使用试剂盒和标本时,必须戴一次性手套,穿试验服。使用后请彻底洗手清洁。 3.5患者样本及其他潜在感染材料试验后应放入医用垃圾桶内。 3.6试剂的溶解液,血清稀释液和阳性对照血清含有叠氮钠作为防腐剂,叠氮钠可以和铅铜反应形成爆炸的金属叠氮化合物.为防止金属叠氮化合物的形成,应用大量的水冲洗以免其堆积. 4、试剂: 4.1 储存与稳定性: 试剂应在2-10℃保存。 冻干试剂必须在复溶后的当天使用,如果保存在2-10℃最多可使用7天。 4.2 试剂盒组成:(由富士瑞士欧公司出产) (1)溶解液(液体) 8mL×1瓶 用于调制致敏粒子和未致敏粒子。 (2)血清稀释液 29mL×1瓶 用于样品的稀释。 (3)致敏粒子(冷冻干燥)

大量全血基因组DNA提取试剂盒操作方法及步骤说明书

大量全血基因组DNA提取试剂盒 目录号:DN04 DN0401 16次×10ml DN0402 32次×10ml DN0403 96次×10ml 适用范围: 适用于快速提取各种动物全血基因组DNA 试剂盒组成、储存、稳定性: 试剂盒组成保存16次×10ml 32次×10ml 96次×10ml 10x红细胞裂解液室温50 ml 100 ml 300 ml 细胞核裂解液室温180 ml 180×2 ml 250 m l×4 蛋白沉淀液室温55 ml 110 ml 330 ml DNA溶解液室温15 ml 30 ml 90 ml 本试剂盒在室温储存18个月不影响使用效果。 储存事项: 1.环境温度低时细胞核裂解液中某些去污剂成份会析出出现浑浊或者沉淀,可在 37℃水浴加热几分钟,即可恢复澄清,不要剧烈摇晃,以免形成过量的泡沫。 2.蛋白沉淀液可能出现析出和沉淀,可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解,如果不 能完全溶解,也不影响使用效果,直接取用上层溶液即可。

3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化,各溶液使用后应及时 盖紧盖子。 产品介绍: 本试剂盒根据全血特点采用几个快速步骤提取基因组DNA。首先红细胞裂解液裂解去除不含DNA的红细胞,细胞核裂解液裂解白细胞释放出基因组DNA,然后蛋白沉淀液选择性沉淀去除蛋白,最后纯净的基因组DNA通过异丙醇沉淀并重溶解于DNA 溶解液。 产品特点: 1.从十几个配方中优选出的红细胞裂解液配方,裂解快速完全。 2.不需要使用有毒的苯酚等试剂。 3.快速,简捷,单个样品操作一般可在1小时内完成。 4.结果稳定,产量高(典型的产量10ml全血可提取出150-500μg),OD260/OD280 典型的比值达 1.7~1.9,长度可达50kb-150kb,可直接用于构建文库、PCR、Southern-blot和各种酶切反应。 注意事项 1.所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到2,500 x g,并配备容纳50ml心 管转头的传统台式离心机。 2.用户需自备异丙醇和70%乙醇。 3.典型的产量10ml全血可提取出150-500μg基因组DNA(不同样品尤其疾病样品中 中白细胞数量差异可能非常大,因此产量的个体差异也可能非常大)。 4.本试剂盒为溶液型,可以很容易的按照比例扩大或者缩小每次处理的全血量 (20μl-10ml),请联系我们索取其它处理量的操作手册。

