药理学实验方法
药理学实验方法
药理学实验方法
第－讲实验动物的选择
在药理学实验中，要根据实验目的，选择不同动物，常用动物有：
１、青蛙和蟾蜍
心脏（离体、在体）实验, 制备坐骨Ｎ－腓肠标本等。
２、小白鼠：
药物初筛：镇痛、耐缺氧、抗肿瘤药物、LD５０测定、避孕药实验等。
３、大白鼠：
抗炎作用，大白鼠踝关节肿胀实验，血压测量，胆管插管等。
长期性毒性试验。
４、豚鼠：
对组胺敏感，并易于致敏，常用抗过敏药（平喘药、抗组胺药）实验。离体心房、心脏、肠管实验等。
豚鼠对结核菌也敏感，也用于抗结核病药物实验。
5、兔：
家兔易得，驯服，便于静脉注射和灌胃，常用于观察药物对心脏的作用和对CNS 的作用。
又由于其体温变化较敏感，也常用于体温实验及热原检查。
家兔也常用于避孕药实验。
6、猫：
猫的血压比较稳定，具有咳咳嗽反射和呕吐动作。因而常用于心血管药物实验和镇咳药、镇吐药实验。
7、狗：
狗的血压比较稳定，常用于降压药、升压药和抗休克药实验。
狗比较容易驯服，最适用于慢性实验。手术造瘘（胃、肠）以便观察药物对胃肠蠕动和分泌的影响。
此外，长期毒性实验也常用狗来进行。
* 附:给药途径及剂量限制
1. 小白鼠
（1）灌畏法:0.1～0.25ml／10g体重。
（2）皮下注射：0.1～0.3ml／10g体重。
（3）肌肉注射：0.2ml／每侧。
（4）腔注射：0.1～0.25ml／10g体重。
（5）静脉注射：0.05～0.1ml／10g体重。
1.大白鼠
（1）灌畏法:2.0ml／10og体重。<3.0ml/只。
（2）腔注射：0.1～0.25ml／10g体重。
第二讲实验动物的麻醉和处死
一、各种实验动物的麻醉药物和麻醉方法
1
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1、乙醚
乙醚为挥发性麻醉药。常用于小动物（小鼠）的麻醉。使用方法有：开放发和封闭法。
2、戊巴比妥钠
戊巴比妥钠的作用稳定、麻醉持续时间中等(一次给药可维持作用2～4 hr)，一般实验均可使用。
常用其3% 溶液。
各种动物所用剂量如下：
狗：30mg/kg，iv
猫、兔：30～40mg/kg，iv或ip
大鼠、小鼠：40～50mg/kg，ip
3、乌拉坦
乌拉坦的作用较弱，对呼吸的抑制作用小是其优点。是动物实验常用的麻醉药。
各种动物所用剂量如下：
家兔、大鼠：1.0～1.5 g/kg，iv或ip
4、氯醛糖
氯醛糖对血压和神经反射影响较小，适用于心血管实验。
但其溶解度小，常用浓度为1% 。
动物所用剂量如下：
狗、猫：80～100mg./kg，iv或ip。常与戊巴比妥钠或乌拉坦合用，合用时应减
少剂量。
二、动物的处死
（一）乙醚吸入法
小鼠、大鼠：吸入乙醚后20～30秒钟进入麻醉壮态，3～5分钟死亡。
鸽、猫等较大动物也可用次法处死。
但需注意以下两点：
1·当用次法处死豚鼠时，脑和肺部可出现小出血点，在进行病理解
剖时要特别注意。
2·焚烧动物尸体时要注意防止火灾发生。
(二) 二氧化碳吸入法
可将动物装入减压干燥器或塑料袋内，通以CO2，可在本30秒～3分钟内杀死动物。
豚鼠、猫、鸽等均可用此法处死。
（三）注射麻醉法
常用药物为巴比妥钠，各种动物所需剂量如下：
鸽：100mg/kg，ip。
猫：60～120mg/kg，iv或ip。
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狗：100mg/kg，iv。
兔：75～100mg/kg，iv。
（四）颈椎脱臼法
此法常用于小白鼠的处死。
（五）空气栓塞法
将空气注入静脉或心腔内造成栓塞。各种动物所需剂量如下：
兔、猫：10～20ml/只。
狗：70～150ml/只。
（六）心脏取血法
豚鼠、猴可用此法。
（七）大量放血法
兔、猫、猴、狗等可用此法。
（八）电击法
220 V交流电，接上粗针头，一头插入颈部皮下，一头插入腰部皮下，通以电流。
第三讲药理学实验设计
第一节药理学实验设计的基本要求
实验设计的三大原则──重复，随机，对照。
（一）重复
影响因素设法控制：
1、动物：品种、体重、年令、性别、饲养条件。……
2、药物：批号、纯度、剂量、注射容量、速度。……
3、仪器：灵敏度、精确度、电压稳定性。……
4、其它：室温、气压、季节、上、下午。……
条件控制越严格，重复性越高，但样品的代表性越差，这是一个不可避免的矛盾。一般先严后松，逐渐扩大实验范围。
（二）随机
随机分组的目的，使各组间不受主观因素的影响，方法：编号抽签或随机数字表法。目前主张“均衡下的随机”，即先将主要因素（体重，性别等）均衡归类分档，再将难控制的因素（活泼程度饥饱程度疲劳程度性周期……）随机安排。
（三）对照
1、阴性对照（空白对照）──N.S.
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2、阳性对照（标准品组），目的是查明：
（1）实验条件是不是发生了改变。
（2）判断和对比试药的作用。
注意：
（1）同时，同地，同条件下进行对照。
（2）统计学指出：实验组与对照组例数相等时最节省动物。因此，对照组使用较少动物是不妥当的。
第二节预试与筛选
（一）预试
目的：了解各种因素对实验的影响，找出最适当的用药计量，最适实验条件（温度，刺激强度，营养液配方……）。为正式实验提供必要的准备。
应注意的问题：
1.实验的稳定性：用变异系数衡量。
S
变异系数CV= ──
X
变异系数越小，可重复性越强。
列如：
某降压药降压结果为:30 ± 5 mm Hg (猫)
25 ± 9 mm Hg (兔)
变异系数CV(猫)= 5/30 =16.7%
CV(兔) = 9/25 = 36%
因此,做降压药实验用猫较兔为好。
2 .实验灵敏性：用因变系数衡量。
E2－E1
因变系数CI = ────────，
log D2 －log D1
可反映出实验的灵敏度。
D1’ D2为两个不同剂量。
E1 E2为两个不同反应强度。
例如，某利尿药水负荷实验结果如下表：
负荷水种类
生理盐水 2.0 mg/kg 12.4 ml
(A) 4.0mg/kg 19.6 ml
自来水 2.0mg/kg 15.6 ml
(B) 4.0mg/kg 20.9 ml
4
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19.6 – 12.4
CI A = = 23.9
log 4 – log 2
20.9 – 15.6
CI B = = 17.6
log 4 – log 2
从以上实验结果应可以看出，本实验应该使用生理盐水作负荷剂。
（二）筛选
是在预试或以往经验的基础上，用少量动物对多种药物进行实验。筛选常在已知反应率的基础上进行，一般以P〈0.1作为筛选合格的标准。
1、保护实验：
筛选解毒药时，将解毒药+毒物量（LD50），如连用4只动物均不死亡，表明该药有一定解毒作用（P < 0.1）,如一只死亡，再加三只，如三只均无
死亡，也认为筛选合格。总之，死亡率为0/4、1/7、2/9、3/12、4/14时都可
认为合格（P < 0.1）。
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2. 阳性率判别实验：
筛选实验结果阳性率判别（%）筛选实验结果阳性率判别（%）
0/2 1/4 2/6 〈70 2/2 3/4 4/6 〉30
0/3 1/5 2/7 〈60 3/3 4/5 5/7 〉40
0/4 1/7 2/9 〈50 4/4 6/7 7/9 〉50
0/5 1/9 2/12 〈40 5/5 8/9 10/12 〉60
0/6 1/11 2/15 〈32 6/6 10/11 13/15 〉68
0/7 1/12 2/16 〈30 7/7 1/12 14/16 〉70
例如：欲筛选疗效在先60%以上药物，如
连续3只均无效，该药即可筛弃，如连续5只均有效，筛选合格。错误筛选率〈10%。
第3节实验设计中样本数问题
(一) 一般情况下选取的样本数：
（1）小动物（小鼠、大鼠、鱼、蛙）：每组10～30例，计量资料每组不少于10例，计数资料每组不少于30例。
（2）中等动物（兔、豚鼠）：每组8～12例。计量资料每组不少于6例，计数资料每组不少于20例。
（3）大动物（犬、猫、猴、羊）：每组5～15例。
（二）按统计学原则测算样本数量（达到P < 0.05）
(1)两组均数对比（计量资料）
s
95% 把握时，N = 26 (--------------- )2 + 1.4
x1 - x2
S
90% 把握时，N = 21 (--------------- )2 + 1.5
x1 - x2
S
80%把握时,N=15.6(------------------)2+1.6
X1- X2
N为每组估计例数,总例数为2N。
X1-X2为原均数之差(预试所得结果)。
S为原来两组总标准差。
（N1-1）S12+（N2-1）S22
──────────────
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药理学实验方法
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S = N 1 + N 2 - 1
S 1 + S 2 或近似为：S ? ------------- 2 例如某次预试，每组用10只动物，所得结果为 :
甲组
X
± S = 23.8±8.8, 乙组
X
± S = 18.8 ± 6.4。 按80%把握,要p<0.05效果,问各组应该用多少
例?
