试管法血型抗体效价测定

试管法血型抗体效价测定

1.检验目的

抗体效价测定是一种半定量检测抗体浓度的方法。把效价视为抗体的含量，在临床输血检验中主要用于鉴定标准血清效价、患者血清抗体检测及血清试剂的稀释等。

2.检验方法

试管法（血凝法）。

3.检验原理

将被检抗血清用生理盐水作倍比稀释后，加入一定量的抗原红细胞，观察凝集强度。以抗体稀释后仍能与抗原红细胞出现肉眼明显可见凝集的最高血清稀释倍数的倒数来表示抗体的效价。

4.标本要求

4.1 采集患者EDTA抗凝静脉血2.0ml。

4.2 将不抗凝静脉血以3000r/min离心3分钟，分离上层血清4℃保存。

5.试剂

标准2％A1、B型标准红细胞悬液；0.9%生理盐水。

6.器材

离心机、小试管、刻度吸管或加样器（50～200μl）、37℃水浴箱等。

7.操作程序

7.1. 取20支小试管，分两排，编号1-10号，第一排每管加生理盐水0.4ml。

7.2.用加样器在第一排第一管中加入0.4ml被检者血清，混匀，移0.2ml至第

二排第1管，依此类推，至第10管，最后弃去0.4ml。1～10管的稀释度分别为1:2、1:4、1:8、1:16、1:32、1:64、1:128、1:256、1:512。

7.2.于第一排每管中加入2％ A1型标准红细胞悬液0.2ml，混匀。

7.3.于第二排每管加入2％B型标准红细胞悬液0.2 ml，混匀。

7.3.室温孵育15分钟。

7.4.以3000r/min离心10秒，以出现（＋）凝集强度试管的血清稀倍数的倒

数为该抗血清的效价。

8. 结果判断

8.1.一般盐水凝集试验可立即观察，或置室温1小时观察结果。

8.2.冷凝集素效价要置4℃冰箱1小时观察结果。

8.3.若出现低稀释凝集强度比高稀释凝集强度要强，说明有前带现象发生。

8.4.对1份血清重复滴定，结果可能不一样，如果只有一个稀释度的差别，是正常误差范围。

9.注意事项

9.1．稀释操作时要准确，避免稀释不匀出现“跳管”现象。

9.2.离心后试管内上清出现溶血外观，表明不仅有抗原抗体反应，而且有补体

激活，有重要临床意义。

9.3.稀释液的容量越小，可能产生的误差越大。如果可能，可以增大稀释容量。

9.4.如果一种血清分别和几种红细胞作用，要将血清做总稀释，然后分别取相

同的血清量到几个试管中，以减少误差。

血型抗体效价测定

血型抗体效价测定 目的了解血型抗体效价测定的操作方法。 原理将被检抗血清作倍比稀释后，加入一定量的抗原红细胞，观察凝集强度。以抗体稀释后仍能与抗原红细胞出现1个（+）凝集的试管稀释倍数之倒数定为该抗体的效价。 器材小试管、刻度吸管、37°C水浴箱。 试剂1.标准2%A型红细胞生理盐水悬液。 2．生理盐水。 标本被检者血清。 操作以抗A效价测定为例。 1．血清倍比稀释取10支小试管，每管加入生理盐水0.1ml。在第1管中加入0.1ml被检者血清，混匀后吸取0.1ml加入第2管，依此类推，至第 10管，最后弃去0.1ml。 2．加入抗原红细胞于每管中加入2%A型红细胞生理盐水悬液0.1ml，混匀。 3．温育置15~20°C室温中温育15min。 4．离心和观察结果以1000r/min离心1min，以出现1个（+）凝集强度试管的血清稀释倍数的倒数定为该抗血清效价。 注意事项 1．倍比稀释要准确，避免稀释不匀出现跳管现象。 2．离心后试管内上清液出现溶血，表明不仅有抗原抗体反应，而且有补体激活，具有重要临床意义。 血型抗体效价测定 目的了解血型抗体效价测定的操作方法。 原理将被检抗血清作倍比稀释后，加入一定量的抗原红细胞，观察凝集强度。以抗体稀释后仍能与抗原红细胞出现1个（+）凝集的试管稀释倍数之倒数定为该抗体的效价。 器材小试管、刻度吸管、37°C水浴箱。 试剂1.标准2%A型红细胞生理盐水悬液。 2．生理盐水。 标本被检者血清。 操作以抗A效价测定为例。 1．血清倍比稀释取10支小试管，每管加入生理盐水0.1ml。在第1管中加入0.1ml被检者血清，混匀后吸取0.1ml加入第2管，依此类推，至第10管，最后弃去0.1ml。 2．加入抗原红细胞于每管中加入2%A型红细胞生理盐水悬液0.1ml，混匀。 3．温育置15~20°C室温中温育15min。 4．离心和观察结果以1000r/min离心1min，以出现1个（+）凝集强度试管的血清稀释倍数的倒数定为该抗血清效价。 注意事项 1．倍比稀释要准确，避免稀释不匀出现跳管现象。

抗血清制备及抗体效价测定

摘要............................................................................. .. (4) 【实验过程】 (5) PartⅠ. NDV 抗血清制备 (5) 一、实验原理 (5) 二、实验仪器、材料和试剂 (7) 1. 仪器 (7) 2. 材料 (7) 3. 试剂 (7) 三、方法和步骤 (7) （一）NDV 兔抗血清制备 (7) 1. 家兔捉拿方法 (7) 2. 家兔固定方法 (8) 3. 初次免疫 (9) 4. 二次免疫 (10) 5. 终末免疫 (10) 6. 试血 (10) 7. 颈动脉放血 (10) 8. 血清分离 (12)

9. 抗血清保存 (12) （二）NDV 鼠抗血清制备 (12) 1. 小白鼠的捉拿和固定 (12) 2. 初次免疫 (13) 3. 二次免疫 (15) 4. 终末免疫 (15) 5. 试血 (16) 6．放血 (18) 7．血清分离 (19) 8．抗血清保存 (19) Part Ⅱ. 琼脂双扩散实验检测抗体效价 (19) 一、基本原理 (19) 二、实验仪器、材料和试剂 (20) 1. 仪器 (20) 2. 材料 (20) 3. 试剂 (20) 三、方法和步骤 (20) 1. 灭活鸡新城疫病毒 Ulster 2C 株抗原提取 . 20 2. 1%琼脂糖配制 (20) 3. 倒平板 (21) 4. 打孔 (21) 5. 稀释抗血清 (22)

