分子生物学第4章重点及试题
一、名词解释：
转录:是指以DNA为模板，在依赖于DNA的RNA聚和酶催化下，以4中NTP（ATP、CTP、GTP和UTP）为原料，合成RNA的过程。
转录单位 (transcription unit):从启动子到终止子的序列 (转录起始点)。模板链（template strand）:又称反义链, 指与转录物互补的DNA链（极性方向3’→5’）。
编码链:又称有义链, 指不作模板的DNA单链（极性方向5’→3’）。hnRNA：核内不均一RNA，是存在于真核细胞核中的不稳定，大小不均一的一组高分子RNA的总称。
转录的极性：转录的效率与转录单位的位置有关。
转录起始：RNA聚合酶与DNA转录启动子结合形成有功能的转录起始复合物的过程。
启动子（Promoters）：指DNA分子上被RNA聚合酶、转录调节因子等识别并结合形成转录起始复合物的区域。
核心启动子：RNA聚合酶能够直接识别并结合的启动子。
RNA聚合酶：是催化以DNA为模板（template）、三磷酸核糖核苷为底物、通过磷酸二酯键而聚合的合成RNA的酶。
C端结构域(CTD)：RNApolⅡ的大亚基中有 C 末端结构域。CTD中含一保守氨基酸序列的多个重复Tyr－Ser p－Pro－Thr p－Ser p－Pro－Ser p C端重复七肽。
沉默子（silencer）：沉默子能够同反式因子结合从而阻断增强子及反式激活因子作用并最终抑制该基因的转录活性的真核基因中的一种特殊的序列。
增强子(enhancer)：是一类正调控元件，能够从转录起始位点的上游或下游数千个碱基处来激活转录。
绝缘子（insulater）：阻断增强子或沉默子的DNA序列。
上游：转录起点上游的序列，是调控区，与转录的方向相反。
下游：转录起点下游的区域，是编码区，与转录的方向一致。
转录起点：＋1位点，RNA聚合酶的转录起始位点，起始NTP多为ATP或GTP。转录泡：在转录时RNA聚合酶Ⅱ（RNAPⅡ）与DNA模板结合，会形成一个泡状结构，成为转录泡。
转录压制：指转录因子的过度表达，抑制受特异性调节基因的基本转录装置，引起转录抑制。
上游激活序列(UAS)：TATA框上游的保守序列称为上游启动子元件或上游激活序列。
锌指结构：在蛋白质中，一小段保守的氨基酸序列（约23个氨基酸残基）结合一个锌离子而形成的一个相对独立的功能域。
终止子（terminator）：在转录的过程中，提供转录终止信号的RNA序列。
抗终止子：有的蛋白因子能作用于终止序列，减弱或取消终止子的作用，称为抗终止作用，这种蛋白因子就称为抗终止因子。/引起抗终止作用的蛋白质。
RNA加工：指新合成的前体RNA分子所经历的结构和化学方面的修饰与成熟的过程。
帽子结构：在RNA链长度超过20-30nt之前，其5’端经化学修饰被加上了一个7-甲基鸟苷残基，这种5’末端的修饰称为帽子结构
poly（A）尾巴：核内不均一 RNA 和 mRNA 在其3’-末端的一个独特的结构，
由 AMP 残基组成的长链。
多聚腺苷化（polyadenylation）：添加 poly（A）到 RNA 分子上的过程。
SD 序列：原核生物起始密码子AUG上游7-12个核苷酸处一段可以与16SrRNA 的3’端反向互补保守区。
选择性剪接：一个hnRNA（pre-mRNA）转录本，通过外显子的剪接、重组，产生多个成熟的mRNA的机制。
组成性剪接：一个基因的转录产物通过剪接只能产生一种成熟的mRNA.它和选择型剪接的区别是后者可以产生多种成熟mRNA。
剪接体：在剪接过程中形成的剪接复合物称为剪接体,剪接体的主要组成是蛋白质和小分子的核RNA(snRNA)。复合物的沉降系数约为50～60S,它是在剪接过程的各个阶段随着snRNA的加入而形成的。
RNA编辑：指由RNA水平的核苷酸改变所引起的密码子发生变化的一种预定修饰，一种RNA编辑是以另一RNA为模板来修饰mRNA前体。
内含子：断裂基因的非编码区，可被转录，但在mRNA加工过程中被剪切掉。
外显子：断裂基因中的编码序列，在剪接后仍保存下来，并可在蛋白质生物合成过程中被表达为蛋白质。
断裂基因：真核生物结构基因，由若干个编码序列和非编码序列互相间隔开但又连续镶嵌而成，去除非编码序列再连接后，可翻译出由连续氨基酸组成的完整蛋白质。
启动子的清理：当开放的启动子复合物足够稳定是，RNA聚合酶离开启动子，释放出σ亚基，核心酶空出启动子位点以进行下一次转录起始。
指导RNA：一类小RNA分子，其部分序列可与被编辑的RNA序列互补。
二、
● 3类特异性转录因子：酸性功能域、富含Gln功能域、富含Pro功能域
以3种方式发挥作用：①改变DNA构象
②影响基本转录起始复合体装置
③影响其他调节因子的活性
● RNA转录3个过程（起始、延伸、终止）
●真核生物中有三种不同的RNA聚合酶，因此也有三种不同的启动子：RNA pol Ⅰ启动子、RNA polⅡ启动子、RNA polⅢ启动子。
●说明RNApol全酶各个亚基的主要功能。
（2）σ亚基：转录起始时与核心酶结合成全酶，使全酶能识别启动子的Sextama Box(－35区，R位点)、Pribnow Box（-10区，B位点）,选择并紧密与模板链发生特异性结合。不同的σ因子与核心酶结合，可识别不同的启动子。全酶完成转录发动后，σ亚基离开全酶。可重复使用。
（2）α亚基：核心酶的组建因子，促使RNApol 与DNA模板链结合
前端α因子－－使模板DNA双链解链为单链
尾端α因子－－使解链的单链DNA重新聚合为双链
（3）β亚基：模板链结合位点，包含RNA/DNA杂交链结合位点
?完成NMP之间的磷酸酯键的连接
?编辑功能（排斥与模板链不互补的碱基）
?与Rho （ρ）因子竞争RNA 3’－end
?构成全酶后，β因子含有两个位点：
起始位点I（initiation site. Rifs）:对利福平敏感，该位点专一性地结合ATP或者GTP （需要高浓度的ATP或GTP）
延伸位点E（elongation site RifR）:对利福平不敏感，对NTP没有专一性的选择，从而保证了RNA链的延伸
（4）β’亚基：促进RNA聚合酶与非模板链结合。
RNA聚合酶核心酶4个功能位点：非模板链结合位点、模板链结合位点、双链DNA 解旋位点、双链DNA重绕位点
●原核生物启动子结构及各部分功能。
答：启动子由两个部分组成：
上游部分：上游控制因子（UCE）：CAP-cAMP的结合位点
CAP：降解物基因活化蛋白
cAMP：环腺苷酸（cAMP）的受体蛋白
下游部分：核心启动子（core promoter）：－35 区（ RNApol识别位点，R site）、－10区（ RNApol结合位点，B site）、转录起点（+1位点，I site）Sextama 盒：-35区序列（TTGACA），位于复制起点上游35区处的6核苷酸序列，能直接被RNA聚合酶全酶中的σ因子识别并结合。
Pribnow 盒：-10区序列（TATAAT），位于-10区处的6核苷酸序列，能使RNA聚合酶识别DNA双链中的模板链，确保转录的链和方向无误。
●真核生物启动子
①RNApolⅠ：负责转录rRNA
顺式作用元件：UPE（上游启动子元件）、Core promoter（核心启动子元件）反式作用因子：UBF（上游启动子元件结合因子）、SL1（选择性因子）
②RNApolⅡ：负责转录hnRNA（mRNA 前体，核不均一RNA）、部分snRNA（核内小分子 RNA ）
顺式作用元件：+1区、-30区、-70区、-90区（Cap site、TATA-box、CAAT-box、GC island）
反式作用因子：TFⅡA、TFⅡB、TFⅡD、TFⅡE、TFⅡF、TFⅡH
③RNApolⅢ：负责转录5S rRNA、tRNA的前体、Alu序列和部分 snRNA
顺式作用元件：内部启动子Ⅰ（A box、B box）内部启动子Ⅱ（A box、B box）反式作用因子：内部启动子Ⅰ（TFⅢC、TFⅢB）内部启动子Ⅱ（TFⅢA、TFⅢC、TFⅢB）（TFⅢC：辅助TFⅢB TFⅢB：定位因子，结合到A-box上游）
在 UBF 与DNA结合后，SL1方可结合上来，它类似原核生物RNA聚合酶中的σ因子，确保RNA聚合酶正确定位在起始点上。UBF 与RNA聚合酶Ⅰ相互作用可识别不同来源的模板，但SL1 具有种属特异性。
TFⅢA ： TFⅢA 在一行上有9个锌指，他们会插入到5S rRNA 基因内部启动子的每一面的大沟中，这就使特异的氨基酸能够与特异的碱基接触并相互作用，形成致密的 protein-DNA 复合物。
启动子上游元件（USE）：
GC岛（GGGCGG）:严格控制RNA的转录启动
CAAT盒（GG C(T)CAAT CT）：决定启动子起始转录的效率，增强启动子的强度
●试比较原核和真核细胞的mRNA的异同.