解: X 1 - X 2 = 23.8 - 18.8 = 5
8.8 + 6.4
S = -------------------------- = 7.6 2
7.6
N = 15.6 ( -------------------- )2 + 1.6 = 37.6 5
即,每组38例,共76例。
（2） 计数资料（百分率为指标）对比
1 -（p 1 + p
2 - 1）2
N = R × ( p 1 - p 2)2 R 值可查表：
质反应两组对比R 值
把握度 80% 90% 95% p = 0.05 3.92 5.25 6.52
P = 0.01 5.86 7.45 8.95
如要求把握度为80%，达到P 〈0.05 水平 , R = 3.92
例如: 已知A 药平喘率为90%, B 药平喘率为60% , 欲求80% 把握， 取P<0.05水平,求每组样本数。
P 1 = 0.9 P 2 = 0.6
1 - ( 0.9 + 0.6 - 1)2
N (80, 0.05) = 3.92×------------------------- = 32.7 ? 33例
(0.9- 0.6 )2
药理学实验方法
每组33例,两组共66例。
第4节优选法设计
优选法是一种快速的选择最优条件的方法。
例如，欲选择某实验的最优水浴温度（以三次反应误差率最小为优选指标），方法如下：
1·先规定最高，最低范围（a，b），并计算x1，x2两点。
x1 = a + 0.618 ×(b - a)
x2 = a + b - x1
设 a = 24℃, b = 45 ℃
x1 = 24 + 0.618 ×( 45 - 24 ) = 37 ℃
x2 = 24 +45 - 37 = 32 ℃
现用37 ℃和32 ℃分别进行试验，如果试验结果37 ℃比32 ℃好，下一步：
2·分步选择x i点：
效果最好者为中点M
大于中点的较高点为H
小于中点的较低点为L
下次应试的x i点：x i = H - M + L
上例37 ℃比32 ℃好，则M = 37，H = 45，L = 32
x3 = 45 - 37 + 32 = 40 ℃
此时应40 ℃和37 ℃再试,如试验结果40 ℃不如37 ℃，仍以
37 ℃为M点。
x 4 : M = 37, H = 40, L = 32
x 4 = 40 - 37 + 32 = 35 ℃
此时应35 ℃和37 ℃再试,如试验结果35 ℃不如37 ℃，仍以37℃为M点。
x5 = 40 - 37 +35 = 38 ℃
此时应38 ℃和37 ℃再试,如试验结果38℃优于37℃,则以38℃为M点。
x6 = 40 - 38 + 37 = 39℃
如果再试39 ℃不如38 ℃，此例最优温度应为此38 ℃左右，可取38 ±0.5 ℃开始正式实验。
第五节质反应序贯实验设计
序贯图法（开放型）：
凭经验或予试结果先规定有效与无效指标水平。要想实验某药是否具有抗吐作用，其具体步骤如下：
规定抗吐率（P0）〈30% 为无效，抗吐率（P1）〉60% 为有效。并保证：
作出阳性结论时假阳性率α为0.05;
作出阴性结论时假阴性率β为0.05。
定出两个直线方程：
U : Y = a + bx L : Y = －a + bx
查表1，a = 2.35, b = 0.45
U:Y = 2.35 +0.45 x
L:Y= －2.35 + 0.45 x A
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第6节实验中的剂量设计
（一）剂量的选择
1. 进行药效对比时,一般选择中效剂量。
2. 进行解毒实验或拮抗实验时，剂量应偏高些。
3. 进行协同作用实验时，剂量应偏低些。
4. 探索最适剂量时，应由小大：
（1）离体器官实验一般按3倍或10倍递增。
例如：
stock solution organ bath final conc.
5 μl of 10－
6 M 5 ml 10－9 M
+ 10 μl of 10－6 M 5 ml 3×10－9 M + 3.5 μl of 10－5 M 5 ml 10－8 M
+ 10 μl of 10－5 M 5 ml 3×10－8 M
+ 3.5 μl of 10－4M 5 ml 10－7 M
+ 10 μl of 10－4 M 5 ml 3×10－7 M
+ 3.5 μl of 10－3 M 5 ml 10－6 M
+ 10 μl of 10－3 M 5 ml 3×10－6 M
……………… 5 ml …………
(2) 整体动物实验剂量按2倍或√10 = 3.16倍递增。
** 只少4个剂量。
3×10-8 mol Ach/L 0.1 ml 1×10-11 mol Ach/L
+ 3×10-8 mol Ach/L 0.2 ml 3×10-11 mol Ach/L
+ 3×10-7 mol Ach/L 0.07 ml 1×10-10 mol Ach/L
+ 3×10-7 mol Ach/L 0.2 ml 3×10-10 mol Ach/L
+3×10-6 mol Ach/L 0.07 ml 1×10-9 mol Ach/L
+3×10-6 mol Ach/L 0.2 ml 3×10-9 mol Ach/L
(二) 动物间剂量换算
动物间剂量换可按下面公式进行：
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药理学实验方法
R B W A
d B= d A××( )1/3
R A W B
d A. d B为A.B两种动物每公斤体重剂量( mg/kg )。
W A.W B为动物体重(kg)值。
R A. R B为动物体重系数(R与体表面积(M2)/体重(kg)的2/3次方成正比。可由下表查到：动物种类小鼠大鼠豚鼠兔猫猴犬人
体重系数59 90 99 93 82 111 104 100
（R）
例1 已知20 g 小鼠需用3.2 mg , 求12 kg及20 kg的犬各需用多少mg ?
d A. = 3.2 mg /0.02 kg = 160 mg/kg , 查表R A.= 59, R B = 104.
W A.= 0.02 kg , W B = 12 kg (20 kg),代入公式:
104 0.02
d B12 = 160 ××( )1/3 = 33.4 mg/kg
59 12
104 0.02
d B20 = 160 ××( ) 1/3= 28.2 mg/kg
59 20
例2 已知12 kg成年家犬需用剂量为33.mg/kg, 求4 kg幼犬和20 kg大犬所需的剂量?
d A. = 33 mg/kg , R A. = R B = 104 ,W A.= 12 kg, .W B = 4(20) kg
d B4 = 33 ×104/104 ×(12/4 )1/3 = 47.6 mg/kg
d B20 =33 ×104/104 ×(12/20)1/3 = 27.8 mg/kg
人和动物间按体表面积折算的等效剂量比值表
10
11
第四讲 毒性试验
一·急性毒性（50% Lethal Dose ，LD 50）试验 （一）定义：引起一半实验动物死亡的药物剂量。
（二）意义：LD 50反映药物毒性大小的指标。该指标即准确又具有代表性。 （三）测定LD 50的原理
质反应的量效曲线的几种形式。
真数剂量
Log LD 50 对数剂量
从对数剂量与死亡频数的正态分布中可知, LgLD 50一半, 因在正态分布中, 横轴中点恰是均数所在处, 所以LgLD 50的平均值（即真数剂量的几何平均值）。
从对数剂量与死亡率关系的正S 型曲线中可知, LgLD 50恰为S 型曲线中点所对应的横轴上的对数值, 因此S 型曲线中点所对应的纵轴(死亡率)恰为50% 。
据此，如果求出正态曲线横轴中点的对数值或正S 型曲线中点 所对应的横轴上的对数值, 即为LgLD 50。
· 测定LD 50就是测定平均最小致死量。
死亡频数
死亡频数
死亡率
死亡率
真数剂量
药理学实验方法
例如：
鼠号 1 2 3 4
最小致死量 5 6 7 8
（mg）
X= （5+6+7+8）÷4 = 6.5 mg
如果给予6.5mg, 1、2号鼠死亡; 3、4号鼠存活。6.5mg既是平均最小致死量又是半数致死量。
看起来测定半数致死量似乎很简单，其实则不然。因为，对于大多数药物来说，要想准确测出最小致死量是不可能的，这是因为除了洋地黄等极少数药物外，绝大多数药物都不能使动物立即死亡。但我们可以将动物分成若干组，每组给予不同剂量，观察一段时间后记录各组死亡数，用适当的公式可以计算出半数致死量。为了把要测定的LD50值包括在内，一般各组间剂量之差按等比级数给予。
要计算几个等比数量的均数，不能用求算数均数的方法进行，必须求其几何均数，即对数剂量的算数均数。请看下列一组数据：
x1x2x3x4
1 10 100 1000
1+10+100+1000
算数均数= = 277.75
4
这显然不能作为半数致死量。
4
几何均数= 1 ×10×100×1000 = 31.62
Lg1 + Lg10 + Lg100 + Lg1000
4
= 1.5
反对数101.5 = 31.62
如将此量给予上述动物, 刚好有两只死亡, 两只存活，为LD50。
（四）测定方法
LD50的测定方法很多，最常用的是寇氏法。
1·计算方法：
计算公式：Lg LD50 = X K－d （∑Pi －0.5）
X K……P = 100%组的对数剂量。
d………对数组间距。
Pi …….各组死亡率。
2．条件：
（１）组间剂量等比。
（２）各组动物数相等。
（３）最小剂量组死亡率（Pn）= 0%；最大剂量组死亡率（Pm）= 100% 。如果Pn > 20%，或Pm < 80%则不能使用此法。
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药理学实验方法
（五）测定LD 50应注意的问题
1·分组的随机性：各组动物在性别、体重、等要保证均匀一致性。
2·动物及数量：常用小鼠，体重20±2g ，雌雄均可。正式实验每组10～20只。
3·剂量应按几何级数排列：临近两组剂量比一般为1：0.7～0.85。测定新药时先将剂距加大（1：0.3～0.5）,初步找出死亡率为0%和100%的剂量。
4·给药途经：以IV. IP. PO.为主。其中必须包括临床推荐给药途径。 5·容量限制：不管哪种途径给药，小白鼠的给药容量不能超过0.2ml/10g 。灌胃以不超过0.3 ml/10g 为限。
6·观察时间：动物一般在两日内死亡，但应观察7天。同时记录其他反应。 （六）等比溶液的配制
1。相邻两组剂量比为1：r ，如r = 0.85
2．设每组所用药液总量为d, 如每组10只小鼠, 每鼠注射药液0.5 ml , 共需5ml ，为留有余地，并使d 能被1- r 正除，可取d = 6 ml 。
3．设上限组（1号液）浓度为C ，整个实验所需浓度为C 的药液总量为D ，则：
ml X r
D 4011
=?-=
4．取出d 量(6ml)为1号液, 余量加水d 至D, 再取d 量为2号液。 5．余量加水d 至D, 再取d 量为3号液。 6．余量加水d 至D, 再取d 量为4号液。 7．余量加水d 至D, 再取d 量为5号液。 8．……………………..，……………………..