6. 加样 (22) 7. 孵育 (23) 8. 结果观察 (23) Part Ⅲ. 酶联免疫吸附试验测定 NDV 抗血清效价 (23) 一、基本原理 (23) 二、实验仪器、材料和试剂 (24) 1. 仪器 (24) 2. 材料 (24) 3. 试剂 (24) 三、方法和步骤 (25) 1. 鸡新城疫病毒 Ulster 2C 株灭活抗原提取 . 25 2、抗原包被 (25) 3. 封闭 (25) 4. 洗板 (25) 5. 稀释抗血清 (25) 6. 加抗血清 (26) 7. 洗板 (26) 8. 加酶标二抗 (26) 9. 洗板 (27) 10. 显色 (27) 11. 终止 (27) 12. 读数 (27)

血型鉴定

ABO、Rh及MNSs血型鉴定用抗体研究进展 来源：本站原创作者：陈琦1张嘉敏2李厚达1朱自严2（1．扬州大学医学院生理教研室，江苏扬 州 225001； 2．上…发布时间：2009-12-2 红细胞血型系统非常复杂，ABO血型之后，目前已发现了29个血型系统，700余种血型抗原。血型抗原的正确鉴别在保证输血安全、调查人种分布、建立稀有血型库及许多疾病的诊断、分型甚至治疗方面都有极其重要的作用［1］。抗原的鉴别有赖于相应抗体的获得。血型鉴定用抗体的制备也经历了多克隆、单克隆及基因工程抗体3个发展阶段。现将ABO、Rh及MNSs血型鉴定用抗体研究进展综述如下。 1 ABO血型鉴定用抗体 1.1ABO抗血清人源抗血清即多克隆抗体是人体内天然存在的或免疫反应检测到的抗体，ABO血型抗血清属于天然抗体，于出生后2—8个月开始产生，8—10岁达高峰。将通过全血制备的抗血清用于ABO血型的鉴定，方法简单、血凝明显、特异性强，长期以来一直是国内外血型检测机构及医院使用的ABO定型试剂。但它们存在的突出问题是：需耗费大量血液、不能做到标准化、难以规模化生产［2］。基于以上原因，科学家们一直希望找到可代替人抗血清用于ABO血型鉴定的理想试剂。杂交瘤技术问世，使这一愿望成为现实。 1.2ABO mAbs 1975年杂交瘤技术发明以后，Voak(1980)和Sachs (1981)等先后建立了能分泌抗 A和抗 B mAbs的杂交瘤细胞株，并将其成功用于ABO系统的血型鉴定。此后，其发展十分迅速，各国均建成了多株能稳定分泌抗 A、抗 B mAbs的瘤株细胞，为保证不同来源的ABO血型mAbs定型试剂质量的稳定性、结果判断的统一性及使用有效性，1987年，国际输血协会(ISBT)在第一届“红细胞及相关抗原单克隆抗体国际专题会议”中，对ABO 血型mAbs制品的生产、使用提出了明确的质量标准和规范［3］。2000年，我国也出台了相应的政策法规，加强了质量管理与监督。目前高效价、质量稳定的ABO血型mAbs定型试剂，已完全取代抗血清，广泛用于ABO血型的临床鉴定［4］。值得注意的是：用mAbs 进行ABO血型鉴定时会有漏检、假阳性、假阴性现象的发生，对此，国内外文献均有报道。1996年，Garatty等［5］报道了1例使用mAbs定型试剂，误将含获得性B抗原的A型患者错定为AB型，导致患者因错输AB型血死亡的病例；国内孙爱农等［6］也有类似发现。究其原因，主要是因为不同个体的红细胞A、B抗原，尤其是亚型决定簇的结构和数量存在不均一性，1个mAb只识别1个抗原结合位点，因此用单一mAb制品进行复杂血型鉴定时，可能导致误判。因此专家建议：可将抗原结合部位不同的mAbs混合组成检测试剂盒，进行复杂血型的鉴定，以确保输血治疗的安全性。 1.3基因工程抗体近年来，基因工程抗体的制备成为抗体工程的重要发展方向。Siegel 等［7］用噬菌体抗体库技术获得了针对ABO血型抗原的Fab和ScFv抗体，国内王长军等［8］也制备出A抗原的ScFv抗体。与mAbs相比，这些基因工程抗 A、抗 B在反应亲合力和效价等方面均未达到临床使用的要求，因此，有关这方面的研究进展不大。 2 Rh血型鉴定用抗体 在Rh血型系统中，常见的有D、C、E、c、e5种抗原，其中D抗原性最强，因此，一般制备的Rh抗体以抗 D为主。 2.1Rh抗血清与ABO血型系统不同，Rh阴性个体血清中没有天然的Rh抗体。只有在接受了Rh阳性血后，Rh抗体才能产生。传统的Rh抗体以Rh阴性志愿者为主要来源，即

ABO血型鉴定的方法步骤与注意事项

ABO血型鉴定的方法步骤与注意事项 一. 原理 根据红细胞上有或无 A抗原或B抗原，将血型分为A型、B型、 AB型及O型4种。可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABC血型。所谓正定型，是用已知抗一 A和抗一B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或B抗原；所谓反定型，是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗一 A或抗一B。 二. 试剂和材料 1.抗一A（B型血）、抗一B（A型血）及抗一A十B（O型血）分型血清（制备方法见本节附注） 2.5%A B及O型试剂红细胞盐水悬液，制备方法见本节附注； 3.受检者血清； 4.受检者 5%红细胞盐水悬液，制备方法见本节附注。 三. 方法 1 .试管法 （1）取洁净小试管3支，分别标明抗一A、抗一B和抗一A十B,用滴管分别加抗一A抗一B和抗一A十Bo分型血清各I滴于试管底部，再以滴管分别加入受检者 5%红细胞盐水悬液 1 滴，混和。 （2）另取洁净小试管3支，分别标明A、B和O细胞。用滴管分别加入受检者血清I滴于试管底部，再分别以滴管加入A B和O型5% 试剂红细胞悬液I滴，混和。 （3）立即以 1000r ／min 离心 1mino

(4)将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以内眼观察有无凝集(或溶血)现象。如内眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。 (5)观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，此有助于A、 B亚型、类B或cisAB的发现。 (6)凝集强度判断标准 2.玻片法 (1)取清洁玻片1张(或白瓷板1块)，用蜡笔划成方格，标明抗 -A、抗-B和抗-A十B,分别用滴管滴加抗-A、抗-B和抗-A十B分型血清I滴于标明的方格内，再各加受检者2%红细胞悬液1滴，混和。 (2)另取洁净玻片一张(或白瓷板1块)，用蜡笔划成方格，标明 A 细胞、B细胞和0细胞，用滴管各加受检者血清1滴，再分别用滴管