细菌总RNA提取说明-生工

细菌总RNA快速抽提试剂盒 产品编号:SK8625/SK8626 包装规格:50次/100次 试剂盒组成 组分 SK8625,50次 SK8626,100次 Buffer Rlysis-B 50 ml 100 ml DEPC-treated ddH2O 30 ml 60 ml 操作手册1份1份 保存方法及注意事项 试剂盒于常温运输,4°C保存。有效期见包装。 产品介绍 本试剂盒是生工生物工程(上海)有限公司最新研制成功的一种细菌总RNA快速抽提试剂盒。因为细菌RNA半衰期很短,RNA很容易发生降解。针对这一难题,本试剂盒采用溶菌酶与裂解液Buffer Rlysis-B共同作用,快速裂解样品,再通过氯仿抽提、无水乙醇沉淀等步骤,可获得浓度高、完整性好的RNA。适合于从各种来源的细菌(革兰氏阳性或阴性菌等)培养液中快速提取RNA。 使用本试剂盒,从1 ml对数生长期的细菌菌液中提取5~15 μg总RNA,可直接用于RT-PCR、Northern Blot、斑点杂交等实验。 本产品具有以下特点: 1. 操作简单,全过程可在40分钟内完成。 2. 完整性好,纯化的RNA几乎不会发生降解。 3. 纯度高,OD260/280一般为2.0。 试剂准备 自备试剂:无水乙醇、75%乙醇、溶菌酶、氯仿等。 标准抽提步骤 4. 取1 ml对数生长期的细菌,8,000 rpm 4°C离心1 min,彻底弃掉培养基,加100 μl溶菌酶,振荡混匀。(G-菌使用的溶 菌酶浓度为400 μg/ml,室温酶解3~5分钟;G+菌使用的溶菌酶浓度为3 mg/ml,室温酶解5~10分钟。) ?收集菌体后可用500 μl DEPC-treated ddH2O漂洗一次,10,000 rpm离心1分钟,弃上清,进一步去除残留的培养基。 5. 立即加入900 μl Buffer Rlysis-B震荡混匀,室温放置3 min。 6. 向裂解样品中加入200 μl 氯仿,充分混匀。12,000 rpm 4°C离心5 min,取上清。 7. 向上清液中加入1/3 体积无水乙醇,混匀,室温放置3 min,12,000 rpm 4°C离心5 min,小心倒掉上清。 ?离心后,在离心管底部,可能无肉眼可见的沉淀产生,属正常现象,请继续以下操作。 8. 用700 μl的75%乙醇(请用DEPC-treated ddH2O配制)洗涤沉淀,12,000 rpm 4°C离心3 min, 小心倒掉上清。 9. 重复步骤5一次。 10. 室温倒置10 min,尽可能使离心管中残留的乙醇彻底挥发。加入30-50 μl的DEPC-treated ddH2O溶解沉淀,立即使用或 -70°C长期保存。 ?如果残留的乙醇有挂壁现象,倒掉液体后再短暂离心,将残液用移液器吸出。然后开盖室温放置5~10分钟至残留的乙

小鼠cfos试剂盒使用方法

小鼠c-fos试剂盒使用方法 检测范围:96T 20pg/ml-480pg/ml 使用目的: 本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中c-fos含量。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠c-fos水平。用纯化的小鼠c-fos抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入c-fos,再与HRP标记的c-fos抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的c-fos呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中小鼠c-fos 浓度。 试剂盒组成 1 30倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7 终止液6ml×1瓶 2 酶标试剂6ml×1瓶8 标准品(960pg/ml)0.5ml×1瓶 3 酶标包被板12孔×8条9 标准品稀释液 1.5ml×1瓶 4 样品稀释液6ml×1瓶10 说明书1份 5 显色剂A液6ml×1瓶11 封板膜2张 6 显色剂B液6ml×1/瓶12 密封袋1个 标本要求 1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融 2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。 操作步骤 1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀 释。 480pg/ml 5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液 240pg/ml 4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液 120pg/ml 3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液 60pg/ml 2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液 30pg/ml 1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液 2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、 待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。 3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用 5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此 重复5次,拍干。 6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。 7.温育:操作同3。