⑴原核生物
①原核生物mRNA 的半衰期短。
②许多原核生物mRNA以多顺反子形式存在。
③其5’端无帽子结构，3’端没有或只有较短的poly(A)。
④原核细胞mRNA（包括病毒）有时可以编码几个多肽。
⑤原核生物常以AUG（有时GUG，甚至UUG）作为起始密码子
⑵真核生物：
①其5’端存在帽子结构。
②绝大多数真核生物mRNA具有poly(A)尾巴。
③其RNA最多只能编码一个多肽。
④真核生物几乎永远以AUG为起始密码子。
●剪接分支位点核苷酸是腺嘌呤核糖核苷酸
● RNA链合成的特点：
1.RNA是按5’→3’方向合成
2.以DNA双链中的反义链（模板链）为模板
3.以4种三磷酸核苷（NTPs）为原料
4.根据碱基配对原则
5.各核苷酸间通过形成磷酸二酯键相连
6.不需要引物
7.合成的RNA带有于DNA编码链相同的序列
●真核生物RNA聚合酶Ⅱ转录起始
①TFⅡD因子对TATA盒的识别，TFⅡA与TFⅡD和其中的TBP结合，增强并稳定TFⅡD与TATA盒的结合，形成“前转录起始复合体（TIC）”（TFⅡD因子:TATA 盒结合蛋白TBP、至少8个TBP辅助因子TAF）
②随后TFⅡB作为TFⅡD和RNA聚合酶的桥梁因子，富集高浓度RNA聚合酶到启动子周围，TFⅡF和TFⅡH使DNA解螺旋后有助于RNA聚合酶的转录与移动。形成“基本转录起始复合体（TIC）”
③TFⅡH的激酶活性使RBPⅡA型的CTD发生高频的磷酸化，转换为ⅡO型的高转录活性的RNA聚合酶。形成“完全的转录起始复合体（TIC）”
④RNA聚合酶在启动转录前清理转录起始复合体后，仅与TFⅡF因子一起完成转录的延伸
（TFⅡD：对增强子和沉默子作出反应）
●原核生物与真核生物启动子的主要差别？
原核生物
TTGACA --- TATAAT------起始位点
-35 -10
真核生物
增强子---GC ---CAAT----TATAA—5mGpp—起始位点
-110 -70 -25
●增强子的组织和细胞学表达特性：
（1）远距离作用
（2）增强子的位置无需固定，可在受其调控基因的上游、下游、或内部。（3）一个增强子可以包含一个以上能够被转录激活子识别的元件。
●沉默子：
①可以在远距离调控转录（至少 1 kb 以外）。
②可以使染色质卷曲成浓缩的难以接近的非活性的形式。与组蛋白的去乙酰化有关。
③沉默子是一种通过延伸DNA的异染色质化而影响染色质结构，形成高密度的异染色质，从而关闭转录的DNA 元件。
●绝缘子：
①是一段具有特化染色质结构的区域，能够阻断增强子和沉默子对靶基因的作用效应。
②当绝缘子位于增强子和启动子之间时，可以阻断增强子上的激活子与下游基本转录复合物的结合，从而阻止增强子对启动子的表达效应。
③当绝缘子位于沉默子和启动子之间时，可以提供一道屏障墙，阻止沉默子的异染色质化区域的延伸，从而阻断沉默子对下游靶基因的失活效应。
●终止子：
1）一种是依赖ρ因子(ρfactor)的转录终止子
2）一种是不依赖ρ因子的转录终止子
●帽子结构的功能
①保护mRNA，防止降解。
②将mRNA转运出细胞核。
③增强mRNA的可译性。
④帽子结构是pre-mRNA正确剪切所必需。
⑤与某些RNA病毒的正链RNA的合成有关，抢夺宿主mRNA的帽子
⑥5’端完整的帽子结构将有利于第一个内含子的剪切。
● poly（A）尾巴的作用：
①稳定mRNA，防止降解。
②促进mRNA的翻译。
③在拼接和mRNA向核外运输的过程中发挥作用。
●多腺苷酸化的意义：
①参与新生RNA从DNA/RNA/RNA聚合酶Ⅱ三联体复合物中的释放
②与转录偶联既能促进转录终止，也能防止mRNA“早熟”
③参与前体的3’端内含子的去除
④稳定mRNA
⑤影响翻译效率
● mRNA的降解：
mRNA作为合成蛋白质的模板，在完成任务后，就到达细胞的一定部位死亡。细胞对于mRNA的命运具有空间控制作用。
过程：真核细胞中mRNA降解的前奏是先去掉polyA尾，然后触发了5’帽子的去除，最后导致mRNA被一种外切酶从5‘→3’降解。
Ccr4p是一种去掉mRNA的polyA尾巴的酶，而去帽酶则位于P小体内
●第一类内含子剪接的机制：
①剪接活性由35s rRNA自身催化（auto-catalysis）完成，剪接过程不需任何酶类与能量的参与。
②剪接反应只要求鸟苷酸的3’-OH。一处的磷酸酯键转化为另一处新的磷酸酯键，不需以分解高能前体物（NTP）为代价而形成新的磷酸酯键，破坏的磷酸酯键与形成的磷酸酯键总是相等。
这类内含子的剪接包括三次转酯反应
第一次转酯反应由游离的G发动，G的3’-OH攻击内含子的5’末端，产生G-内含子和外显子游离的3’-OH末端。
第二次转酯反应由上一个外显子的3’-OH攻击另一个外显子，并与之相连，同时释放线状的内含子。
游离的线状内含子发生第三次转酯反应而形成环状。
● RNA编辑（RNA Editing）的生物学意义
①形成/删除AUG, UAA, UAG, UGA…
②改变codon信息
③扩大编码的遗传信息量
④mRNA editing 较大程度地改变了DNA的遗传信息，使该基因的DNA序列仅是一串简略意义模糊的序列（abbreviated ）或称为隐秘基因、模糊基因
●真核生物mRNA5’端帽子结构与3’尾巴结构的主要功能
⑴5’端“帽子”结构的功能：
①稳定mRNA的一级结构，防止mRNA被5’-核酸外切酶所水解；
②为mRNA识别核糖体提供信号，使 mRNA 较快地与核糖体结合，以提高mRNA 对蛋白质的合成效率。
⑵3’端polyA尾巴结构的功能：
①有助于mRNA从细胞核向细胞质转移；
②与保护mRNA的稳定性和维持mRNA的二级结构有关；
③对蛋白质的合成速度有影响。
三、
1、转录是以DNA一条链为模板的RNA的酶促合成。我们把模板链称为有意链。
2、数个生化反应可由核酶催化，这种具有催化功能的RNA可以剪切自身或其它的RNA分子，或者完成连接或自身剪接反应。
3.hnRNA与mRNA之间的差别主要有两点大小、翻译功能。
4.mRNA在转录开始后不久就与核糖体结合，形成NAP颗粒这种颗粒排列于mRNA分子上，呈串珠状，就像核小体一样。
5、原始转录物的一些序列被修饰，叫做RNA编辑。
6. 真核生物mRNA的5'-帽子结构是m7GpppXpYp, 其3'末端有PolyA结构。
7. 原核生物DNA指导的RNA聚合酶的核心酶的组成是α亚基、α亚基、β亚基、β’亚基。
8. 真核生物RNA聚合酶III负责转录tRNA、5S rRNA、Alu序列和部分snRNA 。
9. 在转录过程中RNA聚合酶全酶的σ因子负责识别启动子的Sextama Box(－35区),并通过σ与模板链结合,核心酶负责转录起始和延伸。
10.将TATA区上游的保守序列称为CAAT盒。
11.真核生物的加工过程中，5’端加上帽子结构，在3’端加上多腺苷酸尾巴，后者由RNA末端腺苷转移酶催化。如果转录的基因不连续，那么，一定要被切除，并通过剪接，将外显子连在一起。
12.每个锌指的C-末端形成一个α-螺旋，在DNA大沟的转折处与DNA结合。有锌参与时才具备转录调控活性。
13.GAL4 蛋白是参与半乳糖代谢的一套基因表达的正调节因子。GAL4能够识别这些基因上游激活序列。
14.LexA 蛋白是原核生物的阻遏物，在大肠杆菌细胞中，结合在lexA 操纵子上，能够阻止下游基因的表达。 LexA 蛋白无转录激活域，因为LexA 蛋白无转录激活功能。
15.激活域的功能是将RNA 聚合酶募集到启动子处，让结构基因开始表达。
16.未甲基化帽子的底物在剪切时，可以被S-腺苷酸-同型半胱氨酸抑制，此物质也是帽子甲基化过程的抑制剂。
17.AAUAAA 基序在pre-mRNA 多腺苷化位点上游 20 nt 处。多聚腺苷化的能力取决于一致序列的保守性。
18.多聚腺苷酸化涉及前体mRNA的切割和在切割位点的多聚腺苷酸化两个过程。
19.16S rRNA的3’端即非常保守，又高度自我互补，能形成发卡式结构。
这正好说明了序列配对是动态的，可变的。
20. L19 是剪切下来的内含子，L19 可以促进RNA 重排，作为 RNA 异构酶；具有酶的基本共性
21.在gRNA 的5’-末端，锚定序列能够引导gRNA到达mRNA将被编辑的区域。
四、
●简述转录的基本过程?