第三代试管婴儿过程

第三代试管婴儿过程 第三代试管婴儿全过程,在正式进入周期之前，夫妻双方要做很多的检查，检查确认符合条件之后进行。试管婴儿的成功率一般都是在30%左右，如果男性级女性的身体条件好的话还有可能会增加一些成功的几率。所以建议男性在做试管婴儿移植前吃一些含锌丰富的食物以及精活速来帮助提高和改善精液质量，女性则可以多吃一些豆类以及奶类，是对卵子的发育比较好的。 第三代试管婴儿的过程是什么？ (1)刺激排卵：一般正常妇女每一自然周期仅有一个卵泡成熟，但要对于试管婴儿来说，这是不够的。 (2)预测排卵：要取排卵前成熟的卵子，首先要确定排卵期。临床上可通过基础体温测定、子宫颈黏液检查，主要是B超监测卵泡的发育程度，以确定给予激素诱发排卵的最佳时间。 (3)采集卵子：于卵泡发育成熟尚未破裂时，在腹腔镜下经腹或在B超监视下，经以针穿刺成熟卵泡，抽取卵泡内容物，找出卵母细胞。 (4)卵子培养：取出的卵母细胞放入培养液中培养，以使卵子进一步成熟，达到与排卵时相近状态。 (5)体外授精：将在无菌条件下取得精子，经过处理，使精子具备穿入卵子的能力，成为授精小滴，然后加入含有卵子的培养基内。通过二性原核融合形成一个新细胞即受精卵，然后继续培养。得其分裂至6～8 个细胞时，抽取一个细胞进行PGD基因诊断。胚胎移植成功取决于受精卵本身的生命力，子宫内膜是否健康，以及移植过程有无损伤。 (6)移植后处理：移植后卧床24小时，限制活动3～4 天，于取卵当天，取卵后第3、6天注射HCG或取卵后每日接收黄体酮肌注以减少妊娠早期流产，移植后14、16 天观察血清HCG水平上升与否以判断妊娠。妊娠成功则定期监测胎儿发育，作高危妊娠处理，密切观察，并采取保胎措施。 第三代试管婴儿适用于哪些不孕不育患者？ 严格意义上说，除非是双侧输卵管切除或输卵管先天发育不全、卵巢功能完全衰竭的不孕女性，以及绝对无精的不育男性，才适合寻求试管婴儿技术的帮助。生育在国外被奉行为一种人类自然繁衍的过程，在西方教义中上升为“天道”。选择试管婴儿技术，是在万不得已的前提下方可实施。能通过非试管方式怀孕，绝不寻求试管婴儿技、术的帮助。 在国内实施试管婴儿技术案例中，在经济利益以及社会环境的综合驱使下，适应症和禁忌症被逐步放宽。另一方面，在试管婴儿禁忌症把握上又存在明显漏洞。即国内外源性精子和卵子的安全性问题一直被人所诟病，比如提供卵子和精子的任何一方患生殖系统疾病乃至性病的风险、提供卵子和精子的任何一方不良生活习惯以及工作环境接触致畸物质风险等

母体IgG抗体效价检测卡操作规程

孕妇血清IgG抗体效价检测操作规程 [样本要求]：血样标本最好采用EDTA抗凝（也可以用枸橼酸钠等抗凝），用血清代替血浆进行检测时，用前离心，2000g×10min，防止纤维蛋白干扰反应结果。 [样品准备]： 试剂配制：用985ulPH7.4的PBS(或者生理盐水)溶解15ul二巯基乙醇（2-Me）,即为0.2M(2-Me)应用液,密封，避光，置2---6℃保存. 红细胞标本的制备：用生理盐水配置红细胞悬液，红细胞最终浓度为1%左右. 血清标本的制备：将被检者静脉血采入含兔脑粉或其它促凝剂的试管中,10分钟后离心取上清;或者将被检者静脉血采入无抗凝剂试管中,4℃放置12小时,或37℃ 放置2小时后离心,2000Rpm,10分钟,取上清.该上清不得有 絮状物或沉淀； [配套试剂]：孕妇IgG抗体 效价卡，标准A、B、O红细 胞（取决于父亲血型）， 0.2M(2-Me)应用液 [实验步骤] 1、试剂卡室温平衡， 离心一次，标记编 号； 2、配制中和血浆：先取待检者血浆200微升与生理盐水600微升做4倍稀释，然后取稀释后的标本和 0.2M巯基乙醇(2-Me)应用液各200ul，混匀，37℃孵育30---60分钟，（充分破坏标本中IgM类抗体） 既得到孕妇的中和血浆。 3 4、在所有孔中加入50ul健康人O型1%红细胞悬液(测定孕妇ABO血型系统以外IgG血型抗体)或所有孔 中加入50ul健康人A型或B型1%红细胞悬液(测定孕妇ABO血型系统IgG血型抗体)，然后加入上述表格中稀释的中和血浆各50ul 5、把加有血浆和红细胞的微柱卡置37 ℃专用孵育器孵育15分钟； 6、用专用离心机离心5分钟（900r/min2分钟1500r/min3分钟）。判定结果。 [结果判定]效价值：产生3+凝集的最高稀释度，其倒数即为效价。 [参考值] 1、RH系统抗体效价16有临床意义 2、ABO系统抗体效价64有临床意义 [注意事项] 1.据文献报道微柱凝胶法检测出的母体效价值比常规聚凝胺和抗人球蛋白试管法高出1-2个滴度 （根据P.L.Mollison所著教材《临床医学中的输血（Blood Transfusion in Clinical Medicine）》） 2. 红细胞标本一定不能被细菌污染，否则出现假阳性反应。尽可能应用当日采集的新鲜血做本实验。如不 得不用过夜血或陈旧血，则必须首先用该标本做阴性对照试验，以确定该标本是否可以做本实验。