组织基因组DNA提取试剂盒磁珠法

组织基因组DNA提取试剂盒(磁珠法) 使用说明书(Cat#Yu-TD02-1) 【产品介绍】 组织基因组DNA提取试剂采用国内领先的专利技术合成的纳米磁珠颗粒和多次实验优化的缓冲液体系,能从样品中分离纯化高质量DNA。在一定条件下,磁珠表面修饰的基团高效吸附目的DNA,而当条件改变时,磁珠释放吸附的DNA,达到快速分离纯化DNA的目的。整个过程安全、无毒、便利,提取的DNA质量稳定、纯度高。纯化后的DNA适用于多种后续实验。本试剂盒可以从少量动物组织中分离纯化出高质量、高浓度的DNA。 【产品特点】 1. 效率高:DNA提取得率高,操作简便。 2. 安全、无毒害:整个操作过程无需使用苯酚、氯仿等有毒物质,提取环境更加安全。 3. 高纯度:OD260/230在1.5左右,OD260/280在2.0左右。可直接用于各种分子生物学实验。 【试剂盒组成】 【规格】50T/盒 【自备试剂】无水乙醇,异丙醇 【贮藏与有效期】 裂解吸附液和Buffer AW1必须室温(15-25℃)避光保存;磁珠室温保存;其他所有试剂室温保存,有效期为1年。 【注意事项】

1、Buffer AW1使用前,加入18mL无水乙醇,混匀,使乙醇含量为60%。★ 2、Buffer AW2使用前,加入21mL无水乙醇,混匀,使乙醇含量为70%。★ 3、磁珠使用前必须充分混匀。★ 4、组织最好置于组织核酸(DNA/RNA)保存液(Cat#Yu-TP01)或液氮中保存。【操作步骤】 1、样本的处理 1.1、液氮中保存的组织将组织在液氮中磨成粉末后,使液氮充分挥发。再以50-100mg组织中加入1mL裂解吸附液,充分研磨。以下进入步骤2。 1.2、组织保存液中保存的样本取出在组织保存液中保存的组织,加入1mL无水乙醇洗涤组织两次。再以50-100mg组织中加入1mL裂解吸附液,充分研磨。以下进入步骤2。 2、吸取400μL研磨后的裂解吸附液转入1.5mL的EP管中,加入5μL蛋白酶K,60℃1500rpm10分钟。 3、取出EP管,加入250μL异丙醇和10μL混匀的磁珠,闭盖,充分混匀。室温1500rpm振荡10min。 4、取出EP管,瞬时离心,将EP管放于磁力架上,吸附磁珠4分钟。 5、在磁力架上,打开EP管盖,吸弃液体,保留磁珠。 6、加入600μL Buffer AW1,闭盖。从磁力架上取下EP管,充分混匀使磁珠完全分散至洗液中。 注:可以在漩涡振荡仪上3000rpm振荡20秒,使EP管壁上的磁珠完全分散至洗液中。 7、将EP管放回磁力架,吸附磁珠3分钟至液体清澈(吸附磁珠2分钟后,颠倒磁力架3次,使EP管盖上残留的磁珠被充分回收)。打开EP管盖子,吸弃液体,保留磁珠(需吸干EP管底和管盖中的残留液体)。 注:由于各个实验室磁力架磁力不尽相同,吸附时间可以延长,直至液体清澈。 8、加入600μL Buffer AW2,闭盖。从磁力架上取下EP管,充分混匀使磁珠完全分散至洗液中。 注:可以在漩涡振荡仪上3000rpm振荡20秒,使EP管壁上的磁珠完全分散至洗液中。

高纯度质粒小提试剂盒使用说明书

高纯度质粒小提试剂盒 Pure Mini Plasmid Kit (目录号:HS0103) 产品包装 试剂盒成分 50 preps Buffer P1 15 ml Buffer P2 15 ml Buffer P3 20 ml Buffer PD 30 ml RNase A(10 mg/ml) 150 ul Buffer PW 60 ml Buffer EB 10 ml Spin Columns PA 50个 Collection Tubes (2 ml) 50个 (注意:使用前将全部RNase A 溶液加到Buffer P1中混合均匀,2 ~ 8℃保存) 保存条件 本试剂盒在室温(15 ~ 25℃)干燥条件下,可保存12个月;更长时间的保存可置于2 ~ 8℃。若溶液产生沉淀,应在使用前置于37℃下溶解沉淀。单独包装的RNase A 在室温可稳定保存12个月。加入RNase A 后的Buffer P1应置于2 ~ 8℃保存,可稳定保存6个月。 产品简介 本试剂盒用于高纯度质粒DNA 的小量制备与纯化。菌体经碱裂解、高盐、低pH 处理,质粒可从菌体中释放出来,并特异、高效地被离心柱硅胶膜(Spin Columns PA )吸附。通过去蛋白液(Buffer PD )和漂洗液(Buffer PW )的清洗可去除蛋白及其他杂质,在低盐、高pH 条件下洗脱,最后得到高纯度的质粒DNA 。 北京厚生博泰科技有限公司 Beijing Hooseen Biotech Co., Ltd.