答：模板识别：RNA聚合酶与DNA双链启动子相互作用并与之相结合。
↓
转录起始
↓
转录延伸：RNA聚合酶释放σ因子离开启动子，核心酶沿模板DNA链移动并使新生RNA链不断伸长。（TFⅡS 刺激延伸；TFⅡS 负责转录产物的矫正）↓
转录终止：当RNA链延伸到转录终止位点时，RNA聚合酶不再形成新的磷酸二酯键，RNA-DNA杂合物分离，转录泡瓦解，DNA恢复成双链状态，而RNA 聚合酶和RNA链都被从模板上释放出来。
●说明poly(A)在分子生物学实验中的应用价值。
a) 可将 oligo (dT) 与载体相连，从总体RNA中分离纯化mRNA
b) 用寡聚dT（oligo (dT)）为引物，反转录合成 cDNA
● Euk.mRNA帽子的种类。
帽子0（Cap-0） m7GpppXpYp-------（共有）m7G N7—甲基鸟苷
帽子1（Cap-1） m7GpppXmpYp--------第一个核苷酸的 2’-O 位上产生甲基化（A N6 位甲基化）
帽子2 （Cap-2） m7GpppXmpYmp第二个核苷酸的 2’-O 位上产生甲基化（A、G、C、U）
●真核生物mRNA前体内含子剪接的信号序列特征是什么？
mRNA前体中内含子的两端边界存在共同的序列，这些序列可能是产生mRNA 前体剪接的信号。多数细胞核mRNA前体中内含子的5’边界序列为GU，3‘边界为AG。
● I型内含子发生改变后，可以产生其他酶的活性吗?如果可以，是哪些活性?这意味着I型内含子的催化中心有什么特点？
答：可以。这些活性包括：RNA聚合酶、内切核酸酶、磷酸酶、连接酶的活性。将I 型内含子转变成这些酶的能力表明它能结合于RNA的糖—磷酸骨架并能催化在它前后的几个不同反应。
●转录涉及模板链和编码链的分离，解释在转录中单链DNA是怎样被保护的。
答：转录过程中控板与编码链分离时，聚合酶覆盖了整个转录泡——从解
旋位点到螺旋重新形成位点，因此单链的DNA被保护起来。
●哪三个序列对原核生物mRNA的精确转录是必不可少的?
答： -35(RNA聚合酶结合位点)、-10(RNA聚合酶起始位点)启动子序列和终止子；
●试证明一个基因中只有一条DNA链作为模板被转录。
答：若基因两条链均被转录，而RNA聚合酶只能以5’→3’方向合成，所以两条DNA链会以相反方向转录。两信使携带着彼此互补的反向核苷酸序列，编码不同的多肽。信使只可以与一条DNA链(重链)互补，因而DNA双链中只有一条链作为转录的模板。
●有一个被认为是mRNA的核苷酸序列，长300个碱基，你怎样才能： (1)证明此RNA是mRNA而不是tRNA或rRNA。 (2)确定它是真核还是原核mRNA。
答：根据序列组成进行判断： (1)此序列太长不可能是tRNA。如果它是rRNA，应该含有许多特殊元件，同时应具有可以形成发夹环的反向重复序列。如果是mRNA则应有AUG起始密码子、一段相应的氨基酸密码子和一个相应的终止密码子构成的可读框。 (2)所有的真核生物mRNA在5’端都含有一个7—甲基鸟苷，而且大多数还在3’端有一个长的po1yA尾巴。这些都是原核生物mRNA所不具有的，但是原核生物mRNA靠近5’端有l—个核糖体结合序列(SD序列)。
●详述怎样加工才能使真核生物mRNA 成熟
一、首、尾修饰
1、5’端加帽成熟真核生物mRNA,其结构5’端形成-m7GpppmXpYp-帽子结构
2、3’端加尾多数真核生物mRNA3’端都有多聚（A)尾，长约100－200个核甘酸。
二、真核生物mRNA的剪接
剪接就是在细胞核中，除去 hnRNA中的内含子，并在连接酶的作用下，将外显子各部分连接起来的过程。
(1)mRNA前体的剪切部位是在内含子末端的特定部位
(2)套索结构的形成及剪接
(3)剪接体的形成
●现分离了一段DNA片段，可能含有编码多肽的基因的前几个密码子。该片段的序列组成如下:
5’CGCAGGATCAGTCGATGTCCTGTG 3’
3’GCGTCCTAGTCAGCTACAGGACAC 5’
(1)哪一条链作为转录的模板链？
(2)mRNA的顺序是什么？
(3)此mRNA能形成二级结构吗？
(4) 翻译从哪里开始，朝哪个方向进行？
(5)此DNA最可能是从原核细胞还是真核细胞中分离的？
提示：mRNA上含有起始密码子AUG对应的编码链上应该是ATG，另一条链即是模
板链
DNA的损伤原因是什么?
6、试比较RNA转录与DNA复制的区别？
7、简述σ因子的功能？
注：转录起始点（p126）、靶基因启动子（p126）、核心酶概念（p128）、转录的基本过程（p131）、三类机制剪接（p160）
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分子生物学试题及答案 一、名词解释 1．cDNA与cccDNA：cDNA是由mRNA通过反转录酶合成的双链DNA；cccDNA是游离于染色体之外的质粒双链闭合环形DNA。 2．标准折叠单位：蛋白质二级结构单元α－螺旋与β－折叠通过各种连接多肽可以组成特殊几何排列的结构块，此种确定的折叠类型通常称为超二级结构。几乎所有的三级结构都可以用这些折叠类型，乃至他们的组合型来予以描述，因此又将其称为标准折叠单位。 3．CAP：环腺苷酸（cAMP）受体蛋白CRP（cAMP receptor protein ），cAMP与CRP结合后所形成的复合物称激活蛋白CAP（cAMP activated protein ） 4．回文序列：DNA片段上的一段所具有的反向互补序列，常是限制性酶切位点。 5．micRNA：互补干扰RNA或称反义RNA，与mRNA序列互补，可抑制mRNA的翻译。 6．核酶：具有催化活性的RNA，在RNA的剪接加工过程中起到自我催化的作用。 7．模体：蛋白质分子空间结构中存在着某些立体形状和拓扑结构颇为类似的局部区域 8．信号肽：在蛋白质合成过程中N端有15~36个氨基酸残基的肽段，引导蛋白质的跨膜。 9．弱化子：在操纵区与结构基因之间的一段可以终止转录作用的核苷酸序列。 10．魔斑：当细菌生长过程中，遇到氨基酸全面缺乏时，细菌将会产生一个应急反应，停止全部基因的表达。产生这一应急反应的信号是鸟苷四磷酸(ppGpp)和鸟苷五磷酸（pppGpp）。PpGpp与pppGpp的作用不只是一个或几个操纵子，而是影响一大批，所以称他们是超级调控子或称为魔斑。 11．上游启动子元件：是指对启动子的活性起到一种调节作用的DNA序列，-10区的TATA、-35区的TGACA 及增强子，弱化子等。 12．DNA探针：是带有标记的一段已知序列DNA，用以检测未知序列、筛选目的基因等方面广泛应用。13．SD序列：是核糖体与mRNA结合序列，对翻译起到调控作用。 14．单克隆抗体：只针对单一抗原决定簇起作用的抗体。 15．考斯质粒：是经过人工构建的一种外源DNA载体，保留噬菌体两端的COS区，与质粒连接构成。16．蓝-白斑筛选：含LacZ基因（编码β半乳糖苷酶）该酶能分解生色底物X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷)产生蓝色，从而使菌株变蓝。当外源DNA插入后，LacZ基因不能表达，菌株呈白色，以此来筛选重组细菌。称之为蓝-白斑筛选。 17．顺式作用元件：在DNA中一段特殊的碱基序列，对基因的表达起到调控作用的基因元件。18．Klenow酶：DNA聚合酶I大片段，只是从DNA聚合酶I全酶中去除了5’→3’外切酶活性 19．锚定PCR：用于扩增已知一端序列的目的DNA。在未知序列一端加上一段多聚dG的尾巴，然后分别用多聚dC和已知的序列作为引物进行PCR扩增。 20．融合蛋白：真核蛋白的基因与外源基因连接，同时表达翻译出的原基因蛋白与外源蛋白结合在一起所组成的蛋白质。 二、填空 1． DNA的物理图谱是DNA分子的（限制性内切酶酶解）片段的排列顺序。 2． RNA酶的剪切分为（自体催化）、（异体催化）两种类型。 3．原核生物中有三种起始因子分别是（IF-1）、（IF-2）和（IF-3）。 4．蛋白质的跨膜需要（信号肽）的引导，蛋白伴侣的作用是（辅助肽链折叠成天然构象的蛋白质）。5．