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灵芝孢子油提取研究及灵芝孢子破壁技术的研究

中国食用菌2008,27(2):34-36

EDIBLEFUNGIOFCHINA

CN53-1054/QISSN1003-8310灵芝孢子油提取研究及灵芝孢子破壁技术的研究

李淑芳,张志军,李海德

(天津市林业果树研究所,天津300112)

摘要:通过灵芝孢子破壁技术的研究,选择适合灵芝孢子油提取的前处理方法。分别采用萌发、超微粉碎、酶解进行灵芝孢子的破壁,效果不理想;将3种方法综合进行灵芝孢子破壁,取得较好效果,破壁率达到85.38%。因此。采用综合破壁法作为灵芝孢子油提取的前处理手段较合适。

关键词:灵芝孢子;破壁;孢子油

中图分类号:¥646.9文献标识码:A文章编号:1003—8310(2008)02-0034—03

灵芝是著名的药用真菌之一。是华夏中草药宝库中的

一支奇葩,千百年来一直被民间视为仙草Ⅲ。灵芝的有效成

分有灵芝多糖类、三萜类、核苷类、甾醇类、生物碱类、

呋喃衍生物、氨基酸多肽类、矿物元素、脂肪酸等。灵芝

具有多方面的药理作用。且毒性很低。其药理作用有:抗

肿瘤、免疫调节、抗放射、镇静、安定、强心、降压、镇

咳、平喘、降血糖等121。

近年来对灵芝属真菌的化学成分及临床作用的研究较多.其中对灵芝孢子的研究近年颇为引人关注.尤其是灵芝孢子油的研究正逐渐被人们所重视。灵芝孢子是灵芝的生殖细胞。灵芝孢子油是从灵芝孢子中萃取得到的油状脂质物。约占灵芝孢子重的20%131.其中含有丰富的三萜类物质.因其化学结构的多样性而具有广泛的生理活性,对于提高机体免疫力、耐缺氧能力、降低胆固醇等方面有明显作用。最新研究表明.灵芝孢子油中的脂质活性物质还具有显著的抑制肿瘤和抗艾滋病毒的活性。近年来,灵芝孢子油产品已成为高档保健品中的珍品,具有十分重要的利用价值和经济价值。

灵芝孢子的孢壁为2层,由几丁质和葡聚糖构成(多醣壁),且具有同心圆的层网结构,质地坚韧,耐酸碱,极难氧化分解。因此限制了人们对孢子内有效物质的消化吸收。为了充分利用灵芝孢子内的有效物质,必须对孢子粉进行破壁。面积为lmm2。深度为1.10mm。中央1个大方格用双线划分为25个中方格。每个中方格又划分为16个小方格,供计数之用,如图l和图2所示。

1计数方法

1.1用电光分析天平(精度0.1ing)称取2mg已破壁的灵芝孢子粉放入10mL试管中.再用精密手持滴管在各试管中加入2mL的蒸馏水。摇荡5min左右,使灵芝孢子在水中

收稿日期:2008—01—2l圈125格血球计数盘图图2用于夏芝孢子计数的中方格

溶解均匀,得到灵芝孢子的悬浊液。

1.2用微量注射器(IOI上L)吸取悬浊液61.LL,一次性将悬浊液滴到计数盘内,并盖上一玻璃片,静置2min~3min,使悬浊液在计数盘内分布均匀.待灵芝孢子粉下沉不再移动后计数。通过光学显微镜鉴别孢子的破壁与否,未破壁的孢子壁光滑完整、丰满,双壁结构清晰,个体形态一致;破壁后,孢子壁不完整、内容物呈不规则块状。

13灵芝孢子破壁率的计算

灵芝孢子破壁率的计算公式:破壁率=[(A—B)/A]×100%

A为破壁前完整孢子数,B为破壁后完整孢子数。

2破壁实验

Zl萌发破壁实验

称取59灵芝孢子粉,放入培养皿(相对湿度65%、温度20。C~48℃),再加入209的25%灵芝子实体浸出液,然后放入恒温培养箱中培养24h。每隔1h取0.019试样加入10mL试管中用血球计数板观察计数。

勉超微粉碎实验方法

取lOg灵芝孢子粉,加入水lOOmL,于超微粉碎机内粉碎30min,每5nfin取样。配比为浓度lmg?mL-1的溶液,

灵芝孢子油提取研究及灵芝孢子破壁技术的研究

用血球计数板观察计数。

 