使用本试剂盒可从1 ~ 5 ml过夜培养的菌液中纯化得到高达20 ug的高纯度质粒DNA,可在30 min之内完成提取任务。所得质粒可直接用于酶切、转化、PCR、测序、低敏感细胞株的转染等各种常规分子生物学操作。 产品特点 1. 快速:步骤少,操作简便,节约时间。 2. 简便:离心吸附柱不需要预平衡,漂洗液Buffer PW 和去蛋白液Buffer PD不需要另加乙醇,即开即用。 3. 纯度高:所得质粒可直接用于酶切、转化、PCR、测序、低敏感细胞株的转染等各种常规分子生物学操作。 操作步骤 1. 取1 ~ 5 ml过夜培养的菌液,室温12,000 rpm离心1 min,尽量将上清去除干净。 (注意:根据菌液的浓度决定取液量,浓度高时取1 ml菌液离心即可,浓度低时可多收集一次) 2. 加入250 ul Buffer P1,用枪头充分吹打使菌体重悬均匀。 (注意:是否将RNase A溶液加到Buffer P1中并混合均匀;菌体沉淀是否悬浮充分,如有未彻底悬浮的菌块会影响裂解,导致提取的质粒浓度及纯度降低) 3. 加入250 ul Buffer P2,温和颠倒混匀6 ~ 8次,直到溶液变得清亮粘稠。 (注意:不可剧烈震荡,以免造成基因组DNA片段的污染,所用时间不要超过5 min,以免质粒受到破坏,如未完全变得清亮,可能是菌体太多,可增加Buffer P2的用量,在后续的操作中Buffer P3的用量也要相应增加) 4. 加入350 ul Buffer P3,立即温和颠倒混匀6 ~ 8次,可见白色沉淀物产生,室温静置2 min,然后12,000 rpm离心3 ~ 5 min。 (注意:Buffer P3加入后应立即混合,避免产生局部沉淀,如果上清中还有微小白色沉淀,可再次离心后取上清) 5. 小心将上清液转移到离心吸附柱Spin Columns PA中,静置2 min,让质粒DNA与吸附柱中的硅胶膜充分结合。12,000 rpm离心0.5 ~ 1 min,弃收集管中的废液。 6. 向吸附柱中加入500 ul去蛋白液,12,000 rpm离心1 min,弃收集管中废液。 (注意:如果宿主菌是endA-,如DH5α若TOP10,此步骤可省略。如果宿主菌是endA+,如TG1、BL21、HB101、JM101等,此步骤不可省略,因这些宿主菌含有大量的核酸酶,易降解质粒。如果提取低拷贝质粒