启动子中的元件通常可以分为两种：（核心启动子元件）和（上游启动子元件）。 6．分子生物学的研究内容主要包含（结构分子生物学）、（基因表达与调控）、（DNA重组技术）三部分。7．证明DNA是遗传物质的两个关键性实验是（肺炎球菌感染小鼠）、（ T2噬菌体感染大肠杆菌）这两个实验中主要的论点证据是：（生物体吸收的外源DNA改变了其遗传潜能）。 8．hnRNA与mRNA之间的差别主要有两点：（hnRNA在转变为mRNA的过程中经过剪接，）、 （mRNA的5′末端被加上一个m7pGppp帽子，在mRNA3′末端多了一个多聚腺苷酸(polyA)尾巴）。 9．蛋白质多亚基形式的优点是（亚基对DNA的利用来说是一种经济的方法）、（可以减少蛋白质合成过程中随机的错误对蛋白质活性的影响）、（活性能够非常有效和迅速地被打开和被关闭）。 10．蛋白质折叠机制首先成核理论的主要内容包括（成核）、（结构充实）、（最后重排）。 11．半乳糖对细菌有双重作用；一方面（可以作为碳源供细胞生长）；另一方面（它又是细胞壁的成分）。所以需要一个不依赖于cAMP—CRP的启动子S2进行本底水平的永久型合成；同时需要一个依赖于cAMP—CRP的启动子S1对高水平合成进行调节。有G时转录从（ S2）开始，无G时转录从（ S1）开
分子生物学课后题
第一章 1、简述细胞的遗传物质，怎样证明DNA是遗传物质？ 答：核酸是细胞内的遗传物质，包括脱氧核糖核酸(|DNA)和核糖核酸（RNA）两类，DNA是主要的遗传物质，具有储存遗传信息，将遗传信息传递给子代，物理化学性质稳定，有遗传变异能力适合作为遗传信息的特性，T2噬菌体侵染实验证明了DNA是遗传物质，将蛋白质被35S标记和DNA被32P 标记的T2噬菌体分别侵染E.coli后，发现进入宿主细胞的只有32P标记的DNA，而无35S标记物，所产生的子代噬菌体只含有32P标记的DNA，无S标记的蛋白质，因此证明DNA是遗传物质。 2、研究DNA的一级结构有什么重要的生物学意义？ 答：DNA的一级结构是指DNA分子中的核苷酸排列顺序，它反映了生物界物种的多样性和复杂性，任何一段DNA序列都可以反映出它的高度的个体性和种族特异性，另外DNA一级结构决定其高级结构，研究DNA一级结构对阐明遗传物质结构、功能及表达调控都极其重要。 3、简述DNA双螺旋结构与现在分子生物学发展的关系。 答：DNA双螺旋结构具有碱基互补配对原则具有极其重要的生物学意义，它是DNA复制、转录、逆转录等基因复制与表达的分子基础。DNA为双链，维持了遗传物质的稳定性。 4、DNA双螺旋结构有哪些形式？说明其主要特点和区别。 答：主要有B-DNA，A-DNA,E-DNA形式 B-DNA：每一螺周含有10个碱基对，两个核苷酸之间夹角为36度 A-DNA：碱基对与中心倾角为19度，螺旋夹角为32.7度 E-DNA：左手螺旋，每圈螺旋含12对碱基，G=C碱基对非对称地位于螺旋轴附近。 第二章 1、简述DNA分子的高级结构。 答：1、单链核酸形成的二级结构（发夹结构）2、反向重复序列（十字架结构，每条链从5'--3'方向阅读）3、三股螺旋的DNA（一条链为全嘌呤核苷酸链，另一条链为全嘧啶核苷酸链）4、DNA的四链结构5、DNA结构的动态性与精细结构6、DNA的超螺旋结构与拓扑学性质。 2、什么是DNA的拓扑异构体，它们之间的相互转变依赖于什么？ 答：DNA不同的空间分子构象又称拓扑异构体它们之间转换依赖于连环数L。连环数是指双螺旋DNA中两条链相互缠绕交叉的总次数。 3、简述真核生物染色体的组成，它们是如何组装的？ 答：真核生物的染色体在间期表现为染色质，染色质是以双链DNA作为骨架与组蛋白和非组蛋白及少量各种RNA等共同组成的丝状结构的大分子物质、 组装的顺序：DNA—核小体链—纤丝—突环—玫瑰花结—螺旋圈—染色体 4、简述细胞内RNA的分布结构特点 答：成熟的RNA主要分布在细胞质中，无论是真核或原核细胞质中，成千上万种的RNA都分为三大类：1、转运RNA 2、信使RNA 3、核蛋白体RNA。细胞核内的RNA统称为nRNA. 5、简述细胞内RNA的结构特点以及与DNA的区别。 答：1、碱基组成不同，RNA分子主要是A G C U 而DNA以T代替U。 2、RNA分子中的核糖都是D-核糖，而DNA则是D-2-脱氧核糖。 3、RNA分子中有许多稀有，微量碱基，而DNA除个别外，不含有稀有碱基 4、RNA分子中嘌呤碱基与嘧啶碱基不一定相等。 5、RNA分子具有逆转录作用，RNA翻译成蛋白质是遗传物质，是遗传信息的传递结合表达者。 6、RNA分子具有催化功能。 6、引起DNA变性的主要因素有哪些？核酸变性后分子结构和性质发生了哪些变化？ 答：①加热②极端PH值③有机溶剂，尿素和酰胺等 核酸变性后氢键被破坏而断裂，双链变为单链，而磷酸二酯键并未锻裂在A260nm 处呈现增色效应。DNA溶液的黏度大大下降、沉淀速度增加、浮力密度上升。紫外吸收光谱升高。酸碱滴定曲线改变，生物活性丧失等。 7、检测核酸变性的定性和定量方法是什么？具体参数如何？ 答：在DNA变性过程中，紫外吸收光谱的变化时检测变性最简单的定性和定量方法。核酸在260nm 处具有特征的吸收峰，便是为A260nm。以50ug/ml DNA溶液在A260下测定，三者的A260数值为：
分子生物学试题及答案
生命科学系本科2010-2011学年第1学期试题分子生物学（A）答案及评分标准 一、选择题，选择一个最佳答案（每小题1分，共15分） 1、1953年Watson和Crick提出（A ） A、多核苷酸DNA链通过氢键连接成一个双螺旋 B、DNA的复制是半保留的，常常形成亲本——子代双螺旋杂合链 C、三个连续的核苷酸代表一个遗传密码 D、遗传物质通常是DNA而非RNA 2、基因组是（D ） A、一个生物体内所有基因的分子总量 B、一个二倍体细胞中的染色体数 C、遗传单位 D、生物体的一个特定细胞内所有基因的分子总量 3、下面关于DNA复制的说法正确的是（D ） A、按全保留机制进行 B、按3＇→5＇方向进行 C、需要4种NTP加入 D、需要DNA聚合酶的作用 4、当过量的RNA与限量的DNA杂交时（A ） A、所有的DNA均杂交 B、所有的RNA均杂交 C、50%的DNA杂交 D、50%的RNA杂交 5、以下有关大肠杆菌转录的叙述，哪一个是正确的？（B ） A、-35区和-10区序列间的间隔序列是保守的 B、-35区和-10区序列距离对转录效率非常重要 C、转录起始位点后的序列对于转录效率不重要 D、-10区序列通常正好位于转录起始位点上游10bp处 6、真核生物mRNA转录后加工不包括（A ） A、加CCA—OH B、5＇端“帽子”结构 C、3＇端poly（A）尾巴 D、内含子的剪接 7、翻译后的加工过程不包括（C ） A、N端fMet或Met的切除 B、二硫键的形成 C、3＇末端加poly（A）尾 D、特定氨基酸的修饰
8、有关肽链合成的终止，错误的是（C ） A、释放因子RF具有GTP酶活性 B、真核细胞中只有一个终止因子 C、只要有RF因子存在，蛋白质的合成就会自动终止 D、细菌细胞内存在3种不同的终止因子：RF1、RF2、RF3 9、酵母双杂交体系被用来研究（C ） A、哺乳动物功能基因的表型分析 B、酵母细胞的功能基因 C、蛋白质的相互作用 D、基因的表达调控 10、用于分子生物学和基因工程研究的载体必须具备两个条件（B ） A、含有复制原点，抗性选择基因 B、含有复制原点，合适的酶切位点 C、抗性基因，合适的酶切位点 11、原核生物基因表达调控的意义是（D ） A、调节生长与分化 B、调节发育与分化 C、调节生长、发育与分化 D、调节代谢，适应环境 E、维持细胞特性和调节生长 12、乳糖、色氨酸等小分子物质在基因表达调控中作用的共同特点是（E ） A、与DNA结合影响模板活性 B、与启动子结合 C、与操纵基因结合 D、与RNA聚合酶结合影响其活性 E、与蛋白质结合影响该蛋白质结合DNA 13、Lac阻遏蛋白由（D ）编码 A、Z基因 B、Y基因 C、A基因 D、I基因 14、紫外线照射引起DNA损伤时，细菌DNA修复酶基因表达反应性增强，这种现象称为（A ） A、诱导 B、阻遏 C、正反馈 D、负反馈 15、ppGpp在何种情况下被合成？（A ） A、细菌缺乏氮源时 B、细菌缺乏碳源时 C、细菌在环境温度太高时 D、细菌在环境温度太低时 E、细菌在环境中氨基酸含量过高时