第27卷第2期李淑芳等:灵芝孢子油提取研究及灵芝孢子破壁技术的研究35

∞生物酶法破壁实验

酶解法是使用纤维素酶、半纤维素酶、蛋白酶、果胶酶等使灵芝孢子壁降解。达到破壁的目的。本实验使用经济适用的包含纤维素酶、蛋白酶的复合酶对灵芝孢子进行破壁处理,用血球计数板观察计数。

经试验可知,影响酶解效果的主要因素有:酶用量、温度、pH值、时间。本试验对以上4个因素进行正交试验,以确定最优酶解条件。因素水平表如表1所示。试验

表1正交试验因素水平表

水平温擘℃9HB值酶解莒舭㈣用量。/Ⅲ.g‘

处理如表2所示。

2.4综合法灵芝孢子破壁

称取灵芝孢子粉59/JnA培养皿内,再加入209,25%灵芝子实体浸出液。用玻璃棒混匀放入恒温培养箱内培养24h;之后加入25mL蒸馏水,将萌发后的灵芝孢子用超微粉碎机处理30min;根据酶解试验条件的确定,加入适量的复合酶在适宜酶解条件下进行酶解。最后显微观察计算灵芝孢子的破壁率。

3结果与分析

3.1萌发破壁

实验结果见表3。灵芝孢子在适宜的条件经过培养萌发后,由于萌发力的作用.灵芝孢子壁逐渐破裂。经过24h萌发破壁后其破壁率达到2.51%左右。

3.2超微粉碎实验结果

表3灵芝孢子的破壁率

时间/hI23456724破壁率/%00.4

表4超微粉碎对灵芝孢子破壁率的影响

实验结果见表4。随着时间的延长,超微粉碎可以显著提高灵芝孢子的破壁率,破壁效果明显:当超微粉碎时间为30min时,破壁率达到2631%。

3.3生物酶法破壁以及酶解条件的确定

从表5中可以看出,在不加酶的情况下。灵芝孢子的破壁率为零;当加酶后,灵芝孢子的破壁率有了明显的提高。这说明进行酶水解有利于灵芝孢子的破壁。随着酶用量的增加,灵芝孢子的破壁率逐渐增大.直到酶用量达到1750IU?g-1孢子时,灵芝孢子破壁率的增加幅度减缓。

从极差大小可知.酶解温度和酶用量是影响灵芝孢子粉破壁率的重要因子。而pH值、酶解时间是次要因子。各因素影响酶解效果的程度大小排列:酶解温度>酶用量>酶解pH值>酶解时间。最后确定灵芝孢子破壁时最佳酶解工艺参数为A382C1D3,即酶用量2000IU?g。1灵芝孢子、酶解温度60℃、酶解pH值7.5、酶解时间1.0h。

34综合法破壁

由灵芝孢子破壁率计算公式计算灵芝孢子的破壁率为:【(1806—264)/1806】x100%=85.38%,“1806”为破壁前完整孢子数。采用综合法破壁后.显微观察破壁前与破壁后灵芝孢子形态图如图3和图4所示。

4结论与讨论

4.1分别采用萌发处理、超微粉碎处理、酶解处理对灵芝孢子进行破壁.试验结果表明3种方法的灵芝孢子破壁率相差不大。因此。单独采用其中的任何1种方法进行灵芝孢子的破壁处理都不能达到较好的破壁效果。

4.2经正交试验得出酶法破壁灵芝孢子的最佳工艺条件:酶用量2000IU?g-1灵芝孢子、酶解温度60℃、酶解pH值7.5、酶解时间1.0h。

4.3采用综合法对灵芝孢子进行破壁处理。使灵芝孢子的破壁率达到了85.38%。大大提高了灵芝孢子的破壁率。

图3破壁前显微镜下

灵芝孢子形态

图4破壁前显微镜下

灵芝孢子油提取研究及灵芝孢子破壁技术的研究

灵芝孢子形态

 

灵芝孢子油提取研究及灵芝孢子破壁技术的研究

 

灵芝孢子油提取研究及灵芝孢子破壁技术的研究

灵芝孢子油提取研究及灵芝孢子破壁技术的研究

作者:李淑芳, 张志军, 李海德

作者单位:天津市林业果树研究所,天津,300112

刊名:

中国食用菌

英文刊名:EDIBLE FUNGI OF CHINA

年,卷(期):2008,27(2)

被引用次数:2次

参考文献(7条)

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本文链接:http://www.wendangku.net/doc/f807c3da6c175f0e7dd13750.html/Periodical_zgsyj200802012.aspx