血型鉴定

ABO血型试验(正反定型) 一原理 利用红细胞凝集试验，通过正反定型准确鉴定ABO血型。 二试剂和材料 1．抗-A（B型血），抗-B（A型血）及抗-A+B（O型血）分型血清。2．5%A、B及O型试剂红细胞盐水悬液。 3．受检者血清。 4．受检者5%红细胞盐水悬液。 三操作（玻片法） 1．取清洁玻片一张，用蜡笔划成方格，标明抗-A、抗-B和抗-A+B，分别用滴管滴加抗-A、抗-B和抗-A+B分型血清1滴于方格内，再加受检者2%红细胞悬液1滴，混合。 2．另取清洁玻片一张，用蜡笔划成方格，标明A细胞、B细胞和O细胞，用滴管各加受检者血清1滴，再分别用滴管加A、B和O型试剂红细胞悬液1滴。 3．将玻片轻轻转动，使血清与细胞充分混匀，连续约15min，以肉眼观察有无凝集反应。也可用低倍镜观察结果。 四结果判定：见表1 表1 ABO血型正反定型结果 五注意事项 1．试管、滴管和玻片必需清洁干燥，防止溶血。 2．操作中应先加血清后加红细胞悬液，以便容易核实是否漏加血清。 3．为防止冷凝集现象的干扰，一般在室温内进行试验。

4．标准抗血清必须符合标准，不要长期放在室温，以免污染和孳长细菌，等渗生理盐水必须等渗、新鲜、无微生物孳生。 5．观察结果要仔细，微弱凝集、或肉眼观察未凝集的标本，要用显微镜观察。 注意特异性凝集与继发性血液凝固、串钱状形成和异物的区别。 六血型鉴定中常见的假阳性反应 1．红细胞串钱形成：红细胞相互重叠，连接成串，象一串重叠的钱币，称为串钱形成，又称假凝集。可见于血浆蛋白紊乱、血沉加快的各种病例或实验中温度过高，作用时间过长，致水分蒸发，血清浓缩。可在观察结果前，再加等渗盐水1滴，彻底混匀，串钱状红细胞因血液稀释而散开。也可用高倍镜仔细观察凝集块的形态和用洗涤后和红细胞配制悬液。 2．寒冷凝集：在较低温度出现的凝集称为寒冷凝集。多数正常人的血清在0~2oC 时能凝集本人的红细胞，又称自家凝集。这种凝集是可逆的，在0-2oC时作用最强，20oC时可消失。但在支原体肺炎、自免溶贫、肝硬化、系统性红斑狼疮等患者血清中，可以出现高效价的病理性自身冷凝集抗体，能与本人及其它各型人的红细胞发生凝集。其最适反应温度是低温，一般在25-30oC凝集作用即减弱。克服方法：被检红细胞在配制悬液前，先用37oC等渗生理盐水洗涤，必要时试验操作可在37oC条件下进行，或在37oC水浴中反复观察几次，报告时要注明有寒冷凝集现象。 七血型鉴定中常见的假阴性反应 1.标准血清效价太低亲和力不强: 抗血清保存方法不当或贮藏时间过长而致 效价减弱是最常见原因。 2.被检红细胞敏感度过低: 如新生儿红细胞抗原形成不足,老年人红细胞敏 感性下降,或红细胞标本贮藏时间过久(红细胞敏感性在血块中下降相对较快),易将A亚型错定为O型。 3.红细胞悬液过浓或过淡: 抗原抗体比例适当时反应最明显。如红细胞悬液 液过浓时,标准血清中的抗体全部被吸收,呈后带现象,以致凝集不明显或不凝集。红细胞浓度太淡,抗体浓度相对增高,呈前带现象而不易凝集,或凝集很弱,未被发现。克服方法: 按规定配制红细胞悬液,悬液太浓时可多加1滴血清,转动玻片,增加红细胞接触的机会.微弱凝集必须用显微镜观察。 4.溶血反应: 红细胞抗原与相对应的免疫抗体相遇,在补体存在时就可发生 溶血。溶血反应与凝集反应在血型鉴定上意义相同,都是抗原抗体反应。克服方法: 玻片法看结果时,片底最好衬以白纸,溶血时液滴边缘呈透明红色,试验前后两次镜下观察,可发现红细胞减少或消失。作血型发现溶血,要换好的等渗盐水和洗涤后红细胞重新配制悬液来作血型鉴定。

ABO血型鉴定(生理盐水法).

ABO血型鉴定（生理盐水法） 1. 原理 根据红细胞上有或无A抗原或/和B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型四种。A型红细胞膜上含有A抗原，B型红细胞膜上含有B抗原，AB 型红细胞膜上含有A、B抗原，抗A、抗B试剂是分别针对A抗原和B抗原的特异性抗体。可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。所谓正定型，是用已知的抗A、抗B试剂与受检者的红细胞混合时，与抗A 试剂发生凝集者即为A型，与抗B分型试剂发生凝集者即为B型，与抗A、抗B试剂均发生凝集者即为AB型，与抗A、抗B试剂均不凝集者即为O型。所谓反定型，是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗－A或/和抗－B。 2. 标本采集 2.1 标本种类：新抽取的抗凝血或手指末梢血和血清。 2.2 标本要求： 2.2.1 抗凝剂：如用抗凝血，多主张用EDTA K2（㎎/dL）抗凝。 2.2.2 用手指末梢血作血型检测时，最少样品量为100ul，如手指有 冻疮，则主张采耳垂血。 3. 标本储存：2小时内完成实验，室温放置下不超过8小时，4℃-8℃ 保存不超过48小时。 4. 标本运输：室温运输 5. 标本拒收标准：细菌污染、溶血标本不能作测定 6. 试剂 6.1 试剂名称：ABO血型检测试剂 6.2 试剂生产厂家：长春博德生物技术有限责任公司上海血液生物医药有限责任公司 6.3 试剂组成 试剂1：抗A分型试剂（蓝色），效价1：128，2℃-8℃避光保存，室温放置不宜过久。 试剂2：抗B分型试剂（黄色），效价1：128，2℃-8℃避光保存，室温放置不宜过久。 试剂3：5％A、B及O型红细胞盐水悬液，自制。配制方法：分别采取已知A、B、O三种血型的红细胞，经盐水洗涤3次，以压积红细胞配成不同浓