(精选)分子生物学期末考试题目及答案
分子生物学复习提纲 一．名词解释 （1）Ori ：原核生物基因质粒的复制起始位点，是四个高度保守的19bp组成的正向重复序列，只有ori能被宿主细胞复制蛋白质识别的质粒才能在该种细胞中复制。 ARS：自主复制序列，是真核生物DNA复制的起点，包括数个复制起始必须的保守区。不同的ARS序列的共同特征是一个被称为A区的11bp的保守序列。（2）Promoter：启动子，与基因表达启动有关的顺式作用元件，是结构基因的重要成分，它是位于转录起始位点5’端上游区大约100~200bp以内的具有独立功能的DNA序列，能活化RNA 聚合酶，使之与模板ＤＮＡ准确地相结合并具有转录起始的特异性。 （3）r-independent termination不依赖r因子的终止，指在不依赖r因子的终止反应中，没有任何其他因子的参与，核心酶也能在某些位点终止转录。（强终止子） （4）SD sequence：ＳＤ序列（核糖体小亚基识别位点），存在于原核生物起始密码ＡＵＧ上游７～１２个核苷酸处的一种４～７个核苷酸的保守片段，它与１６ＳｒＲＮＡ３’端反向互补，所以可以将mRNA的AUG起始密码子置于核糖体的适当位置以便起始翻译作用。 Kozak sequence：存在于真核生物mRNA的一段序列，核糖体能够识别mRNA 上的这段序列，并把它作为翻译起始位点。 （5）Operator：操纵基因，与一个或者一组结构基因相邻近，并且能够与一些特异的阻遏蛋白相互作用，从而控制邻近的结构基因表达的基因。 Operon：操纵子，是指原核生物中由一个或多个相关基因以及转录翻译调控元件组成的基因表达单元。包括操纵基因、结构基因、启动基因。 （6）Enhancer：增强子，能强化转录起始的序列的为增强子或强化子Silencer：沉默子，可降低基因启动子转录活性的一段DNA顺式元件。与增强子作用相反。 （7）cis-acting element ：顺式作用元件，存在于基因旁侧序列中能影响基因表达的序列，包括启动子、增强子、调控序列和可诱导元件，本身不编码任何蛋白质，仅仅提供一个作用位点，与反式作用因子相互作用参与基因表达调控。 trans-acting factor：反式作用因子，是指直接或间接地识别或结合在各类顺式作用元件核心序列上参与调控靶基因转录效率的蛋白质。具有三个功能结构域，即DNA结合域、转录结合域、结合其他结合蛋白的结构域。 （8）Open reading frame (ORF)：开放式阅读框架，是指一组连续的含有三联密码子的能够被翻译成为多肽链的DNA序列。它由起始密码子开始，到终止密码子结束。 （9）Gene：基因，产生一条多肽链或功能RNA所需的全部核苷酸序列。（能转录且具有生物学功能的DNA/RNA的序列。）
(整理)分子生物学第四章习题
第4章DNA复制 一、填空题 1．在DNA合成中负责复制和修复的酶是。 2．染色体中参与复制的活性区呈Y开结构，称为。 3．在DNA复制和修复过程中，修补DNA螺旋上缺口的酶称为 4．在DNA复制过程中，连续合成的子链称为，另一条非连续合成的子链称为。 5．如果DNA聚合酶把一个不正确的核苷酸加到3′端，一个含3′→5′活性的独立催化区会将这个错配碱基切去。这个催化区称为酶。 6．DNA后随链合成的起始要一段短的，它是由以核糖核苷酸为底物合成的。 7．复制叉上DNA双螺旋的解旋作用由催化的，它利用来源于ATP水解产生的能量沿DNA链单向移动。 8．帮助DNA解旋的与单链DNA结合，使碱基仍可参与模板反应。9．DNA引发酶分子与DNA解旋酶直接结合形成一个单位，它可在复制叉上沿后随链下移，随着后随链的延伸合成RNA引物。 10．如果DNA聚合酶出现错误，会产生一对错配碱基，这种错误可以被一个通过甲基化作用来区别新链和旧链的判别的系统进行校正。 11．对酵母、细菌以及几种生活在真核生物细胞中的病毒来说，都可以在DNA独特序列的处观察到复制泡的形成。 12．可被看成一种可形成暂时单链缺口（I型）或暂时双链缺口（II型）的可逆核酸酶。 13．拓扑异构酶通过在DNA上形成缺口超螺旋结构。 14．真核生物中有五种DNA聚合酶，它们是A. ；B. ；C. ；D. ；E. ；15有真核DNA聚合酶和显示3'→5'外切核酸酶活性。 二、选择题（单选或多选） 1．DNA的复制（）。
A．包括一个双螺旋中两条子链的合成B．遵循新的子链与其亲本链相配对的原则 C．依赖于物种特异的遗传密码D．是碱基错配最主要的来源 E．是一个描述基因表达的过程 2．一个复制子是（）。 A．细胞分裂期间复制产物被分离之后的DNA片段 B．复制的DNA片段和在此过程中所需的酶和蛋白质 C．任何自发复制的DNA序列（它与复制起点相连） D．任何给定的复制机制的产物（如单环） E．复制起点和复制叉之间的DNA片段 3．真核生物复制子有下列特征，它们（）。 A．比原核生物复制子短得多，因为有末端序列的存在 B．比原核生物复制子长得多，因为有较大的基因组 C．通常是双向复制且能融合 D．全部立即启动，以确保染色体的S期完成复制 E．不是全部立即启动，在任何给定的时间只有大约15%具有活性 4．下述特征是所有（原核生物、真核生物和病毒）复制起始位点都共有的是（）。A．起始位点是包括多个短重复序列的独特DNA片段 B．起始位点是形成稳定二级结构的回文序列 C．多聚体DNA结合蛋白专一性识别这些短的重复序列 D．起始位点旁侧序列是A-T丰富的，能使DNA螺旋解开 E．起始位点旁侧序是G-C丰富的，能稳定起始复合物 5．下列关于DNA复制的说法正确的有（）。 A．按全保留机制进行 B．按3′→5′方向进行 C．需要4种dNMP的参与 D．需要DNA连接酶的作用 E．涉及RNA引物的形成F．需要DNA聚合酶I 6．标出下列所有正确的答案。（）
分子生物学复习题
1、分子生物学的定义。 从分子水平研究生物大分子的结构与功能从而阐明生命现象本质的科学，主要指遗传信息的传递（复制）、保持（损伤和修复）、基因的表达（转录和翻译）与调控。 2、简述分子生物学的主要研究内容。 a.DNA重组技术（基因工程） （1）可被用于大量生产某些在正常细胞代谢中产量很低的多肽 ; （2）可用于定向改造某些生物的基因组结构 ; （3）可被用来进行基础研究 b.基因的表达调控 在个体生长发育过程中生物遗传信息的表达按一定时序发生变化（时序调节），并随着内外环境的变化而不断加以修正（环境调控）。 c.生物大分子的结构和功能研究(结构分子生物学） 一个生物大分子，无论是核酸、蛋白质或多糖，在发挥生物学功能时，必须具备两个前提： (1)拥有特定的空间结构（三维结构）； (2)发挥生物学功能的过程中必定存在着结构和构象的变化。 结构分子生物学就是研究生物大分子特定的空间结构及结构的运动变化与其生物学功能关系的科学。它包括3个主要研究方向： (1) 结构的测定 (2) 结构运动变化规律的探索 (3) 结构与功能相互关系 d.基因组、功能基因组与生物信息学研究 3、谈谈你对分子生物学未来发展的看法？ (1)分子生物学的发展揭示了生命本质的高度有序性和一致性，是人类认识论上的重大飞跃。生命活动的一致性，决定了二十一世纪的生物学将是真正的系统生物学，是生物学范围内所有学科在分子水平上的统一。 (2)分子生物学是目前自然学科中进展最迅速、最具活力和生气的领域，也是新世纪的带头学科。