计算LD 50公式的来源（Karber 氏法）
∑∑--=+?-=+)5.0()(2
1
150i K i i K P d X p P d X LogLD
药理学实验方法
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d
上图横坐标为对数剂量[x], 纵坐标为死亡率（P ），G 为正S 形曲线中点，它对应的纵坐标H 点P = 50%(0.5)，横坐标的F 点X = LgLD 50；A 点P = 0， D 点P = 1，B 点Xk 为P = 100%时的对数剂量，由图可知：：
矩形AFED = AF . AD = LgLD 50 × 1 = LgLD 50
曲边△X i FG = GCE （三边对应相等） ∴矩形AFED = 曲边形AX i CD = LgLD 50
则LgLD 50 = 矩形AX K CD － 曲边形X i X K C 1
曲边形X 1X K C = d ∑ （p i ＋ p i +1）------相当于多个梯形面积的总和。 2
又矩形AX K CD = AX K . AD = X K × 1 = X K 1
∴LgLD 50 = X K － d ∑ （ p i + p i + 1 ） 2
上述推导过程可用直观图形表示:
LgLD 50 = ＝
＝ －
公式的演变
1
LgLD 50 = X K －d ∑(P i ＋P i ＋1) 2
1
= X K － d ［（P 1＋P 2） ＋（P 2 ＋P 3） ＋…（P K - 2+ P k – 1）+（P k - 1+ P k ）］ 2
1
= X K － d ［P 1＋P 2 ＋P 2 ＋P 3 ＋…P K －2+ P k － 1+P k － 1+ P k ］ 2
1
= X K － d ［2∑P i －（P 1 ＋P k ）］ 2
= X K －d （∑p i － 0.5）
P 1 = 0%；P k = 100%（1.0）
LD 50简化测定方法
计算公式:
)5(150d
D
Log a A a Logd Log LD ?--+
=-
药理学实验方法
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●
D……高剂量组剂量 (mg, g/kg). ● d…….低剂量组剂量 (mg, g/kg). ● A…….高剂量组死亡率的机率单位. ● a…….低剂量组死亡率的机率单位.
例如, 用灌胃法测定某药的LD 50, 结果如下：
高剂量（D=120mg/kg ）组， 死17只， 活3只，死亡率 = 85%，查表, 机率单位A = 6.03; 低剂量（d=100mg/kg ）组， 死8只， 活12只，死亡率 = 40%，查表, 机率单位a = 4.75;
kg mg Log Log Log LD /12.103)100
120
75.403.675.45100(150=?--+
=-
附：中草药毒性实验
由于中草药毒性低，有部分中草药的LD 50不能测出，常测其最大耐受量。
本法取体重18～22g 的健康小鼠，雌雄各半，随机分几组，每组动物灌服不同浓度的受试药物一次，每只0.5ml ，观察7天内动物的中毒反应或有无死亡。以死亡为主要观察指标。如有死亡，则以刚不出现死亡组为准，此时的用药量即为小鼠的最大耐受量。然后按公式计算出耐受量倍数。以耐受人用量口服100倍以上为安全。
计算公式如下：
成人每日用量
）（成人平均体重）小鼠平均体重（毎只小鼠的耐受药量＝小鼠的最大耐受量倍数g 50000
20g ?
举例：升麻葛根汤，人的用量是45g/日，每只小鼠的耐受量为2.85 g, 小鼠的平均体重为20g, 观察7
天，无一只死亡。倍＝小鼠的最大耐受量倍数15845g
50000 20
85.2=?
如因受试药物的浓度或体积限制, 预计一次给药无法测出LD 50时, 可做一次或一日内最大耐受
量试验。既选用拟临床试验的给药途径，以动物能耐受的最大浓度、最大体积的药量一次或一日内2～3次给与动物。如用小鼠，不得少于20只，雌雄各半。要连续观察7天，并详细记录动物反应情况。
常用小白鼠进行实验，体重18～20g ，雌雄均可。也可用大白鼠、家兔、猫、狗等。每次5～10只，尾静脉或腹腔注射一定量药物，观察有无不良反应（惊厥、步态不稳、瘫痪、竖毛、呼吸抑制等）或死亡。连续观察24～48 h 。
例如，给20g 小鼠iv 柴胡注射液0.5 ml 不引起死亡，临床用量为2ml ，人的体重为50kg ，按体重计算小白鼠用量为人用量的625倍。
一般认为，小白鼠最大耐受量相当于人用量的100倍以上就比较安全，可以供临床应用。大部分中草药制剂都是相当安全的。
当归注射液为125倍；金银花注射液为375倍；柴胡注射液为625倍； * 中草药的提纯物毒性增强，都需测LD 50.
药理学实验方法16
药理实验指导
药理学实验指导
实验一药物的作用方式 【实验目的】理解药物的局部作用和全身作用，并了解兴奋作用、抑制作用及拮抗作用。 【实验原理】普鲁卡因为局部麻醉药，抑制中枢神经元，首先抑制对药物敏感的中枢抑制性神经，引起脱抑制而出现兴奋现象，表现为不安、震颤，甚至惊厥。而戊巴比妥钠为镇静催眠、抗惊厥药，随着药物剂量的增加，对中枢的抑制作用逐渐增强，分别产生镇静、催眠、麻醉和抗惊厥的作用。 【实验对象】小白鼠(体重20g左右) 【实验材料】 1．器材：1ml注射器、钟罩、镊子 2．药品：3%普鲁卡因溶液、0.5%戊巴比妥钠溶液 【实验步骤】 1．取小白鼠1只，称重标记，并观察一般活动情况及痛觉反应。 2．在小白鼠一后肢股骨粗隆下端坐骨神经周围，注射3%普鲁卡因溶液0.1ml/10g，随即观察小白鼠左右后肢的活动情况及全身情况。 3．待小白鼠抽搐明显时，立即腹腔注射0.5%戊巴比妥钠溶液0.1ml/10g并继续观察小白鼠全身情况。 4．填表 小白鼠用普鲁卡因后表现用戊巴比妥钠后表现 左后肢全身左后肢全身 【注意事项】 1．要求注射部位要正确。 2．注意抢救时间。 【思考题】 1．小白鼠的那些表现各属于局部、全身、兴奋、抑制和拮抗作用？ 2．本次试验队临床用药有何指导意义？
实验二药物剂量对药物作用的影响 【实验目的】掌握药物剂量与药物作用的关系 【实验原理】戊巴比妥钠为镇静催眠、抗惊厥药，随着药物剂量的增加，药物作用越明显，对中枢的抑制作用逐渐增强，分别产生镇静、催眠、麻醉和抗惊厥的作用。 【实验对象】小白鼠(体重20g左右) 【实验材料】 1．器材：1ml注射器、钟罩、镊子 2．药品：0.1%，1%，2%戊巴比妥钠溶液 【实验步骤】 1．取性别相同，体重相近小白鼠3只，分别称重、记号（1、2、3号），观察精神状态、痛觉反射及翻正反射。 2．给1号小白鼠腹腔注射0.1%戊巴比妥钠溶液0.1ml/ 10g 给2号小白鼠腹腔注射1%戊巴比妥钠溶液0.1ml/10g 给3号小白鼠腹腔注射2%戊巴比妥钠溶液0.1ml/10g 3．用大烧杯罩住小白鼠，并随时观察用药后各小鼠的精神状态、痛觉反射、翻正反射。 4．填表 小白鼠号用药用药后的表现（3′6′9′12′15′） 精神状态痛觉反射翻正反射1号 2号 3号 【注意事项】 1．更换药物要冲洗注射器。 2．小白鼠体重相差应小于两克。 【思考题】 1．药物剂量和药物作用的关系？ 2．讨论3只小白鼠用药以后表现为何不同？
中药药理学实验
实验1 附子炮制前后致小白鼠中毒表现的影响（6 学时） 【目的】观察生附子和制附子致小白鼠的死亡数量，评价炮制对附子毒性的作用。 【器材】1ml注射器、鼠笼、天平。 【药品】生附子水煎醇沉液（上清液）0.5g/ml、制附子水煎醇沉液（上清液） 0.5g/ml。 【动物】小鼠，雌雄各半，体重18?22 g。 【方法】小鼠20只，雌雄各半，随机分为2组。按0.2ml/10g腹腔注射给药，第 1 组给予生附子水煎醇沉液，第2组给予制附子水煎醇沉液。观察并记录30min 内各组小鼠死亡情况。 【结果】记录生附子水煎醇沉液组与制附子水煎醇沉液组动物死亡数，比较两者毒性的大小。 【注意事项】生附子和制附子水煎液制备时均应煎煮4 小时以上。 【思考题】 根据实验结果讨论炮制前后附子毒性作用差异的原因。
实验2生大黄、制大黄以及大黄、芒硝配伍对小白鼠小肠运动 的影响（炭末法）（4学时） ［目的］了解生大黄、制大黄对肠蠕动的影响以及大黄与芒硝配伍的药理意义。 ［原理］利用黑色炭末作为指示剂，观察炭末在肠道的推进距离。口服生大黄可刺激肠蠕动加速，有泻下作用，故对胃肠实热有釜底抽薪”之功。大黄久煎或炮 制之后，致泻成份分解，作用减弱，而芒硝在肠内不易被吸收，使肠内渗透压升高，大量水分保留在肠腔，机械性刺激肠壁而致泻。故生大黄与芒硝配伍有增 水行舟，润燥软坚”之功效，致泻作用增强。 ［器材］手术剪、眼科镊、直尺、注射器、灌胃针头、天平，烧杯，搪瓷盘或蛙板。 ［药品］炭末生理盐水混悬液0.1g/m （炭末为活性炭），生大黄水煎液1g/ml（含炭末 0.1g/m1）,制大黄水煎液1g/ml（含炭末0.1g/ml，生大黄水煎液加芒硝（生大黄1g/ml+芒硝0.5g/ml+炭末0.1g/m1），苦味酸。 ［动物］小白鼠。 ［方法］取禁食20~24h成年、体重相近的12只小白鼠，随机分为4组，每组3 只，用苦味酸标记。分别用上述4种炭末液0.3ml/10g体重灌胃。给药30min后脱颈椎处死，打开腹腔分离肠系膜，剪取上端至幽门，下端至回盲部的肠管，置于托盘上。轻轻将小肠拉成直线，测量肠管长度作为小肠总长度”。从幽门至炭 末前沿的距离作为炭末在肠内推进距离”。取各组3只小自鼠平均值，用公式汁算炭末推进百分率，并注意观察各组小肠容积是否增大。 炭末在肠内推进距离（cm） 炭末推进率= ---------------------------------------- X100% 小肠全长（cm） ［结果］按结果记录分析并填表。
(整理)《药理学》实验讲义.
