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嘌呤霉素溶液配制及使用介绍

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嘌呤霉素Puromycin

嘌呤霉素溶液配制及使用介绍

嘌呤霉素Puromycin

作用机制:嘌呤霉素(Puromycin)是由白黑链霉菌(Streptomyces alboniger)发酵代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素,嘌呤霉素Puromycin通过抑制蛋白质合成而杀死革兰氏阳性菌,各种动物和昆虫细胞。嘌呤霉素Puromycin某种特殊情况下有效作用大肠杆菌。嘌呤霉素Puromycin作为氨酰-tRNA分子3’末端的类似物,能够与核糖体的A位点结合并掺入到延伸的肽链中。但是嘌呤霉素同A

位点结合后,不会参与随后的任何反应,从而导致蛋白质合成的提前终止并释放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟多肽。

嘌呤霉素Puromycin抗性基因:对嘌呤霉素的抗性取决于编码嘌呤霉素N-乙酰转移酶(PAC)的 Pac基因,遗传工程研究使用的Pac基因分离自嘌呤霉素产生菌Streptomyces alboniger。

嘌呤霉素Puromycin最普遍应用:1)嘌呤霉素如今普遍应用于筛选和维持培养含Pac基因的哺乳动物稳定转染细胞。嘌呤霉素在细胞稳转株筛选中的普遍应用与慢病毒载体的特性有关,现在商业化的慢病毒载体多数都携带pac基因。2)在某些特定情况下,嘌呤霉素亦可以用来筛选转化携带pac基因质粒的大肠杆菌菌株。化学特性:化学名称:3 (a -Amino-p-methoxyhydro cinnamamido)- 3–deoxy- N,N–dimethyladenosine·2HClCAS No.:58-58.2,分子式:C22 H29 N7 O5 .2HCl,分子量:544.43 g/mol纯度:>98%(HPLC),易溶于水5-50mg/mL,-20度保存。

嘌呤霉素Puromycin应用浓度:哺乳动物细胞的推荐使用浓度为1-10 μg/mL,最佳浓度需要杀灭曲线来确定。LB琼脂培养基筛选稳定转化pac基因的大肠杆菌,使用浓度为125μg/mL。使用嘌呤霉素筛选大肠杆菌稳转株需要精确的pH 值调节,而且受宿主细胞本身的影响。

嘌呤霉素Puromycin使用步骤:(哺乳动物细胞筛选)