(3)分子生物学是由生物化学、生物物理学、遗传学、微生物学、细胞学、以及信息科学等多学科相互渗透、综合融会而产生并发展起来的，同时也推动这些学科的发展。 (4)分子生物学涉及认识生命的本质，它也就自然广泛的渗透到医学、药学各学科领域中，成为现代医药学重要的基础。 1、DNA双螺旋模型是哪年、由谁提出的?简述其基本内容。 DNA双螺旋模型在1953年由Watson和Crick提出的。 基本内容： (1) 两条反向平行的多核苷酸链围绕同一中心轴相互缠绕，两条链均为右手双螺旋。 (2) 嘌呤与嘧啶碱位于双螺旋的内侧，3′,5′- 磷酸与核糖在外侧，彼此通过磷酸二酯键相连接，形成DNA分子的骨架。 (3) 双螺旋的平均直径为2nm,两个相邻碱基对之间相距的高度即碱基堆积距离 为0.34nm,两个核苷酸之间的夹角为36。。 (4) 两条核苷酸链依靠彼此碱基之间形成的氢键相连系而结合在一起，A与T相配对形成两个氢键，G与C相配对形成3个氢键。 (5) 碱基在一条链上的排列顺序不受任何限制，但根据碱基互补配对原则，当一条多核苷酸的序列被确定后，即可决定另一条互补链的序列。
分子生物学复习题(有详细答案)
绪论 思考题：（P9） 1.从广义和狭义上写出分子生物学的定义？ 广义上讲的分子生物学包括对蛋白质和核酸等生物大分子结构与功能的研究，以及从分子水平上阐明生命的现象和生物学规律。 狭义的概念，即将分子生物学的范畴偏重于核酸（基因）的分子生物学，主要研究基因或DNA结构与功能、复制、转录、表达和调节控制等过程。其中也涉及与这些过程相关的蛋白质和酶的结构与功能的研究。 2、现代分子生物学研究的主要内容有哪几个方面？什么是反向生物学？什么是 后基因组时代？ 研究内容： DNA的复制、转录和翻译；基因表达调控的研究；DNA重组技术和结构分子生物学。 反向生物学：是指利用重组DNA技术和离体定向诱变的方法研究已知结构的基因相应的功能，在体外使基因突变，再导入体内，检测突变的遗传效应，即以表型来探索基因结构。 后基因组时代：研究细胞全部基因的表达图式和全部蛋白质图式，人类基因组研究由结构向功能转移。 3、写出三个分子生物写学展的主要大事件（年代、发明者、简要内容） 1953年Watson和Click发表了?脱氧核糖核苷酸的结构?的著名论文，提出了DNA的双螺旋结构模型。 1972~1973年，重组DNA时代的到来。H.Boyer和P.Berg等发展了重组DNA 技术，并完成了第一个细菌基因的克隆，开创了基因工程新纪元。 1990~2003年美、日、英、法、俄、中六国完成人类基因组计划。解读人类遗传密码。 4、21世纪分子生物学的发展趋势是怎样的？ 随着基因组计划的完成，人类已经掌握了模式生物的所有遗传密码。又迎来了后基因组时代，人类基因组的研究重点由结构向功能转移。相关学说理论相应诞生，如功能基因组学、蛋白质组学和生物信息学。生命科学又进入了一个全新的时代。 第四章 思考题：（P130） 1、基因的概念如何？基因的研究分为几个发展阶段？ 概念：基因是原核、真核生物以及病毒的DNA和RNA分子中具有遗传效应的核苷酸序列，是遗传的基本单位和突变单位以及控制形状的功能单位。 发展阶段：○120世纪50年代以前，主要从细胞的染色体水平上进行研究，属于基因的染色体遗传学阶段。 ○220世纪50年代以后，主要从DNA大分子水平上进行研究，属于分
关于分子生物学试题及答案
分子生物学试题（一） 一.填空题(,每题1分,共20分) 一.填空题(每题选一个最佳答案,每题1分,共20分) 1. DNA的物理图谱是DNA分子的（）片段的排列顺序。 2. 核酶按底物可划分为（）、（）两种类型。 3．原核生物中有三种起始因子分别是（）、（）和（）。 4．蛋白质的跨膜需要（）的引导，蛋白伴侣的作用是（）。5．真核生物启动子中的元件通常可以分为两种：（）和（）。6．分子生物学的研究内容主要包含（）、（）、（）三部分。 7．证明DNA是遗传物质的两个关键性实验是（）、（）。 8．hnRNA与mRNA之间的差别主要有两点：（）、（）。 9．蛋白质多亚基形式的优点是（）、（）、（）。 10.蛋白质折叠机制首先成核理论的主要内容包括（成核）、（结构充实）、（最后重排）。 11.半乳糖对细菌有双重作用；一方面（可以作为碳源供细胞生长）；另一方面（它又是细胞壁的成分）。所以需要一个不依赖于cAMP-CRP的启动子S2进行本底水平的永久型合成；同时需要一个依赖于cAMP-CRP的启动子S1对高水平合成进行调节。有G时转录从（S2 ）开始，无G时转录从（S1 ）开始。 12．DNA重组技术也称为（基因克隆）或（分子克隆）。最终目的是（把一个生物体中的遗传信息DNA转入另一个生物体）。典型的DNA重组实验通常包含以下几个步骤： ①提取供体生物的目的基因（或称外源基因），酶接连接到另一DNA分子上（克隆载体），形一个新的重组DNA分子。 ②将这个重组DNA分子转入受体细胞并在受体细胞中复制保存，这个过程称为转化。 ③对那些吸收了重组DNA的受体细胞进行筛选和鉴定。 ④对含有重组DNA的细胞进行大量培养，检测外援基因是否表达。 13、质粒的复制类型有两种：受到宿主细胞蛋白质合成的严格控制的称为（严紧型质粒），不受宿主细胞蛋白质合成的严格控制称为（松弛型质粒）。 14．PCR的反应体系要具有以下条件： a、被分离的目的基因两条链各一端序列相互补的 DNA引物（约20个碱基左右）。 b、具有热稳定性的酶如：TagDNA聚合酶。 c、dNTP d、作为模板的目的DNA序列 15．PCR的基本反应过程包括：（变性）、（退火）、（延伸）三个阶段。 16、转基因动物的基本过程通常包括： ①将克隆的外源基因导入到一个受精卵或胚胎干细胞的细胞核中； ②接种后的受精卵或胚胎干细胞移植到雌性的子宫；
分子生物学题库
分子生物学备选考题 名词解释: 1.功能基因组学 2.分子生物学 3.epigenetics 4.C值矛盾 5.基因簇 6.间隔基因 7.基因芯片 8.基序（Motifs） 9.CpG岛 10.染色体重建 11.Telomerase 12.足迹分析实验 13.RNA editing 14.RNA干涉（RNA interference） 15.反义RNA 16.启动子（Promoter） 17.SD序列(SD sequence) 18.碳末端结构域（carboxyl terminal domain，CTD） 19.single nucleotide polymorphism，SNP 20.切口平移（Nick translation） 21.原位杂交 22.Expressing vector 23.Multiple cloning sites 24.同源重组 25.转座 26.密码的摆动性 27.热休克蛋白嵌套基因 28.基因家族增强子 29.终止子 30.前导肽RNAi 31.分子伴侣 32.魔斑核苷酸 33.同源域 34.引物酶 35.多顺反子mRNA 36.物理图谱、 37.载体（vector） 38.位点特异性重组 39.原癌基因（oncogene） 40.重叠基因、 41.母源影响基因、
42.抑癌基因（anti-oncogene）、 43.回文序列（palindrome sequence）、 44.熔解温度（melting temperature, Tm） 45.DNA的呼吸作用（DNA respiration） 46..增色效应（hyperchromicity）、 47.C0t曲线（C0t curve）、 48.DNA的C值（C value） 49.超螺旋(superhelix) 、 50.拓扑异构酶（topoisomerase）、 51.引发酶(primase) 、 52.引发体(primosome) 53.转录激活(transcriptional activation) 54.dna基因(dna gene)、 55.从头起始(de novo initiation) 、 56.端粒（telomere） 57.酵母人工染色体（yeast artificial chromosome, YAC）、 58.SSB蛋白（single strand binding protein）、 59.复制叉(replication fork)、 60.保留复制(semiconservative replication) 61.滚环式复制(rolling circle replication)、 62.复制原点(replication origin)、 63.切口(nick) 64.居民DNA (resident DNA) 65.有义链(sense strand) 66.反义链(antisense strand) 67.操纵子(operon) 、 68.操纵基因(operator) 69.内含子(内元intron) 70.外显子(外元exon) 、 71.突变子(muton) 、 72.密码子（codon）、、 73.同义密码（synonymous codons）、 74.GC盒(GC box) 75.增强子(enhancer) 76.沉默子(silencer) 77.终止子(terminator) 78.弱化子（衰减子）(attenuator) 79.同位酶(isoschizomers) 、 80.同尾酶(isocandamers) 81.阻抑蛋白（阻遏蛋白）(repressor) 82.诱导物（inducer）、 83.CTD尾（carboxyl-terminal domain ） 84.载体（vector）、 85.转化体(transformant)