《药理学》实验讲义
实验一药理学实验的基本知识和基本技术 一、目的 1. 掌握基本操作，锻炼动手、动脑能力； 2. 更好地掌握药理学基本理论知识； 3. 培养科学思维 二、基本要求 1. 实验前：预习实验内容并复习相关理论知识； 2. 实验时 ⑴实验器材要妥善保管； ⑵实验操作按步骤进行，仔细观察实验中出现的现象，实事求是地做好记录； ⑶注意节约实验药品； ⑷维持良好的课堂纪律。 3. 实验后 ⑴各组同学将实验动物处死，实验台擦干净，将实验方盘送回准备室； ⑵值日生搞好实验室卫生，将死亡动物送至指定场所； ⑶书写实验报告。 三、实验报告的书写 1. 题目 2. 目的 3. 原理 4. 材料：实验动物，器材，药品 5. 方法：用自己的语言简单扼要描述出来； 6. 结果：要求真实、清楚； 7. 讨论：将实验结果进行比较、分析；实验中有哪些不足之处；结果异常或失败的原因； 8. 结论：将实验结果进行归纳总结，应带有提示性质。 四、药理学实验实验设计原则 1.随机原则 按照机遇均等的原则进行分组。其目的是使一切干扰因素造成的实验误差减少，而不受实验者主观因素或其他偏性误差的影响。 2.对照原则 空白对照（指在不加任何处理的条件下进行观察对照）；阴性对照也称假处理对照（给予生理盐水或不含药物的溶媒）；阳性对照也称标准对照（指以已知经典药物在标准条件下与实验药进行对照）。 3.重复原则 能在类似的条件下，把实验结果重复出来，才能算是可靠的实验，重复实验除增加可靠性外，也可以了解实验变异情况。 五、实验动物
1. 动物的选择 （1）小白鼠：适用于需大量动物的实验，如某些药物的筛选，半数致死量的测定。也较适用于避孕药实验、抗炎镇痛药实验、中枢神经系统药实验、抗肿瘤药及抗衰老药实验等。 （2）大白鼠：比较适用于抗炎药物实验，血压测定、利胆、利尿药实验，也可用于进行亚急性和慢性毒性实验。 （3）豚鼠：因其对组胺敏感，并易于致敏，故常被选用于抗过敏药、平喘药和抗组胺药的实验。也常用于离体心脏、心房、肠管实验。又因它对结核敏感，常用于抗结核病药的实验。 （4）家兔：常用于观察研究脑电生理作用，药物对小肠的作用。由于家兔体温变化敏感，也常用于体温实验，用于热原检查。 （5）狗：狗是记录血压，呼吸最常用的大动物。还可利用狗做成胃瘘、肠瘘，以观察药物对胃肠蠕动和分泌的影响。在进行慢性毒性实验时，也常采用狗。2. 实验动物的编号 狗、兔等较大的动物可用特制的铝质号码牌固定在颈部或耳上。大鼠、小鼠如为白色可用黄色苦味酸在不同的体表标志上标记。 3. 动物固定及给药 （1）小鼠捉拿 小鼠性情较温顺，一般不会咬人，比较容易抓取固定。通常用右手提起小鼠尾巴将其放在鼠笼盖或其它粗糙表面上，在小鼠向前挣扎爬行时，用左手拇指和食指捏住其双耳及颈部皮肤，将小鼠置于左手掌心、无名指和小指夹其背部皮肤和尾部，即可将小鼠完全固定。在一些特殊的实验中，如进行尾静脉注射时，可使用特殊的固定装置进行固定，如尾静脉注射架或专用小鼠固定筒。如要进行手术或心脏采血应先行麻醉再操作，如进行解剖实验则必须先行无痛处死后再进行。 （2）小鼠灌胃 用左手固定鼠，右手持灌胃器，将灌胃针从鼠的口腔插入，压迫鼠的头部，使口腔与食道成一直线,将灌胃针沿咽后壁慢慢插入食道，可感到轻微的阻力,此时可略改变一下灌胃针方向，以刺激引起吞咽动作，顺势将药液注入。一般灌胃针插入小鼠深度为3～4cm，大鼠或豚鼠为4～6cm。常用灌胃量小鼠为0.2～1ml,大鼠1～4ml,豚鼠1～5ml。 （3）小鼠腹腔注射 先将动物固定,腹部用酒精棉球擦试消毒，然后在左或右侧腹部将针头刺入皮下，沿皮下向前推进约0.5 厘米，再使针头与皮肤呈45 度角方向穿过腹肌刺入腹腔，此时有落空感，回抽无肠液、尿液后，缓缓推入药液。此法大小鼠用的较多。 （4）皮下注射 注射时用左手拇指及食指轻轻捏起皮肤，右手持注射器将针头刺入,固定后
药理学实验方案
药理学实验方案
元胡止痛片对小鼠镇痛抗炎镇痛活性研究 ——药理实验设计 设计人：级药学一班 张礼杰 515010 信盼 515024 陈茂琴 515026 何朵朵 515028 药学四班 杨森 515101 冯禹 515110 王同月 515102
元胡止痛片中抗炎和镇痛作用研究 1.实验目的：探讨元胡止痛片的镇痛和抗炎作用 2.实验原理：（1）元胡止痛片收载于《元胡止痛片收载于《中国药典》是由元胡、白芷两味药组成的中药复方制剂为行气活血止痛剂临床用于治疗气滞血瘀胃痛、胁痛、头痛及月经痛等症疗效确切。本实验是为验证元胡止痛片的镇痛和抗炎作用进行验证。实验对四川禾邦阳光制药厂家生产元胡止痛片不同剂量进行了药效学研究采用小鼠醋酸扭体法、小鼠热板法和耳肿胀法实验分别测定小鼠扭体反应抑制率、小鼠痛阂值提高率和肿胀率从而确定不同剂量的镇痛和抗炎作用效果。 在基础医学研究中筛选镇痛药的常见致痛方法概括有物理法（热、电、机械）和化学法。动物的疼痛反应常表现出嘶叫、舔足、翘尾、蹦跳及皮肤、肌肉抽搐。化学法，即将某些化学物质，如强酸、强碱、钾离子、缓激肽等，涂布于动物的的某些敏感部位或腹腔注射。腹腔注射损伤物质引起受试动物腹痛，动物表现出“扭体反应”（即腹部内凹、躯干与后肢伸张、臀部高起）。 3.实验方法 :使用小鼠热板法、醋酸扭体法、耳肿胀法 ,并分别建立小鼠疼痛和炎症模型 ,灌胃给予不同剂量元胡止痛片配成的溶液，观察对动物的镇痛和抗炎作用。 4.实验过程： 1.内容
4.1 药品与试剂 元胡止痛片：四川禾邦阳光制药股份有限公司，国药准字z51021658，规格：片芯重0.25g,12片 阿司匹林: 浙江金华市第三制药厂, 国药准字: H13023716, 临用前用蒸馏水配制为适当浓度的混悬液。 4.2动物：健康昆明种小白鼠，雌性，32只 4.3 器材：数控超级恒温槽，烧杯、1ml 注射器、电子秤 4.4分组： 空白对照组 (灌胃0.9%生理盐水 10 mL/kg) 元胡止痛片高、低剂量组 (0.2，0.4mg ／10g) 阳性药阿司匹林对照组 (灌胃阿司匹林 0. 4 g/kg) 4.5人和动物剂量换算公式 小白鼠=20 0026 .0?人/g 2 方法 （1）热板法 1.动物筛选：致痛潜伏期 (痛阈值)为 5~30s 之间的合格雌性小鼠。32只，热板法镇痛试验筛选痛阈值合格的小鼠，取♀小鼠于给药前先用热板仪于55 ± 0． 5 ℃分别测定每只小鼠的正常痛阈值［将小鼠放于智能热板仪上至出现舔后足的所需时间作为痛阈值( s) ，连续 2 次，间隔30 s ，测定平均值即为正常痛阈值］。将舔后足时间＜ 5 s 或＞30 s ，或跳跃者不用于此实验
药理实验指导
实验二给药途径对药物作用的影响 【目的】观察不同的给药途径对药物作用的影响 【原理】回苏灵为中枢兴奋药 【材料】小鼠3只，体重18~22g，同一性别。 0.04%回苏灵溶液 【方法与步骤】 动物称重，标记。每鼠给药剂量均为8mg/kg。甲鼠灌胃给药，乙鼠皮下注射，丙鼠则为腹腔注射。仔细观察动物反应，记录下各鼠的潜伏期和最终结果。 【结果处理】将上述观察到的结果填入下表2-4，并结合全班的试验结果，比较三种给药途与药物反应的出现时间和作用程度，最好能进行统计分析。 实验三肝脏功能对药物作用的影响 【目的】观察肝脏病理功能状态对药物作用的影响。 【原理】四氯化碳是一种肝脏毒药，其中毒动物常被作为中毒性肝炎的动物模型，用于筛选保肝药物。 【材料】小鼠2只，四氯化碳原液，0.36%戊巴比妥钠。 【方法与步骤】 1.取性别相同、体重相近的2只小鼠，在试验前24h，分别皮下注射四氯化碳原液和生理盐水0.1ml/只。 2.2只小鼠分别ip戊巴比妥钠30ml/kg。 3.观察动物的翻正反射消失情况，记录药物作用的潜伏期和持续时间。 4.试验结束后，解剖小鼠，比较2只小鼠的肝脏外观有何不同。 【结果处理】将上述观察到的结果填入下表2-5，并结合全班的试验结果，比较不同肝脏状态对药物作用影响，最好能进行分析。 实验四药物的抗电惊厥作用 【目的】观察苯妥英钠和苯巴比妥对电惊厥的保护作用。 【原理】以一强电流刺激小鼠头颅可引起全身强直性惊厥，若药物预防强直性惊厥发生，可初步推测该药有抗癫痫大发作的作用。 【材料】小鼠3-4，体重18～22g，雌雄不限。钟罩、天平、注射器，药理生理多用仪。 0.5%苯妥英钠溶液，0.5%苯巴比妥钠溶液。