标准血清效价测定

标准血清效价测定 （一）凝集效价的测定 1．取小试管20 支，分两排放置于试管架上，前排标明 A ，后排标明 B ，再将各排由左而右注明号码。 2．各管均加生理盐水0．2 ml 。 3．吸取A 型被测血清0．2 ml ，加入A 排第1 管中，混匀，从第一管 中吸出0．2 ml 加入第2 管中，依次稀释至第10 管，从第10 管吸出 的0．2ml 弃掉，用同样的方法取B 型被测血清在B 排中稀释，最后两 排管的血清稀释倍数分别为1∶2 、1∶4 、1∶8 、1∶16 、1∶32 、1∶ 64 、1∶128 、1∶256 、1∶512 、1∶1024 。 4．A 排管各加B 型2 ％红细胞生理盐水悬液0．2ml；B 排管各加A 型 2 ％红细胞生理盐水悬液0．2ml，混匀。 5．放置室温（18 ～22 ℃）1 ～2 小时观察结果，以稀释倍数最高而 又显凝集者为其凝集效价。上述操作过程见下表。 表 A 型标准血清(抗B)效价测定

表 B 型标准血清(抗A)凝集效价测定 如被测血清在第七管仍显凝集，则其凝集效价为1∶128 。如第八管仍显凝集则其凝集效价为1∶256 。O 型标准血清抗A 、抗B 的凝集效价测定，可参照上述 （二）标准血清的质量要求 A 型（抗B）效价应在1∶64 以上， B 型（抗A）效价应在1∶128 以上，如果低于上述标准，不能使用。并要检查效价低的原因，重新制备，如果效价太高，可按效价规定加适量等渗盐水稀释。且不含其它血型抗体，不形成缗钱状的假凝集，冷凝集素效价＜1∶4 。 （三）亲和力的测定 所谓亲和力是指标准血清与相对应的红细胞混合后出现的凝集速度及凝集块的大小而言。测定方法如下： 取待测血清0．1ml 放于玻片或瓷板上，取对应的10 ％红细胞生理盐水悬液0．05 ml ，加于血清中混匀并涂成直径约1cm 的圆形，立即记时。观察出现凝集的时间。并继续转动玻片或瓷板，至3 分钟时观察凝集块的大小。标准血清亲和力的质量要求，在15 ～30 秒以内应出现凝集，3 分钟时凝集块应在1m- m2 以上，标准血清中不应含脂肪（脂肪可使效价迅速降低），不可污染细菌。

抗体效价测定操作规程

抗体效价测定操作规程 操作步骤： 一.IgG 类 I.IgG类抗体效价滴定，须取适量血清200］加等体积2—Me溶液混合，封口，置37C水浴箱作用60分钟，先稀释血清：200L病人血清 600L 生理盐水备用，排列6 支试管按顺序编号。第二管开始到第六管加样枪各加生理盐水200L，在第一管和第二管中各加入稀释血清200L，第二管混匀后移出200L转至第三管，以同样操作第六管，从第六管吸出200L 暂时保留在另一试管中（可做为第七管），以备必要时作进一步稀释。这样从第一管到第六管的血清稀释度依次是 1:8,1:16,1:32,1:64,1:128,1:256 。 2.加红细胞悬液（自配红细胞悬液同反定型试剂）每管各加2％相应红细胞悬液200L，混匀。（如待检血清抗体为抗A,则加入A型标准红细胞悬液；如待检血清抗体为抗B,则加入B型标准红细胞悬液；如待检血清中既有抗A又有抗B,则倍量稀释两份血清，一份加入A 型标准红细胞悬液，另一份加入B型标准红细胞悬液；） 3.先直接观察离心结果，之后在每管分别加入凝聚胺试剂盒中的R1 液3d,混合30S均匀后，在各加R2液2滴，操作方法同凝聚胺交叉配血法，然后判读结果。通常以肉眼观察到的第一个“±”的凝集管作为判断的终点, 终点血清稀释度的倒数为效价（Titer ）,或称滴度。 二.IgM 1?血清连续倍量稀释法先稀释血清：100L病人血清+700L生理盐

水备用，排列6 支试管按顺序编号。第二管开始到第六管加样枪各加生理盐水200L,第一管和第二管中各加入稀释血清200L,第二管混匀后移出200L转至第三管，以同样操作第六管，从第六管吸出200L 暂时保留在另一试管中（可做为第七管），以备必要时作进一步稀释。这样从第一管到第六管的血清稀释度依次是 1:8,1:16,1:32,1:64,1:128,1:256 。 2. 加红细胞悬液（自配红细胞悬液同反定型试剂）每管各加2％相应红细胞悬液200L,混匀。（如待检血清抗体为抗A,则加入A型标准红细胞悬液；如待检血清抗体为抗B,则加入B型标准红细胞悬液；如待检血清中既有抗A又有抗B,则倍量稀释两份血清，一份加入A 型标准红细胞悬液，另一份加入B型标准红细胞悬液；）三．此类为IgM 类盐水抗体可立即离心后观察。 四． 五．（学习的目的是增长知识，提高能力，相信一分耕耘一分收获，努力就一定可以获得应有的回报）

详细的试管婴儿过程

试管婴儿是一种先进的辅助生殖技术，自诞生以来已经成功为为无数不孕不育患者解除了烦恼，很多患者都想知道试管婴儿的过程是什么样的，下面我们跟随生殖专家进行详细的了解。 在很多患者看来，试管婴儿是一项非常复杂的技术，的确是这样，但是如果患者选择硬件技术尖端、专家业务素质过硬的医院做试管婴儿，那么试管婴儿的成功率和患者的人身安全都能得到保障。试管婴儿的具体过程如下： 检查准备 做试管婴儿技术前，要做详细的检查准备工作，临床专家要分析患者具体情况，诊断是否适合做试管婴儿技术。需做的检查包括有：女方(妇科检查、诊刮、输卵管通透试验、抗精子抗体等)、男方精液化验等。 技术实施 临床上实施试管婴儿技术，具体步骤为：控制性超排卵→监测卵泡→取卵→取精→体外受精→胚胎体外培养→胚胎移植→胚胎移植后补充黄体酮→胚胎移植后第14天验晨尿确定是否妊娠→妊娠后14天后B超检查。详细介绍如下： 1、控制性超排卵 由于自然月经周期的长短因人而异，同一患者不同周期也存在差异，所以不易安排取卵时间，而且自然周期中只有一个优势卵泡发育，受精后只能形成一个胚胎，而移植一个胚胎的妊娠率是很低的。所以需要采用控制性超排卵来增强与改善卵巢功能，以达到不受自然周期的限制、获得多个健康卵子的目的，提供多个胚胎移植，并尽可能使黄体发育与子宫内膜功能同步。控制性超排卵一般是先用GnRHa使体内FSH和LH降调，再施与HMG或FSH 排卵药物，刺激卵巢中的卵泡成长，依据患者对药物的反应性调整药物使用剂量，患者的年龄及药物的使用剂量不同，所获得的卵子数亦不同。 2、监测卵泡