分子生物学第四章练习题
假定你从一新发现的病毒中提取了核苷酸，请用最简单的方法确定：（1）它是DNA还是RNA？（2）它是单链还是双链？--类型：分析题 答：确定碱基比率。如果有胸腺嘧啶，为DNA，如果有尿嘧啶，则为RNA。如果为双链分子，那么A与T(或U)的量以及G与C的量应相等。 RNA 是由核糖核酸通过（）键连接而成的一种（）。几乎所有的RNA都是由（）DNA（）而来，因此，序列和其中一条链（）。--类型：填空题 --答案：磷酸二酯；多聚体；模板；转录；互补 多数类型的RNA是由加工（）产生的，真核生物前体tRNA的（）包括（）的切除和（）的拼接。随着（）和（）端的序列切除，3’端加上了序列（）。在四膜虫中，前体TRNA 的切除和（）的拼接是通过（）机制进行的。--类型：填空题 --答案：前体分子；加工；内含子；外显子；5’；3’；CCA；内含子；外显子；自动催化 Rnase P 是一种（），含有（）作为它的活性部位，这种酶在（）序列的（）切割（）。--类型：填空题 --答案：内切核酸酶；RNA；tRNA；5’端；前体RNA C0t1/2实验测定的是（）。--类型：填空题 --答案：41 RNA的复性程度 假定摆动假说是正确的，那么最少需要（）种TRNA来翻译61种氨基酸密码子。--类型：填空题 --答案：32 写出两种合成后不被切割或拼接的RNA：（）和（）。--类型：填空题 --答案：.真核生物中的5SrRNA；原核生物中的mRNA 原核细胞信使RNA含有几个其功能所必需的特征区段，它们是：( ) --类型：选择题--选择：(a)启动子，SD序列，起始密码子，终止密码子，茎环结构(b)启动子，转录起始位点，前导序列，由顺反子间区序列隔开的SD序列和ORF 尾部序列，茎环结构(c)转录起始位点，尾部序列，由顺反子间区序列隔开的SD序列和0RF，茎环结构(d)转录起始位点，前导序列，由顺反子间区序列隔开的SD序列和0RF，局部序列 --答案：d
分子生物学试题
分子生物学试题 一、名词解释 1、基因：能够表达和产生蛋白质和RNA的DNA序列，是决定遗传性状的功能单位。 2、基因组：细胞或生物体的一套完整单倍体的遗传物质的总和。 3、端粒：以线性染色体形式存在的真核基因组DNA末端都有一种特殊的结构叫端粒。该结构是一段DNA序列和蛋白质形成的一种复合体，仅在真核细胞染色体末端存在。 4、操纵子：是指数个功能上相关的结构基因串联在一起，构成信息区，连同其上游的调控区（包括启动子和操纵基因）以及下游的转录终止信号所构成的基因表达单位，所转录的RNA 为多顺反子。 5、顺式作用元件：是指那些与结构基因表达调控相关、能够被基因调控蛋白特异性识别和结合的特异DNA序列。包括启动子、上游启动子元件、增强子、加尾信号和一些反应元件等。 6、反式作用因子：是指真核细胞内含有的大量可以通过直接或间接结合顺式作用元件而调节基因转录活性的蛋白质因子。 7、启动子：是RNA聚合酶特异性识别和结合的DNA序列。 8、增强子：位于真核基因中远离转录起始点，能明显增强启动子转录效率的特殊DNA序列。它可位于被增强的转录基因的上游或下游，也可相距靶基因较远。 9、基因表达：是指生物基因组中结构基因所携带的遗传信息经过转录、翻译等一系列过程，合成特定的蛋白质，进而发挥其特定的生物学功能和生物学效应的全过程。 10、信息分子：调节细胞生命活动的化学物质。其中由细胞分泌的调节靶细胞生命活动的化学物质称为细胞间信息分子；而在细胞内传递信息调控信号的化学物质称为细胞内信息分子。11、受体：是存在于靶细胞膜上或细胞内能特异识别生物活性分子并与之结合，进而发生生物学效应的的特殊蛋白质。 12、分子克隆：在体外对DNA分子按照即定目的和方案进行人工重组，将重组分子导入合适宿主，使其在宿主中扩增和繁殖，以获得该DNA分子的大量拷贝。 13、蛋白激酶：是指能够将磷酸集团从磷酸供体分子转移到底物蛋白的氨基酸受体上的一大类酶。 14、蛋白磷酸酶：是具有催化已经磷酸化的蛋白质分子发生去磷酸化反应的一类酶分子，与蛋白激酶相对应存在，共同构成了磷酸化和去磷酸化这一重要的蛋白质活性的开关系统。 15、基因工程：有目的的通过分子克隆技术，人为的操作改造基因，改变生物遗传性状的系列过程。 16、载体：能在连接酶的作用下和外源DNA片段连接并运送DNA分子进入受体细胞的DNA 分子。 17、转化：指质粒DNA或以它为载体构建的重组DNA导入细菌的过程。 18、感染：以噬菌体、粘性质粒和真核细胞病毒为载体的重组DNA分子，在体外经过包装成具有感染能力的病毒或噬菌体颗粒，才能感染适当的细胞，并在细胞内扩增。 19、转导：指以噬菌体为载体，在细菌之间转移DNA的过程，有时也指在真核细胞之间通过逆转录病毒转移和获得细胞DNA的过程。 20、转染：指病毒或以它为载体构建的重组子导入真核细胞的过程。 21、 DNA变性：在物理或化学因素的作用下，导致两条DNA链之间的氢键断裂，而核酸分子中的所有共价键则不受影响。 22、 DNA复性：当促使变性的因素解除后，两条DNA链又可以通过碱基互补配对结合形成DNA 双螺旋结构。 23、退火：指将温度降至引物的TM值左右或以下，引物与DNA摸板互补区域结合形成杂交
分子生物学复习题及其答案
一、名词解释 1、广义分子生物学：在分子水平上研究生命本质的科学，其研究对象是生物大分子的结构和功能。2 2、狭义分子生物学：即核酸（基因）的分子生物学，研究基因的结构和功能、复制、转录、翻译、表达调控、重组、修复等过程，以及其中涉及到与过程相关的蛋白质和酶的结构与功能 3、基因：遗传信息的基本单位。编码蛋白质或RNA等具有特定功能产物的遗传信息的基本单位，是染色体或基因组的一段DNA序列(对以RNA作为遗传信息载体的RNA病毒而言则是RNA序列)。 4、基因：基因是含有特定遗传信息的一段核苷酸序列，包含产生一条多肽链或功能RNA 所必需的全部核苷酸序列。 5、功能基因组学：是依附于对DNA序列的了解，应用基因组学的知识和工具去了解影响发育和整个生物体的特定序列表达谱。 6、蛋白质组学：是以蛋白质组为研究对象，研究细胞内所有蛋白质及其动态变化规律的科学。 7、生物信息学：对DNA和蛋白质序列资料中各种类型信息进行识别、存储、分析、模拟和转输 8、蛋白质组：指的是由一个基因组表达的全部蛋白质 9、功能蛋白质组学：是指研究在特定时间、特定环境和实验条件下细胞内表达的全部蛋白质。 10、单细胞蛋白：也叫微生物蛋白，它是用许多工农业废料及石油废料人工培养的微生物菌体。因而，单细胞蛋白不是一种纯蛋白质，而是由蛋白质、脂肪、碳水化合物、核酸及不是蛋白质的含氮化合物、维生素和无机化合物等混合物组成的细胞质团。 11、基因组：指生物体或细胞一套完整单倍体的遗传物质总和。 12、C值：指生物单倍体基因组的全部DNA的含量，单位以pg或Mb表示。 13、C值矛盾：C值和生物结构或组成的复杂性不一致的现象。 14、重叠基因：共有同一段DNA序列的两个或多个基因。 15、基因重叠：同一段核酸序列参与了不同基因编码的现象。 16、单拷贝序列：单拷贝顺序在单倍体基因组中只出现一次，因而复性速度很慢。单拷贝顺序中储存了巨大的遗传信息，编码各种不同功能的蛋白质。 17、低度重复序列：低度重复序列是指在基因组中含有2～10个拷贝的序列 18、中度重复序列：中度重复序列大致指在真核基因组中重复数十至数万（<105）次的重复顺序。其复性速度快于单拷贝顺序，但慢于高度重复顺序。 19、高度重复序列：基因组中有数千个到几百万个拷贝的DNA序列。这些重复序列的长度为6~200碱基对。 20、基因家族：真核生物基因组中来源相同、结构相似、功能相关的一组基因，可能由某一共同祖先基因经重复和突变产生。 21、基因簇：基因家族的各成员紧密成簇排列成大段的串联重复单位，定位于染色体的特殊区域。 22、超基因家族：由基因家族和单基因组成的大基因家族，各成员序列同源性低，但编码的产物功能相似。如免疫球蛋白家族。 23、假基因：一种类似于基因序列，其核苷酸序列同其相应的正常功能基因基本相同、但却不能合成功能蛋白的失活基因。 24、复制：是指以原来DNA（母链）为模板合成新DNA（子链）的过程。或生物体以DNA/RNA