药理学实验指导
药理学实验指导 （供自学助考班用） 实验一药理学实验基础知识与常用动物捉拿、给药 【目的】1、学习药理学实验基础知识； 2、掌握药理学实验常用动物捉拿、给药方法。 【器材】1ml、5ml、20ml注射器，大、小鼠灌胃针头，4号、6号注射针头，250ml烧杯、鼠笼(或铁丝笼)，天平秤、砝码。 【药品】0.9%生理盐水。 【动物】小白鼠、大鼠、家兔。 【内容】 一、实验动物的捉拿方法 1、蛙和蟾蜍左手握持蛙或蟾蜍，食指和中指夹住左前肢，拇指压住右前肢；右手将双下肢拉直，左手无名指及小指将其压住而固定。此法用于淋巴囊注射。毁脑和毁脊髓则用左手食指和中指夹持蛙或蟾蜍的头部，拇指和无名指小指握持双下肢，右手持刺针进行操作。 2、小白鼠可采取双手法和单手法两种形式。 双手法：右手提起鼠尾，放在鼠笼盖或其他粗糙面上，向后方轻拉，小白鼠则将前肢固定于粗糙面上。此时迅速用左手拇指和食指捏住小白鼠颈背部皮肤，并以小指与手掌尺侧夹持其尾根部，固定于手中。 单手法：小白鼠置于笼盖上，先用左手食指与拇指抓住鼠尾，手掌尺侧及小指夹住尾根部，然后用左手拇指与食指捏住颈部皮肤。 3、大白鼠大白鼠容易激怒咬人，捉持时左手应戴防护手套或用厚布盖住大鼠，先用右手抓住鼠尾，再用左手拇指和食指握住头部，其余手指与手掌握住背部和腹部。不要用力过大，切勿捏其颈部，以免窒息致死。 4、家兔用左手抓住颈背部皮肤(抓的面积越大，其吃重点越分散)。将兔提起，以左手托住其臀部，使兔呈坐位。 二、实验动物的给药途径与方法 1、小白鼠给药途径与方法 灌胃(ig)：左手固定小鼠，右手持灌胃器，灌胃针头自口角进入口腔，紧贴上腭插入食道。如遇阻力，将灌胃针头抽回重插，以防损伤。 常用灌胃量为0.1～0.2ml/10g。 皮下注射(ih)：可用腹部、背部、腹股沟的皮下，此处皮肤比较松弛，也可由助手协助。注药量一般为0.1～0.2ml/10g。 肌肉注射(im)：一人抓住小鼠头部皮肤和尾巴，另一人持连4号针头的注射器，将针头
药理学实验方法
第一章现代药理学实验方法与技术简介 第一节分子生物学试验方法与技术 分子生物技术在药理学实验中应用较为广泛，包括核酸分子探针的标记、核酸分子杂交、多聚酶链反应、蛋白印迹杂交技术、cDNA文库、随机分子库技术、外核基因在真核细胞中的表达、转基因动物、人类基因治疗等。现将更为常用的技术介绍如下： 一、核酸分子探针的标记标记核酸分子探针（nucleic acid probe）是进行核杂交的基础，根据核酸分子探针的来源及性质进行选择，选择的基本原则是具有高度的特异性，探针选择直接影响杂交结果的分析。根据检测对象和目的不同，，可选择不同的探针种类及标记方法。 ㈠探针种类 1．基因组DNA探针是克隆化的各种基因片断，也是最常用的核酸探针，探针应尽可能选用基因编码（外显子），避免使用内含子及其它非编码序列。 2．cDNA探针与mRNA互补的DNA链称cDNA，是一种较为理想的核酸探针，特异性较高。 3．RNA探针RNA与RNA或DNA杂交体的探针稳定性，特异性高。 4．寡核苷酸探针人工合成寡核苷酸片段做探针，可根据需要合成相应序列。 ㈡标记物 常用的探针标记物有两类：放射性同位素和非放射性同位素。标记物的检测具有高度灵敏性和特异性。标记和探针结合不影响杂交的特异性和稳定性。其中放射性同位素是应用最多的探针标记物，但易造成放射性污染，多数同位素的半衰期短，不能长期存放。常用的放射性同位素有32P?3P?35S，有时也用14C,125I或131I。 二、核酸分子杂交（nucleic acid hybridiazation ）是指具有一定同源序列的两条核酸单链在一定的条件下，按碱基互补配对原则形成异质双链的过程。核酸分子杂交是分子生物学领域应用最广泛的技术，灵敏度高、特异性强，主要用于特异DNA或RNA的定性定量检测。 三、聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）是一种体外酶促扩增特异DNA片段的方法。传统的DNA扩增法是分子克隆法，需经过DNA 酶切、链接、转化等步骤构建含有目的基因的载体。然后导入细胞中进行扩增，再用同位素标记的探针进行筛选，操作复杂，耗时。PCR技术灵敏度
药理学设计性实验
药理学设计性实验 实验一、石菖蒲的镇静作用 【目的】 1应用小动物自主活动学习镇静药物的实验方法。 2、应用小动物自主活动仪，研究地西泮、石菖蒲对小鼠自发活动的影响。 【原理】小动物自主活动仪的原理：在活动箱内，将一束或几束光线照射到对侧光电感应器上，动物在箱内每活动一次，感应电流发生改变，经过放大装置，使电脉冲驱使继电器启动, 通过记录器记录动物活动次数。 地西泮是镇静催眠的代表药。石菖蒲具有宁心安神作用，其挥发油对中枢有广泛的抑制作用。本实验以小鼠自发活动次数为指标，观察药物的镇静作用。 【动物】小鼠6只，实验前禁食12h o 【药品】0.05%地西泮溶液，石菖蒲水煎液，生理盐水 【主要器材】动物自主活动仪1台，电子称1台，1ml注射器2支，烧杯2杯。 【方法】将6只动物随机分为甲乙丙组，甲组灌胃生理盐水，乙组灌胃石菖蒲水煎液(连续 两天)，丙组灌胃地西泮1次，0.2ml/10。给药后1小时各组动物放入小动物自主仪，先适应2分钟，再记录5分钟内小鼠自主活动次数。 【结果】地西泮、石菖蒲对小鼠自主活动的影响。(结果见表1) 表1地西泮、石菖蒲对小鼠自主活动的影响 参考文献： [1] 胡锦官，顾健，王志旺?石菖蒲及其有效成分对神经系统作用的药理研究[J].中药药药理 与临床.1999.15 (30: 19 [2] 刘新民.石菖蒲的研究现状J].中医药研究.1992. (4): 57 [3] 吴启端，吴清和，石菖蒲的药理学研究进展[J].2006,17 (6) :477-480 实验二、石菖蒲对记忆障碍小鼠模型的改善作用 【目的】 1、学习小鼠跳台原理和操作，正确运用跳台实验仪器对小鼠进行学习记忆能力行为学测试。 2、观察石菖蒲对小鼠记忆获得障碍的疗效作用。 【原理】鼠跳台实验装置由DT-200小鼠跳台测试箱和DT-200小鼠跳台测试仪组成。测试箱由6个小房间构成，一次可同时试验6只动物，每个小房间有一橡皮台，箱底是可通电的 铜栅，在训练期通电小鼠跳下平台在箱底不断被电击，这个过程中小鼠获得记忆，24 h后测 试时观察小鼠第一次跳下平台的时间和 5 min内跳下平台的次数，比较各组老鼠记忆保持的 能力。 戊巴比妥钠能造成小鼠学习记忆障碍。石菖蒲具有开窍醒神，宁心安神的作用，能够促进学习记忆。本实验以小鼠跳下潜伏期及5min内错误次数作为指标，观察药物对小鼠学习
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2014《药理学》实验 讲义
《药理学》实验讲义
实验一药理学实验的基本知识和基本技术 一、目的 1. 掌握基本操作，锻炼动手、动脑能力； 2. 更好地掌握药理学基本理论知识； 3. 培养科学思维 二、基本要求 1. 实验前：预习实验内容并复习相关理论知识； 2. 实验时 ⑴实验器材要妥善保管； ⑵实验操作按步骤进行，仔细观察实验中出现的现象，实事求是地做好记录； ⑶注意节约实验药品； ⑷维持良好的课堂纪律。 3. 实验后 ⑴各组同学将实验动物处死，实验台擦干净，将实验方盘送回准备室； ⑵值日生搞好实验室卫生，将死亡动物送至指定场所； ⑶书写实验报告。 三、实验报告的书写 1. 题目 2. 目的 3. 原理 4. 材料：实验动物，器材，药品 5. 方法：用自己的语言简单扼要描述出来； 6. 结果：要求真实、清楚； 7. 讨论：将实验结果进行比较、分析；实验中有哪些不足之处；结果异常或失败的原因； 8. 结论：将实验结果进行归纳总结，应带有提示性质。 四、药理学实验实验设计原则 1.随机原则 按照机遇均等的原则进行分组。其目的是使一切干扰因素造成的实验误差减少，而不受实验者主观因素或其他偏性误差的影响。 2.对照原则 空白对照（指在不加任何处理的条件下进行观察对照）；阴性对照也称假处理对照（给予生理盐水或不含药物的溶媒）；阳性对照也称标准对照（指以已知经典药物在标准条件下与实验药进行对照）。 3.重复原则 能在类似的条件下，把实验结果重复出来，才能算是可靠的实验，重复实验除增加可靠性外，也可以了解实验变异情况。