TransZol法rna提取试剂盒说明

TransZol法RNA提取步骤 准备试剂:氯仿、无水乙醇。 1.菌体处理 (1)将发酵后的菌体小心地转入1.5ml离心管中,用纯水冲洗菌体,12000rpm离心2min,仔细去除培养基上清。 (2)加入TransZol TM Up (每≤2×109个细菌中加入1ml TransZol TM Up)。 (3)用移液枪反复吸吹直至裂解液中无明显沉淀。 (4)室温静置5min。 2. 每使用1ml TransZol TM Up,加入0.2ml氯仿或50ul 4-Bromoanisole(间溴茴香醚),剧烈震荡30s,室温孵育3min。 3. 10000×g 4℃离心15min。此时溶液分成三层,无色的水相(上层)、中间层,粉红色有机相(下层)。RNA分布在水相中,水相体积约为所用TransZol TM Up 试剂的50%-60%(为了避免吸到中间层导致DNA污染,可以适当留下一部分水相)。 4. 转移无色的水相于新的RNase-free离心管中,加入等体积的无水乙醇(此时可能会出现沉淀),轻轻颠倒混匀。 5. 将得到的溶液和沉淀一起加入离心柱中,12,000×g 室温离心30s,弃掉流出液(如果体积大于离心柱容量,可以分几次完成)。 6. 加入500ul CB9,12,000×g 室温离心30s,弃掉流出液。 7. 重复步骤6一次。 8. 加入500ul WB9(使用前请先检查是否加入无水乙醇),12,000×g 室温离心30s,弃掉流出液。 9. 重复步骤8一次。 10.12,000×g 室温离心2min,彻底去除残留的乙醇,在室温静置数分钟彻底晾干离心柱。 11.将离心柱放入RNase-free Tube(试剂盒已配)中,加50-200ul RNase-free Water 在离心管的中央,室温静置1min。 12. 12,000×g 室温离心1min,洗脱RNA。 (可选步骤:为获得更多的RNA,建议重复步骤11和12进行二次洗脱)。

DNAzol基因组DNA快速提取试剂盒操作方法及步骤说明书

DNAzol 基因组DNA快速提取试剂 目录号:DN26 DN2601 50ml DN2602 100ml 产品介绍: DNAzol 是一种完全的、可直接使用的基因组DNA提取试剂,简单高效,结果可靠,可快速提取基因组DNA,适用于多种大量或少量样品。DNAzol 可在一个步骤中裂解细胞并水解RNA,经过乙醇沉淀后即可快速得到基因组DNA。整个过程只需10-30 分钟,DNA 回收率可达70-100%,得到的DNA 不需再纯化,可直接用于Southern 杂交、斑点杂交、分子克隆、PCR 反应和其他分子生物学应用。 产品储存: 室温保存至少一年。 注意事项: DNAzol 有毒害性,应避免直接接触皮肤和眼睛。 操作步骤:(实验前请先阅读注意事项) 1.裂解,匀浆 a.组织:25-50mg 组织加1ml DNAzol ,使用匀浆仪处理5-10 次。少量 (5-10mg)柔软组织,如脾或脑组织,可切成或者捣成小块使用微量取样器吹打

混匀,室温放置5-10 分钟。 b.细胞:单层培养的细胞应直接裂解,倒出培养基,加入DNAzol 用取样器吹 打几次混匀。每10cm2 细胞培养板加0.75-1.0ml DNAzol。 c.细胞沉淀或悬浮液:每1-3×107细胞(体积小于0.1ml)加1ml DNAzol,反复 吹打混匀。 以上均要使用大口径枪头吹打,以免过度剪切断基因组。 2.离心 4 -25℃,10000g 离心10 分钟。将得到的上清转入新管。 此步骤去除组织碎片、部分水解的RNA和多糖。如果所提样品为含较多细胞和细胞外物质的样品,如肝、肌肉和大部分植物组织等,或要提取不含RNA 的DNA 时,可加此步骤。其他样品可省略此步。 3.沉淀 每使用1ml DNAzol 加0.5ml 100%乙醇,颠倒离心管5-8 次,混匀样品至出现DNA 沉淀,室温放置1-3分钟。可以看见DNA 絮状沉淀,让沉淀自然沉降到管底,尽可能吸弃上清。用枪头搅绕DNA贴附在离心管上端壁上,仔细吸弃剩下的在管底和管壁的上清。如果因为剪切太厉害导致形成小片段或者量少的DNA(少于15ug),无法缠绕到枪头上,可在4 -25℃,4000g 离心1-2分钟沉淀DNA,弃上清。 4.漂洗 用0.8-1ml 75%乙醇漂洗DNA 两次。漂洗时,将DNA 悬浮在乙醇中,颠倒离心管3-6 次,然后静置0.5-1 分钟使DNA 沉降到管底,尽可能吸弃上清。 如果需要,可在4 -25℃,1000g 离心1-2 分钟沉淀DNA。从组织中提取DNA 时,如需去除其他内含物,第一次漂洗可用70%DNAzol 和30%乙醇的溶液代替75%乙醇。

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