2013-2014现代文理学院分子生物学章节练习题第4章练习题
第四章生物信息的传递下-从mRNA到蛋白质 练习题 一、选择题【单选题】 1．下列氨基酸活化的叙述哪项是错误的 A.活化的部位是氨基酸的α-羧基 B.活化的部位是氨基酸的α-氨基， C.活化后的形式是氨基酰-tRNA D.活化的酶是氨基酰-tRNA合成酶 E.氨基酰tRNA既是活化形式又是运输形式 2．氨基酰tRNA的3’末端腺苷酸与氨基酸相连的基团是 A.1’-OH B.2’-磷酸 C.2’-OH D. 3’-OH， E.3’-磷酸 5．代表氨基酸的密码子是 A.UGA B.UAG C.UAA D.UGG E.UGA和UAG 6．蛋白质生物合成中多肽链的氨基酸排列顺序取决于 A.相应tRNA专一性 B.相应氨基酰tRNA合成酶的专一性 C.相应mRNA中核苷酸排列顺序 D.相应tRNA上的反密码子 E.相应rRNA的专一性 9．能出现在蛋白质分子中的氨基酸哪一种没有遗传密码 A.色氨酸 B.甲硫氨酸 C.羟脯氨酸 D.谷氨酰胺 E.组氨酸 11．下述原核生物蛋白质翻译特点错误的是 A.翻译与转录偶联进行 B.各种RNA中mRNA半寿期最短 C.起始阶段需A TP D.有三种释放因子分别起作用 E.合成场所为70S核糖体 18．氨基酰-tRNA合成酶的特点是 A.存在于细胞核内 B.只对氨基酸的识别有专一性 C.只对tRNA的识别有专一性 D.催化反应需GTP E.对氨基酸、tRNA的识别都有专一性 23．蛋白质合成时肽链合成终止的原因是 A.已达到mRNA分子的尽头 B.特异的tRNA识别终止密码子 C.释放因子能识别终止密码子并进入A位 D.终止密码子本身具酯酶作用，可水解肽酰基与tRNA之间的酯键 E.终止密码子部位有较大阻力，核糖体无法沿mRNA移动24．下列关于翻译的描述错误的是 A.氨基酸必须活化成活性氨基酸 B.氨基酸的羧基端被活化 C.活化的氨基酸被搬运到核糖体上 D.体内所有的氨基酸都有相应的密码 E.tRNA的反密码子与mRNA上的密码子按碱基配对原则反向结合 1、单项选择题参考答案及解析： 1．B 2．D 3．C 信号肽是指用于指导蛋白质的跨膜转移（定位）的N-末端的氨基酸序列（有时不一定在N端） 一般由15～30个氨基酸组成。包括三个区：一个带正电的N末端，称为碱性氨基末端：一个中间疏水序列．以中性氨基酸为主，能够形成一段d 螺旋结构，它是信号肽的主要功能区；一个较长的带负电荷的C末端，含小分子氨基酸，是信号序列切割位点．也称加工区。当信号肽序列合成后，被信号识别颗粒(SRP)所识别，蛋白质合成暂停或减缓，信号识别颗粒将核糖体携带至内质网上4．D 5．D 解析：mRNA分子中共有64个密码，其中61个代表20种氨基酸，有一个起始密码－AUG（在蛋白质生物合成的起始阶段，即代表蛋白质合成的起始，也是蛋氨酸的密码），3个终止密码－UAA、UAG及UGA，所以答案A、B、C、E均为终止密码，只有答案D是代表氨基酸（色氨酸）的密码。6．C 7．E 8．B 用排除法9．C 10．B 11．C 翻译起始阶段需要GTP供能，而活化阶段是ATP供能12．C解析：能引起合成中的肽链过早脱落终止其合成的是嘌呤霉素，其作用机理是：嘌呤霉素的结构与酪氨酰-tRNA（Tyr-tRNAtyr）相似，可取代一些氨基酰-tRNA进入核糖体A位。当延长中的肽链进行移位时，肽链移入A位非正常氨基上时，易脱落，使肽链合成提前终止。氯霉素是与大亚基结合，抑制原核生物肽链延长过程；四环素族抑制氨基酰-tRNA与原核生物核蛋白体结合，抑制其蛋白质生物合成；链霉素是与原核生物小亚基结合，引起读码错误，使毒素类的细菌蛋白异常而失活；放线菌酮仅抑制真核生物转肽酶活性，抑制蛋白质合成。13．C page141，因为A位是进位的，任何新掺入的氨基酸都要在A位上，随后新生的链转移到P位，因为这样上一个tRNA才能被释放，空载之后去携带下一个同类氨基酸14．A 15．C 16．D 17．C 18．E 19．D 20．E 见page136，释放因子有两类三种，其中第一类是识别终止密码子的，而第二类是刺激第一类释放的21．D 22．A 23．C 24．D稀有氨基酸(Rare amino acid)存在于蛋白质中的20种常见氨基酸以外的其它罕见氨基酸，它们没有对应的遗传密码，都是在肽链合成后由相应的常见的氨基酸经过化学修饰衍生而来的氨基酸。蛋白质的稀有氨基酸中，4-羟基脯氨酸和5-羟基赖氨酸是两个重要的氨基酸，它们是胶原蛋白的重要组成成分，而胶原蛋白是哺乳动物体内最丰富的蛋白质。此外，与核酸形成复合物的蛋白某些稀有氨基酸质中的往往含有被修饰的氨基酸。例如，染色体上的组蛋白(histone)中含有被甲基化、乙酰化或磷酸化的氨基酸。N-甲酰甲硫氨酸(N-formylmethionine)是所有原核生物的蛋白质合成时N端的起始氨基酸。25．E 26．A见page133图4-17 27．B解析：蛋白质合成过程中，当mRNA上出现终止密码（UAA、UAG、UGA）时蛋白质合成终止，mRNA第142号密码UGA为终止密码，所以多肽链含有141个氨基酸。28．D 解析：遗传密码具有通用性，所以蛋白质生物合成的起始密码都是AUG，同时也为Met编码。原核生物的起始密码只能辨认甲酰化的蛋氨酸（N-甲酰蛋氨酸）。所以大肠杆菌中初合成的各种多肽链N 端第一个氨基酸是N-甲酰蛋氨酸 29.C30.D 31.B 32.B33.D 注意方向5-3.34.D 35.C 36.B 37.A 38.B 二、不定项选择题【至少两个正确选项的选择题】4．肽链的一级结构修饰： A. N-端修饰 B.个别氨基酸共价修饰， C.肽链水解修饰 D.辅基连接 E.亚基聚合5．tRNA反密码中除有AUGC外，常含有I，它可与密码中哪些碱基配对 A.U B.C C.A D.G E.T 6．下述关于翻译过程正确的是 A.氨基酸随机地结合在tRNA上 B.多肽链的合成是从羧基端向氨基端延伸 C.mRNA沿着核糖体移动 D.生长中的多肽链最初是连结在tRNA上 E.内质网是蛋白质合成场所 10．遗传密码的简并性指的是 A.一些三联体密码子可缺少一个嘌呤碱或嘧啶碱 B.密码子中有许多稀有碱基 C.大多数氨基酸有一组以上的密码子 D.一些密码子适用于一种以上的氨基酸 E.不同种属的生物中都相同，在翻译中可表现为某些密码优先使用特性， 18．肽链合成后的加工包括 A.切除肽链起始端的(甲酰)蛋氨酸残基 B.切除部分肽段 C.二硫键的形成 D.某些氨基酸的羟化、磷酸化 E.连接糖链 19．氨基酰-tRNA合成酶的作用是 A.使氨基酸活化 B.对氨基酸的识别无专一性，对tRNA的识别有专一性 C.促使相应的tRNA与活化氨基酸连接 D.精氨酸可由6种tRNA携带，因此要求有6种氨基酰-tRNA 合成酶催化 E.氨基酰-tRNA合成酶有校正活性 二、【不定项选择题参考答案】 1．AC AC位于N端，疏水特征是为了与膜结合2．ABC 3．BD 4．ABC 5．ABC 见page114图4-4. 6．CD 解释：新加入的氨基酸7．ACDE解析：原核生物翻译与转录无核膜间隔，均在胞质，所以是边转录边翻译，