五、实验动物 1. 动物的选择 （1）小白鼠：适用于需大量动物的实验，如某些药物的筛选，半数致死量的测定。也较适用于避孕药实验、抗炎镇痛药实验、中枢神经系统药实验、抗肿瘤药及抗衰老药实验等。 （2）大白鼠：比较适用于抗炎药物实验，血压测定、利胆、利尿药实验，也可用于进行亚急性和慢性毒性实验。 （3）豚鼠：因其对组胺敏感，并易于致敏，故常被选用于抗过敏药、平喘药和抗组胺药的实验。也常用于离体心脏、心房、肠管实验。又因它对结核敏感，常用于抗结核病药的实验。 （4）家兔：常用于观察研究脑电生理作用，药物对小肠的作用。由于家兔体温变化敏感，也常用于体温实验，用于热原检查。 （5）狗：狗是记录血压，呼吸最常用的大动物。还可利用狗做成胃瘘、肠瘘，以观察药物对胃肠蠕动和分泌的影响。在进行慢性毒性实验时，也常采用狗。 2. 实验动物的编号 狗、兔等较大的动物可用特制的铝质号码牌固定在颈部或耳上。大鼠、小鼠如为白色可用黄色苦味酸在不同的体表标志上标记。 3. 动物固定及给药 （1）小鼠捉拿 小鼠性情较温顺，一般不会咬人，比较容易抓取固定。通常用右手提起小鼠尾巴将其放在鼠笼盖或其它粗糙表面上，在小鼠向前挣扎爬行时，用左手拇指和食指捏住其双耳及颈部皮肤，将小鼠置于左手掌心、无名指和小指夹其背部皮肤和尾部，即可将小鼠完全固定。在一些特殊的实验中，如进行尾静脉注射时，可使用特殊的固定装置进行固定，如尾静脉注射架或专用小鼠固定筒。如要进行手术或心脏采血应先行麻醉再操作，如进行解剖实验则必须先行无痛处死后再进行。 （2）小鼠灌胃 用左手固定鼠，右手持灌胃器，将灌胃针从鼠的口腔插入，压迫鼠的头部，使口腔与食道成一直线,将灌胃针沿咽后壁慢慢插入食道，可感到轻微的阻力,此时可略改变一下灌胃针方向，以刺激引起吞咽动作，顺势将药液注入。一般灌胃针插入小鼠深度为3～4cm，大鼠或豚鼠为4～6cm。常用灌胃量小鼠为0.2～1ml,大鼠1～4ml,豚鼠1～5ml。 （3）小鼠腹腔注射 先将动物固定,腹部用酒精棉球擦试消毒，然后在左或右侧腹部将针头刺入皮下，沿皮下向前推进约0.5 厘米，再使针头与皮肤呈45 度角方向穿过腹肌刺入腹腔，此时有落空感，回抽无肠液、尿液后，缓缓推入药液。此法大小鼠用的较多。
药理实验指导43252
药理实验指导 总论、链霉素毒性、肝脏在药物代谢中的作用 一、药理学实验课的目的和要求： （一）目的： （1）使学生掌握进行药理学实验的基本方法，了解获得药理学知识的科学途径 （2）验证药理学中的重要基本理论，更牢固地掌握药理学的基本概念。（3）培养对科学工作的严肃的态度、严格的要求、严密的工作方法和实事求是的作风，并初步具备客观地对事物进行观察、比较、分析、综合和解决问题的能力。 （二）要求： （1）实验前做好预习工作，结合实验内容，复习有关药理学、生理学和生物化学等方面的理论知识，并领会实验设计的原理。 （2）实验时认真操作，仔细观察，并做好实验记录。 （3）实验后整理实验结果，并进行分析思考，认真书写实验报告，并做好实验室的清洁卫生，关好水、电。 二、实验设计的基本原则 （1）重复性 （2）对照性 （3）随机性 三、药理学实验的一般方法和技术 （一）实验动物选择的原则和方法 1、首先要根据实验的目的选择实验动物 2、选用来源清楚、遗传背景明确的实验动物 3、选用容易获得、价格便宜、易于饲养与管理的实验动物 4、必须注意实验动物种类、品系的质量及健康状况是否良好 5、选用人畜共患疾病的实验物物和传统应用的实验动物 （二）实验动物的选择： 常用的实验动物有蛙、蟾蜍、小白鼠、大白鼠、豚鼠、家兔、猫、狗。常根据不同的实验目的和要求选用不同的实验动物，所选用的动物必须能较好地反映试验药物的选择性作用并符合节约的 原则。 蛙和蟾蜍：离体心肌，观察药物对心脏的作用。坐骨神经和腓肠肌，观察药物对周围神经肌肉或横纹肌的作用。 小白鼠： 1.小鼠属于脊椎动物门，哺乳纲，啮齿目，鼠科，小鼠属动物。 2.成熟早，繁殖力强。 3.体形小，易于饲养管理。 4.性情温顺， 胆小怕惊。 5.对外来刺激极为敏感。6.便于提供同胎和不同品 系动物。7.喜居于光线较暗的安静环境，习于昼伏夜动，喜欢啃咬。8.体小娇嫩，不耐饥饿，不耐冷热，对环境的适应性差。9. 成年雌鼠在动情周期不同阶段阴道粘膜可发生典型变化。适用于需要大量动物的实验，如药物筛选，半数致死量，药物效价。
《药理学实验》课程教学活动大纲
《药理学实验》课程教学大纲 （执笔人：尹艳艳审核人：周兰兰教学院长：陈志武）一、课程简介 （一）课程代码： （二）课程名称（含英文名称）： 药理学实验（pharmacology experiments） （三）课程类别： 专业基础课 （四）修读对象： 药学专业 （五）总学时与学分： 其中实验54学时，3学分。 （六）相关课程： 药理学 （七）内容提要 本课程涵盖了药理学部分的模拟实验及经典实验项目，以大量的实验尤其是动物实验为基础，复制疾病动物模型，研究用药后的生物体功能活动变化及其规律，以巩固药理学及相关基础理论知识，进一步强化实验操作技术，提高动手能力，培养分析问题和解决问题的能力。 二、教学目的和教学方法 （一）教学目的 1．加强学生的药理学基本理论、基本知识和基本技能的训练，培养理论联系实际和独立开展科学研究的能力。药理学实验可以帮助学生验证药理学理论知识，巩固和加强对药理学理论的掌握；促进学生对药理学一些抽象概念的理解；了解药理学研究的一些基本方法，培养学生药理学实验设计和科研能力；初步掌握药物研究的基本技能，并且通过科研模拟实验加强学生的创新思维能力的培养。
2.药理学实验主要以学生在教师指导下自己动手操作为主，少量示教实验为辅，并且配合课堂讨论和多媒体等方法，达到既验证理论，巩固和加强药理学理论知识学习的目的，又要做到培养学生科研能力和创新思维的开发。 （二）教学方法 采用课堂讲授、现场指导、模拟实验、双语教学、自主设计、病例讨论和课外训练等多种教学手段相结合的教学方法。 三、实践教学学时分配 四、选用教材和主要教学参考书
1.陈志武,董六一,《药理学实验指导》,中国协和医科大学出版社,2013年10月 2.孔德虎，《医学机能学实验教程》，科学出版社，2009年2月。 五、实验教学内容 实验一、动物捉拿及各种药方法（录像） 主要讲授内容：介绍动物捉拿及各种给药方法 教学时数：3学时 重点与难点： 1.小鼠、大鼠和家兔的捉拿方法。 2.小鼠、大鼠和家兔常见的给药方法 实验二、小鼠戊巴比妥钠LD50和ED50的测定 主要讲授内容：ED50及LD50的概念，其测定方法和小鼠腹腔注射的方法 教学时数：4学时 重点与难点： 1.小鼠腹腔注射的方法。 2.LD50和ED50的计算方法。 思考题或练习题： 1. 半数有效量（ED50）和半数致死量（LD50）测定的目的意义如何？ 2. 药物的剂量与药物作用有何关系？ 3. 治疗指数和安全范围之间有何联系？ 实验三、吗啡的镇痛作用（小鼠热板法和小鼠扭体法） 主要讲授内容： 1.镇痛药物的热板实验方法测定，观察镇痛药的镇痛作用，熟练掌握小鼠皮下注射的方法； 2.镇痛药物的扭体实验方法测定，观察镇痛药的镇痛作用，熟练掌握小鼠腹腔注射的
药理学实验指导讲解