为评价卵巢刺激效果与决定取卵时间，须利用阴道B超来监测卵泡大小，并配合抽血检查E2值(雌激素)，调整用药量。当二至三个以上的卵泡直径大于1.8cm，且1.4cm以上的卵泡数与E2值相当，便可注射人绒毛促性腺激素(hCG)，促使卵泡成熟。在注射hCG后34~36小时取卵。 3、取卵 最常用的取卵方式是在的局部麻醉下，经阴道B超引导，将取卵针穿过阴道穹窿，直达卵巢吸取卵子，并立即在显微镜下将卵子移到含胚胎培养液的培养皿中，置37 °C的培养箱中培养。 4、取精 精子取出的时间与取卵的日子为同一天。取精前洗净双手，用手淫法留取精液。所给的小杯是无菌的，留取时不要触摸杯缘及杯内。取出的精液采用上游法或密度梯度离心法处理，获取活动力好的精子。 5、体外受精 取卵后4~5小时将处理后的精子与卵子放在同一个培养皿中，共同培养18小时后，可在显微镜下观察受精情况。若精子质量太差，无法自然受精，则必须以显微注射法强迫受精。 6、胚胎移植 阴道及宫颈用生理盐水清洁再用培养液擦洗，将金属或塑料导管置入颈管内。另一助手在显微镜下用1.3mm的聚四氟乙烯管从培养液内吸出胚胎细胞加吸0.03～0.05ml 培养液或0.03～0.05ml受试者血清，将此管插入宫颈管导管内放至距宫底0.5cm处，送胚胎入宫腔。胚胎移植后需卧床24小时，限制活动3～4天，接受黄体酮治疗。移植后2周作β-GCG测定，如无妊娠情况，停用黄体酮。移植成功的妊娠属高危妊娠予以监护。 临床评估 在试管婴儿技术成功实施后，2个月左右可判断试管婴儿是否成功。

血型检查化验单怎么看

血型检查化验单怎么看 在了解血型检查化验单之前，让我们先了解下抗原与抗体的关系。 抗原是指病原体等异物侵入人体之后，引起人体产生抗体的物质（即病原体等异物）。 抗体指的是病原体侵入人体之后，刺激了淋巴细胞，淋巴细胞产生一种抵抗该病原体的特殊蛋白质，是一种可与相应抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。主要分布在血清中，也分布于组织液及外分泌液中。 圆规正传，接着就来了解下血型检查化验单到底应该怎么看吧！ 血型检查化验单上会出现孕妇及其配偶的血型，如，孕妇血型为O型，丈夫血型为A型，化验单上显示IgG抗A效价是1：4，大于1：64的参考值，也就是说ABO溶血检查结果正常，不会发生溶血现象；分母如果大于64，则表示有溶血的可能。 如报告单上显示，Rh（D）+也就是说孕妈妈的血型中含有Rh因子为阳性，绝大部分人的都是这样的数据；如果显示为RH（D）-，那么就有可能发生Rh溶血病，需做密切的观察和检查。 溶血化验单怎么看 关于溶血化验单主要分为两部分： 1、Rh血型不合 首先要知道Rh阴性血型在不同人群和种族中存在差异，在我国汉族中仅为0.34%，少数民族中则在5%以上。Rh血型共有六种抗原，即C和c，D和d，E和e，D抗原是最早发现的，所以临床上凡是D抗原阳性者称为Rh阳性，无D抗原者称为Rh阴性。Rh血型的抗原中以D抗原的抗原性最强，而Rh血型抗原的抗原性决定了溶血的严重程度。 Rh-血型的准妈妈，所怀第一胎为Rh+血型，那么胎儿则含有D抗原，准妈妈体内无D 抗原，因而准妈妈体内对抗D抗原的抗体还不够多，因此在第一胎时发生溶血病的可能性比较小。而在第二胎时，准妈妈因为在第一胎分娩时接触到了胎儿的D抗原，所以体内也产生了更多的D抗体，如果在第二胎所怀胎儿为Rh+血型的话，那么D抗体会增加，会与胎儿体内的抗原发生反应，抗体会透过胎盘把第二个婴儿的血液溶解，这样就会导致第二胎发生溶血病。

ABO血型鉴定总结-临床医学检验考试.

ABO 血型鉴定总结 -临床医学检验考试 1.AB0血型鉴定原理 常用盐水凝集法检测红细胞上存在的血型抗原,以及血清中存在的血型抗体,依据抗原抗体存在的情况判定血型。常规的方法有:①正向定型:用已知抗体的标准血清检查红细胞上未知的抗原。②反向定型:用已知血型的标准红细胞检查血清中未知的抗体。结果判定:凡红细胞出现凝集者为阳性,呈散在游离状态为阴性。 2. 鉴定方法 (1生理盐水凝集法:①玻片法:操作简单,适于大量标本检查,但反应时间长;被检查者如血清抗体效价低, 则不易引起红细胞凝集,因此,不适于反向定型。②试管法:由于离心作用可加速凝集反应,故反应时间短,而且,借助于离心力可以使红细胞接触紧密, 促进凝集作用,适于急诊检查。 红细胞亚型抗原性弱, 如抗 A 抗 B 标准血清效价低时, 易造成漏检或误定。如加用 O 型(抗 A 、 B 血清和反向定型,可避免此类错误医学 `教育网搜集整理。 玻片法凝集结果判断:红细胞呈均匀分布,无凝集颗粒,镜下红细胞分散。在低倍镜下凝集程度强弱判断标准:①呈一片或几片凝块, 仅有少数单个游离红细胞为(++++。②呈数个大颗粒状凝块,有少数单个游离红细胞为(+++。③数个小凝集颗粒和一部分微细凝 集颗粒,游离红细胞约占 1/2为(++。④肉眼可见无数细沙状小凝集颗粒。于镜下观察, 每凝集团中有 5~8个以上红细胞凝集为 (+ 。⑤可见数个红细胞凝集在一起,周围有很多的游离红细胞(±。⑥可见极少数红细胞凝集, 而大多数红细胞仍呈分散分布为混合凝集外观。⑦镜下未见细胞凝集,红细胞均匀分布为(-。 (2凝胶微柱法:是红细胞抗原与相应抗体在凝胶微柱介质中发生凝集反应的免疫学方法。血型抗体为单克隆抗体,加入试剂、标本, 用专用离心机离心后可直接用肉眼观察结果或用血型仪分析。此法操作标准化,定量加样,确保结果准确性。 3. 抗 A 、抗 B 和抗 AB 标准血清标准