药理学实验指导 中药教学部 重庆邮电学院生物学院 二O O四年六月 前言 药理学实验教学的目的，不仅是验证药理学理论，还可培养学生基本操作技能，观察和分析解决问题的能力，以及体验科学研究的基本原则和基本程序，从而提高学生实验研究能力和严密的科学思维方法。为了使各专业的学生能深入理解药理学的基本理论和基本知识，特编写了这本《药理学实验实验指导》。 本实验指导选择的实验内容经典、实用，做到既和理论课有密切联系，又有实验课的独特体系；既有整体动物（包括清醒动物和麻醉动物）实验，又有器官水平实验；既有验证性实验，又有设计性实验,还有综合性实验。从而使学生初步具备对客观事物进行观察、比较、分析、综合和解决问题的能力，并验证、巩固和加深理解基本理论，从而初步掌握药理学实验的基本方法。 为了达到上述目的，要求同学们做到下列事项：
一、遵守纪律，提前5分钟到达实验室，因故外出或早退应向老师请假。进入实验室必须身穿白大衣，不许穿拖鞋，衣着整洁干净。实验时应严肃认真，不高声谈笑，不进行实验室无关的活动。违者将给予一定的处罚。 二、实验前：1.仔细阅读实验指导，了解实验目的、要求、方法和操作步骤，领会其设计原理；2.结合实验内容，复习有关药理学和生理学、生化学等方面理论知识做到充分理解；3.预测实验中各个步骤可能出现的情况；4.注意实验中可能发生的问题。 三、实验时：1.实验者必须先熟悉仪器的使用要点，而后运用。仪器损坏或失灵，应请老师修理或调换。违章操作使仪器损坏者，要进行赔偿。各小组实验器材不得调换。公用物品用完后放回原处。2.实验时将实验器材妥善安排好，正确装置；严格按照实验指导上的步骤进行操作，准确计算给药量，防止出现差错意外；3.认真仔细地观察实验过程中出现的现象，随时记录药物反应出现的时间、表现以及最后转归，联系课堂讲授内容进行思考。4.注意节约实验材料。 四、实验后：1.整理实验结果，经过分析思考，写出实验报告（①.名、班级、组别、日期、操作者②.题目、目的、简要方法(包括仪器，药品等)．③实验结果是实验中最重要的部分，应该忠实，正确地记述实验过程中所观察到的现象。一定随时记录，不可单凭记忆，否则容易发生错误或遗漏）。时交给指导教师；2.整理实验器材，洗净擦干，妥为安好，放回原处。将用过的动物进行处死动物及其他废物丢入指定处所。有班长安排各组进行轮流打扫清洁，做好实验室的清洁卫生工作（桌、凳、地板、收拾干净，摆放整齐），离开时关闭所有的水、电、气关好门窗。 生物信息学院中药学教学部 刘圣蓉刘毅编著 二0 0四年六月
药理学实验教程资料
药理学实验教程 （中、英文版） 主编 叶春玲 钟玲 暨暨南南大大学学药药学学院院药药理理教教研研室室 22000077年年55月月
药理学实验教程 目目 录录 第一篇 药理学实验基本知识 第一章 药理学实验须知 一、药理学实验课的目的和要求 二、实验结果的整理和实验报告的撰写 第二章 药理学实验设计的基本知识 一、实验设计的基本原则 二、药理实验设计中的剂量问题 三、药理实验设计中的预试问题 第三章 药理学实验的统计处理原则 一、计量资料的统计分析 二、计数资料的统计分析 三、药效和剂量依赖关系（相关性）的统计分析 四、两药药效的等效性分析 第四章 常用实验动物的基本操作 一、实验动物的选择及捉拿固定 二、实验动物的编号 三、实验动物的给药方法 四、实验动物的麻醉和取血 第五章 药理学实验常用仪器操作技术 BL-410生物机能实验系统 第六章 药物剂型与处方学 一、药物剂型 二、处方学 第二篇 药理学总论实验 第一章 药动学实验 实验一 磺胺类药物静脉给药后的药时曲线 实验二 磺胺类药物非血管内给药后的药时曲线 实验三 3P87 计算药物动力学参数
实验四磺胺类药物在体内的分布 实验五磺胺嘧啶的血浆蛋白结合率测定 实验六磺胺类药物在麻醉大鼠体内经胆汁和尿排泄的实验 第二章药效学总论实验 实验一不同给药途径对药物作用的影响 实验二肝功能状态对药物作用的影响 实验三量效关系曲线和有关药效学参数测定 第三章安全性试验 实验一药物急性半数致死量（LD50）的测定 实验二最大耐受量（MTD）测定 第三篇药理学各论实验 第一章传出神经系统药物实验 实验一药物对麻醉动物血压的影响 实验二药物对麻醉动物血流动力学的影响 实验三药物对离体兔主动脉环的作用 第二章中枢神经系统药物实验 实验一药物对小鼠自发活动的影响 实验二药物对益智作用的影响 实验三抗癫痫药和抗惊厥实验 实验四镇痛药实验 第三章心血管系统药物实验 实验一利多卡因对哇巴因诱发心律失常的拮抗作用 实验二强心苷对家兔在体衰竭心脏的作用 实验三药物对垂体后叶素所致的急性心肌缺血心电图变化的影响第四章内脏系统药物实验 实验一呋塞米对小鼠尿量及电解质的影响 实验二药物对组胺诱发豚鼠哮喘的作用 实验三药物对大鼠的利胆作用 第五章激素类及抗炎药物实验 实验一糖皮质激素对毛细血管通透性的影响
中药药理学实验指导
中药药理学实验指导中药教学部姚干编 重庆邮电学院生物信息学院
2005年02月10日 前言 我国中医中药历史悠久，理论体系完整，在历代临床实践中积累了丰富的药效学经验。中药和方剂是祖国医学的精华，其药理作用需要不断地加以研究与探索。中药药理学是采用现代科学技术方法来研究中药的组方、成分、作用机理及用途的一门前沿科学，而中药药理实验和中药药理学是不可分割的一门学科的两个组成部分，缺一不可。中药药理实验以中医药理论为指导，以中药功效为主线，运用现代药理学实验方法进行单味中药与经典方剂的研究，对继承、发扬祖国医药学这一伟大宝库的历史使命和实现中药现代化，有着非常重要的作用。 本实验指导是以中药专业培养计划为依据，按照《中药药理学》实验课程（本科）教学大纲的要求编撰而成的，主要供我院中药专业本科学生实验教学使用。 本实验指导首先对中药药理实验的基础知识与基本技术进行了简要介绍，选择的实验项目力求内容经典、实用，既与理论课有密切联系，又有实验课的独特体系；既有整体动物实验，又有器官水平实验；既有定性实验，又有定量实验；既有验证性实验，又有设计性实验。从而使学生初步具备对客观事物进行观察、比较、分析、综合和解决问题的能力，并验证、巩固和加深理解基本理论，从而初步掌握中药药理学实验的基本方法。
目录 中药药理学实验须知 3 中药药理实验的基础知识与基本技术 5 实验一生大黄、制大黄对小鼠排便时间和数量的影响17 实验二生大黄、制大黄对小鼠小肠运动的影响17 实验三秦艽对蛋清致大鼠后跖肿胀的影响18 实验四青皮对家兔离体肠平滑肌的影响19
实验五金铃子对小鼠的镇痛作用20 实验六人参对小鼠耐常压缺氧的作用20 实验七人参对小鼠游泳时间的影响21 中药药理学实验须知 一、中药药理学实验课的目的和要求 ㈠目的 中药药理学实验课的目的在于通过实验，使学生掌握中药药理学实验的基本方法，了解获得中药药理学知识的科学途径，验证中药药理学中的重要理论，更牢固地掌握中药药理学
《药学大实验》实验指导 药理学部分
药学实验（药理学实验） 实验五不同给药途径、给药剂量对药物作用的影响 (一)不同给药途径对药物作用的影响 ?实验目的 观察不同给药途径对药物（硫酸镁）作用的影响，了解核酸镁不同给药途径产生不同作用的原因； 掌握硫酸镁的作用以及小鼠灌胃、腹腔注射方法 ?实验原理 硫酸镁为一种容积性泻药（此外还有刺激性和润滑性泻药），口服在肠道难吸收，在肠内形成高渗压而阻止肠内水分的吸收，从而扩张肠道、刺激肠壁、促进肠道蠕动，产生泻下作用。注射给药可使血中Mg2+增加，由于Ca2+和Mg2+化学结构相似，Ca2+和Mg2+间存在相互拮抗作用，Ca2+参与运动神经末梢Ach释放，而Mg2+拮抗Ca2+这种作用，结果使神经肌肉接头处Ach减少，骨骼肌紧张性降低，肌肉松弛。同时对中枢神经及心血管系统产生抑制作用。因此产生抗惊厥及降压效果。本实验观察不同给药途径对硫酸镁作用性质的影响。 大多数药物需进入血液分布到作用部位才能发生作用。药物自给药部位进入全身血液循环的过程为吸收（absorption），吸收速度的快慢及吸收数量的多少直接影响药物的起效时间及强度。其中给药途径是决定药物起效时间及强度的重要因素