NDV抗血清制备及抗体效价测定

NDV抗血清制备及抗体效价测定 【实验目的】 1. 学习抗血清制备的基本原理，掌握兔和小鼠免疫注射方法、兔颈动脉放血、小鼠眼球采 血技术。 2. 学习双向琼脂扩散实验的基本原理，掌握的基本程序和结果判读方法。 3. 学习酶联免疫吸附实验（ELISA）的基本原理，掌握间接ELISA的基本程序和结果判读 方法。 4. 学习免疫印迹实验的基本原理，掌握免疫印迹记实验的的基本程序和结果判读方法。 PartⅠ. NDV抗血清制备 一、实验原理 将具有免疫原性的物质注入健康动物体内后，抗原可刺激机体相应B细胞增殖、分化形成浆细胞并分泌特异性抗体。待动物血清中存在大量抗体时，采集动物血液，分离析出血清，便得到所需的抗血清（免疫血清或抗体）。由于抗原性物质通常具有多个抗原决定簇，可以刺激机体产生多种抗体形成细胞克隆，合成和分泌各种抗原决定簇的抗体，免疫血清中实际上是含有多种抗体的混合物，所以这种免疫法获得的免疫血清又称为多克隆抗体（Polyclonal antibody，PcAb）。多克隆抗体的制备是一个复杂的过程，为了获得特异性强，效价高的抗血清，除了抗原的因素外，还需注意动物品系的选择、抗原注射的浓度、剂量、次数、间隔时间及注射途径等。对于免疫原性较弱的可溶性抗原(如蛋白质类抗原)要加入佐剂，以增强免疫性。 本实验介绍新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV）抗血清的制备过程。新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV）又称亚洲鸡瘟病毒、伪鸡瘟病毒或禽肺脑炎病毒。在病毒分类学中的位置属于副黏病毒科（Paramyxoviridae）、副黏病毒属（Paramyxovirus）中的一个种。该病毒主要危害鸡、珠鸡和火鸡，在被侵袭的鸡群中迅速传播，强毒株可使鸡群全群毁灭。以新城疫病毒灭活疫苗（Ulster 2C株）灭活油剂苗多种途径免疫兔和小白鼠，制备新城疫病毒抗血清。 二、实验仪器、材料和试剂 1. 仪器

试管婴儿流程步骤详解

试管婴儿流程步骤详解 最近聊天的过程中发现，很多姐妹对于做试管婴儿的具体过程、详细操作流程都感到很迷茫，不知道该何去何从。为了帮助大家，现根据个人经验，梳理了关于试管婴儿主要过程和步骤，供各位姐妹参考。 方法/步骤 1在正式进入试管婴儿周期之前，夫妻双方要做很多的检查，具体检查列表可以见这篇博文，以前做过的一些检查单可以保留，这样就可以少检查一些项目了。 2检查确认符合条件之后，夫妇双方需要准备“三证”：①双方身份证原件及复印件;②结婚证书原件及复印件;③计划生育机构出具的生育证明(二胎者带二胎生育证)。夫妇双方签署体外受精-胚胎移植知情同意书。 3这时候也就开始进入试管婴儿周期了，不过有些医院需要排队，这个就每个医院不同了。不过有一点需要提醒的是，注意主治医生的选择，可以找之前做过的姐妹咨询看哪个医生的技术、服务态度好一点，因为这个很重要，有些医生爱理不理，这会成为一个很麻烦的问题。很多姐妹在跟我聊天的时候，都说自己的医生态度很恶劣，想沟通一下都很难。所以在可能的情况下，尽量选一个态度好一点的医生。 4饮食注意，试管前饮食有很多注意问题，如女性在试管前要多吃些促排卵食物，西柚、奶酪之类的，男性也要多吃蛋白质食物、含锌食物，三月前要用精活速提高精子质量。 5第一步：降调节 月经来潮第三天------------抽血检查激素. 月经来潮第十天-----------月经干净后查白带,衣原体,支原体等术前检查. 月经来潮第二十天--------- 1.开始降调节 2.制定方案(根据个人身体状况，医生会决定使用长方案还是短方案) 3.探宫腔(主要是确定子宫的位置). u 月经来潮第第二十八天-----1.B超检查.2.发现有nang肿要用时穿刺。 6第二步：促排卵 月经来潮第三天------------1.B超检查. 2.开始应用促排卵药物(有分国产药和进口药，价钱相差很大，进口的300块一支，个人情况不同每天的用药量也不同，我一天打2支，600大洋。国产的我没记住多少钱)

孕妇母体IgG抗体效价检测操作规程

孕妇母体IgG抗体效价检测操作规程 【原理】 新生儿溶血病HDN发生的主要原因在于母子血型不合，血型系统最主要的类型为ABO血型系统，本实验采用微柱凝胶检测孕妇血清中的抗A（B）IgG抗体效价。 【试剂】 6%牛血清白蛋白；生理盐水；凝胶卡 【标本采集】 孕妇静脉血3毫升，肝素钠抗凝，孕妇爱人静脉血3毫升，肝素钠抗凝。将孕妇标本制作成血清标本，孕妇爱人标本制成0.5%红细胞标本（用生理盐水洗涤后配制）。 【操作步骤】 1．取孕妇血清标本50微升加入等体积的牛血清白蛋白，37度水浴温育30～60分钟；2．将血清倍比稀释成9管，依次为1：4、8、16、32、64、128、512、1024、2048管；3．将卡作好标记，在所有孔中加入经处理好的孕妇血清标本50ul； 4．然后在所有孔中加入50ul的孕妇爱人0.5%红细胞标本； 5．37度孵育15分钟（专用孵育箱）； 6．专用离心机离心5分钟；900rpm2分钟，1500rpm3分钟； 7．取出判定结果； 【结果判定】 阳性结果：红细胞凝集块位于凝胶表面或凝胶中； 阴性结果：红细胞完全沉降到胶底部，在凝胶管底部形成红细胞扣。 【结果报告】 产生1+阳性凝集的最高稀释度，其倒数即为效价。 【注意事项】 1．红细胞标本一定不能被细菌污染，否则出现假阳性反应，尽可能应用当日采集的新鲜血做本实验。如不得不用过夜血或陈旧血，则必须首先用该标本做阴性对照试验，以确定该标本是否可以做本试验。 2．血清标本：血清标本必须充分去除纤维蛋白，否则标本中纤维蛋白在微柱凝胶中析出，阻碍红细胞沉淀，呈假阳性反应。 3．如在微柱凝胶中出现溶血现象，强烈提示为红细胞抗原抗体阳性反应，也不排除其他原因所臻溶血，故对此标本一定认真分析，并向上级主管技术人员报告并讨论。 4．本凝胶卡价格不菲，成本较高，请您节约使用。 【临床意义】 有人观察1632例孕妇血清中IgG抗A（B）≥1：64者249例；ABO-HDN发生率随IgG抗A（B）效价升高而上升；HDN与妊娠史的频率有关，随着年龄上升，孕妇个体IgG抗A（B）抗体效价也随之上升。夫妇间ABO血型不合者应及时检查产前血型抗体水平，用于预防不良妊娠的发生；IgG抗A（B）效价的高低与HDN的发病率成正比；孕妇血清IgG抗A（B）效价≥1：64需定期检测抗体效价水平及时用药降低抗体效价，以预防新生儿溶血病的发生。