之一。给药途径不同，则药物吸收快慢亦不同，其吸收快慢顺序除静脉注射外是：腹腔注射>吸入>舌下>直肠>肌内注射>皮下注射>口服>皮肤。给药途径不同，其吸收程度又不同，由此使药物作用强度不同。药物经不同给药途径所致的吸收程度是：吸入、舌下、直肠、肌内注射较为完全，口服次之，皮下较差；皮肤表面吸收程度最差，一定要脂溶性特别高的药物才能通过此途径较好地吸收。而胃肠道给药，影响因素较多，包括有首关消除的影响等，使药物吸收程度有所不同。首关消除（first pass elimination）：从胃肠道吸收入门静脉系统的药物在到达全身血循环前必先通过肝脏，如果肝脏对其代谢能力很强或由胆汁排泄的量大，则使进入全身血循环内的有效药物量明显减少，这种作用称为首关消除。有的药物在被吸收进入肠壁细胞内而被代谢一部分也属首关消除。首关消除也称首关代谢（first pass metabolism）或首关效应（first pass effect）。注射、舌下和直肠给药可避免肝代谢。 ?实验学时 2学时 ?实验对象 小白鼠，体重18-22g，雌雄不限 ?实验器材 1ml注射器2支、小白鼠灌胃针头1个、5号针头1个、250ml烧杯2个
大学药理学实验(附问题详解)
实验题目： 小鼠腹腔注射筒箭毒碱ED50的测定 Determination of Cl-Tubocurarine's Median Effective Dose （ED50） 【实验目的】 了解ED50的测定方法、原理、计算过程与意义。 【相关理论】 1．关于量反应，质反应： 量反应是指个体上反应的强度并以数量的分级来表示；例如：血压、尿量等。 质反应是指群体中所观察到的某一效应的出现；如：生死、有效或无效。以阳性反应的出现频率或百分数来表示（全或无，阳性率）。 2．关于ED50，LD50，以及治疗指数: 能使群体中有半数个体出现某一效应的剂量，称为半数效应量，若此效应为有效，则为半数有效量ED50，ED50是质反应的参数。若此效应为死亡时，则为半数致死量LD50。 治疗指数= LD50/ ED50=TI，该值越大越好，说明药物越安全. 可用机率单位正规法或点斜法求出LD1 ，ED99 ；LD5 ，ED95。 3．肌松药分为去极化型和非去极化型两种。 去极化型肌松药的代表为琥珀酰胆碱，其肌松作用不能被抗胆碱酯酶药新斯的明拮抗，反而会加重。 非去极化型肌松药的代表为筒箭毒碱，其肌松作用能被新斯的明解救。 4．测定ED50，LD50的意义 可计算治疗指数TI（LD50/ ED50），为临床安全用药提供指导。
【实验动物】 小鼠（种KM），雌雄各半。 【实验器材】 铁丝网，铁架台，天平，注射器等。 【实验方法】 应用点斜法测定ED50。 应用该方法测定ED50时，实验设计必须符合以下5点要求： 1）动物以5~8组为宜； 2）每组动物数须一致； 3）各组给药剂量应呈现等比数列； 4）各组给药剂量的公比r = 1.1~1.6； 5）最大剂量（Dmax）组的阳性反应率须≥80%，最小剂量（Dmin）组的阳性反应率须≤20% 【实验方法】 1．预实验：目的是为了找出符合上述点斜法要求5）的Dmax和Dmin。阳性反应判定标准：20min小鼠落下3次（注意排除因互相拥挤而落下所造成的假阳性）。 2．确定组数（n）后，根据Dmax和Dmin，计算各组应给予的剂量，Dmax= rn·D min。注意公比r应在上述要求的围，即 = 1.1 ~ 1.6。 分别计算出各组应注射的剂量，见下表： Group No. 1 2 3 4 5 6...
药理实验方法学重点
一．1.首过效应：口服给药后，药物在到达体循环之前，经肠道、肠壁和肝脏的代谢分解使进入生物体内的相对药量降低。2，判断方法：尾静脉给药AUC和门静脉给药AUC—比较判断肝首过—是—尾静脉》门静脉;门静脉给药和十二指肠给药AUC—比较判断肠首过—是—门静脉》十二指肠十二指肠和灌胃给药AUC—比较判断胃首过—是—十二指肠AUC》灌胃AUC 二．简述肾外包扎性高血压模型制备的基本原理和注意事项?答：原理：肾外异物包扎，可致肾周围炎，肾外形成一层纤维性鞘膜，压迫肾实质，造成肾组织缺血，使肾素形成增加，进而使血管紧张素含量增加，血压上升。属肾性高血压模型。注意事项：1)肾外包扎材料除自制双层孔胶薄膜和玻璃纸外，还可用绸布、乳胶、火棉胶等材料。肾外包扎应足够紧，但不能勒破组织。2) 如果要制造2肾1扎型，则一侧肾包扎后无需切除另一侧肾，术后3~6个月10%~20%动物形成高血压；如果要制造2肾2扎型，则一侧肾包扎后同法包扎另一侧肾，术后3~4周70%以上动物形成高血压。三、（一）佐剂性关节炎1.大鼠AA的制备：选用雄性Lewis、Wistar或SD大鼠，体重200g左右，将每鼠右后足趾皮内注射完全弗氏佐剂（CFA）0.1ml致炎。CFA是将卡介苗或死结合分枝杆菌加入已经高压灭菌的液体石蜡中，浓度为10mg/ml。原发病变主要表现为早起致炎局部的炎症反应，致炎后18h右后足的肿胀达峰值，持续3d后逐渐减轻，8d后再度肿胀；继发病变一般出现于致炎后10d左右，表现为对侧和前肢的肿胀，耳和尾部出现“关节炎”小结，变应性角膜翳以及体重下降等等。2.小鼠AA 的制备：选用雄性C57BL/6小鼠，8周龄，4%氟烷吸入麻醉，左侧胫-跗关节皮下两点皮下注射100ulCFA，CFA浓度为5ug/ul，对照组同方法注射液状石蜡。造模后22d处死。造模24h 内原发侧关节出现急性肿胀，第9天肿胀较严重。模型组穿格子数和活动度明显降低。造模后小鼠对于机械异常性疼痛和热痛出现明显退缩反应。（二）II型胶原诱导的关节炎 1.小鼠CIA的制备：将鸡或牛II型胶原（CII）溶解于0.01mol/L的醋酸后与同等容积的含有低浓度卡介苗的液体石蜡油（ALCB）充分乳化，CII和ALCB的计量均为4mg/mL.,乳化在冰浴中进行。在小鼠（18g左右）根部多点皮内注射乳化剂0.1ml，第21d在尾根部加强注射。加强注射后，由第三者检查关节炎的发生情况。2.大鼠CIA的制备：CII溶解于0.01mol/L 的醋酸中（CII终浓度为4mg/ml），充分研磨，4度过夜，讲CII溶液滴加至冷的不完全弗氏佐剂（IFA）中，等体积混合，充分乳化。大鼠（体重150g左右）尾根部和背部分多点皮内注射0.1mLCII乳化剂。7d后同法再坚强注射一次。对照组注射0.01mol/L醋酸和IFA的乳化液。从第20d后开始，用组织测量仪测定后足趾的容积。评价指标：足趾肿胀度、全身表现评分、关节肿胀数、关节炎指数、X线评分、关节炎病理评分。四、祛痰药的药理试验方法 1).呼吸道分泌液量测定法小鼠酚红实验法,基本原理：利用酚红小鼠腹腔注射后部分从气道排泄的特点，测定小鼠气道酚红排泄量，以判断受试药对气道通透性和分泌液量的影响.操作步骤：小鼠饥饿16-18h--注射酚红前30min受试药物灌胃--腹腔注射酚红药 物，30min 后处死--血凝后，分离气管、气管插管并与注射器相连--用5% NaHco3 0.8ml 洗气管，反复三次--合并洗液，放置，得透明红色上清液，用分光光度计波长545nm比色，根据酚红标准曲线计算出酚红量。注意事项：1.待小鼠体内血液凝固后，再切开颈部，以免血液中酚红影响。2.气道内注入NaHco3溶液后吸出时要轻轻进行，一旦用力过度，肺泡会破裂液体流入胸腔。2)呼吸道纤毛运动实验法---鸽纤毛运动实验法原理：利用气管纤毛运动带动颗粒物从气管内固定的向口腔方向的速度，测定药物祛痰药物，一般测运动2cm所需的时间.操作步骤：鸽气管分离，做2cm的标记---切开气管，将软木屑放在2cm向心端--记录2cm所需时间，观察给药前后0.5h的速度，正常是3-4min。注意事项：鸽气管暴露实验注意温度，等待时颈部用生理盐水湿润纱布防治干燥.3)豚鼠气道黏液黏蛋白的测定.原理：气道黏液主要由杯细胞和黏液性腺细胞产生和分泌，内含黏蛋白，为黏多糖和蛋白质。无机酸存在下，己糖醛酸从黏多糖中释放与咔唑起缩合反应，形成有色物，在530nm比色测定.操作：豚鼠麻醉处死，取气管称重----剪开气管用棉棒取黏液--水洗，离心，取上清液