Rh血型鉴定操作规程

抗D血型鉴定操作规程 1.目的： 定性鉴定患者Rh（D）血型 2.适用范围： 适用于献血员筛查、临床检测和血液制品检测。 3.方法及原理; 该系统主要有五种抗血清，即抗D、抗C、抗c、抗E、抗e。.用五种抗Rh标准血清来检查红细胞抗原，有18种表现型。在临床输血中，一般只做D抗原的鉴定，凡被鉴红细胞和抗D血清凝集者为Rh阳性，不凝集者为Rh阴性。其它Rh抗原鉴定和D抗原一样只是加相应的抗血清既可。其鉴定方法，由抗血清的性质而定。如盐水抗体用盐水法，lgG抗体用聚凝胺，抗人球蛋白等方法。 4.试剂及设备: 4.1 RhD血型定型试剂、0.9%氯化钠 4.2 离心机、显微镜、恒温水浴箱 5.样本的采集与处理: 5.1标本种类：新抽取的EDTA-K2抗凝血2ml。 5.2标本储存： 2℃-8℃保存。 5.3标本运输： 室温运输 5.4.标本拒收标准： 细菌污染、溶血标本不能作测定。 6.操作步骤： 6.1试管法 6.1.1取1支标记的干净试管，加入2滴抗D定型试剂。6.1.2再加1滴3-5%的被检红细胞悬液于试管中，摇匀。6.1.3离心，3000-3400r/min15秒。 6.1.4检查是否有溶血（溶血可能是阳性结果，也可能是细菌污染），然后轻轻摇晃使细胞再悬浮起来。 6.1.5观察凝集状况，并立即记录，必要时可借助显微镜。 6.1.6若是阴性结果，需37℃孵育15分钟，然后再离心观察结果，结果若呈阴性需进一步确认是否为弱D。

6.2玻片法 6.2.1取一标记的干净玻片，在其表面滴加1滴抗D血型定型试剂，在滴加1滴35-50%的待测红细胞悬液。 6.2.2持续地、轻柔地上下倾斜载玻片，使待测红细胞悬液与该试剂在约2cm直径范围内充分混匀2分钟。 6.2.3肉眼观察载玻片上是否出现红细胞凝集。 6.2.4记录结果 6.2.5若是阴性结果，需用室温盐水试管法复核。 8.干扰因素: 8.1假阳性因素 8.1.1试剂中存在具有其他特异性抗体（指不完全D抗体），因此对疑难抗原定型时，建议用不同来源的抗血清同时做两份试验。因为使用两份特异性相同的抗血清得到不一致的结果时，就会使检验人员意识到有进一步试验的必要。 8.1.2多凝集红细胞与任何人血清都会发生凝集。 8.1.3当用未经洗涤的红细胞做试验时，标本中的自由凝集素和异常蛋白质可能引起假阳性结果。 8.1.4试剂瓶可能被细菌、外来物质或其他抗血清所污染. 8.2假阴性因素

禽流感免疫抗体效价检测

龙源期刊网 https://www.wendangku.net/doc/f710253988.html, 禽流感免疫抗体效价检测 作者：何生 来源：《湖北畜牧兽医》2013年第07期 摘要：为掌握H5N1高致病性禽流感疫苗免疫效价，了解乌鲁木齐市米东区鸡群禽流感免疫抗体水平，对该地区不同鸡场进行了禽流感抗体检测。结果表明，40只免疫鸡，免疫抗体 效价合格数33只，总合格率为82.5%。说明近几年对高致病性禽流感采取的强制免疫措施达到了比较显著的效果。 关键词：禽流感；免疫；抗体效价；血凝试验；血凝抑制试验 中图分类号：S855 文献标识码：B 文章编号：1007-273X（2013）07-0029-02 禽流感是由禽流感病毒引起的一种禽类（家禽和野禽）的烈性传染病，被世界动物卫生组织（OIE）定为A类传染病。禽流感病毒感染后，呈现出较严重的全身性、出血性、败血性症状，死亡率较高。禽流感病毒不仅能引起禽类严重的疾病，而且对人类和哺乳类动物也能造成感染。在世界各种家禽和野生禽类中，按照血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）表面抗原来区分，已发现了数千种属于许多不同抗原亚型的病毒。各种品种和不同日龄的禽类均可感染高致病性禽流感。该研究为掌握H5N1高致病性禽流感疫苗免疫效价，了解本地区鸡群禽流感免疫抗体水平，对该地区鸡场进行了禽流感抗体检测，并对不其检测结果进行了对比分析。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 试验动物 40只鸡由米东区铁厂沟镇大草滩村养禽场提供。 1.1.2 试剂禽流感病毒H5亚型血凝抑制试验抗原，禽流感病毒H5亚型血凝抑制试验阳性血清，1%鸡红细胞悬液。 1.1.3 仪器 96孔V型微量反应板、台式离心机，单道、多道微量可调移液器，吸嘴，微量振荡器，加样槽。 1.2 方法 1.2.1 血凝（HA）试验在微量反应板的1～12孔均加入0.025 mL的PBS，换滴头，吸取0.025 mL病毒悬液加入第1孔混匀，从第1孔吸取0.025 mL病毒液加入第2孔，混匀后吸取0.025 mL加入第3孔，依次倍比稀释至第11孔，从第11孔吸取0.025 mL弃之，换滴头，每孔再加入0.025 mL PBS。每孔均加入0.025 mL体积分数为1%的鸡红细胞悬液，充分混匀后加入。在微量振荡器上振荡2 min，在25 ℃恒温箱内静置40 min后观察结果。